DiaSorin Ireland Ltd. Unit 13/14 Holly Avenue, Stillorgan Industrial
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1. 99 1 110 111 intervalo de confianza al 95 95 0 100 Mycopl M es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317030 45 47 ES 200 007 941 02 2012 12 LIAISON Control Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317031 1 FINALIDAD DEL ENSAYO Los controles LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM negativo y positivo se utilizan en los inmunoensayos quimioluminiscentes CLIA para verificar la fiabilidad de los ensayos No se han establecido las caracter sticas del m todo de los controles LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM en relaci n con otros ensayos o plataformas de instrumentos LIAISONS Analyzer En el certificado de an lisis se proporciona informaci n espec fica sobre el lote de los controles que debe introducirse manualmente en el software del analizador antes de colocar los frascos de los controles Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador LIAISON XL Analyzer Los c digos de barras del certificado de an lisis contienen informaci n espec fica sobre el lote de los controles Esta informaci n debe leerse con el lector manual de c digo de barras del LIAISON XL Analyzer antes de introducir los frascos de los controles Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador 2 MATERIALES SUMINISTRADOS Control negativo 2 x 0 7 mL Suero plasma humano no reactivo para anticuerpos IgM anti Mycoplasma pneumoniae estabilizado en tamp n de fosfato alb mina s rica bovina EDTA deterg2. D LOTE N 01 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media valor de ndice 4 3 4 4 14 1 17 1 23 6 Desviaci n est ndar valor de ndice 0 4 0 3 1 6 0 9 1 9 Coeficiente de variaci n 8 5 6 9 11 3 5 3 8 0 Valor m n valor de ndice 3 1 3 9 10 0 15 0 20 0 Valor m x valor de ndice 4 9 5 1 16 0 18 0 26 0 LOTE N 02 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media valor de ndice 4 7 3 9 14 7 17 4 23 3 Desviaci n est ndar valor de ndice 0 4 0 2 1 6 1 3 1 4 Coeficiente de variaci n 8 7 5 6 11 1 7 3 6 1 Valor m n valor de ndice 4 1 3 6 10 0 14 0 21 0 Valor m x valor de ndice 5 4 4 5 18 0 19 0 25 0 LOTE N 03 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media valor de ndice 4 5 4 0 15 8 16 8 22 8 Desviaci n est ndar valor de ndice 0 6 0 3 1 9 1 8 1 2 Coeficiente de variaci n 13 3 7 6 11 9 10 8 5 5 Valor m n valor de ndice 3 1 3 5 11 0 14 0 20 0 Valor m x valor de ndice 6 2 4 7 18 0 23 0 24 0 Coeficiente de variaci n entre lotes 3 3 7 1 6 1 1 7 1 7 Reproducibilidad Sitio 2 A B E C D LOTE N 01 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media valor de ndice 4 1 4 1 12 8 17 5 23 1 Desviaci n est ndar valor de ndice 0 4 0 3 1 1 0 9 1 9 Coeficiente de variaci n 11 0 8 1 8 2 5 4 8 2 Valor m n valor de ndice 3 2 3 6 11 0 15 0 20 0 Valor m x valor de ndice 4 8 4 8 14 0 19 0 27 0 LOTE N 02 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media valor de ndi
3. REF 319102 o LIAISON XL Starter Kit REF 319200 LIAISON Light Check REF 319101 LIAISON Wash System Liquid REF 319100 LIAISON Wash System Liquid REF 319100 LIAISON XL Waste Bags REF X0025 LIAISON Waste Bags REF 450003 LIAISON XL Cleaning Tool REF 310995 LIAISON Cleaning Kit REF 310990 Otros materiales requeridos Controles LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM negativo y positivo REF 317031 5 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Para uso diagn stico in vitro Todas las unidades de suero y plasma utilizadas para elaborar los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reactivas a la presencia de HBsAg anti VHC anti VIH 1 y anti VIH 2 Sin embargo dado que ning n m todo de an lisis puede garantizar totalmente la ausencia de agentes pat genos todo el material de origen humano deber considerarse potencialmente infeccioso y manipularse como tal Mycopl M es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317030 39 47 ES 200 007 941 02 2012 12 6 NORMAS DE SEGURIDAD No coma beba fume ni se maquille en el laboratorio donde se realiza el ensayo No utilice la pipeta con la boca Evite el contacto directo con todo material potencialmente infeccioso mediante el uso de indumentaria protectora como batas de laboratorio gafas protectoras y guantes desechables L vese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo Evite las salpicaduras y la formaci n de aerosoles El
4. heter filos Dicha reactividad puede ser importante en la pr ctica cl nica 15 2 Precisi n con LIAISON Analyzer Para determinar la repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo es decir las variaciones intra ensayo e inter ensayo se utilizaron muestras con diferentes concentraciones de analito espec fico Los resultados se refieren a los grupos de muestras analizadas y su precisi n no est garantizada dado que pueden existir diferencias entre laboratorios y centros Repetibilidad Para evaluar la repetibilidad interna se analizaron veinte r plicas en la misma serie Repetibilidad A B E Cc D N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media valor de ndice 4 1 4 3 16 1 18 3 26 3 Desviaci n est ndar valor de ndice 0 1 0 2 0 7 0 6 0 8 Coeficiente de variaci n 3 1 5 6 4 5 3 3 3 2 Valor m n valor de ndice 3 9 3 9 14 0 17 0 24 0 Valor m x valor de ndice 4 3 4 7 17 0 19 0 27 0 Mycopl M es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317030 43 47 ES 200 007 941 02 2012 12 Reproducibilidad Para evaluar la reproducibilidad se han analizado veinte replicados en d as diferentes a lo sumo dos sesiones anal ticas al d a utilizando tres lotes diferentes de integral Las pruebas se realizaron en dos sitios internamente sitio 1 y en un laboratorio independiente sitio 2 con dos instrumentos diferentes Reproducibilidad Sitio 1 A B E G
