Disco reactivo para panel de función hepática Piccolo
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1. gt Complejo Cu Prote na La cantidad de prote nas totales en la muestra es directamente proporcional a la absorbancia del complejo Cu prote na La prueba de prote na total es una reacci n de valoraci n final y la absorbancia se mide como la diferencia en la absorbancia entre 550 nm y 850 nm 4 Principios de la operaci n Ver el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo para recibir informaci n sobre los principios y limitaciones del procedimiento Page 3 of 12 5 Descripci n de los reactivos Reactivos Cada disco reactivo para panel de funci n hep tica Piccolo contiene soportes s lidos reactivos espec ficos para pruebas secas se describen abajo En cada disco se incluye un reactivo de referencia de muestra seco que consta de tamp n surfactante excipientes y estabilizadores para usar en el c lculo de las concentraciones de alanina aminotransferasa ALT alb mina ALB fosfatasa alcalina ALP y aspartato aminotransferasa AST En el disco se incluyen muestras de referencia espec ficas para bilirrubina total TBIL bilirrubina directa DBIL y prote na total TP Cada disco reactivo contiene tambi n un diluyente formado por surfactantes excipientes y estabilizadores Tabla 1 Reactivos Componente Cantidad Disco L alanina 874 ug L cido asp rtico 426 ug Bilirrubina oxidasa 0 2 U P rpura de bromcresol 2 ug Sulfato c prico 134 ug a acido cetoglut rico 82. 24 e Disco reactivo para panel de funci n hepatica Piccolo C Servicio t cnico y de atenci n al cliente 800 822 2947 Febrero 2014 NP 400 7137 Rev G 1998 Abaxis Inc Union City CA 94587 1 Indicaciones El disco reactivo para panel de funci n hep tica Piccolo se utiliza junto con el analizador qu mico de sangre de Piccolo para realizar determinaciones cuantitativas in vitro de alanina aminotransferasa alb mina fosfatasa alcalina aspartato aminotransferasa bilirrubina directa bilirrubina total y prote nas totales en sangre entera heparinizada plasma heparinizado o suero en un en un mbito de laboratorio cl nico o una ubicaci n point of care 2 Resumen y explicaci n de las pruebas El disco reactivo para panel de funci n hep tica Piccolo y el analizador qu mico de sangre de Piccolo constituyen un sistema de diagn stico in vitro que ayuda al m dico a diagnosticar las siguientes alteraciones Alanina aminotransferasa Enfermedades hep ticas incluidas la hepatitis viral y la cirrosis cardiopat as Alb mina Patolog as del h gado y del ri n Fosfatasa alcalina Enfermedades del h gado seas paratiroideas e intestinales Aspartato aminotransferasa Hepatopat as incluidas la hepatitis e ictericia viral shock Bilirrubina directa Hepatopat as alteraciones hemol ticas hematol gicas y metab licas incluidas la hepatitis y la obstrucci n de la ves cula biliar Bilirrubina to
3. 30 971 Abstract Perry B y otros Measurement of total bilirubin by use of bilirubin oxidase Clin Chem 1986 32 329 332 Doumas BT y otros Measurement of total bilirubin by use of bilirubin oxidase Clin Chem 1986 32 1349 1353 Otsuji S y otros A new enzymatic approach for estimating total and direct bilirubin Clin Biochem 1988 21 81 110 Page 11 of 12 13 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 Bibliograf a continuaci n Meites S Bilirubin direct reacting and total modified Malloy Evelyn method En Faulkner WR y Meites S comp Selected methods of clinical chemistry Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1982 9 119 124 Koller A y Kaplan LA Total serum protein En Clinical chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AP comp St Louis The C V Mosby Company 1989 1057 1060 Reigler E Eine kolorimetrische Bestimmungsmethode des Eiweisses Z Anal Chem 1914 53 242 245 Weichselbaum TE An accurate and rapid method for the determination of proteins in small amounts of blood serum and plasma Am J Clin Path 1946 16 40 49 Doumas BT y otros A candidate reference method for determination of total protein in serum I Development and validation Clin Chem 1981 27 1642 1650 National Committee for Clinical Laboratory Standards Physician s office laboratory guidelines tentative guideline 2 ed
