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Disco reactivo metabólico completo de Piccolo

1. Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 8 0 10 5 13 1 VR 1 7 1 5 1 4 Intervalo 7 7 8 4 10 1 11 0 12 6 13 4 observado Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 intervalo 95 IC 94 2 al00 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 ae 6 3 Cloruro CL Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 94 6 106 0 115 5 VR 1 8 1 4 1 5 Intervalo 90 100 102 108 110 119 observado Porcentaje de 91 9 96 8 95 2 resultados en el 57 62 60 62 59 62 intervalo 95 IC 82 2 a 97 3 95 IC 88 8 a 99 6 95 IC 86 5 a 99 0 2 4 Creatinina CRE Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 0 89 2 07 6 89 VR 11 0 5 0 1 6 Intervalo 0 7 1 2 1 8 2 3 6 5 7 2 observado Porcentaje de 93 6 100 100 resultados en el 58 62 62 62 62 62 intervalo 95 IC 84 3 a 98 2 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 pia 15 0 Glucosa GLU Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 95 2 130 3 365 8 VR 1 1 1 0 0 8 Intervalo 93 98 125 133 351 373 observado Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 intervalo 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 a 10 4 Page 91 of 120 Potasio K Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 3 4 5 7 7 2 VR 3 3 255 2 0 Intervalo 3 2 3 7 5 2 5 9 6 7 7
2. Para las muestras de sangre o plasma use s lo tubos de recolecci n de muestras tratados con heparina litio tap n verde Para las muestras de suero use tubos para obtenci n de muestras sin aditivo tap n rojo o tubos separadores de suero tap n rojo o rojo negro Comience la prueba en los 10 minutos siguientes a la transferencia de la muestra al disco reactivo La concentraci n de di xido de carbono total es determinada con mayor precisi n cuando la prueba se lleva a cabo inmediatamente despu s de abrir el tubo y lo m s pronto posible despu s de la obtenci n y procesado de la sangre en el tubo cerrado El aire contiene mucho menos di xido de carbono que el plasma y el di xido de carbono gaseoso disuelto escapar de la muestra al aire con la reducci n resultante en el valor del di xido de carbono de hasta 6 mmol I en el curso de 1 hora 8 Procedimiento Materiales suministrados Un disco reactivo metab lico completo Piccolo PN 400 1028 una caja de discos PN 400 0028 Materiales necesarios pero no suministrados Analizador qu mico sangu neo Piccolo o analizador qu mico Piccolo xpress Con cada analizador qu mico sangu neo Piccolo o analizador qu mico Piccolo xpress se suministran pipetas de transferencia de muestras con volumen fijo de aproximadamente 100 ul y puntas y pueden solicitarse repuestos a Abaxis Reactivos de control disponibles comercialmente recomendados por Abaxis p ngase en contacto con
3. 117 Fossati P et al Enzymatic Creatinine Assay A New Colorimetric Method Based on Hydrogen Peroxide Measurement 1983 29 1494 1496 Page 118 of 120 13 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 Perry B et al Measurement of total bilirubin by use of bilirubin oxidase Clin Chem 1986 32 329 332 54 55 56 IT 58 59 60 61 62 Chaney et al Urea and ammonia determinations Clin Chem 1962 8 130 132 64 65 66 67 68 69 Bibliografia segue Whelton A et al Nitrogen metabolites and renal function In Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2 Ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia W B Saunders Company 1994 1513 1575 Folin O et al A system of blood analysis J Biol Chem 1919 38 81 110 Somogyi M A reagent for the copper iodometric determination of very small amounts of sugar J Biol Chem 1937 117 771 776 Nelson N et al A photometric adaption of the Somogyi method for the determination of glucosio J Biol 1944 153 375 380 Kaplan LA Glucosio In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA AJ Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 850 856 Berry MN et al Enzymatic determination of potassium in serum Clin Chem 1989 35 817 820 Van Pelt J Enzymatic determination of sodium potassium and chloride in serum compared with determination by flame photometry coulometry and ion selective e
4. 95 IC 94 2 a 100 5 5 9 Nitr geno ureico sangu neo BUN Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 15 1 41 0 72 2 VR 2 3 2 5 1 8 Intervalo 14 16 37 43 68 75 observado Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 intervalo 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 15 0 13 Bibliograf a 1 Tonhazy NE White NG Umbreit WW A rapid method for the estimation of the glutamic aspartic transaminase in tissues and its application to radiation sickness Arch Biochem 1950 28 36 42 2 Reitman S Frankel S A colorimetric method for the determination of serum glutamic oxalacetic and glutamic pyruvic transaminases Am J Clin Pathol 1957 28 56 63 3 Murray RL Alanine aminotransferase Clinical chemistry theory analysis and correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AP comps St Louis The C V Mosby Company 1989 895 898 4 Wroblewski F LaDue JS Serum glutamic pyruvic transminase in cardiac and hepatic disease Proc Soc Exp Biol Med 1956 91 569 571 5 Bergmeyer HU M Horder IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 3 IFCC method for alanine aminotransferase J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 521 534 6 Howe PE The use of sodium sulfate as the globulin precipitant in the determination of proteins in blood J Biol Chem 1921 49 93 107 7 Howe PE The determination of proteins in blood a micro method J Biol Chem 1921 49
5. direttamente proporzionale all attivit dell a amilasi riattivata e alla concentrazione dello ione cloruro nel campione a amilasi CNPG3 CNP G3 Cr Ca Page 99 of 120 Creatinina CRE Il metodo Jaffe introdotto per la prima volta nel 1886 tuttora comunemente usato per determinare i livelli di creatinina nel sangue L attuale metodo di riferimento abbina l uso di Terra di Fuller floridina e la tecnica di Jaffe per incrementare la specificit della reazione 34 Sono stati messi a punto metodi enzimatici che risultano pi specifici per la creatinina di quanto non lo siano le diverse varianti della tecnica di Jaffe 37 Nei metodi basati sull enzima creatinina ammide idrolasi si elimina il problema dell interferenza dello ione ammonio che si riscontra invece nelle tecniche che utilizzano creatinina immino idrolasi Creatinina ammide idrolasi Creatinina H O gt Creatina Creatina ammidinidrolasi Creatina H O _ Sarcosina urea Sarcosina ossidasi Sarcosina H O O gt Glicina formaldeide H207 Perossidasi H 0 TBHBA 4 AAP gt Colorante chinoneimina rossa H O Vengono utilizzate due provette per determinare la concentrazione di creatinina presente nel campione La creatina endogena viene misurata nella provetta bianco che viene sottratta dall insieme di creatina endogena e creatina formata dalle reazioni enzimatiche ne
6. 120 Media 21 4 21 4 DV 2 29 2 29 Cv 10 7 10 7 Controllo 2 Media 10 5 10 5 DV 0 90 0 90 CV 8 6 8 6 Proteine totali mg dL Controllo 1 N 80 Media 6 8 6 8 SD 0 05 0 08 CV 0 8 1 2 Controllo 2 Media 4 7 4 7 SD 0 09 0 09 CV 2 0 2 0 Azoto ureico mg dL Controllo 1 N 80 Media 19 19 SD 0 35 0 40 CV 1 9 2 1 Controllo 2 Media 65 65 SD 1 06 1 18 CV 1 6 1 8 Correlazione Alcuni campioni di sangue intero eparinizzato e di siero sono stati prelevati ed analizzati con l analizzatore chimico del sangue Piccolo e con uno o pi metodi comparativi I campioni di sangue intero sono stati analizzati con l analizzatore chimico del sangue Piccolo sul posto presso i vari siti mentre 1 campioni di siero sono stati analizzati con l analizzatore chimico del sangue Piccolo e con metodi comparativi In alcuni casi sono stati utilizzati campioni integrativi con valori elevati e bassi in modo da coprire l intera gamma dinamica Sono stati scelti campioni rispondenti ai valori di distribuzione contenuti nelle linee guida NCCLS EP9 A guideline La Tabella 7 riporta le statistiche di correlazione rappresentative Tabella 7 Correlazione dell analizzatore chimico del sangue Piccolo con i 1 metodi o di comparazione Valori di Correlazione Pendenza Tntercetta SEE N riferimento del Metodo coefficiente campione comparativo mmol L Alanina 0 981 0 905 1 3 3 21 86 10 174 Paramax transaminasi U L 0 985 0 946 2 5 2 84 67 10 174 Technicon gt 0
7. CV 1 7 1 5 1 4 Range osservato 7 7 8 4 10 1 11 0 12 6 13 4 Percentuale di 100 100 100 risultati nel range 62 62 62 62 62 62 6 3 IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 100 100 100 Page 115 of 120 Cloruro CL Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 94 6 106 0 115 5 CV 1 8 1 4 1 5 Range osservato 90 100 102 108 110 119 Percentuale di 91 9 96 8 95 2 risultati nel range 57 62 60 62 59 62 2 4 IC 95 da 82 2 a IC 95 da 88 8 a IC 95 da 86 5 a 97 3 99 6 99 0 Creatinina CRE Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 0 89 2 07 6 89 CV 11 0 5 0 1 6 Range osservato 0 7 1 2 1 8 2 3 6 5 7 2 Percentuale di 93 6 100 100 risultati nel range 58 62 62 62 62 62 15 0 IC 95 da 84 3 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 98 2 100 100 Glucosio GLU Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 95 2 130 3 365 8 CV 1 1 1 0 0 8 Range osservato 93 98 125 133 351 373 Percentuale di 100 100 100 risultati nel range 62 62 62 62 62 62 10 4 IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 100 100 100 Potassio K Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 3 4 5 7 7 2 CV 3 3 2 3 2 0 Range osservato 3 2 3 7 5 2 5 9 6 7 7 5 Percentuale di 100 100 100 risultati nel rang
8. PA NCCLS 2002 Page 96 of 120 Disco reagente per il metabolismo generale Piccolo CE Servizio clienti e assistenza tecnica 1 800 822 2947 Esenzione da norme CLIA Usare solo sangue intero in litio eparina Complessit moderata Usare sangue intero in litio eparina plasma in litio eparina o siero Dicembre 2009 PN 400 7139 Rev G 2003 Abaxis Inc Union City CA 94587 1 Destinazione d uso Il disco reagente per il metabolismo generale Piccolo da utilizzarsi con l analizzatore chimico del sangue Piccolo o con l analizzatore chimico Piccolo xpress destinato all accertamento quantitativo in vitro di alanino transaminasi ALT albumina fosfatasi alcalina ALP aspartato transaminasi AST calcio cloruro creatinina glucosio potassio sodio bilirubina totale anidride carbonica totale proteine totali e azoto ureico ematico BUN nel sangue intero eparinizzato nel plasma eparinizzato o nel siero I test di questo pannello sono esenti dalle norme CLIA 88 Se un laboratorio modifica le istruzioni per il sistema di test i test sono considerati di complessit elevata e soggetti a tutti 1 requisiti CLIA In laboratori esenti dalle norme CLIA possibile testare solo sangue intero in litio eparina In caso di impiego in laboratori a complessit moderata possibile usare sangue intero litio eparinato plasma litio eparinato o siero Per eseguire test in esenzione dalle norme CLIA necessario un Certificato
9. Parametri del test L analizzatore chimico del sangue Piccolo e l analizzatore chimico Piccolo xpress funzionano a temperature ambiente comprese tra 15 C e 32 C 59 90 F Il tempo di analisi per ogni disco reagente per metabolismo generale Piccolo meno di 14 minuti L analizzatore mantiene il disco reagente a una temperatura di 37 C 98 6 F durante l intervallo di misurazione Procedura del test Le procedure dettagliate per il prelievo dei campioni e il modo di operare sono descritte nel manuale dell operatore dell analizzatore chimico del sangue Piccolo e dell analizzatore chimico Piccolo xpress Taratura L analizzatore chimico del sangue Piccolo e l analizzatore chimico Piccolo xpress sono tarati dal produttore prima della spedizione Il codice a barre stampato sul relativo anello fornisce i dati di taratura specifici dei dischi Consultare il manuale dell operatore dell analizzatore chimico del sangue Piccolo Page 105 of 120 Controllo qualitativo Consultare la sezione 2 4 del manuale dell operatore dell analizzatore Piccolo o la sezione 6 Taratura e controllo qualitativo del manuale dell operatore dell analizzatore Piccolo xpress Le prestazioni dell analizzatore chimico del sangue Piccolo o dell analizzatore chimico Piccolo xpress si possono verificare effettuando test su controlli Per un elenco di materiali di controllo qualitativo approvati con i relativi range di accettazione rivolgersi all
