PLATELIA HSV (1 + 2) IgM 96 PRUEBAS 72683 - Bio-Rad
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1. 6 PRECAUCIONES DE USO SOLAMENTE PARA USO EN DIAGN STICO IN VITRO CONSERVAR A 2 8 C Cuidado Este kit contiene materiales de origen humano que han sido testados y dieron resultados negativos en las pruebas aprobadas por la FDA para la presencia de HbsAg y de los anticuerpos anti VIH 1 anti VIH 2 y anti HCV Dado que ninguna prueba diagn stica puede ofrecer una completa garant a sobre la ausencia de agentes infecciosos cualquier material de origen humano debe ser considerado potencialmente infeccioso Todos los materiales de origen humano deben manipularse seg n las pr cticas de seguridad com nmente adoptadas en la pr ctica diaria de laboratorio Informaciones de Salud y Seguridad 1 No pipetear por via oral Usar los guantes de un solo uso y la protecci n para los ojos al manejar las muestras y durante la prueba Lavar las manos a fondo despu s de terminar el test 2 Los reactivos siguientes contienen baja concentraci n de sustancias da inas o irritantes a El tamp n de lavado contiene detergentes b El conjugado contiene fenol c El substrato es cido d Los reactivos contienen zida S dica 0 09 que puede reaccionar con cobre y plomo y formar zidas met licas potencialmente explosivas Para eliminarla diluir con mucha agua Si cualquier reactivo entra en contacto con la piel u ojos lavar con mucha agua 3 Los aparatos no desechables se deben esterilizar despu s su uso El m todo preferido es autoclavar durante 1 h a 1212. podem ser obtidas atrav s da subsidi ria Bio Rad mais pr xima de si vriga spr k som kr vs i enlighet med EG direktivet kan erh llas fr n din lokala Bio Rad representant De vrige sprog som kr ves i henhold til EU direktiv kan f s ved henvendelse til den lokale Bio Rad leverand r Bio Rad Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette France 05 2012 Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33
3. C los materiales dese chables deben ser autoclavados o incinerados 4 El cido sulf rico contenido en la Soluci n Bloqueante y el cido clorh drico usado para limpiar la cristaler a son corrosivos utilizar estos materiales con cuidado En caso de contacto con la piel u ojos limpiar con mucha agua 5 Los cidos neutralizados y la otros residuos l quidos se deben disinfectar a adiendo hipoclorito de sodio en un volumen suficiente para obtener una concentraci n final por lo menos del 1 0 Se requier una exposici n al hipoclorito de sodio al 1 durante 30 minutos para garantizar una disinfecci n eficaz 6 El derrame de materiales potencialmente infecciosos se debe eliminar inmediatamente con papel absorbente y el rea contaminada tendr que ser limpiada por ejemplo con hipoclorito de sodio al 1 0 antes de se que se contin e el trabajo El hipoclorito de sodio no se debe utilizar en derrames que contengan cido antes de que la zona sea limpiada Todos los materiales utilizados para limpiar derrames inclu dos los guantes se deben desechar como residuos potencialmente infecciosos No autoclavar materiales que contengan hipoclorito de sodio Ref 91021 BRD Espa ol 6 11 Precauciones anal ticas 1 Poner todos los reactivos y las muestras a temperatura ambiente 18 30 C antes de su uso Inmediatamente despu s del uso poner los reactivos a la temperatura de conservaci n recomendada Es importante trabajar a la temperatura correct