4. VR 4 6 Nivel de control 2 Media 281 DE 4 08 VR 1 5 Aspartato aminotransferasa U l Nivel de control 1 Media 47 DE 0 98 VR 2 1 Nivel de control 2 Media 145 DE 1 83 VR 1 3 Bilirrubina directa mg dl Nivel de control 1 Media 0 4 DE 0 03 VR 6 5 Nivel de control 2 Media 2 2 DE 0 10 VR 4 8 Total 21 2 79 13 5 52 3 25 6 2 5 6 0 11 2 1 3 7 0 11 2 9 39 2 29 5 8 281 8 75 3 1 49 0 92 1 9 147 1 70 1 2 0 4 0 03 6 6 22 0 12 5 6 Page 9 of 12 Tabla 6 Precisi n N 80 continuaci n Sustrato Bilirrubina total mg dl Nivel de control 1 Media DE VR Nivel de control 2 Media DE VR Proteinas totales g dl Nivel de control 1 Media DE VR Nivel de control 2 Media DE VR Correlaci n Intraserial 0 8 0 06 8 0 3 2 0 09 1 7 6 8 0 05 0 8 4 7 0 09 2 0 Total 0 8 0 07 9 3 5 2 0 15 2 8 6 8 0 08 1 2 4 7 0 09 2 0 Las muestras de suero y de sangre entera heparinizadas de los pacientes se extrajeron de dos sitios Las muestras de sangre entera se analizaron con el analizador quimico de sangre de Piccolo en los sitios de campo y las muestras s ricas se analizaron con el analizador de Piccolo y mediante m todos de comparacion En algunos casos se usaron muestras muy y poco enriquecidas para cubrir el l mite din mico Todas las muestras fueron probadas en singlicato el mismo d a E
5. n de punto final que se mide como la diferencia en la absorbancia entre 600 nm y 550 nm Fosfatasa alcalina ALP Las t cnicas para medir la fosfatasa alcalina fueron creadas hace m s de 60 a os En estos momentos a algunos de estos m todos espectrofotom tricos de criterio de valoraci n o de dos puntos se los considera obsoletos o demasiado complicados El uso de p nitrofenil fosfato p NPP aument la velocidad de la reacci n La fiabilidad de esta t cnica aument significativamente con el uso de un tamp n con i n met lico para mantener la concentraci n de iones magnesio y zinc en la reacci n El m todo de referencia de la Asociaci n Norteamericana de Qu mica Cl nica AFCC usa p NPP como substrato y un amortiguador con i n met lico El procedimiento de Piccolo se modific a partir de los m todos AACC e IFCC La fosfatasa alcalina hidroliza al p NPP en un tamp n con i n met lico y forma p nitrofenol y fosfato ALP p Nitrofenil fosfato __ p Nitrofenol fosfato Zn M g La cantidad de ALP en la muestra es proporcional al ndice de aumento de la diferencia de absorbancia entre 405 nm y 500 nm Aspartato aminotransferasa AST La prueba de aspartato aminotransferasa AST se basa en el m todo cin tico de Karmen de acuerdo con la modificaci n de Bergmeyer El m todo de referencia actual de la Federaci n de Quimica Cl nica IFCC utiliza la t cn
6. 10 Limitaciones del procedimiento Las limitaciones generales del procedimiento se describen en el manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo e FEl nico anticoagulante recomendado para su uso con el sistema qu mico de sangre de Piccolo es heparina litio Abaxis ha realizado estudios que demuestran que EDTA fluoruro oxalato o cualquier otro anticoagulante que contenga iones de amon aco interferir n con al menos un producto qu mico contenido en el disco reactivo para panel de funci n hep tica Piccolo e Las muestras con un hematocrito superior al 62 del volumen de eritrocitos concentrados puede dar resultados imprecisos Las muestras con un hematocrito elevado pueden ser analizadas como hemolizadas Estas muestras pueden ser centrifugadas para obtener plasma y luego realizar la prueba con un nuevo disco reactivo e Cualquier resultado para una prueba particular que supere los valores de la prueba deber ser analizado por otro m todo de prueba aprobado o enviado a un laboratorio de referencia No diluya la muestra y vu lvala a evaluar en el analizador qu mico de sangre de Piccolo Advertencia Extensas pruebas realizadas con el sistema qu mico de sangre de Piccolo demostraron que en muy raras ocasiones una muestra colocada en el disco reactivo puede no fluir de manera adecuada a la c mara de muestras Debido al flujo asim trico puede analizarse una cantidad inadecuada de muestra y los resultados obtenidos pueden q
