Piccolo® General Chemistry 13
Contents
1. AMY 14 97 U I 14 97 U l Aspartato aminotransferasa AST 11 38 U l 11 38 U l Calcio CA 8 0 10 3 mg dl 2 0 2 58 mmol l Creatinina CRE 0 6 1 2 mg dl 53 106 pmol l Gamma glutamiltransferasa GGT 5 65 U l 5 65 U l Glucosa GLU 73 118 mg dl 4 05 6 55 mmol l Bilirrubina total TBIL 0 2 1 6 mg dl 3 4 27 4 umol l Prote na total TP 6 4 8 1 g dl 64 81 g l Nitr geno ureico sangu neo BUN 7 22 mg dl 2 5 7 9 mmol urea l cido rico Mujer 2 2 6 6 mg dl 0 13 0 39 mmol 1 Var n 3 6 8 0 mg dl 0 21 0 47 mmol l 12 Caracter sticas de eficacia Linealidad La qu mica para cada analito es lineal a lo largo del intervalo din mico indicado a continuaci n cuando el analizador qu mico sanguineo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress funciona de acuerdo con el procedimiento recomendado consulte el manual del usuario del analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Tabla 5 L mites din micos de Piccolo Sustrato Unidades comunes Unidades SI Alanina aminotransferasa ALT 5 2000 U l 5 2000 U l Alb mina ALB 1 6 5 g dl 10 65 g l Fosfatasa alcalina ALP 5 2400 U l 5 2400 U l Amilasa AMY 5 4000 U l 54000 U l Aspartato aminotransferasa AST 52000 U l 5 2000 U l Calcio 4 0 16 0 mg dl 1 0 4 0 mmol l Creatinina 0 2 20 mg dl 18 1768 mol l Gamma glutamiltransferasa GGT 5 3 000 U l 5 3 000 U l Glucosa 10 700 mg dl 0 56 38 9 mmol l Bilirrubina total TBIL 0 1 30 mg dl 1 7 513 pmol l2. Hepatopat as incluida la hepatitis y obstrucci n de la ves cula biliar ictericia Prote na total Hepatopat as enfermedades del ri n o de la m dula sea alteraciones metab licas y de la nutrici n Nitr geno ureico sangu neo Nefropatias y enfermedades metab licas BUN Acido rico Alteraciones renales y metab licas incluida la insuficiencia renal y la gota Al igual que con cualquier procedimiento diagn stico de prueba antes del diagn stico final hay que considerar todos los restantes procedimientos de prueba incluido el estado cl nico del paciente Page 69 of 114 3 Principios de la prueba Alanina aminotransferasa ALT La alanina aminotransferasa ALT fue medida por tres m todos Dos de estos m todos la t cnica de acoplamiento colorim trico por dinitrofenilhidracina y la prueba enzim tica fluorescente se usan muy raramente La t cnica m s com n para la determinaci n de las concentraciones de ALT en suero es un m todo enzim tico basado en el trabajo de Wroblewski y LaDue La Federaci n Internacional de Qu mica Cl nica International Federation of Clinical Chemistry IFCC ha propuesto un procedimiento Wr blewski y LaDue modificado como el recomendado El m todo desarrollado para ser usado con el analizador de Piccolo es una modificaci n del procedimiento recomendado por la IFCC En esta reacci n la ALT cataliza la transferencia de un grupo amino de la L alanina al a cetoglutar
3. L y glutamil p nitroanilida este procedimiento fue modificado para usar el sustrato L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida El m todo GGT recomendado por la Federaci n Internacional de Qu mica Cl nica IFCC se basaba en el ltimo sustrato con la glicilglicina como el otro sustrato Abaxis modific el m todo IFCC para que reaccione a 37 C El agregado de una muestra con gamma glutamiltransferasa a los sustratos L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida y glicilglicina gli gl1 produce la formaci n de L y glutamil glicilglicina glu gli gli y 3 carboxi 4 nitroanilina GGT L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida Gli glit Glu gli gli 3 carboxi 4 nitroanilina La absorbancia de este indice de reacci n se mide a 405 nm La producci n de 3 carboxi 4 nitroanilina es directamente proporcional a la actividad de GGT en la muestra Glucosa GLU Las primeras mediciones de la concentraci n de glucosa fueron realizadas mediante m todos de reducci n del cobre como Folin Wu y Somogyi Nelson La falta de especificidad en las t cnicas de reducci n del cobre llev al desarrollo de procedimientos cuantitativos mediante las enzimas hexoquinasa y glucosa oxidasa La prueba de glucosa incorporada en el disco reactivo qu mico general 13 de Piccolo es una versi n modificada del m todo de la hexoquinasa que ha sido propuesto como base del m todo de referencia de glucosa La reacci n de glucosa con adenosina trifosfato
4. Mosby Company 1989 1029 1033 Webster D Bignell AHC EC Attwood An assessment of the suitability of bromocresol green for the determination of serum albumin Clin Chim Acta 1974 53 101 108 Louderback A Mealey EH NA Taylor A new dye binding technic using bromcresol purple for determination of albumin in serum Clin Chem 1968 14 793 794 Abstract Pinnell AE Northam BE New automated dye binding method for serum albumin determination with bromcresol purple Clin Chem 1978 24 80 86 King EJ Armstrong AR A convenient method for determining serum and bile phosphatase activity Can Med Assoc J 1934 31 376 381 Kind PRN King EJ Estimation of plasma phosphatase by determination of hydrolysed phenol with amino antipyrine J Clin Pathol 1954 7 322 326 Ohmori Y Uber die Phosphomonoesterase Enzymologia 1937 4 217 231 Fujita H Uber die Mikrobestimmung der Blutphosphatase J Biochem Japan 1939 30 69 87 Petitclere C y otros Mechanism of action of Mg and Zn on rat placental alkaline phosphatase I Studies on the soluble Zn and Mg alkaline phosphatase Can J Biochem 1975 53 1089 1100 Tietz NW y otros A reference method for measurement of alkaline phosphatase activity in human serum Clin Chem 1983 29 751 761 Bowers GN Jr y otros IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part I General considerations concerning the determination of the catalytic concentration of an enzyme in t
5. Nitrofurantoina 0 2 20 Oxacilina 1 Oxaloacetato 132 Fenito na 1 2 3 Prolina 4 Piruvato 0 3 0 9 44 Rifampina 0 4 3 1 5 cido salic lico 15 30 25 Sulfalazina 2 4 10 Sulfanilamida 10 15 50 Teofilina 1 2 20 e Las siguientes sustancias mostraron una interferencia superior al 10 Se define a la interferencia significativa como un desv o superior al 10 en el resultado para una muestra en l mites normales Las mezclas de suero humano fueron enriquecidas con concentraciones conocidas de los f rmacos o qu micos y luego analizadas Page 79 of 114 Tabla 3 Sustancias con interferencia significativa gt 10 Rango fisiol gico Concentraci n con Interferencia terap utico gt 10 interferencia mg dl mg dl Alanina aminotransferasa ALT cido asc rbico 0 8 1 2 20 11 aum Oxaloacetato 132 843 aum Alb mina ALB Acetoacetato 0 05 3 60 102 18 dism Ampicilina 0 5 30 12 dism Cafe na 0 3 1 5 10 14 dism Cloruro de calcio 20 17 dism Cefalotina Keflin 10 400 13 aum Ibuprofeno 0 5 4 2 50 28 aum a cetoglutarato 5 11 dism Nitrofuranto na 0 2 20 13 dism Prolina 4 12 aum Sulfalazina 24 10 14 dism Sulfanilamida 10 15 50 12 dism Teofilina 1 2 20 11 dism Fosfatasa alcalina ALP Teofilina 1 2 20 42 dism Creatinina CRE cido asc rbico 0 8 1 2 20 11 dism Dopamina 19 80 dism L dopa 5 71 dism Epinefrina 1 45 dism Glutation 30 13 di
6. Principles and Technics 2 ed New York Harper and Row 1974 417 421 1058 1059 National Committee for Clinical Laboratory Standards Interference testing in clinical chemistry proposed guideline NCCLS Publication EP7 P Wayne PA NCCLS 1986 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 3 ed Washington DC AACC Press 1990 Benet LZ Williams RL Design and optimization of dosage regimens pharmacokinetic data In Goodman and Gilman s The Pharmacological Basis of Therapeutics 8 ed Gilman AG y otros comps New York McGraw Hill Inc 1990 1650 1735 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 1991 suplemento a la tercera edici n Washington DC AACC Press 1991 Moss DW Henderson AR Enzymes En Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2 ed Burtis CA Ashwood ER comps Philadelphia W B Saunders Company 1994 735 896 Painter PC Cope JY Smith JI Appendix En Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2 ed Burtis CA Ashwood ER comps Philadelphia W B Saunders Company 1994 2161 2217 National Committee for Clinical Laboratory Standards Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices tentative guideline segunda edici n NCCLS Document EP5 T2 Wayne PA NCCLS 1992 Page 91 of 114