4. adir 100 L de imunocomplexo a cada pocillo Incubar 45 min a 37 C Lavar 4 veces STEP 3 A adir 100 L de Substrato a cada pocillo Incubar 15 min a T A STEP 4 A adir 100 L de Soluci n Bloqueante Leer la D Oa 450 nm dentro de 30 min 10 VALIDACI N DEL TEST Restar el valor del blanco lt 0 150 a todas las otras lecturas Los valores en D O del suero de control Cut off deben ser dentro del 25 del valor medio si testado en triple prueba Descartar cualquier valor anormal y recalcular la media El valor positivo debe tener D O igual por lo menos a 1 5 veces el Cut off La relaci n entre Control Negativo y Cut off debe ser inferior a 0 6 La D O del cut off debe ser gt 0 2 a 450 nm e gt 0 16 a 450 620 nm 11 INTERPRETACI N DEL TEST Resultados cualitativos Si el valor de la absorbancia de la muestra es superior al Cut off la muestra resulta positiva por la presencia de IgM espec ficas para el ant geno Calcular la relaci n entre el valor de D O de la muestra y lo del Cut off INDEX La muestra se considera Inmune si la concentraci n es gt 1 2 Dudoso 20 del cut off No inmune si la concentraci n es lt 0 8 Si el resultado es dudoso repetir el test Si el resultado continua siendo dudoso recoger una nueva muestra de sangre Ref 91021 BRD Espa ol 8 11 12 LIMITACIONES Como en el caso de muchas pruebas serol gicas los resultados sirven s lo como indicaci n para la di gnosis y deben ser interpr
5. de conjugado indicado en etiqueta mezclando por inversi n Ref 91021 BRD Espa ol 4 11 CONJ CONJUGADO 1 x 18 mL Contenido anticuerpos monoclonales marcados anti HSV con peroxidasa en una soluci n fosfato tamponada conteniendo fenol 0 05 Y Bronidox 0 02 Preparaci n Listo para su uso El Imunocomplexo se tiene que preparar acerca de 45 minutos adelante CONTROL IgM IgM CONTROL NEGATIVO PF93900 1 x 1 6 mL INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Contenido Suero humano diluido en tamp n fosfato 0 01 mol L con BSA 1 y zida s dica al 0 09 l quido listo para su uso sin diluci n adicional WASH BUF 10x TAMP N DE LAVADO 10X PF93603 1 x 100 mL INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Contenido Soluci n salina tamponada PBS concentrada 10 veces contiene Brij al 0 5 Preparaci n Diluir el volumen requerido 1 10 con agua destilada con el fin de obtener el tamp n de lavado listo para su uso Si hay cristales presentes disolverlos a 37 C antes de diluir SAMP DIL DILUYENTE 2 PF93611 1 x 100 mL INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Para la diluci n de las muestras de suero Listo para su uso Contenido Soluci n de prote nas en tamp n fosfato con zida s dica 0 09 con adici n de metilnaranja como conservante SUBS TMB SUBSTRATO PF93619 15 mL Listo para su uso INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Contenido Tetrametilbenzidina 0 26 mg mL y H2O2 0 01 estabilizados en tamp n citrato 0 05 mol L pH 3 8 H2SO4 0 3 M SOLUCI N BLOQUEANTE
6. del lavador Aspiraci n inadecuada de los pocillos Asegurarse del buen funcionamiento del lavador Error de pipeteado Controlar el funcionamiento de la pipeta Adici n de los reactivos demasiado lenta Evitar la sequedad de la placa despu s del lavado A adir los reactivos inmediatamente Presencia de burbujas Evitar la formaci n de burbujas mientras se pipetea Sistema ptico no limpio Controlar la fuente de luz y el detector para la presencia de suciedad Limpiar el fondo de la placa con papel suave Desarrollo escaso del color Tiempo o temperatura de incubaci n incorrectos Verificar el control de la temperatura y el tiempo de incubaci n Seguir cuidadosamente las instrucciones Volumen inadecuado de substrato a adido a la placa Controlar el funcionamiento de la pipeta Ref 91021 BRD Espa ol 10 11 17 REFERENCES 1 G B Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 2 S Land et al Rapid diagnosis of herpes simplex virus infections by enzyme linked immunosorbent assay J Clin Microbiol 19 865 1984 3 B Gonik et al Comparison of two enzyme linked immunosorbent assays for detection of herpes simplex virus antigen J Clin Microbiol 29 436 1991 4 C Gleaves et al Evaluation of an enzyme immunoassay for the detection of herpes simplex virus HSV antigen from clinical specimens in viral transport media J Virological Meth 28 133 1990 5 M Morgan and T Smith Eval
