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DE2935 Insulin ELISA 141030 m

1. C lculo de los Resultados Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de est ndares controles y muestras de pacientes Construir una curva est ndar mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada est ndar frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva est ndar M todo automatizado Los resultados en las instrucciones de uso se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 Par metros 4 Par metros Rodbard o 4 Par metros Marquardt son los m todos preferidos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes La concentraci n de las muestras puede leerse directamente de la curva de est ndares Las muestras con concentraciones superiores al mayor est ndar han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n 6 3 1 Ejemplo de una Curva Est ndar T pica Los siguientes datos son solamente para la explicaci n y no pueden ser utilizados en lugar de los datos generados en el momento del ensayo Est ndar 0 _0 HIU mL Est ndar 1 _6 25 IU mL Est ndar 5 100 pIU mL Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49
2. 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 21 Demeditec Insulin ELISA DE2935 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales En un estudio con adultos aparentemente sanos utilizando el DEMEDITEC Insulin ELISA se observaron los siguientes valores 2 ulU mL a 25 ulU mL Solo los resultados no deberian ser el raz n unico para cualquier consecuencia terap utica Los resultados deber an corresponder con otras observaciones cl nicas y ensayos diagn sticos 8 CONTROL DE CALIDAD Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control se recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparaci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utilizar m todos estad sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los ra
3. 3 1 Beispiel f r eine Standardkurve Nachfolgend wird ein typisches Beispiel f r eine Standardkurve mit dem DEMEDITEC ELISA gezeigt Diese Werte sollten nicht zur Berechnung von Patientendaten verwendet werden Standard 4 50 ulU mL Standard 5 100 uIU mL Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 15 Demeditec Insulin ELISA DE2935 7 ERWARTETE WERTE Es wird empfohlen dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt In einer Studie wurden die Proben von gesunden Erwachsenen untersucht Dabei ergaben sich mit dem DEMEDITEC Insulin ELISA folgende Werte 2 ulU mL bis 25 ulU mL 8 QUALITATS KONTROLLE Es wird empfohlen die Kontrollproben gem den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzuset zen Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag zu Tag berpr fung der Ergebnisse erzielt Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC Labors sind im QC Zertifikat das dem Kit beiliegt aufgef hrt Die im QC Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden Es wird ebenfalls empfohlen an nationalen oder internationalen Qualit tssicherung
4. Angaben zu den Referenzen entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 17 Demeditec Insulin ELISA DE2935 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzim tico DEMEDITEC Insulin ELISA proporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantitativa de la insulina en suero y plasma Este ensayo est dise ado solo para diagn stico in vitro 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DEMEDITEC Insulin ELISA ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio de s ndwich Los pocillos de las placas est n recubiertos con un anticuerpo monoclonal dirigido contra un foci antig nico en la mol cula inulina Una aliquota de muestras de los pacientes contenido end gena insulina est incubado en un pocillo recubierto con enzima conjugado el cual es un anti insulina anticuerpo conjugado con Biotin Despu s de la incubaci n el conjugado no unido se lava Durante el segundo paso de incubaci n Streptavidin Peroxidase Enzyme Complex se una con el biotin anti insulina anticuerpo La cantidad del complejo HRP unido es proporcional a la concentraci n de insulina en la muestra Despu s de la adici n de la soluci n sustrato la intensidad de color desarrollado es proporcio
5. Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 5 Demeditec Insulin ELISA DE2935 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Serum or plasma only heparin or citrate plasma can be used in this assay Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette for serum allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting has occurred Pa tients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time Plasma Whole blood should be collected into centrifuge tubes containing anti coagulant e g Sarstedt Mono vette with the appropriate plasma preparation and centrifuged immediately after collection 5 2 Specimen Storage and Preparation Specimens should be capped and may be stored for up to 5 days at 2 C to 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time at least one year should be frozen only once at 20 C prior to as say Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen Dilution If in an initial assay a specimen is found to contain more than the highest standard the specimens can be diluted with Zero Standard
6. Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejemplo a diluci n 1 10 10 uL muestra 90 uL Zero Standard mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Zero Standard mezclar totalmente 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1 Consideraciones generales Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada est ndar control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 20 Demeditec Insulin ELISA DE2935 6 2 Procedimiento de ensayo Cada uno debe incluir una curva d
7. and re assayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a dilution 1 10 10 uL sample 90 uL Zero Standard mix thoroughly b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Zero Standard mix thoroughly 6 ASSAY PROCEDURE 6 1 General Remarks Allreagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each standard control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption Asa general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 6 Demeditec Insulin ELISA DE2935 6 2 Test Procedure Each run must include a standard curve 1 2 3 oND Secure the desired number of Microtiter wells in the frame holder Disp
