(Dako Autostainer/Autostainer Plus) N.º de
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1. Uso previsto Sinonimos del antigeno Resumen y explicacion Reactivo suministrado Inmun geno Especificidad 119834 001 C DuoFLEX Cocktail Anti AMACR Anti Cytokeratin HMW Anti Cytokeratin 5 6 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus N de cat logo IK004 Para uso en diagn stico in vitro La combinaci n de anticuerpos DuoFLEX Cocktail Monoclonal Rabbit Anti Human AMACR clon 13H4 Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin High Molecular Weight clon 348E12 y Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin 5 6 clon D5 16 B4 Dako Autostainer Autostainer Plus est n indicadas para su uso en inmunohistoqu mica junto con los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus Esta combinaci n de anticuerpos se utiliza como prueba diagn stica complementaria para la confirmaci n del carcinoma prost tico de las neoplasias prost ticas intraepiteliales as como de sus lesiones benignas similares en tejidos de pr stata fijados con formol e incluidos en parafina 1 5 tras realizar el diagn stico primario mediante un examen morfol gico de portaobjetos te idos con hematoxilina y eosina H8E La interpretaci n cl nica de cualquier tinci n positiva o la ausencia de la misma debe ser complementada por estudios morfol gicos con los controles adecuados y debe ser evaluada por un pat logo cualificado dentro del contexto de la historia cl nica del paciente y otras pruebas diagn sticas AMACR Alfa metilaci2. SG Xu J Fanger GR P504S a new molecular marker for the detection of prostate carcinoma Am J Surg Pathol 2001 25 11 1397 Jiang Z Wu C Woda BA Dresser K Xu J Fanger GR Yang XJ P504S a methylacyl CoA racemase a useful marker for diagnosis of small foci of prostatic carcinoma on needle biopsy Am J Surg Path 2002 26 9 1169 Yang XJ Wu C Woda BA Dresser K Tretiakova M Fanger GR Jiang Z Expression of a methylacyl CoA racemase P504S in atypical adenomatous hyperplasia of the prostate Am J Surg Path 2002 26 7 921 Jiang Z Fanger GR Banner BF Woda BA Algate P Dresser K Xu J Reed SG Rock KL Chu PG A dietary enzyme alpha methylacyl CoA racemase P504S is overexpressed in colon carcinoma Cancer Detect Prev 2003 27 6 422 Beach R Gown AM de Peralta Venturina MN Folpe AL Yaziji H Salles PG Grignon DJ Fanger GR Amin MG P504S immunohistochemical detection in 405 prostatic specimens including 376 18 gauge needle biopsies Am J Surg Pathol 2002 26 12 1588 Moll R Franke WW Schiller DL The catalog of human cytokeratins Patterns of expression in normal epithelia tumors and cultured cells Cell 1982 31 11 Miettinen M Keratin immunohistochemistry update of applications and pitfalls Pathol Ann 1993 28 113 Moll R Franke WW Schiller DL The catalog of human cytokeratins Patterns of expression in normal epithelia tumors and cultured cells Cell 1982 31 11 24 Moll R L we A Laufer J Franke
3. mago 1 5y 4 15 Adenocarcinoma de mama 61 y 9 61 Colangiocarcinoma del tracto biliar 1 4 2 14 Adenocarcinoma pulmonar 23 3 23 Carcinoma neuroendocrino gastrointestinal 1 9 pulmonar y de higado 9 Sarcoma epitelioide de tejido blando 12 1 12 Adenocarcinoma de ovario 27 2 27 Adenocarcinoma de pancreas 1 3 1 13 Tumor cortical suprarrenal 20 1 20 Tumores de glandula salival 28 1 28 Carcinomas de colon 176 122 176 Bien diferenciado 58 45 58 Moderadamente diferenciado 88 66 88 Mal diferenciado 30 11 30 Tumores de c lulas germinativas 1 4 0 14 Tumores carcinoides de pulm n y 0 10 gastrointestinales 10 Carcinoma de c lulas peque as 0 15 pulmonar y cut neo 15 Mesotelioma pleural 1 6 0 16 Carcinoma no diferenciado 27 0 27 Melanoma 20 0 20 Carcinoma de c lulas escamosas 0 25 cut neo y de mucosa 25 Carcinoma de c lulas basales de piel 20 0 20 Sarcoma sinovial 6 0 6 Tumores tiroideos 54 0 54 Timoma 8 0 8 Carcinoma endometrioide 10 0 10 Se ha descrito la positividad del anti CK HMW 348E12 en carcinomas de c lulas escamosas ductales o transicionales como carcinoma de c lulas escamosas de la piel pulm n y nasofaringe carcinoma ductal de mama p ncreas conducto biliar y gl ndulas salivales as como los carcinomas de c lulas transicionales de la vejiga y nasofaringe y los timomas 21 22 El anti CK HMW 34fE12 ti mesoteliomas epiteliales pero