7. PF93602 1 x 16 ml INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Soluci n de H2SO4 0 3 mol L lista para su uso CINTA ADHESIVA 2 BOLSA DE PL STICO 1 MATERIALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS Incubador a 37 40 C Lector de Microplacas longitud de onda 450 o 450 620 nm e 405 nm con linealidades hasta OD gt 2 000 Lavador de Microplacas no indispensable Agua Destilada o desionizada Material de laboratorio cubetas tubos de ensayo etc Micropipetas y puntales de precisi n 2 Guantes de un solo uso Cron metro Soluci n de hipoclorito del sodio 5 Envases para la colecci n de materiales potencialmente infecciosos Papel absorbente Ref 91021 BRD Espa ol 5 11 5 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS Los reactivos deben ser conservados a 2 8 C La fec ha de caducidad est impresa en cada uno de los componentes y en la etiqueta exterior de la caja Los reactivos tienen una estabilidad limitada despu s de la abertura y o de la preparaci n REACTIVO CONDICIONES MICROPLACA 5 SEMANAS 2 8 C bolso de pl stico CONTROL 5 SEMANAS 2 8 C CONJUGADO 5 SEMANAS 2 8 C ANT GENO RECONSTITUIDO utilizar durante el d a no puede ser congelado SUBSTRATO hasta la fecha de caducidad a 2 8 C 1 se mana a 15 30 C en ambiente oscuro DILUYENTE MUESTRAS hasta la fecha de caducidad a 2 8 C WASH BUFFER listo para su uso 2 semanas 2 8 C 5 d as 15 30 C SOLUCI N BLOQUEANTE hasta la fecha de caducidad a 2 8 C
8. Ref 91021 BRD Espa ol 1 11 PLATELIA HSV 1 2 IgM 96 PRUEBAS 72683 KIT INMUNOENZIM TICO POR CAPTURA PARA LA DETERMINACI N CUALITATIVA DE ANTICUERPOS IgM ANTI HERPES SIMPLEX VIRUS 1 2 EN SUERO HUMANO Ref 91021 BRD Espa ol 2 11 RESUMO 1 INDICACIONES DE USO 2 RESUMEN Y EXPLICACI N DEL TEST 3 PRINCIPIO DEL M TODO 4 COMPONENTES DEL KIT Y PREPARACI N DEL REACTIVO 5 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS 6 PRECAUCIONES DE USO 7 TIPO DE MUESTRA Y CONSERVACION 8 PROCEDIMIENTO DEL TEST 9 ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO DEL TEST 10 VALIDACI N DEL TEST 11 INTERPRETACI N DE RESULTADOS 12 LIMITACIONES DEL TEST 13 ESPECIFICIDAD ANAL TICA 14 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DIAGNOSTICAS 15 PRECISI N 16 GUIA DE RESOLUCION DE PROBLEMAS 17 BIBLIOGRAF A Ref 91021 BRD Espa ol 3 11 1 INDICACIONES KIT INMUNOENZIM TICO POR CAPTURA PARA LA DETERMINACI N CUALITATIVA DE ANTICUERPOS IgM ANTI HERPES SIMPLEX VIRUS 1 2 EN SUERO HUMANO 2 RESUMEN Y EXPLICACI N DEL TEST El Herpes simplex virus HSV pertenece al grupo de los Herpesviridae del cual se conocen dos tipos el tipo 1 HSV 1 y el tipo 2 HSV 2 que presentan diferencias antig nicas menores El HSV 1 causa lesiones principalmente oral faciales mientras que HSV 2 es principalmente responsable de lesiones genitales pero esta dinstinci n es s lo aproximada y ambos tipos pueden causar infecciones en amb