7. 5 2000 U l 5 2000 UN Alb mina ALB 1 6 5 g dl 10 65 g l Fosfatasa alcalina ALP 5 2 400 UN 5 2 400 U I Aspartato aminotransferasa AST 5 2000 U l 5 2000 UN Bilirrubina directa DBIL 0 1 15 mg dl 1 7 257 umol l Bilirrubina total TBIL 0 1 30 mg dl 1 7 513 umol 1 Prote na total TP 2 14 g dl 20 140 g l Especificidad El l mite inferior para la detecci n de cada sustrato es el siguiente alanina aminotransferasa 5 U l alb mina 1 g dl 10 g l fosfatasa alcalina 5 U l aspartato aminotransferasa 5 U l bilirrubina directa 0 1 mg dl 1 7 umol 1 bilirrubina total 0 1 mg dl 1 7 umol y prote na total 2 g dl 20 g l Precisi n Para todos los ensayos se condujeron estudios de precisi n siguiendo las pautas NCCLS EP5 T2 Los resultados de los an lisis intraseriales y de precisi n total fueron determinados evaluando dos niveles de material de control Se realizaron los controles por duplicado dos veces durante 20 d as a lo largo de un per odo de cuatro semanas Los resultados de los estudios de precisi n se muestran en la Tabla 6 Page 8 of 12 Tabla 6 Precisi n N 80 Sustrato Intraserial Alanina aminotransferasa U l Nivel de control 1 21 Media 2 76 DE 13 4 VR Nivel de control 2 Media 52 DE 2 70 VR 5 2 Alb mina g dl Nivel de control 1 Media 5 6 DE 0 09 VR 1 7 Nivel de control 2 Media 3 7 DE 0 07 VR 2 0 Fosfatasa alcalina U l Nivel de control 1 Media 39 DE 1 81
8. de inmediato se deben almacena en un lugar oscuro por per odos que no excedan los 60 minutos Si no se puede analizar la muestra dentro de ese per odo se la debe separar en plasma o suero y almacenar en un tubo de muestra con tapa en lugar oscuro y a bajas temperaturas e Para las muestras de sangre entera o plasma use s lo tubos de recolecci n de muestra evacuados con heparina litio Para muestras de suero use tubos de recolecci n de muestras no evacuados con aditivos o tubos con separador para suero 8 Procedimiento Materiales necesarios e Un disco reactivo para panel de funci n hep tica Piccolo Materiales requeridos pero no proporcionados e Analizador qu mico de sangre de Piccolo e Reactivos de control disponibles comercialmente recomendados por Abaxis consulte el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo Par metros de prueba e Fl analizador qu mico de sangre de Piccolo funciona a temperaturas ambiente entre 15 C y 32 C 59 90 F El tiempo de an lisis para cada disco reactivo para panel de funci n hep tica Piccolo es menor de 14 minutos El analizador mantiene el disco reactivo a una temperatura de 37 C 98 6 F durante el intervalo de medici n Procedimiento de prueba La obtenci n completa de la muestra y los procedimientos de operaci n paso a paso se detallan en el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo Page 5 of 12 Calibrado El analizador qu mico de
9. rotor de una bolsa da ada 6 Instrumento Consulte el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo para obtener informaci n completa sobre el uso del analizador 7 Recolecci n y preparaci n de las muestras Las t cnicas para la obtenci n de la muestra se describen en el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo e FEl tama o m nimo necesario para la muestra es 100 ul de sangre entera heparinizada plasma heparinizado suero o suero de control La c mara de muestra del disco reactivo puede contener hasta 120 ul de muestra e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n deben ser homogeneizadas antes de transferir una muestra al disco reactivo Invierta el tubo de recolecci n con suavidad varias veces antes de transferir la muestra No sacuda el tubo de recolecci n esto puede provocar hem lisis e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n se deben analizar dentro de los 60 minutos posteriores a la recolecci n Las muestras refrigeradas de sangre entera pueden causar cambios significativos en las concentraciones de aspartato aminotransferasa La muestra se puede separar en plasma o suero y almacenar en tubos de muestra con tapa a 2 8 C 36 46 F si no se la puede analizar en 60 minutos e Los resultados de bilirrubina total y bilirrubina directa pueden verse afectados de manera negativa por la fotodegradaci n Las muestras de sangre entera que no se analicen