7. Proteina total TP 2 14 g dl 20 140 g l Nitr geno ureico sanguineo BUN 2 180 mg dl 0 7 64 3 mmol urea 1 Acido rico 1 15 mg dl 0 1 0 9 mmol l Si la concentraci n del analito es superior al intervalo de medici n intervalo din mico pero inferior al intervalo del sistema en la tarjeta impresa se indicar n un signo gt en el limite superior y un asterisco detr s del n mero por ejemplo ALT gt 2000 U I Si es inferior al intervalo din mico se imprimir lt con un asterisco por ejemplo ALT lt 5 U l Para valores que tengan un valor enormemente m s alto que el intervalo de medici n intervalo del sistema se imprimir en lugar del resultado Page 81 of 114 Cada vez que aparezca en la tarjeta impresa recoja una muestra nueva y realice de nuevo la prueba Si los resultados de la segunda muestra se vuelven a suprimir p ngase en contacto con el servicio de atenci n al cliente de Abaxis Sensibilidad l mites de detecci n El l mite inferior del intervalo informable din mico para cada analito es alanina aminotransferasa 5 U l alb mina 1 g dl 10 g l fosfatasa alcalina 5 U l amilasa 5 U l aspartato aminotransferasa 5 U l calcio 4 0 mg dl 1 0 mmol l creatinina 0 2 mg dl 18 pmol l gamma glutamiltransferasa 5 U l glucosa 10 mg dl 0 56 mmol l bilirrubina total 0 1 mg dl 1 7 umol 1 prote na total 2 g dl 20 g l nitr geno ureico 2 0 mg dl 0 7 mmol urea l y cido ric
8. AL Marbach EP Urea and ammonia determinations Clin Chem 1962 8 130 132 66 67 68 69 70 71 Feichtmeir TV Wrenn HT Direct determination of uric acid using uricase Am J Clin Pathol 1955 25 833 839 73 Bibliograf a cont Jaynes PK Feld RD Johnson GF An enzymic reaction rate assay for serum creatinine with a centrifugal analyzer Clin Chem 1982 28 114 117 Fossati P Prencipe L y Berti G Enzymic creatinine assay a new colorimetric method based on hydrogen peroxide measurement Clin Chem 1983 29 1494 1496 Whelton A Watson AJ Rock RC Nitrogen metabolites and renal function En Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2 ed Burtis CA Ashwood ER comps Philadelphia W B Saunders Company 1994 1513 1575 Ball EG Revel JP Cooper O The quantitative measurement of glutamyl transpeptidase activity J Biol Chem 1956 221 895 908 Goldbarg JA y otros The colorimetric determination of glutamyl transpeptidase with a synthetic substrate Arch Biochem Biophys 1960 91 61 70 Orlowski M Meister A y Glutamyl p nitroanilide a new convenient substrate for determination and study of L and D glutamyltranspeptidase activities Biochim Biophys Acta 1963 73 679 681 Persijn JP van der Slik W A new method for the determination of y glutamyltransferase in serum J Clin Chem Clin Biochem 1976 14 421 427 Shaw LM y otros IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 4 IFCC
9. de control homologados y valores de referencia e Cron metro Par metros de prueba El analizador qu mico de sangre Piccolo o Piccolo xpress funciona a una temperatura ambiente entre 15 C y 32 C 59 90 F El tiempo de an lisis para cada disco reactivo qu mico general 13 de Piccolo es menor a 14 minutos El analizador mantiene el disco reactivo a una temperatura de 37 C 98 6 F durante el intervalo de medici n Procedimiento de prueba La recolecci n completa de la muestra y los procedimientos paso a paso se detallan en el Manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Calibrado El analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress est calibrado por el fabricante antes de su env o al cliente El c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras proporciona al analizador los datos de calibraci n especificos del disco Ver el Manual del operador del analizador qu mico Piccolo o Piccolo xpress Control de calidad Consulte la Secci n 2 4 del manual del usuario de Piccolo o la Secci n 6 Calibraci n y control de calidad del manual del usuario de Piccolo xpress El rendimiento del analizador qu mico sangu neo Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress puede verificarse por medio de controles P ngase en contacto con el Servicio de asistencia t cnica de Abaxis para solicitar una lista de los materiales de control de calidad homologa
10. in cardiac and hepatic disease Proc Soc Exp Biol Med 1956 91 569 571 5 Bergmeyer HU Horder M IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 3 IFCC method for alanine aminotransferase J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 521 534 6 Howe PE The use of sodium sulfate as the globulin precipitant in the determination of proteins in blood J Biol Chem 1921 49 93 107 7 Howe PE The determination of proteins in blood a micro method J Biol Chem 1921 49 109 113 8 Wolfson WQ y otros A rapid procedure for the estimation of total protein true albumin total globulin alpha globulin beta globulin and gamma globulin in 10 ml of serum Am J Clin Pathol 1948 18 723 30 Page 88 of 114 13 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Centers for Disease Control CDC Alpha amylase methodology survey I Atlanta US Public Health Service nov 1975 26 21 28 29 30 31 32 33 34 35 36 Bibliografia cont Saifer A Gerstenfeld S Vacsler F Photometric microdetermination of total serum globulins by means of a tryptophan reaction Clin Chem 1961 7 626 36 Saifer A Marven T The photometric microdetermination of serum total globulins with a tryptophan reaction a modified procedure Clin Chem 1966 12 414 17 Gendler SM Albumin En Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ comps St Louis The C V
11. 5 7 2 Porcentaje de resultados 93 6 100 100 en el intervalo 58 62 62 62 62 62 15 0 95 IC 84 3 a 98 2 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Gamma glutamiltransferasa GGT Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 35 0 U I 86 2 U l 131 3 U l VR 2 8 1 5 1 5 Intervalo observado 33 38 83 90 123 135 Porcentaje de resultados 100 100 100 en el intervalo 62 62 62 62 62 62 10 4 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Glucosa Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 95 2 130 3 365 8 VR 1 1 1 0 0 8 Intervalo observado 93 98 125 133 351 373 Porcentaje de resultados 100 100 100 en el intervalo 62 62 62 62 62 62 95 IC 94 2 a 100 Se consideraron l mites de 65 mg dl 99 mg dl Page 87 of 114 Bilirrubina total TBIL 5 9 95 IC 91 3 a 100 95 IC 94 2 a 100 Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 0 86 mg dl 2 5 mg dl 5 7 mg dl VR 6 1 2 6 1 8 Intervalo observado 0 8 1 0 2 3 2 6 5 4 5 9 Porcentaje de resultados en 100 100 100 el intervalo 62 62 62 62 62 62 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Prote na total TP Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 4 8 g dl 5 7 g dl 7 1 g dl
12. 8 cido 3 5 dicloro 2 hidroxibenzenosulf nico DHBSA 37 Ug Glucosa 6 fosfato deshidrogenasa levadura 0 05 U cido L glut mico deshidrogenasa h gado bovino 0 01 U cido L glut mico y 3 carboxi 4 nitroanilina sal de amonio 30 ug Glicilglicina 317 Hg Page 74 of 114 Tabla 1 Reactivos cont Componente Cantidad disco Hexoquinasa levadura 0 1 U a cetoglutarato sal dis dica 28 ug cido a cetoglutarico 72 ug Lactato deshidrogenasa corazon de pollo 0 002 U Lactato deshidrogenasa LDH microbiana 0 03 U Lactato deshidrogenasa Staphylococcus epidermidis 0 1 U Acetato de magnesio 7 ug Cloruro de magnesio 3 ug Malato deshidrogenasa MDH coraz n porcino 0 01 U Nicotinamida adenina dinucle tido NAD 20 ug Nicotinamida adenina dinucle tido reducida NADH 18 ug Peroxidasa r bano 0 8 U p Nitrofenil fosfato p NPP 56 ug Ferrocianuro de potasio 0 4 ug Yoduro de potasio 56 ug Sarcosina oxidasa microorganismos 0 6 U Ferrocianuro s dico 1 pg Potasio s dico tartrato 686 ug cido 2 4 6 Tribromo 3 hhidroxibenzoico 188 ug Ureasa haba blanca 0 05 U Uricasa microbiana 0 04 U Sulfato de zinc 3 ug Amortiguadores surfactantes excipientes y estabilizadores Advertencias y precauciones e Para uso diagn stico in Vitro e El envase del diluyente en el disco reactivo se abre autom ticamente cuando se cierra el caj n del analizador Un disco con un contenedor diluyente abierto no puede volver a utilizarse Comprue