5. reactivo vertido debe limpiarse con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 y eliminarse como si se tratase de material potencialmente infeccioso Todas las muestras los reactivos biol gicos y los materiales usados en el ensayo deben considerarse posibles transmisores de agentes infecciosos Por consiguiente su eliminaci n debe efectuarse de conformidad con las disposiciones y normas generales establecidas por las autoridades con jurisdicci n sobre el laboratorio as como con las leyes vigentes en cada pa s Asimismo es preciso incinerar los materiales desechables y descontaminar los residuos l quidos con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 concentraci n final durante al menos media hora Los materiales que puedan volver a utilizarse tendr n que esterilizarse en autoclave empleando un procedimiento de extraordinaria capacidad descontaminante USP 24 2000 p 2143 Aunque la aplicaci n de un ciclo de descontaminaci n de una hora a 121 C suele considerarse adecuado el usuario debe verificar su eficacia mediante una prueba inicial y el uso peri dico de indicadores biol gicos Los reactivos que contienen ProClin 300 est n catalogados como sustancias irritantes en las Directivas Europeas pertinentes R 43 Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel S 24 Ev tese el contacto con la piel S 37 Usense guantes adecuados S 60 Elim nense el producto y su recipiente como residuos peligrosos 7 PREPARACI
6. sticas La especificidad y la sensibilidad diagn sticas han sido evaluadas analizando 445 muestras pertenecientes a una poblaci n con signos y s ntomas de neumon a at pica precedentes de distintos laboratorios Las muestras tambi n han sido examinadas con un m todo ELISA de referencia y se han empleado la regla del consenso general y los datos serol gicos para establecer los resultados esperados respecto a las muestras discrepantes 36 445 Las doces muestras clasificadas como dudosas con el m todo de referencia se excluyeron del an lisis de los resultados Los resultados se refieren a los grupos de muestras analizadas y su precisi n no est garantizada dado que pueden existir diferencias entre laboratorios y centros Concordancia con el m todo de referencia Concordancia para los resultados positivos 97 0 96 99 intervalo de confianza al 95 91 4 99 4 Concordancia para los resultados negativos 94 3 313 332 intervalo de confianza al 95 91 2 96 5 Concordancia general 91 9 409 445 intervalo de confianza al 95 89 0 94 3 Resultados despu s de consenso Entre la poblaci n presumiblemente negativa estudiada se obtuvieron siete resultados positivos y 315 resultados negativos Especificidad diagn stica 97 8 315 322 intervalo de confianza al 95 95 6 99 1 En la poblaci n presumiblemente positiva estudiada una muestra ha resultado negativa y 110 muestras han resultado positivas sensibilidad diagn stica
7. tendr que desecharse Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador Las operaciones del analizador son las siguientes Dispensaci n de los calibradores los controles o las muestras en el m dulo de reacci n Distribuye el tamp n A y las part culas magn ticas recubiertas Incubaci n Lavado con l quido de lavado l quido del sistema Dispensaci n del conjugado en el m dulo de reacci n Incubaci n Lavado con l quido de lavado l quido del sistema Dispensaci n de los reactivos Starter y medici n de la luz emitida Advertencia Es preciso realizar el mantenimiento con LIAISON XL Cleaning Tool REF 310995 consulte las instrucciones de uso de LIAISON XL Cleaning Tool para obtener informaci n detallada A A O NS 12 CONTROL DE CALIDAD Los controles LIAISON deben analizarse individualmente para determinar la eficacia del ensayo En el control de calidad es preciso utilizar los controles LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM a por lo menos una vez cada d a de uso cuando se usa un nuevo integral de reactivos cuando se calibra el kit cuando se usa un nuevo lote de reactivos Starter e para determinar la eficacia del integral reactivo abierto despu s de m s de seis semanas o conforme a lo estipulado en las normas y los requisitos de los reglamentos locales o los organismos acreditados Los valores de control deben permanecer dentro de los rangos previstos Cada vez que el valor de uno o am
