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1. n transversal tubular y del volumen nuclear de las c lulas de Leydig a partir de los datos di metro trans versal tubular menor y di metros nucleares mayor y menor respec tivamente se concibi dise y elabor un programa para la reali zaci n de estudios morfom tricos MFT en lenguaje Turbo Basic que calcula el volumen nuclear se g n la f rmula y 1 6 1 B nuclear donde Ly B di metros menor y mayor El c lculo de las medias se realiz en cada caso y en cada grupo y se de Revista CENIC Ciencias Biol gicas Vol 31 No 3 2000 KK PPP 5 5 5 a a a a termin adem s la desviaci n est ndar de cada grupo An lisis de los datos Las variables rea de la secci n transversal tubular y volumen nu clear de c lulas de Leydig fueron almacenados en bases de datos ela boradas mediante el programa com putadorizado Fox Pro 2 5 Para estu diar el efecto de la administraci n de alcohol y del tiempo sobre dichas variables se practic un an lisis de varianza de dos v as que incluy como efectos principales el tiempo y el alcoholismo anidado en el tiempo Este an lisis se llev a cabo mediante el paquete de programas comercial Systat 7 0 RESULTADOS El programa MFT facilit la realizaci n de los c lculos morfom bricos de las estructuras medidas con el ocular microm trico Los animales tratados por 12 se manas tuvieron un mayor consumo promedio diario de alc2. 50 del peso de los test culos que fue atribuida a una reducci n del rea de la secci n transversal de los t bulos seminiferos y de la cantidad de epitelio germinativo En el pre sente trabajo aunque se encontr disminuci n del peso de los testicu los no se hali una reducci n signi ficativa del rea de secci n transver sal tubular Esos mismos autores re portaron una marcada reducci n de la masa testicular relativa al peso corporal en ratas de 20 q de nacidas tratadas con dieta l quida durante 41 d 36 del total de calor as aportadas por el alcohol pero este experimen to al realizarse durante la etapa de maduraci n sexual de los animales pudo haber perjudicado el crecimien to testicular Aunque ha sido referido por al gunos autores que el tratamiento cr nico con alcohol provoca reduc ci n del rea de la secci n transver sal de los t bulos seminiferos en Revista CENIC Ciencias Biol gicas Vol 31 No 3 2000 este experimento la ingesti n de al cohol 10 durante 12 y 24 semanas no la afect significativamente si bien sta fue menor en el grupo tra tado por 12 semanas Ello pudiera ex plicarse por ser este grupo el de ma yor consumo promedio diario de al cohol Van Thiel y col relacionaron la reducci n del di metro tubular con la p rdida de celularidad del epi telio germinativo secundaria a la dis minuci n de testosterona Reciente mente otros autores atribuyen este e
3. Entre las al teraciones m s frecuentes se repor ta disminuci n del deseo sexual disfunciones er ctiles e infertili dad El consumo cr nico de alcohol provoca adem s disminuci n del peso y volumen testiculares atro fia testicular reducci n del di me tro de los t bulos seminiferos y grado variable de fibrosis peritu bular 5 Con relaci n a dichas afec ciones se ha reportado una dismi nuci n de las concentraciones s ricas de testosterona asociada con la inhibici n directa de la esteroidog nesis en las c lulas de Leydig Aunque hay evidencias de que el alcoholismo cr nico inhibe la s ntesis y liberaci n de testosterona algunos autores plantean que no provoca alteracio nes citol gicas de dichas c lu las sin embargo no se han en contrado referencias a su an lisis morfom trico lo cual podr a apor tar una informaci n m s objetiva sobre el estado de funcionamien to celular Por lo anterior este trabajo se propuso evaluar los efectos del consumo cr nico de alcohol sobre el rea de la secci n transversal de los t bulos seminiferos y el volu men nuclear de las c lulas de Leydig en la rata 181 182 MATERIALES Y METODOS Animales y tratamiento Se seleccionaron 30 ratas albinas Wistar macho de 10 semanas de edad 170 215 g de peso corporal aparen temente sanas adultas Bioterio del Instituto Superior de Ciencias B si cas y Precl nicas Victoria de Gi r n Los ani
