Italy www.diasorin.com LIAISON® Direct Renin
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1. Mol cula Cantidad a adida a la muestra ug mL Reactividad cruzada Beta microglobulina 50 7 0 Catepsina D 1 5 6 9 Tripsina 1 6 4 2 Plasmina 100 0 8 En ausencia de una preparaci n est ndar de prorrenina la reactividad cruzada de la prorrenina ha sido evaluada utilizando dos preparaciones disponibles en el mercado de prorrenina recombinante y de renina recombinante Se han preparado dos grupos de cinco soluciones con las mismas concentraciones de las dos mol culas y las muestras as preparadas intervalo 0 78 12 5 ng mL se han analizado con inmunoensayos para la medici n de la renina directa que demuestran ausencia de reactividad cruzada por parte de la prorrenina En la tabla siguiente se muestra la relaci n entre la se al emitida por cada soluci n de prorrenina y la se al emitida por la soluci n de renina correspondiente Liaison Direct Renin 0 26 Test IRMA renina directa 0 56 Test CLIA renina directa 0 16 Inmunoensayo Relaci n media entre prorrenina y renina 15 2 Precisi n con LIAISON Analyzer La repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo es decir las variaciones intra ensayo e inter ensayo han sido determinadas utilizando muestras en diferentes concentraciones de analito Los resultados se refieren a los grupos de pacientes tomados en consideraci n no se trata de prestaciones garantizadas porque pueden existir diferencias entre los diferentes laboratorios Repetibi2. DiaSorin S p A DiaSorin Via Crescentino snc 13040 Saluggia VC Italy C www diasorin com Modificaciones 8 Supresiones 8 LIAISON Direct Renin REF 310470 1 FINALIDAD DEL ENSAYO El ensayo LIAISON Direct Renin emplea la tecnolog a de la quimioluminiscencia CLIA en un ensayo inmunol gico para la determinaci n cuantitativa in vitro de la renina en muestras de plasma humano obtenido con EDTA La determinaci n de la renina es til en el diagn stico y en el tratamiento de varios tipos de hipertensi n en el hombre El ensayo debe realizarse en la serie de instrumentos LIAISONY Analyzer 2 SUMARIO Y EXPLICACI N DEL TEST La enzima proteol tica renina peso molecular aproximadamente 42 kDa es sintetizada principalmente por las c lulas yuxtaglomerulares del ri n bajo forma de prorrenina y es almacenada bajo forma de gr nulos de prorrenina o renina La renina se libera como respuesta a est mulos fisiol gicos como por ejemplo la disminuci n del volumen hem tico y de la presi n arterial y la p rdida de sodio El precursor inactivo de la renina es la prorrenina que se convierte en renina en dos fases Primero la prorrenina sufre un cambio de conformaci n reversible que origina la prorrenina activada seguidamente 46 amino cidos de la prorrenina se separan por v a proteol tica para producir la renina activa una glicoproteina formada por 340 residuos de amino cidos Una parte de la prorrenina no sufre la sepa
3. La medici n de la renina total prorrenina y renina activa o de la prorrenina tienen menor importancia cl nica Te ricamente la angiotensina Il es un mejor indicador pero tiene una vida media muy breve y es dif cil diferenciarla de la angiotensina l El angiotensin geno el sustrato de la renina es el factor que limita la producci n de la angiotensina ll En efecto su disponibilidad contribuye en parte a la estimulaci n o a la inhibici n del sistema renina angiotensina aldosterona La angio tensina no se almacena en las c lulas hep ticas donde se sintetiza a diferencia de la renina que se almacena en los ri ones donde es producida Un aumento del nivel de hormonas tiroideas hipertiroidismo de estr genos anticonceptivos orales embarazo o de glucocorticoides s ndrome de Cushing terapia con cortisona provoca el aumento de los niveles del sustrato de la renina La angiotensina ll interviene en el control de la filtraci n glomerular y de la perfusi n renal La renina es secretada por los ri ones como respuesta a la reducci n de la perfusi n de la arteria renal barorreceptor intrarrenal a la reducci n de la reabsorci n de ones sodio en el t bulo distal p rdida de sodio a la hipopotasemia o a la estimulaci n de los receptores B adren rgicos Adem s la secreci n de la renina se reduce por feedback negativo en presencia de concentraciones plasm ticas elevadas de angiotensina ll Se observa un aumento de los
4. valores que se van a aplicar a todos los materiales de control de calidad utilizados b c d 13 INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS El analizador calcula autom ticamente las concentraciones de renina de las muestras desconocidas expresadas en pUl mL y clasifica los resultados Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador Aunque los calibradores y los controles pueden generar resultados de RLU o dosis distintos en LIAISON y LIAISON XL los resultados de los pacientes son equivalentes Intervalo de ensayo El analizador calcula autom ticamente las concentraciones de renina hasta 500 pUl mL Est ndar de referencia El ensayo est calibrado seg n la Preparaci n Internacional de Referencia de la Organizaci n Mundial de la Salud World Health Organization International Reference Preparation NIBSC c digo 68 356 Los resultados est n expresados en uUl mL Datos cl nicos Cada laboratorio debe establecer sus propios intervalos de referencia para la poblaci n tomada en consideraci n Para determinar el intervalo de los valores esperados se ha realizado un estudio en 178 muestras de plasma obtenido con EDTA 89 sujetos Las muestras se han recogido en una poblaci n mantenida en ayunas formada por donantes de sangre aparentemente sanos hombres n 49 y mujeres n 40 de raza cauc sica y de origen afro americana hisp nica y asi tica que satisface los siguientes criterios de inclusi n sujetos adul