10. Tabla 1 Reactivos Componente Cantidad disco cido 2 4 6 Tribromo 3 hidroxibenzoico TBHBA 188ug 2 Cloro 4 nitrofenil a maltotriosida CNPG3 53ug 2 Metil 4 isotizolina 3 uno clorhidrato MIT 4 2ug 4 7 13 16 21 Pentaoxa 1 10 diazabiciclo 8 8 5 tricosano Kryptofix 221 86ug 4 Aminoantipirina clorhidrato 13ug Adenosina 5 difosfato 36ug Adenosina 5 trifosfato 22ug Acido a cetoglut rico 101ug Amilasa 0 036U Arsenazo III sal s dica 1 7ug Ascorbato oxidasa Cucurbita spp 0 3U Bilirrubina oxidasa 0 1U P rpura de bromcresol 2 2ug Acetato de calcio 25ug Acido citrico sal tris dica 567ug Creatina amidinohidrolasa Actinobacillus spp 3U Creatinina amidohidrolasa Pseudomonas spp 1U Sulfato c prico 134ug Etilenglicol bis B aminoetil ter N N N N acido tetraac tico EGTA 4ug Acido etilendiaminotetraac tico EDTA 178g Acido etilendiaminatetraac tico EDTA sal dis dica 15ug B Galactosidasa 0 005U Glucosa 6 fosfato deshidrogenasa levadura 0 05U Glutamato deshidrogenasa h gado bovino 0 01U Glutamina sintetasa 0 17U Hexoquinasa levadura 0 1U Imidazol 29ug Lactato deshidrogenasa 0 27U L alanina 874u8 L cido asp rtico 426ug Acido L glutamico 9 2ug Cloruro de magnesio 3ug Sulfato de magnesio 33ug Malato deshidrogenasa coraz n porcino 0 1U Cloruro de manganeso 10ug N Acetil ciste na 60ug B Nicotinamida adenina dinucle tido NAD 40ug B Nicotinamida adenina dinucle tido reducida NADH 48ug o Nit
11. a 100 z E 1 RS Este porcentaje est basado en el supuesto de que es imposible distinguir correctamente entre valores normales y anormales cuando el error es mayor de una cuarta parte de intervalo normal Se utiliz el intervalo 10 U l 47 U I Alb mina ALB Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 3 0 g dl 3 5 g dl 4 2 g dl VR 2 7 2 5 1 8 Intervalo 2 9 3 2 3 3 3 7 4 0 4 4 observado Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 intervalo 12 5 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Fosfatasa alcalina ALP intervalo 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 94 5 U I 171 5 UA 337 5 U I VR 5 2 3 2 24 Intervalo 85 106 160 184 287 388 observado Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 95 IC 94 2 a 100 Aspartato aminotransferasa AST intervalo 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 56 0 120 4 276 3 VR 2 4 1 1 1 0 Intervalo 54 60 117 124 266 285 observado Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 95 IC 94 2 a 100 Page 90 of 120 Calcio CA
12. assistenza tecnica Abaxis Altri controlli a base di siero o plasma umano potrebbero non essere compatibili I materiali di controllo qualitativo devono essere conservati secondo le istruzioni del foglio illustrativo incluso nella confezione dei controlli Se 1 risultati sono fuori range ripetere una volta Se i risultati sono nuovamente fuori range rivolgersi all assistenza tecnica Non refertare i risultati se i controlli sono al di fuori dei limiti riportati sulla relativa etichetta Consultare il manuale dell operatore dell analizzatore chimico Piccolo o Piccolo xpress per una trattazione dettagliata sulle modalit di esecuzione registrazione interpretazione e rappresentazione grafica dei risultati dei controlli Laboratori esenti Abaxis raccomanda di testare i controlli nel modo seguente e almeno ogni 30 giorni e ogni volta che intervengono mutamenti significativi nelle condizioni del laboratorio ad esempio se l analizzatore Piccolo viene spostato in una nuova collocazione oppure in presenza di variazioni nel controllo della temperatura e quando indicato un corso di formazione o aggiornamento del personale e ogni volta che viene utilizzato un nuovo lotto test esenti dalle norme CLIA in laboratori esenti Laboratori non esenti Abaxis raccomanda di testare i controlli seguendo le linee guida federali statali e locali 9 Risultati L analizzatore chimico del sangue Piccolo e l analizzatore chimico Piccolo xpress c
13. gena se mide en la cubeta de referencia que es restada de la creatina end gena combinada y la creatina formada a partir de las reacciones enzim ticas en la cubeta de prueba Una vez eliminada la creatina end gena de los c lculos la concentraci n de creatinina es proporcional a la intensidad del color rojo producido El criterio de valoraci n del fin de la reacci n se mide como la diferencia en la absorbancia entre 550 nm y 600 nm eGFR calculada La creatinina s rica se mide de forma rutinaria como indicador de la funci n renal Debido a que la edad el sexo y la raza influyen en las concentraciones de creatinina no es posible detectar la nefropat a cr nica NC tan solo mediante la creatinina s rica As pues el National Kidney Disease Education Program Programa Nacional de Educaci n sobre la Nefropat a recomienda encarecidamente que los laboratorios informen de forma rutinaria de la tasa de filtraci n glomerular estimada eGFR cuando se mida la creatinina s rica en los pacientes mayores de 18 a os La comunicaci n de forma rutinaria de la eGFR junto con todas las determinaciones de creatinina s rica permite a los laboratorios ayudar a identificar a los individuos con funci n renal reducida y contribuye a facilitar la detecci n de la NC Los valores calculados de la eGFR lt 60 mL min generalmente est n asociados con un mayor riesgo de resultados adversos de la NC Piccolo calcula la eGFR usando la edad el sexo y la raza d
14. geno de la amida para formar un complejo Cu Prote na coloreado OH Prote na total Cu II gt Complejo Cu Prote na La cantidad de prote nas totales en la muestra es directamente proporcional a la absorbancia del complejo Cu prote na La prueba de prote na total es una reacci n de valoraci n final y la absorbancia se mide como la diferencia en la absorbancia entre 550 nm y 850 nm Nitr geno ureico sangu neo BUN La urea puede ser medida directa e indirectamente La reacci n de diacetil monoxima el nico m todo directo para medir la urea es la usada m s com nmente pero emplea reactivos peligrosos Los m todos indirectos miden el amon aco creado a partir de la urea el uso de la enzima ureasa aument la especificidad de estas pruebas El amon aco se cuantifica mediante distintos m todos entre ellos la nesslerizaci n valoraci n cida la t cnica de Berthelot 24 y las reacciones enzim ticas acopladas Sin embargo los procedimientos de Berthelot catalizados son err ticos cuando se mide el amon aco Las reacciones enzim ticas acopladas son r pidas tienen una elevada especificidad para el amon aco y son las usadas con mayor frecuencia Una de estas reacciones fue propuesta como posible m todo de referencia En la reacci n de acoplamiento de enzimas la ureasa hidroliza la urea en amon aco y di xido de carbono Al combinarse el amon aco con a cetoglutarato y nicotinamida adenina dinucle tido
15. n est ndar de qu mica cl nica El m todo enzim tico Abaxis se basa en la activaci n de la piruvato quinasa con potasio y muestra una linealidad excelente y una susceptibilidad despreciable a las sustancias end genas La interferencia del sodio y del i n amon aco se minimiza al agregar Kriptofix y glutamato deshidrogenasa respectivamente En la reacci n de acoplamiento de enzimas la piruvato quinasa PK desfosforila al fosfoenolpiruvato PEP para formar piruvato La lactato deshidrogenasa LDH cataliza la conversi n de piruvato a lactato Al mismo tiempo NADH se oxida a NAD K PK ADP PEP gt Piruvato ATP LDH Piruvato NADH H ___ Lactato NAD El rango de cambio en la diferencia de absorbancia entre 340 y 405 nm se debe a la conversi n de NADH en NAD y es directamente proporcional a la cantidad de potasio en la muestra Sodio NA Se han desarrollado m todos colorim tricos y enzim ticos que permiten la medici n de la concentraci n del sodio con instrumentaci n est ndar de qu mica cl nica 948 En la reacci n enzim tica Abaxis la B galactosidasa es activada por el sodio en la muestra La enzima activada cataliza la reacci n de o nitrofenilo B D galactopiranosida ONPG a o nitrofenol y galactosa Na ONPG gt o nitrofenol Galactosa B Galactosidasa Bilirrubina total TBIL Tipicamente los niveles de bilirrubina total se han
16. 100 100 Azoto ureico ematico BUN Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 15 1 41 0 72 2 CV 2 3 2 5 1 8 Range osservato 14 16 37 43 68 75 Percentuale di 100 100 100 risultati nel range 62 62 62 62 62 62 15 0 IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 100 100 100 13 Bibliografia 1 Tonhazy NE White NG Umbreit WW A rapid method for the estimation of the glutamic aspartic transaminase in tissues and its application to radiation sickness Arch Biochem 1950 28 36 42 2 Reitman S Frankel S A colorimetric method for the determination of serum glutamic oxalacetic and glutamic pyruvic transaminases Am J Clin Pathol 1957 28 56 63 3 Murray RL Alanine aminotransferase In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AP eds St Louis The C V Mosby Company 1989 895 898 Wroblewski F LaDue JS Serum glutamic pyruvic transminase in cardiac and hepatic disease Proc Soc Exp Biol Med 1956 91 569 571 Bergmeyer HU M Horder IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 3 IFCC method for alanine aminotransferase J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 521 534 Page 117 of 120 13 10 11 12 13 14 15 16 17 Fujita H Uber die Mikrobestimmung der Blutphosphatase J Biochem Japan 1939 30 69 87 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Bibliografia segue Howe PE The use of sodium su
17. 109 113 8 Wolfson WQ y otros A rapid procedure for the estimation of total protein true albumin total globulin alpha globulin beta globulin and gamma globulin in 10 ml of serum Am J Clin Pathol 1948 18 723 30 9 Saifer A Gerstenfeld S Vacsler F Photometric microdetermination of total serum globulins by means of a tryptophan reaction Clin Chem 1961 7 626 36 10 Saifer A Marven T The photometric microdetermination of serum total globulins with a tryptophan reaction a modified procedure Clin Chem 1966 12 414 17 11 Gendler SM Albumin Clinical chemistry theory analysis and correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AP comps St Louis The C V Mosby Company 1989 1029 1033 12 Webster D Bignell AHC Attwood EC An assessment of the suitability of bromocresol green for the determination of serum albumin Clin Chim Acta 1974 53 101 108 13 Louderback A MealeyEH Taylor NA A new dye binding technic using bromcresol purple for determination of albumin in serum Clin Chem 1968 14 793 794 Abstract 14 Pinnell AE Northam BE New automated dye binding method for serum albumin determination with bromcresol purple Clin Chem 1978 24 80 86 15 King EJ and Armstrong AR A convenient method for determining serum and bile phosphatase activity Can Med Assoc J 1934 31 376 381 16 Kind PRN King EJ Estimation of plasma phosphatase by determination of hydrolysed phenol with amino antipyrine J Clin Pathol 1954 7 322 326 17 Ohmo
18. 159 46 Rangos de la M todo de muestra Comparaci n mmol l P 10 174 Paramax 10 174 Technicon 1 1 5 3 Paramax 1 5 5 0 Beckman 27 368 Paramax 26 150 Technicon 13 111 Paramax 13 252 DAX Tabla 7 Correlaci n del analizador qu mico de sangre de Piccolo con los m todos de comparaci n continuaci n Rangos de la Correlaci n Pendiente Intercepta VER N muestra Metono de Coeficiente Comparaci n mmol l a 0 991 0 990 0 4 0 17 25 5 2 11 9 Paramax Calcio mg dl 0 673 0 742 1 8 0 22 81 8 1 9 9 Beckman Cloruro mmol l 0 978 0 982 1 1 1 84 120 71 118 Vitros 950 caia 0 993 0 926 0 0 0 15 260 0 4 14 7 Paramax 0 987 0 866 0 1 0 16 107 0 4 7 5 Beckman 0 987 1 009 2 8 3 89 251 72 422 Paramax Glucosa mg dl 0 997 0 943 1 2 469 91 56 646 Beckman Potasio mmol l 0 969 0 863 0 6 0 14 58 2 0 6 8 Rodero gt gt gt 2 KNM 2 Sodio mmol l 0 937 0 782 27 7 3 79 113 116 154 Radi metro EEN gt gt gt gt KNA 2 Bilirrubina total 0 974 0 901 0 0 0 07 250 0 2 3 7 Paramax mg dl 0 98 1 113 0 4 0 09 91 0 1 6 4 Beckman Di xido de carbono total 0 947 0 903 2 4 0 84 60 6 39 Cobas Fara mmol l Proteinas totales 0 849 0 932 0 6 0 19 251 5 7 9 2 Paramax g dl 0 873 0 935 0 3 0 16 92 6 5 9 2 Beckman Nitr geno ureico 0 964 0 923 0 5 1 08 251 6 52 Paramax sangu neo mg dl 0 983 0 946 0 0 0 66 92 6 38 Beckman Las muestras s ricas de pacientes hospitalizados proporcionaron un rango de muestra m s amplio y posiblemente
19. 40 1528 1531 Helgerson RC y otros Host guest Complexation 50 Potassium and sodium selective selective chromogenic ionophores J Amer Chem Soc 1989 111 6339 50 Kumar A y otros Chromogenic ionophere based methods for spectrophotometric assay of sodium and potassium in serum and plasma Clin Chem 1988 34 1709 1712 Berry MN y otros Enzymatic determination of sodium in serum Clin Chem 1988 34 2295 2298 Malloy HT y Evelyn KA The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter J Biol Chem 1937 119 481 490 Page 94 of 120 13 50 51 52 Perry B y otros Measurement of total bilirubin by use of bilirubin oxidase Clin Chem 1986 32 329 332 54 55 56 57 58 59 60 61 62 Chaney y otros Urea and ammonia determinations Clin Chem 1962 8 130 132 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 Bibliograf a continuaci n Meites S Bilirubin direct reacting and total modified Malloy Evelyn method En Selected Methods of Clinical Chemistry Vol 9 Faulkner WR Meites S comps Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1982 119 124 Murao S Tanaka N A new enzyme bilirubin oxidase produced by Myrothecium verrucaria MT 1 Agric Biol Chem 1981 45 2383 2384 Osaki S Anderson S Enzymatic determination of bilirubin Clin Chem 1984 30 971 Abstract Skeggs LT Jr An automatic method for the determination of c
