Androstenedione ELISA - DIAsource Immunoassays
Contents
1. CHROM TMB Concentrado de conjugado de biotina Concentrado avidina HRP Tamp n de ensayo Conjugado de biotina Anticuerpo espec fico Estreptavidina HRP Concentrado WASH SOLN Tampon de lavado Revision nr 1305132. Ag 1251 Ab 1251 Ag 1251 Ab 1251 CONC INC BUF ACETONITRILE SERUM DIL SPE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL NEUTR SOLN TRACEUR BUF EXTR SOLN conc WASH SOLN CONTROL N Used symbols Wash buffer Revision nr 130513 P I Number 1701000 Simbolos utilisados Producto sanitario para diagn stico in vitro Fabricante WASH SOLN cone 1251 CONC Ab 1251 conc ACETONITRILE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR SOLN ELU SOLN GEL PRE SOLN NEUTR SOLN TRACEUR BU HRP HRP HRP HRP CONJ BUF CHROM TMB conc
3. Timer Semi logarithmic graph paper or software for data reduction 4 3 Storage and stability of the Kit When stored at 2 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 8 C Microtiter wells must be stored at 2 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again Opened kits retain activity for three months if stored as described above 4 4 Preparation of Reagents Allow all reagents and required number of strips to reach room temperature prior to use Wash Solution Add deionized water to the 40X concentrated Wash Solution Dilute 30 mL of concentrated Wash Solution with 1170 mL deionized water to a final volume of 1200 mL The diluted Wash Solution is stable for 2 weeks at room temperature 4 5 Disposal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheets 4 6 Damaged Test Kits In case of any severe damage to the test kit or components DIAsource ImmunoAssays S A has to be informed in writing at the latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 en
4. golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado Adicionar 200 uL de Substrate Solution a cada pocillo Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 100 uL de Stop Solution a cada pocillo O Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 es Revision Nr 140710 1 6 3 Calculo de los Resultados Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de calibradores controles y muestras de pacientes Construir una curva est ndar mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada calibrador frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X 3 Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva est ndar 4 M todo automatizado Los resultados en la IFU se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 Par metros 4 Par metros Rodbard o 4 Par metros Marquardt son los m todos preferidos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes 5 La concentraci n de las
5. mezclar totalmente 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1 Consideraciones generales Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada calibrador control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura 6 2 Procedimiento de ensayo Cada uno debe incluir una curva de calibradores 1 Asegurar el n mero deseado de pocillos en el recipiente 2 Dispensar 20 uL de cada Calibrador Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados 3 Dispensar 200 uL de Enzyme Conjugate a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso 4 Incubar durante 60 minutes a temperatura ambiente 5 Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 4 veces con Wash Solution diluida 400 uL por pocillo Realizar un
6. muestra puede leerse directamente de la curva de calibradores Las muestras con concentraciones superiores al mayor est ndar han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n N a 6 3 1 Ejemplo de una Curva Est ndar T pica Los siguientes datos son solamente para la explicaci n y no pueden ser utilizados en lugar de los datos generados en el momento del ensayo Calibrador 5 10 0 ng mL 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales En un estudio con donantes de sangre aparentemente sanos utilizando el Diasource Androstenedione ELISA se observaron los siguientes valores Mujeres suero CO oaei ra ec Css es 27 or sm Hombres suero Edad Media Percentil 2 5 Percentil 97 5 a os ng mL ng mL ng mL 8 CONTROL DE CALIDAD Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparaci n directa de los resultados Es re
7. pathological levels The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DIAsource directly Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 en Revision Nr 140710 1 9 ASSAY CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 0 021 10 ng mL 9 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity The following substances were tested for cross reactivity of the assay Compound Crossreactivity Androstenedione 100 0 Androsterone lt 0 01 Aldosterone 0 0 Cortisol lt 0 2 Dihydrotestosterone lt 0 01 Dihydroepiandrosterone 0 01 Estriol 1 8 16 Epiestriol lt 0 01 Estradiol lt 0 01 Estriol 3 glucuronide lt 0 01 Estriol 16 glucuronide lt 0 01 Estriol 16 sulfate lt 0 01 Estrone lt 0 01 1
8. s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente se pueden derivar consecuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 113 Responsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante 12 REFERENCIAS BIBLIOGRAF A Consultar el manual de usuario en ingl s Revision date 2014 07 10 Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 es Revision Nr 140710 1 P I Number 1701000