5. 75 mm Adhiera al tubo del calibrador la etiqueta correspondiente con el c digo de barras y col quelo en el instrumento Con cada soluci n de los calibradores se pueden realizar tres calibraciones Consulte el apartado 8 para conservar los calibradores despu s de la reconstituci n Para obtener informaci n detallada sobre el uso de los calibradores en el instrumento consulte el manual del usuario correspondiente CONTROLES Para preparar y manipular los controles correctamente consulte las instrucciones incluidas con el juego de controles LIAISON Direct Renin 8 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS INTEGRAL DE REACTIVOS Sellado Estable a 2 8 C hasta la fecha de caducidad Abierto en el instrumento o a 2 8 C Estabilidad m nima seis semanas Despu s de este intervalo de tiempo se puede seguir usando el integral de reactivos siempre que los controles permanezcan dentro de los l mites esperados Use siempre el mismo analizador con el integral de reactivos abierto Use las gradillas suministradas con el analizador para mantener el integral en posici n vertical No congele Mantenga el integral de reactivos en posici n vertical durante la conservaci n para facilitar la resuspensi n de las part culas magn ticas Mantenga protegido de la luz directa CALIBRADORES Liofilizados Estables a 2 8 C hasta la fecha de caducidad A su llegada los calibradores deben conservarse a 2 8
6. C en posici n vertical para evitar que el li filo se adhiera a la tapa del frasco Reconstituidos Estables durante dos semanas si se conservan a 2 8 C en los frascos originales bien cerrados o en los tubos de ensayo tapados Despu s de la reconstituci n los calibradores deben conservarse a 2 8 C en posici n vertical para evitar que la soluci n se adhiera a la tapa del frasco o del tubo de ensayo No exponga los calibradores reconstituidos a temperatura ambiente durante m s tiempo del necesario para procesarlos en el analizador Durante la manipulaci n de los calibradores adopte las precauciones necesarias para evitar la contaminaci n microbiana Renin es fm LIAISON Direct Renin REF 310470 47 54 ES 200 007 906 02 2012 12 9 RECOGIDA Y PREPARACI N DE LAS MUESTRAS Si durante la manipulaci n de las muestras se produce la crioactivaci n de la prorrenina precursor inactivo de la renina en renina se obtienen resultados falsamente elevados La crioactivaci n se produce cuando las muestras se enfr an por mucho tiempo a una temperatura de 4 C o inferior o cuando las muestras est n fr as pero todav a l quidas no congeladas La crioactivaci n de prorrenina en renina es m s r pida en el suero La concentraci n hem tica de prorrenina es aproximadamente diez veces superior a la de la renina El nico tipo de muestra que se puede usar es plasma humano obtenido con EDTA El uso de suero y plasma obtenido con hep
7. efecto gancho a dosis altas HDH high dose hook effect se ha determinado a adiendo renina recombinante a un pool de plasma humano hasta una concentraci n m xima de 150 000 uUl mL Cuando se analizan muestras que contienen concentraciones de analito extremadamente elevadas se pueden obtener concentraciones inferiores a las reales por el efecto gancho La presencia del efecto gancho se evalu analizando una muestra a la que se hab an a adido altas concentraciones de renina La muestra present un valor de concentraci n por encima del intervalo de ensayo lo que indica que la clasificaci n de las muestras es correcta 15 7 Sensibilidad anal tica y funcional La sensibilidad anal tica l mite de detecci n se define como la m nima dosis de analito que el test puede detectar que puede ser distinta del punto cero La sensibilidad anal tica calculada seg n las l neas gu a del Instituto para Est ndares Cl nicos y de Laboratorio Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI USA Documento N EP17 A oscila entre 0 52 HUl mL y 0 97 uUl mL determinada con varias sesiones anal ticas lotes de kit e instrumentos La sensibilidad anal tica definida como la m nima dosis de analito que el test puede detectar que puede ser distinta del punto cero es decir dos desviaciones est ndar por encima de cero oscila entre 0 13 pUl mL y 0 53 uUl mL determinada con varias sesiones anal ticas lotes de kit e instrumentos La sensibilidad
8. funcional definida como la concentraci n de analito a la que el coeficiente de variaci n inter ensayo es superior al 20 oscila entre 1 60 uUl mL y 1 96 uUl mL determinada con varias sesiones anal ticas lotes de kit e instru mentos 15 8 Comparaci n con otros m todos Se han comparado los resultados del test LIAISON Direct Renin con los de los dos m todos de referencia CLIA e IRMA Se han obtenido las siguientes correlaciones LIAISON Direct Renin 1 097 x test de referencia CLIA 2 765 Coeficiente de correlaci n r 0 927 n 325 LIAISON Direct Renin 0 900 x test de referencia IRMA 4 304 Coeficiente de correlaci n r 0 957 n 212 Los valores nominales de los calibradores del test LIAISON Direct Renin se han asignado para reflejar los datos de exactitud mostrados 300 A 400 J l o o S 3 i o i 2 300 c 200 4 o S o o E o o X 2 X ES 3 200 2 ES 9 a 100 4 os 8 o a a e pa zZ 100 O O D D lt lt I 0 0 100 200 300 0 100 200 300 400 M todo CLIA pUl mL M todo IRMA uUl mL Renin es fm LIAISON Direct Renin REF 310470 52 54 ES 200 007 906 02 2012 12 LIAISON Control Direct Renin REF 310471 1 FINALIDAD DEL ENSAYO Los controles LIAISON Direct Renin niveles 1 y 2 se utilizan en los inmunoensayos quimioluminiscentes CLIA LIAISON9 para verificar la fiabilidad de los ensayos No se han establecido las caracter sticas del m todo de los controles LIAI
