DAKO ChemMateä Detection Kit Peroxidase/DAB, Rabbit/Mouse
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1. C EnVision G 2 Doublestain System Rabbit Mouse DAB Permanent Red N de cat logo K5361 2 edici n Para su uso con anticuerpos primarios de conejo y de rat n Para 150 pruebas 114143 002 K5361 ES SGA 13 10 06 p g 1 11 ndice P gina USO PESVISTO a ia 3 Resumen y EXplICACION eo colita ol La 3 Principios del procediMiento moasa a a aA A 3 o a a a a a a a E 4 Reactivos suministrados soeren e E ti a E 4 Material necesario pero no SUMINISITAOO oococcoccocconconccnocnccnoncononncnnonnnnnonenncnnonnnnnnnnonennnnos 5 ETECAUCION ES at no da 5 Almacenam nN Oceno ricos oocen ao cl nEds 6 Preparaci n de las muestras oocoocconconcccccconcccnonconnoncnnnnnnnnonnnnnnnnnnnnnrnnnnnnnnnnnrnnnnnnnnnnrnnnnnnanennennnnss 6 ProcediMIEN Osmanien A a T A Preparaci n de los reactivos coococcocconccocconionconconnononconnonnonnnnnnnnnnnnonnnnnonnnnonnnanennnnnnnnnnos T B Procedimiento de tinci n para uso manual oocoococcccccccccnccnccncnnncnnononnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnns T C Procedimiento de tinci n para Dako Autostainer Instruments occoccocconcnnonnonioninninnonnos 9 interpretacion de lOS Tesultados caricia 11 REIGrEnNCIaS noe ni 11 114143 002 K5361 ES SGA 13 10 06 p g 2 11 Uso previsto Para uso diagn stico in vitro EnVision G 2 Doublestain System est indicado para su uso en inmunocitoqu mica con anticuerpos primarios de rat n o de conejo de Dako para la detecci n de ant2. Elimine el exceso de tamp n de lavado y limpie los portaobjetos de la forma antes descrita Aplique 200 uL de DAB Working Solution para cubrir la muestra Inc bela durante 5 15 minutos Los tiempos de incubaci n ptimos pueden variar y deber n determinarse en cada laboratorio en particular Enjuague ligeramente la muestra con agua destilada o desionizada de una botella de lavado no apunte el chorro directamente sobre el tejido Recoja los residuos de la DAB Working Solution en un recipiente para materiales peligrosos para su correcta eliminaci n Si el procedimiento de tinci n se ha de interrumpir los portaobjetos se pueden mantener en un ba o de de tamp n de lavado despu s de la incubaci n de la DAB Working Solution hasta 1 hora a temperatura ambiente 20 25 C sin modificar el resultado de la tinci n Paso 5 Vial 5 Doublestain Block Elimine el exceso de tamp n de lavado y limpie los portaobjetos de la forma antes descrita Aplique 200 uL de Doublestain Block para cubrir la muestra Inc bela durante 3 1 minutos Enjuague la muestra de la forma descrita en el paso 1 Paso 6 Anticuerpo primario n 2 o reactivo de control negativo n 2 Elimine el exceso de tamp n de lavado y limpie los portaobjetos de la forma antes descrita Aplique 200 uL de anticuerpo primario de rat n o conejo diluido adecuadamente o de reactivo de control negativo v ase la secci n A 3 para cubrir la muestra Inc bela durante 10 1 minutos En
3. Principios del procedimiento El procedimiento consiste en una tinci n doble secuencial en la que el primer ant geno se visualiza mediante HRP DAB y el segundo ant geno mediante AP Permanent Red El uso del Dual Endogenous Enzyme Block inhibe la actividad de la fosfatasa alcalina end gena de la peroxidasa y de la pseudoperoxidasa presente en algunos tejidos Tras el bloqueo de las enzimas end genas el primer paso consiste en la incubaci n de la muestra con un anticuerpo primario de rat n o de conejo diluido adecuadamente seguido por la incubaci n con el reactivo Polymer HRP Este reactivo es un pol mero de dextrano conjugado con HRP que tambi n est recubierto de anticuerpos frente a las inmunoglobulinas de conejo y de rat n La reacci