9. a Compruebe que el termostato no est por debajo de 35 C por encima de 39 C 2 No usar los reactivos despu s de la fecha de caducidad La contaminaci n microbiol gica de los reactivos debe ser evitada ya que esta puede acortar la vida del producto y causar resultados err neos 3 No modificar el m todo ni reemplazar los reactivos con los de otros fabricantes o de otros lotes a no ser que est espec ficamente indicado que el reactivo es intercambiable No reducir los tiempos de incubaci n recomendados 4 Lavar con cido hidrocl rico 2M todos los materiales de laboratorio que se utilizan en las pruebas y aclarar con agua destilada o desionizada 5 No exponer los reactivos a fuerte iluminaci n ni a humos de hipoclorito durante la conservaci n o las fases de incubaci n 6 Evitar que los pocillos se sequen durante el ensayo 7 Evitar la contaminaci n cruzada entre reactivos Es importante usar pipetas exclusivas para cada reactivo 8 Evitar de tocar el borde del pocillo con el conjugado No salpicar sobre las microplacas 9 Las titulaciones inmunoenzim ticas de vez en cuando pueden presentar un particular efecto llamado edge effect efecto filo que debe reducirse al m nimo aumentando el valor de la humedad durante las fases de la incubaci n Las placas se deben cubrir con sus tapas y deben ser incubadas a 37 C en un ba o de agua usando un soporte para placas o un incubador Alternativamente incubar las placas en un
10. analizador aprobado Para m s informaci n consultar el manual de usuario del equipo No utilizar incubadores de CO2 10 Asegurarse de que el fondo de la placa est limpio y seco y de que no haya burbujas presentes en la superficie del l quido antes de leer la placa 11 Puede ser fuente de error el uso de muestras altamente hemolizadas suero no coagulado en su totalidad o muestras que presentan contaminaci n micr biana 12 Leer el manual de usuario de cada equipo y en especial si desea obtener informaci n sobre los puntos siguientes instalaci n y requisitos espec ficos principios operativos instrucciones precauciones y riesgos especificaciones del fabricante y rendimiento del equipo mantenimiento y servicio t cnico 7 TIPO DE MUESTRA Y CONSERVACI N El tipo de muestra es suero recogido normalmente de sangre venosa y manipulado con las apropiadas precauciones requeridas en la buena pr ctica de laboratorio El suero fresco se puede conservar durante 4 d as a 2 8 C Para conservacion es m s largas congelar a 20 C Evitar de congelar y descongelar reiteradas veces La calidad de la muestra puede ser seriamente afectada por la contaminaci n microbiana que conduce a resultados err neos No utilizar muestras muy lip micas ict ricas hemolizadas o contaminadas El test no se puede aplicar a plasma humano 8 PROCEDIMIENTO M todo Manual Preparar el n mero requerido de tiras Preparar el tamp n de lavado diluyend
11. etados sempre junto con otros tipos de diagn stico Para determinar la sueroconversi n es necesario titular dos muestras La primera muestra se recoge lo mantes posible despu s de que se produzcan losprimeros s ntomas la segunda despu s de 2 3 semanas Si la primera se recoge demasiado tarde durante el curso de la infecci n la sueroconversi n podr a no ser demonstrable Si los resultados de los sueros en pareja no dan resultado definido hay que titular otra vez las muestras Los resultados deben ser interpretados siempre junto con otros procedentes de evaluaci n cl nica y otros procedimientos de diagn sticos 13 ESPECIFICIDAD ANAL TICA Se analizaron 87muestras de suero contenentes potenciales interferentes Anticuerpos Antinucleo ANA n 12 Factor Reumat ideo n 8 Anticuerpos eter filos n 5 Bilirubina n 9 Trigliceridos n 10 Cytomegalovirus IgM 23 14 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE DIAGN STICO En una prueba cl nica externa se analizaron 313 muestras con el kit Platelia en comparaci n con otro m todo inmunoenzim tico comercial Todas la muestras discrepantes eran analizadas con un tercer m todo comercial Los resultados est n resumidos en la tabla siguiente Platelia HSV IgM REFERENCIA 43 6 2 262 El kit Platelia HSV IgM tiene una sensibilidad del 95 6 y una especificidad del 97 8 15 PRECISI N Precisi n intra ensayo Muestra HSM 1 Negativo lt C