8. bis 8 C gelagert werden F r eine l ngere Aufbewahrung mindestens 1 Jahr sollten die Proben eingefroren bei 20 C bis zum Testbeginn gelagert werden Nur einmal einfrieren Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden ohne Schaumbildung 5 3 Probenverdinnung Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Probe eine Konzentration h her als der h chste Stan dard gefunden wird kann diese Probe mit Zero Standard weiter verd nnt und nochmals bestimmt werden Die Verd nnung muss jedoch bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden Beispiel a Verd nnung 1 10 10 uL Serum 90 uL Zero Standard gr ndlich mischen b Verd nnung 1 100 10 uL Verd nnung a 1 10 90 uL Zero Standard gr ndlich mischen 6 TESTDURCHFUHRUNG 6 1 Allgemeine Hinweise Alle Reagenzien und Proben m ssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durch mischt werden Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden Wenn die Testdurchf hrung einmal begonnen wurde muss sie ohne Unterbrechung zu Ende ge f hrt werden Fur jeden Standard jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden um Verschlep pungen zu vermeiden Die Optische Dichte ist abh ngig von Inkubationszeit und Temperatur Deshalb ist es notwendig vor Beginn der Testdurchf hrung alle Reagenzien in einen arbeitsbereiten Zustand zu bringen die Deckel der Fl schchen zu ffnen alle ben tigten Wells in den Halter zu setzen
9. 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 4 Demeditec Insulin ELISA DE2935 4 REAGENTS 4 1 Reagents provided 1 Microtiterwells 12 x 8 break apart strips 96 wells Wells coated with anti Insulin antibody monoclonal 2 Zero Standard 1 vial 3 mL ready to use 0 ulU mL Contains non mercury preservative 3 Standard Standard 1 5 5 vials 1 mL ready to use Concentrations 6 25 12 5 25 50 and 100 ulU mL Conversion wlU mL x 0 0433 ng mL ng mL x 23 09 ulU mL The standards are calibrated against international WHO approved Reference material NIBSC 66 304 Contain non mercury preservative 4 Enzyme Conjugate 1 vial 5 mL ready to use mouse monoclonal anti Insulin conjugated to biotin Contains non mercury preservative 5 Enzyme Complex 1 vial 7 mL ready to use Streptavidin HRP Complex Contains non mercury preservative 6 Substrate Solution 1 vial 14 mL ready to use Tetramethylbenzidine TMB 7 Stop Solution 1 vial 14 mL ready to use contains 1 N acidic solution Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns 8 Wash Solution 1 vial 30 mL 40X concentrated see Preparation of Reagents Note Additional Zero Standard for sample dilution is available upon request 4 2 Materials required but not provided A microtiter plate calibrated reader 450 10 nm Calibrated variable precision
10. 1 mL listo para usar Concentraciones 6 25 12 5 25 50 and 100 ulU mL Conversi n plU mL x 0 0433 ng mL ng mL x 23 09 ulU mL Los est ndares estan calibrados segun autorizado WHO material de refer ncia NIBSC 66 304 Contiene conservantes sin mercurino 4 Enzyme Conjugate Conjugado enzim tico 1 vial 5 mL listo para usar Rat n monoclonal anti insulina conjugado a biotina Contiene conservante sin mercurio 5 Enzyme Complex Complejo enzim tico 1 vial 7 mL listo para usar Estreptavidina HRP complexo Contiene conservante sin mercurio 6 Substrate Solution Soluci n de sustrato 1 vial 14 mL listo para usar Tetrametilbencidina TMB 7 Stop Solution Soluci n de parada 1 vial 14 mL listo para usar contiene 1 N acido solucion Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en al piel 8 Wash Solution Soluci n de lavado 1 vial 30 mL concentrado 40X ver Preparaci n de los Reactivos Nota Se puede solicitar el Zero Standard para la diluci n de la muestra 4 2 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450 10 nm Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada 4 3 Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos mas alla de esta fech
11. 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 19 Demeditec Insulin ELISA DE2935 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero o plasma solo Heparina o citrato No usar muestras hemol ticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette para el suero permitir coagulaci n y separar el suero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular Plasma Toda la sangre ha de recogerse en tubos de centr fuga que contengan anticoagulante Ej Sarstedt Monovette con una preparaci n adecuada para el plasma y centrifugar inmediatamente tras la recogida 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 5 d as a 2 C a 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo al menos un a o han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo 5 3 Diluci n de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el est ndar mas concentrado ha de diluirse con Zero Standard y volver a ensayarse como se describe en el
12. AS l m di Product information a ec Information about other products is available at www demeditec com certified company Users Manual Insulin ELISA Ce DE2935 y 96 wells Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner Stra e 2 e D 24145 Kiel Germany Era 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com Demeditec Insulin ELISA DE2935 Contents Inhaltsverzeichnis Contenuti Contenido Contenu AA SINTBODUGT ON ar tells lala 3 2 PRINCIPLE OF THE TES Tr 3 3 WARNINGS AND PRECAUTIONS c ccccccseescsecesescssececesceseseseecesecesessevacseeesevessueusevasauesseveseuatevanes 4 A te ica ase Nit he tase a NAT 5 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION cccccccesesescsssesescssesesescssassseseevasesssevasssestevanes 6 5 ASSIM PROCEDA Eo en Matas 6 7 EXPECTED NORMAL VALUES ao al ai ee A 8 8 QUALITY CONTRO Lasuna oi nahen reihe 8 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS ccccccccesescscesesescssesesescecscsssscevacsseesesasssesevaveussevassueesevanes 8 10 EIMITATIONSOFUSE coin aii 10 11 MBG AAS PECTS santino tico 10 12 BEFEBENGESFEITERAT RE en ee cta 11 hir oc ESSIEN TIN Ga nal a a A aa see 12 Be TES TPR ING IPs aa a da euren 12 3 NORSICHTSMABNAHMEN SE einteilen ss 12 A BESTANDTEILE DESK Sad 13 55 BROBENVORBEREITUNG ES Als it a st a lat 14 6 ZBESTDURCHFUHRUNG see Bea ten a Dai all 14 7 VEHRWARTETE WERTE re ee 16 8 QUAHT
