EnVision™ FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
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1. Se recomienda EnVision M FLEX Hematoxylin C digo K8018 para la contratinci n El reactivo proporciona una tinci n nuclear azul claro Las secciones de tejido con tinci n se pueden montar con un medio de montaje acuoso o basado en disolvente org nico 114807 005 K8010 ES NAN 2011 03 25 p 3 11 Reactivos A Material suministrado DM821 DM822 DM827 DM823 DM828 DM831 114807 005 EnVision FLEX PEROXIDASE BLOCKING REAGENT EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent 10x 13 mL Tamp n de fosfato que contiene per xido de hidr geno 15 mmol L de NaN y detergente listo para su uso EnVision M FLEX HRP 10 x 13 mL Dextrano unido a mol culas de peroxidasa y mol culas de anticuerpo secundario de cabra contra inmunoglobulinas de conejo y rat n listo para su uso En soluci n tamponada que contiene prote na estabilizante y conservante EnVision FLEX DAB Chromogen 3x3mL Tetrahidrocloruro de 3 3 diaminobencidina en disolvente org nico El color de este reactivo puede variar Puede ir de violeta fuerte a incoloro sin que esto afecte de ning n modo al rendimiento del kit EnVision FLEX Substrate Buffer 20 x 13 mL Soluci n tamponada que contiene per xido de hidr geno y conservante EnVision FLEX TARGET RETRIEVAL SOLUTION HIGH pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x 9 x 30 mL Tamp n Tris EDTA concentrado 50 veces pH 9 wash BUFFER 20X EnV2. 6 Se encuentra disponible para los usuarios profesionales una hoja de datos de seguridad para EnVision M FLEX Peroxidase Blocking Reagent 7 EnVision M FLEX DAB Chromogen contiene 1 5 de tetrahidrocloruro de 3 3 diaminobencidina y est marcado como Nocivo R40 Posibles efectos cancer genos R43 Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel R68 Posibilidad de efectos irreversibles S35 Elim nense los residuos del producto y sus recipientes con todas las precauciones posibles S36 37 Usense indumentaria y guantes de protecci n adecuados Como regla general los menores de 18 a os no pueden manipular este producto Debe informarse debidamente a los usuarios acerca del procedimiento adecuado de trabajo las propiedades peligrosas del producto y las instrucciones de seguridad necesarias seg n la Directiva 94 33 CE de la Uni n Europea Le rogamos que consulte la hoja de datos de seguridad MSDS para obtener informaci n m s detallada EE UU 3 3 diaminobencidina DAB puede ser t xico por inhalaci n por ingesti n y en contacto con la piel El material es irritante para los ojos y la piel En caso de contacto con la piel enjuagar inmediatamente la zona afectada con agua y jab n NOTA Aunque la diaminobencidina est relacionada estructuralmente con la bencidina no hay pruebas de la carcinogenicidad de la diaminobencidina Consulte las normas nacionales regionales o locales para la eliminaci n del producto 8
3. n los cortes de tejidos fijados con formol e incluidos en parafina deben someterse a desparafinaci n y rehidrataci n seguidas de la recuperaci n del ep topo inducida por calor HIER mediante el m todo de recuperaci n de dianas que se especifica en el folleto informativo del anticuerpo primario Consulte tambi n la preparaci n de la muestra 3 en 1 en la secci n Procedimiento El c digo K8010 incluye EnVision M FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x DM828 Alternativamente se recomienda EnVision M FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x c digo K8004 o EnVision M FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x c digo K8005 Algunos anticuerpos primarios requieren el pretratamiento enzim tico del tejido para la tinci n ptima en vez de HIER La peroxidasa end gena se debe bloquear con EnVision M FLEX Peroxidase Blocking Reagent DM821 incluido en este kit Gracias a un procedimiento de lavado eficaz y a la presencia de prote nas estabilizantes en los reactivos de Dako no son necesarios los pasos para llevar a cabo un bloqueo extra con el fin de reducir la tinci n de fondo no espec fica Se recomienda EnVision Y FLEX Wash Buffer 20x DM831 incluido en este kit o disponible como reactivo opcional c digo K8007 En el kit no se incluyen anticuerpos primarios Se recomienda el uso de Dako FLEX Ready to Use Primary Antibodies o Dako concentrated Primary Antibodies Se recomienda el uso de EnVision FLEX Antibody Di