4. no reaccion con los mesoteliomas sarcomatoides o desmopl sicos 23 Los tumores epiteliales negativos al anti CK HMW 34fE12 son adenomas del tipo acinar p ej hip fisis o adenocarcinomas del epitelio simple p ej carcinomas endometriales renales y hepatocelulares o tumores neuroendocrinos 18 22 24 As puede utilizarse el anti CK HMW 34fE12 para ayudar en la subclasificaci n de los carcinomas 22 Tambi n se ha sugerido que el anti CK HMW 348E12 es til en el diagn stico diferencial de peque as lesiones acinares de la gl ndula prost tica 11 Su valor diagn stico puede residir en la identificaci n de las c lulas basales O Malley et al 25 observaron tinci n positiva de las c lulas basales en 47 ejemplos de lesiones prost ticas benignas incluyendo hiperplasia adenomatosa at pica 26 hiperplasia de c lulas basales 21 atrofia 20 hiperplasia posescler tica 19 y n dulo fibroepitelial 14 mientras que 21 casos de adenocarcinomas de acinos peque os no mostraron ninguna reactividad Se recalc que la p rdida de la capa de c lulas basales no es uniforme en todos los adenocarcinomas prost ticos Las c lulas basales s lo se pierden en adenocarcinomas de acinos peque os Se recomend considerar como muy sugerente la ausencia completa de tinci n de lesiones de pr stata con anti CK HMW 34fE12 aunque no como diagn stico de malignidad El anticuerpo citoqueratina 5 6 marc 56 61 92 de los mesote
5. BE12 Isotipo lgG1 kappa Citoqueratina Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin 5 6 clon D5 16 B4 Isotipo lgG1 kappa AMACR recombinante de longitud total P504S 6 CK HMW queratina inmun gena solubilizada extra da de la capa c rnea humana Citoqueratina 5 6 Citoqueratina aislada 5 La especificidad del anticuerpo anti AMACR monoclonal de conejo fue evaluada por an lisis inmunocitoqu mico y de transferencia Western Los anticuerpos anti ACMAR se unieron positivamente a las c lulas HEK293 fijadas en formol que sobreexpresaron AMACR pero no reaccionaron con c lulas transfectadas con un pl smido vac o En transferencias Western de lisados de muestras de carcinoma de pr stata primario el anti AMACR monoclonal de conejo identific una prote na de 54 kDa que es compatible con el peso molecular esperado de la AMACR 9 307773ES_001 p 1 5 Precauciones Almacenamiento Preparacion de las muestras incluido el material necesario pero no suministrado Procedimiento de tincion incluido el material necesario pero no suministrado 119834 001 Se ha demostrado que el anti CK HMW 348E12 reacciona con las prote nas 66 57 51 y 49 kDa 1 correspondientes a las citoqueratinas 1 5 10 y 14 del cat logo Moll 14 15 18 Shah et al 19 sugirieron la utilidad cl nica del anti CK HMW 348E12 como ayuda en la diferenciaci n de las enfermedades de Paget y de Bowen carcinoma in situ del melanoma de extensi n superfic
6. WW Cytokeratin 20 in human carcinomas A new histodiagnostic marker detected by monoclonal antibodies Am J Pathol 1992 140 427 47 Gown AM Vogel AM Monoclonal antibodies to human intermediate filament proteins Il Distribution of filaments in normal human tissues Amer J Pathol 1984 114 309 Shah KD Tabibzadeh SS Gerger MA Immunohistochemical distinction of Paget s Disease from Bowen s Disease and superficial soreading melanoma with the use of monoclonal cytokeratin antibodies Amer J Clin Pathol 1987 88 689 Varma M Amin MB Linden MD Zarbo RJ Discriminant staining pattern of small glandular and preneoplastic lesions of the prostate using high molecular weight cytokeratin antibody A study of 301 consecutive needle biopsies Mod Pathol 1997 10 93A Bacchi CA Zarbo RJ Jiang JJ Gown AM Do glioma cells express cytokeratin Appl Immunohistochem 1995 3 45 Dairkee SH Puett L Hackett AJ Expression of basal and luminal epithelium specific keratins in normal benign and malignant breast tissue J Nat Can Inst 1988 80 691 Bolen JW Hammar SP McNutt MA Reactive and neoplastic serosal tissue a light microscopic ultrastructural and immunocytochemical study Amer J Surg Pathol 1986 10 34 Hurlimann J Gardiol D Immunohistochemistry in the differential diagnosis of liver carcinomas Amer J Surg Pathol 1991 15 280 O Malley FP Grignon DJ Shum DT Usefulness of immunoperoxidase staining with high molecular weight cyt