20. 56 38 9 mmol l Potasio K 1 5 8 5 mmol l 1 5 8 5 mmol l Sodio NA 110 170 mmol l 110 170 mmol l Bilirrubina total TBIL 0 1 30 mg dl 1 7 513 umol l Di xido de carbono total tCO 5 40 mmol l 5 40 mmol l Prote na total TP 2 14 g dl 20 140 g l Nitr geno ureico BUN 2 180 mg dl 0 7 64 3 mmol urea l Si la concentraci n del analito es superior al intervalo de medici n intervalo din mico pero inferior al del sistema en la tarjeta impresa se indicar n un signo gt en el limite superior y un asterisco detr s del n mero por ejemplo ALT gt 2000 U I Si es inferior al intervalo din mico se imprimir lt con un asterisco por ejemplo ALT lt 5 U I Para valores que tengan un valor enormemente m s alto que el intervalo de medici n intervalo del sistema se imprimir en lugar del resultado Cada vez que aparezca en la tarjeta impresa recoja una muestra nueva y realice de nuevo la prueba Si los resultados de la segunda muestra se vuelven a suprimir p ngase en contacto con el servicio de asistencia t cnica de Abaxis Sensibilidad l mites de detecci n El l mite inferior del rango informado din mico para cada electrolito es alanina aminotransferasa 5 U l alb mina 1 g dl 10 g l fosfatasa alcalina 5 U l aspartato aminotransferasa 5 U l calcio 4 0 mg dl 1 0 mmol l cloruro 80 mmol l creatinina 0 2 mg dl 18 umol 1 glucosa 10 mg dl 0 56 mmol l potasio 1 5 mmol l sodio 110 mmol
21. 854 1 001 0 3 0 22 261 1 1 5 3 Paramax Albumina Edk 0 896 0 877 0 1 0 21 100 1 5 5 0 Beckman Fosfatasi alcalina 0 988 0 970 5 9 3 97 99 27 368 Paramax U L 0 929 1 136 17 6 4 79 80 26 150 Technicon Aspartato 0 93 0 87 5 3 2 76 159 13 111 Paramax transaminasi U L 1 0 0 97 3 0 1 9 46 13 252 DAX Page 113 of 120 Tabella 7 Correlazione dell analizzatore chimico del sangue Piccolo con i 1 metodi o di comparazione segue Valori di Correlazione Podi Titercett SEE N riferimento del Metodo coefficiente campione comparativo mmol L A 0 991 0 990 0 4 0 17 25 5 2 11 9 Paramax Calcio medi 0 673 0 742 1 8 0 22 81 8 1 9 9 Beckman Cloruro mmol L 0 978 0 982 1 1 1 84 120 71 118 Vitros 950 Pee 0 993 0 926 0 0 0 15 260 0 4 14 7 Paramax Creatinina mg dL 0 987 0 866 0 1 0 16 107 0 4 7 5 Beckman i 0 987 1 009 2 8 3 89 251 72 422 Paramax Glucosio med 0 997 0 943 12 4 69 91 56 646 Beckman A Radiometro Potassio mmol L 0 969 0 863 0 6 0 14 58 2 0 6 8 KNATM 2 A Radiometro Sodio mmol L 0 937 0 782 27 7 3 79 113 116 154 KNATM 2 Bilirubina totale 0 974 0 901 0 0 0 07 250 0 2 3 7 Paramax mg dL 0 98 1 113 0 4 0 09 91 0 1 6 4 Beckman Alange carbonica 0 947 0 903 2 4 0 84 60 6 39 Cobas Fara totale mmol L Proteine totali 0 849 0 932 0 6 0 19 251 5 7 9 2 Paramax g dL 0 873 0 935 0 3 0 16 92 6 5 9 2 Beckman Azoto ureico 0 964 0 923 0 5 1 08 251 6 52 Paramax ematico mg dL 0 983 0 946 0 0 0 66 92 6 38 Beckman I campioni di sie
22. El m todo de referencia de la Asociaci n Norteamericana de Qu mica Clinica AACC usa el p NPP como sustrato y un amortiguador con i n met lico El procedimiento de Piccolo se modific a partir de los m todos AAC y IFCC La fosfatasa alcalina hidroliza el p NPP en un amortiguador con i n met lico y forma p nitrofenol y fosfato ALP p nitrofenil fosfato gt p Nitrofenol fosfato Zn Mg La cantidad de ALP en la muestra es proporcional al ndice de aumento de la diferencia de absorbancia entre 405 nm y 500 nm Aspartato aminotransferasa AST La prueba de aspartato aminotransferasa AST se basa en el m todo de cin tico de Karmen de acuerdo con la modificaci n de Bergmeyer El m todo de referencia actual de la Federaci n de Quimica Clinica IFCC utiliza la t cnica de Karmen Bergmeyer de acoplamiento de malato deshidrogenasa MDH y nicotinamida dinucle tido reducida NADH en la detecci n de AST en suero Se agrega lactato deshidrogenasa LDH a la reacci n para reducir la interferencia causada por el piruvato end geno El AST cataliza la reacci n del L aspartato y a cetoglutarato en oxaloacetato y L glutamato El oxaloacetato es convertido en malato y el NADH es oxidado a NAD por el catalizador MDH AST L aspartato a cetoglutarato Oxaloacetato L glutamato MDH Oxaloacetato NADH HX _ Malato NAD El cambio en el indice de absorbancia a 340
23. El sistema qu mico sangu neo Piccolo y el analizador qu mico Piccolo xpress suprimen cualquier resultado que sea afectado por m s del 10 de interferencia por hem lisis lipidemia o ictericia En lugar del resultado la tarjeta tendr impreso HEM LIP o ICT respectivamente Los niveles de amilasa muy elevados gt 9 000 U l tendr n un efecto significativo superior al 10 de aumento sobre el resultado del cloruro El sistema Piccolo no eval a la concentraci n de amilasa de cada muestra La prueba de potasio del sistema Piccolo es un ensayo de piruvato quinasa PK lactatodeshidrogenasa LDH acoplados Por tanto en casos de trauma muscular extremo o niveles muy elevados de creatina quinasa CK el Piccolo puede recuperar un valor de potasio K falsamente elevado En casos como ste los valores de recuperaci n de potasio inesperadamente altos deben confirmarse con otra metodolog a P ngase en contacto con el Servicio de asistencia t cnica de Abaxis para obtener informaci n acerca de los niveles m ximos de sustancias end genas Efectos de las sustancias ex genas y terap uticas Se seleccionaron treinta y cinco sustancias ex genas y terap uticas como interferentes potenciales para m todos de prueba Abaxis siguiendo las recomendaciones de Young Se defini a una interferencia significativa como una desviaci n superior al 10 en el resultado para una muestra de l mite normal Las mezclas de suero
24. H O NAD Il tasso di variazione nella differenza di assorbanza tra 340 nm e 405 nm causata dalla trasformazione di NADH in NAD ed direttamente proporzionale alla quantit di urea presente nel campione 4 Funzionamento Per 1 principi e i limiti della procedura vedere il manuale dell operatore dell analizzatore chimico del sangue Piccolo o dell analizzatore chimico Piccolo xpress 5 Descrizione dei reagenti Reagenti Ogni disco reagente per il metabolismo generale Piccolo contiene granuli secchi di reagente specifico per il test come da descrizione che segue In ogni disco compreso un reagente secco per campione bianco costituito da sostanza tampone tensioattivi eccipienti e conservanti utilizzato per calcolare le concentrazioni di alanina transaminasi ALT albumina ALB fosfatasi alcalina ALP aspartato transaminasi AST calcio CA cloruro CL glucosio GLU potassio K sodio NA anidride carbonica totale tCO proteine totali TP e azoto ureico ematico BUN Sono inoltre compresi nel disco campioni bianco dedicati per creatinina CRE e bilirubina totale TBIL Ogni disco contiene anche un diluente composto da tensioattivi e conservanti Page 102 of 120 Tabella 1 Reagenti Componente Quantita Disco Acido 2 4 6 tribromo 3 idrossibenzoico TBHBA 188ug 2 Cloro 4 nitrofenil a maltotrioside CNPG3 53ug Idrocloruro di 2 metil 4 isotizolin 3 one MIT 4 2ug 4 7 13 16 21 pentaoxa 1 10 diaz
25. J 1934 31 376 381 Kind PRN King EJ Estimation of plasma phosphatase by determination of hydrolysed phenol with amino antipyrine J Clin Pathol 1954 7 322 326 Ohmori Y Uber die Phosphomonoesterase Enzymologia 1937 4 217 231 Petitclerc C Delisle M Martel M Mechanism of action of Mg2 and Zn2 on rat placental alkaline phosphatase I Studies on the soluble Zn2 and Mg2 alkaline phosphatase Can J Biochem 1975 53 1089 1100 Tietz NW et al A reference method for measurement of alkaline phosphatase activity in human serum Clin Chem 1983 29 751 761 Bowers GN Jr et al IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part I General considerations concerning the determination of the catalytic concentration of an enzyme in the blood serum or plasma of man Clin Chim Acta 1979 98 163F 174F Karmen A A note on the spectrophotometric assay of glutamic oxalacetic transaminase in human blood serum J Clin Invest 1955 34 131 133 Bergmeyer HU et al Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 IFCC method for aspartato transaminasi Clin Chem 1977 23 887 899 Bergmeyer HU et al Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 Revised IFCC method for aspartato transaminasi Clin Chem 1978 24 720 721 Kramer B et al A simple technique for the determination of calcium and mag
26. aum Metotrexato 0 5 80 dism Nitrofuranto na 20 13 aum cido salic lico 50 17 dism Sulfadiazina 150 25 dism An ooe ag by i P Dism disminuci n en la concentraci n del sustrato especificado Aum aumento en la concentraci n del sustrato especificado e Para la prueba de cloruro el bromuro a niveles t xicos gt 15 mmol l puede causar un efecto significativo gt 10 de aumento sobre el resultado del cloruro El yoduro a concentraciones muy altas 30 mmol l el nivel m s elevado que se ha probado no tiene efecto Los niveles fisiol gicos normales de bromuro y yoduro no interfieren en el Sistema de prueba del cloruro de Piccolo 11 Valores esperados Se analizaron muestras de entre 60 y 140 varones y mujeres adultos en el analizador qu mico de sangre de Piccolo para determinar el intervalo de referencia para los electrolitos Estos l mites se calcularon sobre la base del 95 del intervalo de referencia de los valores combinados totales obtenidos de los sujetos de referencia Estos intervalos se proporcionan solamente como gu a Los niveles de ALP en ni os en crecimiento son muy variables Se recomienda que su consultorio o instituci n establezca los m rgenes normales para su poblaci n de pacientes en particular Page 84 of 120 Tabla 4 Intervalos de referencia Piccolo Sustrato Unidades comunes Unidades SI Alanina aminotransferasa ALT 10 47 U L 10 47 UN Alb mina ALB 3 3 5 5 g dl 33 55
27. di anidride carbonica CO2 in bicarbonato HCO Il fosfoenolpiruvato PEP e HCO reagiscono quindi formando ossalacetato e fosfato in presenza di fosfoenolpiruvato carbossilasi PEPC La malicodeidrogenasi MDH catalizza la reazione dell ossalacetato e scompone la nicotinammide adenin dinucleotide NADH in NAD e malato Il tasso di cambiamento nell assorbanza a causa della trasformazione dell NADH in NAD direttamente proporzionale alla quantit di tCO presente nel campione Page 101 of 120 PEPC PEP HCO gt gt Ossalacetato Fosfato MDH Ossalacetato NADH HY __ NAD Malato Proteine totali TP Il metodo per le proteine totali una variante della reazione con biureto nota per la sua precisione accuratezza e specificit Il metodo stato messo a punto da Riegler e poi modificato da Weichselbaum Doumas et al La reazione con biureto viene proposta come metodo di riferimento per le proteine totali 7985 Nella reazione con biureto la soluzione proteinica viene trattata con ioni rame Cu II in un mezzo fortemente alcalino Vengono aggiunti tartrato di sodio potassio e ioduro di potassio per impedire rispettivamente la precipitazione dell idrossido di rame e l autoriduzione del rame Gli ioni Cu II reagiscono con legami peptidici tra gli atomi di ossigeno carbonile e azoto ammide formando un complesso rame proteine colorato OH Proteina totale Cu I gt Complesso rame pro
28. di esenzione CLIA Il Certificato di esenzione pu essere ottenuto dai CMS Centers for Medicare amp Medicaid Services Per assistenza nell ottenere un certificato contattare la COLA Commission on Laboratory Accreditation al numero verde negli Stati Uniti 1 800 981 9883 2 Sintesi e spiegazione degli esami clinici Il disco reagente per il metabolismo generale Piccolo e l analizzatore chimico del sangue Piccolo costituiscono un sistema diagnostico in vitro che coadiuva il medico nella diagnosi delle seguenti patologie Alanina transaminasi ALT Malattie epatiche compresa epatite virale e cirrosi Albumina Malattie epatiche e renali Fosfatasi alcalina ALP Malattie epatiche ossee paratiroidee e intestinali Aspartato transaminasi Malattie epatiche compresa epatite e itterizia virale shock AST Calcio Malattie paratiroidee ossee e renali croniche tetanie Cloruro Disidratazione diarrea e vomito prolungati tubolopatia renale iperparatiroidismo ustioni affezioni renali da perdita di sali iperidratazione e terapia con tiazidici Creatinina Malattia renale e controllo della dialisi renale Glucosio Disturbi del metabolismo dei carboidrati compresi diabete mellito degli adulti e giovanile ipoglicemia Potassio Malattia renale glomerulare o tubolare insufficienza adrenocorticale chetoacidosi diabetica eccesso di potassio per endovena sepsi panipopituitarismo emolisi in vitro iperaldosteronismo