9. 2 9 Desviaci n est ndar uUl mL 0 5 1 7 1 8 2 8 7 8 1 8 3 3 Coeficiente de variaci n 9 5 12 8 5 3 3 4 2 9 6 6 3 2 Valor m nimo uUl mL 4 4 10 9 31 8 77 4 254 9 24 3 93 9 Valor m ximo uUl mL 6 9 17 7 40 3 88 4 282 7 31 7 107 2 Coeficiente de variaci n inter lotes 2 7 0 6 1 2 0 9 1 7 0 4 0 2 Renin es fm 50 54 LIAISON Direct Renin REF 310470 ES 200 007 906 02 2012 12 Reproducibilidad Sitio 2 A B Cc D Control 1 Control 2 LOTE Nr 01 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 20 Media uUl mL 18 8 38 4 79 1 228 6 27 5 97 2 Desviaci n est ndar uUl mL 3 1 2 8 5 9 22 4 1 9 9 5 Coeficiente de variaci n 16 5 7 4 7 5 9 8 7 0 9 8 Valor m nimo Ul mL 15 8 34 2 61 1 188 6 24 2 83 0 Valor m ximo uUl mL 26 4 44 1 88 9 270 0 32 0 116 5 LOTE Nr 03 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 20 Media uUl mL 15 8 34 8 85 4 260 8 26 8 103 2 Desviaci n est ndar uUl mL 2 7 2 1 5 2 26 5 2 8 7 5 Coeficiente de variaci n 17 1 6 1 6 1 10 2 10 6 7 3 Valor m nimo 1Ul mL 12 9 32 3 75 2 214 5 22 1 91 0 Valor m ximo uUl mL 22 7 38 4 93 7 306 2 31 7 116 3 Coeficiente de variaci n inter lotes 12 2 7 0 5 4 9 3 1 9 4 2 15 3 Precisi n con LIAISON XL Analyzer Para determinar la repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo es decir las variaciones intra ensayo e inter ensayo se utilizaron muestras con diferentes concentraciones de analito espec fico La va
10. 65 8 1 2 gt 500 0 1 4 182 9 192 9 105 5 1 4 397 3 1 8 91 5 98 2 107 4 1 8 198 7 209 5 105 5 1 16 45 7 53 6 117 2 1 16 99 3 109 3 110 0 1 32 22 9 25 5 111 5 1 32 49 7 54 9 110 5 Renin es fm LIAISON Direct Renin REF 310470 51 54 ES 200 007 906 02 2012 12 15 5 Veracidad con el test de recuperaci n Se han analizado dos grupos de muestras cada uno de ellos formado por una muestra con concentraci n de renina elevada y por una muestra con concentraci n de renina baja o normal mezcladas en proporci n 1 5 1 2 1 1 2 1 y 5 1 grupo 1 muestras X y Y grupo 2 muestras W y Z Los porcentajes de recuperaci n han sido determinados por los resultados de las muestras no diluidas Las concentraciones medidas de renina obtenidas en funci n de las concentraciones esperadas han sido analizadas con la regresi n lineal Los coeficientes de correlaci n r estaban comprendidos entre 0 996 y 1 000 Concentraci n Concentraci n Y Concentraci n Concentraci n Y Grupo 1 esperada medida Recu S idci n Grupo 2 esperada medida Reci oraci n pUI mL pUI MmL p 1Ul mL uUl mL P X no diluido 5 3 W no diluido 23 9 5 1 25 8 24 5 95 0 5 1 65 4 62 3 95 2 2 1 46 3 49 4 106 6 2 1 106 9 103 4 96 7 1 1 66 9 69 3 103 6 1 1 148 4 148 4 100 0 1 2 87 4 92 1 105 4 1 2 189 9 186 6 98 2 1 5 107 9 108 0 110 1 1 5 231 4 230 0 99 4 Y no diluido 128 4 Z no diluido 272 9 15 6 Efecto gancho El
11. RINCIPIO DEL ENSAYO El m todo para la determinaci n cuantitativa de la renina es un ensayo inmunol gico de tipo sandwich basado en el principio de la quimioluminiscencia Un anticuerpo monoclonal de rat n espec fico que reconoce tanto la renina como la prorrenina recubre las part culas magn ticas fase s lida otro anticuerpo monoclonal espec fico para la renina est enlazado a un derivado del isoluminol conjugado anticuerpo isolumino Durante la incubaci n la renina presente en los calibradores o en los controles as como tambi n la renina y la prorrenina presentes en las muestras enlazan el anticuerpo monoclonal en fase s lida el anticuerpo conjugado reacciona en seguida con la renina ya enlazada en la fase s lida Se forma un sandwich s lo en presencia de las mol culas de renina que crean un puente entre los dos anticuerpos Despu s de la incubaci n se elimina el material no enlazado mediante un ciclo de lavado A continuaci n se a aden los reactivos starter que inducen una reacci n de quimioluminiscencia La se al luminosa y por lo tanto la cantidad de conjugado anticuerpo isoluminol se mide con un fotomultiplicador en unidades relativas de luz RLU relative light units y es directamente proporcional a la concentraci n de renina presente en los calibradores en las muestras o en los controles Para impedir la sobreestimaci n de la renina se deben evitar condiciones de procesamiento de las muestras que active
12. SON Direct Renin en relaci n con otros ensayos o plataformas de instrumentos LIAISON Analyzer El Certificado de An lisis Certificate of Analysis contiene informaci n espec fica sobre el lote de controles que debe introducirse manualmente en el software del analizador antes de colocar los frascos de los controles en el instrumento Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador LIAISON XL Analyzer Los c digos de barras del certificado de an lisis contienen informaci n espec fica sobre el lote de los controles que debe leerse con el lector manual de c digo de barras del LIAISON XL Analyzer antes de introducir los frascos de los controles Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador 2 MATERIALES SUMINISTRADOS 4 x 2 frascos 4 frascos 4 x 2 0 mL de LIAISON Control Direct Renin nivel 1 renina humana recombinante proteasa cida activa de 340 amino cidos producida en c lulas renales embrionarias humanas transfectadas con una construcci n de DNA codificante para renina humana tamp n fosfato alb mina s rica bovina 0 2 ProClin 300 conservantes 4 frascos 4 x 2 0 mL de LIAISON Control Direct Renin nivel 2 renina humana recombinante proteasa cida activa de 340 amino cidos producida en c lulas renales embrionarias humanas transfectadas con una construcci n de DNA codificante para renina humana tamp n fosfato alb mina s rica bovina un colorante azul inact