4. previo al tratamiento ooocccoccconncconcconncconnonnnononconnnononnnnnnnnnnnonnnonnnnonnnonons 8 B Procedimiento de UNCION esras a a r cds 9 Conrod CAM ie es o ad 10 Interpretaci n de los resultadoS ccoonccccccncoocnccconnnconnconononnnnnonanncnnnnnonnnnonnnnrnnnnnonnrnonannncnnanennns 10 IM cio Nes aa 10 Explicaci n delos sSIMDOlOS srenti aR A iad 11 114807 005 K8010 ES NAN 2011 03 25 p 2 11 ESPA OL Uso previsto Para uso diagn stico in vitro El sistema de detecci n Dako EnVision M FLEX est dise ado para su uso en inmunohistoqu mica junto con los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus El sistema detecta anticuerpos primarios de rat n y conejo y la reacci n se visualiza mediante el EnVision Y FLEX DAB Chromogen Si se utiliza con EnVision M FLEX Rabbit LINKER c digo K8019 o EnVision M FLEX Mouse LINKER c digo K8022 se puede conseguir la amplificaci n de la se al de los anticuerpos primarios de rat n o de los anticuerpos primarios de conejo respectivamente Los reactivos EnVision M FLEX est n dise ados para su uso en cortes de tejidos fijados con formol e incluidos en parafina Resumen y explicaci n El sistema de detecci n Dako EnVision M FLEX ha sido dise ado como un sistema flexible y proporciona una tinci n ptima en los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus cuando se emplea el protocolo recomendado en este folleto informativo Antes de proceder a la tinci
5. 2011 03 25 p 7 11 Procedimiento Los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus Plus utilizan t cnicas basadas en diferentes principios para obtener resultados de tinci n ptimos Antes de ejecutar protocolos en su instrumento Dako Autostainer Autostainer Plus lea detenidamente el Manual del usuario del instrumento Dako correspondiente A fin de asegurar la recuperaci n del ep topo reproducible se recomienda cargar siempre el soporte para portaobjetos completamente con portaobjetos Con esto se garantiza un calentamiento id ntico de los cortes en cada ciclo A Procedimiento previo al tratamiento Procedimiento de preparaci n de la muestra 3 en 1 recomendado al utilizar PT Link La desparatfinaci n la rehidrataci n y la recuperaci n del ep topo inducida por calor HIER se pueden realizar con cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina usando el procedimiento 3 en 1 1 Prepare una soluci n de trabajo diluyendo el concentrado de EnVision M FLEX Target Retrieval Solution 1 50 en agua destilada o desionizada 2 Llene los tanques PT Link con cantidad suficiente 1 5 L de soluci n de trabajo como para cubrir los cortes de tejido 3 Fije el PT Link de forma que precaliente la soluci n a 65 4 Sumerja los cortes de tejido montados fijados con formol e incluidos en parafina en la soluci n de EnVision M FLEX Target Retrieval Solution soluci n de trabajo precalentada en los tanques PT Link e inc belos
6. Material opcional EnVision FLEX Antibody Diluent c digo K8016 contiene azida s dica NaN un compuesto qu mico altamente t xico en su forma pura En la concentraci n en la que se encuentra en el producto aunque no est clasificada como peligrosa la azida s dica puede reaccionar con el cobre o el plomo de las ca er as para formar compuestos de azidas met licas altamente explosivas Una vez desechado deje correr abundante cantidad de agua para evitar acumulaciones de azidas met licas en las ca er as 9 Utilice el equipo de protecci n personal adecuado para evitar el contacto con los ojos y la piel 10 La soluci n no utilizada debe desecharse con arreglo a las normativas locales regionales y nacionales Almacenamiento Almacenar los reactivos EnVision M FLEX y EnVision M FLEX a 2 8 C Almacenar EnVision FLEX Hematoxylin c digo K8018 a temperatura ambiente No deben utilizarse despu s de la fecha de caducidad impresa en los viales Si los reactivos se almacenan bajo condiciones diferentes a las especificadas dichas condiciones deben ser verificadas por el usuario La soluci n Substrate Working Solution preparada se debe almacenar en la oscuridad a 2 8 C y se debe utilizar en un plazo de 5 d as Si observa una tinci n inesperada que no puede explicarse por variaciones en los procedimientos del laboratorio y sospecha de la existencia de un problema con el producto p ngase en contacto con los servicios t cnicos d