13. 987 0 866 0 1 0 16 107 0 4 7 5 Beckman aa aa 1 0 0 98 0 4 3 29 135 5 312 Paramax 1 0 1 60 3 1 18 57 49 27 1848 Beckman UN Glucosa mg dl 0 987 1 009 2 8 3 89 251 72 422 Paramax 8 0 997 0 943 1 2 4 69 91 56 646 Beckman Bilirrubina total 0 974 0 901 0 0 0 07 250 0 2 3 7 Paramax mg dl 0 980 1 113 0 4 0 09 91 0 1 6 4 Beckman Prote nas totales 0 849 0 932 0 6 0 19 251 5 7 9 2 Paramax g dl 0 873 0 935 0 3 0 16 92 6 5 9 2 Beckman Nitr geno ureico 0 964 0 923 0 5 1 08 251 6 52 Paramax sangu neo mg dl 0 983 0 946 0 0 0 66 92 6 38 Beckman cido rico 0 979 0 958 0 3 0 20 159 1 4 7 6 Paramax mg dl 0 975 0 908 0 6 0 31 44 2 1 12 1 DAX Las muestras s ricas de pacientes hospitalizados proporcionaron un rango de muestra m s amplio y posiblemente m s til que las muestras de sangre entera venosa de pacientes ambulatorios Las estad sticas de correlaci n para las pruebas del calcio de Piccolo corresponden a estas muestras de suero Un sitio utiliz solamente suero en el analizador Piccolo para la correlaci n de gamma glutamiltransferasa Page 85 of 114 Resultados de un estudio con usuarios sin preparaci n Se llev a cabo un estudio con usuarios sin preparaci n en el que los participantes nicamente con las instrucciones del an lisis que se les proporcionaban deb an analizar tres discos con muestras aleatorizadas a ciegas Las muestras se prepararon a base de suero con tres niveles de cada uno de los trece anal
14. ATP catalizada por la hexoquinasa HK produce glucosa 6 fosfato G 6 P y adenosina difosfato ADP La glucosa 6 fosfato deshidrogenasa G 6 PDH cataliza la reacci n de G 6 P en 6 fosfogluconato y la reducci n de nicotinamida adenina dinucle tido NAD a NADH Hexoquinasa Glucosa ATP _ gt _ Glucosa 6 fosfato ADP G 6 PDH G 6 P NAD __ 6 fosfogluconato NADH La absorbancia se mide bicrom ticamente a 340 nm y 850 nm La producci n de NADH es directamente proporcional a la cantidad de glucosa en la muestra Page 72 of 114 Bilirrubina total TBIL T picamente los niveles de bilirrubina total se han evaluado por pruebas que emplean cido sulfan lico diazotizado Se ha desarrollado un m todo m s moderno y m s espec fico que utiliza la enzima bilirrubina oxidasa Adem s de utilizar el m todo de prueba de la bilirrubina total m s espec fico la fotodegradaci n del par metro se minimiza con el analizador Piccolo porque la muestra se puede analizar inmediatamente despu s de obtenida En el procedimiento enzim tico la bilirrubina es oxidada por la bilirrubina oxidasa en biliverdina Bilirrubina oxidasa Bilirrubina O 2 gt Biliverdina H O La bilirrubina se mide como la diferencia en la absorbancia entre 467 nm y 550 nm La absorbancia inicial de esta reacci n de punto final se determina por la cubeta de refe
15. Clin Chem 1980 26 816 826 Folin O Denis W A new colorimetric method for the determination of uric acid in blood J Biol Chem 1912 1913 13 469 475 Brown H The determination of uric acid in human blood J Biol Chem 1945 158 601 608 Fossati P Prencipe L Berti G Use of 3 5 dichloro 2 hydroxy benzenesulfonic acid 4 aminophenazone chromogenic system in direct enzymic assay of uric acid in serum and urine Clin Chem 1980 26 227 231 Page 90 of 114 13 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 Bibliograf a cont National Committee for Clinical Laboratory Standards Physician s office laboratory guidelines tentative guide line segunda edici n NCCLS Document POL1 T2 Wayne PA NCCLS 1992 National Committee for Clinical Laboratory Standards Procedures for the handling and processing of blood specimens approved guideline second edition NCCLS document H18 A2 Wayne PA NCCLS 1999 Overfield CV Savory J Heintges MG Glycolysis a re evaluation of the effect on blood glucose Clin Chim Acta 1972 39 35 40 Rehak NN Chiang BT Storage of whole blood effect of temperature on the measured concentration of analytes in serum Clin Chem 1988 34 2111 2114 Sherwin JE Obernolte R Bilirubin En Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AP comps St Louis The C V Mosby Company 1989 1009 1015 Henry RJ Cannon DC Winkelman JW Clinical Chemistry
16. Disco reactivo qu mico general 13 de Piccolo CE Para uso diagn stico in vitro y uso profesional solament Servicio t cnico y al cliente 800 822 2947 Exoneraci n de la CLIA Usar nicamente sangre entera tratada con heparina litio Complejidad moderada Usar sangre entera tratada con heparina litio plasma tratado con heparina litio o suero Abril 2008 PN 400 7149 Rev G O 2004 Abaxis Inc Union City CA 94587 1 Indicaciones El disco reactivo qu mico general 13 de Piccolo usado con el analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress se ha dise ado para proporcionar determinaciones cuantitativas in vitro de alanina aminotransferasa ALT alb mina fosfatasa alcalina ALP amilasa aspartato aminotransferasa AST calcio creatinina gamma glutamiltransferasa GGT glucosa bilirrubina total prote na total nitr geno ureico sangu neo BUN y cido rico en sangre entera heparinizada plasma heparinizado o suero Los an lisis de este panel est n exonerados seg n los requisitos de CLIA 88 Si un laboratorio modificara las instrucciones del sistema de an lisis los an lisis se considerar an de alta complejidad y quedar an sujetos a todos los requisitos de la CLIA En los laboratorios exonerados seg n la CLIA s lo puede analizarse sangre entera tratada con heparina litio En laboratorios de complejidad moderada pueden utilizarse sangre entera tratada con heparina litio plasm
17. VR 2 0 1 5 1 5 Intervalo observado 4 6 5 3 5 3 5 9 6 7 7 5 Porcentaje de resultados en 98 4 100 100 el intervalo 61 62 62 62 62 62 95 IC 94 2 a 100 Nitr geno ureico sangu neo BUN Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 15 1 41 0 72 2 VR 2 3 2 5 1 8 Intervalo observado 14 16 37 43 68 75 Porcentaje de resultados en 100 100 100 el intervalo 62 62 62 62 62 62 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 cido rico Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 2 96 4 92 11 10 VR 4 7 3 1 2 8 Intervalo observado 2 7 3 4 4 6 5 7 10 4 12 1 Porcentaje de resultados en 100 100 100 el intervalo 62 62 62 62 62 62 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 13 Bibliografia 1 Tonhazy NE NG White WW Umbreit A rapid method for the estimation of the glutamic aspartic transaminase in tissues and its application to radiation sickness Arch Biochem 1950 28 36 42 2 Reitman S Frankel S A colorimetric method for the determination of serum glutamic oxalacetic and glutamic pyruvic transaminases Am J Clin Pathol 1957 28 56 63 3 Murray RL Alanine aminotransferase En Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ comp St Louis The C V Mosby Company 1989 895 898 4 Wroblewski F LaDue JS Serum glutamic pyruvic transminase