8. DiaSorin Ireland Ltd H Unit 13 14 Holly Avenue Stillorgan Industrial Park Blackrock Biotrin oDubiin Ireland C www diasorin com Modificaciones 4 11 nueva direcci n de DiaSorin Ireland Ltd Supresiones LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317030 1 FINALIDAD DEL ENSAYO El ensayo LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM emplea la tecnolog a de la quimioluminiscencia CLIA en un ensayo inmunol gico para la determinaci n cualitativa de anticuerpos espec ficos de clase IgM dirigidos contra el Mycoplasma pneumoniae en muestras de suero o plasma humano El ensayo debe realizarse en la serie de analizadores LIAISON 2 RESUMEN Y EXPLICACI N DEL TEST Los micoplasmas son los organismos m s peque os que existen capaces de crecer en medios de cultivo acelulares Infectan a los hombres los animales las plantas los insectos y se observan en las aguas residuales El nombre micoplasma deriva de la apariencia fungiforme de los organismos y de la plasticidad de la membrana externa que causa pleomorfismo Las neumon as definidas tambi n como neumon as contra das en comunidad community acquired pneumonias CAP se dividen en t picas y at picas seg n los s ntomas y signos cl nicos El agente etiol gico de las primeras es el Streptococcus pneumoniae mientras que las ltimas pueden transmitirse por Mycoplasma pneumoniae Chlamydia pneumoniae o Legionella pneumophila 5 La infecci n es ubiquitaria y por lo gene
9. N DE LOS REACTIVOS INTEGRAL DE REACTIVOS Para manipular los reactivos es preciso adoptar una serie de precauciones importantes Resuspensi n de las part culas magn ticas Las part culas magn ticas deben estar completamente resuspendidas antes de colocar el integral en el instrumento Realice los pasos indicados a continuaci n para garantizar la suspensi n completa de las part culas Antes de quitar el precinto gire la rueda peque a del compartimento de part culas magn ticas hasta que la suspensi n adopte un color marr n Agite horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza y sumo cuidado para facilitar la suspensi n de las part culas magn ticas evite la formaci n de espuma Controle visualmente el fondo del contenedor de las part culas magn ticas para cerciorarse de que no hayan quedado part culas magn ticas sedimentadas Seque con sumo cuidado la superficie de cada pared para eliminar el l quido residual Si es necesario repita el procedimiento hasta que las part culas magn ticas est n completamente resuspendidas Formaci n de espuma en los reactivos Para garantizar las mejores prestaciones del integral se recomienda evitar la formaci n de espuma en los reactivos Respete las recomendaciones siguientes Antes de usar el integral controle visualmente los reactivos y en especial los calibradores segunda y tercera posici n despu s del contenedor de part culas magn ticas para asegurarse de que no se ha form
10. ado espuma Si se observa la presencia de espuma tras la resuspensi n de las part culas magn ticas coloque el integral en el instrumento y deje que se disuelva la espuma El integral est listo para el uso una vez que se ha disuelto la espuma que ha permanecido en el instrumento y que se ha agitado Instalaci n del integral en el rea de reactivos LIAISON XL Analyzer Coloque el integral en el rea de reactivos del analizador con la etiqueta de c digo de barras orientada a la izquierda y espere 30 minutos antes de utilizarlo Las part culas magn ticas se agitan autom ticamente y se resuspenden por completo en el analizador Consulte el manual del usuario del analizador para introducir las muestras y comenzar el ensayo LIAISON XL Analyzer LIAISON XL Analyzer incorpora un dispositivo magn tico que favorece la dispersi n de las micropart culas antes de colocar un integral de reactivos en el rea de reactivos del analizador Consulte los detalles en el manual del usuario del analizador a Coloque el integral de reactivos en la ranura espec fica b Deje el integral de reactivos en el dispositivo magn tico durante al menos 30 segundos varios minutos como m ximo Si es necesario repita la operaci n Coloque el integral en el rea de reactivos del analizador con la etiqueta orientada a la izquierda y espere 15 minutos antes de utilizarlo Las part culas magn ticas se agitan autom ticamente y se resuspenden po
11. alor m ximo UA mL 4 4 14 23 1 2 17 Reproducibilidad Para evaluar la reproducibilidad interna se han analizado veinte r plicas con un lote de integral en d as diferentes una o dos sesiones anal ticas al d a Reproducibilidad 4 5 6 Control Control negativo positivo N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media UA mL 6 5 13 8 15 1 1 0 14 7 Desviaci n est ndar 0 45 1 2 1 3 0 15 1 5 Coeficiente de variaci n 7 0 8 4 8 6 15 2 10 3 Valor m nimo UA mL 5 6 11 12 0 7 12 Valor m ximo UA mL 7 6 15 17 1 2 18 Mycopl M es fm 44147 LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317030 ES 200 007 941 02 2012 12 15 4 Efecto saturaci n con altas concentraciones Cuando se analizan muestras que contienen concentraciones de anticuerpos extremadamente elevadas se pueden obtener concentraciones inferiores a las reales por efecto de la saturaci n Sin embargo mediante un sistema bien optimizado con dos incubaciones se excluye la posibilidad de obtener resultados por debajo de su valor porque la se al anal tica permanece siempre elevada curva a saturaci n El an lisis de tres muestras positivas para IgM anti Mycoplasma pneumoniae de alta concentraci n permiti evaluar el efecto de saturaci n Todas las muestras arrojaron valores de concentraci n elevados conforme a lo previsto lo que indica que la clasificaci n de las muestras es correcta 15 5 Especificidad y sensibilidad diagn