13. XL Una vez que se ha usado un integral con un tipo de analizador concreto debe seguir us ndose en ese analizador hasta que se termine Por motivos de trazabilidad relacionados con lo antes expuesto es necesario terminar el seguimiento de los pacientes con el mismo tipo de analizador Los seguimientos deben realizarse en un nico tipo de analizador LIAISON o LIAISON XL Renin es fm LIAISON Direct Renin REF 310470 49 54 ES 200 007 906 02 2012 12 15 PRESTACIONES METODOL GICAS DEL KIT 15 1 Especificidad anal tica La especificidad anal tica se define como la capacidad que tiene el test para detectar exactamente el analito ante la presencia de factores potencialmente interferentes en la matriz de la muestra por ejemplo hem lisis lipemia bilirrubinemia Interferencias Estudios controlados sobre los factores potencialmente interferentes han demostrado que las prestaciones del test no est n influenciadas por las concentraciones de bilirrubina hasta 20 mg dL de hemoglobina hasta 500 mg dL o de triglic ridos hasta 3000 mg dL Reacciones cruzadas La presencia de las siguientes mol culas que pueden ocasionar potencialmente reacciones cruzadas en el ensayo ha mostrado las interferencias ilustradas a continuaci n El test se ha realizado seg n las l neas gu a del Instituto para Est ndares Cl nicos y de Laboratorio Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI USA Documento N EP07 A2
14. arina o citrato proporciona valores de renina inferiores y por lo tanto est desaconsejado Se recomienda estandarizar cuidadosamente la preparaci n del paciente y las condiciones de recogida de la muestra Recoja la sangre extra da a temperatura ambiente por punci n en vena en un tubo de ensayo de vidrio con silicona en un tubo vacutainer con tap n de color violeta o equivalente con EDTA como anticoagulante La presencia de hem lisis puede indicar una manipulaci n incorrecta de las muestras durante la recogida o la preparaci n de las mismas Se recomienda si bien no es indispensable recoger las muestras en sujetos en ayunas Escriba la hora del d a en el que se recogi la muestra y la posici n del paciente supina erecta sentada No enfr e con anterioridad los tubos de ensayo para la recogida con EDTA ni los sumerja en ba o de hielo manipule las muestras a temperatura ambiente Centrifugue los tubos de ensayo utilizando una centrifugadora no refrigerada separa el plasma con EDTA de las c lulas inmediatamente despu s de la centrifugaci n y conserve las muestras a 20 C o a temperaturas inferiores subdivididas en al cuotas congeladas instant neamente Antes de realizar el ensayo descongele con precauci n agite las muestras descongeladas y elimine las burbujas de aire que pudiera haber No use muestras fuertemente hemolizadas o lip micas ni muestras que presenten material suspendido o evidente contaminaci n microbiana No u
15. cialmente infeccioso Todas las muestras los reactivos biol gicos del kit y los materiales usados para efectuar el ensayo se deben considerar capaces de transmitir agentes infecciosos por lo tanto los residuos se deber n eliminar de acuerdo con las reglamentaciones de las agencias autorizadas que tengan jurisdicci n sobre el laboratorio y con las normativas de cada pa s Los reactivos que contienen ProClin 300 se clasifican como irritantes seg n las Directivas Europeas aplicables R 43 Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel S 24 Ev tese el contacto con la piel S 37 Usense guantes adecuados S 60 Elim nense el producto y su recipiente como residuos peligrosos 5 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD No exponga los controles reconstituidos a temperatura ambiente durante m s tiempo del necesario para procesarlos en el analizador Liofilizados Estables a 2 8 C hasta la fecha de caducidad A su llegada los controles deben conservarse a 2 8 C en posici n vertical para evitar que el li filo se adhiera a la tapa del frasco Reconstituidos Estables durante ocho semanas si se conservan a 2 8 C en los frascos originales bien cerrados o en los tubos de ensayo tapados Despu s de la reconstituci n los controles deben conservarse a 2 8 C en posici n vertical para evitar que la soluci n se adhiera a la tapa del frasco o del tubo de ensayo 6 PREPARACI N DE LOS REACTIVOS Reconstituya el contenido d
16. do considerando la variabilidad de las sesiones anal ticas respecto de la curva maestra almacenada a fin de garantizar unos resultados anal ticos exactos y de obtener indicaciones sobre la estabilidad o el deterioro de los reactivos Si los valores de control se mantienen repetidamente fuera del rango previsto es muy probable que el ensayo se haya realizado de forma incorrecta Renin es fm LIAISON Control Direct Renin REF 310471 54 54 ES 200 007 906 02 2012 12
17. e los frascos con 2 0 mL de agua desionizada o destilada Espere durante 10 15 minutos a 18 25 C la disoluci n completa Agite delicadamente los frascos por inversi n Evite la formaci n de espuma La soluci n reconstituida de cada control debe transferirse en un tubo de ensayo de poliestireno de 12 x 75 mm Coloque en el tubo de ensayo del control la etiqueta correspondiente con el c digo de barras y ubique en el rea de las muestras del instrumento Con una soluci n de control es posible realizar nueve test El volumen m nimo de control necesario es 355 uL 205 uL de control 150 uL de volumen muerto Mantenga los controles en el instrumento s lo el tiempo necesario para realizar el test de control de calidad Despu s del uso tape los tubos de ensayo lo antes posible y mant ngalos a 2 8 C en posici n vertical Durante la manipulaci n de los controles adopte las precauciones necesarias para evitar la contaminaci n microbiana Renin es fm LIAISON Control Direct Renin REF 310471 53 54 ES 200 007 906 02 2012 12 7 MANIPULACI N Coloque los tubos de transferencia con c digo de barras en una de las gradillas con muestras del paciente del analizador Consulte las instrucciones de manipulaci n en el manual del analizador 8 VALORES ESPERADOS En el certificado de an lisis se indican los intervalos y valores previstos de concentraci n de renina en los controles Se han estableci