4. Revista CENIC Ciencias Biol gicas Vol 31 No 3 2009 El alcoholismo cr nico en la morfolog a de estructuras testiculares en la rata Aymara G mez Gonz lez y Andr s Dovale Borjas 3 Instituto de Ciencias B sicas y Precl nicas Victoria de Gir n Avenida 27 No 12023 entre 120 B y 122 Marianao Avenida E 17 No 19402 entre 194 y 198 Playa Ciudad de La Habana Cuba cari ani A NATA Aceptado 5 de junio del 2000 PEPENE ipigi Na PEZAR Pian 2 Recibido 10 de agosto de 1999 Palabras clave t bulos semin feros c lulas de Leydig morfometr a cariometr a Key words seminiferous tubules Leydig cells morphometry karyometry RESUMEN La ingesti n cr nica de alcohol provoca un descenso de las con ceentraciones plasm ticas de testosterona hecho que se asocia con disfunciones sexuales tales como impotencia y esterilidad Aunque el estudio histol gico de los testiculos en los individuos alcoh licos ha demostrado disminuci n de su peso y modificaciones del di metro y morfolog a de los t bulos semin feros no se han hallado alteraciones citol gicas de las c lulas de Leydig productoras de testosterona Con el objetivo de evaluar los efectos del alcohol sobre la morfolo g a de dichas estructuras testiculares se realiz un estudio con 30 ratas albinas Wistar de 10 semanas de edad Diez de los animales consumieron alcohol al 10 en el agua de consumo durante 12 semanas y otros diez siguieron el tratam
5. asic Versi n 1 0 1987 Palkovits M Quantitativ Histolo gische Methoden in Verbindung mit den Schiddruse und ihre vergk1 chenge Bewertung Endokrinologie 45 227 1973 Szent gothai J Fierk B Mess B and Hal sz B Hypothalamic control of the anterior pituitary 3rd Ed Akad miai Kiad Budapest 130 1968 Bertram J E Analyzing renal glom eruli with the new stereology Inter national Review of Citology 161 111 1995 Avila V COMSDI Manual de usua rio Versi n 2 0 Holgu n 1 1994 Eng A SASUDI Manual de usuario Versi n 2 0 Holgu n 1 10 1994 Coro Artich R M Borrajere I DIGIPAT un sistema cubano para rnorfometr a de im genes Revista Latinoamericana de Patolog a 34 9 1996 Deltour L Haselbeck R Hwee Luan Ang Duester G Localization of class I and class IV alcohol dehydro genases in mouse testis and epi dydimis Potential retinol dehydroge nases for endogenous retinoic acid synthesis Biology of Reproduction 56 102 1997 183
6. fecto al d ficit de cido retinoico indispensable para el desarrollo de dicho epitelio Los resultados del presente trabajo no coinciden con lo reportado por estos autores de bido probablemente a la menor concentraci n de alcohol emplea da Los vol menes nucleares de las c lulas de Leydig fueron menores en los grupos de animales alcoholizados aunque no se afectaron significati vamente por el tratamiento Esto pudiera deberse al peque o tama o de la muestra y a la baja concentra ci n de alcohol empleada La dismi nuci n del volumen nuclear de las c lulas secretoras se interpreta como un signo de menor actividad sint tica como en este caso el n cleo controla la s ntesis y secreci n de testosterona el descenso en la pro ducci n de dicha hormona justifica r a la disminuci n del volumen nu clear CONCLUSIONES El consurno de alcohol 10 en el agua de beber durante 12 y 24 serna nas provoca disminuci n de los pe sos testiculares pero no afecta sig nificativamente la morfolog a de este rgano El volumen nuclear de las c lulas de Leydig resulta discre tamente menor en las ratas tratadas que en sus respectivos controles El rea de la secci n transversal de los t bulos semin feros no mostr varia ciones significativas entre ambos grupos Estos resultados coinciden con la disminuci n de las concen traciones plasm ticas de testoste rona reportados en individuos al coh licos y en experie
