LIAISON® Measles IgM (REF 318820)
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1. DiaSorin S p A DIENS Via Crescentino snc 13040 Saluggia VC Italy C www diasorin com Modificaciones Supresiones LIAISON Measles IgM REF 318820 1 FINALIDAD DEL ENSAYO El ensayo LIAISON Measles IgM emplea la tecnolog a de la quimioluminiscencia CLIA para la determinaci n cualitativa de anticuerpos IgM espec ficos contra el virus del sarampi n en muestras de suero o plasma humano Est dise ado para facilitar la determinaci n del estado serol gico frente al virus del sarampi n El ensayo debe realizarse en la serie de analizadores LIAISON 2 RESUMEN Y EXPLICACI N DEL TEST El sarampi n es una enfermedad viral severa y muy contagiosa causada por un paramixovirus del g nero morbillivirus Se transmite principalmente por v a respiratoria o por contacto directo con las secreciones nasales u orales de una persona infectada 1 Cuando se produce la infecci n el virus invade el epitelio respiratorio de la nasofaringe y se propaga a los ganglios linf ticos regionales produciendo una viremia primaria que extiende la infecci n al sistema reticuloendotelial tras dos o tres d as de replicaci n del virus Despu s de una ulterior proliferaci n del virus y transcurridos de cinco a siete d as desde que se contrae la infecci n se produce una viremia secundaria que dura un m nimo de cuatro a siete d as Durante esta fase el virus puede seguir multiplic ndose y afectar a la piel la membrana conjuntiva2. Agite horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza y sumo cuidado para facilitar la suspensi n de las part culas magn ticas evite la formaci n de espuma Controle visualmente el fondo del frasco de part culas magn ticas para cerciorarse de que no hayan quedado part culas magn ticas sedimentadas Seque con sumo cuidado la superficie de cada pared para eliminar el l quido residual Si es necesario repita el procedimiento hasta que las part culas magn ticas est n completamente resuspendidas Formaci n de espuma en los reactivos Para garantizar las mejores prestaciones del integral se recomienda evitar la formaci n de espuma en los reactivos Res pete las recomendaciones siguientes Antes de usar el integral controle visualmente los reactivos y en especial los calibradores segunda y tercera posici n des pu s del frasco de part culas magn ticas para asegurarse de que no se ha formado espuma Si se observa la presencia de espuma tras la resuspensi n de las part culas magn ticas coloque el integral en el instrumento y deje que se disuelva la espuma El integral est listo para el uso una vez que se ha disuelto la espuma que ha permanecido en el instrumento y que se ha agitado Instalaci n del integral en el rea de reactivos LIAISON analyzers Coloque el integral en el rea de reactivos del analizador con la etiqueta de c digo de barras orientada a la izquierda y espere 30 minutos antes de utilizarlo L
3. de agentes infecciosos Por consiguiente su eliminaci n debe efectuarse de conformidad con las disposiciones y normas ge nerales establecidas por las autoridades con jurisdicci n sobre el laboratorio as como con las leyes vigentes en cada pa s Los reactivos que contienen ProClin 300 est n catalogados como sustancias irritantes en las Directivas Europeas pertinentes R 43 Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel S 24 Ev tese el contacto con la piel S 37 Usense guantes adecuados S 60 Elim nense el producto y su recipiente como residuos peligrosos 5 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD Cuando se reciben los controles se deben mantener a 2 8 C en posici n vertical para evitar el contacto de la soluci n con la tapa del frasco No los congele Si se guardan sin abrir a temperatura de 2 8 C y en posici n vertical los controles per manecen estables hasta la fecha de caducidad Despu s de abrirlos los controles permanecen estables durante ocho semanas si se conservan refrigerados a 2 8 C entre dos usos sucesivos Evite la contaminaci n bacteriana de los controles Los controles no deben utilizarse despu s de la fecha de caducidad indicada en las etiquetas de los frascos 6 PREPARACI N DE LOS REACTIVOS Coloque los frascos de los controles en las gradillas C del LIAISON analyzer Con una soluci n de control dos frascos se pueden realizar al menos 25 pruebas El volumen m nimo de control necesario e