7. a los hepatocitos las c lulas acinares pancre ticas los t bulos renales proximales y los tejidos normales no epiteliales 18 El anti CK HMW 34BE12 tind la gl ndula mamaria de la mama el epitelio escamoso del cuello uterino la gl ndula prost tica el conducto excretor de la gl ndula salival lingual el epitelio escamoso de la piel las c lulas reticulares y los cuerpos de Hassall del timo as como el epitelio escamoso de las am gdalas No se demostr ninguna tinci n en la suprarrenal m dula sea cerebelo o cerebro colon coraz n ri n h gado pulm n c lulas mesoteliales ovario p ncreas paratiroides pericardio nervio perif rico hip fisis m sculo esquel tico intestino delgado bazo est mago test culos tiroides o tero El anticuerpo citoqueratina 5 6 marca los epitelios escamosos estratificados En epitelios complejos las c lulas basales en la mayor a de los casos expresan CK 5 Generalmente el anticuerpo no marca los epitelios simples y las c lulas no epiteliales Tejidos anormales Anti AMACR es inmunorreactivo con la mayor a de los carcinomas de pr stata analizados 8 13 Tipo de tejido n analizado Tumores con tinci n positiva Adenocarcinoma prost tico 1 8 17 18 Carcinoma hepatocelular 21 17 21 Carcinoma renal 24 18 24 Carcinoma de c lulas de transici n de la vejiga 29 9 29 307773ES_001 p 3 5 Referencias bibliograficas 119834 001 Adenocarcinoma de est
8. clonal Mouse Anti Human Cytokeratin 5 6 clon D5 16 B4 es una citoqueratina de tipo b sico y de alto peso molecular con una masa molecular de 58 kDa que se expresa en las capas estratificadas de epitelio basal intermedio y superficial de las c lulas as como en los epitelios transicionales los epitelios complejos las c lulas mesoteliales y en el mesotelioma Salvo escasas excepciones no se ha encontrado CK 5 en los epitelios simples ni en c lulas no epiteliales CK 6 tambi n es un tipo b sico de citoqueratina de peso molecular alto con una masa molecular de 56 kDa expresada por el epitelio escamoso proliferante a menudo junto con CK 16 48 kDa 16 17 Consulte las Instrucciones generales para la tinci n inmunohistoqu mica de Dako o las instrucciones del sistema de detecci n de los procedimientos de IHQ para 1 Principio del procedimiento 2 Material necesario pero no suministrado 3 Almacenamiento 4 Preparaci n de la muestra 5 Procedimiento de tinci n 6 Control de calidad 7 Soluci n de problemas 8 Interpretaci n de la tinci n 9 Limitaciones generales La combinaci n de anticuerpos monoclonal de conejo y monoclonal de rat n lista para usar se suministra en forma l quida en una soluci n tamp n que contiene prote na estabilizante y 0 015 mol L de NaNs La AMACR Monoclonal Rabbit Anti Human AMACR clon 13H4 Isotipo lgG1 kappa Citoqueratina Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin de alto peso molecular clon 34
9. do Elementos tisulares con tinci n positiva n analizado 8 9 12 Ri n 12 12 12 c lulas epiteliales tubulares H gado 15 15 15 hepatocitos Pulm n 12 12 12 c lulas epiteliales bronquiales Ves cula biliar 10 10 10 c lulas epiteliales Colon 20 20 20 epitelio de superficie de colon focal y luminal Colon hiperpl sico 28 1 28 Pr stata benigno 194 23 194 Suprarrenal 12 0 12 Vejiga 7 0 7 Cerebro 5 0 5 Mama 12 0 12 Endometrio 12 0 12 Coraz n 5 0 5 Ganglio linf tico 7 0 7 P ncreas 15 0 15 Pr stata 19 0 19 Ovario 12 0 12 Intestino delgado 18 0 18 Gl ndula salival 7 0 7 Piel 7 0 7 Bazo 12 0 12 Est mago 13 0 13 Tiroides 5 0 5 Test culos 5 0 5 El anticuerpo Anti CK de alto peso molecular HMW 348E12 es reactivo con los tejidos epiteliales normales entre los que se encuentran epitelio escamoso y conductos sudor paros de la piel 18 todas las capas epiteliales incluyendo el epitelio luminal y basal y las c lulas ductales de mama 20 algunos neumocitos mesotelio y epitelio bronquial en el pulm n epitelio del conducto colector del ri n y c lulas ductales de p ncreas conductos biliares hep ticos y mesotelio as como una porci n del epitelio c lulas con una localizaci n m s basal del tracto gastrointestinal 18 El anti CK HMW 34f E12 no marc