9. to be taken into account Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 en Revision Nr 140710 1 6 3 1 Example of Typical Calibration curve The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay Calibrator Optical Units 450 nm Calibrator 0 0 ng mL Calibrator 1 0 1 ng ml 7 EXPECTED VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values In a study conducted with apparently normal healthy adults using the DIAsource Androstenedione ELISA the following values are observed Females Age years Mean 2 5 Percentile 97 5 Percentile 2 gt ng mL ng mL ngimL 2 039 002 086 mess 66 22 os se Males Age Mean ng mL 2 5 Percentile 97 5 Percentile years g ng mL ng mL 11 17 18 53 54 82 The results alone should not be the only reason for any therapeutic consequences The results should be correlated to other clinical observations and diagnostic tests 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and
10. 10 uL Sample 90 uL Calibrator O mix thoroughly b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Calibrator O mix thoroughly 6 TEST PROCEDURE 6 1 General Remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each calibrator control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption As a general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature 6 2 Assay Procedure Each run must include a calibration curve Secure the desired number of Microtiterwells in the holder Dispense 20 uL of each Calibrators controls and samples with new disposable tips into appropriate wells Dispense 200 uL Enzyme Conjugate into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step Incubate for 60 minutes at room temperature PO RQ Na Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 4 times with diluted Wash Solution 400 uL per well Strike the wells sharply on absorbent pape
11. 7a Pregnenolone lt 0 01 170H Progesterone lt 0 3 Progesterone lt 0 01 Testosterone 0 6 9 3 Analytical Sensitivity The analytical sensitivity was calculated from the mean minus two standard deviations of twenty 20 replicate analyses of CalibratorO and was found to be 0 021 ng mL 9 4 Precision The within assay variability Intra Assay and between assay variability Inter Assay are shown below 9 4 1 Intra Assay Variation oe Intra Assay Variation Mean am cv 1 AA gt E 9 4 2 Inter Assay Variation Inter Assay Variation EI 9 4 3 Inter Lot The inter lot variation was determined by repeated measurements of 3 samples in 6 replicates per sample with 3 different kit lots Sample n Mean Lot 1 ng mL Mean Lot 2 ng mL Mean Lot 3 ng mL Inter Lot CV Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 en Revision Nr 140710 1 9 5 Recovery Samples have been spiked by adding Androstenedione solutions with Known concentrations in a 1 1 ratio The expected values were calculated by addition of half of the values determined for the undiluted samples and half of the values of the known solutions The Recovery has been calculated by multiplication of the ratio of the measurements and the expected values with 100 112 9 108 6 Concentration ng mL Average Recovery Range of Recovery 9 6 Linearity Range of Recovery 3 y le 102 9 101 3 105 6 10 LIMITATION
12. CIONES DE USO Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados 10 1 Sustancias que pueden interferir Hemoglobina hasta 4 mg mL Bilirrubina hasta 0 5 mg mL y Triglic ridos hasta 30 mg mL no influencian los resultados del ensayo 10 2 Interferencias con drogas Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de Androstenodiona en una muestra 10 3 Efecto Gancho Dosis Elevada No se ha observado efecto gancho en este ensayo 11 ASPECTOS LEGALES 11 1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas a n el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Pr cticas de Laboratorio o a otros est ndares y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un n mero suficiente de controles para validar la exactitud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par metros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con Diasource 11 2 Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse
13. Concentraciones 0 0 1 0 3 1 0 3 0 10 ng ml Conversion ng mL x 3 492 nmol l Los calibradores estan calibrados segun el material de referencia de la National Measurement Institute Australia NMIA M955 Contiene conservante sin mercurio El Control Low amp High 2 viales 1 0 mL each listo para usar N Referir los valores y rangos del control a la etiqueta del via o a la Hoja de datos QC G Q Z 7 E Contiene conservante sin mercurio Enzyme Conjugate Conjugado enzim tico 1 vial 25 mL listo para usar Androstenediona conjugado con la Peroxidasa de r bano Contiene conservante sin mercurio A 5 jaa eal a a de sustrato 1 vial 25 mL listo para usar ae de parada 1 vial 14 mL listo para usar Evitar el contacto con la Solucion de parada Puede causar irritacion y quemaduras en el piel 7 ise oram A 1 vial 30 mL concentrado 40x Nota Se puede solicitar el Calibrador O para la diluci n de la muestra 4 2 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450 10 nm Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada 4 3 Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 C 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos mas alla de esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 C 8 C Las placas multipocillo han de a