12. o El conjugado est compuesto por monoclonales espec ficos anti HSV marcados con peroxidasa 4 COMPONENTES DEL KIT Y PREPARACI N DEL REACTIVO Reactivos suficientes para 96 determinaciones Poner los reactivos a temperatura ambiente de su uso MT PLATE MICROPLACA 12 x 8 pocillos recubiertos de ant cuerpos humanos monoclonales anti IgM humanos Uso Abrir el envase de la placa desde el lado opuesto del c digo M seguido por el n mero de lote que sirve para su identificaci n retirar el soporte y las tiras necesarias Colocar las tiras no utilizadas en la bolsa de pl stico con el gel de silice extraer el aire y cerrar fuertemente CONTROL CONTROL POSITIVO 1 x 1 6 mL Contenido Suero humano diluido a concentraci n conocida de anticuerpos anti HSV IgM en tamp n fosfato 0 01 mol L con BSA 1 y zida s dica al 0 09 l quido listo para su uso sin diluci n adicional Color el color es proporcional al t tulo del anticuerpo CONTROL CUT OFF CUT OFF 1 x 2 5 mL Contenido Suero humano diluido a concentraci n conocida de anticuerpos anti HSV IgM en tamp n fosfato 0 01 mol L con BSA 1 y zida s dica al 0 09 l quido listo para su uso sin diluci n adicional Color el color es proporcional al t tulo del anticuerpo Ag ANT GENO Polvo liofilizado x 6 frascos Contenido Herpes Simplex Virus purificado en tamp n fosfato conteniendo l quido asc tico de rat n y lactosa Preparaci n Reconstituir con el volumen
13. o el Wash Buffer 10x 100 mL 900 mL H2O Preparar el ant geno reconstituyendo el liofilizado con el conjugado volumen indicado en etiqueta Ref 91021 BRD Espa ol 7 11 Diluir las muestras 1 101 poniendo 10 L de suero en 1 mL de diluyente dispensar 100 L de cada muestra diluida para cada pocillo se recomienda efectuar una doble prueba Colocar los controles SIN DILUIR en una tira preferiblemente por duplicado 100 L para cada pocillo El requisito m nimo indispensable es 1 negativo 2 cut off y 1 positivo Dejar un pocillo libre para efectuar el blanco utilizando s lo 100 L de la mezcla substrato Cubrir los pocillos con la cinta protectora e incubar 45 minutos a 37 C Lavar 4 veces dejando la soluci n de lavado en el pocillo 30 segundos 300 L cada ciclo A adir 100 L de imunocomplexo a cada pocillo ant geno anticuerpos monoclonales marcados con POD e incubar de nuevo 45 minutos a 37 C cubriendo los pozos con la cinta protectora Lavar la placa otra vez 4 veces como se describi anteriormente Finalmente distribuir el Substrato 100 L pozo Despu s de 15 minutos a temperatura ambiente parar la reacci n enzim tica con 100 L de Soluci n Bloqueante Leer la Absorbancia DO a 450 nm o 450 620 nm dentro de 30 min 9 Procedimiento de la prueba para PLATELIA HSV IgM M todo Manual STEP 1 Poner 100 L de la muestra diluida controles en los pocillos Incubar 45 min a 37 C Lavar 4 veces STEP 2 A
14. os sitios anat micos HSV puede tambi n causar una forma de queratitis ocular y lesiones del sistema nervioso central El HSV puede afectar pr cticamente a toda la poblaci n La infecci n primaria est a menudo en una forma subclinica y se diagnostica raramente Despu s de un per odo de latencia de variable duraci n la reactivaci n puede ocurrir y la r plica viral puede o no dar lugar a lesiones cl nicas La infecci n contra da durante el nacimiento es de inter s particular siendo causa importante de morbosidad y de mortalidad Por esta raz n es importante