Colestat enzimático AA líquida
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1. 100 U l POD 1000 U l 4 AF 0 2 mmol l Good 50 mmol l pH 6 8 Fenol 15 mmol l Colato de sodio 0 2 mmol l REACTIVOS NO PROVISTOS Calibrador A plus provisto separadamente por Wiener lab cuando se emplea la t cnica autom tica INSTRUCCIONES PARA SU USO Reactivos Provistos listos para usar PRECAUCIONES Los reactivos son para uso diagn stico in vitro Colestat M todo enzim tico para la determinaci n de colesterol en suero o plasma enzim tico AA ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Reactivos Provistos son estables en refrigerador 2 10oC hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja No mante ner a temperaturas elevadas durante lapsos prolongados INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS Lecturas del Blanco superiores a 0 160 D O son indicio de deterioro de los reactivos En tal caso desechar MUESTRA Suero o plasma a Recolecci n se debe obtener de la manera usual b Aditivos en caso de que la muestra a emplear sea plasma se recomienda nicamente el uso de heparina como anticoagulante para su obtenci n c Sustancias interferentes conocidas Excepto la h2. 37oC Relaci n muestra reactivo 1 100 Tiempo de equilibrio 3 segundos Tiempo de retardo 300 segundos Tiempo de lectura 5 20 segundos Absorbancia de blanco lt 0 250 D O L mite de absorbancia 2 000 D O Linealidad 5 g l Para las instrucciones de programaci n debe consultarse el Manual del Usuario del Analizador en uso Para la cali braci n debe emplearse Calibrador A plus de Wiener lab de acuerdo a los requerimientos del analizador PRESENTACION 6 x 60 ml C d 1009308 4 x 100 ml C d 1220114 2 x 100 ml C d 1220221 2 x 500 ml C d 1220222 Empleando los reactivos Colestat enzim tico AA l qui da junto con HDL Colesterol Reactivo Precipitante HDL Colesterol FT y LDL Colesterol Reactivo Precipitan te provistos separadamente por Wiener lab es posible determinar el colesterol ligado a las lipoprote nas de alta densidad HDL colesterol y a las lipoprote nas de baja densidad LDL colesterol BIBLIOGRAFIA Abell L L et al J Biol Chem 195 357 1952 Allain C C et al Clin Chem 20 470 1974 American Health Foundation Position statement on diet and coronary heart disease p g 255
3. 1972 I F C C Clin Chim Acta 87 3 459 F 1978 Trinder P Ann Clin Biochem 6 24 1969 Coniglio R I Acta Bioq Clin Latinoam XXIII 2 201 1989 Expert Panel of National Cholesterol Education Program JAMA 285 19 2486 2001 Young D S Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests AACC Press 3rd ed 1990 Elaborado por Wiener Laboratorios S A I C Riobamba 2944 2000 Rosario Argentina http www wiener lab com ar Dir T c Viviana E C tola Bioqu mica Producto Inscripto M S Disp N 7795 98 44 02
4. 861254504 00 P g 1 de 4 SIGNIFICACION CLINICA La determinaci n de colesterol en forma aislada tiene utili dad diagn stica limitada Sin embargo su concentraci n var a de manera m s o menos predecible en un gran n me ro de condiciones cl nicas Se ha visto que el colesterol es uno de los factores contri buyentes a la formaci n de ateromas dado que las compli caciones arterioscler ticas prevalecen en individuos hiper colesterol micos Diversos estudios epidemiol gicos han permitido observar adem s que el riesgo de contraer enfermedad card aca coronaria ECC para los individuos varones de m s de 40 a os con colesterolemia menor o igual a 2 10 g l es 3 veces menor que entre individuos con m s de 2 30 g l y 6 veces menor que entre individuos con m s de 2 60 g l FUNDAMENTOS DEL METODO La secuencia reaccional es la siguiente CHE steres del colesterol gt colesterol cidos grasos CHOD colesterol O2 gt colesten 3 ona H2O2 POD H2O2 4 AF aceptor gt quinonimina roja REACTIVOS PROVISTOS Standard soluci n de colesterol 2 g l Reactivo soluci n conteniendo colesterol esterasa CHE colesterol oxidasa CHOD peroxidasa POD 4 ami nofenazona 4 AF y buffer Good pH 6 8 conteniendo fe nol y colato de sodio en las siguientes concentraciones CHE 100 U l CHOD