4. las v as respiratorias y otros rganos in cluidos el bazo el timo el pulm n el h gado y el ri n La viremia alcanza su pico m ximo entre 11 y 14 d as despu s de contraer la infecci n y luego remite r pidamente en unos cuantos d as 2 Antes de que existiese la vacuna el sarampi n era una enfermedad eminentemente infantil pero los programas de vacu naci n contra esta enfermedad parte de la vacuna MMR contra sarampi n paperas y rubeola han reducido en gran medida su incidencia y las complicaciones asociadas con ella Gracias a los intensos programas de vacunaci n llevados a cabo durante a os en los pa ses desarrollados en la actualidad es una enfermedad que afecta principalmente a personas que nunca se han vacunado y a menores de m s edad que no han desarrollado anticuerpos seroconversi n tras la vacu naci n Sin embargo pueden producirse epidemias de sarampi n en pa ses con gran cobertura vacunal Tales brotes evidencian la existencia que la inmunidad no es total en la poblaci n afectada 1 3 La detecci n de manchas de Koplik y el avance de la erupci n cut nea desde la cabeza hasta el tronco y las extremidades 6 permiten diagnosticar cl nicamente el sarampi n Sin embargo el car cter no espec fico de los s ntomas prodr micos y la existencia de casos leves hacen que los s ntomas cl nicos no se consideren criterios de diagn stico fiables Muchos m dicos carecen de experiencia a la hora de diagnost
5. ximo valor de ndice 1 9 2 6 2 7 LOTE N 03 N mero de determinaciones 20 20 20 Media valor de ndice 1 4 2 3 2 1 Desviaci n est ndar 0 21 0 24 0 29 Coeficiente de variaci n 13 3 10 1 13 5 Valor m nimo valor de ndice 1 2 1 9 1 6 Valor m ximo valor de ndice 1 9 2 7 2 6 15 3 Precisi n con LIAISON XL analyzers Para determinar la repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo es decir las variaciones intra ensayo e inter ensayo se utilizaron muestras con diferentes concentraciones de analito espec fico La variabilidad mostrada en las tablas no ha dado lugar a una clasificaci n err nea de las muestras Repetibilidad Para evaluar la repetibilidad se analizaron veinte r plicas en la misma serie ene Control Repetibilidad 1 2 positivo N mero de determinaciones 20 20 20 Media valor de ndice 1 7 2 6 2 3 Desviaci n est ndar 0 03 0 04 0 07 Coeficiente de variaci n 1 8 1 6 2 9 Valor m nimo valor de ndice 1 7 2 6 2 1 Valor m ximo valor de ndice 1 8 2 7 2 4 Measles M es fm LIAISON Measles IgM REF 318820 42 162 ES 200 007 028 2 2012 06 Reproducibilidad Para evaluar la reproducibilidad se analizaron veinte r plicas en d as diferentes m ximo dos series al d a con tres lotes distintos de integrales Control Reproducibilidad 1 2 positivo LOTE N 01 N mero de determinaciones 2 Media valor de ndice Desviaci n est ndar Coeficient
6. y en un laboratorio independiente sitio 2 con dos instrumentos diferentes Reproducibilidad Sitio 1 A B Control positivo LOTE N 01 N mero de determinaciones 20 20 20 Media valor de ndice 1 7 2 2 2 1 Desviaci n est ndar 0 14 0 16 0 12 Coeficiente de variaci n 8 4 7 3 5 9 Valor m nimo valor de ndice 1 4 2 0 1 8 Valor m ximo valor de ndice 1 9 25 2 3 LOTE N 02 N mero de determinaciones 20 20 20 Media valor de ndice 1 3 1 9 1 8 Desviaci n est ndar 0 16 0 17 0 13 Coeficiente de variaci n 12 2 8 8 7 4 Valor m nimo valor de ndice 1 1 1 6 1 6 Valor m ximo valor de ndice 1 7 2 2 2 0 LOTE N 03 N mero de determinaciones 20 20 20 Media valor de ndice 1 2 2 7 1 9 Desviaci n est ndar 0 16 0 25 0 29 Coeficiente de variaci n 13 3 9 4 13 5 Valor m nimo valor de ndice 1 1 2 3 1 5 Valor m ximo valor de ndice 1 6 3 1 2 2 e de Control Reproducibilidad Sitio 2 A B positivo LOTE N 01 N mero de determinaciones 20 20 20 Media valor de ndice 1 7 2 3 2 2 Desviaci n est ndar 0 23 0 25 0 17 Coeficiente de variaci n 13 2 11 1 7 6 Valor m nimo valor de ndice 1 2 1 7 1 9 Valor m ximo valor de ndice 2 0 2 6 2 6 LOTE N 02 N mero de determinaciones 20 20 20 Media valor de ndice 1 7 2 2 2 2 Desviaci n est ndar 0 15 0 28 0 24 Coeficiente de variaci n 8 7 12 4 11 2 Valor m nimo valor de ndice 1 3 1 5 1 6 Valor m
7. EDTA detergentes conservantes y un colorante azul inactivo Las concentraciones de los calibradores ndice est n referenciadas con una preparaci n interna de anticuerpos Diluyente de muestras 27 mL Case na alb mina s rica bovina tamp n fosfato EDTA detergentes conservantes y un colorante azul inactivo Conjugado 13 5 mL Nucleoprote na recombinante del virus del sarampi n obtenida en baculovirus conjugada con un deri vado del isoluminol suero fetal bovino tamp n de borato conservantes y un colorante amarillo inactivo N mero de ensayos 50 Todos los reactivos se suministran listos para su uso El orden de los reactivos refleja la disposici n de los recipientes en el integral de reactivos Material necesario no suministrado LIAISON XL analyzers LIAISON analyzers LIAISON XL Cuvettes REF X0016 LIAISON Module REF 319130 LIAISON XL Disposable Tips REF X0015 gt LIAISON XL Starter Kit REF 319200 LIAISON Starter Kit REF 319102 o LIAISON XL Starter Kit REF 319200 LIAISON Light Check REF 319101 LIAISON Wash System Liquid REF 319100 LIAISON Wash System Liquid REF 319100 LIAISON XL Waste Bags REF X0025 LIAISON Waste Bags REF 450003 LIAISON Cleaning Kit REF 310990 Otros materiales requeridos Controles LIAISON Measles IgM negativo y positivo REF 318821 5 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Para uso diagn stico in vitro T