7. OA C EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus C digo K8010 5 edici n El kit contiene reactivos suficientes para 400 600 pruebas Para Dako Autostainer Autostainer Plus Reactivos opcionales C digo K8004 K8005 K8006 K8007 K8018 K8019 K8022 Nombre del producto EnVision M FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x EnVision M FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x EnVision M FLEX Antibody Diluent EnVision FLEX Wash Buffer 20x EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus EnVision FLEX Rabbit LINKER Dako Autostainer Autostainer Plus EnVision FLEX Mouse LINKER Dako Autostainer Autostainer Plus Opciones adicionales K8020 114807 005 FLEX IHC Microscope Slides Pruebas 200 430 200 430 400 600 400 600 120 190 120 190 500 K8010 ES NAN 2011 03 25 p 1 11 ndice P gina USO Prov a a A E A 3 Resumen y explicaci aiic a A RATEN aR EEE AE ii 3 A EEN 4 PoMateila SUIS tad Opt caia 4 B Material necesario pero no SUMINISTTADO ccoocccccocncoconnconcononannonannnonnnnonnnnnnnnnnonnnnonanncnnnos 5 C Reactivos Opcionales nissan pisa 5 FTECAUCION O iniciadas 6 Almacenamie NO aca oa 6 Preparaci n de 0S te acosa iii 7 Recopilaci n y preparaci n de las MuestraS oocccoonnccoccnconcncnncnnonncnonnnnnononononrnonnnnnonnnnnnnrnnnannnnnanoss 7 Procedime NO A E E E A E 8 A Procedimiento
8. ara uso automatizado s lo en instrumentos Dako Autostainer Cuando se realizan tinciones manuales el usuario debe determinar y verificar el procedimiento ptimo a menos que se especifique en el folleto informativo del anticuerpo primario Dako espec fico 2 Para uso exclusivo con cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina Cuando se utilizan cortes congelados o frotis de c lulas el usuario debe determinar y verificar el procedimiento ptimo a menos que se especifique en el folleto informativo del anticuerpo primario Dako espec fico Los cambios en el procedimiento pueden influir en el n mero de pruebas suministradas en el kit 114807 005 K8010 ES NAN 2011 03 25 p 10 11 Explicaci n de los s mbolos Referencia Limitaci n de temperatura E Fecha de caducidad Dispositivo m dico para Contiene suficiente para lt n gt i ans diagn stico in vitro ensayos Consutte las instrucciones LOT C digo del lote gt Nocivo de uso de Los sistemas de Dako EnVision M est n cubiertos por la patente estadounidense 5 543 332 y por la patente europea 594 772 Producido por Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Dinamarca Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 114807 005 K8010 ES NAN 2011 03 25 p 11 11
9. atura ambiente entre 1 y 5 minutos 7 Coloque la gradilla con cortes enjuagados en un instrumento Dako Autostainer Autostainer Plus Empiece inmediatamente el ciclo de tinci n preprogramado NOTA Cuando se utilice en recipientes de Coplin para el procedimiento HIER la Target Retrieval Solution diluida y el Wash Buffer diluido pueden utilizarse 1 sola vez un solo uso Algunos ep topos no toleran la HIER y algunos requieren un pretratamiento enzim tico Consulte el folleto informativo del anticuerpo primario de Dako correspondiente Los cortes de tejido no deben secarse durante el tratamiento o durante el siguiente procedimiento de tinci n inmunohistoqu mica Para aumentar la adherencia de los cortes de tejidos a los portaobjetos se recomienda utilizar FLEX IHC Microscope Slides c digo K8020 B Procedimiento de tinci n Dako FLEX Ready to Use Primary Antibodies se pueden utilizar con el sistema de detecci n Dako EnVision M FLEX aplicado en cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina En el folleto informativo del anticuerpo primario concentrado encontrar una gu a sobre diluci n de los anticuerpos primarios concentrados de Dako Los anticuerpos primarios concentrados se deben diluir en EnVision M FLEX Antibody Diluent DM830 c digo K8006 Los pasos de tinci n y los tiempos de incubaci n han sido preprogramados en el software de los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus usando los siguientes pro