10. ial pagetoide Se inform de la positividad del anti CK HMW 34fE12 en la enfermedad de Paget de mama 5 5 y la enfermedad de Bowen 10 10 aunque se ti i el 25 1 4 correspondiente a la enfermedad de Paget de la vulva y 0 6 de los melanomas de extensi n superficial pagetoides 19 En el caso del anticuerpo anti citoqueratina 5 6 clon D5 16 B4 en transferencia Western de preparaciones citoesquel ticas de epidermis y epitelio no queratinizante el anticuerpo marca la citoqueratina 5 Tambi n marca la citoqueratina 6 y marca d bilmente a la citoqueratina 4 No se observ reacci n cruzada con las citoqueratinas 1 7 8 10 13 14 18 y 19 1 Para usuarios profesionales 2 Este producto contiene azida s dica NaN3 un compuesto qu mico altamente t xico en su forma pura Aunque no est clasificada como peligrosa a la concentraci n en la que se encuentra en el producto la azida s dica puede reaccionar con el cobre o el plomo de las ca er as para formar compuestos de azidas met licas altamente explosivas Una vez desechado deje correr abundante cantidad de agua para evitar acumulaciones de azidas met licas en las ca er as 3 Al igual que con cualquier producto derivado de fuentes biol gicas deber n aplicarse procedimientos adecuados de manejo 4 Utilice el equipo de protecci n personal adecuado para evitar el contacto con los ojos y la piel 5 La soluci n que no se utilice deber desecharse de acuerdo con las nor
11. iga siendo v lido confirmando que el patr n de tinci n sea id ntico al descrito en Caracter sticas de resultados 307773ES_001 p 2 5 Interpretacion de la tincion Caracteristicas de resultados 119834 001 Se recomienda la contratinci n en hematoxilina usando EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo K8018 Despu s de finalizado el procedimiento de tinci n se deben secar al aire sumergir en xileno y montar los cortes usando un medio de montaje permanente Debe evitarse el uso de alcohol con los medios de montaje permanente dado que puede reducir la reactividad de la soluci n de crom geno rojo Los controles positivo y negativo deber n realizarse de manera simult nea empleando el mismo protocolo que para las muestras del paciente El tejido de control positivo debe incluir pr stata normal o hiperplasia y las c lulas y estructuras deben mostrar patrones de reacci n como se describe para este tejido en Caracter sticas de rendimiento en todas las muestras positivas Las c lulas de carcinoma marcadas por Anti AMACR muestran una tinci n citoplasm tica granular de color rojo Las c lulas marcadas por el anticuerpo anti citoqueratina de alto peso molecular muestran tinci n citoplasm tica de color marr n Las c lulas marcadas por el anticuerpo anti citoqueratina 5 6 muestran tinci n citoplasm tica de color marr n Tejidos normales Anti AMACR Tipo de teji
12. l coenzima A racemasa a metilacil CoA P504S Citoqueratina HMW Queratina 903 AMACR El anticuerpo monoclonal de conejo anti AMACR clon 13H4 reconoce una prote na de 382 amino cidos identificada por sustracci n de bibliotecas de ADNc junto con an lisis de alto rendimiento por micromatrices de la presencia de adenocarcinoma de pr stata 6 Alfa metilacil CoA racemasa AMACR es una enzima implicada en la bios ntesis del cido biliar y la B oxidaci n de cidos grasos ramificados 7 AMACR se expresa en c lulas de neoplasias intraepiteliales prost ticas premalignas de alto grado HGPIN y adenocarcinomas de pr stata pero est presente a niveles bajos o indetectables en c lulas epiteliales glandulares de la pr stata normal y la hiperplasia prost tica benigna 6 8 13 CK HMW las citoqueratinas son prote nas citoesquel ticas de filamento intermedio esenciales para el desarrollo y la diferenciaci n de las c lulas epiteliales Se han identificado clasificado y numerado aproximadamente veinte citoqueratinas diferentes de acuerdo con el peso molecular y los puntos isoel ctricos 14 En general la mayor a de las citoqueratinas con bajo peso molecular 40 54 kDa se distribuye en el epitelio no escamoso n meros del cat logo de Moll 7 8 y 17 20 15 Las citoqueratinas con alto peso molecular 48 67 kDa se encuentran en el epitelio escamoso n meros del cat logo de Moll 1 6 y 9 16 15 Citoqueratina 5 6 La citoqueratina mono
