TRILLIUM DIAGNOSTICS
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1. P gina 2 Versi n del analizador TM Leuko64 Ensayo para la detecci n de inflamaci n y lesiones en tejidos hematol gico ATENCI N Todos los componentes de este equipo contienen azida de sodio lt 0 1 en peso volumen como conservante Este producto qu mico es un compuesto t xico y peligroso si se combina con cidos o metales Manipule el equipo con el cuidado necesario Las soluciones que contienen azida de sodio se deben desechar correctamente CONTROL DE CALIDAD DEL PRODUCTO El rendimiento y la especificidad de los reactivos que se incluyen en este equipo se han sometido a prueba empleando los m todos de control de calidad interna de Trillium Este producto se fabrica de acuerdo con directrices de control de calidad y de producci n que cumplen las normas FDA QSR e ISO 13485 2003 LIMITACIONES DEL PRODUCTO Se sabe que el uso terap utico de interfer n gamma G CSF o agentes que modulen sus niveles afecta la sobrerregulaci n de la expresi n del leucocito CD64 y por lo tanto influir sobre la interpretaci n del ensayo Los resultados del ensayo Leuko64 no deben usarse como medida nica de inflamaci n en estos pacientes sino m s bien para realizar un seguimiento del efecto de los tratamientos mencionados Para obtener un rendimiento ptimo y evitar resultados espurios o inexactos es necesario almacenar y usar este producto y las muestras que se van a ensayar de forma adecuada Una mezcla incompleta del Reactivo2. lisis de datos Copie los archivos listmode de las muestras para trasladarlos a este equipo de an lisis Para el an lisis de los datos listmode siga las sencillas instrucciones que encontrar en el archivo de Ayuda del software Revise el tutorial en el CD de software en relaci n con el an lisis antes de su uso NOTA El software es espec fico para cada lote y los protocolos de uso son espec ficos para cada modelo de instrumento Se le pedir que verifique la selecci n correcta ta aCe MANI PULACI N Y ALMACENAMI ENTO Deben extremarse las precauciones al manejar este producto Deben adoptarse medidas de precauci n universales durante la utilizaci n tanto de este producto como de las muestras de pacientes destinadas al ensayo Evite la inhalaci n la ingesti n y el contacto del producto con los ojos o con la piel Utilice equipo personal de protecci n adecuado y siga las pr cticas recomendadas de laboratorio Guarde las ampollas en posici n vertical bien cerradas a una temperatura entre 2 y 8 C cuando no se vayan a usar Las ampollas que no se hayan abierto permanecer n estables hasta la fecha de caducidad que se indica en cada ampolla y en cada hoja de ensayo Evite ciclos innecesarios de calentamiento y enfriamiento Proteja el producto de la congelaci n de temperaturas superiores a 30 C y de periodos de tiempo prolongados a temperatura ambiente entre 18 y 26 C o de la exposici n a la luz LK64 H IVD 09 July_A4_ES
3. de ensayo no se ha comprobado usando tubos con aditivo o revestimiento No se recomienda hacer esto ya que puede perjudicar el rendimiento del ensayo Cualquier tubo de 13 x 75 vac o con tap n perforable y compatible con los analizadores Abbott Cell Dyn se puede utilizar en las posiciones de muestra y tubo 1 e Micropipeta s con capacidad de dosificaci n de 20 uL y 50 uL y puntas desechables e Agitador vortex e Ordenador para el an lisis de archivos listmode y un Memory Stick de transferencia de archivos desde el CellDyn instrumento MUESTRAS El ensayo Leuko64 s lo precisa 50 uL de sangre entera anticoagulada con EDTA por lo que es adecuado para pruebas de pacientes de todas las edades Las muestras siguen siendo aceptables hasta 8 horas despu s si se mantienen a temperatura ambiente 18 22 C o hasta 48 horas si se almacenan refrigeradas entre 2 y 8 C INSTRUCCIONES DE USO Este ensayo SOLO se puede realizar en el modo de carga autom tica o el Cell Dyn 4000 o el Cell Dyn Sapphire Los usuarios de la versi n del software de Abbott Sapphire R2 5 diciembre del 2007 deben consultar en el archivo de PowerPoint Leuko64 CD titulados Zafiro optimizado la configuraci n de la versi n de software R2 5 antes de que el an lisis de la muestra l Etiquete un tubo de 13 x 75 compatible con los analizadores Cell Dyn con un c digo de barras de tubo 1 Leuko64 H Se trata simplemente de un marcador de posici n No se a adir n rea