13. ATSKONTBONE ea ae A 16 9 ASSAY CHARAG TE AIS VIKA a a ee nen eh 16 ID GRENZEN DES TESTS tar ta 17 ii RECHTLICHE GRUNDLAGEN sacacasa li ia 17 12 REFERENZEN LITERATUR Aa 0 nase 17 14 INTRODUCCION ai dad 18 2 FUNDAMENTO DELENSA VO ia rd 18 3 PRECAUCIONES dt AA td 18 AS COMPONENTES DECK A A A 19 Bs MUESTRAS a ee 20 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO aunanaananannununnnnnannnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 20 7 VALORES ESPERADO S usa dues 22 amp CONTROL EC AUN AD ataca sido 22 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO uuceeecccccccccecececesececececececececececsceseseseseseseseststetetitevitevevevenenenens 22 108 MIMTACIONES DE USO 2 na a a aetna aa Ara aa Econ es 23 II ASPECTOS LEGALES sE 23 12 REFERENCIAS BIB LICR Asa ee 23 SYMBOLS USED WITH DEMEDITEC ELISAS ccceececesesessececesessessceseesacssescesasseescevaveseesevansneseevanes 24 Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner Stra e 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 2 Demeditec Insulin ELISA DE2935 1 INTRODUCTION 1 1 Intended Use The DEMEDITEC Insulin ELISA is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of Insulin in serum and plasma 1 2 Summary and Explanation Insulin is the principal hormone responsible for the control of glucose metabolism It is synthesized in the B cells of the i
14. ILE DES KITS 4 1 Kitinhalt 1 Microtiterwells 96 Wells 12 x 8 Wells einzeln brechbar Mit anti Insulin Antik rper mono klonal beschichtet 2 Zero Standard 1 Fl schchen 3 mL gebrauchsfertig O ulU mL Enth lt quecksilberfreies Konser vierungsmittel 3 Standard Standard 1 5 5 Fl schchen je 1 mL gebrauchsfertig Konzentrationen 6 25 12 5 25 50 100 ulU mL Umrechnungsfaktor ulU mL x 0 0433 ng mL ng mL x 23 09 ulU mL Die Standards sind kalibriert gegen das Internationale WHO Referenzmaterial NIBSC 66 304 Enthalt quecksilberfreies Konservierungsmittel 4 Enzyme Conjugate Enzymkonjugat 1 Fl schchen 5 mL gebrauchsfertig monoklonaler Maus Anti Insulin Antik rper mit Biotin konjugiert Enthalt quecksilberfreies Konservierungsmittel 5 Enzyme Complex Enzymkomplex 1 Flaschchen 7 mL gebrauchsfertig Streptavidin HRP Komplex Enthalt quecksilberfreies Konservierungsmittel 6 Substrate Solution Substratlsg 1 Flaschchen 14 mL gebrauchsfertig Substratl6sung TMB 7 Stop Solution Stoppl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig enth lt 1 N saure L sung Kontakt mit der Stoppl sung vermeiden Kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen 8 Wash Solution Waschlsg 1 Fl schchen 30 mL 40X konz S Vorbereitung der Reagenzien Anmerkung Zus tzlicher Zero Standard zur Probenverd nnung ist auf Anfrage erh ltlich 4 2 Erforderliche aber nicht enthaltene Ger te und Mater
15. MBOLS USED WITH DEMEDITEC ELISAS Symbol English Deutsch Francais Espa ol Italiano mM m European Conformity CE Konformitats kennzeichnung Conforme aux normes europ ennes Conformidad europea Conformita europea Consult instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Consulter les instruc tions d utilisation Consulte las Instrucciones Consultare le istruzioni per l uso JE In vitro diagnostic device In vitro Diagnostikum Usage Diagnostic in vitro Para uso Diagn stico in vitro Per uso Diagnostica in vitro Nur f r Forschungs Seulement dans le S lo para uso en RUO For research use only ecke cadre de recherches investigaci n Solo a scopo di ricerca Catalogue number Katalog Nr R f rence N mero de cat logo No di Cat Lot No Batch code Chargen Nr No de lot N mero de lote Lotto no Contains sufficient for lt n gt tests Ausreichend f r n Ans tze Contenu suffisant pour n tests Contenido suficiente para lt n gt ensayos Contenuto sufficiente per n saggi Storage Temperature Lagerungstemperatur Temp rature de conservation Temperatura de conservacion Temperatura di con servazione Expiration Date Mindesthaltbarkeits datum Date limite d utilisation Fecha de caducidad Data di scadenza Eno A Legal Manufacturer Hersteller Fabricant Fabrican
16. Nur eine solche Vorbereitung garantiert gleiche Zeiten f r jeden Pipettiervorgang ohne Pausen Als generelle Regel gilt dass die enzymatische Reaktion linear proportional zu Zeit und Tempera tur ist Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 14 Demeditec Insulin ELISA DE2935 6 2 Testdurchf hrung Jeder Lauf muss eine Standardkurve beinhalten 1 2 N 10 11 12 Die ben tigte Anzahl Wells in der Halterung befestigen Je 25 uL Standard Kontrollen und Proben mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Wells geben 25 uL Enzyme Conjugate in jedes Well geben F r 10 Sekunden gut sch tteln Es ist sehr wichtig in diesem Schritt eine komplette Durchmi schung zu erreichen 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells 3 mal mit verd nnter Wash Solution 400 uL waschen Verbleibende Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfer nen Achtung Die Sensitivit t und Pr zision dieses Assays wird erheblich beeinflusst von der korrek ten Durchf hrung des Waschschrittes 50 uL Ezyme Complex in jedes Well geben 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells 3 mal mit verd nnter Wash Solution 400 uL waschen Verbleibend
17. a Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 8 C Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo Los kits abiertos conservan su actividad durante 8 semanas si se almacenan como se ha descrito arriba 4 4 Preparaci n de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el n mero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Wash Solution A adir agua desionizada a la Soluci n de lavado concentraa 40x Mezclar 30 mL de Wash Solution concentrada con 1170 mL de agua desionizada hasta un volumen final de 1200 mL La soluci n del lavado diluida es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente 4 5 Eliminaci n del Kit La eliminaci n del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informaci n especial de este producto ver cap tulo 13 4 6 Kits de ensayo da ados En caso de que exista cualquier da o severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a DEMEDITEC no mas tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n Despu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0