29. m s til que las muestras de sangre venosa de pacientes ambulatorios Las estad sticas de correlaci n para las pruebas del calcio de Piccolo corresponden a estas muestras de suero Resultados de un estudio con usuarios sin formaci n Se llev a cabo un estudio con usuarios sin formaci n en el que los participantes nicamente con las instrucciones del an lisis que se les proporcionaban deb an analizar tres discos con muestras aleatorizadas a ciegas Las muestras se prepararon a base de suero con tres niveles de cada uno de los catorce analitos ALT alb mina ALP AST calcio cloruro creatinina glucosa potasio sodio bilirrubina total di xido de carbono total prote na total y nitr geno ureico sangu neo BUN Los participantes no ten an ninguna formaci n en la realizaci n del an lisis Se reclutaron en total aproximadamente 60 participantes de 3 centros que constitu an una poblaci n suficientemente diversa estudios edad sexo etc a efectos demogr ficos En las tablas siguientes se muestra un resumen del rendimiento de cada analito Page 89 of 120 Alanina aminotransferasa ALT intervalo 15 0 95 IC 91 3 a 100 95 IC 94 2 a 100 Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 45 4 U l 98 9 U L 184 3 U I VR 3 7 1 7 1 5 Intervalo 42 53 96 103 175 191 observado Porcentaje de 98 4 100 100 resultados en el 61 62 62 62 62 62 95 IC 94 2
30. malnutrizione iperinsulinismo alcalosi metabolica e perdita gastrointestinale Sodio Disidratazione diabete insipido perdita di liquidi gastrointestinali ipotonici avvelenamento da sali depressione selettiva della sete perdite cutanee bruciori sudorazione iperaldosteronismo disturbi del SNC iponatremia diluitiva depletiva e delusiva sindrome da inadeguata secrezione di ADH Page 97 of 120 Bilirubina totale Affezioni epatiche compresa epatite e ostruzione della cistifellea itterizia Anidride carbonica totale Alcalosi e acidosi metabolica primaria e alcalosi e acidosi respiratoria primaria Proteine totali Malattie epatiche renali e del midollo osseo disturbi metabolici e alimentari Azoto ureico ematico BUN Malattie renali e metaboliche Come per ogni esame clinico diagnostico prima della diagnosi definitiva si dovranno considerare tutti gli altri esami compreso lo stato clinico del paziente 3 Principio su cui si basa la procedura Alanina transaminasi ALT L alanina transaminasi ALT stata misurata con tre metodologie Due di questi metodi la tecnica di accoppiamento colorimetrica alla dinitrofenilidrazina e l analisi enzimatica fluorescente sono usati di rado Un metodo enzimatico basato sul lavoro di Wr blewski e LaDue la tecnica pi diffusa per determinare le concentrazioni di ALT nel siero stata proposta una procedura Wr blewski e LaDue modificata come procedura raccomandata
31. nel risultato relativo a un campione che rientra nei valori normali Concentrazione che interferenza produce gt 10 osservata interferenza Alanino transaminasi Acido ascorbico 20 11 aum Ossaloacetato Albumina Acetoacetato 102 18 dim Ampicillina 30 12 dim Caffeina 10 14 dim Cloruro di calcio 20 17 dim Cefalotina Keflin 400 13 aum Ibuprofene 50 28 aum a chetoglutarato 5 11 dim Nitrofurantoina 20 13 dim Prolina 4 12 aum Sulfadiazine 10 14 dim Sulfanilamide 50 12 dim Teofillina 20 11 dim Fosfatasi alcalina Teofillina 20 42 dim Creatinina Acido ascorbico 20 11 dim Dopamina 19 80 dim L dopa 5 71 dim Epinefrina 1 45 dim Glutatione 30 13 dim Glucosio Ossaloacetato 132 11 dim Piruvato 44 13 dim Potassio Penicillina G 100 17 aum Sulfadiazine 150 12 dim Page 108 of 120 Tabella 3 Le seguenti sostanze hanno evidenziato uno spostamento maggiore del 10 nel risultato relativo a un campione che rientra nei valori normali segue Concentrazione che interferenza produce gt 10 osservata interferenza Sodio Cefalotina 400 12 aum Metotrexate 0 5 11 aum Penicillina G 100 10 aum Bilirubina totale Dopamina 19 55 dim L dopa 5 17 dim Anidride carbonica totale Acetamminofene 100 11 aum Acido ascorbico 20 12 dim Cefalotina 400 13 aum Cimetidina 16 19 dim Eritromicina 10 21 dim Lidocaina 1 23 aum Metotrexate 0 5 80 dim Nitrofurantoina 20 13 aum Acido
32. salicilico 50 17 dim Sulfadiazine 150 25 dim Dim diminuita concentrazione dello specifico analita Aum aumentata concentrazione dello specifico analita e Per analisi relativa al cloruro il bromuro a livelli tossici gt 15 mmol L pu avere un effetto rilevante aumento gt 10 sul risultato del cloruro Lo ioduro a concentrazioni molto elevate 30 mmol L livello massimo testato non ha alcun effetto Normali livelli fisiologici di bromuro e ioduro non interferiscono con il sistema Piccolo di test sul cloruro 11 Valori previsti Per accertare l intervallo di riferimento sono stati analizzati con l analizzatore chimico del sangue Piccolo campioni prelevati da 60 140 adulti maschi e femmine Questi valori sono stati calcolati in base all intervallo di riferimento del 95 ricavato dai valori complessivi ottenuti dai soggetti di riferimento Tali intervalli vengono riportati a solo titolo indicativo I valori ALP nei bambini in crescita sono estremamente variabili Si consiglia allo studio o alla struttura di definire valori minimi e massimi normali per la propria popolazione di pazienti Page 109 of 120 Tabella 4 Intervalli di riferimento Analita Unita comuni Unita SI Alanina transaminasi ALT 10 47 U L 10 47 U L Albumina ALB 3 3 5 5 g dL 33 55 g L Fosfatasi alcalina ALP sesso maschile 53 128 U L 53 128 U L Fosfatasi alcalina ALP sesso femminile 42 141 U L 42 141 U L Aspartato transaminasi AST 11 38
33. 15 0 IC 95 da 91 3 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 100 100 100 Questa percentuale si basa sull ipotesi dell impossibilita di effettuare una distinzione appropriata tra valori normali e anormali nel caso in cui gli errori siano maggiori di un quarto del range normale E stato considerato il range di 10 U L 47 U L Albumina ALB Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 3 0 g dL 3 5 g dL 4 2 g dL CV 2 1 2 5 1 8 Range osservato 2 9 3 2 3 3 3 7 4 0 4 4 Percentuale di 100 100 100 risultati nel range 62 62 62 62 62 62 12 5 IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 100 100 100 Fosfatasi alcalina ALP Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 94 5 U L 171 5 U L 337 5 U L CV 5 2 3 2 2 4 Range osservato 85 106 160 184 287 388 Percentuale di 100 100 100 risultati nel range 62 62 62 62 62 62 15 0 IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 100 100 100 Aspartato aminotransferasi AST Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 56 0 120 4 276 3 CV 2 4 1 1 1 0 Range osservato 54 60 117 124 266 285 Percentuale di 100 100 100 risultati nel range 62 62 62 62 62 62 15 0 IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 100 100 100 Calcio CA Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 8 0 10 5 13 1
34. 3 m 175 x Sa x et x 0 742 per le donne x 1 212 per i neri d America Glucosio GLU Le prime misurazioni della concentrazione di glucosio furono effettuate con metodi basati sulla riduzione in rame ad esempio Folin Wu e Somogyi Nelson A causa della mancanza di specificit delle tecniche di riduzione in rame sono state messe a punto procedure quantitative utilizzando gli enzimi esochinasi e glucosio ossidasi Il test del glucosio inserito nel disco reagente per il metabolismo generale una variante del metodo dell esochinasi che stato proposto come base del metodo di riferimento per il glucosio La reazione del glucosio con l adenosina trifosfato ATP catalizzata dalla esochinasi HK produce glucosio 6 fosfato G 6 P e adenosina difosfato ADP La glucosio 6 fosfato deidrogenasi G 6 PDH catalizza la reazione di G 6 P in 6 fosfogluconato e la riduzione della nicotinammide adenin dinucleotide NAD in NADH HK Glucosio ATP gt G 6 P ADP G 6 PDH G 6 P NAD gt 6 fosfogluconato NADH H Page 100 of 120 Potassio K Sono stati messi a punto metodi spettrofotometrici che consentono di misurare la concentrazione di potassio con i normali strumenti di chimica clinica Il metodo enzimatico Abaxis basato sull attivazione della piruvato chinasi con il potassio e risulta avere eccellente linearit e bassissima suscettibilit alle sostanze endogene L i
35. 5 observado Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 intervalo 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 El 8 6 Sodio NA Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 122 1 140 8 157 5 VR 1 0 0 8 1 0 Intervalo 118 127 138 143 154 162 observado Porcentaje de 98 4 100 100 resultados en el 61 62 62 62 62 62 intervalo 95 IC 91 3 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 3 1 Bilirrubina total TBIL Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 0 86 mg dl 2 5 mg dl 5 7 mg dl VR 6 1 2 6 1 8 Intervalo 0 8 1 0 2 3 2 6 5 4 5 9 observado Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 intervalo 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a100 95 IC 94 2 a 100 E 15 0 Di xido de carbono total tCO2 Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 20 3 27 6 34 4 VR 5 1 4 6 3 7 Intervalo 18 23 23 30 32 38 observado Porcentaje de 100 98 4 100 resultados en el 62 62 61 62 62 62 intervalo 95 IC 94 2 a 100 95 IC 91 3 a100 95 IC 94 2 a 100 14 7 Page 92 of 120 Prote na total TP Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 4 8 g dl 5 7 g dl 7 1 g dl VR 2 0 1 5 1 5 Intervalo 4 6 5 3 5 3 5 9 6 7 7 5 observado Porcentaje de 98 4 100 100 resultados en el 61 62 62 62 62 62 intervalo 95 IC 91 3 a 100 95 IC 94 2 a 100
36. 5 21 1422 1426 Jaynes PK y otros An Enzymatic Rate Rate Assay For Serum Creatinine With a Centrifugal Analyzer 1982 28 114 117 Fossati P y otros Enzymatic Creatinine Assay A New Colorimetric Method Based on Hydrogen Peroxide Measurement 1983 29 1494 1496 Whelton A y otros Nitrogen metabolites and renal function En Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2 ed Burtis CA Ashwood ER comps Philadelphia W B Saunders Company 1994 1513 1575 Folin O y otros A system of blood analysis J Biol Chem 1919 38 81 110 Somogyi M A reagent for the copper iodometric determination of very small amounts of sugar J Biol Chem 1937 117 771 776 Nelson N y otros A photometric adaptation of the Somogyi method for the determination of glucose J Biol 1944 153 375 380 Kaplan LA Glucose Clinical chemistry theory analysis and correlation 2 ed Kaplan LA AJ Pesce AJ comps St Louis The C V Mosby Company 1989 850 856 Berry MN y otros Enzymatic determination of potassium in serum Clin Chem 1989 35 817 20 Van Pelt J Enzymatic determination of sodium potassium and chloride in serum compared with determination by flame photometry coulometry and ion selective electrodes Clin Chem 1994 40 846 847 Hubl W y otros Enzymatic determination of sodium potassium and chloride in abnormal hemolyzed icteric lipemic paraproteinemic or uremic serum samples compared with indirect determination with ion selective electrodes Clin Chem 1994
37. Disco reactivo metab lico completo de Piccolo CE Servicio t cnico y de atenci n al cliente 800 822 2947 Exoneraci n de la CLIA Usar nicamente sangre entera tratada con heparina litio Complejidad moderada Usar sangre entera tratada con heparina litio plasma tratado con heparina litio o suero Diciembre de 2009 PN 400 7139 Rev G O 2003 Abaxis Inc Uni n City CA 94587 1 Indicaciones El disco reactivo metab lico completo Piccolo usado con el analizador qu mico sangu neo Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress est dise ado para su utilizaci n en la determinaci n cuantitativa in vitro de alanina aminotransferasa ALT alb mina fosfatasa alcalina ALP aspartato aminotransferasa AST calcio cloruro creatinina glucosa potasio sodio bilirrubina total di xido de carbono total prote na total y nitr geno ureico sangu neo BUN total en sangre entera heparinizada plasma heparinizado o suero Los an lisis de este panel est n exonerados seg n los requisitos de CLIA 88 Si un laboratorio modificara las instrucciones del sistema de an lisis los an lisis se considerar an de alta complejidad y quedar an sujetos a todos los requisitos de la CLIA En los laboratorios exonerados seg n la CLIA s lo puede analizarse sangre entera tratada con heparina litio En laboratorios de complejidad moderada pueden utilizarse sangre entera tratada con heparina litio plasma tratado con heparina litio o sue
38. N 80 Media 49 49 DE 0 98 0 98 VR 2 07 2 07 Control 2 Media 147 147 DE 1 83 1 83 VR 1 26 1 26 Calcio mg dl Control 1 N 80 Media 8 6 8 6 DE 0 21 0 25 VR 2 4 2 9 Control 2 Media 11 8 11 8 DE 0 39 0 40 VR 3 3 3 4 Page 86 of 120 Tabla 6 Precisi n continuaci n Sustrato Cloruro mmol l Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Creatinina mg dl Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Glucosa mg dl Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Potasio mmol l Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Sodio mmol l Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Bilirrubina total mg dl Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Tama o de la muestra Intraserial N 160 97 8 1 63 17 113 6 1 97 1 7 N 80 1 1 0 14 12 5 5 2 0 23 4 4 N 80 66 0 76 1 1 278 2 47 0 9 N 120 6 12 0 32 5 2 4 10 0 24 5 9 143 5 2 28 1 6 120 0 2 13 1 8 0 8 0 06 8 0 5 2 0 09 1 7 Page 87 of 120 Total 97 8 1 74 1 7 113 6 2 22 2 0 1 1 0 14 13 1 52 0 27 52 66 1 03 1 6 278 3 84 1 4 6 12 0 32 5 7 4 10 0 26 6 3 143 5 2 28 1 6 120 0 2 13 1 8 0 8 0 07 9 3 5 2 0 15 2 8 Tabla 6 Precisi n continuaci n Sustrato Tama o de la muestra Di xido de carbono total mmol l Control 1 N 120 Media DE VR Control 2 Media DE VR Prote na total mg dl Cont