4. C antes de su uso puede invalidar tanto la al cuota que se extrae como el resto del material de la ampolla La selecci n del protocolo incorrecto del instrumento o del n mero de lote al iniciar el software puede disminuir la precisi n del an lisis de los datos listmode El software es espec fico para cada lote y los protocolos de uso son espec ficos para cada modelo de instrumento Realice la selecci n correcta cuando se le solicite Cualquier archivo de una muestra de sangre con leucopenia o neutropenia muy elevada que muestre menos de 200 eventos del recuento de leucocitos reunidos por el software Leuko64 en cualquiera de las 3 categor as PMN Linfocitos o Monocitos no puede ser objeto de an lisis por el ensayo Leuko64 sin que se produzca una reducci n significativa en la precisi n y exactitud del ndice de PMN CD64 Cualquier archivo con un recuento de evento de bolas inferior a 1000 debe evaluarse para determinar el motivo del bajo n mero de bolas que podr a deberse tanto a ajustes incorrectos del instrumento como a una muestra de sangre sin diluir con un WBC gt 25 x 109 c lulas L e Este producto es s lo para uso con el de AbbottCell Dyn 4000 o Cell Dyn Sapphire analizadores de hematolog a La colocaci n correcta de la etiqueta de c digo de barras es esencial Consulte el manual de usuario de Abbott Cell Dyn para obtener m s informaci n Este sistema de ensayo no se ha comprobado usando tubos con aditivo o r
5. TRILLIUM DIAGNOSTICS LLC INNOVATIVE DIAGNOSTICS FOR CLINICAL CYTOMETRY AND LABORATORY HEMATOLOGY o Versi n del analizador hematol gico Leuko64 Ensayo para la detecci n de inflamaci n y lesiones en tejidos t Informaci n sobre el producto LK 064H 100 100 pruebas M Para uso diagn stico in vitro RESUMEN Y PRINCIPIO DE APLICACI N La expresi n de CD64 en neutr filos aumenta r pidamente tanto in vitro como in vivo en cuesti n de horas en presencia de mediadores del proceso de inflamaci n como el interfer n gamma y el G CSF 1 3 El mismo cambio se observa como respuesta a la infecci n o a las lesiones de tejidos documentadas lo que indica que la medici n de la expresi n de CD64 en neutr filos est relacionada con la presencia de estas condiciones en humanos 4 10 El ensayo Leuko64 emplea una mezcla de tres anticuerpos monoclonales con especificidades hacia los clones 22 y 32 2 de CD64 y Mac2 158 de CD163 El uso de dos anticuerpos de diferentes ep topos de CD64 aumenta la relaci n se al ruido del ensayo y proporciona un mecanismo para reducir al m ximo la variaci n entre lotes de la se al de fluorescencia del reactivo La adici n del anticuerpo monoclonal al CD163 un ant geno con especificidad por los monocitos aumenta la especificidad de la identificaci n de la subpoblaci n de leucocitos lo que simplifica el algoritmo de b squeda de clusters del software Leuko64 QuantiCALC M a la
6. acuette gbo com ATENCI N AL CLIENTE Trillium Diagnostics LLC Ec ReP IQ Products bv wl PO Box 67 EC Rozenburglaan 13a Brewer Maine USA 04412 9727 DL Groningen The Netherlands Tel 1 207 945 0900 Tel 31 0 50 57 57 000 Fax 1 207 942 0346 Fax 31 0 50 57 57 002 Technical infofQtrilliumdx com Technical marketingOigproducts nl Orders accepted by Phone Fax or Website Orders orders iqproducts nl www trilliumdx com www iqproducts nl LK64 H IVD 09 July_A4_ES P gina 4
7. ctivos o muestras a este tubo 2 Etiquete un tubo de 13 x 75 sin aditivos ni revestimiento con un tap n perforable con un c digo de barras de tubo 2 Leuko64 H Para obtener m s informaci n sobre la colocaci n correcta de la etiqueta de c digo de barras consulte los manuales de usuario de Cell Dyn 4000 ap ndice B 11 o Cell Dyn Sapphire secciones 4 9 de Abbott 11 12 3 Pipetee 50 uL del Reactivo A en la parte inferior del tubo 2 Evite que el reactivo se deslice por las paredes internas del tubo ya que eso dificultar a todo el proceso de mezcla 4 A ada 50 uL de sangre entera y bien mezclada a la parte inferior del tubo 2 con el Reactivo A Evite que la sangre se deposite en las paredes internas del tubo Use un hisopo para eliminar los restos de sangre que hayan podido quedar en las paredes internas del tubo 5 Mezcle el contenido del tubo con cuidado usando un agitador vortex o sujetando el tubo por la parte superior con una mano y dando golpecitos en la parte inferior con un dedo de la otra mano un m nimo de 5 veces 6 La mezcla perfecta de la suspensi n de bolas de Reactivo C Il es muy importante y se realiza mejor agitando la ampolla durante 10 segundos antes de pipetear Pipetee 20 uL de Reactivo C Il bien mezclado en el contenido del tubo 2 y trate de evitar que salpique a las paredes del tubo 7 Mezcle el contenido del tubo con cuidado como se indica en el paso 5 Inicie una incubaci n previa de 10 minutos 8 Durant