n se visualiza mediante el crom geno DAB Tras el paso de bloqueo con el reactivo Doublestain Block la muestra se incuba con un segundo anticuerpo primario de rat n o de conejo diluido adecuadamente En el siguiente paso se a ade Rabbit Mouse LINK un pol mero de dextrano con anticuerpos frente a las inmunoglobulinas de conejo y de rat n seguido por la incubaci n con el reactivo Polymer AP El Permanent Red Chromogen permite visualizar la segunda reacci n Todos los reactivos espec ficos excepto los anticuerpos primarios se incluyen en el kit 114143 002 K5361 ES SGA 13 10 06 p g 3 11 Reactivos Reactivos suministrados Los materiales abajo indicados son suficientes para realizar 1
4. comparaci n con sustancias con estructuras similares Como regla general los menores de edad no pueden manipular este producto Debe informarse debidamente a los usuarios acerca del procedimiento adecuado de trabajo las propiedades peligrosas del producto y las instrucciones de seguridad necesarias Le rogamos que consulte la hoja de datos de seguridad MSDS para obtener informaci n m s detallada 5 Este producto contiene azida s dica NaNz un compuesto qu mico altamente t xico en su forma pura En la concentraci n en la que se encuentra en el producto aunque no est clasificada como peligrosa la azida s dica puede reaccionar con el cobre o el plomo de las ca er as para formar acumulaciones de azidas met licas altamente explosivas Una vez desechado deje correr abundante cantidad de agua para evitar acumulaciones de azidas met licas en las ca er as 6 Utilice el equipo de protecci n personal adecuado para evitar el contacto con los ojos y la piel 7 La soluci n no utilizada debe desecharse con arreglo a las normativas locales provinciales y nacionales Almacenamiento Almacene el kit a una temperatura de 2 8 C No utilice el producto despu s de la fecha de caducidad impresa en el kit No intercambie componentes del kit de lotes diferentes Si los reactivos se almacenan bajo condiciones diferentes a las especificadas dichas condiciones deben ser verificadas por el usuario Si observa una tinci n inesperada que n
5. muestras secas pueden causar un aumento de la tinci n inespec fica B 2 Protocolo de tinci n Paso 1 Vial 1 Dual Endogenous Enzyme Block Elimine el exceso de tamp n de lavado y limpie con cuidado alrededor de la muestra para eliminar cualquier resto de l quido y mantener el reactivo en la zona requerida Aplique 200 uL de Dual Endogenous Enzyme Block para cubrir la muestra Inc bela durante 5 1 minutos Enjuague suavemente la muestra con soluci n de tamp n de lavado de un frasco de lavado no dirija el flujo directamente sobre el tejido y col quela durante 5 minutos en un ba o de tamp n de lavado reci n preparado 114143 002 K5361 ES SGA 13 10 06 p g 7 11 Paso 2 Anticuerpo primario n 1 o reactivo de control negativo n 1 Elimine el exceso de tamp n de lavado y limpie los portaobjetos de la forma antes descrita Aplique 200 uL de anticuerpo primario de rat n o conejo o de reactivo de control negativo v ase la secci n A 3 para cubrir la muestra Inc bela durante 10 1 minutos Enjuague la muestra de la forma descrita en el paso 1 Paso 3 Vial 2 Polymer HRP Elimine el exceso de tamp n de lavado y limpie los portaobjetos de la forma antes descrita Aplique 200 uL de Polymer HRP para cubrir la muestra Inc bela durante 10 1 minutos Enjuague dos veces la muestra de la forma descrita en el paso 1 Paso 4 DAB Working Solution Prepare la DAB Working Solution de la forma descrita en la secci n A 1