12. ativo del instrumento para la manipulaci n correcta 8 VALORES ESPERADOS En el certificado de an lisis se indican los intervalos de concentraci n de IgM anti Mycoplasma pneumoniae en los controles Estos se han establecido considerando la variabilidad de las series anal ticas respecto de la curva maestra del fabricante a fin de garantizar la precisi n de los resultados anal ticos y de obtener indicaciones sobre la estabilidad o el deterioro de los reactivos Si los valores experimentales de los controles est n repetidamente fuera de los intervalos predefinidos con mucha probabilidad el ensayo se ha llevado a cabo de forma incorrecta Mycopl M es fm LIAISON Control Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317031 47 147 ES 200 007 941 02 2012 12
13. bos controles no coincida con el rango esperado habr que repetir la calibraci n y evaluar de nuevo los controles Si los valores siguen fuera de rango tras una calibraci n satisfactoria ser preciso repetir la prueba usando un frasco de control sin abrir Los resultados no deben notificarse si los valores de control est n fuera del rango previsto Antes de utilizar otros controles es preciso evaluar su compatibilidad con este ensayo as como establecer los intervalos de valores que se van a aplicar a todos los materiales de control de calidad utilizados b c d Mycopl M es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317030 41147 ES 200 007 941 02 2012 12 13 INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS El analizador calcula autom ticamente los niveles de IgM contra el Mycoplasma pneumoniae expresados como valor de ndice y clasifica los resultados Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador Aunque los calibradores y los controles pueden generar resultados de RLU o dosis distintos en LIAISON y LIAISON XL los resultados de los pacientes son equivalentes Intervalo del ensayo Valor de ndice de 0 1 a 27 de IgM anti Mycoplasma pneumoniae 13 1 Interpretaci n de los resultados obtenidos en muestras individuales El ensayo de IgG e IgM es indispensable para una interpretaci n fiable de los resultados El valor de corte que discrimina entre la presencia y la ausencia de anticuerpos IgM anti Mycoplasma
14. ce 4 0 3 6 12 7 17 1 22 8 Desviaci n est ndar valor de ndice 0 4 0 3 1 1 1 0 1 3 Coeficiente de variaci n 9 9 7 8 8 4 5 9 5 7 Valor m n valor de ndice 3 3 3 1 11 0 15 0 21 0 Valor m x valor de ndice 4 5 4 1 14 0 19 0 26 0 LOTE N 03 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media valor de ndice 3 6 3 6 12 0 14 9 20 0 Desviaci n est ndar valor de ndice 0 7 0 6 2 0 2 5 3 0 Coeficiente de variaci n 19 0 17 5 16 3 17 1 14 9 Valor m n valor de ndice 2 2 2 4 10 0 10 0 14 0 Valor m x valor de ndice 4 3 4 5 14 0 18 0 24 0 Coeficiente de variaci n entre lotes 4 0 5 1 4 2 5 5 3 9 15 3 Precisi n con LIAISON XL Analyzer Para determinar la repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo es decir las variaciones intra ensayo e inter ensayo se emplearon varias muestras con diferentes concentraciones de analito espec fico Los resultados se refieren a los grupos de muestras analizadas y su precisi n no est garantizada dado que pueden existir diferencias entre laboratorios y centros Repetibilidad Para evaluar la repetibilidad interna se analizaron veinte r plicas en la misma serie Repetibilidad 1 2 3 Control Gonel negativo positivo N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media UA mL 3 9 12 6 21 3 1 1 15 3 Desviaci n est ndar 0 27 0 90 0 84 0 074 0 93 Coeficiente de variaci n 7 1 7 1 3 9 6 9 6 1 Valor m nimo UA mL 3 4 11 19 0 9 13 V
15. da Con cada soluci n de los calibradores se pueden realizar cuatro calibraciones La calibraci n debe realizarse por triplicado cada vez que se verifique al menos una de las siguientes condiciones Se usa un nuevo lote de reactivos Starter La calibraci n anterior fue realizada m s de cuatro semanas antes Se usa un nuevo lote de integral reactivo El analizador ha recibido asistencia t cnica Los valores de control est n fuera de los rangos esperados LIAISON Analyzer Los valores de los calibradores est n almacenados en los c digos de barras de la etiqueta del integral LIAISON XL Analyzer Los valores de los calibradores est n almacenados en la etiqueta de identificaci n por radiofrecuencia RFID 11 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO Para obtener resultados correctos es preciso respetar estrictamente las instrucciones proporcionadas en el manual del analizador LIAISON Analyzer Cada par metro del test se identifica mediante el c digo de barras incluido en la etiqueta del integral de reactivos Si el c digo de barras no se puede leer no ser posible usar el integral y tendr que desecharse Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador LIAISON XL Analyzer Cada par metro del test se identifica mediante la informaci n codificada en la etiqueta de identificaci n por radiofrecuencia RFID del integral de reactivos Si la etiqueta no se puede leer no ser posible usar el integral y