18. d wells must be stored at 2 C to 8 C in the sealed foil pouch and used in the frame provided 5 Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same se quence for each step 6 Use reservoirs only for single reagents This especially applies to the substrate reservoirs Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate so lution may turn solution coloured Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur 7 Mix the contents of the microplate wells thoroughly to ensure good test results Do not reuse mi crowells 8 Do not let wells dry during assay add reagents immediately after completing the rinsing steps 9 Allow the reagents to reach room temperature 21 C 26 C before starting the test Tempera ture will affect the absorbance readings of the assay However values for the patient samples will not be affected 10 Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous mem branes 11 Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are han dled 12 Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results 13 Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation 14 Do not use reagents be
19. denken haben setzen Sie sich bitte mit der Firma DEMEDITEC in Verbindung 11 2 Therapeutische Konsequenzen Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen selbst dann nicht wenn alle Testergebnisse mit den in 11 1 genannten Voraussetzungen bereinstimmen Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten Nur in F llen in denen die Laborergebnisse in akzeptabler bereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage f r die Einleitung therapeutischer Kon sequenzen dienen 11 3 Haftung Jegliche Ver nderungen des Testkits und oder Austausch oder Vermischung von Komponenten un terschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen k nnen die gew nschten Ergebnisse und die G ltigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen Solche Ver nderungen und oder Aus tausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzanspr che zur Folge Reklamationen die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden ge m Punkt 11 2 erfolgen sind ebenfalls abzuweisen Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschr nkt Jegliche Sch den die w hrend des Transports am Kit entstanden sind unterliegen nicht der Haftung des Herstellers 12 REFERENZEN LITERATUR
20. e Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfer nen 50 uL Substrate Solution in jedes Well geben 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Die enzymatische Reaktion durch Zugabe von 50 uL Stop Solution in jedes Well abstoppen Die Optische Dichte bei 450 10 nm mit einem Mikrotiterplatten Leseger t innerhalb von 10 Mi nuten nach Zugabe der Stop Solution bestimmen Ergebnisermittlung Die durchschnittlichen Werte der Optischen Dichte OD f r jedes Set von Standards Kontrollen und Patientenproben bestimmen Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragen der mittleren Optischen Dichte jedes Standards gegen die Konzentration wobei der OD Wert auf der vertikalen Y Achse und die Konzentration auf der horizontalen X Achse eingetragen wird Unter Verwendung der mittleren OD wird f r jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve ermittelt Automatische Methode Die in der Gebrauchsanweisung angegebenen Werte wurden automa tisch mit Hilfe der 4 Parameter Gleichung bestimmt 4 Parameter Rodbard oder 4 Parameter Marquardt sind die bevorzugten Methoden Andere Auswertungsfunktionen k nnen leicht abwei chende Werte ergeben Die Konzentration der Proben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden Proben die eine h here Konzentration als die des h chsten Standards enthalten m ssen verd nnt werden Dieser Verd nnungsfaktor muss bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden 6
21. e estandares 1 2 N 10 11 12 10 11 12 13 Asegurar el n mero deseado de pocillos en el recipiente Dispensar 25 uL de cada Standard Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados Dispensar 25 uL de Enzyme Conjugate a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 3 veces con Wash Solution diluida 400 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado Adicionar 50 uL de Enzyme Complex a cada pocillo Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 3 veces con Wash Solution diluida 400 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Adicionar 50 uL de Substrate Solution a cada pocillo Incubar durante 15 minutes a temperatura ambiente Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 50 uL de Stop Solution a cada pocillo Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution
22. eg Latexhandschuhe tragen Die Verunreinigung von Reagenzien oder Proben mit Mikroben kann zu falschen Ergebnissen f hren Der Gebrauch sollte gem der Vorschriften einer entsprechenden nationalen Gefahrenstoff Sicherheitsrichtlinie erfolgen Reagenzien nicht nach dem auf dem Kit Etikett angegebenen Verfallsdatum verwenden Alle im Kit Protokoll angegebenen Mengen m ssen genau eingehalten werden Optimale Ergeb nisse k nnen nur durch Verwendung kalibrierter Pipetten und Mikrotiterplatten Lesegerate erreicht werden Komponenten von Kits mit unterschiedlichen Lotnummern nicht untereinander vertauschen Es wird empfohlen keine Wells von verschiedenen Platten zu verwenden auch nicht wenn es sich um das gleiche Lot handelt Die Kits k nnen unter anderen Bedingungen gelagert oder versendet worden sein so dass die Bindungscharakteristik der Platten leicht unterschiedlich ausf llt Chemikalien und zubereitete oder bereits benutzte Reagenzien m ssen gem den nationalen Gefahrenstoffvorschriften wie gef hrlicher Abfall behandelt werden Sicherheitsdatenbl tter f r dieses Produkt sind auf Anfrage direkt von der Firma Demeditec Diag nostics GmbH erh ltlich Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 12 Demeditec Insulin ELISA DE2935 4 BESTANDTE