6. 5 C antes de la inmunotinci n De la misma manera las incubaciones deben realizarse a temperatura ambiente No deje que las muestras se sequen durante el procedimiento de tinci n Las muestras secas pueden causar un aumento de la tinci n inespec fica Paso 1 Programaci n del Autostainer Instrument Antes de la primera aplicaci n del EnVision G 2 Doublestain System en el Dako Autostainer Instrument debe crearse una nueva plantilla Consulte la plantilla abajo indicada y el Manual del usuario del Autostainer Instrument correspondiente 114143 002 K5361 ES SGA 13 10 06 p g 9 11 Plantilla K5361 1 Rinse Butterf 2 End Enz Block 3 Rinse Butfer 4 Primary Antibody 5 Rinse Buffer 6 secondary Reagent f Rinse ol 6 Rinse Buffer 9 SwtchE 10 Substrate 11 Rinse Water 12 Swtch ff 13 Auxiliary 14 Rinse Buffer 15 Primary ntibody 16 Rinse Buffer 17 secondary Reagent 18 Rinse Buffer 19 Rinse Buffer 20 Tertiary Reagent 21 Rinse Butterd 22 Rinse Buffer 2d Substrate Batch 25 Rinse Water 26 Swtch NOTA Antes de cargar los portaobjetos de acuerdo con la PROGRAM STAINING RUN SCREEN deben a adirse a la lista de reactivos los siguientes reactivos Le rogamos que consulte la Tabla 1 para obtener el nombre el paso de la plantilla y el tempo de incubaci n y el Manual del usuario del Autostainer Instrument correspondiente Tabla 1 Modificaciones necesarias de la li
7. 50 ensayos El n mero de los ensayos se basa en el uso de 200 uL de cada reactivo por ensayo Vial 1 Vial 2 Vial 3 Vial 4 Vial 5 Vial 6 Vial 7 Vial 8 114143 002 3x11 mL 3x11 mL 3x11 mL 1x 1 5 mL 3x11 mL 3x11 mL 3x11 mL 3x11 mL Dual Endogenous Enzyme Block Listo para su uso Soluci n de bloqueo enzim tico end geno que contiene 0 5 de per xido de hidr geno detergentes inhibidores enzim ticos y conservante pH 2 Polymer HRP Listo para su uso Pol mero de dextrano conjugado con peroxidasa de r bano e inmunoglobulinas aisladas por afinidad Se suministra en tamp n Tris HCI que contiene prote na estabilizante y conservante DAB Substrate Buffer Soluci n de tamp n sustrato pH 7 5 que contiene lt 0 1 de per xido de hidr geno estabilizantes estimuladores y un agente antimicrobiano DAB Chromogen 5 de tetrahidrocloruro de 3 3 diaminobenzidina en soluci n cromog nica Doublestain Block Listo para su uso Soluci n inhibidora RABBIT MOUSE LINK Rabbit Mouse LINK Listo para su uso Pol mero de dextrano unido a anticuerpos secundarios frente a inmunoglobulinas de conejo y de rat n En soluci n tamponada que contiene prote na estabilizante y conservante Polymer AP Listo para su uso Pol mero de dextrano conjugado con fosfatasa alcalina e inmunoglobulinas aisladas por afinidad Se suministra en tamp n Tris HCI que contiene prote na estabili
8. ap Screen se recomienda mojar previamente los portaobjetos durante 5 minutos en el Tamp n de lavado Dako n de cat logo S3006 Coloque los viales en la racleta de reactivos de acuerdo con el Reagent Layout Map Tenga cuidado de cargar los reactivos y los vol menes correctos Preste especial atenci n a la carga de los viales con los anticuerpos primarios Purgue el agua y las bombas de tamp n Inicie el programa Despu s de que finalice el programa enjuague los portaobjetos con agua destilada o desionizada Para la contratinci n y el montaje consulte los pasos 10 y 11 de la secci n B 2 Interpretaci n de los resultados El ant geno reconocido por el anticuerpo primario n 1 se ti e con el crom geno DAB El uso del crom geno DAB produce un producto final de color marr n El ant geno reconocido por el anticuerpo primario n 2 se ti e con el crom geno Permanent Red El uso del crom geno Permanent Red produce un producto final de color rojo Ambos colores permiten su visualizaci n frente a la contratinci n con hematoxilina Si no hay presente ninguna tinci n inespec fica se reconocer como una tinci n difusa de color marr n o rojo en los portaobjetos tratados con el reactivo de control negativo Los n cleos se te ir n de color azul gracias a la contratinci n con hematoxilina Referencias 1 Sheehan DC HrAPchak BB Theory and practice of histotechnology St Louis CV Mosby Company 1980 Explicaci n de los s mbo