16. e de tipo IgM a los ant genos micopl smicos Analizar una segunda muestra recogida de dos a cuatro semanas m s tarde negativo o positivo positivo paralelamente a la primera muestra Analizar una segunda muestra recogida de dos a cuatro semanas m s tarde positivo negativo gt paralelamente a la primera muestra 14 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO No se han precisado las caracter sticas del m todo de ensayo para casos en los que la prueba de Mycoplasma pneumoniae LIAISON se utiliza junto con ensayos de otros fabricantes para detectar los marcadores serol gicos espec ficos del Mycoplasma pneumoniae En este caso los usuarios son responsables de establecer sus propias caracter sticas Para obtener resultados fiables es necesario utilizar una t cnica especializada y seguir estrictamente las instrucciones La contaminaci n bacteriana o la inactivaci n por calentamiento pueden repercutir en los resultados del test Este test es adecuado s lo para el an lisis de muestras individuales y no para pools combinaciones de muestras Los resultados del test se muestran de manera cualitativa como positivos o negativos para la presencia de anticuerpos IgM anti Mycoplasma pneumoniae Sin embargo el diagn stico de una enfermedad infecciosa no debe basarse en el resultado de un solo ensayo sino que debe estar respaldado por otras pruebas cl nicas otros procedimientos diagn sticos y la opini n del m dico Las mue
17. ener a 2 8 C en posici n vertical para evitar el contacto de la soluci n con la tapa del frasco No lo congele Si se guardan sin abrir a temperatura de 2 8 C y en posici n vertical los controles permanecen estables hasta la fecha de caducidad Despu s de la apertura los controles son estables durante seis semanas si se conservan refrigerados a 2 8 C entre dos usos sucesivos Evite la contaminaci n bacteriana de los controles Los controles no deben utilizarse despu s de la fecha de caducidad indicada en las etiquetas de los frascos 6 PREPARACI N DE LOS REACTIVOS Coloque los frascos de los controles en las gradillas C del LIAISONY Analyzer Con una soluci n de control se pueden realizar al menos 20 pruebas El volumen m nimo de control necesario es 420 uL 20 uL de control 400 uL de volumen muerto En el momento del uso espere hasta que los controles se estabilicen a temperatura ambiente 20 25 C antes de abrir los frascos y d jelos en el instrumento s lo durante el tiempo requerido para realizar la prueba de control de calidad Despu s del uso tape los frascos lo antes posible y mant ngalos a 2 8 C en posici n vertical Durante la manipulaci n de los controles adopte las precauciones necesarias para evitar la contaminaci n microbiana Mycopl M es fm LIAISON Control Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317031 46 47 ES 200 007 941 02 2012 12 7 MANIPULACI N H gase referencia al manual oper
18. entes 0 2 ProClin 300 y conservantes Los controles se prediluyen y por lo tanto no deben utilizarse como muestras Control positivo 2 x 0 7 mL Suero plasma humano reactivo para anticuerpos IgM anti Mycoplasma pneumoniae estabilizado en tamp n de fosfato alb mina s rica bovina EDTA detergentes 0 2 ProClin 300 y conservantes Los controles se prediluyen y por lo tanto no deben utilizarse como muestras Todos los reactivos se suministran listos para su uso El intervalo de las concentraciones para cada control est impreso en el certificado de an lisis e indica los l mites definidos por DiaSorin para los valores de los controles obtenidos con test fiables Cada laboratorio es responsable de adoptar l mites diferentes para cumplir exigencias espec ficas 3 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Para uso diagn stico in vitro Los controles no son espec ficos de un lote y pueden intercambiarse sin problema con lotes diferentes de integral de reactivos Todos los materiales utilizados para elaborar los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reactivos a la presencia de HBsAg anti VHC anti VIH 1 y anti VIH 2 Sin embargo dado que ning n m todo de an lisis puede garantizar totalmente la ausencia de agentes pat genos todo el material de origen humano deber considerarse potencialmente infeccioso y manipularse como tal Adopte las precauciones necesarias para manipular los reactivo
19. estra Recoja la sangre de forma as ptica mediante punci n venosa d jela coagular y separe el suero del co gulo lo antes posible Al utilizar recipientes para la recogida y la separaci n del plasma con gel siga al pie de la letra las instrucciones del fabricante Antes del ensayo clarifique por filtraci n o centrifugaci n las muestras que presenten material en suspensi n opalescencia lipemia o residuos eritrocitarios No use muestras fuertemente hemolizadas o lip micas ni muestras que contengan part culas o presenten contaminaci n microbiana evidente Elimine las burbujas de aire que pueda haber antes del ensayo Si el ensayo se lleva a cabo dentro de los ocho d as sucesivos a la recogida las muestras se pueden conservar a 2 8 C En caso contrario se deben subdividir en al cuotas congeladas a 20 C o a temperaturas inferiores Si las muestras han sido descongeladas ag telas con cuidado antes de realizar el ensayo Nueve muestras de diferente reactividad se han guardado durante ocho d as a 2 8 C y nueve muestras se han sometido a cinco ciclos de congelaci n y descongelaci n Los resultados no han presentado diferencias significativas El volumen m nimo de muestra necesario para una determinaci n es 170 uL 20 uL de muestra 150 uL de volumen muerto 10 CALIBRACI N La prueba de los calibradores espec ficos del ensayo permite utilizar los valores RLU unidades relativas de luz detectados para ajustar la curva maestra asigna