18. ilitar la suspensi n de las part culas magn ticas evite la formaci n de espuma Controle visualmente el fondo del contenedor de las part culas magn ticas para cerciorarse de que no hayan quedado part culas magn ticas sedimentadas Si es necesario repita el procedimiento hasta que las part culas magn ticas est n completamente resuspendidas Si es necesario seque con mucho cuidado la superficie de cada pared cuando quite el precinto para eliminar el l quido residual Formaci n de espuma en los reactivos Para garantizar las mejores prestaciones del integral se recomienda evitar la formaci n de espuma en los reactivos Respete las recomendaciones siguientes Antes de usar el integral controle visualmente los reactivos para excluir la presencia de espuma Si se observa la presencia de espuma tras la resuspensi n de las part culas magn ticas coloque el integral en el instrumento y deje que se disuelva la espuma El integral est listo para el uso una vez que se ha disuelto la espuma que ha permanecido en el instrumento y que se ha agitado Renin es fm LIAISON Direct Renin REF 310470 46 54 ES 200 007 906 02 2012 12 Instalaci n del integral en el rea de reactivos LIAISON Analyzer Coloque el integral en el rea de reactivos del analizador con la etiqueta de c digo de barras orientada a la izquierda y espere 30 minutos antes de utilizarlo Las part culas magn ticas se agitan autom ticamente y se resuspenden p
19. ivo 0 2 ProClin 300 conservantes 4 etiquetas con c digos de barras para el control Direct Renin nivel 1 y 4 etiquetas con c digos de barras para el control Direct Renin nivel 2 Los controles se suministran liofilizados El intervalo de las concentraciones para cada control est impreso en el certificado de an lisis e indica los l mites definidos por DiaSorin para los valores de los controles obtenidos con test fiables Cada laboratorio es responsable de adoptar l mites diferentes para cumplir exigencias espec ficas 3 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES S lo para uso diagn stico in vitro Los controles no son espec ficos para lote de kit Se pueden intercambiar entre s aunque pertenezcan a lotes diferentes Observe las precauciones necesarias para la manipulaci n de los reactivos de laboratorio Los residuos deben eliminarse de acuerdo con la reglamentaci n local 4 NORMAS DE SEGURIDAD No coma beba fume o se maquille durante la ejecuci n del ensayo No pipetee las soluciones con la boca Evite el contacto directo con el material potencialmente infeccioso usando batas de laboratorio gafas de protecci n y guantes desechables L vese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo Evite salpicaduras o formaci n de aerosoles En caso de que esto sucediera cada gota de reactivo se debe eliminar con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 y el medio utilizado se deber tratar como material residuo poten
20. lidad Para evaluar la repetibilidad se han analizado veinte replicados en la misma sesi n anal tica en el laboratorio donde se desarroll el kit Repetibilidad A B Cc D Control 1 Control 2 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 20 Media uUl mL 15 1 33 8 82 2 258 0 27 1 99 0 Desviaci n est ndar uUl mL 0 6 0 9 1 7 3 1 1 5 2 3 Coeficiente de variaci n 3 7 2 8 2 0 1 2 5 6 2 4 Valor m nimo uUl mL 13 4 32 4 78 5 252 8 24 1 95 3 Valor m ximo uUl mL 15 7 35 9 84 6 264 4 29 9 102 5 Reproducibilidad Para evaluar la reproducibilidad se han analizado veinte replicados en d as diferentes una o dos sesiones anal ticas al d a utilizando dos lotes diferentes de integral por cada sitio Los ensayos se realizaron en dos sitios en el laboratorio donde se desarroll el kit sitio 1 y en un laboratorio independiente sitio 2 utilizando los mismos instrumentos Reproducibilidad Sitio 1 E A B C D Control 1 Control 2 LOTE Nr 02 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 20 20 Media uUl mL 5 1 13 2 34 1 82 4 260 3 27 2 103 2 Desviaci n est ndar uUl mL 0 5 1 6 1 9 4 3 12 3 1 9 4 4 Coeficiente de variaci n 0 0 12 4 5 7 5 2 4 7 6 9 4 2 Valor m nimo uUl mL 4 1 11 4 30 8 74 3 241 6 24 3 93 7 Valor m ximo uUl mL 5 9 17 2 38 4 88 7 278 8 30 4 111 0 LOTE Nr 03 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 20 20 Media uUl mL 5 3 13 1 34 7 83 5 266 7 27 3 10
21. liminar con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 y el medio utilizado se deber tratar como material residuo potencialmente infeccioso Todas las muestras los reactivos biol gicos del kit y los materiales usados para efectuar el ensayo se deben considerar capaces de transmitir agentes infecciosos por lo tanto los residuos se deber n eliminar de acuerdo con las reglamentaciones de las agencias autorizadas que tengan jurisdicci n sobre el laboratorio y con las normativas de cada pa s Los reactivos que contienen ProClin 300 se clasifican como irritantes seg n las Directivas Europeas aplicables R 43 Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel S 24 v tese el contacto con la piel S 37 Usense guantes adecuados S 60 Elim nense el producto y su recipiente como residuos peligrosos 7 PREPARACI N DE LOS REACTIVOS INTEGRAL DE REACTIVOS Para manipular los reactivos es preciso adoptar una serie de precauciones importantes Resuspensi n de las part culas magn ticas Las part culas magn ticas deben estar completamente resuspendidas antes de colocar el integral en el instrumento Siga los pasos indicados a continuaci n para garantizar la suspensi n completa de las part culas Antes de quitar el precinto gire la rueda peque a del compartimento de part culas magn ticas hasta que la suspensi n adopte un color marr n Agite horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza y sumo cuidado para fac