9. e agua destilada o desionizada reci n preparado Paso 10 Contratinci n instrucciones para la hematoxilina Sumerja los portaobjetos en un ba o de hematoxilina La duraci n de la incubaci n depende de la potencia de la hematoxilina utilizada Despu s de la contratinci n con hematoxilina enjuague bien en agua destilada o desionizada 114143 002 K5361 ES SGA 13 10 06 p g 8 11 Opcional Sumerja los portaobjetos con tejido en un ba o de 37 mmol L de agua amoniacal y enju guelos suavemente en agua destilada o desionizada durante 2 5 minutos El agua amoniacal 37 mmol L se prepara mezclando 2 5 mL de 15 mol L de hidr xido de amonio concentrado con 1 litro de agua destilada o desionizada El agua de amonio de 37 mmol L no utilizado puede almacenarse a temperatura ambiente 20 25 C en un frasco bien cerrado durante 12 meses Paso 11 Montaje Si se utilizan medios de montaje acuosos se recomienda utilizar medios como Dako Glycergel Mounting Medium n de cat logo C0563 o Faramount Aqueous Mounting Medium n de cat logo S3025 Para montajes no acuosos permanentes se recomienda el uso de Dako Permanent Mounting Media n de cat logo S3026 tras haber dejado secar completamente los portaobjetos al aire C Procedimiento de tinci n para Dako Autostainer Instruments Todos los reactivos del kit con la excepci n del vial 4 y del vial 9 se suministran con Autostainer Reagent Vials La DAB Working Solution y la Permane
10. genos en tejidos fijados con formol e incluidos en parafina o frotis celulares fijados Este sistema de visualizaci n est dise ado para la detecci n simult nea de dos ant genos distintos dentro de una sola muestra El sistema puede utilizarse en procedimientos manuales o con Dako Autostainer instruments La interpretaci n de los resultados debe realizarla un anatomopat logo cualificado en el contexto de la historia cl nica del paciente y otras pruebas diagn sticas Resumen y explicaci n EnVision G 2 Doublestain System es un kit de visualizaci n EnVision de segunda generaci n Este sistema es til para la detecci n simult nea de dos ant genos presentes en concentraciones bajas en una sola muestra La visualizaci n est basada en la peroxidasa HRP empleando DAB como crom geno y en la fosfatasa alcalina AP con Permanent Red como crom geno Este sistema no contiene biotina por lo que se reduce significativamente la tinci n inespec fica derivada de la actividad end gena de la avidina biotina Consulte las Instrucciones generales para la tinci n inmunohistoqu mica de Dako o las instrucciones del sistema de detecci n de los procedimientos de IHC para 1 Principio del procedimiento 2 Material necesario pero no suministrado 3 Almacenamiento 4 Preparaci n de la muestra 5 Procedimiento de tinci n 6 Control de calidad 7 Soluci n de problemas 8 Interpretaci n de la tinci n y 9 Limitaciones generales
11. herencia adecuada de los cortes a los portaobjetos es importante secar el agua de debajo de los cortes antes del proceso de secado en el horno 114143 002 K5361 ES SGA 13 10 06 p g 6 11 Procedimiento A Preparaci n de los reactivos A 1 DAB Working Solution Se prepara la DAB Working Solution mezclando bien 1 mL de DAB Substrate Buffer vial 3 con 1 gota 25 30 uL de DAB Chromogen vial 4 Una al cuota de 1 mL es suficiente para 10 cortes de tejido Prepare s lo el volumen necesario para el n mero de portaobjetos que se van a te ir La soluci n DAB Working Solution preparada se mantiene estable