8. TENCIAS Y PRECAUCIONES Para uso diagn stico in vitro Los controles no son espec ficos de un lote y pueden intercambiarse sin problema con lotes diferentes de integral de reactivos Todos los materiales utilizados para fabricar los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reac tivos para la presencia de HBsAg anti VHC anti VIH 1 y anti VIH 2 Sin embargo dado que ning n m todo de an lisis puede garantizar totalmente la ausencia de agentes pat genos todo el material de origen humano deber considerarse potencialmente infeccioso y manipularse como tal Adopte las precauciones necesarias para manipular los reactivos de laboratorio Los residuos deben eliminarse de acuerdo con la reglamentaci n local 4 NORMAS DE SEGURIDAD No coma beba fume ni se maquille en el laboratorio donde se realiza el ensayo No utilice la pipeta con la boca Evite el contacto directo con todo material potencialmente infeccioso mediante el uso de indumentaria protectora como ba tas de laboratorio gafas protectoras y guantes desechables L vese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo Evite las salpicaduras y la formaci n de aerosoles El reactivo vertido debe limpiarse con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 y eliminarse como si se tratase de material potencialmente infeccioso Todas las muestras los reactivos biol gicos y los materiales usados en el ensayo deben considerarse posibles transmisores
9. as muestras con concentraciones de IgM contra el virus del sarampi n que tienen un valor de ndice entre 0 9 y 1 1 se de ben considerar dudosas El an lisis de las muestras dudosas debe repetirse para confirmar el resultado inicial Si una muestra es positiva en la segunda prueba se considerar positiva Si una muestra es negativa en la segunda prueba se considerar negativa Si el resultado es repetidamente dudoso habr que obtener y analizar una segunda muestra antes de que transcurran una o dos semanas Las muestras con concentraciones de IgM contra el virus del sarampi n que presentan un valor de ndice igual o mayor que 1 1 se deben considerar positivas Un resultado positivo suele indicar infecci n aguda Un resultado negativo no siempre permite descartar la presencia de sa rampi n agudo puesto que la enfermedad puede encontrarse en una fase muy temprana y el paciente puede no ser capaz de sintetizar los anticuerpos IgM espec ficos frente al virus del sarampi n Cuando se sospeche que se ha producido expo sici n cl nica al virus del sarampi n aunque el resultado sea negativo habr que extraer y analizar una segunda muestra antes de una o dos semanas Un resultado dudoso es indicativo de infecci n reciente o de infecci n pasada con IgM contra el virus del sarampi n persistente Los datos serol gicos provenientes de la detecci n de otros marcadores del virus del sa rampi n pueden aportar informaci n til para la interpretac
10. as part culas magn ticas se agitan autom ticamente y se resuspenden por com pleto en el analizador Consulte el manual del usuario del analizador para introducir las muestras y comenzar el ensayo LIAISON XL analyzers LIAISON XL analyzer incorpora un dispositivo magn tico que favorece la dispersi n de las micropart culas antes de co locar un integral de reactivos en el rea de reactivos del analizador Consulte los detalles en el manual del usuario del analizador a Coloque el integral de reactivos en la ranura espec fica b Deje el integral de reactivos en el dispositivo magn tico durante al menos 30 segundos varios minutos como m ximo Si es necesario repita la operaci n Coloque el integral en el rea de reactivos del analizador con la etiqueta orientada a la izquierda y espere 15 minutos an tes de utilizarlo Las part culas magn ticas se agitan autom ticamente y se resuspenden por completo en el analizador Consulte el manual del usuario del analizador para introducir las muestras y comenzar el ensayo 8 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD DEL INTEGRAL DE REACTIVOS Sellado Estable a 2 8 C hasta la fecha de caducidad Abierto en el instrumento o a 2 8 C Estabilidad m nima de ocho semanas Si los controles permanecen dentro de los rangos previstos se puede seguir usando el integral despu s de este intervalo de tiempo Use siempre el mismo LIAISON analyzer con el integral de reactivos abier