20. ia de reactivos cruzados en las muestras se usaron ensayos que llevan la marca CE Los resultados se refieren a los grupos de muestras analizadas y su precisi n no est garantizada dado que pueden existir diferencias entre laboratorios y centros LIAISON9 Kit A Kit B Estado cl nico N Anticuerpos IgM anti hCMV 10 2 20 0 0 2 20 Anticuerpos IgM anti EBV VCA 34 9 26 2 6 6 18 Anticuerpos IgM anti parvovirus B19 18 2 11 1 6 5 28 Anticuerpos anti adenovirus 5 0 0 0 0 0 0 Anticuerpos anti virus de la gripe A y B 10 2 20 0 0 2 20 Anticuerpos anti virus de la parainfluenza 4 0 0 0 0 0 0 Anticuerpos IgM anti virus respiratorio sincitial RSV 5 0 0 0 0 0 0 Anticuerpos IgM anti Bordetella pertussis 5 0 0 0 0 0 0 Anticuerpos IgM anti Chlamydia pneumoniae 5 0 0 2 40 2 40 Anticuerpos IgM anti Legionella pneumophila 5 0 0 0 0 0 0 Anticuerpos anti Toxoplasma gondii 9 0 0 1 11 0 0 Anticuerpos anti Treponema pallidum 5 0 0 0 0 0 0 Factor reumatoide inmunoglobulinas anti Fc 5 1 20 0 0 1 20 Autoanticuerpos anti nucleares ANA 5 0 0 0 0 0 0 Anticuerpos humanos anti rat n HAMA 5 0 0 1 20 0 0 Total 130 16 12 7 5 18 14 Como se indica en la documentaci n 1 los ensayos comerciales para la detecci n de Mycoplasma pneumoniae IgM pueden revelar resultados falso positivos debido a la presencia de IgM en otros agentes etiol gicos y no claramente relacionados con la presencia o ausencia de anticuerpos
21. ma pneumoniae se caracteriza por dos prote nas de superficie principales P1 adesina de 170 kD y p30 que parece directamente implicada en la uni n a los receptores Como los adultos presentan una fuerte respuesta inmune a la P1 durante la infecci n el gen de la P1 presenta variabilidad antig nica 6 12 Recientemente se ha observado una elevada antigenicidad de la porci n C terminal de la prote na P1 de la cepa FH de Mycoplasma pneumoniae que se utiliza en ambos ensayos LIAISON9 La presencia de anticuerpos espec ficos anti Mycoplasma pneumoniae es el principal indicador para el diagn stico preciso de la enfermedad respiratoria aguda por Mycoplasma pneumoniae Despu s de la infecci n inicial el sistema inmunitario normal responde con la s ntesis r pida de anticuerpos que alcanzan un m ximo entre tres y seis semanas despu s y en seguida disminuyen gradualmente durante meses o a os Como el per odo de incubaci n es largo la respuesta de los anticuerpos a menudo ya es evidente cuando aparece la sintomatolog a 10 El aumento aislado de los niveles de IgM espec fica anti Mycoplasma pneumoniae a menudo puede indicar infecci n aguda dado que los anticuerpos IgM aparecen dentro de una semana despu s de la infecci n inicial y aproximadamente dos semanas antes que los anticuerpos IgG 7 Sin embargo la presencia de IgM se considera significativa sobre todo en la poblaci n pedi trica en la que son menores las ocasiones de infeccio
22. mana est enlazado a un derivado del isoluminol conjugado anticuerpo isoluminol Durante la primera incubaci n los calibradores muestras o controles se diluyen con tamp n A que contiene IgG de cabra anti IgG humana como reactivo de absorci n para contener la interferencia de IgG humana espec fica para Mycoplasma pneumoniae o del factor reumatoide Si est n presentes en los calibradores en las muestras o en los controles los anticuerpos contra el Mycoplasma pneumoniae se unen a la fase s lida Durante la segunda incubaci n el anticuerpo conjugado reacciona con cualquier anticuerpo IgM humano al Mycoplasma pneumoniae unido a la fase s lida El material no unido se elimina mediante un ciclo de lavado despu s de cada incubaci n A continuaci n se a aden los reactivos Starter que inducen una reacci n de quimioluminiscencia instant nea La se al luminosa y por lo tanto la cantidad de conjugado anticuerpo isoluminol se mide con un fotomultiplicador en unidades relativas de luz RLU e indica la presencia o la ausencia de anticuerpos IgM contra el Mycoplasma pneumoniae en los calibradores las muestras o los controles 4 MATERIALES SUMINISTRADOS Integral de reactivos Part culas magn ticas Part culas magn ticas recubiertas con lisado micopl smico enriquecido con p ptido recombinante 1 6 mL obtenido en E coli alb mina s rica bovina tamp n PBS lt 0 1 de azida s dica Calibrador 1 Suero plasma human
23. nes de repetici n Los adultos que han sido infectados repetidamente durante un per odo de varios a os pueden no presentar una fuerte respuesta inmune de tipo IgM a los ant genos micopl smicos 9 En estos casos la reinfecci n origina directamente una respuesta de tipo IgG por lo tanto encontrar un ensayo negativo para IgM no excluye con seguridad una infecci n aguda Cuando se observa una respuesta de tipo IgM sta puede persistir durante meses o a os despu s de la infecci n En estos casos el hallazgo de un ensayo positivo para IgM no significa necesariamente una infecci n en curso o reciente Se ha demostrado que la determinaci n de los anticuerpos IgG es necesaria puesto que los pacientes pueden no presentar una respuesta inmunitaria de tipo IgM o IgA 11 La respuesta de tipo IgG es la ltima en el tiempo y los niveles de IgG permanecen elevados durante como m nimo un a o despu s de la infecci n Mycopl M es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317030 38 47 ES 200 007 941 02 2012 12 3 PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO El m todo de determinaci n cualitativa de anticuerpos IgM espec ficos frente al Mycoplasma pneumoniae es el inmunoensayo indirecto mediante quimioluminiscencia CLIA de tipo s ndwich Lisado micopl smico enriquecido con un ant geno recombinante de elevada especificidad y sensibilidad se usa para recubrir las part culas magn ticas fase s lida y un anticuerpo monoclonal de rat n anti lgM hu