39. U L 11 38 U L Calcio CA 8 0 10 3 mg dL 2 0 2 58 mmol L Cloruro CL 98 108 mmol L 98 108 mmol L Creatinina CRE 0 6 1 2 mg dL 53 106 pmol L Glucosio GLU 73 118 mg dL 4 05 6 55 mmol L Potassio K 3 6 5 1 mmol L 3 6 5 1 mmol L Sodio NA 128 145 mmol L 128 145 mmol L Bilirubina totale TBIL 0 2 1 6 mg dL 3 4 27 4 umol L Anidride carbonica totale tCO 18 33 mmol L 18 33 mmol L Proteina totale TP 6 4 8 1 g dL 64 81 g L Azoto ureico ematico BUN 7 22 mg dL 2 5 7 9 mmol urea L 12 Caratteristiche prestazionali Linearit La chimica per ciascun analita lineare sull arco dei valori dinamici elencati di seguito se l analizzatore chimico del sangue Piccolo o l analizzatore chimico Piccolo xpress vengono utilizzati seguendo la procedura raccomandata si veda il manuale dell operatore dell analizzatore chimico del sangue Piccolo o dell analizzatore chimico Piccolo xpress Tabella 5 Valori dinamici Piccolo Analita Unit comuni Unit SI Alanina transaminasi ALT 5 2000 U L 5 2000 U L Albumina ALB 1 6 5 g dL 10 65 g L Fosfatasi alcalina ALP sesso maschile 5 2400 U L 5 2400 U L Aspartato transaminasi AST 5 2000 U L 5 2000 U L Calcio CA 4 0 16 0 mg dL 1 0 4 0 mmol L Cloruro CL 80 135 mmol L 80 135 mmol L Creatinina CRE 0 2 20 mg dL 18 1768 umol L Glucosio GLU 10 700 mg dL 0 56 38 9 mmol L Potassio K 1 5 8 5 mmol L 1 5 8 5 mmol L Sodio NA 110 170 mmol L 110 170 mmol L Bilirubina totale TBIL 0 1 30
40. V 2 4 Controllo 2 Media 11 8 SD 0 39 CV 3 3 Page 111 of 120 Totale 21 2 79 13 5 52 3 25 6 2 5 6 0 11 2 1 3 7 0 11 2 9 39 2 29 5 8 281 8 75 3 1 49 0 98 2 07 147 1 83 1 26 8 6 0 25 2 9 11 8 0 40 3 4 Tabella 6 Precisione segue Analita Cloruro mmol L Controllo 1 Media DV CV Controllo 2 Media DV CV Creatinina mg dL Control 1 Media DV CV Controllo 2 Media SD CV Glucosio mg dL Control 1 Media DV CV Controllo 2 Media DV CV Potassio mmol L Controllo 1 Media DV CV Controllo 2 Media DV CV Sodio mmol L Controllo 1 Media DV CV Controllo 2 Media DV CV Bilirubina totale mg dL Controllo 1 Media SD CV Controllo 2 Media SD CV Quantita del campione N 160 N 80 N 120 Page 112 of 120 In corso di svolgimento 97 8 1 63 1 7 113 6 1 97 1 7 1 1 0 14 12 5 5 2 0 23 44 66 0 76 1 1 278 2 47 0 9 6 12 0 32 5 2 4 10 0 24 5 9 143 5 2 28 1 6 120 0 2 13 1 8 0 8 0 06 8 0 5 2 0 09 1 7 Totale 97 8 1 74 1 7 113 6 2 22 2 0 1 1 0 14 13 1 5 2 0 27 5 2 66 1 03 1 6 278 3 84 1 4 6 12 0 32 5 7 4 10 0 26 6 3 143 5 2 28 1 6 120 0 2 13 1 8 0 8 0 07 9 3 5 2 0 15 2 8 Tabella 6 Precisione segue Analita Quantita del campione In corso di svolgimento Totale Anidride carbonica totale mmol L Controllo 1 N
41. a prelievo evacuate senza additivo tappo rosso o provette per separazione del siero tappo rosso o rosso nero per i campioni di siero Iniziare il test non oltre 10 minuti dopo aver trasferito il campione nel disco reagente La massima precisione nel determinare la concentrazione di anidride carbonica totale si ha quando l analisi viene effettuata immediatamente dopo aver aperto la provetta e quanto prima possibile dopo aver prelevato ed elaborato il sangue nella provetta non aperta L aria ambiente contiene molta meno anidride carbonica del plasma pertanto parte dell anidride carbonica in forma gassosa verr liberata dal campione nell aria con conseguente diminuzione del valore dell anidride carbonica fino a 6 mmol L nel giro di un ora 8 Procedura Materiale in dotazione e Un disco reagente per metabolismo generale Piccolo numero parte 400 1028 una confezione di dischi numero parte 400 0028 Materiale necessario ma non in dotazione e Analizzatore chimico del sangue Piccolo o analizzatore chimico Piccolo xpress e Ogni analizzatore chimico del sangue Piccolo o analizzatore chimico Piccolo xpress corredato di pipette di trasferimento del campione volume fisso di circa 100 uL e puntali riordinabili direttamente ad Abaxis e Reagenti di controllo disponibili in commercio raccomandati da Abaxis per i valori attesi e i materiali di controllo approvati rivolgersi all assistenza tecnica Abaxis e Cronometro
42. a renal insuficiencia adrenocortical cetoacidosis diab tica tratamiento endovenoso con potasio excesivo sepsis panhipopituitarismo hem lisis in vitro hiperaldosteronismo malnutrici n hiperinsulinismo alcalosis metab lica y p rdida gastrointestinal Page 72 of 120 Sodio Deshidrataci n diabetes ins pida p rdida de l quidos gastrointestinales hipot nicos intoxicaci n por sal disminuci n selectiva de la sensaci n de sed p rdidas cut neas quemaduras sudoraci n hiperaldosteronismo alteraciones del SNC hiponatremia por diluci n por depleci n y por delirio y s ndrome de secreci n inadecuada de HAD Bilirrubina total Hepatopat as incluida la hepatitis y obstrucci n de la ves cula biliar ictericia Di xido de carbono total Alcalosis y acidosis metab lica primarias y alcalosis y acidosis respiratoria primarias Prote na total Hepatopat as enfermedades del ri n o de la m dula sea alteraciones metab licas y de la nutrici n Nitr geno ureico sangu neo Nefropat as y enfermedades metab licas BUN Al igual que con cualquier procedimiento diagn stico de prueba antes del diagn stico final hay que considerar todos los restantes procedimientos de prueba incluido el estado cl nico del paciente 3 Principio del procedimiento Alanina aminotransferasa ALT La alanina aminotransferasa ALT fue medida por tres m todos Dos de estos m todos la t cnica de acoplamiento colorim
43. abiciclo 8 8 5 triscosano Kryptofix 221 86ug Idrocloruro di 4 amminoantipirina 13ug Adenosina 5 difosfato 36ug Adenosina 5 trifosfato 22ug Acido a chetoglutarico 101ug Amilasi 0 036U Arsenazo III sale sodico 1 7ug Ascorbato ossidasi Cucurbita spp 0 3U Bilirubina ossidasi 0 1U Violetto di bromocresolo 2 2ug Acetato di calcio 25ug Acido citrico sale trisodico 567g Creatina amidinoidrolasi Actinobacillus spp 3U Creatinine amidohydrolase Pseudomonas spp 1U Solfato di rame 134ug Acido etilene glicol bis etere 8 amminoetile N N N N tetracetico EGTA 4ug Acido etilen diamminotetracetico EDTA 17818 Acido etilene diammin tetracetico EDTA sale disodico 15ug B galattosidasi 0 005U Glucosio 6 fosfato deidrogenasi lievito 0 05U Glutammato deidrogenasi fegato di bue 0 01U Glutammina sintetasi 0 17U Esochinasi lievito 0 1U Imidazolo 29ug Lattato deidrogenasi 0 27U L alanina 874u8 Acido L aspartico 426ug Acido L glutammico 9 2ug Cloruro di magnesio 3ug Solfato di magnesio 33ug Malico deidrogenasi cuore porcino 0 1U Cloruro di manganese 10ug N acetilcisteina 60ug B nicotinammide adenin dinucleotide NAD 40ug B nicotinammide adenin dinucleotide ridotta NADH 48ug o nitrofenil B D galattopiranoside ONPG 22ug Perossidasi barbaforte 1U Fosfoenol piruvato 57ug Fosfoenol piruvato carbossilasi 0 001U p NPP S6ug Ferrocianuro di potassio 0 4ug loduro di potassio 28ug Piruvato chinasi 0 01U Sarcosina ossidasi m
44. ador qu mico Piccolo xpress calculan e imprimen autom ticamente las concentraciones de analitos en la muestra Los detalles de los c lculos del criterio de valoraci n y velocidad de la reacci n se encuentran en el Manual del usuario del analizador qu mico en cuesti n En el manual del usuario se detalla tambi n la interpretaci n de los resultados stos se imprimen en tarjetas de resultado proporcionadas por Abaxis La parte posterior de las tarjetas de resultados es adhesiva para facilitar su colocaci n en los archivos del paciente 10 Limitaciones del procedimiento Las limitaciones generales del procedimiento se detallan en el Manual del operador del analizador qu mico sangu neo Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress e Fl nico anticoagulante recomendado para uso con el sistema qu mico sangu neo Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress es heparina litio Abaxis ha realizado estudios demostrando que el EDTA fluoruro oxalato y cualquier anticoagulante que contenga ones de amon aco interferir con al menos un producto qu mico del disco reactivo metab lico completo Piccolo No utilizar heparina s dica e Las muestras con un hematocrito superior al 62 65 del volumen de eritrocitos concentrados una fracci n de volumen de 0 62 0 65 puede dar resultados imprecisos Las muestras con un hematocrito elevado pueden ser analizadas como hemolizadas Estas muestras pueden ser centrifugadas para obtener plasma y lueg
45. alcolano e stampano automaticamente le concentrazioni degli analiti nel campione I dettagli relativi al calcolo della reazione al punto finale e nel tempo sono indicati nel manuale dell operatore dell analizzatore chimico del sangue Piccolo e dell analizzatore chimico Piccolo xpress L interpretazione dei risultati descritta in dettaglio nel manuale dell operatore I risultati vengono stampati su apposite schede fornite da Abaxis Le schede risultati sono adesive sul retro per poterle facilmente applicare sulle cartelle dei pazienti 10 Limiti d uso della procedura I limiti procedurali generali sono trattati nel manuale dell operatore dell analizzatore chimico del sangue Piccolo e dell analizzatore chimico Piccolo xpress e L unicoanticoagulante raccomandato per l uso con il sistema chimico del sangue Piccolo e l analizzatore chimico Piccolo xpress la litio eparina Abaxis ha condotto studi che dimostrano come l EDTA il fluoruro l ossalato e qualsiasi anticoagulante contenente ioni ammonio interferisce con almeno uno dei complessi chimici contenuti nel disco reagente per metabolismo generale Piccolo Non utilizzare eparina di sodio e campioni con ematocriti superiori al 62 65 del volume dei globuli rossi concentrati una frazione di volume di 0 62 0 65 possono dare luogo a risultati imprecisi I campioni con ematocriti elevati possono essere dati come emolizzati Tali campioni si possono centrifugare per ott
46. alori normali Ai gruppi di siero umano sono state aggiunte concentrazioni note di farmaci o sostanze chimiche si poi proceduto alla relativa analisi Per un elenco delle sostanze esogene e terapeutiche valutate vedere la Tabella 2 Per un elenco di analiti nei quali stata osservata un interferenza vedere la Tabella 3 Tabella 2 Valutazione delle sostanze esogene e terapeutiche Potenziale interferente Massima concentrazione testata mg dL se non diversamente specificato Acetamminofene 100 Acetoacetato 102 Acido acetilsalicilico 50 Ampicillina 30 Acido ascorbico 3 Caffeina 10 Cefalotina Keflin 400 Cloramfenicolo 100 Cimetidina 16 Dopamina 13 Epinefrina 1 Eritromicina 10 Glutatione 30 Idroclorotiazide 7 5 Ibuprofene 50 Isoniazide 4 Chetoprofene 50 L dopa 5 Lidocaina 1 Lattato di litio 84 Meticillina 100 Metotrexate 0 5 Metronidazolo 5 Page 107 of 120 Tabella 2 Valutazione delle sostanze esogene e terapeutiche segue Potenziale interferente Massima concentrazione testata mg dL se non diversamente specificato Nafcillina Nitrofurantoina 20 Oxacillina 1 Ossaloacetato 132 Penicillina G 100 Fenitoina 5 5 Difenilidantione 3 Prolina 4 Rifampina 0 5 Acido salicilico 50 Sulfadiazine 150 Sulfanilamide 50 Teofillina 20 Per un elenco di analiti nei quali e stata osservata un interferenza vedere la Tabella 3 Tabella 3 Le seguenti sostanze hanno evidenziato uno spostamento maggiore del 10
47. analysis and correlation 2 ed In Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The CV Mosby Company 1989 869 872 Koller A Kaplan LA Total serum protein In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2nd ed In Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 1057 1060 Reigler E Eine kolorimetrische Bestimmungsmethode des Eiweisses Z Anal Chem 1914 53 242 245 Weichselbaum TE An accurate and rapid method for the determination of proteins in small amounts of blood serum and plasma Am J Clin Path 1946 16 40 49 Doumas BT et al A candidate reference method for determination of total protein in serum I Development and validation Clin Chem 1981 27 1642 1650 Fales FW Urea in serum direct diacetyl monoxime method In Selected Methods of Clinical Chemistry Vol 9 Faulkner WR Meites S eds Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1982 365 373 Van Slyke et al A permanent preparation of urease and its use in the determination of urea J Biol Chem 1914 19 11 228 Fawcett JK et al A rapid and Precise method for the determination of urea J Clin Pathol 1960 13 156 159 Talke H et al Enzymatische Harnstoffbestimmung in Blut und Serum im optischen Test nach Warburg Klin Wochensch 1965 43 174 175 Hallett et al Reduced nicotinamide adenine dinucleotide coupled reaction for emergency blood urea estimation Clin Chim Acta 1971 35 33 37 Patton et al Spectrophotometric