14. Consequences Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutical consequences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutical consequences 11 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer 12 REFERENCES 1 Kicman A T Bassindale T Cowan D A Dale S Hutt A J and Leeds A R Effect of androstenedione ingestion on plasma testosterone in young women a dietary supplement with potential health risks Clin Chem 2003 49 167 169 2 Brown G A Vukovich M D Martini E R Kohut M L Fr
15. DA Ze CE Androstenedione ELISA KAPD3265 DIAsource ImmunoAssays S A Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium LOT 140710 1 ANDROSTENEDIONE ELISA KAPD3265 IN VITRO DIAGNOSTIC USE DlAsource ImmunoAssays SA Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 99 91 1 INTRODUCTION The DiAsource Androstenedione Enzyme Immunoassay Kit provides materials for the quantitative determination of Androstenedione in serum and EDTA plasma This assay is intended for in vitro diagnostic use only The steroid hormone Androstenedione is one of the main androgens besides Testosterone and Dehydroepiandrosterone Testosterone the most important biological active androgen is derived from peripheral enzymatic conversion of Androstenedione In males androgens are secreted primarily by the Leydig cells of the testes to some degree also in the adrenal cortex In females the androgens are secreted mainly in the adrenal glands and in the ovary Around 10 of the androgens are derived from peripheral conversion mainly of DHEA Androstenedione and Testosterone show high diurnal variability The highest levels are measured in the morning At the age of puberty serum androstenedione levels rise after menopause they decline again High androstenedione levels are measured during pregnancy In women high levels of androstenedione 47 100 above normal are generally found in hirsutism mostly in combin
16. Revision Nr 140710 1 5 SPECIMEN Serum or EDTA plasma can be used in this assay Do not use Heparin or Citrate plasma Heparin plasma leads to slightly reduced values For citrate plasma the results are significant increased Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette for serum allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting has occurred Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time Plasma Whole blood should be collected into centrifuge tubes containing anti coagulant and centrifuged immediately after collection E g Sarstedt Monovette for EDTA plasma 5 2 Specimen Storage Specimens should be capped and may be stored for up to 5 days at 2 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen Dilution If in an initial assay a Serum specimen is found to contain more than the highest calibrator the specimens can be diluted 10 fold or 100 fold with Calibrator O and reassayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a dilution 1 10
17. S OF USE Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a complete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results 10 1 Interfering Substances Haemoglobin up to 4 mg mL Bilirubin up to 0 5 mg mL and Triglyceride up to 30 mg mL have no influence on the assay results 10 2 Drug Interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of Androstenedione in a sample 10 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 en Revision Nr 140710 1 11 LEGAL ASPECTS 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national standards and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DlAsource 11 2 Therapeutic
18. ailable upon request directly from DlAsource Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 en Revision Nr 140710 1 4 KIT COMPONENTS 4 1 Contents of the Kit Microtiterwells 12x8 break apart strips 96 wells Wells coated with a polyclonal anti Androstenedione antibody on Calibrators N 0 to 5 6 vials 1 mL ready to use See exact values on vial labels Conversion ng mL x 3 492 nmol l Standards are calibrated against Reference Material of the National Measurement Institute Australia NMIA M955 contain non mercury preservative O Z El F N Control Low amp High 2 vials 1 0 mL each ready to use For control values and ranges please refer to vial label or QC Datasheet Contain non mercury preservative en Z 7 E Enzyme Conjugate 1 vial 25 mL ready to use Androstenedione conjugated to horseradish Peroxidase contains non mercury preservative S z A Substrate Solution 1 vial 25 mL ready to use TMB CHROM TMB a Stop Solution 1 vial 14 mL ready to use saa contains 0 5M H2SO Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns SOLN Wash Solution 1 vial 30 mL 40X concentrated see Preparation of Reagents STOP WASH 4 2 Equipment and material required but not provided Amicrotiterplate calibrated reader 450 10 nm Calibrated variable precision micropipettes Absorbent paper Distilled or deionized water