24. o no reactivo para IgM anti Mycoplasma pneumoniae alb mina s rica bovina 0 6 mL tamp n fosfato EDTA detergentes 0 2 ProClin 300 y un colorante amarillo inactivo Las concentraciones de los calibradores son calibradas contra una preparaci n interna de anticuerpos Calibrador 2 Suero plasma humano reactivo para IgM anti Mycoplasma pneumoniae alb mina s rica bovina 0 6 mL tamp n fosfato EDTA detergentes 0 2 ProClin 300 y un colorante azul inactivo Las concentraciones de los calibradores son calibradas contra una preparaci n interna de anticuerpos Tamp n A IgG de cabra anti lgG humana reactivo de absorci n suero de cabra alb mina s rica bovina 15 8 mL tamp n fosfato EDTA detergentes 0 2 ProClin 300 y un colorante azul inactivo Conjugado Anticuerpos monoclonales de rat n anti lIgM humana conjugados con un derivado de isoluminol 13 5 mL alb mina s rica bovina tamp n fosfato 0 2 de ProClin 300 conservantes y colorante amarillo inactivo N mero de ensayos 50 Todos los reactivos se suministran listos para su uso El orden de los reactivos refleja el orden con el que se han ensamblado los contenedores en el integral de reactivos Materiales requeridos pero no suministrados LIAISON XL Analyzer LIAISON Analyzer LIAISON XL Cuvettes REF X0016 LIAISON Module REF 319130 LIAISON XL Disposable Tips REF X0015 LIAISON XL Starter Kit REF 319200 LIAISON Starter Kit
25. ot sico heparina s dica hemolisis hasta 1000 mg dL de hemoglobina lipemia hasta 3000 mg dL de triglic ridos bilirrubinemia hasta 20 mg dL de bilirrubina albuminemia hasta 5 0 g dL de alb mina Los resultados no se modifican tras cinco ciclos de congelaci n y descongelaci n de las muestras Reacciones cruzadas Las reacciones cruzadas del ensayo LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM se estudiaron para evaluar las interferencias potenciales por parte de anticuerpos dirigidos contra otros organismos que pueden causar s ntomas cl nicos similares a los de una infecci n por Mycoplasma pneumoniae adenovirus virus de la gripe A y B virus de la parainfluenza virus respiratorio sincitial Bordetella pertussis Chlamydia pneumoniae Legionella pneumophila por parte de anticuerpos dirigidos contra otros organismos vectores de enfermedades infecciosas EBV hCMV parvovirus B19 Toxoplasma gondii Treponema pallidum as como tambi n por parte de otras condiciones que derivan de una actividad at pica del sistema inmunitario autoanticuerpos anti nucleares factor reumatoide anticuerpos humanos anti rat n HAMA human anti mouse antibodies Las muestras utilizadas en estos estudios se seleccionaron previamente mediante el uso de otro ensayo de IgM anti Mycoplasma pneumoniae comercializado Las muestras que son negativas para anticuerpos IgM anti Mycoplasma pneumoniae se emplearon en el estudio de reactividad cruzada Para detectar la presenc
26. pneumoniae tiene un valor de ndice de 10 Los resultados de las muestras deben interpretarse como sigue Las muestras con niveles de IgM anti Mycoplasma pneumoniae inferiores al valor de ndice 10 deben considerarse negativas Las muestras con niveles de IgM anti Mycoplasma pneumoniae iguales o superiores al valor de ndice 10 deben considerarse positivas Valor de ndice de IgM Clasificaci n Interpretaci n de los resultados Ausencia de infecci n Un resultado negativo para anticuerpos IgM anti Mycoplasma pneumoniae indica generalmente que no se ha desarrollado una infecci n pero no lt 10 negativo excluye con seguridad la posibilidad de una infecci n Los adultos que han sido infectados repetidamente durante un per odo de varios a os pueden no presentar una fuerte respuesta inmune de tipo IgM a los ant genos micopl smicos gt 10 positivo Probable infecci n aguda 13 2 Interpretaci n de los resultados combinados para IgG e IgM obtenidos en muestras individuales Resultado para IgG Resultado para IgM Interpretaci n de los resultados Ausencia de infecci n Un resultado negativo para anticuerpos IgM anti Mycoplasma pneumoniae indica generalmente que no se ha desarrollado una infecci n pero no negativo negativo excluye con seguridad la posibilidad de una infecci n Los adultos que han sido infectados repetidamente durante un per odo de varios a os pueden no presentar una fuerte respuesta inmun