23. en Stark besch digte Einzelkomponenten sollten nicht f r den Testlauf verwendet werden Sie m ssen gelagert werden bis eine endg ltige L sung gefunden wurde Danach sollten Sie gemaB den offiziellen Richtlinien entsorgt werden Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany ad 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 13 Demeditec Insulin ELISA DE2935 5 PROBENVORBEREITUNG Serum oder Plasma Heparin oder Zitratplasma kann in diesem Test als Probenmaterial eingesetzt werden Lipamische ikterische und oder stark hamolysierte Proben sollten nicht verwendet werden Achtung Proben die Natriumazid enthalten sollten nicht verwendet werden 5 1 Probenentnahme Serum Blut durch Venenpunktion entnehmen z B mit Sarstedt Monovette f r Serum gerinnen lassen und das Serum durch Zentrifugation bei Raumtemperatur abtrennen Vor der Zentrifugation muss die Ge rinnung vollst ndig abgeschlossen sein Bei Patienten die Antikoagulantien erhalten kann die Gerin nungszeit l nger dauern Plasma Die Blutentnahme erfolgt mit R hrchen die ein Antikoagulanz enthalten z B Sarstedt Monovette mit entsprechender Plasma Pr parierung Das Plasma wird als Uberstand nach einer Zentrifugation gewonnen 5 2 Probenaufbewahrung Proben sollten stets gut verschlossen sein und k nnen vor Testbeginn bis zu 5 Tage bei 2 C
24. ense 25 uL of each Standard control and samples with new disposable tips into appropri ate wells Dispense 25 pL Enzyme Conjugate into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step Incubate for 30 minutes at room temperature Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 3 times with diluted Wash Solution 400 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure Add 50 uL of Enzyme Complex to each well Incubate for 30 minutes at room temperature Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 3 times with diluted Wash Solution 400 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Add 50 uL of Substrate Solution to each well Incubate for 15 minutes at room temperature Stop the enzymatic reaction by adding 50 uL of Stop Solution to each well Determine the absorbance OD of each well at 450 10 nm with a microtiter plate reader It is recommended that the wells be read within 10 minutes after adding the Stop Solution Calculation of Results Calculate the average absorbance values for each set of standards controls and patient samples Using linear graph paper construct a standard curve by plotting the mean absorbance obtained from each
25. etas del kit Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las placas pueden resultar diferentes Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a Demeditec Diagnostics GmbH Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 18 Demeditec Insulin ELISA DE2935 4 COMPONENTES DEL KIT 4 1 Componentes del Kit 1 Microtiterwells Placas multipocillo 12 x 8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti insulina monoclonal 2 Zero Standard Est ndar 1 vial 3 mL listo para usar 0 ulU mL Contiene conservantes sin mercurino 3 Standard Standard 1 5 Est ndar 5 viales
26. ialien Kalibriertes Mikrotiterplattenleseger t mit 450 10 nm Filter Kalibrierte variable Prazisions Mikropipette Saugf higes Papier Destilliertes Wasser 4 3 Lagerung und Haltbarkeit des Kits Die unge ffneten Reagenzien behalten bei Lagerung um 2 8 C ihre Reaktivit t bis zum Verfallsda tum Nach dem Verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden Nach dem ffnen sollten alle Reagenzien bei 2 8 C gelagert werden Die Mikrotiterwells sollten bei 2 8 C gelagert werden Der einmal ge ffnete Folienbeutel sollte stets sehr sorgf ltig wieder verschlossen werden Unter den be schriebenen Lagerbedingungen behalten ge ffnete Kits 8 Wochen ihre Reaktivit t 4 4 Vorbereitung der Reagenzien Alle Reagenzien sowie die ben tigte Anzahl von Wells sollen vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden Wash Solution Die 40 fach konzentrierte Wash Solution 30 mL mit 1170 mL destilliertem Wasser auf ein Gesamtvo lumen von 1200 mL verd nnen Die verd nnte Waschl sung ist bei Raumtemperatur f r 2 Wochen stabil 4 5 Entsorgung des Kits Die Entsorgung des Kits muss gem den nationalen gesetzlichen Vorschriften erfolgen Spezielle Informationen f r dieses Produkt finden Sie im Sicherheitsdatenblatt Kapitel 13 4 6 Besch digte Testkits Im Falle einer starken Besch digung des Testkits oder der Komponenten muss DEMEDITEC in schriftlicher Form sp testens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werd
27. il info demeditec de e http www demeditec com 16 Demeditec Insulin ELISA DE2935 10 GRENZEN DES TESTS Jede unsachgem e Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests k nnen die Ergebnis se beeinflussen 10 1 Interferenzen H moglobin bis zu 4 mg mL Bilirubin bis zu 0 5 mg mL und Triglyceride bis zu 30 mg mL haben keinen Einfluss auf das Testergebnis 10 2 Beeinflussung durch Medikamente Uns sind bislang keine Stoffe Medikamente bekannt geworden deren Einnahme die Messung des Insulin Gehaltes der Probe beeinflussen w rde 10 3 High Dose Hook Effekt Ein Hook Effekt tritt bei Proben mit bis zu 1600 ulU mL Insulin nicht auf 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 11 1 Zuverl ssigkeit der Ergebnisse Der Test muss exakt gem der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden Dar ber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP Good Laboratory Practice oder andere eventu ell anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien Es ist sehr wichtig bei der Testdurchf hrung stets eine ausreichen de Anzahl Kontrollen zur berpr fung der Genauigkeit und Pr zision mitlaufen zu lassen Die Testergebnisse sind nur g ltig wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen liegen und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebenen Spezifikationen f r diesen Assay erf llen Wenn Sie bez glich eines Ergebnisses Zweifel oder Be