10. concentrada 20 veces pH 7 6 0 1 K8018 DM826 EnVision FLEX Hematoxylin 10 x 13 mL Soluci n acuosa de hematoxilina t Q O Q Q 02 am S 02 O K8019 RABBIT LINKER DM825 EnVision FLEX Rabbit LINKER 3 x 13 mL Soluci n tamponada que contiene prote na estabilizante y un antibi tico lista para su uso ees ENGEZA EnVision FLEX Mouse LINKER 3 x 13 mL Soluci n tamponada que contiene prote na estabilizante y un antibi tico lista para su uso 114807 005 K8010 ES NAN 2011 03 25 p 5 11 Precauciones 1 Para usuarios profesionales 2 EnVision M FLEX HRP EnVision M FLEX Mouse LINKER y EnVision FLEX Rabbit LINKER contienen material de origen animal y es posible que haya presente alg n rastro de material humano debido a los procedimientos de fabricaci n Al igual que con cualquier producto de origen biol gico deber n aplicarse los procedimientos de manipulaci n adecuados 3 No exponga EnVision M FLEX DAB Chromogen EnVision M FLEX Substrate Buffer o EnVision M FLEX Substrate Working Solution a luz intensa durante el procedimiento 4 Se encuentra disponible para los usuarios profesionales una hoja de datos de seguridad para EnVision M FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x y EnVision M FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x 5 Se encuentra disponible para los usuarios profesionales una hoja de datos de seguridad para EnVision M FLEX Wash Buffer 20x
11. destilada o desionizada 2 Llene los tanques PT Link con cantidad suficiente 1 5 L de soluci n de trabajo como para cubrir los cortes de tejido 3 Fije el PT Link de forma que precaliente la soluci n a 65 4 Desparafinice y rehidrate manualmente los cortes de tejido montados en portaobjetos de vidrio Para conseguir una mejor adherencia del tejido al portaobjetos se recomienda el uso de portaobjetos recubiertos o silanizados 5 Sumerja los cortes de tejido a temperatura ambiente en la soluci n de EnVision M FLEX Target Retrieval Solution soluci n de trabajo precalentada e inc belos durante 20 40 minutos a 97 El usuario debe determinar el tiempo ptimo de incubaci n 6 Deje que los cortes se enfr en en el PT Link hasta 65 114807 005 K8010 ES NAN 2011 03 25 p 8 11 7 Extraiga cada gradilla para portaobjetos del tanque PT Link e introd zcalos inmediatamente en un bote o tanque p ej PT Link Rinse Station c digo PT109 con EnVision FLEX Wash Buffer 20x diluido y a temperatura ambiente 8 Deje los portaobjetos en EnVision M FLEX Wash Buffer 20x diluido y a temperatura ambiente entre 1 y 5 minutos 9 Coloque los portaobjetos en un instrumento Dako Autostainer Autostainer Plus y proceda a la tinci n Los cortes no deben secarse durante el tratamiento ni durante el procedimiento de tinci n inmunohistoqu mica 10 Tras la tinci n los portaobjetos deben montarse utilizando un medio de montaje acuo
12. durante 20 40 minutos a 97 El usuario debe determinar el tiempo ptimo de incubaci n 5 Deje que los cortes se enfr en en el PT Link hasta 65 6 Extraiga cada gradilla para portaobjetos Autostainer con los portaobjetos del tanque PT Link e introd zcalos inmediatamente en un bote o tanque p ej PT Link Rinse Station c digo PT109 con EnVision M FLEX Wash Buffer 20x diluido y a temperatura ambiente 7 Deje los portaobjetos en EnVision M FLEX Wash Buffer 20x diluido y a temperatura ambiente entre 1 y 5 minutos 8 Coloque los portaobjetos en un instrumento Dako Autostainer Autostainer Plus y proceda a la tinci n Los cortes no deben secarse durante el tratamiento ni durante