27. r completo en el analizador Consulte el manual del usuario del analizador para introducir las muestras y comenzar el ensayo CONTROLES Para preparar y manipular los controles correctamente consulte las instrucciones incluidas con el juego de controles LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM 8 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD DEL INTEGRAL REACTIVO Sellado Estable a 2 8 C hasta la fecha de caducidad Abierto en el instrumento o a 2 8 C Estabilidad m nima seis semanas Si los controles permanecen dentro de los rangos previstos se puede seguir usando el integral despu s de este intervalo de tiempo Use siempre el mismo LIAISON Analyzer con el integral de reactivos abierto Use las gradillas suministradas con el LIAISONY Analyzer para mantener el integral en posici n vertical No lo congele Mantenga el integral reactivo en posici n vertical mientras est guardado para garantizar una adecuada resuspensi n de las part culas magn ticas Evite su exposici n a luz directa Mycopl M es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317030 40 47 ES 200 007 941 02 2012 12 9 RECOGIDA Y PREPARACI N DE LAS MUESTRAS El ensayo se puede efectuar en muestras de suero o plasma humano incluido el suero recogido con tubos para la separaci n del suero Se pueden utilizar anticoagulantes como el citrato s dico el EDTA pot sico y la heparina s dica En el ensayo es fundamental utilizar el tipo adecuado de mu
28. ral es end mica con signos inespec ficos caracterizados por malestar general mialgia dolor de garganta cefalea y s ntomas en aumento en el aparato respiratorio durante un per odo de uno a cinco d as La tos es t picamente seca opresiva y algunas veces parox stica y puede convertirse en una caracter stica del cuadro cl nico Los signos f sicos como las crepitaciones pulmonares durante la inspiraci n a menudo no son aparentes hasta que los ex menes radiogr ficos evidencian la presencia de una neumon a El curso de la enfermedad es variable pero la tos y los s ntomas debidos al aparato respiratorio y las alteraciones radiogr ficas pueden persistir durante varias semanas Los ni os est n sujetos a infecciones m s frecuentes que los adultos el desarrollo de complicaciones tambi n est influido por la edad 3 La enfermedad generalmente se limita al aparato respiratorio Las manifestaciones extrapulmonares incluyen s ndrome de Stevens Johnson y otros eritemas artralgia meningitis o encefalitis y otras complicaciones neurol gicas miocarditis y pericarditis El Mycoplasma pneumoniae est provisto de una estructura especializada en una o en ambas extremidades mediante la cual los microorganismos se enganchan a la superficie de la mucosa del aparato respiratorio y se hacen completamente resistentes a los antibi ticos que act an sobre la s ntesis de la pared celular bacteriana como la penicilina La estructura del Mycoplas
29. s de laboratorio Los residuos deben eliminarse de acuerdo con la reglamentaci n local 4 NORMAS DE SEGURIDAD No coma beba fume ni se maquille en el laboratorio donde se realiza el ensayo No utilice la pipeta con la boca Evite el contacto directo con todo material potencialmente infeccioso mediante el uso de indumentaria protectora como batas de laboratorio gafas protectoras y guantes desechables L vese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo Evite las salpicaduras y la formaci n de aerosoles El reactivo vertido debe limpiarse con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 y eliminarse como si se tratase de material potencialmente infeccioso Todas las muestras los reactivos biol gicos y los materiales usados en el ensayo deben considerarse posibles transmisores de agentes infecciosos Por consiguiente su eliminaci n debe efectuarse de conformidad con las disposiciones y normas generales establecidas por las autoridades con jurisdicci n sobre el laboratorio as como con las leyes vigentes en cada pa s Los reactivos que contienen ProClin 300 est n catalogados como sustancias irritantes en las Directivas Europeas pertinentes R 43 Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel S 24 Ev tese el contacto con la piel S 37 Usense guantes adecuados S 60 Elim nense el producto y su recipiente como residuos peligrosos 5 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD Cuando se reciben los controles se deben mant
30. stras de los pacientes tratados con preparados de anticuerpos monoclonales de rat n para terapia o diagn stico pueden contener anticuerpos humanos anti rat n HAMA Como estas muestras pueden interferir en un ensayo inmunol gico basado en el uso de anticuerpos monoclonales sus resultados deben examinarse minuciosamente Los integrales no deben utilizarse con los dos tipos de analizadores LIAISON y LIAISON XL Una vez que se ha usado un integral con un tipo de analizador concreto debe seguir us ndose en ese analizador hasta que se termine Por motivos de trazabilidad relacionados con lo antes expuesto es necesario terminar el seguimiento de los pacientes con el mismo tipo de analizador Los seguimientos deben realizarse un nico tipo de analizador LIAISONY o LIAISON XL Mycopl M es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgM REF 317030 42 47 ES 200 007 941 02 2012 12 15 PRESTACIONES METODOL GICAS DEL KIT 15 1 Especificidad anal tica La especificidad anal tica se define como la capacidad del ensayo para detectar analitos espec ficos en presencia de factores potencialmente interferentes en la matriz de la muestra por ejemplo anticoagulantes hemolisis efectos de tratamientos de la muestra o de anticuerpos de reactividad cruzada Interferencia Estudios controlados sobre los factores potencialmente interferentes han demostrado que las prestaciones del test no est n influenciadas por anticoagulantes citrato s dico EDTA p
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