11. cas se evaluaron mediante el an lisis de 532 muestras provenientes de un labo ratorio europeo Las muestras se analizaron con un m todo de comparaci n y se aplic el principio de consenso con los datos cl nicos y serol gicos para establecer los resultados esperados Las cuatro muestras clasificadas como dudosas con el m todo de referencia se excluyeron del an lisis de los resultados Entre la poblaci n presumiblemente negativa estudiada se obtuvo un resultado positivo ning n resultado dudoso y 376 re sultados negativos Especificidad diagn stica 100 376 376 intervalo de confianza al 95 99 0 100 0 Entre la poblaci n presumiblemente positiva estudiada se obtuvieron tres resultados negativos dos resultados dudosos y 147 resultados positivos Sensibilidad diagn stica 96 7 147 152 intervalo de confianza al 95 92 5 98 9 Measles M es fm LIAISON Measles IgM REF 318820 43 162 ES 200 007 028 2 2012 06 Modificaciones 2 Supresiones LIAISON Control Measles IgM REF 318821 1 FINALIDAD DEL ENSAYO Los controles LIAISON Measles IgM negativo y positivo se utilizan en los inmunoensayos quimioluminiscentes CLIA para verificar la fiabilidad de los ensayos No se han establecido las caracter sticas del m todo de los controles LIAISON9 Measles IgM en relaci n con otros ensayos o plataformas de instrumentos LIAISON analyzers En el certificado de an lisis se proporciona informaci n espec fica sobr
12. das del panel Aunque no existen pruebas concluyentes de reactividad cruzada no se puede descartar a causa de la escasa disponibilidad de ciertas muestras Los resultados se refieren a los grupos de muestras analizadas y sus prestaciones no est n garantizadas dado que pueden existir diferencias entre labo ratorios y centros 15 2 Precisi n con LIAISON analyzers Para determinar la repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo es decir las variaciones intra ensayo e inter ensayo se utilizaron muestras con diferentes concentraciones de analito espec fico Los resultados se refieren a los grupos de mues tras analizadas y su precisi n no est garantizada dado que pueden existir diferencias entre laboratorios y centros Repetibilidad Para evaluar la repetibilidad interna se analizaron veinte r plicas en la misma serie Repetibilidad A B Gontrol positivo N mero de determinaciones 20 20 20 Media valor de ndice 1 5 2 2 2 2 Desviaci n est ndar 0 12 0 14 0 10 Coeficiente de variaci n 7 7 6 2 4 3 Valor m nimo valor de ndice 1 3 2 0 2 0 Valor m ximo valor de ndice 1 7 2 6 2 3 Measles M es fm LIAISON Measles IgM REF 318820 41 162 ES 200 007 028 2 2012 06 Reproducibilidad Para evaluar la reproducibilidad se analizaron veinte r plicas en d as diferentes m ximo dos series al d a con tres lotes distintos de integrales Las pruebas se realizaron en dos sitios internamente sitio 1
13. dos tipos de analizadores LIAISONY y LIAISON XL Una vez que se ha usado un integral con un tipo de analizador concreto debe seguir us ndose en ese analizador hasta que se termine Por motivos de trazabilidad relacionados con lo antes expuesto es necesario terminar el seguimiento de los pacientes con el mismo tipo de analizador Los seguimientos deben realizarse un nico tipo de analizador LIAISONY o LIAISON XL 15 CARACTER STICAS ESPEC FICAS DEL M TODO 15 1 Especificidad anal tica La especificidad anal tica se define como la capacidad del ensayo para detectar analitos espec ficos en presencia de fac tores potencialmente interferentes en la matriz de la muestra por ejemplo anticoagulantes hemolisis efectos de tratamientos de la muestra o de anticuerpos que puedan dar reactividad cruzada Interferencia Estudios controlados de sustancias o factores potencialmente interferentes han demostrado que las presta ciones del ensayo no dependen de los anticoagulantes EDTA pot sico heparina citrato s dico la hemolisis hasta 1000 mg dL de hemoglobina la lipemia hasta 3000 mg dL de triglic ridos la bilirrubinemia hasta 20 mg dL de bilirrubina ni la ejecuci n de hasta seis ciclos de congelaci n y descongelaci n a las muestras Reacciones cruzadas La finalidad del estudio de reactividad cruzada relacionado con el ensayo LIAISON Measles IgM es evaluar las posibles interferencias de anticuerpos dirigidos contra otros orga
14. e de IgM contra el virus del sarampi n de 0 5 a 4 El valor de corte que discrimina entre la presencia y la ausencia de anticuerpos IgM contra el virus del sarampi n es 1 0 valor de ndice Los resultados de las muestras deben interpretarse como sigue Las muestras con concentraciones de IgM contra el virus del sarampi n que tienen un valor de ndice por debajo de 0 9 se deben considerar negativas Las muestras con concentraciones de IgM contra el virus del sarampi n que tienen un valor de ndice entre 0 9 y 1 1 se de ben considerar dudosas El an lisis de las muestras dudosas debe repetirse para confirmar el resultado inicial Si una muestra es positiva en la segunda prueba se considerar positiva Si una muestra es negativa en la segunda prueba se considerar negativa Si el resultado es repetidamente dudoso habr que obtener y analizar una segunda muestra antes de que transcurran una o dos semanas Las muestras con concentraciones de IgM contra el virus del sarampi n que presentan un valor de ndice igual o mayor que 1 1 se deben considerar positivas En Liaison XL analyzers El valor de corte que discrimina entre la presencia y la ausencia de anticuerpos IgM contra el virus del sarampi n es 1 0 valor de ndice Los resultados de las muestras deben interpretarse como sigue Las muestras con concentraciones de IgM contra el virus del sarampi n que tienen un valor de ndice por debajo de 0 9 se deben considerar negativas L