determinar el t tulo del estado inmunitario de la paciente durante el embarazo y observar la eventual sueroconversi n La presencia de IgM espec ficas es importante para la di gnosis de infecci n neonatal y de encefalitis causadas por HSV Por otra parte la presencia de IgM espec ficas indica la actividad viral en progreso aunque no permite distinguir entre la infecci n primaria y la reactivaci n 3 PRINCIPIO DEL M TODO La prueba sobre la titulaci n IgM anti Virus Herpes Simplex est basado en el principio de la captura de estas imunoglobulinas y successiva revelaci n de las espec ficas disfrutando de su capacidad de unir un ant geno conjugado a peroxidasa La captura se efect a con anticuerpos monoclonales unidos en la fase s lida pocillos de microtitulaci n El ant geno est constituido por una mezcla de los Herpes Simplex Virus tipo 1 y 2 purificado e inactiv
15. uation of an enzyme linked immunosorbent assay for the detection of herpes simplex virus antigen J Clin Micronbiol 19 730 1984 6 D Ho et al Indirect ELISA for the detection of HSV 2 specific IgG and IgM antibodies with glycoprotein G gG 2 J Virological Meth 36 249 1992 7 R Eberle et al The immune response to herpes simplex virus comparison of the specificity and relative titers of serum antibodies directed against viral polypeptides following primary herpes simplex virus type 1 infections J Med Virology 16 1247 1985 8 J E Kuhn et al Analysis of the IgM and IgG antibody response against herpes simplex virus type 1 HSV 1 structural and nonstructural proteins J Medical Virology 23 135 1987 The other languages which are required in conformity to the European Directive can be obtained from your local Bio Rad agent Les autres langues requises par la Directive Europ enne sont disponibles aupr s de votre repr sentant Bio Rad local Los otros idiomas que se requiren para la conformidad de la Directiva Europea puede ser obtenida en su oficina local Biorad Die anderen Sprachen die in bereinstimmung mit der europ ischen IVD Direktive ben tigt werden erhalten Sie ber Ihre lokale Bio Rad Niederlassung Le altre lingue che sono richieste in conformit con le Direttive Europee possono essere ottenute dal locale agente Bio Rad As restantes l nguas obrigat rias em conformidade com a Directiva Europeia
16. ut Off HSM 2 Positivo gt Cut Off HSM 3 Positivo Cut Off Control Positivo n replicados 23 23 23 12 12 D O 0 202 0 643 0 816 0 638 1 404 CV 23 14 7 5 14 6 6 4 Precisi n en pruebas Muestra Index Media CV Control Positivo 5 77 6 6 HSM1 0 41 14 3 HSM2 1 19 13 HSM3 1 98 11 3 Ref 91021 BRD Espa ol 9 11 Precisi n en lotes INDEX Muestra Lote n 128 Lote n 129 Lote n 130 Media CV HSM1 Cut Off 0 37 0 42 0 33 0 37 12 HSM2 Cut Off 1 27 1 27 1 31 1 28 1 8 HSM3 Cut Off 2 15 1 93 1 88 2 00 7 2 16 GU A DE RESOLUCI N DE PROBLEMAS PROBLEMA POSSIBLES FUENTES DE ERROR PRUEBA U ACCIONES Serie no valida todos negativos Uno o m s reactivos no han sido a adidos o han sido a adidos en secuencia err nea Controlar de nuevo el procedimiento Controlar si hay disoluciones que no se hayan utilizado Placa no reactiva Controlar el c digo del envase de la placa ver punto 4 de la informaci n t cnica para el c digo correcto Controlar la presencia de humedad en la placa no utilizada El gel de s lice debe ser amarillo p lido Repetir el test Serie no v lida todos positivos Contaminaci n del sustrato Recoger una nueva al cuota de sustrato Lavado inadecuado Asegurarse del buen funcionamiento del lavador Escasa precisi n Aspiraci n incompleta de los pocillos Asegurarse del buen funcionamiento
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