10. sangre de Piccolo es calibrado por el fabricante antes de su envio El c digo de barra impreso en el anillo del c digo de barra del disco reactivo proporciona al analizador con datos de calibraci n espec ficos del disco Consulte el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo Control de calidad La eficacia del analizador qu mico de sangre de Piccolo se puede verificar a trav s de la realizaci n de controles Los controles recomendados por Abaxis se enumeran en el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo Otros controles basados en plasma o suero humanos pueden no ser compatibles Consulte el manual del usuario del analizador qu mico de Piccolo para obtener informaci n m s detallada sobre la realizaci n el registro la interpretaci n y la extrapolaci n de los resultados de control 9 Resultados El analizador qu mico de sangre de Piccolo calcula e imprime autom ticamente las concentraciones de sustratos de la muestra Los detalles de los c lculos del punto final y la velocidad de la reacci n figuran en el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo La interpretaci n de los resultados se detalla en el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo Los resultados se imprimen en las tarjetas de resultados proporcionadas por Abaxis La parte posterior de las tarjetas de resultados es adhesiva para facilitar su colocaci n en los archivos del paciente
11. 2 ug Lactato deshidrogenasa 0 13 U Cloruro de magnesio 3 ug Malato deshidrogenasa MDH coraz n porcino 0 01 U B nicotinamida adenina dinucle tido reducida NADH 12 ug p NPP 56 ug Yoduro de potasio 28 ug Potasio s dico tartrato 343 ug Sulfato de zinc 3 ug Tampones surfactantes excipientes y estabilizadores Advertencias y precauciones e Para uso diagn stico in vitro e El envase del diluyente en el disco reactivo se abre autom ticamente cuando se cierra el caj n del analizador Un disco con un contenedor diluyente abierto no puede volver a utilizarse Compruebe que la muestra o el control est colocado en el disco antes de cerrar el caj n e Los discos de reactivo usados contienen l quidos del cuerpo humano Siga las buenas pr cticas de seguridad en el laboratorio 38 Bae cuando manipule y deseche los discos usados Consulte el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo para obtener instrucciones sobre la limpieza de derrames que presentan riesgo biol gico e Los discos reactivos son de pl stico y pueden romperse o estallarse si se caen Nunca use un disco que se haya ca do ya que puede diseminar material biol gico peligroso en el interior del analizador e El reactivo en soporte s lido puede contener sustancias cidas o c usticas El usuario no entra en contacto con el reactivo en soporte s lido si sigue los procedimientos recomendados En el caso en que se manipule el reactivo en sop
12. Documento POL1 T2 del NCCLS Wayne PA NCCLS 1992 National Committee for Clinical Laboratory Standards Procedures for the handling and processing of blood specimens approved guideline 2 ed Documento H18 Tdel NCCLS Wayne PA NCCLS 1988 Rehak NN Chiang BT Storage of whole blood effect of temperature on the measured concentration of analytes in serum Clin Chem 1988 34 2111 2114 Sherwin JE Obernolte R Bilirubin En Clinical chemistry theory analysis and correlation 2 ed Kaplan LA y Pesce AP comp St Louis The C V Mosby Company 1989 1009 1015 Henry RJ Cannon DC Winkelman JW Clinical chemistry Principles and techniques 2 ed Nueva York Harper and Row 1974 417 421 1058 1059 Benet LZ Williams RL Design and optimization of dosage regimens pharmacokinetic data En Gilman AG y otros comp Goodman and Gilman s The Pharmacological Basis of Therapeutics 8 ed Nueva York McGraw Hill Inc 1990 1650 1735 Moss DW Henderson AR Enzymes En Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2 ed Burtis CA y Ashwood ER comp Philadelphia W B Saunders Company 1994 735 896 National Committee for Clinical Laboratory Standards Interference testing in clinical chemistry approved guideline Documento EP7 A del NCCLS Wayne PA NCCLS 2002 Painter PC Cope JY Smith JI Reference Information for the clinical laboratory En Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 ed Burtis CA Ashwood ER comp Philadelphia WB Saunder
13. a A partir de la separaci n de la enzima bilirrubina oxidasa del Myrothecium verrucaria MT 1 se desarroll un ensayo m s espec fico para determinar la bilirrubina directa Este m todo tambi n es espec fico para determinar bilirrubina directa cuando la reacci n se produce a pH bajo En el procedimiento enzim tico el complejo soluble de bilirrubina bilirrubina directa es oxidado por la bilirrubina oxidasa en biliverdina Bilirrubina oxidasa Complejo soluble O Biliverdina H20 de bilirrubina La bilirrubina directa se mide como la diferencia en la absorbancia entre 467 nm y 550 nm La absorbancia inicial de esta reacci n de punto final se determina por la cubeta de referencia con bilirrubina directa y la