15. e de variaci n Valor m nimo valor de ndice Valor m ximo valor de ndice LOTE N 02 N mero de determinaciones 2 Media valor de ndice Desviaci n est ndar Coeficiente de variaci n Valor m nimo valor de ndice Valor m ximo valor de ndice LOTE N 03 N mero de determinaciones 2 Media valor de ndice Desviaci n est ndar Coeficiente de variaci n Valor m nimo valor de ndice Valor m ximo valor de ndice 2 n w N2D0 0 oOumo x Z N 00 0 Pouar o 22000 onono o N 00mnO NoOo 0 DS co a ho 0 J PNDOILPO DON gt 15 4 Efecto saturaci n con altas concentraciones Cuando se analizan muestras que contienen concentraciones de anticuerpos extremadamente elevadas se pueden obtener concentraciones inferiores a las reales por efecto de la saturaci n Sin embargo mediante un m todo optimizado en dos pa sos es posible excluir los resultados muy por debajo de su valor puesto que la se al anal tica permanece siempre alta curva de saturaci n El an lisis de cuatro muestras positivas para IgM contra el virus del sarampi n de alta concentraci n permiti evaluar el efecto de saturaci n Todas las muestras arrojaron valores de concentraci n elevados conforme a lo previsto lo que indica que la clasificaci n de las muestras es correcta 15 5 Especificidad y sensibilidad diagn sticas La especificidad y la sensibilidad diagn sti
16. e el lote de los controles que debe introducirse manualmente en el software del analizador antes de colocar los frascos de los controles Para obtener in formaci n detallada consulte el manual del analizador LIAISON XL analyzers Los c digos de barras del certificado de an lisis contienen informaci n espec fica sobre el lote de los controles Esta informaci n debe leerse con el lector manual de c digo de barras del LIAISON Y XL analyzer antes de in troducir los frascos de los controles Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador 2 MATERIALES SUMINISTRADOS Control negativo 2 x 0 7 mL Plasma desfibrinado suero humano no reactivo para anticuerpos IgM contra el virus del sarampi n 0 2 de ProClin 300 y conservantes Control positivo 2 x 0 7 mL Anticuerpos IgM HuCAL con licencia de MorphoSys AG HuCAL es una marca comercial registrada de MorphoSys AG reactivos al virus del sarampi n case na alb mina s rica bovina tamp n fosfato EDTA detergentes conservantes y un colorante amarillo inactivo Todos los reactivos se suministran listos para su uso El rango de las concentraciones de cada control se indica en el cer tificado de an lisis y detalla los l mites establecidos por DiaSorin para los valores de control que pueden obtenerse con cada serie de ensayos fiable Cada laboratorio es responsable de adoptar l mites diferentes para cumplir exigencias espec ficas 3 ADVER
17. el kit cuando se usa un nuevo lote de reactivos starter para determinar la eficacia del integral de reactivos abierto despu s de m s de ocho semanas o conforme a lo estipu lado en las normas y los requisitos de los reglamentos locales o los organismos acreditados Los valores de control deben permanecer dentro de los rangos previstos Cada vez que el valor de uno o ambos controles no coincida con el rango esperado habr que repetir la calibraci n y evaluar de nuevo los controles Si los valores siguen fuera de rango tras una calibraci n satisfactoria ser preciso repetir la prueba usando un frasco de control sin abrir Los re sultados no deben notificarse si los valores de control est n fuera del rango previsto Antes de utilizar otros controles es preciso evaluar su compatibilidad con este ensayo as como establecer los intervalos de valores que se van a aplicar a todos los materiales de control de calidad utilizados b c d e 13 INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS El analizador calcula autom ticamente la concentraci n de anticuerpos IgM contra el virus del sarampi n expresada como valor de ndice y clasifica los resultados Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador Aunque los calibradores y los controles pueden generar resultados de RLU o dosis distintos en LIAISON y LIAISON XL los resultados de los pacientes son equivalentes En Liaison analyzers Intervalo del ensayo Valor de ndic