durante aproximadamente 5 d as si se almacena a una temperatura de 2 8 C Esta soluci n debe mezclarse bien antes de su uso Cualquier precipitado que se forme en la soluci n en un plazo de 5 d as no afecta a la calidad de la tinci n La DAB Working Solution debe prepararse en un Autostainer Reagent Vial cuando se utiliza en el Dako Autostainer instrument A 2 Permanent Red Working Solution Se prepara la Permanent Red Working Solution mezclando bien 100 partes de Permanent Red Substrate Buffer vial 8 con 1 parte de Permanent Red Chromogen vial 9 Por ejemplo mezcle 1 mL de Permanent Red Substrate Buffer vial 8 con 10 uL de Permanent Red Chromogen vial 9 Prepare s lo el volumen necesario para el n mero de portaobjetos que se van a te ir Utilice la soluci n en los 30 minutos siguientes La Permanent Red Working Sol
12. juague la muestra de la forma descrita en el paso 1 Paso 7 Vial 6 Rabbit Mouse LINK Elimine el exceso de tamp n de lavado y limpie los portaobjetos de la forma antes descrita Aplique 200 UL de Rabbit Mouse LINK para cubrir la muestra Inc bela durante 10 1 minutos Enjuague dos veces la muestra de la forma descrita en el paso 1 Paso 8 Vial 7 Polymer AP Elimine el exceso de tamp n de lavado y limpie los portaobjetos de la forma antes descrita Aplique 200 uL de Polymer AP para cubrir la muestra Inc bela durante 10 1 minutos Enjuague dos veces la muestra de la forma descrita en el paso 1 Paso 9 Permanent Red Working Solution Prepare la Permanent Red Working Solution de la forma descrita en la secci n A 2 La Permanent Red Working Solution preparada debe utilizarse en los 30 minutos siguientes Elimine el exceso de tamp n y limpie los portaobjetos de la forma antes descrita Aplique 200 uL de Permanent Red Working Solution para cubrir la muestra Inc bela durante 5 20 minutos Los tiempos de incubaci n ptimos pueden variar y deber n determinarse en cada laboratorio en particular Enjuague ligeramente los portaobjetos con agua destilada o desionizada de una botella de lavado no apunte el chorro directamente sobre la muestra Recoja los residuos que contengan crom geno en un recipiente para desechos peligrosos para eliminarlos de forma adecuada Ponga durante 5 minutos los portaobjetos enjuagados en un ba o mar a d
13. los 8C i Referencia 20 y Limitaci n de temperatura e Fecha de caducidad T xico Dispositivo m dico para gt Contiene suficiente para Xn Fabricado por Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Dinamarca Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 114143 002 K5361 ES SGA 13 10 06 p g 11 11
14. nt Red Working Solution deben prepararse en Autostainer Reagent Vials cuando se utilicen en el Dako Autostainer Instrument EnVision G 2 Doublestain System se ha adaptado para su uso con los Dako Autostainer instruments de acuerdo con la plantilla abajo descrita Antes de la tinci n de acuerdo con la plantilla de Dako Autostainer Instruments le rogamos que lea atentamente el Manual del usuario del Autostainer Instrument correspondiente Antes de iniciar el Autostainer Instrument deben introducirse los portaobjetos y los reactivos de acuerdo con el Slide Layout Map y Reagent Layout Map Los siguientes pasos de pretratamiento deben realizarse antes de utilizar el EnVision G 2 Doublestain System con cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina Se debe eliminar la parafina y rehidratar la muestra Algunas muestras deben someterse al desenmascaramiento del epitopo mediante la recuperaci n del ep topo inducida por calor o digesti n enzim tica Consulte la secci n A 3 y el folleto informativo del anticuerpo primario Dako individual para obtener informaci n espec fica acerca de la preparaci n de las muestras Despu s del desenmascaramiento la muestra debe enjuagarse suavemente con soluci n de tamp n de lavado de un frasco de lavado no dirija el flujo directamente sobre el tejido y colocarse durante 5 minutos en un ba o de tamp n de lavado reci n preparado Los reactivos deben equilibrarse a temperatura ambiente 20 2