absorbancia final se obtiene de la cubeta de prueba con bilirrubina directa La cantidad de bilirrubina directa contenida en la muestra es proporcional a la diferencia entre las mediciones inicial y final de la absorbancia Bilirrubina total TBIL Normalmente los niveles de bilirrubina total se median mediante pruebas que emplean cido sulfan lico diazotizado En la actualidad se ha desarrollado un m todo m s nuevo y m s espec fico que utiliza la enzima bilirrubina oxidasa Adem s de usar el m todo de prueba de la bilirrubina total m s espec fico la fotodegradaci n del sustrato se minimiza con el analizador de Piccolo porque se puede analizar la muestra inmediatamente despu
14. chem Jap n 1939 30 69 87 19 20 21 22 23 24 25 26 Tonhazy NE White NG Umbreit WW A rapid method for the estimation of the glutamic aspartic transaminase in tissues and its application to radiation sickness Arch Biochem 1950 28 36 42 Reitman S y Frankel S A colorimetric method for the determination of serum glutamic oxalacetic and glutamic pyruvic transaminases Am J Clin Pathol 1957 28 56 63 Murray RL Alanine aminotransferase En Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AP comp St Louis The C V Mosby Company 1989 895 898 Wroblewski F LaDue JS Serum glutamic pyruvic transminase in cardiac and hepatic disease Proc Soc Exp Biol Med 1956 91 569 571 Bergmeyer HU Horder M IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 3 IFCC method for alanine aminotransferase J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 521 534 Howe PE The use of sodium sulfate as the globulin precipitant in the determination of proteins in blood J Biol Chem 1921 49 93 107 Howe PE The determination of proteins in blood a micro method J Biol Chem 1921 49 109 113 Wolfson WQ y otros A rapid procedure for the estimation of total protein true albumin total globulin alpha globulin beta globulin and gamma globulin in 10 ml of serum Am J Clin Pathol 1948 18 723 730 Saifer A Gerstenfeld S Vacsler F Photometric microdetermination of total serum globuli
15. eno 1 2 100 cido acetilsalic lico 2 10 50 Cloranfenicol 1 2 5 100 Cimetidina 0 1 1 16 Eritromicina 0 2 2 10 Isoniacida 0 1 0 7 4 Cetoprofen 50 Meticilina 100 Metotrexato 0 0 5 Metronidazol 0 1 5 Nafcilina 1 Oxacilina 1 Fenito na 1 2 3 Tabla 3 Sustancias con interferencia significativa superior al 10 Valores Concentraci n sin interferencia terap uticos mg dl significativa mg dl Interferencia Alanina aminotransferasa ALT Acido asc rbico 0 8 1 2 20 11 aum Oxaloacetato 132 843 aum Alb mina ALB Acetoacetato 0 05 3 60 102 18 dism Ampicilina 0 5 30 12 dism Cafe na 0 3 1 5 10 14 dism Cloruro de calcio 20 17 dism Cefalotina Keflin 10 400 13 aum Ibuprofeno 0 5 4 2 50 28 aum a cetoglutarato 5 11 dism Nitrofuranto na 0 2 20 13 dism Prolina 4 12 aum Sulfalazina 2 4 10 14 dism Sulfanilamida 10 15 50 12 dism Teofilina 1 2 20 11 dism Fosfatasa alcalina ALP Teofilina 1 2 20 42 dism Aspartato aminotransferasa Ninguno Ninguno Ninguno AST Bilirrubina total directa DBIL Acido asc rbico 0 8 1 2 2 5 30 dism Dopamina 0 3 1 5 15 50 dism Bilirrubina total TBIL Dopamina 19 55 dism L dopa 5 17 dism Prote na total TP Ninguno Ninguno Ninguno Ap CS o pa y e Dism disminuci n en la concentraci n del sustrato especificado Aum aumento en la concentraci n del sustrato especificado Consulte la bibliograf a para obtener informaci n adicional
16. ica de Karmen Bergmeyer de acoplamiento de malato deshidrogenasa MDH y nicotinamida dinucle tido reducida NADH en la detecci n de AST en suero Se agrega lactato deshidrogenasa LDH a la reacci n para reducir la interferencia causada por el piruvato end geno El AST cataliza la reacci n del L aspartato y a cetoglutarato en oxaloacetato y L glutamato El oxaloacetato es convertido en malato y el NADH es oxidado a NAD por el catalizador MDH AST L aspartato a cetoglutarato Oxaloacetato L glutamato MDH Oxaloacetato NADH _ gt Malato NAD El cambio en el ndice de absorbancia a 340 nm 405 nm debido a la conversi n de NADH a NAD es directamente proporcional a la cantidad de AST contenida en la muestra Page 2 of 12 Bilirrubina directa DBIL Van Den Bergh y Miiller fueron los primeros en detectar la bilirrubina directa al observar que el pigmento de la bilis humana reaccionaba con cido sulfan lico diazotizado en ausencia de alcohol En la actualidad las t cnicas m s com nmente utilizadas para medir la bilirrubina directa son modificaciones del m todo desarrollado por Malloy y Evelyn que se basa en la combinaci n del cido sulfan lico diazotizado y la bilirrubina para formar el cromoforo azobilirrubina Con algunos m todos diazo se obtienen resultados poco confiables ya que la forma no conjugada se puede medir como bilirrubina direct