18. a medir la amilasa La mayor a de los procedimientos usan una soluci n polisac rida pero emplean t cnicas de detecci n distintas Los m todos viscosim tricos carecen de precisi n y exactitud mientras que los m todos turbidim tricos y yodom tricos son dif ciles de estandarizar Los m todos usados con mayor frecuencia son sacarog nicos y cromol ticos La t cnica cl sica de medici n de la amilasa es un m todo sacarog nico pero es dif cil y exige demasiado tiempo Los m todos cromol ticos que utilizan p nitrofenilgluc sidos como sustratos fueron desarrollados recientemente Estos an lisis tienen mayor especificidad para la amilasa pancre tica que para la salival y son f cilmente monitorizables En el m todo de Piccolo el sustrato 2 cloro p nitrofenil a D maltotriosida CNPG3 reacciona con la a amilasa en la muestra del paciente liberando 2 cloro p nitrofenol CNP La liberaci n del CNP crea un cambio en el color a Amilasa CNPG3 gt gt CNP D Maltotriosida La reacci n se mide bicromaticamente a 405 nm y 500 nm El cambio en la absorbancia debido a la formaci n de CNP es directamente proporcional a la actividad de la a amilasa en la muestra Aspartato aminotransferasa AST La prueba de aspartato aminotransferasa AST se basa en el m todo de velocidad de Karmen de acuerdo con la modificaci n de Bergmeyer El m todo de referencia actual de la Federaci n de Qu mica Cl ni
19. a tratado con heparina litio o suero Se necesita un certificado de exoneraci n de la CLIA para realizar an lisis exonerados por la CLIA Un certificado de exoneraci n puede obtenerse de CMS Centers for Medicare amp Medicaid Services Si necesita ayuda para obtener este certificado dir jase a la comisi n de acreditaci n de laboratorios COLA en el tel fono 1 800 981 9883 2 Resumen y explicaci n de las pruebas El disco reactivo qu mico general 13 de Piccolo y el analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress constituyen un sistema de diagn stico in vitro que ayuda al m dico a diagnosticar los trastornos siguientes Alanina aminotransferasa ALT Enfermedades hep ticas incluidas la hepatitis v rica y la cirrosis Alb mina Patolog as del h gado y del ri n Fosfatasa alcalina ALP Patolog as del h gado seas de la gl ndula paratiroides e intestinales Amilasa Pancreatitis Aspartato aminotransferasa AST Hepatopat as incluidas la hepatitis e ictericia v ricas shock Calcio Enfermedades de la gl ndula paratiroides seas y nefropat as cr nicas Creatinina Nefropat a y control de di lisis renal Gamma glutamiltransferasa Hepatopat as incluidas cirrosis hep tica y tumores GGT hep ticos primarios y secundarios Glucosa Alteraciones del metabolismo de carbohidratos incluida la diabetes mellitus del adulto y juvenil e hipoglucemia Bilirrubina total
20. ador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress para obtener informaci n sobre los principios y limitaciones del procedimiento 5 Descripci n de los reactivos Reactivos Cada disco reactivo qu mico general 13 de Piccolo contiene puntos espec ficos para pruebas secas descritos a continuaci n En cada disco se incluye un reactivo seco de muestra de referencia con amortiguador surfactantes excipientes y estabilizadores para utilizar en el c lculo de las concentraciones de alanina aminotransferasa ALT alb mina ALB fosfatasa alcalina ALP amilasa AMY aspartato aminotransferasa AST calcio CA gamma glutamiltransferasa GGT glucosa GLU nitr geno ureico BUN y cido rico AU En el disco se incluyen muestras de referencia espec ficas para creatinina CRE bilirrubina total TBIL y prote na total TP Cada disco reactivo contiene tambi n un disolvente formado por surfactantes excipientes y estabilizadores Tabla 1 Reactivos Componente Cantidad disco Adenosina 5 difosfato 4 ug Adenosina 5 trifosfato 11 ug L alanina 874 48 4 aminoantipirina HCl 4 AAP 20 Hg Arsenazo III sal s dica 3 ug Ascorbato oxidasa Cucurbita ssp 0 5 U cido L asp rtico 426 ug Bilirrubina oxidasa 0 1 U P rpura de bromcresol 2 ug 2 Cloro p nitrofenil a D maltotriosido NPG3 40 ug Creatina amidinohidrolasa Actinobacillus spp 2U Creatinina amidohidrolasa Pseudomonas spp 1U Sulfato c prico 134 u
21. ato para formar L glutamato y piruvato La lactato deshidrogenasa cataliza la conversi n de piruvato a lactato Al mismo tiempo NADH se oxida a NAD como se muestra en el esquema siguiente de la reacci n ALT L Alanina a cetoglutarato _ L Glutamato Piruvato LDH Piruvato NADH H Lactato NAD El indice de cambio de la diferencia de absorbancia entre 340 nm y 405 nm se debe a la conversi n de NADH a NAD yes directamente proporcional a la cantidad de ALT presente en la muestra Alb mina ALB Los primeros m todos usados para medir la alb mina incluyen t cnicas de fraccionamiento y el contenido en tritofano de las globulinas Estos m todos son dif ciles de utilizar y no tienen una especificidad elevada Hay dos t cnicas inmunoqu micas que se consideran m todos de referencia pero son costosas y requieren mucho tiempo Las t cnicas de tinci n son los m todos usados con mayor frecuencia para el an lisis de la alb mina El verde de bromcresol BCG es el m todo de tinci n usado con mayor frecuencia pero puede sobrestimar la concentraci n de alb mina en especial dentro del extremo inferior de los valores normales La p rpura de bromcresol BCP es la m s espec fica de las tinturas en uso La p rpura de bromcresol BCP al unirse a la alb mina cambia su color de amarillo a azul La absorbancia m xima cambia con el cambio de color Surfactantes BCP A
22. be que la muestra o la prueba fue colocada en el disco antes de cerrar el caj n e Los discos de reactivo usados contienen l quidos del cuerpo humano Siga las pr cticas de seguridad del laboratorio cuando manipule y elimine discos usados Consulte el Manual del operador del analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress para obtener instrucciones sobre la limpieza de derrames biopeligrosos e Los discos reactivos son de pl stico y pueden romperse o estallarse si se caen Nunca use un disco que se haya ca do ya que puede diseminar material biol gico peligroso en el interior del analizador e El reactivo en soporte s lido puede contener sustancias cidas o c usticas El usuario no entra en contacto con el reactivo en soporte s lido si sigue los procedimientos recomendados En el caso en que se manipule el reactivo en soporte s lido por ejemplo limpieza tras dejar caer y romper un disco de reactivo se debe evitar la ingesti n el contacto con la piel y la inhalaci n del mismo Instrucciones para la manipulaci n de los reactivos Los discos de reactivo pueden ser usados directamente del refrigerador sin calentar No permita que los discos permanezcan a temperatura ambiente m s de 48 horas antes de usar Abra la bolsa de cierre herm tico y saque el disco teniendo cuidado de no tocar el anillo del c digo de barras situado en la parte superior del disco Utilizar de acuerdo con las instrucciones prop
23. ca IFCC utiliza la t cnica de Karmen Bergmeyer del acoplamiento de malato deshidrogenasa MDH y nicotinamida dinucle tido reducida NADH en la detecci n de AST en suero Se agrega lactato deshidrogenasa LDH a la reacci n para reducir la interferencia causada por el piruvato end geno El AST cataliza la reacci n del L aspartato y a cetoglutarato en oxaloacetato y L glutamato El oxaloacetato es convertido en malato y el NADH es oxidado a NAD por el catalizador MDH AST L aspartato a cetoglutarato Oxaloacetato L glutamato MDH Oxaloacetato NADH Malato NAD El cambio en el ndice de absorbancia a 340 nm 405 nm debido a la conversi n de NADH a NAD es directamente proporcional a la cantidad de AST en la muestra Calcio CA Los primeros m todos usados para analizar calcio comprendieron el precipitado de calcio con un exceso de aniones 2 Los m todos de precipitaci n son complicados y suelen ser imprecisos El m todo de referencia para el calcio es la espectroscopia por absorci n at mica sin embargo este m todo no es adecuado para su uso de rutina Los m todos espectrofotom tricos que usan los indicadores metalocr micos o cresolftale na complexona o arsenazo III son los usados con m s frecuencia gt El arsenazo III tiene gran afinidad por el calcio y no depende de la temperatura como el CPC El calcio en la muestra del paciente se une al arse