8. e los 10 minutos de la incubaci n programe la lista de tareas con la opci n de rack and position rejilla y posici n de identificaci n y seleccione el ensayo CD3 4 8 9 Rellene una rejilla de carga autom tica en el siguiente orden Posici n 1 un tubo de recogida de sangre vac o con un tap n pertorable Aseg rese de que el tubo no tiene ning n c digo de barras Posici n 2 Tubo 1 desde el paso 1 Posici n 3 Tubo 2 desde el paso 2 10 Seleccione Run Autoloader Iniciar cargador autom tico NOTA Puesto que este ensayo se sirve del ensayo existente CELL DYN Immuno T Cell CD3 4 8 de Abbott se deben ignorar los indicadores y los mensajes generados por el sistema que hacen referencia a la muestra o los datos es decir muestra insuficiente infracci n de la tasa de recuento de leucocitos n mero de eventos del recuento de leucocitos fuera de los l mites Al analizar una serie de muestras los errores repetidos por muestras insuficientes provocar n que el cargador autom tico se detenga lo que requerir la intervenci n del operador Haga clic en OK y Run Autoloader Los mensajes generados por el sistema relacionados con el instrumento o los reactivos es decir error al colocar la jeringa fallo del cargador autom tico o del cabezal de mezcla reactivo insuficiente se deben tratar en consecuencia AN LISIS DEL ARCHIVO LISTMODE Inicie el software Leuko64 QuantiCALC incluido en un equipo PC que se utilizar para el an
9. evestimiento No se recomienda hacer esto ya que puede perjudicar el rendimiento del ensayo CARACTER STI CAS DE RENDIMIENTO Cada laboratorio deber a establecer un os intervalo s de referencia aceptables para cada lote de Leuko64 H El intervalo de referencia previsto del ndice de PMN CD64 para muestras de sangre normal sanas es lt 1 00 En general cuanto m s grave sea la respuesta inflamatoria sist mica aguda mayor ser el valor del ndice CD64 medido para PMN y Monocitos No se han establecido intervalos previstos de referencia para los ndices de monocitos CD64 y CD163 REFERENCIAS I Davis BH 2005 Improved Diagnostic Approaches to Infection Sepsis Detection Expert Rev Mol Diag 5 193 207 2 Schiff D Rae J Martin T Davis B Curnutte J 1997 Increased phagocyte CD64 expression and improved Fc receptor mediated phagocytosis following in vivo recombinant human interferon Y treatment of normal human subjects Blood 90 2987 94 3 Petroni KC Shen L Guyre PM 1988 Modulation of human polymorphonuclear leukocyte IgG Fc receptors and Fc receptor mediated functions by IFN gamma and glucocorticoids J Immunol 140 3467 72 4 Davis BH Bigelow NC Curnutte JT Ornvold K 1995 Neutrophil CD64 expression Potential diagnostic indicator of acute inflammation and therapeutic monitor of interferon Y therapy Lab Hematol 1 3 12 5 Guyre PM Campbell AS Kniffin WD Fanger MW 1990 Monocytes and polymorphonuclear neutro
10. hil CD64 as a diagnostic marker Pediatrics 121 129 134 13 Cell Dyn 4000 System Operator s Manual Appendix B 11 to B 13 Abbott Diagnostics Division 9140275G October 2001 14 Cell Dyn Sapphire System Operator s Manual Section 4 9 Abbott Diagnostics Division 9140419C December 2005 15 US Department of Labor Occupational Safety and Health Administration 29 CFR Parts 1910 1030 Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens Final Rule Federal Register 235 64175 82 1991 16 US Department of Health and Human Services Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories HHS Publication NIH 93 8395 Washington US Government Printing Office 1993 LK64 H IVD 09 July_A4_ES P gina 3 Versi n del analizador TM Leuko64 Ensayo para la detecci n de inflamaci n y lesiones en tejidos hematol gico MARCAS REGISTRADAS Los derechos del software Leuko64 QuantiCALC est n registrados y ha sido desarrollado de modo conjunto por VERITY SOFTWARE HOUSE Topsham Maine Estados Unidos e www vsh com y TRILLIUM DIAGNOSTICS LLC Brewer Maine EE UU www trilliumdx com Cell Dyn 4000 es una marca comercial de Abbott Laboratories Abbott Park Illinois Estados Unidos www abbottdiagnostics com Cell Dyn Sapphire es una marca comercial de Abbott Laboratories Abbott Park Illinois Estados Unidos www abbottdiagnostics com Vacuette es una marca comercial registrada de Greiner Bio One Kremsmuenster Austria www v