28. ilution Soluci n para diluci n i 3 caer Sample Diluent Sample Diluent medium de l chantillon de la muestra DIINENIS OEL campioni Conjugate i Konjugatverd nnungs Solution pour dilution Soluci n para diluci n a Diluent Conjugate Diluent medium du conjugu del conjugado Diluente del tracciante Version 08 07 14 JS Updated 141030 Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner Stra e 2 e D 24145 Kiel Germany Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Email info demeditec de e http www demeditec com 24
29. influenciar los resultados 10 1 Sustancias que pueden interferir Hemoglobina hasta 4 mg mL Bilirrubina hasta 0 5 mg mL y Triglic ridos hasta 30 mg mL no influencian los resultados del ensayo 10 2 Interferencias con drogas Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de insulina en una muestra 10 3 Efecto Gancho Dosis Elevada No se ha observado efecto gancho en este ensayo hasta 1600 ulU mL de insulina 11 ASPECTOS LEGALES 11 1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas a n el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Pr cticas de Laboratorio o a otros est ndares y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un n mero suficiente de controles para validar la exactitud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par metros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con DEMEDITEC 11 2 Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultado
30. it and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to custom er misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 10 Demeditec Insulin ELISA DE2935 REFERENCES LITERATURE Flier J S Kahn C R and Roth J 1979 Receptors antireceptor antibodies and mechanisms of insulin resistance N Engl J Med 300 8 413 419 Frier B M Ashby J P Nairn I M and Bairs J D 1981 Plasma insulin C peptide and gluca gon concentrations in patients with insulin independent diabetes treated with chlorpropamide Di ab metab 7 1 45 49 Judzewitsch R G Pfeifer M A Best J D Beard J C Halter J B and Porte D Jr 1982 Chronic Chlorpropamide therapy of noninsulin dependent diabetes augments basal and stimulat ed insulin secretion by increasing islet sen
31. known to us which have an influence to the measurement of Insulin in a sample 10 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test up to 1600 ulU mL of Insulin 11 LEGAL ASPECTS 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national stand ards and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and preci sion of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DEMEDITEC 11 2 Therapeutic Consequences Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agree ment with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences 11 3 Liability Any modification of the test k
32. micropipettes Absorbent paper Distilled or deionised water Timer Graph paper or software for data reduction 4 3 Storage Conditions When stored at 2 C to 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 C to 8 C Microtiter wells must be stored at 2 C to 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again Opened kits retain activity for 8 weeks if stored as described above 4 4 Reagent Preparation Bring all reagents and required number of strips to room temperature prior to use Wash Solution Add deionized water to the 40X concentrated Wash Solution Dilute 30 mL of concentrated Wash So lution with 1170 mL deionized water to a final volume of 1200 mL The diluted Wash Solution is stable for 2 weeks at room temperature 4 5 Disposal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Safety Data Sheet 4 6 Damaged Test Kits In case of any severe damage to the test kit or components DEMEDITEC has to be informed in writ ing at the latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations Demeditec
33. nal a la concentraci n de insulina en la muestra del paciente 3 PRECAUCIONES Este kit es solamente para diagn stico in vitro Por favor se usa solo la version valida de la metodico t cnico incluido aqui en el kit Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV I II HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos Evitar contacto con Stop Solution que contiene 1 N acido solucion Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas No fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultados err neos El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiqu
34. ngos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos arriba mencionado sin encontrar ning n error contactar con su distribuidor o con DEMEDITEC directamente 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 9 1 Rango din mico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre 1 76 100 ulU mL 9 2 Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Consultar el manual de usuario en ingl s 9 3 Sensibilidad Anal tica La sensibilidad anal tica de los ELISA DEMEDITEC se calcul con a adir 2 desviaciones est ndar de la media de veinte 20 r plicas del Est ndar 0 y result ser 1 76 IU mL 9 4 Precisi n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 5 Recuperaci n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 6 Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 22 Demeditec Insulin ELISA DE2935 10 LIMITACIONES DE USO Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden
35. ntigenic site on the Insulin molecule An aliquot of patient sample containing endogenous Insulin is incubated in the coated well with en zyme conjugate which is an anti Insulin antibody conjugated with Biotin After incubation the unbound conjugate is washed off During the second incubation step Streptavidin Peroxidase Enzyme Complex binds to the biotin anti Insulin antibody The amount of bound HRP complex is proportional to the concentration of Insulin in the sample Having added the substrate solution the intensity of colour developed is proportional to the concentra tion of Insulin in the patient sample Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 3 Demeditec Insulin ELISA DE2935 3 WARNINGS AND PRECAUTIONS 1 This kit is for in vitro diagnostic use only For professional use only 2 All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I II HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal 3 Before starting the assay read the instructions completely and carefully Use the valid version of instructions for use provided with the kit Be sure that everything is understood 4 The microplate contains snap off strips Unuse