24. cia En lugar del resultado la tarjeta tendr impreso HEM LIP o ICT respectivamente P ngase en contacto con el Servicio de asistencia t cnica de Abaxis para obtener informaci n acerca de los niveles m ximos de sustancias end genas Efectos de la sustancias ex genas y terap uticas Se seleccionaron treinta y cinco sustancias ex genas y terap uticas como interferentes potenciales para los m todos de prueba de Abaxis sobre la base de las recomendaciones de Young 81 La interferencia significativa se define como una desviaci n gt 10 en el resultado para una muestra dentro de los valores normales Las mezclas de suero humano fueron enriquecidas con una concentraci n conocida de los f rmacos o productos qu micos y despu s analizadas Page 78 of 114 Tabla 2 Ex genos y sustancias terap uticas evaluados Rango fisiol gico o terap utico Concentraci n m s elevada probada mg dl mg dl Acetaminofeno 1 2 100 Acetoacetato 0 05 3 60 102 cido acetilsalic lico 2 10 50 Ampicilina 0 5 30 Acido asc rbico 0 8 1 2 20 Cafe na 0 3 1 5 10 Cloruro de calcio 20 Cefalotina Keflin 10 400 Cloranfenicol 1 2 5 100 Cimetidina 0 1 1 16 L dopa 5 Dopamina 19 Epinefrina 1 Eritromicina 0 2 2 0 10 Glutation 30 Ibuprofeno 0 5 4 2 50 Isoniacida 0 1 0 7 4 a cetoglutarato 5 Cetoprofen 50 Meticilina 100 Metotrexato 0 1 0 5 Metildopa 0 1 0 5 0 5 Metronidazol 0 1 5 Nafcilina 1
25. dos con los l mites de aceptaci n Otros controles basados en plasma o suero humanos pueden no ser compatibles Los materiales de control de calidad deben almacenarse conforme a las instrucciones del prospecto incluido con los controles Si los controles dan resultados fuera de los l mites repita una vez Si siguen fuera de los l mites llame al servicio de asistencia t cnica Si los controles incumplen los l mites de la etiqueta no utilice sus resultados Consulte el Manual del usuario de Piccolo o Piccolo xpress para obtener informaci n m s detallada sobre la realizaci n el registro la interpretaci n y la extrapolaci n de los resultados de control Laboratorios exonerados Abaxis recomienda las pruebas de control de la siguiente manera e Al menos cada 30 d as e Siempre que hayan cambiado las condiciones de laboratorio de manera significativa por ejemplo traslado del Piccolo a otro lugar o cambios en el control de temperatura e Cuando se indique la formaci n o nueva formaci n del personal e Con cada lote nuevo an lisis exonerados por CLIA en laboratorios en estado exonerado Laboratorios no exonerados Abaxis recomienda que las pruebas de control se hagan conforme a las recomendaciones federales estatales y locales 9 Resultados El analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress calcula e imprime autom ticamente las concentraciones de analitos en la muestra Los detalles de los c lcul
26. e referencia 2 Media 11 8 11 8 DE 0 39 0 40 VR 3 3 3 4 Creatinina mg dl Nivel de referencia 1 Media 1 1 1 1 DE 0 14 0 14 VR 12 5 13 1 Nivel de referencia 2 Media 5 2 5 2 DE 0 23 0 27 VR 4 4 5 2 Gamma glutamiltransferasa U l Nivel de referencia 1 Media 25 25 DE 0 59 0 74 VR 2 34 2 94 Nivel de referencia 2 Media 106 106 DE 1 52 2 29 VR 1 43 2 15 Glucosa mg dl Nivel de referencia 1 Media 66 66 DE 0 76 1 03 VR 1 1 1 6 Nivel de referencia 2 Media 278 278 DE 2 47 3 84 VR 0 9 1 4 Page 83 of 114 Tabla 6 Precisi n N 80 cont Par metro Bilirrubina total mg dl Nivel de referencia 1 Media DE VR Nivel de referencia 2 Media DE VR Prote nas totales g dl Nivel de referencia 1 Media DE VR Nivel de referencia 2 Media DE VR Nitr geno ureico sangu neo mg dl Nivel de referencia 1 Media DE VR Nivel de referencia 2 Media DE VR cido rico mg dl Nivel de referencia 1 Media DE VR Nivel de referencia 2 Media DE VR Correlaci n Intraserial 0 8 0 06 8 0 5 2 0 09 1 7 6 8 0 05 0 8 4 7 0 09 2 0 0 35 1 9 65 1 06 1 6 3 8 0 15 4 0 7 5 0 24 3 2 Total 0 8 0 07 9 3 3 2 0 15 2 8 6 8 0 08 1 2 4 7 0 09 2 0 19 0 40 2 1 65 1 18 1 8 3 8 0 18 4 8 7 5 0 29 3 9 Las muestras de suero y de sangre entera heparinizadas de los pacientes se ext
27. he blood serum or plasma of man Clin Chim Acta 1979 98 163F 174F McNeely MDD Amylase En Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ comps St Louis The C V Mosby Company 1989 906 909 Zinterhofer L y otros Nephelometric determination of pancreatic enzymes I Amylase Clin Chim Acta 1973 43 5 12 Somogyi M Modifications of two methods for the assay of amylase Clin Chem 1960 6 23 35 Gillard BK Markman HC Feig SA Direct spectro photometric determination of a amylase activity in saliva with p nitrophenyl a maltoside as substrate Clin Chem 1977 23 2279 2282 Wallenfels K y otros The enzymic synthesis by transglucosylation of a homologous series of glycosidically substituted malto oligosaccharides and their use as amylase substrates Carbohydrate Res 1978 61 359 368 Karmen A A note on the spectrophotometric assay of glutamic oxalacetic transaminase in human blood serum J Clin Invest 1955 34 131 133 Bergmeyer HU y otros Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1977 23 887 899 Bergmeyer HU Herder M Moss DW Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1978 24 720 721 Kramer B Tisdall FF A simple technique for the determination
28. imetrische Bestimmungsmethode des Eiweisses Z Anal Chem 1914 53 242 245 Weichselbaum TE An accurate and rapid method for the determination of proteins in small amounts of blood serum and plasma Am J Clin Path 1946 16 40 49 Doumas BT y otros A candidate reference method for determination of total protein in serum I Development and validation Clin Chem 1981 27 1642 1650 Fales FW Urea in serum direct diacetyl monoxime method En Selected Methods of Clinical Chemistry vol 9 Faulkner WR Meites S comps Washington D C American Association for Clinical Chemistry 1982 365 373 Van Slyke DD Cullen GE A permanent preparation of urease and its use in the determination of urea J Biol Chem 1914 19 211 228 Fawcett JK Scott JE A rapid and precise method for the determination of urea J Clin Pathol 1960 13 156 159 Talke H Schubert GE Enzymatische Harnstoffbest immung in Blut und Serum im optischen Test nach Warburg Klin Wochensch 1965 43 174 175 Hallett CJ Cook JGH Reduced nicotinamide adenine dinucleotide coupled reaction for emergency blood urea estimation Clin Chim Acta 1971 35 33 37 Patton CJ Crouch SR Spectrophotometric and kinetics investigation of the Berthelot reaction for the determination of ammonia Anal Chem 1977 49 464 469 Sampson EJ y otros A coupled enzyme equilibrium method for measuring urea in serum optimization and evaluation of the AACC study group on urea candidate reference method
29. irecta como indirectamente La reacci n de diacetil monoxima el nico m todo directo para medir la urea es la usada m s com nmente pero emplea reactivos peligrosos Los m todos indirectos miden el amon aco creado a partir de la urea el uso de la enzima ureasa aument la especificidad de estas pruebas El amon aco se cuantifica mediante distintos m todos entre ellos la nesslerizaci n titulaci n cida la t cnica de Berthelot y las reacciones enzim ticas acopladas Sin embargo los procedimientos de Berthelot catalizados son err ticos cuando se mide el amon aco Las reacciones enzim ticas acopladas son r pidas tienen una elevada especificidad para el amon aco y son las usadas habitualmente Una de estas reacciones fue propuesta como posible m todo de referencia En la reacci n de acoplamiento de enzimas la ureasa hidroliza la urea en amon aco y di xido de carbono Al combinarse el amon aco con 2 oxoglutarato y nicotinamida adenina dinucle tido reducida NADH la enzima glutamato deshidrogenasa GLDH oxida la NADH en NAD Ureasa Urea HO gt gt NH CO GLDH NH 2 oxoglutarato NADH gt L glutamato H2O NAD El indice de cambio de la diferencia de absorbancia entre 340 nm y 405 nm se debe a la conversi n de NADH en NAD y es directamente proporcional a la cantidad de urea presente en la muestra Page 73 of 114 Acido rico AU Los primeros m todos cuanti