22. lyzer Los valores de los calibradores est n almacenados en la etiqueta de identificaci n por radiofrecuencia RFID del integral de reactivos 11 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO Para obtener resultados correctos es preciso respetar estrictamente las instrucciones proporcionadas en el manual del analizador LIAISON Analyzer Cada par metro de la prueba se identifica mediante el c digo de barras incluido en la etiqueta del integral de reactivos Si el c digo de barras no se puede leer no ser posible usar el integral y tendr que desecharse Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador LIAISON XL Analyzer Cada par metro de la prueba se identifica mediante la informaci n codificada en la etiqueta de identificaci n por radiofrecuencia RFID del integral de reactivos Si la etiqueta no se puede leer no ser posible usar el integral y tendr que desecharse Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador En caso de que los c digos de barras de los calibradores externos no se lean correctamente los datos indicados en las etiquetas de los mismos debajo del c digo de barras pueden introducirse manualmente en la serie de instrumentos LIAISON Analyzer Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador Las operaciones del analizador son las siguientes 1 Dispensa los calibradores los controles o las muestras en el m dulo de reacci n 2 Dispensa las part culas
23. magn ticas recubiertas 3 Dispensa el conjugado en el m dulo de reacci n 4 incuba 5 Lava con el l quido de lavado l quido del sistema 6 A ade los reactivos starter y mide la luz emitida Renin es fm LIAISON Direct Renin REF 310470 48 54 ES 200 007 906 02 2012 12 12 CONTROL DE CALIDAD Los controles LIAISONY deben analizarse individualmente para determinar la eficacia del ensayo En el control de calidad es preciso utilizar los controles LIAISON Direct Renin a por lo menos una vez por cada d a de trabajo cuando se usa un nuevo integral de reactivos cuando se calibra el kit cuando se usa un nuevo lote de reactivos starter e para determinar la eficacia del integral de reactivos abierto despu s de m s de seis semanas o conforme a lo estipulado en las normas y los requisitos de los reglamentos locales o los organismos acreditados Los valores de control deben permanecer dentro de los rangos previstos Cada vez que el valor de uno o ambos controles no coincida con el rango esperado habr que repetir la calibraci n y evaluar de nuevo los controles Si los valores siguen fuera de rango tras una calibraci n satisfactoria ser preciso repetir la prueba usando un frasco de control sin abrir Los resultados no deben notificarse si los valores de control est n fuera del rango previsto Antes de utilizar otros controles es preciso evaluar su compatibilidad con este ensayo as como establecer los intervalos de
24. n la prorrenina consulte el apartado Recogida y Preparaci n de las Muestras 4 MATERIALES SUMINISTRADOS El orden de los reactivos refleja el orden con el que se han ensamblado los contenedores en el integral de reactivos Integral de reactivos para 100 determinaciones Suspensi n de part culas magn ticas recubiertas de anticuerpo anti renina y prorrenina monoclonal de rat n alb mina s rica bovina tamp n PBS lt 0 1 azida s dica Soluci n de conjugado anticuerpo anti renina monoclonal de rat n conjugado con un derivado del isoluminol IgG de rat n no espec fica alb mina s rica bovina tamp n PBS 0 2 ProClin 300 conservantes 2 3 mL 13 mL En el kit se incluyen Calibrador A liofilizado renina humana recombinante proteasa cida activa de 340 amino cidos producida en c lulas renales embrionarias humanas transfectadas con una construcci n de DNA codificante para renina humana tamp n fosfato alb mina s rica bovina un colorante amarillo inactivo 0 2 ProClin 300 conservantes 5x2 0 mL Calibrador B liofilizado renina humana recombinante proteasa cida activa de 340 amino cidos producida en c lulas renales embrionarias humanas transfectadas con una construcci n de DNA codificante para renina humana tamp n fosfato alb mina s rica bovina un colorante azul inactivo 0 2 ProClin 300 conservantes 5x2 Etiquetas con c digos de barras para el calibrador A y para el calib
25. niveles de renina en Se observa una disminuci n de los niveles de renina en Aldosteronismo secundario hipertensi n grave de origen renal Aldosteronismo primario La medici n directa de la renina es til La medici n directa de la renina es til en el diagn stico en el diagn stico diferencial de hiperaldosteronismo primario y diferencial de hiperaldosteronismo primario y secundario junto secundario junto con el an lisis de la aldosterona con el an lisis de la aldosterona Enfermedad de Addison Retenci n de sales despu s de una terapia esteroidea Dieta pobre en sodio administraci n de diur ticos hemorragias Terapia con vasopresina ADH Insuficiencia renal cr nica Hiperplasia suprarrenal cong nita con d ficit de 17 hidroxilasa P rdida de sales como consecuencia de enfermedades gastro ent ricas Tumores renales que sintetizan renina Hipertensi n esencial Hipopotasemia S ndrome de Bartter niveles elevados de renina sin hiperten si n Estenosis de la arteria renal Renin es fm LIAISON Direct Renin REF 310470 44 54 ES 200 007 906 02 2012 12 Desde el punto de vista general la poblaci n con presi n sist lica constantemente superior a 160 mmHg y o presi n diast lica superior a 95 100 mmHg hipertensi n exige tratamiento anti hipertensivo La incidencia mundial de muerte correlacionada a hipertensi n es aproximadamente cinco millones
26. ones en serie de dos muestras de plasma de concentraci n elevada de renina tanto no diluidas como despu s de diluci n con plasma sin renina Las concentraciones medidas de renina obtenidas en funci n de las concentraciones esperadas han sido analizadas con la regresi n lineal Los coeficientes de correlaci n r estaban comprendidos entre 0 999 y 1 000 Concentraci n Concentraci n Y Concentraci n Concentraci n Y Diluci n esperada medida Pedi Sraci n Diluci n esperada medida Recu e Sci n uUl mL pUI mL P uUl mL pUI mL P no diluido 333 4 no diluido gt 500 0 1 2 166 7 190 5 114 3 1 2 396 5 1 4 83 4 91 7 110 1 1 4 198 3 200 0 100 9 1 8 41 7 47 3 113 5 1 8 99 1 103 1 104 0 1 16 20 8 24 7 118 6 1 16 49 6 51 3 103 6 1 32 10 4 12 1 116 3 1 32 24 8 26 2 105 8 Se han analizado dos muestras adicionales de plasma con niveles de renina por encima del intervalo de ensayo sin diluir y diluidas en serie con el diluyente para endocrinolog a LIAISON Endocrinology Diluent Los valores medidos frente a los niveles de renina esperados se analizaron mediante regresi n lineal Los coeficientes de correlaci n r fueron de 1 000 Concentraci n Concentraci n Y Concentraci n Concentraci n Y Diluci n esperada medida Recu cradh Diluci n esperada medida Kecu n uUl mL uUl mL P pUI ML uUl mL P no diluido gt 500 0 no diluido gt 500 0 1 2 3