36. ormal and abnormal val ues In a study conducted with apparently normal healthy adults using the DEMEDITEC Insulin ELISA the following values are observed 2 ulU mL to 25 ulU mL The results alone should not be the only reason for any therapeutic consequences The results should be correlated to other clinical observations and diagnostic tests 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve A statistically signif icant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to as sure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results lt is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materi als patient results should be considered invalid In this case please check the foll
37. owing technical are as Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DEMEDITEC directly 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 1 76 100 ulU mL 9 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity The cross reactivities were determinated by addition of different analytes to serum containing 4 ng mL 100 IU mL Insulin and measuring the apparent Insulin concentration Added analyte to a high value serum Observed Insulin value Cross reaction 4 ng mL ng mL Porcine Insulin 8 ng mL Bovine Insulin 8 ng mL Dog Insulin 16 ng mL Rabbit Insulin 16 ng mL Rat Insulin 16 ng mL Human Proinsulin 32 ng mL Porcine Proinsulin 16 ng mL Bovine Proinsulin 16 ng mL 9 3 Sensitivity The analytical sensitivity of the DEMEDITEC ELISA was calculated by adding 2 standard deviations to the mean of 20 replicate analyses of the Zero Standard and was found to be 1 76 ulU mL Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 8 Demeditec Insulin ELISA DE2935 9 4 Reproducibility 9 4 1 Intra Assay The within assay variability is shown below Sam
38. ple n Mean 4lU mL CV 9 4 2 Inter Assay The between assay variability is shown below Sample n Mean mL CV CA 2 669 60 9 5 Recovery Samples have been spiked by adding Insulin solutions with known concentrations in a 1 1 ratio The expected values were calculated by addition of half of the values determined for the undiluted samples and half of the values of the known solutions The Recovery has been calculated by multi plication of the ratio of the measurements and the expected values with 100 Added Concentration Measured Conc Expected Conc Recovery 1 1 v v ulU mL HIU mL HIU mL 9 6 Linearity Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner Stra e 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com Demeditec Insulin ELISA DE2935 10 LIMITATIONS OF USE Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a com plete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results 10 1 Interfering Substances Haemoglobin up to 4 mg mL bilirubin up to 0 5 mg mL and triglyceride up to 30 mg mL have no influence on the assay results 10 2 Drug Interferences Until today no substances drugs are
39. s Programmen teilzuneh men um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll Werten und Trends angewendet werden Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials bereinstimmen sollten die Patien tenergebnisse als ung ltig eingestuft werden In diesem Fall berpr fen Sie bitte die folgenden Berei che Pipetten und Zeitnehmer Photometer Verfallsdatum der Reagenzien Lagerungs und Inkubati onsbedingungen Absaug und Waschmethode Sollten Sie nach berpr fung der vorgenannten Be reiche keinen Fehler erkannt haben setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma DEMEDITEC in Verbindung 9 ASSAY CHARACTERISTIKA 9 1 Messbereich Der Messbereich des Testes liegt zwischen 1 76 100 ulU mL 9 2 Spezifit t der Antik rper Kreuzreaktivit t Die Daten entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 9 3 Sensitivit t Die analytische Sensitivit t definiert als Mittelwert plus der zweifachen Standardabweichung des Ze ro Standards n 20 betr gt 1 76 ulU mL Die Daten zu 9 4 Reproduzierbarkeit Pr zision 9 5 Wiederfindung 9 6 Linearit t entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Ema
40. s del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente se pueden derivar consecuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 11 3 Responsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante 12 REFERENCIAS BIBLIOGRAF A Consultar el manual de usuario en ingl s Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 23 Demeditec Insulin ELISA DE2935 SY
41. s entfernt In einer zweiten Inkubation bindet ein Streptavidin Peroxidase Enzymkomplex an den biotinylierten anti Insulin Antik rper Nach einem weiteren Waschschritt wird die Substratl sung zugegeben und die Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt Die Intensitat der gebildeten Farbe ist proportio nal der Insulin Konzentration in der Probe Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplatten leser gemessen 3 VORSICHTSMABNAHMEN Dieser Kit ist nur zum in vitro diagnostischen Gebrauch geeignet Nur die g ltige im Testkit enthaltene Gebrauchsanweisung verwenden Informationen zu im Kit enthaltenen gef hrlichen Substanzen entnehmen Sie bitte dem Sicher heitsdatenblatt Alle Bestandteile dieses Testkits die humanes Serum oder Plasma enthalten wurden mit FDA gepr ften Methoden auf HIV I II HosAg und HCV getestet und als negativ best tigt Jedoch sollten alle Bestandteile im Umgang und bei der Entsorgung wie m gliche Gefahrenstoffe betrachtet wer den Der Kontakt mit der Stop Solution sollte vermieden werden da sie 1 N saure L sung enth lt Saure L sung kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen Nicht mit dem Mund pipettieren und den Kontakt von Kitbestandteilen und Proben mit Haut und Schleimh uten vermeiden Inden Bereichen in denen Proben oder Kitbestandteile verwendet werden nicht rauchen essen oder Kosmetika verwenden Beim Umgang mit Proben oder Reagenzien Einw