el procedimiento de tinci n inmunohistoqu mica 9 Tras la tinci n se recomienda realizar la deshidrataci n la depuraci n y el montaje permanente NOTA Cuando se utilice en el PT Link para el procedimiento de preparaci n de la muestra 3 en 1 la Target Retrieval Solution diluida y el Wash Buffer diluido pueden utilizarse 3 veces en un per odo de 5 d as siempre que se conserven a temperatura ambiente Procedimiento HIER utilizando el PT Link Tras los procesos de desparafinaci n y rehidrataci n del tamp n agua la mayor a de los cortes de tejidos debe someterse a recuperaci n del ep topo inducida por calor HIER 1 Prepare una soluci n de trabajo diluyendo el concentrado de EnVision FLEX Target Retrieval Solution 50x 1 50 en agua
13. e Dako 114807 005 K8010 ES NAN 2011 03 25 p 6 11 Preparaci n de los reactivos A 1 EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x DM828 c digo K8004 Diluya una cantidad suficiente de EnVision M FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x 1 50 con agua destilada o desionizada para el procedimiento de tinci n planificado La soluci n diluida no utilizada puede almacenarse a 2 8 durante un mes Si se usa Dako PT Link en el pretratamiento se puede realizar una diluci n vaciando el contenido del vial de Target Retrieval Solution 50x en el tanque de Dako PT Link y a adiendo agua destilada o desionizada hasta la l nea marcada l nea de llenado Deseche la soluci n si est turbia Cuando se utilice en el PT Link para el procedimiento de preparaci n de la muestra 3 en 1 la soluci n diluida puede utilizarse 3 veces en un per odo de 5 d as siempre que se conserve a temperatura ambiente A 2 EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x DM829 c digo K8005 Diluya una cantidad suficiente de EnVision M FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x 1 50 con agua destilada o desionizada para el procedimiento de tinci n planificado Si se usa Dako PT Link en el pretratamiento se puede realizar una diluci n vaciando el contenido del vial de Target Retrieval Solution 50x en el tanque de Dako PT Link y a adiendo agua destilada o desionizada hasta la l nea marcada l nea de llenado La soluci n diluida n
14. estras Las muestras pueden ser cortes de tejidos fijados con formol e incluidos en parafina El tiempo de fijaci n depende del fijador y el tipo grosor del tejido Por ejemplo los bloques de tejido con un grosor de 3 4 mm deben fijarse con formol tamponado neutro durante 18 24 horas El grosor adecuado de los cortes incluidos en parafina es de unos 4 um Las muestras deben montarse en portaobjetos para microscopio p ej FLEX IHC Microscope Slides c digo K8020 Los cortes deben montarse en los portaobjetos lo m s planos y estirados que sea posible Si est n demasiado arrugados influir n negativamente en los resultados de la tinci n NOTA Los portaobjetos para microscopio deben tener un ancho adecuado para el instrumento Dako Autostainer Autostainer Plus Consulte el Manual del usuario del instrumento de Dako espec fico para obtener informaci n sobre los portaobjetos para microscopio que se pueden utilizar Los cortes incluidos en parafina deben montarse desde un ba o Mar a precalentado que contenga agua destilada o desionizada El ba o Mar a no debe contener aditivos como gelatina poli L lisina etc Los cortes deben secarse mediante calor generalmente a una temperatura no superior a 60 durante 60 minutos como m ximo Con el fin de asegurar una adherencia adecuada de los cortes a los portaobjetos es importante secar el agua de debajo de los cortes antes del proceso de secado en el horno 114807 005 K8010 ES NAN