7. ien to per 24 semanas los diez animales restantes constituyeron los controles Al finalizar el tratamiento se extrajeron los test culos se pesaron aislados del epid dimo y se procesaron mediante la t cnica histol gica de hematoxilina y eosina Se midi el di metro transversal menor de los t bulos semin feros y se realiz la cariometr a de las c lulas de Leydig con el empleo de un ocular microm trico de 10x Para el procesamiento de los datos se confeccion un pro grama para estudios morfom tricos que permiti calcular el rea de la secci n transversal tubular y el volumen nuelear celular a partir de los datos recogidos Se encontr una disminuci n del peso testicular y del volumen nuclear de las c lulas de Leydig en los animales experimentales pero en cambio no se afect significativamente el rea de la secci n transversal tubular Aunque los valores obtenidos no fueron estad sticamente significativos estos resultados son con gruentes con la disminuci n de las concentraciones plasm ticas de testostero na encontrada en pacientes alcoh licos ABSTRACT Chronic alcohol ingestion results in a decrease in serum testosterone levels associated with sexual dysfunction impotence and sterility Diminished testicular weights and disturbances in the morphology and diameter of seminiferous tubules have been reported in alcoholic male rats but the cytological features of the Leydig cells do not seem to be affected In order to eva
8. luate the alcohol induced testicular damage 30 ten week old ma e Wistar rats have been studied Ten of the animals were fed 10 alcohol in their drinking water during 12 weeks another ten for 24 weeks and the rest of the animals were the controls At the end of the treatment the testicles were extracted isolated from the epididymis weighed and processed with hematoxilin and eosin The transversal diameter of the seminiferous tubules and the karyometry of Leydig cells were measured using a 10x micrometric ocular A software program for morphometric studies for data processing was created This software made it possible to calculate the cross section area of the seminiferous tubules and the nuclear volume of Leydig cells A decrease of testicular weights and Leydig cells nuclear volume reduction was found but the cross section area of the seminiferous tubules was not affected by alcohol consumption Although the obtained values had not statistical significance these results are congruent with the decrease of serum testosterone levels found in alcoholic patients o SE AR a MARD OME SAN NY A UN ARTE AR Tao A AM DN D E AE ET A PAE Rv e A TN 3 El ALARI AAA Id a ri INTRODUCCION El alcoholismo es una toxicoma n a que afecta principalmente a la poblaci n adulta masculina y se en cuentra asociada con diversos tras tornos entre los que se destacan por su importancia m dica y social las disfunciones sexuales
9. males se distribuyeron de manera aleatoria en dos grupos cada uno de los cuales estuvo inte grado por diez experimentales y cin co controles su vez cada grupo ex perimental consumi alcohol et lico 10 en el agua de consumo 16 g 100 mL durante 12 y 24 semanas res pectivamente mientras quelos con troles recibieron agua ad libitum El l quido se suministr en jeringuillas pl sticas de 50 mL lo que permiti comprobar el consumo diario de la droga Procesamiento histol gico y an li sis morfom trico Al finalizar el tratamiento los animales se sacrificaron previa anes tesia con pentobarbital s dico a ra z n de 40 mg kg por v a intraperito neal Los test culos se extrajeron y pesaron aislados del epid dimo en una balanza anal tica BLA 200 MT se fijaron por inmersi n en l quido de Bouin durante 24 h y se procesa ron mediante la t cnica de la para na Los cortes a um se colorearon con hematoxilina y eosina y se ob servaron en un microscopio Carl Zeiss Se midi el di metro transver sal menor de m s de 100 t bulos semin feros en cada animal con el empleo de un ocular microm trico Tx y un objetivo 40x Para la cariometri a de las c lulas de Leydig se midieron los di metros mayor y menor de m s de 190 n cileos celulares que presentaron nucl cios manifiestos mediante un ocular microm trico 7x un objetivo de inmersi n 100xy optovar 1 6 Para el c lculo del rea de la secci