18. i n cl nica de los resultados Measles M es fm LIAISON Measles IgM REF 318820 40 162 ES 200 007 028 2 2012 06 14 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO No se han precisado las caracter sticas del m todo de ensayo para casos en los que la prueba de sarampi n LIAISON se utiliza junto con ensayos de otros fabricantes para detectar los marcadores serol gicos espec ficos del sarampi n En este caso los usuarios son responsables de establecer sus propias caracter sticas Para obtener resultados fiables es necesario utilizar una t cnica especializada y seguir estrictamente las instrucciones La contaminaci n bacteriana o la inactivaci n por calentamiento pueden repercutir en los resultados del test Los resultados del test se muestran de manera cualitativa como positivos o negativos para la presencia de anticuerpos IgM contra el virus del sarampi n Sin embargo el diagn stico de una enfermedad infecciosa no debe basarse en el resultado de un solo ensayo sino que debe estar respaldado por otras pruebas cl nicas otros procedimientos diagn sticos y la opi ni n del m dico Las muestras de los pacientes tratados con anticuerpos monoclonales de rat n para terapia o diagn stico pueden contener anticuerpos humanos anti rat n HAMA Como estas muestras pueden interferir en un ensayo inmunol gico basado en el uso de anticuerpos monoclonales sus resultados deben examinarse minuciosamente Los integrales no deben utilizarse con los
19. icar el sarampi n debido a que la prevalencia de esta enfermedad ha disminuido lo que acrecienta la necesidad de usar m todos serol gicos de laboratorio para distinguir el sarampi n de otras enfermedades cl nicamente similares 4 Los anticuerpos IgM e IgG se sintetizan durante la respuesta inmune primaria y pueden detectarse en suero unos cuantos d as despu s de la aparici n de la erupci n cut nea Los niveles de anticuerpos IgM alcanzan su pico m ximo en un plazo de siete a diez d as luego descienden r pidamente y rara vez se detectan transcurridas de seis a ocho semanas En las personas inmunizadas contra el sarampi n no suele detectarse la IgM despu s de una exposici n repetida al virus 5 La exposici n repetida al virus del sarampi n provoca una potente respuesta inmune anamn sica con r pido aumento de los anticuerpos IgG que previene la enfermedad cl nica 6 3 PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO El m todo de determinaci n cualitativa de anticuerpos IgM espec ficos frente al virus del sarampi n es un inmunoensayo de captura de anticuerpos mediante quimioluminiscencia CLIA La inmunoglobulina G anti IgM humana monoclonal de rat n recubre las part culas magn ticas fase s lida y un ant geno recombinante del virus del sarampi n se conjuga con un de rivado del isoluminol conjugado anticuerpo isoluminol Los anticuerpos anti lgM presentes en los calibradores las muestras o los controles se unen a la fase s lida dura
20. ividad se han guardado durante siete d as a 2 8 C y diez muestras se han sometido a seis ciclos de congelaci n y descongelaci n Los resultados no han presentado diferencias significativas El volumen m nimo de muestra necesario para una determinaci n es 170 uL 20 uL de muestra 150 uL de volumen muerto 10 CALIBRACI N La prueba de los calibradores espec ficos del ensayo permite utilizar los valores RLU unidades relativas de luz detectados para ajustar la curva maestra asignada Con cada soluci n de los calibradores se pueden realizar cuatro calibraciones La recalibraci n debe realizarse por triplicado cada vez que se verifique al menos una de las siguientes condiciones Se usa un nuevo lote de integral de reactivos o de reactivos starter Han pasado m s de cuatro semanas desde la ltima calibraci n El analizador ha recibido asistencia t cnica Los valores de control est n fuera de los rangos esperados LIAISON analyzers Los valores de los calibradores est n almacenados en los c digos de barras de la etiqueta del inte ral LIAISONO XL analyzers Los valores de los calibradores est n almacenados en la etiqueta de identificaci n por radiofre cuencia RFID Measles M es fm LIAISON Measles IgM REF 318820 39 162 ES 200 007 028 2 2012 06 11 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO Para obtener resultados correctos es preciso respetar estrictamente las instrucciones proporcionadas en el manual del ana