17. n la tabla 7 se muestran las estad sticas de correlaci n representativas Tabla 7 Correlaci n del analizador qu mico de sangre de Piccolo con los m todos de comparaci n Sustrato Alanina aminotransferasa UN Alb mina g dl Fosfatasa alcalina U Aspartato aminotransferasa U Bilirrubina directa mg dl Bilirrubina total mg dl Prote nas totales g dl Coeficiente Pendiente Intercepta de correlaci n 0 981 0 985 0 854 0 896 0 988 0 929 0 93 1 0 0 990 0 974 0 980 0 849 0 873 0 905 0 946 1 001 0 877 0 970 1 136 0 87 0 97 0 88 0 901 1 113 0 932 0 935 1 3 2 5 0 3 0 1 5 9 17 6 5 3 3 0 0 1 0 0 0 4 0 6 0 3 VER 3 21 2 84 0 22 0 21 3 97 4 79 2 76 1 90 0 08 0 07 0 09 0 19 0 16 N Limites de M todo de la muestra comparaci n 86 10 174 Paramax 67 10 174 Technicon 261 1 1 5 3 Paramax 100 1 5 5 0 Beckman 99 27 368 Paramax 80 26 150 Technicon 159 13 111 Paramax 46 13 252 DAX 263 0 12 8 Paramax 250 0 2 3 7 Paramax 91 0 1 6 4 Beckman 251 5 7 9 2 Paramax 92 6 5 9 2 Beckman Las muestras s ricas de pacientes hospitalizados proporcionaron un l mite de muestra m s amplio y posiblemente m s til que las muestras de sangre entera venosa de pacientes ambulatorios Page 10 of 12 13 Bibliografia 1 2 10 11 12 13 14 15 16 17 Fujita H Umber die Mikrobestimmung der Blutphosphatase J Bio
18. na a cetoglutarato gt L glutamato Piruvato Page 1 of 12 LDH Piruvato NADH H _ gt Lactato NAD El ndice de cambio de la diferencia de absorbancia entre 340 nm y 405 nm se debe a la conversi n de NADH en NAD y es directamente proporcional a la cantidad de ALT en la muestra Alb mina ALB Entre los primeros m todos usados para medir la alb mina se encontraban las t cnicas de fraccionamiento y el contenido de triptofano de las globulinas La realizaci n de estos m todos es poco precisa y su especificidad es baja Dos t cnicas inmunoquimicas se consideran como m todos de tinci n de referencia pero son lentas y su coste es elevado Las t cnicas de tinci n son los m todos usados con mayor frecuencia para medir la alb mina El bromcresol verde BDG es el m s usado de los m todos de tinci n pero puede sobrestimar las concentraciones de alb mina especialmente en los l mites inferiores de los valores normales El bromcresol p rpura BCP es la m s espec fica de las tinturas en uso gt La p rpura de bromcresol BCP al unirse a la alb mina cambia su color de amarillo a azul La absorbancia m xima cambia con el cambio de color Surfactantes BCP Albimina Complejo BCP Alb mina pH acido La alb mina unida es proporcional a la concentraci n de alb mina en la muestra Se trata de una reacci
19. ne phosphatase activity in human serum Clin Chem 1983 29 751 761 Bowers GN Jr y otros IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part I General considerations concerning the determination of the catalytic concentration of an enzyme in the blood serum or plasma of man Clin Chem Acta 1979 98 163F 174F Karmen A A note on the spectrophotometric assay of glutamic oxalacetic transaminase in human blood serum J Clin Invest 1955 34 131 133 Bergmeyer y otros Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1977 23 887 899 Bergmeyer y otros Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1978 24 720 721 Van Den Bergh AAH M ller P Uber eine Direkte und eine indirekte Diazoreaktion auf Bilirubin Biochem Z 1916 77 90 103 Malloy HT Evelyn KA The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter J Biol Chem 1937 119 481 490 Doumas BT Wu T W The measurement of bilirubin fractions in serum Crit Rev Clin Lab Sci 1991 28 415 445 Murao S y Tanaka N A new enzyme bilirubin oxidase produced by Myrothecium verrucaria MT 1 Agric Biol Chem 1981 45 2383 2384 Osaki S Anderson S Enzymatic determination of bilirubin Clin Chem 1984