15. o puede explicarse por variaciones en los procedimientos del laboratorio y sospecha de la existencia de un problema con el producto p ngase en contacto con nuestros servicios t cnicos Preparaci n de las muestras El kit puede utilizarse en cortes de tejidos fijados con formol e incluidos en parafina o frotis de c lulas fijados Pueden utilizarse diferentes agentes de fijaci n para la conservaci n de las muestras Deber n emplearse los m todos habituales de procesamiento de tejidos para la tinci n inmunocitoqu mica con todos los cortes de tejido 1 El grosor adecuado de los cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina y de los cortes congelados es de 4 6 um La muestra debe montarse en portaobjetos para microscopio Los cortes deben montarse en los portaobjetos lo m s planos y estirados que sea posible Si est n demasiado arrugados influir n negativamente en los resultados de la tinci n NOTA Para su uso en Dako Autostainer instruments los portaobjetos no deben superar un ancho de 26 mm con el fin de que ajusten en el soporte para portaobjetos Los cortes incluidos en parafina deben montarse desde un ba o mar a precalentado que contenga agua destilada o desionizada El ba o mar a no deber a contener aditivos como gelatina poli L lisina etc Los cortes deben secarse por calor generalmente a una temperatura lt 60 C durante al menos 60 minutos por ejemplo durante una noche Con el fin de asegurar una ad
16. ouse LINK y el vial 7 Polymer AP contienen material de origen animal Al igual que con cualquier producto de origen biol gico deber n aplicarse los procedimientos de manipulaci n adecuados 3 No exponga el vial 3 DAB Chromogen el vial 9 Permanent Red Chromogen o las DAB Working Solution o Permanent Red Working Solution preparadas a luz intensa 4 El vial 4 DAB Chromogen contiene 1 5 de tetrahidrocloruro de 3 3 diaminobenzidina tetracloruro de bifenil 3 3 4 4 tetrailtetraamonio est etiquetado como Nocivo R40 Posibles efectos cancer genos R43 Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel R68 Posibilidad de efectos irreversibles S35 Elim nense los residuos del producto y sus recipientes con todas las precauciones posibles S36 37 sense indumentaria y guantes de protecci n adecuados El vial 9 Permanent Red Chromogen contiene sal Fast Red KL y est etiquetado como T xico R45 Puede causar c ncer S35 Elim nense los residuos del producto y sus recipientes con todas las precauciones posibles S45 En caso de accidente o malestar ac dase inmediatamente al m dico si es posible mu strele la etiqueta 114143 002 K5361 ES SGA 13 10 06 p g 5 11 S53 Ev tese la exposici n rec bense instrucciones especiales antes del uso Precauci n Este producto contiene una sustancia que no se ha analizado totalmente Esta clasificaci n se ha realizado tomando exclusivamente como base una