48. and kinetics investigation of the Berthelot reaction for the determination of ammonia Anal Chem 1977 49 464 469 Sampson EJ et al A coupled enzyme equilibrium method for the measuring urea in serum optimization and evaluation of the AACC study group on Urea Candidate reference method Clin Chem 1980 26 816 826 National Committee For Clinical Laboratory Standards Physician s office laboratory guidelines tentative guideline 2 ed NCCLS Document POL1 T2 Wayne PA NCCLS 1992 Scott M G Electrolytes and Blood Gases In Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia WB Saunders Company 1999 1058 1059 Page 119 of 120 13 70 71 T2 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 Bibliografia segue National Committee For Clinical Laboratory Standards Procedures for the handling and processing of blood specimens tentative standard NCCLS Document H18 A2 Wayne PA NCCLS 1999 Overfield CV et al Glycosis a re evaluation of the effect on blood glucose Clin Chim Acta 1972 39 35 40 Rehak NN Chiang BT Storage of whole blood effect of temperature on the measured concentration of analytes in serum Clin Chem 1988 34 2111 4 Sherwin JE Obernolte R Bilirubin In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation Kaplan LA Pesce AJ comps St Louis The C V Mosby Company 1989 1009 1015 Henry RJ et al Clinical Chemistry Principles and Technics 2 ed Ne
49. arbon dioxide in blood plasma Am J Clin Pathol 1960 33 181 185 Korzun WJ Miller WG Carbon Dioxide Clinical chemistry theory analysis and correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AP comps St Louis The CV Mosby Company 1989 869 872 Koller A Kaplan LA Total serum protein Clinical chemistry theory analysis and correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AP comps St Louis The C V Mosby Company 1989 1057 1060 Reigler E Eine kolorimetrische Bestimmungsmethode des Eiweisses Z Anal Chem 1914 53 242 245 Weichselbaum TE An accurate and rapid method for the determination of proteins in small amounts of blood serum and plasma Am J Clin Path 1946 16 40 49 Doumas BT y otros A candidate reference method for determination of total protein in serum I Development and validation Clin Chem 1981 27 1642 1650 Fales FW Urea in serum direct diacetyl monoxime method En Selected Methods of Clinical Chemistry Vol 9 Faulkner WR Meites S comps Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1982 365 373 Van Slyke y otros A permanent preparation of urease and its use in the determination of urea J Biol Chem 1914 19 11 228 Fawcett JK y otros A rapid and precise method for the determination of urea J Clin Pathol 1960 13 156 159 Talke H y otros Enzymatische Harnstoffbestimmung in Blut and Serum im optischen Test nach Warburg Klin Wochensch 1965 43 174 175 Hallett y otros Reduced nicotinamide adenine dinucl
50. as muestras no hemolizadas que no se procesan con rapidez pueden tener niveles de potasio elevados por la p rdida intracelular de potasio Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n se deben analizar dentro de los 60 minutos posteriores a la extracci n Las concentraciones de glucosa se ven afectadas por el tiempo transcurrido desde que el paciente ingiri alimentos y el tipo de muestra obtenida de l Para determinar los resultados de glucosa con precisi n deben obtenerse muestras de un paciente que haya ayunado por lo menos durante 12 horas Las concentraciones de glucosa disminuyen aproximadamente 5 12 mg dl por hora en muestras no centrifugadas almacenadas a temperatura ambiente La refrigeraci n de muestras de sangre entera puede provocar cambios significativos en las concentraciones de aspartato aminotransferasa creatinina y glucosa La muestra puede separarse en plasma y suero y almacenarse en tubos de ensayo con tapa a 2 8 C 36 46 F si la muestra no se analiza dentro de los 60 minutos Los resultados de la bilirrubina total pueden verse afectados de manera negativa por la fotodegradaci n Las muestras de sangre entera que no se analicen de inmediato se deben almacenar en la oscuridad por per odos que no excedan los 60 minutos Si la muestra no se puede analizar dentro de dicho per odo se la puede separar en plasma o suero y almacenar en un tubo de muestra con tapa en la oscuridad a baja temperatura
51. d New York Harper and Row 1974 417 421 1058 1059 Scott M G Electrolytes and Blood Gases Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 ed Burtis CA Ashwood ER comps Philadelphia WB Saunders Company 1999 1065 1066 National Committee for Clinical Laboratory Standards Interference testing in clinical chemistry proposed guideline NCCLS Document EP7 A Wayne PA NCCLS 2002 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 3 ed Washington DC AACC Press 1990 National Committee for Clinical Laboratory Standards How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory approved guidelines 2 ed NCCLS Document C28 A2 Wayne PA NCCLS 2000 Painter PC Cope JY Smith JI Reference Information for the clinical laboratory En Burtis CA Ashwood ER comps Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 ed Philadelphia WB Saunders Company 1999 p gs 676 684 National Committee for Clinical Laboratory Standards Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices approved guideline NCCLS Document EP5 A Wayne PA NCCLS 1999 National Committee for Clinical Laboratory Standards Quality management for unit use testing proposed guideline NCCLS Document EP18 A Wayne PA NCCLS 2002 Page 95 of 120 13 Bibliograf a continuaci n 82 National Committee for Clinical Laboratory Standards Method comparison and bias estimation using patient samples approved guideline NCCLS Document EP9 A2 Wayne
52. dall International Federation of Clinical Chemistry International Federation of Clinical Chemistry IFCC Il metodo messo a punto per utilizzo con gli analizzatori Piccolo una variante della procedura raccomandata dalla IFCC In questa reazione la ALT catalizza il trasferimento di un gruppo ammidico da L alanina a a chetoglutarato formando L glutammato e piruvato La lattato deidrogenasi catalizza la trasformazione del piruvato in lattato Allo stesso tempo P NADH viene ossidata in NAD come illustrato nel seguente schema di reazione ALT L alanina a chetoglutarato L glutammato Piruvato LDH Piruvato NADH H Lattato NAD Il tasso di variazione nella differenza di assorbanza tra 340 nm e 405 nm causata dalla trasformazione di NADH in NAD ed direttamente proporzionale alla quantit di ALT presente nel campione Albumina ALB Tra i primi metodi usati per misurare l albumina ricordiamo le tecniche di frazionamento e il contenuto di triptofano delle globuline Tali metodi sono poco pratici nell esecuzione e non presentano un elevato grado di specificit Due tecniche immunochimiche sono considerate metodi di riferimento ma sono costose e richiedono molto tempo Le tecniche basate sul legame con coloranti sono le pi usate per la misurazione dell albumina Il verde di bromocresolo BCG il pi diffuso fra i metodi basati su legame con colorante ma pu dare una concen
53. disco reactivo Una bolsa rasgada o rota puede permitir que la humedad llegue al disco sin usar y afecte de manera negativa la eficacia del reactivo No use un disco de una bolsa da ada 6 Instrumento Consulte el Manual del usuario del analizador qu mico sangu neo Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress para obtener informaci n completa acerca del uso del analizador 7 Recolecci n y preparaci n de las muestras En la secci n Obtenci n de muestras del manual del usuario del analizador qu mico sangu neo Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress se describen las t cnicas para la obtenci n de las muestras e El tama o m nimo de muestra requerido es 100 ul de sangre entera heparinizada plasma heparinizado suero o material de referencia La c mara de muestra del disco reactivo puede contener hasta 120 ul de muestra Page 79 of 120 Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n deben ser homogeneizadas antes de transferir una muestra al disco reactivo Invierta el tubo de recolecci n con suavidad varias veces antes de transferir la muestra No sacuda el tubo de recolecci n esto puede causar hem lisis La hem lisis puede provocar resultados err neamente elevados en las pruebas de potasio Este problema puede pasar desapercibido cuando se analiza sangre entera la liberaci n de potasio de apenas 0 5 de los eritrocitos puede aumentar el nivel s rico de potasio en 0 5 mmol l Adem s incluso l
54. e 62 62 62 62 62 62 8 6 IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 100 100 100 Sodio NA Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 122 1 140 8 157 5 CV 1 0 0 8 1 0 Range osservato 118 127 138 143 154 162 Percentuale di 98 4 100 100 risultati nel range 61 62 62 62 62 62 3 1 IC 95 da 91 3 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 100 100 100 Page 116 of 120 Bilirubina totale TBIL Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 0 86 mg dL 2 5 mg dL 5 7 mg dL CV 6 1 2 6 1 8 Range osservato 0 8 1 0 2 3 2 6 5 4 5 9 Percentuale di 100 100 100 risultati nel range 62 62 62 62 62 62 15 0 IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 100 100 100 Anidride carbonica totale tCO Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 20 3 27 6 34 4 CV 5 1 4 6 3 7 Range osservato 18 23 23 30 32 38 Percentuale di 100 98 4 100 risultati nel range 62 62 61 62 62 62 14 7 IC 95 da 94 2 a IC 95 da 91 3 a IC 95 da 94 2 a 100 100 100 Proteine totali TP Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 4 8 g dL 5 7 g dL 7 1 g dL CV 2 0 1 5 1 5 Range osservato 4 6 5 3 53 5 9 6 7 7 5 Percentuale di 98 4 100 100 risultati nel range 61 62 62 62 62 62 5 9 IC 95 da 91 3 a IC 95 da 94 2 a IC 95 da 94 2 a 100
55. e en contacto con el Servicio de asistencia t cnica de Abaxis para solicitar una lista de los materiales de control de calidad homologados con los l mites de aceptaci n Otros controles basados en plasma o suero humanos pueden no ser compatibles Los materiales de control de calidad deben almacenarse conforme a las instrucciones del prospecto incluido con los controles Si los controles dan resultados fuera de los l mites repita una vez Si siguen fuera de los l mites llame al servicio de asistencia t cnica Si los controles incumplen los l mites de la etiqueta no utilice sus resultados Consulte el Manual del usuario de Piccolo o Piccolo xpress para obtener informaci n m s detallada sobre la realizaci n el registro la interpretaci n y la extrapolaci n de los resultados de control Laboratorios exonerados Abaxis recomienda las pruebas de control de la siguiente manera e Al menos cada 30 d as e Siempre que hayan cambiado las condiciones de laboratorio de manera significativa por ejemplo traslado del Piccolo a otro lugar o cambios en el control de temperatura e Cuando se indique la formaci n o nueva formaci n del personal e Con cada lote nuevo an lisis exonerados por CLIA en laboratorios en estado exonerado Laboratorios no exonerados Abaxis recomienda que las pruebas de control se hagan conforme a las recomendaciones federales estatales y locales 9 Resultados El analizador qu mico sangu neo Piccolo o el analiz
56. e l operatore sui livelli di interferenti presenti in ogni campione e Il sistema chimico del sangue Piccolo e l analizzatore chimico Piccolo xpress eliminano ogni eventuale risultato falsato da un interferenza superiore al 10 dovuta a emolisi lipemia e ittero In tal caso sulla scheda dei risultati verr stampata la dicitura HEM LIP o ICT rispettivamente al posto dei risultati e Livelli di amilasi molto elevati gt 9 000 U L avranno un effetto rilevante con aumento gt 10 sul risultato relativo al cloruro La concentrazione di amilasi non viene valutata dal sistema Piccolo per ogni campione e Il dosaggio del potassio nel sistema Piccolo un test combinato di piruvato chinasi PK lattato deidrogenasi LDH In caso di trauma muscolare estremo o livelli molto elevati di creatina chinasi CK il sistema Piccolo pu pertanto recuperare un valore di potassio K falsamente elevato In tal caso il recupero di un livello intesso di potassio elevato deve essere confermato utilizzando una metodologia diversa e Peri livelli massimi di sostanze endogene rivolgersi all assistenza tecnica Abaxis Effetti delle sostanze esogene e terapeutiche e Sono state selezionate trentacinque sostanze come potenziali interferenti con i metodi di test di Abaxis secondo le raccomandazioni di Young Si definisce interferenza significativa uno spostamento superiore al 10 nel risultato relativo a un campione rientrante nei v