42. sitivity to glucose J Clin End and Metab 55 2 321 328 Kosaka K Hagura R and Kuzuya T 1977 Insulin responses in equivocal and definite diabe tes with special reference to subjects who had mild glucose intolerance but later developed defi nite diabetes Diabetes 26 10 944 952 Starr J Il Mako M E Juhn D and Rubenstein A H 1978 Measurement of serum proin sulin like material cross reacitivity of porcine and human proinsulin in the insulin radioimmunoas say J Lab Clin Med 91 4 691 692 Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 11 Demeditec Insulin ELISA DE2935 1 EINLEITUNG Der DEMEDITEC Insulin ELISA wird zur quantitativen Bestimmung von Insulin in Serum und Plasma eingesetzt Nur f r In vitro Diagnostik 2 TESTPRINZIP Der DEMEDITEC Insulin ELISA ist ein Festphasen Enzymimmunoassay der auf der Sandwichtechnik basiert Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem monoklonalen Antik rper beschichtet der gegen eine definierte Antik rper Bindungsstelle des Insulin Molek ls gerichtet ist Die Proben werden in die beschichteten Wells gegeben und mit einem Enzym Konjugat inkubiert Das Konjugat enth lt einen anti Insulin Antik rper der mit Biotin konjugiert ist Das nicht gebundene Kon jugat wird durch Waschen der Well
43. slets of Langerhans as the precursor proinsulin which is processed to form C peptide and insulin Both are secreted in equimolar amounts into the portal circulation The mature insulin molecule comprises two polypeptide chains the A chain and B chain 21 and 30 amino acids respectively The two chains are linked together by two inter chain disulphide bridges There is also an intra chain disulphide bridge in the A chain Secretion of insulin is mainly controlled by plasma glucose concentration and the hormone has a number of important metabolic actions Its principal function is to control the uptake and utilisation of glucose in peripheral tissues via the glucose transporter This and other hypoglycaemic activities such as the inhibition of hepatic gluconeogenesis and glycogenolysis are counteracted by the hypergly caemic hormones including glucagon epinephrine adrenaline growth hormone and cortisol Insulin concentrations are severely reduced in insulin dependent diabetes mellitus IDDM and some other conditions such as hypopituitarism Insulin levels are raised in non insulin dependent diabetes mellitus NIDDM obesity insulinoma and some endocrine dysfunctions such as Cushing s syndrome and acromegaly 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DEMEDITEC Insulin ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the sandwich principle The microtiter wells are coated with a monoclonal antibody directed towards a unique a
44. standard against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the standard curve Automated method The results in the Instructions for Use have been calculated automatically using a 4 Parameter curve fit 4 Parameter Rodbard or 4 Parameter Marquardt are the preferred methods Other data reduction functions may give slightly different results The concentration of the samples can be read directly from this standard curve Samples with concentrations higher than that of the highest standard have to be further diluted or reported as gt 100 ulU mL For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into ac count 6 3 1 Example of Typical Standard Curve The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay Standard 0 0 iUm Standard 1 6 25 IU mL Standard 2 12 5 IU mL Standard 3 25 ylU mL Standard 4 50 uIU mL Standard 5 100 IU mL Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922 0 e Fax 49 0 431 71922 55 Updated 141030 Email info demeditec de e http www demeditec com 7 Demeditec Insulin ELISA DE2935 7 EXPECTED NORMAL VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own n
45. te Fabbricante Distributed b Distributor Vertreiber Distributeur Distribuidor Distributore y Content Content Inhalt Contenu Contenido Contenuto Volume No Volume No Volumen Anzahl Volume Num ro Volumen N mero Volume Quantit Microtiterwells Microtiterwells Mikrotiterwells a de micro Placas multipocillo Micropozzetti Antiserum Antiserum Antiserum Antis rum Antisuero Antisiero Enzyme Conju gate Enzyme Conjugate Enzymkonjugat Conjugu enzymatique Conjugado enzim tico Tracciante enzimatico Enzyme Com plex Enzyme Complex Enzymkomplex Complexe enzyma tique Complex enzim tico Complesso enzimatico ri lu ta ate Solu Substrate Solution Substratl sung Solution substrat Soluci n de sustrato Soluzione di substrato Stop Solution Stop Solution Stoppl sung Solution d arr t Soluci n de parada Soluzione d arresto p Zero Standard Zero Standard Nullstandard Zero Standard Estandar cero Standard zero Standard Standard Standard Standard Estandar Standard Control Control Kontrolle Contr le Control Controllo Assay Buffer Assay Buffer Assaypuffer Tampon d essai Tampon de ensayo Tampone del test as olution ash Solution aschl sung olution de lavage oluci n de lavado oluzione di lavaggio Wash Solut Wash Sol Waschl Sol del Sol de lavad Sol di 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH il arossidorgi 1 N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI Probenverd nnungs Solution pour d
46. yond expiry date as shown on the kit labels 15 All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiter plate readers 16 Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under dif ferent conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different 17 Avoid contact with Stop Solution containing 1 N acidic solution It may cause skin irritation and burns 18 Some reagents contain Proclin 300 BND and or MIT as preservatives In case of contact with eyes or skin flush immediately with water 19 TMB substrate has an irritant effect on skin and mucosa In case of possible contact wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water Wash contaminated objects before reusing them If inhaled take the person to open air 20 Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline or regulation 21 For information on hazardous substances included in the kit please refer to Safety Data Sheets Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DEMEDITEC Demeditec Diagnostics GmbH e Lise Meitner StraBe 2 e D 24145 Kiel Germany en 08 07 14 Phone 49 0 431 71922

DE2935 Insulin ELISA 141030 m

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