15. ision FLEX Wash Buffer 20x 4 x 1 L Soluci n salina tamponada con Tris que contiene Tween 20 concentrada 20 veces pH 7 6 0 1 K8010 ES NAN 2011 03 25 p 4 11 B Material necesario pero no suministrado Instrumento Dako Autostainer Autostainer Plus Dako PT Link Dako Proteinase K Ready to Use si fuera necesario Dako FLEX Ready to Use Primary Antibodies o anticuerpos primarios concentrados de conejo o rat n diluidos adecuadamente de Dako Dako FLEX Ready to Use Rabbit o Mouse Universal Negative Control o reactivo de control negativo adecuado para el anticuerpo primario Utensilios para instrumentaci n de Dako Portaobjetos para microscopio p ej FLEX IHC Microscope Slides Reactivos generales de laboratorio para desparafinaci n de cortes de tejidos incluidos en parafina Medio de montaje acuoso o basado en disolvente org nico y cubreobjetos C Reactivos opcionales K8004 TARGET RETRIEVAL SOLUTION D M 828 HIGH pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x 3 x 30 mL Tamp n Tris EDTA concentrado 50 veces pH 9 K8005 TARGET RETRIEVAL SOLUTION DM829 LOW pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x K8006 DM830 EnVision FLEX Antibody Diluent 120 mL Tamp n Tris pH 7 2 que contiene 15 mmol L de NaN y prote na listo para su uso K8007 wash BUFFER 20X DM831 EnVision FLEX Wash Buffer 20x 1 L Soluci n salina tamponada con Tris que contiene Tween 20
16. luent c digo K8006 para la diluci n de los Dako concentrated Primary Antibodies Puede aplicarse EnVision M FLEX Rabbit LINKER c digo K8019 para obtener una amplificaci n de se al opcional de los anticuerpos primarios de conejo Puede aplicarse para la amplificaci n de se ales utilizando anticuerpos primarios de rat n EnVision FLEX Mouse LINKER c digo K8022 o incluido en el c digo K8012 Como gu a EnVision M FLEX Rabbit LINKER proporciona una amplificaci n de se al de 2 3 veces y EnVision Y FLEX Mouse LINKER proporciona una amplificaci n de se al de 4 5 veces El reactivo de detecci n Dako EnVision M FLEX HRP DM822 que se incluye en el kit se compone de un soporte principal de dextrano al que se han unido un gran n mero de mol culas de peroxidasa HRP y mol culas de anticuerpo secundario Para la reacci n de uni n se ha utilizado una qu mica nica que permite la uni n de hasta 100 mol culas de HRP y hasta 20 mol culas de anticuerpo por soporte principal El sistema de sustrato que se incluye en el kit est compuesto por dos componentes EnVision M FLEX DAB Chromogen DM827 una soluci n de diaminobencidina DAB concentrada y EnVision M FLEX Substrate Buffer DM823 que contiene per xido de hidr geno Antes de su uso EnVision FLEX DAB Chromogen se debe diluir en EnVision M FLEX Substrate Buffer El sistema de sustrato produce un producto final marr n claro en el lugar del ant geno diana
17. o utilizada puede almacenarse a 2 8 durante un mes Deseche la soluci n si est turbia Cuando se utilice en el PT Link para el procedimiento de preparaci n de la muestra 3 en 1 la soluci n diluida puede utilizarse 3 veces en un per odo de 5 d as siempre que se conserve a temperatura ambiente A 3 EnVision Y FLEX Wash Buffer 20x DM831 c digo K8007 Diluya una cantidad suficiente de EnVision FLEX Wash Buffer 20x 1 20 con agua destilada o desionizada para el procedimiento de tinci n planificado Diluya a adiendo el Wash Buffer concentrado a una cantidad medida previamente de agua destilada o desionizada para minimizar la formaci n de espuma Mezcle suavemente hasta que la soluci n diluida tenga un aspecto homog neo La soluci n diluida no utilizada puede almacenarse a 2 8 durante un mes Deseche la soluci n si est turbia Cuando se utilice en el PT Link para el procedimiento de preparaci n de la muestra 3 en 1 la soluci n diluida puede utilizarse 3 veces en un per odo de 5 d as siempre que se conserve a temperatura ambiente A 4 EnVision FLEX Substrate Working Solution La soluci n EnVision FLEX Substrate Working Solution que contiene DAB se prepara mezclando una gota de EnVision FLEX DAB Chromogen DM827 por 1 mL de EnVision Y FLEX Substrate Buffer DM823 Use EnVision M FLEX Substrate Working Solution en un plazo de 5 d as almacenar en la oscuridad a 2 8 C Recopilaci n y preparaci n de las mu