57. el Servicio de asistencia t cnica Abaxis para solicitar materiales de control homologados y valores de referencia Cron metro Par metros de prueba El analizador qu mico sangu neo Piccolo y el analizador qu mico Piccolo xpress funcionan a una temperatura ambiente entre 15 C y 32 C 59 90 F El tiempo necesario para el an lisis de cada disco reactivo metab lico completo de Piccolo es inferior a 14 minutos El analizador mantiene el disco reactivo a una temperatura de 37 C 98 6 F durante el intervalo de medici n Page 80 of 120 Procedimiento de prueba La extracci n completa de la muestra y los procedimientos paso a paso se detallan en el Manual del usuario del analizador qu mico sangu neo Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Calibrado El analizador qu mico sangu neo Piccolo y el analizador qu mico Piccolo xpress han sido calibrados por el fabricante antes de su env o al cliente El c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras proporciona al analizador los datos de calibraci n espec ficos para el disco Ver el manual del usuario del analizador qu mico de sangre de Piccolo Control de calidad Consulte la Secci n 2 4 del manual del usuario de Piccolo o la Secci n 6 Calibraci n y control de calidad del manual del usuario de Piccolo xpress El rendimiento del analizador qu mico sangu neo Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress puede verificarse por medio de controles P ngas
58. el paciente El m todo de Piccolo para la creatinina es comparable con el m todo de referencia para la creatinina IDMS de forma que se puede utilizar la siguiente forma de la ecuaci n MDRD para el c lculo de la eGFR GFR mL min 1 73 m 175 x Sw 1 x edad x 0 742 si es mujer x 1 212 si es afroamericano Glucosa GLU Las mediciones de la concentraci n de glucosa se realizaron en un principio utilizando m todos de reducci n del cobre como Folin Wu y Somolgyi Nelson La falta de especificidad en las t cnicas de reducci n del cobre llev al desarrollo de procedimientos cuantitativos mediante las enzimas hexoquinasa y glucosa oxidasa La prueba de la glucosa incorporada en el disco reactivo metab lico completo es una versi n modificada del m todo de la hexoquinasa que se propuso como la base para el m todo de referencia de la glucosa La reacci n de glucosa con adenosina trifosfato ATP catalizada por la hexoquinasa HK produce glucosa 6 fosfato G 6 P y adenosina difosfato ADP La glucosa 6 fosfato deshidrogenasa G 6 PDH cataliza la reacci n de G 6 P en 6 fosfogluconato y la reducci n de nicotinamida adenina dinucle tido NAD a NADH Page 75 of 120 HK Glucosa ATP gt G 6 P ADP G 6 PDH G 6 P NAD 6 Fosfogluconato NADH H Potasio K Se han desarrollado m todos espectrofotom tricos que permiten la medici n de la concentraci n del potasio con instrumentaci
59. enere plasma e poi rianalizzare in un nuovo disco reagente e Eventuali risultati di un dato test che superino i valori minimi e massimi di riferimento per l analisi in questione si dovranno analizzare con un altro metodo di esame approvato o inviati a un laboratorio di fiducia Non diluire il campione e rianalizzarlo con l analizzatore chimico del sangue Piccolo o l analizzatore chimico Piccolo xpress Avvertenza Le numerose prove condotte sul sistema chimico del sangue Piccolo o l analizzatore chimico Piccolo xpress hanno evidenziato che in casi molto rari il flusso di campione erogato all interno del disco reagente pu non essere regolare all interno del ricettacolo del campione A causa del flusso irregolare possibile che venga analizzata una quantit inadeguata di campione e diversi risultati potrebbero superare i valori di riferimento minimi e massimi Il campione pu essere rianalizzato usando un nuovo disco reagente Page 106 of 120 Interferenza Diverse sostanze sono state testate come interferenti con gli analiti Sono stati preparati gruppi di siero umano Ogni potenziale interferente stato analizzato alla concentrazione indicata in NCCLS EP7 P Effetti delle sostanze endogene e Gli interferenti fisiologici emolisi ittero e lipemia causano alterazioni nelle risultanze delle concentrazioni di alcuni analiti Gli indici del campione sono stampati sulla parte inferiore di ogni scheda dei risultati per informar
60. eotide coupled reaction for emergency blood urea estimation Clin Chim Acta 1971 35 33 37 Patton y otros Spectrophotometric and kinetics investigation of the Berthelot reaction for the determination of ammonia Anal Chem 1977 49 464 469 Sampson EJ y otros A coupled enzyme equilibrium method for the measuring urea in serum optimization and evaluation of the AACC study group on Urea Candidate reference method Clin Chem 1980 26 816 826 National Committee For Clinical Laboratory Standards Physician s office laboratory guidelines tentative guideline 2 ed NCCLS Document POL1 T2 Wayne PA NCCLS 1992 Scott M G Electrolytes and Blood Gases Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 ed Burtis CA Ashwood ER comps Philadelphia WB Saunders Company 1999 1058 1059 National Committee for Clinical Laboratory Standards Procedures for the handling and processing of blood specimens tentative standard NCCLS Document H18 A2 Wayne PA NCCLS 1999 Overfield CV y otros Glycosis a re evaluation of the effect on blood glucose Clin Chim Acta 1972 39 35 40 Rehak NN Chiang BT Storage of whole blood effect of temperature on the measured concentration of analytes in serum Clin Chem 1988 34 2111 4 Sherwin JE Obernolte R Bilirubin En Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation Kaplan LA Pesce AJ comps St Louis The C V Mosby Company 1989 1009 1015 Henry RJ y otros Clinical Chemistry Principles and Technics 2 e
61. esultado para una muestra en l mites normales Concentraci n a la que de interferencia se produce gt 10 observada de interferencia Alanina aminotransferasa cido asc rbico 20 11 aum Oxaloacetato Alb mina Acetoacetato 102 18 dism Ampicilina 30 12 dism Cafe na 10 14 dism Cloruro de calcio 20 17 dism Cefalotina Keflin 400 13 aum Ibuprofeno 50 28 aum a cetoglutarato 5 11 dism Nitrofurantoina 20 13 dism Prolina 4 12 aum Sulfadiazina 10 14 dism Sulfanilamida 50 12 dism Teofilina 20 11 dism Fosfatasa alcalina Teofilina 20 42 dism Page 83 of 120 Tabla 3 Las sustancias siguientes mostraron un desv o superior al 10 en el resultado para una muestra en l mites normales continuaci n Concentraci n a la que de interferencia se produce gt 10 observada de interferencia Creatinina cido asc rbico 20 11 dism Dopamina 19 80 dism L dopa 5 71 dism Epinefrina 1 45 dism Glutationa 30 13 dism Glucosa Oxaloacetato 132 11 dism Piruvato 44 13 dism Potasio Penicilina G 100 17 aum Sulfadiazina 150 12 dism Sodio Cefalotina 400 12 aum Metotrexato 0 5 11 aum Penicilina G 100 10 aum Bilirrubina total Dopamina 19 55 dism L dopa 5 17 dism Di xido de carbono total Paracetamol 100 11 aum cido asc rbico 20 12 dism Cefalotina 400 13 aum Cimetidina 16 19 dism Eritromicina 10 21 dism Lidoca na 1 23
62. evaluado por pruebas que emplean cido sulfanilico diazotizado P Se ha desarrollado un m todo m s moderno y m s espec fico que utiliza la enzima bilirrubina oxidasa Adem s de utilizar el m todo de prueba de la bilirrubina total m s espec fico la fotodegradaci n del electrolito se minimiza con los analizadores Piccolo porque la muestra se puede analizar inmediatamente despu s de obtenida En el procedimiento enzim tico la bilirrubina se oxida por la bilirrubina oxidasa en biliverdina Bilirrubina oxidasa Bilirrubina O gt gt Biliverdina H O La bilirrubina se mide como la diferencia en la absorbancia entre 467 nm y 550 nm La absorbancia inicial de esta reacci n de punto final se determina por la cubeta de referencia con bilirrubina y la absorbancia final se obtiene de la cubeta de prueba con bilirrubina La cantidad de bilirrubina en la muestra es proporcional a la diferencia entre las mediciones inicial y final de la absorbancia Di xido de carbono total tC 02 El di xido de carbono total en suero o en plasma existe como di xido de carbono disuelto derivados carbaminos de las prote nas iones de bicarbonato y carbonato y cido carb nico El di xido de carbono total se puede medir mediante el indicador de pH m todo de electrodo CO y m todos enzim ticos espectrofotom tricos que producen todos resultados precisos y exactos El m todo enzim tico est bien adaptado para usar en un analizador qu mico
63. g l Fosfatasa alcalina ALP Var n 53 128 UA 53 128 U I Fosfatasa alcalina ALP Mujer 42 141 U l 42 141 U l Aspartato aminotransferasa AST 11 38 U l 11 38 U l Calcio CA 8 0 10 3 mg dl 2 0 2 58 mmol l Cloruro CL 98 108 mmol l 98 108 mmol l Creatinina CRE 0 6 1 2 mg dl 53 106 pmol l Glucosa GLU 73 118 mg dl 4 05 6 55 mmol l Potasio K 3 6 5 1 mmol l 3 6 5 1 mmol l Sodio NA 128 145 mmol l 128 145 mmol l Bilirrubina total TBIL 0 2 1 6 mg dl 3 4 27 4 umol l Di xido de carbono total tCO 18 33 mmol l 18 33 mmol l Proteina total TP 6 4 8 1 g dl 64 81 g l Nitr geno ureico BUN 7 22 mg dl 2 5 7 9 mmol urea l 12 Caracter sticas de eficacia Linealidad La qu mica para cada analito es lineal en el intervalo din mico indicado a continuaci n cuando el analizador qu mico sangu neo Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress funcionan de acuerdo con el procedimiento recomendado consulte el manual del usuario del analizador qu mico sangu neo Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress Tabla 5 L mites din micos de Piccolo Sustrato Unidades comunes Unidades SI Alanina aminotransferasa ALT 5 2000 U I 5 2000 U I Alb mina ALB 1 6 5 g dl 10 65 g l Fosfatasa alcalina ALP 5 2400 U I 5 2400 U ll Aspartato aminotransferasa AST 5 2000 U I 5 2000 U ll Calcio CA 4 0 16 0 mg dl 1 0 4 0 mmol l Cloruro CL 80 135 mmol l 80 135 mmol l Creatinina CRE 0 2 20 mg dl 18 1768 umol l Glucosa GLU 10 700 mg dl 0
64. humano fueron enriquecidas con una concentraci n conocida de los f rmacos o qu micos y analizadas En la Tabla 2 puede consultar una lista de las sustancias ex genas y terap uticas evaluadas En la Tabla 3 puede consultar una lista de los analitos en los que se observaron interferencias Tabla 2 Sustancias ex genas y terap uticas evaluadas Factores de interferencia potenciales Concentraci n m xima analizada mg dl salvo donde se indiquen otras unidades Paracetamol 100 Acetoacetato 102 cido acetilsalic lico 50 Ampicilina 30 cido asc rbico 3 Cafe na 10 Cefalotina Keflin 400 Cloranfenicol 100 Cimetidina 16 Dopamina 13 Epinefrina 1 Eritromicina 10 Page 82 of 120 Tabla 2 Sustancias ex genas y terap uticas evaluadas continuaci n Factores de interferencia potenciales Concentraci n m xima analizada mg dl salvo donde se indiquen otras unidades Glutationa 30 Hidroclorotiazida 7 5 Ibuprofeno 50 Isoniacida 4 Cetoprofen 50 L dopa 5 Lidocaina 1 Lactato de litio 84 Meticilina 100 Metotrexato 0 5 Metronidazol 5 Nafcilina 1 Nitrofuranto na 20 Oxacilina 1 Oxaloacetato 132 Penicilina G 100 Fenito na 5 5 Difenilhidanto na 3 Prolina 4 Rifampina 0 5 cido salic lico 50 Sulfadiazina 150 Sulfanilamida 50 Teofilina 20 En la Tabla 3 puede consultar una lista de los analitos en los que se observaron interferencias Tabla 3 Las sustancias siguientes mostraron un desv o superior al 10 en el r
65. icroorganismo 1U Tartrato di sodio potassio 343 ug Ureasi fagiolini 0 05U Solfato di zinco 3ug Sostanze tampone tensioattivi eccipienti e conservanti Page 103 of 120 Avvertenze e precauzioni e Per uso diagnostico in vitro e Il contenitore del diluente nel disco reagente viene aperto automaticamente al momento della chiusura del cassetto dell analizzatore Non si puo riutilizzare un disco con contenitore del diluente aperto Accertarsi che il campione o controllo sia stato inserito nel disco prima di chiudere il cassetto e dischi reagente usati contengono fluidi corporei umani Si dovranno adottare le corrette prassi di laboratorio nel maneggiare e smaltire i dischi usati Per le istruzioni sulle modalit di eliminazione di eventuali fuoriuscite di materiale a rischio biologico vedere il manuale dell operatore dell analizzatore chimico del sangue Piccolo o dell analizzatore chimico Piccolo xpress e I dischi reagente sono in plastica e possono spaccarsi o scheggiarsi in caso di caduta Non utilizzare in alcun caso un disco che abbia subito cadute in quanto pu rilasciare materiale a rischio biologico all interno dell analizzatore e granuli di reagente possono contenere acidi o sostanze caustiche L operatore non viene a contatto con i granuli di reagente se vengono seguite le procedure raccomandate Qualora si debbano maneggiare i granuli p es per pulire dopo aver fatto cadere e infranto un disco reagente evitare