21. lizador LIAISON analyzers Cada par metro del test se identifica mediante el c digo de barras incluido en la etiqueta del integral de reactivos Si el c digo de barras no se puede leer no ser posible usar el integral y tendr que desecharse Para obte ner informaci n detallada consulte el manual del analizador LIAISON XL analyzers Cada par metro del test se identifica mediante la informaci n codificada en la etiqueta de identi ficaci n por radiofrecuencia RFID del integral de reactivos Si la etiqueta no se puede leer no ser posible usar el integral y tendr que desecharse Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador Las operaciones que realiza el analizador son las siguientes Distribuye los calibradores los controles o las muestras en el m dulo de reacci n Distribuye el diluyente de muestras Distribuye las part culas magn ticas recubiertas Incuba Lava con l quido de lavado l quido del sistema Distribuye el conjugado en el m dulo de reacci n Incuba Lava con l quido de lavado l quido del sistema A ade los reactivos starter y mide la luz emitida 0709 O NES 12 CONTROL DE CALIDAD Los controles LIAISON deben analizarse individualmente para determinar la eficacia del ensayo En el control de calidad es preciso utilizar los controles LIAISONY Measles IgM a por lo menos una vez cada d a de uso cuando se usa un nuevo integral de reactivos cuando se calibra
22. nismos que podr an originar s ntomas cl nicos similares a los del sarampi n hCMV EBV virus de la rubeola parvovirus B19 virus de las paperas Toxoplasma gondii de anticuerpos dirigidos contra otros organismos que podr an ocasionar enfermedades infecciosas Treponema pallidum HSV VZV y de otras condiciones derivadas de una actividad at pica del sistema inmunitario autoanticuerpos anti nuclea res factor reumatoide HAMA o anticuerpos humanos anti rat n Las muestras utilizadas en estos estudios se seleccionaron previamente mediante el uso de otro ensayo de IgM contra el virus del sarampi n comercializado En el es tudio se emplearon muestras seronegativas para anticuerpos IgG contra el virus del sarampi n y seropositivas para reactivo cruzado Para detectar la presencia de reactivos cruzados en las muestras se usaron ensayos que llevan la marca CE Estado cl nico A E Anticuerpos IgM anti hCMV 15 0 Anticuerpos IgM anti VZV 6 0 Anticuerpos IgM anti parvovirus B19 10 0 Anticuerpos IgM anti HSV 5 0 Anticuerpos IgM contra el virus de la rubeola 8 0 Anticuerpos IgM anti EBV 18 0 Anticuerpos IgM contra el virus de la parotiditis 5 0 Anticuerpos IgM anti Toxoplasma gondii 15 0 Autoanticuerpos anti nucleares ANA 5 0 Factor reumatoide inmunoglobulinas anti Fc 5 0 Anticuerpos anti Treponema pallidum 4 0 Anticuerpos humanos anti rat n HAMA 7 0 Total 103 0 No se obtuvo ning n positivo en las muestras analiza
23. nte la primera incubaci n Durante la segunda incubaci n el conju gado de ant geno del virus del sarampi n reacciona con la IgM unida a la fase s lida El material no unido se elimina mediante un ciclo de lavado despu s de cada incubaci n A continuaci n se a aden los reactivos starter que inducen una reacci n de quimioluminiscencia instant nea La se al lu minosa y por lo tanto la cantidad de conjugado anticuerpo isoluminol se mide con un fotomultiplicador en unidades relativas de luz RLU e indica la concentraci n de IgM contra el virus del sarampi n presente en los calibradores las mues tras o los controles Measles M es fm LIAISON Measles IgM REF 318820 37 162 ES 200 007 028 2 2012 06 4 MATERIALES SUMINISTRADOS Integral de reactivos Part culas magn ticas 1 6 mL Part culas magn ticas recubiertas con IgG anti lIgM humana monoclonal de rat n alb mina s rica bovina tamp n PBS lt 0 1 de azida s dica Calibrador 1 Plasma desfibrinado suero humano no reactivo para IgM contra el virus del sarampi n 0 2 de 0 55 mL ProClin 300 y conservantes Las concentraciones de los calibradores ndice est n referenciadas con una preparaci n interna de anticuerpos Calibrador 2 Anticuerpos IgM HuCAL con licencia de MorphoSys AG HuCAL es una marca comercial registrada 0 55 mL de MorphoSys AG reactivos al virus del sarampi n case na alb mina s rica bovina tamp n fosfato
24. odas las unidades de suero y plasma utilizadas para fabricar los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reactivas para la presencia de HBsAg anti VHC anti VIH 1 y anti VIH 2 Sin embargo dado que ning n m todo de an lisis puede garantizar totalmente la ausencia de agentes pat genos todo el material de origen humano deber considerarse potencialmente infeccioso y manipularse como tal 6 NORMAS DE SEGURIDAD No coma beba fume ni se maquille en el laboratorio donde se realiza el ensayo No utilice la pipeta con la boca Evite el contacto directo con todo material potencialmente infeccioso mediante el uso de indumentaria protectora como ba tas de laboratorio gafas protectoras y guantes desechables L vese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo Evite las salpicaduras y la formaci n de aerosoles El reactivo vertido debe limpiarse con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 y eliminarse como si se tratase de material potencialmente infeccioso Todas las muestras los reactivos biol gicos y los materiales usados en el ensayo deben considerarse posibles transmiso res de agentes infecciosos Por consiguiente su eliminaci n debe efectuarse de conformidad con las disposiciones y normas generales establecidas por las autoridades con jurisdicci n sobre el laboratorio as como con las leyes vigentes en cada pa s Asimismo es preciso incinerar los materiales desechables y descontaminar los residuos l quido