13. liomas pleurales epitelioides mientras que se marcaron 9 63 14 de los adenocarcinomas metast sicos Tambi n se marc el mesotelio reactivo 27 En otro estudio 28 el anticuerpo marc fuertemente los 23 mesoteliomas con diferenciaci n acinar o epitelioide mientras que en las reas sarcomatoides de tumores con una morfolog a mixta el marcado fue d bil o nulo Un caso de mesotelioma sarcomatoide dio una reacci n equ voca mientras que los mesoteliomas de tipo desmopl sico o sarcomatoide fueron negativos De 27 adenocarcinomas secundarios de pleura 22 fueron negativos 4 fueron d biles o equ vocos y 1 fue focalmente positivo Con el anticuerpo se han demostrado altos niveles de positividad a la citoqueratina en 5 6 casos de hiperplasia ductal de tipo usual y tinci n negativa en la mayor a de los casos de hiperplasia ductal at pica y carcinoma ductal in situ 29 1 Dud Pei F Zheng J Wang K P504S and 34betaE12 dual staining of immunohistochemistry in the diagnosis of prostate cancer Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi 2005 34 311 312 2 Varma M Morgan M Amin MB Wozniak S Jasani B High molecular weight cytokeratin antibody clone 34betaE12 a sensitive marker for differentiation of high grade invasive urothelial carcinoma from prostate cancer Histopathology 2003 42 167 1 72 3 Martens MB Keller JH Routine immunohistochemical staining for high molecular weight cytokeratin 34 beta and alpha methylacyl CoA racemase P504S i
14. mativas locales provinciales y nacionales Almacenar a 2 8 No utilizar despu s de la fecha de caducidad impresa en el vial Si los reactivos se almacenan bajo condiciones diferentes a las especificadas dichas condiciones deben ser verificadas por el usuario No existen signos evidentes que indiquen la inestabilidad de este producto Por lo tanto los controles positivo y negativo deber n realizarse de manera simult nea con las muestras del paciente Si observa una tinci n inesperada que no puede explicarse por variaciones en los procedimientos del laboratorio y sospecha de la existencia de un problema con el anticuerpo p ngase en contacto el servicio t cnico de Dako La combinaci n de anticuerpos puede utilizarse para marcar cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina Las muestras de tejido deben cortarse en secciones de aproximadamente 4 um Se requiere un tratamiento previo con recuperaci n del ep topo inducida por calor HIER por sus siglas en ingl s Se obtienen resultados ptimos al pretratar los tejidos con EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x n de cat logo K8004 Cortes desparafinados se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido desparafinados fijados en formol e incluidos en parafina usando Dako PT Link n de cat logo PT100 PT101 Para m s detalles consulte la Gu a del usuario de PT Link Siga el procedimiento de tratamiento previo explicado en el prospec
15. n postirradiation prostate biopsies Mod Pathol 2006 19 287 290 4 Abrahams NA Ormsby AH Brainard J Validation of cytokeratin 5 6 as an effective substitute for keratin 903 in the differentiation of benign from malignant glands in prostate needle biopsies Histopathology 2002 41 35 41 5 Abrahams NA Bostwick DG Ormsby AH Qian J Brainard JA Distinguishing atrophy and high grade prostatic intraepithelial neoplasia from prostatic adenocarcinoma with and without previous adjuvant hormone therapy with the aid of cytokeratin 5 6 Am J Clin Pathol 2003 120 368 376 307773ES_001 p 4 5 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 Xu J Stolk JA Zhang X Silva SJ Houghton RL Matsumura M Vedvick TS Leslie KB Badaro R Reed SG Identification of differentially expressed genes in human prostate cancer using subtraction and microarray Canc Res 2000 60 1677 Ferdinandusse S Denis S ljst L Dacremont G Waterham HR Wanders JA Subcellular localization and physiological role of a methylacyl CoA racemase Journal of Lipid Research 2000 41 1890 Jiang Z Fanger GR Woda BA Banner BF Algate P Dresser K Xu J Chu PG Expression of a methylacyl CoA racemase P504S in various malignant neoplasms and normal tissues A study of 761 cases Human Pathology 2003 34 8 792 Jiang Z Woda BA Rock KL Xu Y Savas L Khan A Pihan G Cai F Babcook JS Rathanaswami P Reed