19. anke W D Jackson D A and King D S Endocrine responses to chronic androstenedione intake in 30 to 56 year old men J Clin Endocrinol Metab 2000 85 4074 4080 3 Erickson GF 1993 Normal regulation of ovarian androgen production Seminars in Reproductive Endocrinology 11 307 312 4 Mango D Scirpa P Battaglia F Tartaglia E Manna P Diagnostic significance of steroid hormones in patients with ovarian cancer J Endocrinol Invest 1986 Aug 9 4 307 14 Revision date 2014 07 10 Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 en Revision Nr 140710 1 ANDROSTENEDIONE ELISA KAPD3265 IN VITRO DIAGNOSTIC USE DiAsource ImmunoAssays SA Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 99 91 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzim tico Diasource Androstenedione proporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantitativa del Androstenodiona en suero y plasma EDTA Este ensayo est dise ado solo para diagn stico in vitro 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit Diasource Androstenedione ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio de uni n competitiva Los pocillos de las placas est n recubiertos con un anticuerpo policlonal dirigido contra un foci antig nico en la mol cula Androstenodiona En las muestras de los pacientes Androstenodiona compite con un conjugado Androstenodiona peroxidasa de r bano en la uni n al an
20. ation with other androgens as testosterone and DHEA S Androstenedione overproduction is due to ovarian dysfunction or maybe of adrenal origin High circulating androstenedione levels are found in women with polycystic ovaries and 21 hydroxylase effect Significant lower androstenedione levels are found in postmenopausal osteoporosis 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DlAsource Androstenedione ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the principle of competitive binding The microtiter wells are coated with an antibody directed towards an antigenic site on the Androstenedione molecule Endogenous Androstenedione of a patient sample competes with an Androstenedione horseradish peroxidase conjugate for binding to the coated antibody After incubation the unbound conjugate is washed off The amount of bound peroxidase conjugate is reverse proportional to the concentration of Androstenedione in the sample After addition of the substrate solution the intensity of colour developed is reverse proportional to the concentration of Androstenedione in the patient sample 3 PRECAUTIONS e This kit is for in vitro diagnostic use only For professional use only e All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV III HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal e Before starting t
21. comendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utilizar m todos estad sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ning n error contactar con su distribuidor o con Diasource directamente Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 es Revision Nr 140710 1 9 CARACTERISTICAS DEL ENSAYO 9 1 Rango dinamico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre 0 021 10 ng mL 9 2 Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Consultar el manual de usuario en ingl s 9 3 Sensibilidad Analitica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media menos dos desviaciones est ndar de veinte 20 r plicas del Calibrador 0 y result ser 0 021ng mL 9 4 Precisi n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 5 Recuperaci n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 6 Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s 10 LIMITA
22. ctivos o las muestras puede dar resultados err neos e El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas e No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit e Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados e No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las placas pueden resultar diferentes e Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas e Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a Diasource Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 es Revision Nr 140710 1 4 KIT COMPONENTS 4 1 Contents of the Kit Microtiterwells placas multipocillo 12 x 8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti Androstenodiona policlonal 2 cat on Calibradores Calibrador 0 5 6 viales 1 mL listo para usar
23. he assay read the instructions completely and carefully Use the valid version of the package insert provided with the kit Be sure that everything is understood e The microplate contains snap off strips Unused wells must be stored at 2 C to 8 C in the sealed foil pouch and used in the frame provided e Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same sequence for each step e Use reservoirs only for single reagents This especially applies to the substrate reservoirs Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution colored Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur e Mix the contents of the microplate wells thoroughly to ensure good test results Do not reuse microwells e Do not let wells dry during assay add reagents immediately after completing the rinsing steps e Allow the reagents to reach room temperature 21 26 C before starting the test Temperature will affect the absorbance readings of the assay However values for the patient samples will not be affected e Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes e Donot smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled e Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false re