30. itos ALT alb mina ALP AMY AST calcio creatinina GGT glucosa bilirubina total prote na total BUN y UA Los participantes no ten an ninguna formaci n en la realizaci n del an lisis Se reclutaron en total aproximadamente 60 participantes de 3 centros que constitu an una poblaci n suficientemente diversa estudios edad sexo etc a efectos demogr ficos En las tablas siguientes se muestra un resumen del rendimiento de cada analito Alanina aminotransferasa ALT Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 45 4 U I 98 9 U l 184 3 U L VR 3 1 1 7 1 5 Intervalo observado 42 53 96 103 175 191 Porcentaje de resultados 98 4 100 100 en el intervalo 61 62 62 62 62 62 15 0 95 IC 91 3 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Este porcentaje esta basado en el supuesto de que es imposible distinguir correctamente entre valores normales y anormales cuando el error es mayor de una cuarta parte de intervalo normal Se utiliz el intervalo 10 U l 47 U D Alb mina Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 3 0 g dl 3 5 g dl 4 2 g dl VR 2 1 2 5 1 8 Intervalo observado 2 9 3 2 3 3 3 7 4 0 4 4 Porcentaje de resultados 100 100 100 en el intervalo 62 62 62 62 62 62 12 5 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Fosfatasa alcalina ALP Nivel 1 Nivel 2 Nive
31. l 3 N 62 62 62 Media 94 5 U I 171 5 U L 337 5 UA VR 5 2 3 2 2 4 Intervalo observado 85 106 160 184 287 388 Porcentaje de resultados 100 100 100 en el intervalo 62 62 62 62 62 62 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Amilasa AMY Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 72 1 UN 126 9 U I 260 0 U I VR 2 4 2 1 1 9 Intervalo observado 67 75 120 133 248 273 Porcentaje de resultados 100 100 100 en el intervalo 62 62 62 62 62 62 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Page 86 of 114 Aspartato aminotransferasa AST Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 56 0 120 4 276 3 VR 2 4 1 1 1 0 Intervalo observado 54 60 117 124 266 285 Porcentaje de resultados 100 100 100 en el intervalo 62 62 62 62 62 62 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Calcio Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 8 0 10 5 13 1 VR 1 7 1 5 1 4 Intervalo observado 7 7 8 4 10 1 11 0 12 6 13 4 Porcentaje de resultados 100 100 100 en el intervalo 62 62 62 62 62 62 6 3 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Creatinina Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 0 89 2 07 6 89 VR 11 0 5 0 1 6 Intervalo observado 0 7 1 2 1 8 2 3 6
32. lb mina _ _ Complejo BCP Alb mina pH cido La alb mina unida es proporcional a la concentraci n de alb mina en la muestra Se trata de una reacci n de punto final que se mide como la diferencia en la absorbancia entre 600 nm y 550 nm Fosfatasa alcalina ALP Las t cnicas para medir la fosfatasa alcalina fueron creadas hace m s de 60 a os En estos momentos a algunos de estos m todos espectrofotom tricos de criterio de valoraci n o de dos puntos se los considera obsoletos o demasiado complicados El uso de p nitrofenil fosfato p NPP aument la velocidad de la reacci n La fiabilidad de esta t cnica aument de manera considerable con el uso de un amortiguador de i n met lico para mantener la concentraci n de iones de magnesio y zinc en la reacci n El m todo de referencia de la Asociaci n Norteamericana de Quimica Cl nica AACC usa el p NPP como sustrato y un amortiguador con i n met lico El procedimiento de Piccolo se modific a partir de los m todos AAC y IFCC La fosfatasa alcalina hidroliza el p NPP en un amortiguador con i n met lico y forma p nitrofenol y fosfato ALP p nitrofenil fosfato gt 3 gt p Nitrofenol fosfato Zn Mg La cantidad de ALP en la muestra es proporcional al indice de aumento de la diferencia de absorbancia entre 405 nm y 500 nm Page 70 of 114 Amilasa AMY Se desarrollaron 200 pruebas distintas par
33. lisis deber analizarse por otro m todo de prueba homologada o ser enviado a un laboratorio de referencia No diluya la muestra ni vuelva a analizarla en el analizador qu mico sangu neo Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Advertencia Pruebas exhaustivas del sistema qu mico sangu neo Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress han demostrado que en casos muy raros la muestra aplicada al disco reactivo podr a no fluir con facilidad a la c mara de la muestra Debido al flujo irregular puede analizarse una cantidad inadecuada de muestra y los resultados obtenidos pueden quedar fuera de los valores de referencia La muestra puede volverse a analizar con un nuevo disco reactivo Interferencia Se probaron sustancias que interfieren con los sustratos Se prepararon mezclas de suero humano La concentraci n a la cual se prob cada interferente potencial se bas en los niveles de prueba en NCCLS EP7 P Efectos de las sustancias end genas Los interferentes fisiol gicos hem lisis ictericia y lipemia causan cambios en las concentraciones informadas de algunos par metros Los ndices de la muestra son impresos en la base de cada tarjeta de resultados para informar al usuario sobre los niveles de obst culos presentes en cada muestra El sistema qu mico sangu neo Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress suprime cualquier resultado que sea afectado por m s del 10 de interferencia por hem lisis lipidemia o icteri
34. ltados de la bilirrubina total pueden verse afectados de manera negativa por la fotodegradaci n Las muestras de sangre entera que no se analicen de inmediato se deben almacenar en la oscuridad por per odos que no excedan los 60 minutos Si la muestra no se puede analizar dentro de dicho per odo debe separarse en plasma o suero y almacenarse en un tubo de muestra con tapa en la oscuridad a baja temperatura e Para las muestras de sangre o plasma use s lo tubos de recolecci n de muestras tratados con heparina litio tap n verde Para las muestras de suero use tubos para obtenci n de muestras sin aditivo tap n rojo o tubos separadores de suero tap n rojo 0 rojo negro e Comience la prueba en los 10 minutos siguientes a la transferencia de la muestra al disco reactivo S Procedimiento Materiales suministrados e Un disco reactivo qu mico general 13 de Piccolo PN 400 1029 una caja de discos PN 400 0029 Page 76 of 114 Materiales necesarios pero no suministrados e Analizador qu mico sangu neo de Piccolo o analizador qu mico Piccolo xpress e Con cada analizador qu mico de sangre Piccolo o analizador qu mico Piccolo xpress se suministran pipetas de transferencia de muestras volumen fijo de aproximadamente 100 ul y puntas y pueden solicitarse repuestos a Abaxis e Reactivos de control disponibles comercialmente recomendados por Abaxis p ngase en contacto con el Servicio T cnico de Abaxis para solicitar materiales
35. method for y glutamyltransferase J Clin Chem Clin Biochem1983 21 633 646 Folin O Wu H A system of blood analysis J Biol Chem 1919 38 81 110 Somogyi M A reagent for the copper iodometric determination of very small amounts of sugar J Biol Chem 1937 117 771 776 Nelson N A photometric adaptation of the Somogyi method for the determination of glucose J Biol Chem 1944 153 375 380 Kaplan LA Glucose En Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ comps St Louis The C V Mosby Company 1989 850 856 Malloy HT Evelyn KA The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter J Biol Chem 1937 119 481 490 Meites S Bilirubin direct reacting and total modified Malloy Evelyn method En Selected Methods of Clinical Chemistry Vol 9 Faulkner WR Meites S comps Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1982 119 124 58 Murao S Tanaka N A new enzyme bilirubin oxidase produced by Myrothecium verrucaria MT 1 Agric Biol Chem 1981 45 2383 2384 Osaki S Anderson S Enzymatic determination of bilirubin Clin Chem 1984 30 971 Abstract Perry B y otros of total bilirubin by use of bilirubin oxidase Clin Chem 1986 32 329 332 Koller A Kaplan LA Total serum protein En Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ comps St Louis The C V Mosby Company 1989 1057 1060 Reigler E Eine kolor