5. dores enzim ticos No emplear el Standard en analizador autom tico debido a la distinta tensi n superficial con respecto al suero dada por el disolvente empleado en su preparaci n Se recomienda realizar una recalibraci n semanal o cada vez que se obtengan valores fuera del rango aceptable de los controles Standatrol S N o S E 2 niveles PERFORMANCE a Reproducibilidad procesando replicados de las mis mas muestras en 10 d as diferentes se obtuvo Nivel D S C V 1 24 g l 0 043 g l 3 49 3 31 g l 0 115 g l 3 48 b Recuperaci n agregando cantidades conocidas de co lesterol a distintos sueros se obtuvo una recuperaci n entre 98 y 101 para todo nivel de colesterol entre 1 90 y 4 79 g l c L mite de detecci n depende del fot metro empleado Para una lectura de 0 001 D O el cambio m nimo de concen traci n detectable ser aproximadamente de 0 0063 g l d Linealidad la reacci n es lineal hasta 5 g l Para valo res superiores diluir 1 2 con el Blanco y repetir la lectura multiplicando el resultado final por 2 PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS Longitud de onda primaria 505 nm Longitud de onda secundaria 600 700 nm Tipo de reacci n punto final Direcci n de la reacci n aumenta Temperatura de reacci n
6. eparina los anticoagulantes comunes inter fieren en la determinaci n Los sueros con hem lisis visible o intensa producen valores falsamente aumentados por lo que no deben ser usados No se observan interferencias por bilirrubina hasta 80 mg l cido asc rbico hasta 75 mg l cido rico hasta 200 mg l ni hem lisis ligera Referirse a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m todo d Estabilidad e instrucciones de almacenamiento el co lesterol en suero es estable por lo menos 1 semana en refrige rador y 2 meses en congelador sin agregado de conservantes MATERIAL REQUERIDO no provisto Espectrofot metro o fotocolor metro Micropipetas y pipetas para medir los vol menes indicados Tubos de fotocolor metro o cubetas espectrofotom tricas de caras paralelas Ba o de agua a 37oC Reloj o timer CONDICIONES DE REACCION Longitud de onda 505 nm en espectrofot metro o en fotocolor metro con filtro verde 490 530 nm Temperatura de reacci n 37oC Tiempo de reacci n 5 minutos Volumen de muestra 10 ul Volumen de Reactivo 1 ml Volumen final de reacci n 1 01 ml Los vol menes de Muestra y Reactivo pueden variarse pro porcionalmente Ej 20 ul de Muestra 2 ml de Reactivo LINEA LIQUIDA No provisto en todas las presentaciones 861254504 00 P g 2 de 4 Wiener lab 2000 Rosario Argentina PROCEDIMIENTO En tres tubos de fotocolor metro o cubetas
7. espectrofo tom tricas marcadas B Blanco S Standard y D Des conocido colocar B S D Standard 10 ul Muestra 10 ul Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml Incubar 5 minutos en ba o de agua a 37oC o 20 minutos a temperatura ambiente 25oC Leer en espectrofot metro a 505 nm o en fotocolor metro con filtro verde 490 530 nm llevando el aparato a cero con el Blanco ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL El color de reacci n final es estable 30 minutos por lo que la absorbancia debe ser le da dentro de este lapso CALCULO DE LOS RESULTADOS 2 00 g l colesterol g l D x f donde f S CONVERSION DE UNIDADES colesterol g l colesterol mg dl x 0 01 colesterol mmol l colesterol g l x 2 59 colesterol g l colesterol mmol l x 0 39 METODO DE CONTROL DE CALIDAD Standatrol S N y Standatrol S E 2 niveles VALORES DE REFERENCIA El panel de expertos del National Cholesterol Education Program NCEP provee los siguientes valores de colesterol Deseable lt 2 00 g l Moderadamente alto 2 00 2 39 g l Elevado 2 40 g l No obstante se recomienda que cada laboratorio esta blezca sus propios intervalos o valores de referencia LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA Los reductores disminuyen la respuesta de color mientras que los oxidantes colorean el Reactivo aumentando los Blancos Los detergentes metales pesados y cianuros son inhibi
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