27. or completo en el analizador Consulte el manual del usuario del analizador para introducir las muestras y comenzar el ensayo LIAISON XL Analyzer El instrumento LIAISON XL Analyzer incorpora un dispositivo magn tico que favorece la dispersi n de las micropart culas antes de colocar un integral de reactivos en el rea de reactivos del analizador Consulte los detalles en el manual del usuario del analizador a Coloque el integral de reactivos en la ranura espec fica b Deje el integral de reactivos en el dispositivo magn tico durante al menos 30 segundos varios minutos como m ximo Si es necesario repita la operaci n Coloque el integral en el rea de reactivos del analizador con la etiqueta orientada a la izquierda y espere 15 minutos antes de utilizarlo Las part culas magn ticas se agitan autom ticamente y se resuspenden por completo en el analizador Consulte el manual del usuario del analizador para introducir las muestras y comenzar el ensayo CALIBRADORES Los calibradores del LIAISON Direct Renin se suministran liofilizados Reconstituya el contenido de los frascos con 2 0 mL de agua desionizada o destilada Deje los frascos durante 10 15 minutos a 18 25 C hasta que el contenido se disuelva por completo Mezcle bien los frascos mediante una inversi n suave evite la formaci n de espuma La soluci n reconstituida de cada calibrador debe transferirse a un tubo de poliestireno de 12 x
28. por a o Existen dos tipos de hipertensi n Esencial o primaria 90 95 del total donde se desconece la causa que la origina Hipertensi n secundaria 5 10 es decir debida a una causa subyacente que puede tener los siguientes or genes Hipertensi n asociada a insuficiencia renal 2 3 de origen vascular 2 3 de origen parenquimal Hipertensi n asociada a trastornos hormonales Hipertensi n asociada a tumores end crinos muy rara Hipertensi n atr gena por ejemplo debida a anticonceptivos orales 1 La renina se mide bajo prescripci n m dica cuando La presi n diast lica es superior a 90 mmHg l neas gu a de la Sociedad Europea de Hipertensi n y de la Sociedad Europea de Cardiolog a La presi n sist lica es superior a 140 mmHg l neas gu a de la Sociedad Europea de Hipertensi n y de la Sociedad Europea de Cardiolog a Se sufre de hipopotasemia para establecer el diagn stico diferencial de hiperaldosteronismo secundario o de hipermineralcorticoidismo primario La respuesta al tratamiento anti hipertensivo habitual es insuficiente Se estudia el car cter funcional de una estenosis de la arteria renal midiendo la renina en las venas renales durante la inhibici n de la enzima de conversi n de la angiotensina Un tumor est vinculado a un aumento de la presi n arterial para establecer el diagn stico diferencial de producci n ect pica de renina 3 P
29. raci n proteol tica de los amino cidos que la transforma en renina y se libera en la circulaci n La prorrenina puede activarse por diferentes medios como por ejemplo crioactivaci n acidificaci n o proteolisis parcial La secreci n de la prorrenina no es regulada r gidamente mientras que la secreci n de la renina est controlada estrictamente La concentraci n hem tica de prorrenina es aproximadamente diez veces mayor que la de la renina La renina es considerada una enzima de doble dominio porque los fragmentos N y C terminales son muy similares Cada dominio contiene un residuo solo de cido asp rtico fundamental para la actividad catal tica La renina cataliza la formaci n de angiotensina un decap ptido por ataque proteol tico del sustrato de la renina llamado angiotensin geno una glicoproteina sintetizada en el h gado La enzima de conversi n de la angiotensina angiotensin converting enzyme ACE a su vez convierte la angiotensina en angiotensina ll un octap ptido que estimula la secreci n de aldosterona e inhibe la secreci n de renina con un mecanismo de feedback retroacci n negativo El sistema renina angiotensina aldosterona SRAA juega un papel de importancia fundamental en la homeostasis h drica y salina y en la regulaci n de la presi n arterial Por lo tanto la medici n de la renina y de la aldosterona plasm ticas es considerada un indicador de la actividad del sistema renina angiotensina aldosterona
30. rador B El conjugado y las part culas magn ticas se suministran listos para su uso Los calibradores se suministran liofilizados 5x2 0 mL Renin es fm LIAISON Direct Renin REF 310470 45 54 ES 200 007 906 02 2012 12 Materiales requeridos pero no suministrados relacionados con el sistema LIAISON XL Analyzer LIAISON Analyzer LIAISON XL Cuvettes REF X0016 LIAISON Module REF 319130 LIAISON XL Disposable Tips REF X0015 LIAISON 2 XL Starter Kit REF 319200 LIAISON Starter Kit REF 319102 o LIAISON XL Starter Kit REF 319200 Es LIAISON Light Check REF 319101 LIAISON Wash System Liquid REF 319100 LIAISON Wash System Liquid REF 319100 LIAISON XL Waste Bags REF X0025 LIAISON Waste Bags REF 450003 LIAISON Cleaning Kit REF 310990 Otros materiales requeridos Controles LIAISON Direct Renin niveles 1 y 2 REF 310471 LIAISON Endocrinology Diluent REF 319133 5 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES S lo para uso diagn stico in vitro 6 NORMAS DE SEGURIDAD No coma beba fume o se maquille durante la ejecuci n del ensayo No pipetee las soluciones con la boca Evite el contacto directo con el material potencialmente infeccioso usando batas de laboratorio gafas de protecci n y guantes desechables L vese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo Evite salpicaduras o formaci n de aerosoles En caso de que esto sucediera cada gota de reactivo se debe e