20. ns by means of a tryptophan reaction Clin Chem 1961 7 626 636 Saifer A Marven T The photometric microdetermination of serum total globulins with a tryptophan reaction a modified procedure Clin Chem 1966 12 414 417 Gendler SM Albumin En Clinical chemistry Theory Analysis and Correlation LA Kaplan y Pesce AJ comp St Louis The C V Mosby Company 1989 1029 1033 Webster D Bignell AHC Attwood EC An assessment of the suitability of bromocresol green for the determination of serum albumin Clin Chim Acta 53 1974 101 108 Louderback A Mealey EH Taylor NA A new dye binding technique using bromcresol purple for determination of albumin in serum Clin Chem 14 1968 793 794 Abstract Pinnell AE Northam BE New automated dye binding method for serum albumin determination with bromcresol purple Clin Chem 1978 24 80 86 King EJ Armstrong AR A convenient method for determining serum and bile phosphatase activity Can Med Assoc J 1931 31 376 381 Kind PRN King EJ Estimation of plasma phosphatase by determination of hydrolysed phenol with amino antipyrine J Clin Pathol 1954 7 322 326 Ohmori Y Uber die Phosphomonoesterase Enzymologia 1937 4 217 231 Petitclerc C y otros Mechanism of action of Mg2 and Zn2 on rat placental alkaline phosphatase I Studies on the soluble Zn2 and Mg2 alkaline phosphatase Can J Biochem 1975 53 1089 1100 Tietz NW y otros A reference method for measurement of alkali
21. orte s lido por ejemplo limpieza tras dejar caer y romper un disco de reactivo se debe evitar la ingesti n el contacto con la piel y la inhalaci n del mismo Instrucciones para la manipulaci n de los reactivos Los discos de reactivo pueden ser usados directamente del refrigerador sin calentar No deje que los discos guardados en las bolsas de aluminio selladas permanezcan a temperatura ambiente m s de 48 horas antes de usarlos Abra la bolsa de aluminio sellada saque el disco y use de acuerdo con las instrucciones proporcionadas en el manual del operador del analizador qu mico de sangre de Piccolo Debe desechar los discos no usados en los 20 minutos siguientes a la apertura de la bolsa Almacenamiento Almacene los discos de reactivo en sus bolsas selladas a 2 8 C 36 46 F No exponga los discos abiertos o sin abrir a la luz solar directa o a temperaturas superiores a los 32 C 90 F Los discos de reactivo pueden ser usados hasta la fecha de caducidad Page 4 of 12 indicada en el paquete La fecha de caducidad tambi n aparece codificada en el c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras Si los reactivos han caducado aparecer un mensaje de error en la pantalla del analizador qu mico de sangre de Piccolo Indicaciones de inestabilidad deterioro del disco reactivo Una bolsa rasgada o rota puede permitir que la humedad llegue al disco sin usar y afecte de manera negativa a la eficacia del reactivo No utilice un
22. s Company 1999 1788 1846 Painter PC Cope JY Smith JI Appendix En Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2 ed Burtis CA Ashwood ER comp Philadelphia W B Saunders Company 1994 2161 2217 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 3 ed Washington DC AACC Press 1990 National Committee for Clinical Laboratory Standards Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices 2 ed pautas aprobadas Documento EP5 A del NCCLS Wayne PA NCCLS 1999 Page 12 of 12
23. s de su obtenci n En el procedimiento enzim tico la bilirrubina es oxidada por la bilirrubina oxidasa en biliverdina Bilirrubina oxidasa Bilirrubina O gt Biliverdina H O La bilirrubina se mide como la diferencia en la absorbancia entre 467 nm y 550 nm La absorbancia inicial de esta reacci n de punto final se determina por la cubeta de referencia con bilirrubina y la absorbancia final se obtiene de la cubeta de prueba con bilirrubina La cantidad de bilirrubina en la muestra es proporcional a la diferencia entre las mediciones inicial y final de la absorbancia Prote na total TP El m todo de prote nas totales es una modificaci n de la reacci n de Biuret reconocida por su precisi n exactitud y especificidad Originariamente desarrollada por Riegler y modificada por Weichselbaum Doumas y otros propusieron una reacci n de Biuret como posible m todo de referencia para la determinaci n de prote nas totales En la reacci n de Biuret la soluci n de prote nas es tratada con iones c pricos Cu II en un medio fuertemente alcalino Se agregan tartrato s dico de potasio y yoduro de potasio para impedir la precipitaci n de hidr xido de cobre y la autorreducci n del cobre respectivamente Los iones Cu II reaccionan con uniones pept dicas entre los tomos de ox geno carbonilo y nitr geno amida para formar un complejo Cu prote na coloreado OH Prote na total Cul