24. lmacenarse a 2 C 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo Los kits abiertos conservan su actividad durante 3 meses si se almacenan como se ha descrito arriba 4 4 Preparacion de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el numero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Wash Solution Mezclar 30 mL de Wash Solution concentrada con 1170 mL de agua desionizada hasta un volumen final de 1200 mL La soluci n del lavado diluida es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente 4 5 Eliminacion del Kit La eliminacion del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informacion especial de este producto ver capitulo 13 4 6 Kits de ensayo danados En caso de que exista cualquier da o severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a Diasource no m s tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n Despu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales Catalogue Nr KAPD3265 PI number 1701126 es Revision Nr 140710 1 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero o plasma EDTA No usar plasma heparina o plasma citrato El heparina plasm tico sufre disminuci n de sus valores el citrato presenta valores muy aumentados No usar
25. muestras hemol ticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette para el suero permitir coagulaci n y separar el suero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular Plasma Toda la sangre ha de recogerse en tubos de centr fuga que contengan anticoagulante y centrifugar inmediatamente tras la recogida Ej Sarstedt Monovette para plasma EDTA 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 5 dias a 2 C a8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un periodo de tiempo mas largo han de congelarse solo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo 5 3 Diluci n de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el calibrador m s concentrado ha de diluirse con Calibrador 0 y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejemplo a diluci n 1 10 10 uL muestra 90 uL Calibrador O mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Calibrador O
26. r to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure 7 Add 200 uL of Substrate Solution to each well 8 Incubate for 30 minutes at room temperature 9 Stop the enzymatic reaction by adding 100 uL of Stop Solution to each well 10 Read the OD at 450 10 nm with a microtiter plate reader within 10 minutes after adding the Stop Solution 6 3 Calculation of Results 1 Calculate the average absorbance values for each set of calibrators controls and patient samples Using semi logarithmic graph paper construct a calibration curve by plotting the mean absorbance obtained from each calibrator against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis 3 Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the calibration curve 4 Automated method The results in the Instructions for Use have been calculated automatically using a 4 Parameter curve fit 4 Parameter Rodbard or 4 Parameter Marquardt are the preferred methods Other data reduction functions may give slightly different results 5 The concentration of the samples can be read directly from this calibration curve Samples with concentrations higher than that of the highest calibrator have to be further diluted For the calculation of the concentrations this dilution factor has
27. sults e Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation e Donot use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels e All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers e Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different e Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H2SQ It may cause skin irritation and burns e Some reagents contain Proclin 300 BND and or MIT as preservatives In case of contact with eyes or skin flush immediately with water e TMB substrate has an irritant effect on skin and mucosa In case of possible contact wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water Wash contaminated objects before reusing them If inhaled take the person to open air e Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline or regulation e For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets Material Safety Data Sheets for this product are av
28. ticuerpo inmovilizado Despu s de la incubaci n el conjugado no unido se lava La cantidad de conjugado de peroxidasa unido es inversamente proporcional a la concentraci n de Androstenodiona en la muestra Despu s de la adici n de la soluci n sustrato la intensidad de color desarrollado es inversamente proporcional a la concentraci n de Androstenodiona en la muestra del paciente 3 PRECAUCIONES e Este kit es solamente para diagn stico in vitro e Porfavor se usa solo la version valida de la metodico t cnico incluido aqui en el kit e Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material e Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV III HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos e Evitar contacto con Stop Solution que contiene H2SO 0 5 M Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel e Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas e Nofumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados e Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los rea
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