10. ncias simi lares Fue concebido y dise ado un pro grama de computaci n denomina do MFT que permite realizar el an lisis de estudios microsc picos mor fom tricos practicados con ocular mi crom trico BIBLIOGRAFIA 1 10 H 12 13 14 15 Taniguchi N and Kaneko S Alco holic effect on male sexual func tion Nippon Rinsho 55 3040 1997 Bergman B O and Brismar B O Cohabiting relationships and sexual interest of male alcoholics Journal of Addictive Diseases 15 53 1998 Van Thiel D H Lester R and Sherins R I Hypogonadism in al coholic liver disease evidence for a double defect Gastroenterology 61 1188 1974 Van Thiel D H Gavaler J S Lester R and Goodman M D Alcohol in duced testicular atrophy An ex perimental modei for hypogo nadism ocurring in chronic alco holic men Gastroenterology 69 328 1975 Calleja J Rodr guez L A Fern ndez del Busto E y Vaquero C Alteracio nes testiculares producidas por el al cohol Actas Urol gicas Espa olas 21 337 1997 Van Thiel D H Gavaler J S Cobb C E Sherins R J and Lester R Alco hobinduced testicular atrophy in the adult male rat Endocrinology 105 888 1978 Adams M L and Cicero T J Effects of alcohol on B endorphin and re productive hormones in the male rat Alcoholism Clinical and Ex perimental Research 15 685 1991 Borland International Ine Turbo B
11. ohol que los tratados por 24 semanas Los pesos testiculares de las ratas alcoholiza das fueron discretamente menores aunque el an lisis de varianza apli cado a todos los grupos evidenci que dicha disminuci n no fue signi ficativa La estructura histol gica de los test culos fue similar en ambos grupos El grosor de la pared y las caracter sticas del epitelio semi n fero fueron aparentemente norma les El rea de secci n transversal tubular fue ligeramente menor en el grupo de ratas tratadas por 12 sema nas Fig 1 Aunque dicha variable fue discretamente mayor en el gru po tratado por 24 semanas que en su respectivo control las diferencias no fueron estad sticamente significati vas como evidencia el an lisis de varianza aplicado a todos los grupos El aspecto histol gico de las c lulas de Leydig fue aparentemente nor mal en todos los grupos Los vol menes nucleares medios de dichas c lulas fueron menores en todas las ratas alcoholizadas aunque el an lisis de varianza indic que stos no fueron significativamente afectados por el tratamiento Fig 2 DISCUSION Numerosas investigaciones mi crosc picas morfol gicas requieren del empleo de m todos cuantitativos morfom tricos que contribuyan a validar los resultados los que de esta forma pueden ser comparados me diante diferentes pruebas estad sti cas Entre los m todos m s emplea dos se encuentra la cariovolume tr a pero el proce
12. samiento manual de los datos obtenidos mediante s tos es sumamente laborioso y est sujeto a m ltiples errores Aunque en el mundo y en centros de elevado desarrollo de Cuba existen equipos de avanzada tecnolog a que permi ten realizar tales estudios mediante la digitalizaci n de im genes s tos no est n al alcance de la mayor a de los centros donde se realizan es tas investigaciones son de elevado costo y no est n exentos de dificul tades t cnicas en su utilizaci n Con la creaci n del nuevo programa MET todo aquel que tenga acceso a una mierocomputadora IBM compa tible puede realizar el an lisis de los Gatos primarios obtenidos median te los m todos micromorfom tricos m s utilizados La disminuci n de los pesos testiculares en ratas alcoholizadas ha sido referida por otros autores 1 Van Thiel y col estudiaron los efec tos del alcohol sobre la estructura y funci n testicular en ratas tratadas STTS tum D o E 12 24 t semanas I Controles O Expenmentales Fig 1 Area de la secci n transversal de los t bulos semin feros STTS jen ratas que recibieron alcohol y en controles en dos per odos de tratamiento a Volumen nuclear mm t semanas J Controles U Experimentales Fig 2 Volumen nuclear de c lulas de Leydig en ratas que recibieron alcohol y en controles en dos per odos de tratamiento por 164 d 23 4 semanas y encontra ron una reducci n de m s del
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