36. nazo III para formar un complejo de tintura de calcio Ca Arsenazo III p Complejo Ca Arsenazo III La reacci n de punto final es controlada a 405 nm 467 nm y 600 nm La cantidad de calcio total en la muestra es proporcional a la absorbancia Creatinina CRE El m todo Jaffe presentado en 1886 sigue siendo el m todo usado con mayor frecuencia para la determinaci n de los niveles de creatinina en la sangre El m todo de referencia actual combina el uso de tierra de bat n floridina con la t cnica Jaffe para incrementar la especificidad de la reacci n Se han desarrollado m todos enzim ticos que son m s espec ficos para la creatinina que las diversas modificaciones de la t cnica de Jaffe Los m todos que usan a la enzima creatinina amidohidrolasa eliminan el problema de la interferencia del i n amon aco encontrado en las t cnicas que utilizan creatinina iminohidrolasa Page 71 of 114 En las reacciones de acoplamiento de enzimas la creatinina amidohidrolasa hidroliza la creatinina en creatina Una segunda enzima la creatina amidinohidrolasa cataliza la formaci n de sarcosina a partir de la creatina La sarcosina oxidasa provoca la oxidaci n de sarcosina a glicina formaldeh do y per xido de hidr geno H202 En un acabado Trinder la peroxidasa cataliza la reacci n entre el per xido de hidr geno 2 4 6 tribromo 3 acido hidroxinbenzoico TBHBA y 4 aminoantipirina 4 AAAP en una tintura r
37. o 1 mg dl 0 1 mmol l Precisi n Se realizaron estudios de precisi n que utilizaron las recomendaciones NCCLS EP5 T2 Se determinaron los resultados de precisi n total e intraserial evaluando dos niveles del material de referencia Se realizaron los controles por duplicado dos veces durante 20 d as a lo largo de un per odo de cuatro semanas Los resultados de los estudios de precisi n se muestran en la tabla 6 Tabla 6 Precisi n N 80 Par metro Intraserial Total Alanina aminotranferasa U l Nivel de referencia 1 Media 21 21 DE 2 76 2 79 VR 13 4 13 5 Nivel de referencia 2 Media 52 52 DE 2 70 3 25 VR 5 2 6 2 Alb mina g dl Nivel de referencia 1 Media 5 6 5 6 DE 0 09 0 11 VR 1 7 2 1 Nivel de referencia 2 Media 3 7 3 7 DE 0 07 0 11 VR 2 0 2 9 Fosfatasa alcalina U l Nivel de referencia 1 Media 39 39 DE 1 81 2 29 VR 4 6 5 8 Nivel de referencia 2 Media 281 281 DE 4 08 8 75 VR 1 5 3 1 Amilasa U l Nivel de referencia 1 Media 46 46 DE 2 40 2 63 VR 5 2 Sid Nivel de referencia 2 Media 300 300 DE 11 15 11 50 VR 3 7 3 8 Page 82 of 114 Tabla 6 Precision N 80 cont Parametro Intraserial Total Aspartato aminotransferasa U l Nivel de referencia 1 Media 47 49 DE 0 98 0 92 VR 2 1 1 9 Nivel de referencia 2 Media 145 147 DE 1 83 1 70 VR 1 3 1 2 Calcio mg dl Nivel de referencia 1 Media 8 6 8 6 DE 0 21 0 25 VR 2 4 2 9 Nivel d
38. of calctum and magnesium in small amounts of serum J Biol Chem 1921 47 475 481 Clark EP Collips JB A study of the Tisdall method for the determination of blood serum calcium with suggested modification J Biol Chem 1925 63 461 464 Katzman E Jacobi M The determination of serum calcium by titration with ceric sulfate J Biol Chem 1937 118 539 544 Cali JP et al A reference method for the determination of total calcium in serum En GR Cooper comp Selected Methods of Clinical Chemistry vol 8 Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1997 3 8 Kessler G M Wolfman An automated procedure for the simultaneous determination of calcium and phosphorus Clin Chem 1964 10 686 703 Michaylova V Ilkova P Photometric determination of micro amounts of calcium with arsenazo III Anal Chim Acta 1971 53 194 198 Scarpa A y otros Metallochromic indicators of ionized calcium Ann NY Acad Sci 1978 307 86 112 Knoll VE Stamm D Spezifische kreatininbest immung im serum Z Klin Chem Klin Biochem 1970 8 582 587 Haeckel R Simplified determinations of the true creatinine concentration in serum and urine J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 385 394 Moss GA Bondar RJL Buzzelli DM Kinetic enzymatic method for determining serum creatinine Clin Chem 1975 21 1422 1426 Page 89 of 114 13 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 61 62 63 64 Chaney
39. oja de quinoneimina Se agregan ferrocianuro de potasio y ascorbato oxidasa a la mezcla de la reacci n para reducir al m nimo la interferencia potencial de la bilirrubina y el cido asc rbico respectivamente Creatinina amidohidrolasa Creatinina HO ______ _ gt Creatina Creatina amidinohidrolasa Creatina HO gt gt Sarcosina Urea Sarcosina oxidasa Sarcosina H O O __ Glicina Formaldehido H O Peroxidasa H20 TBHBA 4 AAP _ Coloraci n roja de quinoneimina HO Se utilizan dos cubetas para determinar la concentraci n de creatinina en la muestra La creatina end gena se mide en la cubeta de referencia que es restada de la creatina end gena combinada y la creatina formada a partir de las reacciones enzim ticas en la cubeta de prueba Una vez eliminada la creatina end gena de los c lculos la concentraci n de creatinina es proporcional a la intensidad del color rojo producido La reacci n de punto final se mide como la diferencia en la absorbancia entre 550 nm y 630 nm Gamma glutamiltransferasa GGT Los primeros m todos cuantitativos desarrollados para medir la gamma glutamiltransferasa GGT precisaban una segunda reacci n para formar un colorante azoico que se combinaba con un crom foro El cambio a L y glutamil p nitroanilida como sustrato en la reacci n elimin el paso de formaci n del colorante Debido a la pobre solubilidad y estabilidad de
40. orcionadas en el Manual del operador del analizador qu mico de sangre Piccolo o Piccolo xpress Debe desechar los discos no usados en los 20 minutos siguientes a la apertura de la bolsa Almacenamiento Almacene los discos de reactivo en sus bolsas selladas a 2 8 C 36 46 F No exponga los discos abiertos o sin abrir a la luz solar directa o a temperaturas superiores a los 32 C 90 F Los discos de reactivo pueden ser usados hasta la fecha de caducidad indicada en el paquete La fecha de caducidad tambi n aparece codificada en el c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras Si los reactivos han caducado aparecer un mensaje de error en la pantalla del analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Page 75 of 114 Indicaciones de inestabilidad deterioro del disco reactivo Una bolsa desgarrada o da ada puede hacer que el rotor sin uso entre en contacto con la humedad lo que puede afectar el rendimiento del reactivo de manera negativa No utilice un rotor de una bolsa da ada 6 Instrumento Consulte el Manual del usuario del analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress para obtener informaci n completa acerca del uso del analizador 7 Recolecci n y preparaci n de las muestras En la secci n Obtenci n de muestras del manual del operador del analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress se describen la