25. s 420 uL 20 uL de control 400 uL de volumen muerto En el momento del uso espere hasta que los controles se estabilicen a temperatura ambiente 20 25 C antes de abrir los frascos y d jelos en el instrumento s lo durante el tiempo requerido para realizar la prueba de control de calidad Despu s del uso tape los frascos lo antes posible y mant ngalos a 2 8 C en posici n vertical Durante la manipulaci n de los controles adopte las precauciones necesarias para evitar la contaminaci n microbiana Measles M es fm LIAISON Control Measles IgM REF 318821 44 162 ES 200 007 028 2 2012 06 7 MANIPULACI N Consulte las instrucciones de manipulaci n en el manual del analizador 8 VALORES ESPERADOS En el certificado de an lisis se indican los intervalos y valores previstos de concentraci n de anticuerpos IgM contra el virus del sarampi n Estos se han establecido considerando la variabilidad de las series anal ticas respecto de la curva maestra del fabricante a fin de garantizar la precisi n de los resultados anal ticos y de obtener indicaciones sobre la estabilidad o el deterioro de los reactivos Si los valores de control se mantienen repetidamente fuera del rango previsto es muy proba ble que el ensayo se haya realizado de forma incorrecta Measles M es fm LIAISON Control Measles IgM REF 318821 45 162 ES 200 007 028 2 2012 06
26. s con una solu ci n de hipoclorito s dico al 5 concentraci n final durante al menos media hora Los materiales que puedan volver a utilizarse tendr n que esterilizarse en autoclave empleando un procedimiento de extraordinaria capacidad descontaminante USP 24 2000 p 2143 Aunque la aplicaci n de un ciclo de descontaminaci n de una hora a 121 C suele considerarse adecuado el usuario debe verificar su eficacia mediante una prueba inicial y el uso peri dico de indicadores biol gicos Los reactivos que contienen ProClin 300 est n catalogados como sustancias irritantes en las Directivas Europeas pertinentes R 43 Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel S 24 Ev tese el contacto con la piel S 37 Usense guantes adecuados S 60 Elim nense el producto y su recipiente como residuos peligrosos Measles M es fm LIAISON Measles IgM REF 318820 38 162 ES 200 007 028 2 2012 06 7 PREPARACI N DEL INTEGRAL DE REACTIVOS Para manipular los reactivos es preciso adoptar una serie de precauciones importantes Resuspensi n de las part culas magn ticas Las part culas magn ticas deben estar completamente resuspendidas antes de colocar el integral en el instrumento Realice los pasos indicados a continuaci n para garantizar la suspensi n completa de las part culas Antes de quitar el precinto gire la ruedecilla del recipiente de part culas magn ticas hasta que la suspensi n adopte un co lor marr n
27. to Use las gradillas suministradas con LIAISON analyzer para mantener el integral en posici n vertical No lo congele Mantenga el integral de reactivos en posici n vertical mientras est guardado para garantizar una adecuada resuspen si n de las part culas magn ticas Evite su exposici n a luz directa 9 OBTENCI N Y PREPARACI N DE LAS MUESTRAS En el ensayo puede emplearse suero o plasma humanos Las pruebas realizadas confirman que es posible utilizar EDTA pot sico y heparina como anticoagulantes La sangre debe extraerse de forma as ptica mediante venipuntura y dejar que coagule para despu s separar el suero del co gulo tan pronto como sea posible Antes del ensayo es posible que haya que depurar las muestras con materia particulada material en suspensi n lipemia o restos de eritrocitos mediante filtraci n o centrifugaci n Deben descartarse las muestras visiblemente hemolizadas o lip micas as como las que contienen materia particulada o presentan una contaminaci n microbiana evidente Compruebe si existen burbujas de aire en la muestra y eli m nelas antes del ensayo Las muestras tendr n que guardarse a una temperatura de 2 8 C cuando se vayan a utilizar en los siete d as siguientes a la extracci n de lo contrario habr que hacer partes al cuotas y congelarlas 20 C o menos Las muestras congeladas deben descongelarse y agitarse bien antes de realizar el ensayo Diez muestras de diferente react
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