16. okeratin in the differential diagnosis of small acinar lesions of the prostate gland Virch Arch Pathol Anat 1990 417 191 Brown DC Theaker JM Banks PM Gatter KC Mason DY Cytokeratin expression in smooth muscle and smooth muscle tumors Histopathol 1987 11 477 Numero de catalogo A Limite de temperatura BA Consulte las instrucciones de uso atal EC REP Fabricante Dako North America Inc Dako Denmark A S es 6392 Via Real Produktionsvej 42 C digo de lot Fecha de caducidad ie e di Carpinteria California 93013 USA DK 2600 Glostrup Denmark Tel 805 566 6655 Tel 45 4485 9500 Fax 805 566 6688 Fax 45 4485 9595 EC REP Representante autorizado en la Comunidad Europea Producto sanitario para diagn stico in vitro Technical Support 800 424 0021 PTOO39 Rev C Edici n 03 09 119834 001 Customer Service 800 235 5763 www dako com 307773ES_001 p 5 5
17. previo ni durante el siguiente procedimiento de tinci n inmunohistoqu mica Para una mejor adherencia de los cortes de tejidos a los portaobjetos se recomienda el uso de Dako FLEX IHC Microscope Slides n de cat logo K8020 El sistema de visualizaci n recomendado es EnVision DuoFLEX Doublestain System Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo K6807 Los pasos de tinci n y los tiempos de incubaci n han sido preprogramados en el software de los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus usando los siguientes protocolos Plantilla del protocolo DuoFLEX2 volumen de aplicaci n 200 uL o DuoFLEX3 volumen de aplicaci n 300 uL Autoprograma PINct sin contratinci n o PINcth con contratinci n Todos los pasos de incubaci n deben realizarse a temperatura ambiente Consulte el Manual del usuario para m s detalles sobre el instrumento correspondiente Si todav a no est n disponibles los protocolos en el instrumento Dako Autostainer utilizado comun quese con el servicio t cnico de Dako Las condiciones ptimas pueden variar seg n la muestra y el m todo de preparaci n Por lo tanto deber n determinarse individualmente en cada laboratorio Si el pat logo encargado de la evaluaci n desea otra intensidad de tinci n se puede solicitar informaci n a un especialista en aplicaciones de Dako o a un especialista del servicio t cnico para reprogramar el protocolo Verifique que el rendimiento del protocolo ajustado s
18. to de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x n de cat logo K8004 Se deben aplicar los siguientes par metros para PT Link temperatura de precalentamiento 65 temperatura y tiempo de recuperaci n del ep topo 97 durante 20 1 minutos enfriar a 65 Extraiga la gradi lla para portaobjetos Autostainer con los portaobjetos del tanque PT Link e introduzca los portaobjetos inmediatamente en un bote o tanque p ej PT Link Rinse Station c digo PT109 con EnVision FLEX Wash Buffer 20x n de cat logo K8007 diluido y a temperatura ambiente Deje los portaobjetos en Wash Buffer durante 1 5 minutos Cortes incluidos en parafina el m todo preferido para la colocaci n de cubreobjetos consiste en la utilizaci n del medio de montaje acuoso Dako Faramount n de cat logo S3025 Como m todo alternativo de preparaci n de una muestra tanto el desparafinado como la recuperaci n del ep topo se pueden realizar en el PT Link con un procedimiento modificado Consulte las instrucciones en la Gu a del usuario de PT Link Despu s de finalizar el procedimiento de tinci n se deben secar al aire a 60 sumergir en xileno y montar los cortes usando un medio de montaje permanente Debe evitarse el uso de alcohol con los medios de montaje permanente dado que puede reducir la reactividad de la soluci n de crom geno rojo Antes de realizar el montaje los cortes de tejido no se deben secar durante el tratamiento
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