24. sobre posibles interferencias qu micas Page 7 of 12 11 Valores esperados Se usaron muestras de un total de 125 adultos varones y mujeres analizadas en el analizador quimico de sangre de Piccolo para determinar los intervalos de referencia Estos valores l mite s lo se ofrecen como gu a Los niveles de ALP en ni os en crecimiento son muy variables Se recomienda que su consultorio o instituci n establezca los l mites normales para su poblaci n de pacientes en particular Tabla 4 Intervalos de referencia Piccolo Sustrato Intervalo de referencia Unidades comunes Unidades SI Alanina amino transferasa ALT 10 47 UN 10 47 UN Alb mina ALB 3 3 5 5 g dl 33 55 g l Fosfatasa alcalina ALP Var n 53 128 UN 53 128 UN Fosfatasa alcalina ALP Mujer 42 141 UN 42 141 UN Aspartato aminotransferasa AST 11 38 UN 11 38 UN Bilirrubina directa DBIL 0 0 3 mg dl 0 5 1 umol 1 Bilirrubina total TBIL 0 2 1 6 mg dl 3 4 27 4 umol Prote na total TP 6 4 8 1 g dl 64 81 g l 12 Caracter sticas de eficacia Linealidad La qu mica para cada sustrato es lineal a lo largo de los l mites din micos enumerados a continuaci n cuando el analizador qu mico de sangre de Piccolo se utiliza de acuerdo con el procedimiento recomendado consulte el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo Tabla 5 L mites din micos de Piccolo Sustrato L mite din mico Unidades comunes Unidades SI Alanina aminotransferasa ALT
25. tal Hepatopat as incluida la hepatitis y obstrucci n de la ves cula biliar ictericia Prote nas totales Hepatopat as enfermedades del ri n o de la m dula sea alteraciones metab licas y de la nutrici n Al igual que con cualquier procedimiento diagn stico de prueba hay que considerar todos los procedimientos de prueba restantes incluido el estado cl nico del paciente antes del diagn stico final 3 Principio del procedimiento Alanina aminotransferasa ALT La alanina aminotransferasa ALT fue medida por tres m todos Dos de estos m todos la t cnica de acoplamiento colorim trico por dinitrofenilhidracina y la prueba enzim tica fluorescente se usan muy raramente La t cnica m s com n para la determinaci n de las concentraciones de ALT en suero es un m todo enzim tico basado en el trabajo de Wr blewski y LaDue La Federaci n Internacional de Qu mica Cl nica IFCC ha propuesto como m todo recomendado un procedimiento Wr blewski y LaDue modificado El m todo desarrollado para usar con el analizador de Piccolo es una modificaci n del procedimiento recomendado por la IFCC En esta reacci n la ALT cataliza la transferencia de un grupo amino de la L alanina al a cetoglutarato para formar L glutamato y piruvato La lactato deshidrogenasa cataliza la conversi n de piruvato a lactato Al mismo tiempo la NADH se oxida a NAD como se observa en el esquema de la siguiente reacci n ALT L alani
26. uedar fuera de los valores de referencia La muestra puede ser analizada de nuevo con un nuevo disco reactivo Interferencia Se probaron sustancias que interfieren con los sustratos Se prepararon mezclas de suero humano La concentraci n a la cual se prob cada obst culo potencial se bas en los niveles de prueba en NCCLS EP7 A Efectos de las sustancias end genas e Los obst culos fisiol gicos hem lisis lipemia e ictericia causan cambios en las concentraciones informadas de algunos sustratos Los ndices de la muestra est n impresos en la base de cada tarjeta de prueba para informar al usuario sobre los niveles de obst culos presentes en cada muestra El sistema qu mico de sangre de Piccolo suprime cualquier resultado que sea afectado por una interferencia superior al 10 por hem lisis ictericia o lipemia En el lugar del resultado en la tarjeta se imprime HEM LIP o ICT respectivamente Efectos de las sustancias terap uticas e Se define a la interferencia significativa como un desv o superior al 10 en los resultados para una muestra en l mites normales Las mezclas de suero humano fueron enriquecidas con una concentraci n conocida de los f rmacos o productos qu micos y luego analizadas Page 6 of 12 Tabla 2 Sustancias terap uticas evaluadas Valores fisiol gicos fisiol gicos o Concentraci n m s elevada o terap uticos mg dl probada mg dl Sustancias end genas Acetaminof
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