17. sta de reactivos C digo Paso de la plantilla Tiempo de incubaci n Reactivo Dual Endogenous Enzyme Block Los anticuerpos primarios no est n todav a en la lista del Autostainer Polymer HRP DAB Working Solution Doublestain Block Los anticuerpos primarios no est n todav a en la lista del Autostainer Rabbit Mouse LINK Polymer AP Permanent Red Working Solution 114143 002 K5361 Individual K5361 End Enz Block Bloq 5 minutos Enz End Primary Antibody 10 minutos Anticuerpo primario Secondary Reagent 10 minutos Reactivo secundario K5361 Substrato 10 minutos Individual Anticuerpo primario 10 minutos K5361 K5361 K5361 Secondary Reagent 10 minutos Reactivo secundario Tertiary Reagent 10 minutos Reactivo terciario Substrate Batch 10 minutos Lote del sustrato K5361 ES SGA 13 10 06 p g 10 11 Paso 2 Protocolo de tinci n Cargue la plantilla K5361 del kit de detecci n EnVision G 2 Doublestain System en la PROGRAM STAINING RUN SCREEN Especifique el n mero de portaobjetos de la sesi n y cargue los reactivos con los tiempos de incubaci n de la plantilla La posici n de los portaobjetos se mostrar en la Slide Layout Map Screen y la posici n y el volumen del reactivo que debe cargarse en el Autostainer Instrument se mostrar n en la Reagent Layout Map Screen Consulte tambi n el Manual del usuario Antes de cargar los portaobjetos de acuerdo con la Slides Layout M
18. ution debe prepararse en un Autostainer Reagent Vial cuando se utiliza en el Dako Autostainer instrument A 3 Instrucciones para la diluci n ptima de los anticuerpos primarios EnVision G 2 Doublestain System es compatible con anticuerpos primarios concentrados de Dako diluidos adecuadamente El usuario debe determinar la diluci n ptima B Procedimiento de tinci n para uso manual B 1 Notas sobre el procedimiento Los siguientes pasos de pretratamiento deben realizarse antes de utilizar el EnVision G 2 Doublestain System con cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina Se debe eliminar la parafina y rehidratar la muestra Algunas muestras deben someterse al desenmascaramiento del ep topo mediante la recuperaci n del ep topo inducida por calor o digesti n enzim tica Consulte el folleto informativo del anticuerpo primario individual para obtener informaci n espec fica acerca de la preparaci n de las muestras Despu s del desenmascaramiento la muestra debe enjuagarse suavemente con soluci n de tamp n de lavado de un frasco de lavado no dirija el flujo directamente sobre el tejido y colocarse durante 5 minutos en un ba o de tamp n de lavado reci n preparado Los reactivos deben equilibrarse a temperatura ambiente 20 25 C antes de la inmunotinci n De la misma manera las incubaciones deben realizarse a temperatura ambiente No deje que las muestras se sequen durante el procedimiento de tinci n Las
19. zante y un conservante SUBSTRATE BUFFER Permanent Red Substrate Buffer Soluci n de tamp n sustrato K5361 ES SGA 13 10 06 p g 4 11 Vial9 1x300 uL Permanent Red Chromogen Soluci n Permanent Red Chromogen Material necesario pero no suministrado Pa os absorbentes Agua amoniacal 37 mmol L opcional Antibody Diluent n de cat logo Dako S0809 o S2022 Contratinci n hematoxilina como Mayer s Hematoxylin de Dako basada en agua n de cat logo S3309 Cubreobjetos Dako Autostainer instrument opcional Anticuerpos primarios de Dako y reactivos de control negativo Agua destilada o desionizada Epitope Retrieval Solution Etanol 95 y 70 C mara h meda opcional Microscopio aumento de 20 800x Medios de montaje como Dako Glycergel Mounting Medium n de cat logo C0563 Dako Faramount Aqueous Mounting Medium Ready to Use n de cat logo 83025 o medio de montaje no acuoso permanente n de cat logo Dako S3026 Tejidos positivos y negativos para su uso como controles del procedimiento Portaobjetos SuperFrost Plus recubiertos con poli L lisina o Dako Silanized Slides n de cat logo 83003 Ba os o recipientes de tinci n Cron metro capaz de medir intervalos de 2 40 minutos Frascos de lavado Wash Buffer n de cat logo Dako S3006 Ba o mar a con tapa Xileno tolueno o sustitutos de xileno Precauciones 1 Para usuarios profesionales 2 El vial 2 Polymer HRP el vial 6 Rabbit M
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