11. o Mezcla de anticuerpos monoclonales murinos contiene Reactivo A 1 ampolla de 5 5 mL soluci n salina tamponada de seroalb mina bovina purificada 0 5 y azida de sodio 0 01 Bolas de poliestireno para la calibraci n marcadas con isotiocianato de fluoresce na FITC y StarFire Red en un tamp n isot nico con 0 01 de Tween 20 y 0 1 de azida s dica Juegos de etiquetas de c digo de barras tubos 1 y 2 necesarias para conectar con el sistema operativo del analizador hematol gico Cell Dyn Reactivo C II 1 ampolla de 2 2 mL Etiquetas de c digo Tubo 1 110 etiquetas barras Tubo 2 110 etiquetas Se emplea para analizar los archivos listmode de la citometr a de flujo y calcular los ndices de CD64 en leucocitos El CD incluido contiene tambi n tutoriales de formaci n y uso ptimo del equipo de ensayo Leuko64 para el usuario 1 disco espec fico para Software Leuko64 cada lote Tel fono 207 945 0900 Fax 1 207 942 0346 info trilliumdx com www trilliumdx com LK64 H IVD 09 July_A4_ES P gina 1 de 4 IL uk 64 Versi n del analizador e 0 Ensayo para la detecci n de inflamaci n y lesiones en tejidos hematol gico EQUIPO NECESARIO NO INCLUIDO Analizador hematol gico Abbott Cell Dyn Sapphire o Cell Dyn 4000 Tubos sin aditivos VACUETTE de 13 x 75 de Greiner Bio One art culos 454088 o 454001 Z sin aditivo o revestimiento y un tap n perforable Este sistema
12. phils of patients with streptococcal pharyngitis express increased numbers of type IgG Fc receptors J Clin Invest 86 1892 1 6 Ng PC and Lam HS 2006 Diagnostic markers for neonatal sepsis Curr Opin Pediatr 18 2 125 131 7 Davis BH and Bigelow NC 2005 Comparison of neutrophil CD64 expression manual myeloid immaturity counts and automated hematology analyzer flags as indicators of infection or sepsis Lab Hematol 11 137 47 8 Leino L Sorvajarvi K Katajisto J Laine M Lilius E Pelliniemi T Rajamaki A Silvoniemi P Nikoskelainen J 1997 Febrile infection changes the expression of IgG Fc receptors and complement receptors in human neutrophils in vivo Clin Exp Immunol 107 37 43 9 Davis BH Olsen S Ahmad E Bigelow NC 2006 Neutrophil CD64 is an Improved Indicator of Infection or Sepsis in Emergency Room Patients Arch Pathol Lab Med 130 5 654 61 10 Van der Meer W Pickkers P Scott CS van der Hoeven JG Bunnewiek JK 2007 Hematological indices inflammatory markers and neutrophil CD64 expression comparative trends during experimental human endotoxemia J Endotoxin Res 13 94 100 II Groselj M Ihan A Derganc M 2008 Neutrophil and Monocyte CD64 and CD163 expression in critically ill neonates and children with sepsis comparison of fluorescence intensity and calculated Indexes Mediators of Inflammation 2008 article ID 202646 12 Bhandari V Wang C Rinder C Rinder H 2008 Hematologic profile of sepsis in neonates Neutrop
13. vez que permite la identificaci n de poblaciones de control positivo y negativo El empleo de software automatizado elimina la variaci n inherente al an lisis subjetivo de datos de citometr a de flujo en formato listmode El uso de una suspensi n de bolas fluorescentes para la estandarizaci n de la cuantificaci n de CD64 celular permite una trazabilidad conforme al est ndar NIST Standard Reference Material SRM 1932 RM 8640 y proporciona un mecanismo para reducir al m ximo las diferencias entre lotes de ensayo Leuko64 Los resultados del ensayo Leuko64 se muestran en forma de ndice PMN CD64 como par metro diagn stico junto con los ndices de monocitos CD64 y CD163 APLICACI N La versi n LK 064H 100 del equipo de ensayo Leuko64 est dise ada espec ficamente para su uso con un analizador hematol gico Abbott Cell Dyn 4000 o Cell Dyn Sapphire USOS PREVISTOS El equipo de ensayo Leuko64 de Trillium Diagnostics est destinado al uso en la medici n de la expresi n del leucocito neutr filo CD64 en conjunto con otras pruebas de laboratorio y evaluaciones cl nicas para ayudar al diagn stico in vitro de la respuesta inflamatoria sist mica aguda a lesiones tisulares como ocurre al producirse da os infecci n o sepsis de los tejidos Trillium Leuko64 est dise ado para uso diagn stico in vitro por parte de personal cualificado y formado COMPONENTES DEL EQUIPO Cantidad Nombre del reactivo E proporcionada Prop sit
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