31. riabilidad mostrada en las tablas no ha dado lugar a una clasificaci n err nea de las muestras Repetibilidad Para evaluar la repetibilidad se analizaron veinte r plicas en la misma serie Repetibilidad 1 2 3 4 5 6 7 Control 1 Control 2 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 20 20 20 20 Valor medio uUl mL 3 471 11 68 22 35 47 37 93 52 169 1 267 9 29 98 111 0 Desviaci n est ndar u4Ul mL 0 169 0 30 0 82 1 99 2 36 5 41 11 44 0 64 2 64 Coeficiente de variaci n 4 87 2 58 3 67 4 21 2 52 3 20 4 27 2 12 2 38 Valor m nimo uUl mL 3 156 10 99 20 72 40 65 87 94 160 8 250 4 28 96 105 0 Valor m ximo uUl mL 3 790 12 11 24 09 49 54 98 68 180 0 287 3 31 32 115 5 Reproducibilidad Para evaluar la reproducibilidad se han analizado veinte r plicas en d as diferentes una o dos sesiones anal ticas al d a Reproducibilidad 1 2 3 4 5 6 7 Control 1 Control 2 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 20 20 20 20 Valor medio 1Ul mL 5 779 15 83 21 70 42 09 78 43 158 0 255 9 28 38 107 5 Desviaci n est ndar u4Ul mL 0 753 1 29 1 84 3 66 5 49 11 80 20 02 1 83 7 87 Coeficiente de variaci n 13 03 8 12 8 49 8 69 7 01 7 47 7 82 6 81 7 32 Valor m nimo uUl mL 4 548 13 34 18 39 35 04 65 44 132 3 204 9 24 72 92 07 Valor m ximo uUl mL 7 121 17 73 24 98 49 98 85 80 172 5 281 2 31 47 120 1 15 4 Linealidad con el test de diluci n Se han analizado diluci
32. se muestras coaguladas Evite ciclos repetidos de congelaci n y descongelaci n Se recomienda analizar las muestras de plasma inmediatamente despu s de haberlas colocado en el instrumento El volumen m nimo de muestra necesario para una determinaci n es 355 uL 205 uL de muestra 150 uL de volumen muerto 10 CALIBRACI N La prueba de los calibradores espec ficos del ensayo permite utilizar los valores RLU unidades relativas de luz detectados para ajustar la curva maestra asignada Con cada soluci n de los calibradores se pueden realizar tres calibraciones Los calibradores solo deben utilizarse con el lote de integral de reactivos correspondiente No utilice calibradores asociados con un lote de integral de reactivos diferente en el mismo ensayo Para garantizar la elecci n del lote correcto el n mero de lote del calibrador tambi n aparece impreso en la etiqueta del integral de reactivos La calibraci n debe realizarse por triplicado cada vez que se verifique al menos una de las siguientes condiciones Se usa un nuevo lote de reactivos starter Han pasado m s de dos semanas desde la ltima calibraci n Se usa un nuevo lote de integral de reactivos El analizador ha recibido asistencia t cnica Los valores de control est n fuera de los rangos esperados LIAISON Analyzer Los valores de los calibradores est n almacenados en los c digos de barras del integral de reactivos LIAISON XL Ana
33. tos de 18 65 a os de edad con presi n arterial normal y niveles normales de glucosa en ayunas Los siguientes criterios han impedido incluir en el estudio menores de 18 a os uso de f rmacos prescritos por el m dico dieta prescrita por el m dico embarazo lactancia materna y uso de anticonceptivos orales Las muestras de sangre se han extra do entre las 7 00 y las 10 00 de la ma ana en sujetos mantenidos tanto en posici n erecta como en posici n supina Las muestras en posici n erecta se recogieron cuando los sujetos se sentaron despu s de estar parados durante 30 minutos las muestras en posici n supina se recogieron en los sujetos despu s de haber permanecido acostados por al menos 30 minutos Se obtuvieron los siguientes intervalos 5 95 percentil 4 4 46 1 uUl mL posici n erecta y 2 8 39 9 uUl mL posici n supina 14 LIMITACIONES DEL ENSAYO Los reactivos del kit deben usarse s lo en el sistema LIAISON Los calibradores son espec ficos para cada lote y no deben utilizarse con un integral de reactivos perteneciente a otro lote Los componentes individuales del integral de reactivos no deben ser separados del integral El kit no debe usarse despu s de la fecha de caducidad que figura en la etiqueta externa Para obtener resultados fiables es necesario atenerse estrictamente a las instrucciones de utilizaci n y poseer una adecuada t cnica manual La contaminaci n bacteriana de las mues
34. tras o la inactivaci n mediante calentamiento pueden modificar los resultados del an lisis Un resultado aparentemente normal no excluye la posibilidad de la presencia de una patolog a y debe evaluarse junto con el cuadro cl nico del paciente y con otros procedimientos diagn sticos Los resultados del test se muestran de manera cuantitativa Sin embargo el diagn stico de una patolog a no se debe formular en base al resultado de un solo ensayo sino que ste se debe validar con otras pruebas cl nicas y con la opini n del m dico Cada decisi n terap utica debe ser tomada caso por caso El kit LIAISONY Direct Renin se ha puesto a punto para la determinaci n del analito de forma intacta e inalterada La degradaci n de la mol cula o la crioactivaci n de la prorrenina pueden influir en los resultados finales Aunque est n presentes agentes capaces de neutralizar los anticuerpos anti rat n HAMA human anti mouse antibodies concentraciones de HAMA extremadamente elevadas algunas veces pueden influir en los resultados del ensayo No se han estudiado los niveles de renina en edad pedi trica No se han estudiado las interferencias debidas a la administraci n de f rmacos Las muestras que contienen niveles de renina por encima del intervalo de ensayo pueden prediluirse con LIAISON Endocrinology Diluent REF 319133 Los integrales no deben utilizarse con los dos tipos de analizadores LIAISON y LIAISONY
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