18. on el procedimiento HIER pueden montarse utilizando un medio de montaje acuoso o permanente Si se utilizan medios de montaje acuosos se recomienda utilizar medios como Dako Glycergel M Mounting Medium c digo C0563 o Faramount Aqueous Mounting Medium c digo S3025 Control de calidad Cada sesi n de tinci n debe incluir una muestra de control positivo conocido con el fin de asegurar un rendimiento correcto de todos los reactivos aplicados Si la muestra de control positivo no muestra una tinci n positiva los resultados de las muestras deber n considerarse como no v lidos Se debe utilizar un reactivo de control negativo con cada muestra para identificar cualquier tinci n no espec fica Si las tinciones no espec ficas no se pueden diferenciar claramente de las tinciones espec ficas los resultados de las muestras deber n considerarse como no v lidos Interpretaci n de los resultados La soluci n Substrate Working Solution que contiene diaminobencidina proporciona un color marr n en el lugar del ant geno diana reconocido por el anticuerpo primario El color marr n debe estar presente en la muestra de control positivo en la ubicaci n esperada del ant geno diana Si hay tinci n inespec fica se reconocer como una tinci n bastante difusa de color marr n en los portaobjetos tratados con el reactivo de control negativo Los n cleos se te ir n de color azul gracias a la contratinci n con hematoxilina Limitaciones 1 P
19. so o permanente NOTA Cuando se utilice en el PT Link para el procedimiento HIER la Target Retrieval Solution diluida y el Wash Buffer diluido pueden utilizarse 3 veces en un per odo de 5 d as siempre que se conserven a temperatura ambiente Procedimiento HIER utilizando recipientes de Coplin Tras los procesos de desparafinaci n y rehidrataci n del tamp n agua la mayor a de los cortes de tejidos debe someterse a recuperaci n del ep topo inducida por calor HIER 1 Coloque los recipientes de tinci n con la EnVision M FLEX Target Retrieval Solution 50x diluida en un ba o de agua 2 Caliente el ba o Mar a y los recipientes llenos con EnVision Y FLEX Target Retrieval Solution soluci n de trabajo hasta 95 99 Tape los reci pientes para estabilizar la temperatura y evitar la evaporaci n 3 Sumerja los cortes a temperatura ambiente en la EnVision M FLEX Target Retrieval Solution soluci n de trabajo precalentada de los recipientes de tinci n 4 Lleve la temperatura del ba o Mar a y la EnVision FLEX Target Retrieval Solution hasta 95 99 Incube durante 20 1 minutos a 95 99 5 Retire el recipiente con los portaobjetos del ba o Mar a Deje que los portaobjetos se enfr en en la EnVision M FLEX Target Retrieval Solution durante 20 1 minutos a temperatura ambiente 6 Decante la EnVision M FLEX Target Retrieval Solution y enjuague los cortes con EnVision M FLEX Wash Buffer 20x diluido a temper
20. tocolos Plantilla del protocolo FLEX 200 volumen de aplicaci n 200 uL o FLEX _300 volumen de aplicaci n 300 uL Programas autom ticos para ciclos de tinci n 114807 005 K8010 ES NAN 2011 03 25 p 9 11 FLEX protocolo FLEX FLEX Mo protocolo FLEX Mouse LINKER FLEX RD protocolo FLEX Rabbit LINKER El paso Auxiliar debe configurarse a tamp n de enjuague en sesiones de tinci n con lt 10 portaobjetos En el caso de sesiones de tinci n con 210 portaobjetos el paso Auxiliar debe configurarse a ninguno De esta manera se aseguran tiempos de lavado semejantes Todos los pasos de incubaci n deben realizarse a temperatura ambiente Consulte el Manual del usuario para m s detalles sobre el instrumento correspondiente Si todav a no est n disponibles los protocolos en el instrumento Dako Autostainer Autostainer Plus utilizado comun quese con el servicio t cnico de Dako Los tiempos de incubaci n ptimos del anticuerpo primario y del EnVision M FLEX HRP dependen del anticuerpo primario aplicado Consulte el folleto informativo del anticuerpo primario de Dako correspondiente El usuario deber verificar el protocolo aplicado Una vez completado el procedimiento de tinci n se deben montar las muestras Se recomienda realizar la deshidrataci n la depuraci n y el montaje permanente siempre que los portaobjetos se hayan tratado con el procedimiento de preparaci n de la muestra 3 en 1 Los portaobjetos tratados c
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