41. os del criterio de valoraci n y velocidad de la reacci n se encuentran en el Manual del usuario del analizador qu mico en cuesti n En el manual del usuario se detalla tambi n la interpretaci n de los resultados stos se imprimen en tarjetas de resultado proporcionadas por Abaxis La parte posterior de las tarjetas de resultados es adhesiva para facilitar su colocaci n en los archivos del paciente Page 77 of 114 10 Limitaciones del procedimiento Las limitaciones generales del procedimiento se detallan en el Manual del operador del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress El nico anticoagulante recomendado para uso con el sistema qu mico de sangre Piccolo o el sistema qu mico Piccolo xpress es heparina litio No utilizar heparina s dica Abaxis realiz estudios que demuestran que EDTA fluoruro oxalato y cualquier anticoagulante que contenga ones de amonio interferir n al menos con un producto qu mico contenido en el disco reactivo qu mico general 13 de Piccolo Las muestras con hematocritos que superen el 62 65 del volumen concentrado de eritrocitos una fracci n de volumen de 0 62 0 65 pueden dar resultados falsos Las muestras con un hematocrito elevado pueden ser analizadas como hemolizadas Estas muestras pueden ser centrifugadas para obtener plasma y luego realizar la prueba con un nuevo disco reactivo Todo resultado para una prueba particular que supere los valores del an
42. rajeron de dos sitios Las muestras de sangre entera se analizaron con el analizador qu mico de sangre de Piccolo en los sitios de campo y las muestras s ricas se analizaron mediante m todos de comparaci n En los dos casos se utilizaron los resultados de las pruebas de las muestras s ricas con Piccolo y stos fueron indicados convenientemente en la tabla En algunos casos se usaron muestras muy y poco enriquecidas para cubrir el rango din mico Todas las muestras fueron probadas en singlicato el mismo d a En la tabla 7 se muestran las estad sticas de correlaci n representativas Page 84 of 114 Tabla 7 Correlaci n del analizador qu mico de sangre de Piccolo con los m todos de comparaci n Coeficiente de Pendiente Tnterc pia VER N L mites de M todo de correlaci n la muestra comparaci n Alanina Aminotransterasa 0 981 0 905 1 3 3 21 86 10 174 Paramax UN 0 985 0 946 2 5 2 84 67 10 174 Technicon PE 0 854 1 001 0 3 0 22 261 1 1 5 3 Paramax a 0 896 0 877 0 1 0 21 100 1 5 5 0 Beckman Fosfatasa alcalina 0 988 0 970 5 9 3 97 99 27 368 Paramax UN 0 929 1 136 17 6 4 79 80 26 150 Technicon 0 979 0 692 4 7 3 11 99 11 92 Paramax palace CU 0 963 1 065 4 1 3 47 80 19 118 Technicon M ra 0 93 0 87 53 2 76 159 13 111 Paramax 1 0 0 97 3 0 1 9 46 13 252 DAX M UN Calcio mg dl 0 991 0 990 0 4 0 17 25 5 2 11 9 Paramax SES 0 673 0 742 1 8 0 22 81 8 1 9 9 Beckman Creatinina mg dl 0 993 0 926 0 0 0 15 260 0 4 14 7 Paramax 8 0
43. rencia con bilirrubina y la absorbancia final se obtiene de la cubeta de prueba con bilirrubina La cantidad de bilirrubina en la muestra es proporcional a la diferencia entre las mediciones inicial y final de la absorbancia Prote na total TP El m todo de las prote nas totales es una modificaci n de la reacci n de biuret reconocida por su precisi n exactitud y especificidad Originariamente desarrollada por Riegler y modificada por Weichselbaum Doumas et al propusieron una reacci n de biuret como posible m todo de referencia para la determinaci n de prote nas totales En la reacci n de biuret la soluci n de prote nas es tratada con iones c pricos Cu ID en un medio fuertemente alcalino Se agregan tartrato s dico pot sico y yoduro de potasio para impedir la precipitaci n de hidr xido de cobre y la autorreducci n del cobre respectivamente Los iones Cu II reaccionan con uniones peptidicas entre los tomos de ox geno carbonilo y nitr geno amida para formar un complejo Cu prote na coloreado OH Prote na total Cu II Complejo Cu Prote na La cantidad de prote nas totales en la muestra es directamente proporcional a la absorbancia del complejo Cu prote na La prueba de prote na total es una reacci n de valoraci n final y la absorbancia se mide como la diferencia en la absorbancia entre 550 nm y 850 nm Nitr geno ureico sangu neo BUN La urea puede ser medida tanto d
44. s t cnicas para la obtenci n de las muestras e El tama o m nimo de muestra requerido es 100 ul de sangre entera heparinizada plasma heparinizado suero o material de referencia La c mara de muestra del disco reactivo puede contener hasta 120 ul de muestra e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n deben ser homogeneizadas antes de transferir una muestra al disco reactivo Invierta el tubo de recolecci n con suavidad varias veces antes de transferir la muestra No sacuda el tubo de recolecci n esto puede causar hem lisis e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n se deben analizar dentro de los 60 minutos posteriores a la extracci n Las concentraciones de glucosa se ven afectadas por el tiempo transcurrido desde que el paciente ingiri alimentos y el tipo de muestra obtenida de l Para determinar los resultados de glucosa con precisi n deben obtenerse muestras de un paciente que haya ayunado por lo menos durante 12 horas Las concentraciones de glucosa disminuyen aproximadamente 5 12 mg dl por hora en muestras no centrifugadas almacenadas a temperatura ambiente e Larefrigeraci n de muestras de sangre entera puede provocar cambios significativos en las concentraciones de aspartato aminotransferasa creatinina y glucosa La muestra puede separarse en plasma o suero y almacenarse en tubos de ensayo tapados a 2 8 C 36 46 F si la muestra no se analiza dentro de los 60 minutos e Los resu
45. sm Glucosa GLU Oxaloacetato 132 11 dism Piruvato 0 3 0 9 44 13 dism Bilirrubina total TBIL Dopamina 19 55 dism L dopa 5 17 dism cido rico cido asc rbico 0 8 1 2 20 13 dism Epinefrina 1 14 dism L dopa 5 78 dism Metildopa 0 1 0 5 0 5 12 dism Rifampina 0 4 3 1 5 14 dism cido salic lico 15 30 25 20 dism aum aumento dism disminuci n Consulte la bibliograf a para obtener informaci n adicional sobre posibles interferencias qu micas Page 80 of 114 11 Valores esperados Se usaron muestras de un total de 193 adultos varones y mujeres analizadas en el analizador quimico sanguineo de Piccolo para determinar los intervalos de referencia para ALT ALB ALP calcio creatinina glucosa TBIL TP y BUN Se usaron muestras de un total de 186 adultos varones y mujeres para determinar el intervalo de referencia de la AST y cido rico Se usaron muestras de un total de 131 adultos varones y mujeres para determinar el intervalo de referencia de la GGT Estos intervalos s lo se ofrecen como gu a Se recomienda que su consultorio o instituci n establezca los intervalos normales para su poblaci n de pacientes en particular Tabla 4 Intervalos de referencia Piccolo Sustrato Unidades comunes Unidades SI Alanina aminotransferasa ALT 10 47 U L 10 47 U l Albumina ALB 3 3 5 5 g dl 33 55 g l Fosfatasa alcalina ALP Mujer 42 141 UN 42 141 U l Var n 53 128 U I 53 128 U l Amilasa
46. tativos para determinar las concentraciones de cido rico en sangre se basaron en la reducci n del cido fosfot ngstico a azul de tungsteno en soluciones alcalinas de cido rico Se desarroll una prueba de cido rico con mayor especificidad utilizando la enzima uricasa espec fica para el cido rico Desde entonces este m todo ha pasado a ser la t cnica qu mica cl nica de referencia para el cido rico El m todo de la uricasa se acopla a trav s de un acabado de peroxidasa de Trinder En este m todo la uricasa cataliza la oxidaci n de cido rico a alanto na y per xido de hidr geno La peroxidasa cataliza la reacci n entre el per xido de hidr geno H20 la 4 aminoantipirina 4 AAP y el cido 3 5 dicloro 2 hidroxibenzenesulf nico DHBSA en una coloraci n de rojo quinoneimina Se agrega ferrocianuro s dico y ascorbato oxidasa a la mezcla de la reacci n para minimizar la potencial interferencia de bilirrubina y cido asc rbico Uricasa cido rico O HO Alanto na CO H 0 Peroxidasa H 0 4 AAP DHBSA gt 3 coloraci n de quinoneimina H O La cantidad de cido rico en la muestra es directamente proporcional a la absorbancia de la coloraci n de quinoneimina La absorbancia final de esta reacci n de punto final se mide biocrom ticamente a 500 nm y 600 nm 4 Principios del procedimiento Consulte el Manual del usuario del analiz
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