66. ioni metodi basati sulla precipitazione sono complessi e spesso imprecisi Il metodo di riferimento per il calcio la spettroscopia ad assorbimento atomico tale metodo tuttavia non adatto ad analisi di routine I metodi pi diffusi sono quelli spettrometrici che utilizzano indicatori metallocromici a base di o cresolftaleina complexone o arsenazo II L arsenazo III presenta una elevata affinit con il calcio e non dipendente dalla temperatura come il CPC 25 26 27 I Il calcio presente nel campione prelevato dal paziente si lega con l arsenazo III formando un complesso calcio colorante Ca arsenazo III gt Complesso Ca arsenazo III La reazione al punto finale viene controllata a 405 nm 467 nm e 600 nm La quantit di calcio nel campione proporzionale all assorbanza Cloruro CL Il metodo si basa sulla determinazione dell attivazione dell attivit dell a amilasi in funzione del cloruro L a amilasi disattivata viene riattivata mediante l aggiunta dello ione cloruro consentendo al calcio di riassociarsi con l enzima La riattivazione dell attivit dell a amilasi proporzionale alla concentrazione di ioni cloruro nel campione L a amilasi riattivata trasforma il substrato 2 cloro p nitrofenil a D maltotrioside CNPG3 in 2 cloro p nitrofenolo CNP producendo colore e a maltotriosio G3 La reazione si misura bicromaticamente l aumento dell assorbanza
67. l ingestione il contatto cutaneo e l inalazione Istruzioni per la manipolazione del reagente I dischi reagente possono essere utilizzati direttamente dal frigorifero senza riscaldarli Non lasciare 1 dischi sigillati negli astucci di foglio d alluminio a temperatura ambiente per oltre 48 ore prima dell uso Aprire l astuccio di foglio d alluminio sigillato estrarre il disco e utilizzarlo seguendo le istruzioni contenute nel manuale dell operatore dell analizzatore chimico del sangue Piccolo o dell analizzatore chimico Piccolo xpress Se un disco non viene utilizzato entro 20 minuti dopo l apertura dell astuccio dovr essere gettato via Conservazione Conservare i dischi reagente negli astucci sigillati a 2 8 C 36 46 F Non esporre i dischi aperti o meno alla luce solare diretta o a temperature superiori a 32 C 90 F I dischi reagente si possono utilizzare fino alla data di scadenza indicata sulla confezione La data di scadenza inoltre indicata in forma codificata nel codice a barre stampato sul relativo anello In caso di reagenti scaduti sul display dell analizzatore chimico del sangue Piccolo o dell analizzatore chimico Piccolo xpress viene visualizzato un messaggio di errore Segni di instabilit o deterioramento del disco reagente Se l astuccio strappato o comunque danneggiato l umidit pu penetrare nel disco non utilizzato e alterare il comportamento del reagente Non utilizzare dischi prele
68. l bilirrubina total 0 1 mg dl 1 7 pmol L di xido de carbono total 5 mmol l prote na total 2 g dl 20 g l y nitr geno ureico sangu neo 2 0 mg dl 0 7 mmol urea Page 85 of 120 Precisi n Los estudios de precisi n se realizaron mediante el uso de las recomendaciones NCCLS EP5 A con modificaciones basadas en NCCLS EP18 P para dispositivos que se vayan a usar en la unidad Los resultados para la precisi n intraserial y total se determinaron mediante dos niveles de materiales de referencia disponibles comercialmente Los estudios utilizaron m ltiples instrumentos y dos lotes de discos reactivos Las pruebas de calcio creatinina glucosa sodio y nitr geno ureico fueron realizadas en un sitio las de potasio y di xido de carbono total se realizaron en dos sitios a lo largo de 20 d as la prueba de cloruro se realiz en dos sitios a lo largo de cinco d as Los resultados de los estudios de precisi n se muestran en la Tabla 6 Tabla 6 Precisi n Sustrato Tama o de la muestra Intraserial Total Alanina aminotransferasa U 1 Control 1 N 80 Media 21 21 DE 2 76 2 79 VR 13 4 13 5 Control 2 Media 52 52 DE 2h 3 25 VR 5 2 6 2 Alb mina g dl Control 1 N 80 Media 5 6 5 6 DE 0 09 0 11 VR 1 7 2 1 Control 2 Media 3 7 3 7 DE 0 07 0 11 VR 2 0 2 9 Fosfatasa alcalina U I Control 1 N 80 Media 39 39 DE 1 81 2 29 SD 4 6 5 8 Control 2 Media 281 281 DE 4 08 8 75 VR 1 5 3 1 Aspartato aminotransferasa U 1 Control 1
69. lectrodes Clin Chem 1994 40 846 847 Hubl W et al Enzymatic determination of sodium potassium and chloride in abnormal hemolyzed icteric lipemic paraprteinemic or uremic serum samples compared with indirect determination with ion selective electrodes Clin Chem 1994 40 1528 1531 Helgerson RC et al Host guest Complexation 50 Potassium and sodium ion selective chromogenic ionophores J Amer Chem Soc 1989 111 6339 6350 Kumar A et al Chromogenic ionophere based methods for spectrophotometric assay of sodium and potassium in serum and plasma Clin Chem 1988 34 1709 1712 Berry MN et al Enzymatic determination of sodium in serum Clin Chem 1988 34 2295 2298 Malloy HT and Evelyn KA The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter J Biol Chem 1937 119 481 490 Meites S Bilirubin direct reacting and total modified Malloy Evelyn method In Selected Methods of Clinical Chemistry Vol 8 9 Faulkner WR Meites S eds Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1982 119 124 Murao S Tanaka N A new enzyme bilirubin oxidase produced by Myrothecium verrucaria MT 1 Agric Biol Chem 1981 45 2383 2384 Osaki S Anderson S Enzymatic determination of bilirubin Clin Chem 1984 30 971 Abstract Skeggs LT Jr An automatic method for the determination of carbon dioxide in blood plasma Am J Clin Pathol 1960 33 181 185 Korzun WJ Miller WG Carbon Dioxide In Clinical chemistry theory
70. lfate as the globulin precipitant in the determination of proteins in blood J Biol Chem 1921 49 93 107 Howe PE The determination of proteins in blood a micro method J Biol Chem 1921 49 109 113 Wolfson WQ et al A rapid procedure for the estimation of total protein true albumina total globulin alpha globulin beta globulin and gamma globulin in 10 ml of serum Am J Clin Pathol 1948 18 723 730 Saifer A Gerstenfeld S and Vacsler F Photometric microdetermination of total serum globulins by Medias of a tryptophan reaction Clin Chem 1961 7 626 636 Saifer A Marven T The photometric microdetermination of serum total globulins with a tryptophan reaction a modified procedure Clin Chem 1966 12 414 417 Gendler SM Albumin In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed In Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 1029 1033 Webster D Bignell AHC Attwood EC An assessment of the suitability of bromocresol green for the determination of serum albumin Clin Chim Acta 1974 53 101 108 Louderback A MealeyEH Taylor NA A new dye binding technic using bromcresol purple for determination of albumin in serum Clin Chem 1968 14 793 794 Abstract Pinnell AE Northam BE New automated dye binding method for serum albumin determination with bromcresol purple Clin Chem 1978 24 80 86 King EJ and AR Armstrong A convenient method for determining serum and bile phosphatase activity Can Med Assoc
71. lla provetta test Una volta eliminata la creatina endogena dai calcoli la concentrazione di creatinina proporzionale all intensit del colore rosso prodotto Per misurare la reazione al punto finale si prende la differenza di assorbanza tra 550 nm e 600 nm eGFR calcolato La creatinina sierica viene misurata di routine come indicatore delle funzioni renali Poich la creatinina varia in funzione dell et del sesso e dell etnicit possibile che la sola creatinina sierica non permetta di rilevare l insufficienza renale cronica IRC Pertanto il National Kidney Disease Education Program consiglia caldamente ai laboratori di valutare il tasso di filtrazione glomerulare stimato eGFR quando misurano la creatinina sierica in pazienti maggiorenni La refertazione di routine del eGFR stimato con tutte le determinazioni di creatinina sierica permette ai laboratori di aiutare a identificare 1 soggetti con ridotte funzioni renali agevolando la diagnosi di IRC Generalmente valori calcolati di eGFR lt 60 ml min sono associati a un aumentato rischio di insufficienza renale cronica con esiti avversi Il calcolo del eGFR stimato viene effettuato dal dispositivo Piccolo in base all et al sesso e all etnicit del paziente Il metodo Piccolo della creatinina basato sul metodo di riferimento IDMS della creatinina in modo che possa essere usata la seguente formula dell equazione MDRD per il calcolo del eGFR stimato GFR ml min 1 7
72. mg dL 1 7 513 umol L Anidride carbonica totale tCO 5 40 mmol L 5 40 mmol L Proteina totale TP 2 14 g dL 20 140 g L Azoto ureico ematico BUN 2 180 mg dL 0 7 64 3 mmol urea L Se la concentrazione dell analita superiore ai valori di rilevamento range dinamico ma inferiore ai valori previsti dal sistema sulla scheda dei risultati sar indicato un segno gt vicino al limite immediatamente superiore e un asterisco dopo il numero ad esempio ALT gt 2000 U L Se invece la concentrazione risulta inferiore al range dinamico verr stampato un segno lt con un asterisco ad esempio ALT lt 5 U L Per valori macroscopicamente superiori al range di misurazione range del sistema al posto del risultato viene stampato il segno Raccogliere un nuovo campione e rieseguire il test ogni volta che su una scheda viene stampato il segno Se i risultati relativi al secondo campione vengono nuovamente soppressi rivolgersi all assistenza tecnica Abaxis Sensibilit limiti di rilevazione I limiti inferiori dell intervallo dinamico rilevabile per ogni analita sono i seguenti alanina transaminasi 5 U L albumina 1 g dL 10 g L fosfatasi alcalina 5 U L aspartato transaminasi 5 U L calcio 4 0 mg dL 1 0 mmol L cloruro 80 mmol L creatinina 0 2 mg dL 18 umol L glucosio 10 mg dL 0 56 mmol L potassio 1 5 mmol L sodio 110 mmol L bilirubina totale 0 1 mg dL 1 7 umol L anidride carbonica totale 5 mmol L pro
73. nesium in small amounts of serum J Biol Chem 1921 47 475 481 Clark EP et al A study of the Tisdall method for the determination of blood serum calcium with suggested modification J Biol Chem 1925 63 461 464 Katzman E et al The determination of serum calcium by titration with ceric sulfate J Biol Chem 1937 118 539 544 Cali et al A reference method for the determination of total calcium in serum Jn Selected Methods of Clinical Chemistry Vol 8 Cooper GR ed Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1977 3 8 Kessler G et al An automated procedure for the simultaneous determination of calcium and phosphorus Clin Chem 1964 10 686 703 Michaylova V et al Photometric determination of micro amounts of calcium with arsenazo III Anal Chim Acta 1971 53 194 198 Scarpa A et al Metallochromic indicators of ionized calcium Ann NY Acad Sci 1978 307 86 112 Ono T et al A new enzymatic assay of chloride in serum Clin Chem 1988 34 552 553 Knoll VE et al Spezifische Kreatininbetimmung Im Serum Z Klin Chemi Clin Biochem 1970 8 582 587 Haeckel R et al Simplified determinations of the true creatinine concentration in serum and urine J Cklin Chem Clin Biochem 1980 18 385 394 Moss GA et al Kinetic Enzymatic Method For Determining Serum creatinine 1975 21 1422 1426 Jaynes PK et al An Enzymatic Reaction Rate Assay For Serum Creatinine With a Centrifugal Analyzer 1982 28 114
74. ni metallo formando p nitrofenolo e fosfato ALP p nitrofenil fosfato p nitrofenolo Fosfato Zn Mg La quantit di ALP nel campione proporzionale al tasso di aumento nella differenza di assorbanza tra 405 nm e 500 nm Aspartato transaminasi AST Il test per l aspartato transaminasi AST si basa sul metodo di Karmen con le modifiche introdotte da Bergmeyer L attuale metodo di riferimento dell International Federation of Clinical Chemistry IFCC si basa sulla tecnica Karmen Bergmeyer di associazione della malato deidrogenasi MDH e della nicotinammide dinucleotide ridotta NADH per il rilevamento di AST nel siero Alla reazione si aggiunge lattato deidrogenasi LDH per ridurre l interferenza causata dal piruvato endogeno L AST catalizza la reazione dell L aspartato e dell a chetoglutarato in ossalacetato e L glutammato L ossalacetato viene trasformato in malato e NADH viene ossidata in NAD dal catalizzatore MDH AST L aspartato a chetoglutarato _ Ossalacetato L glutammato MDH Ossalacetato NADH H ___ Malato NAD Il tasso di cambiamento nell assorbanza a 340 nm 405 nm causata dalla trasformazione dell NADH in NAD direttamente proporzionale alla quantit di AST presente nel campione Calcio CA I primi metodi utilizzati per analizzare il calcio si basavano sulla precipitazione del calcio con un eccesso di an
75. nm 405 nm debido a la conversi n de NADH a NAD es directamente proporcional a la cantidad de AST en la muestra Calcio CA Los primeros m todos usados para analizar el calcio comprendieron la precipitaci n del calcio con un exceso de aniones Los m todos de precipitaci n son trabajosos y a menudo imprecisos El m todo de referencia para el calcio es la espectroscop a por absorci n at mica sin embargo este m todo no es adecuado para uso rutinario Los m todos espectrofotom tricos mediante o cresolftale na complexona o arsenazo III como indicadores metalocr micos son los que se utilizan con mayor frecuencia El arsenazo III tiene una gran afinidad por el calcio y no depende de la temperatura como el CPC 25 26 27 El calcio en la muestra del paciente se une al arsenazo III para formar un complejo de tintura de calcio Ca Arsenazo III Complejo Ca Arsenazo III El criterio de valoraci n de la reacci n final se controla a 405 nm 467 nm y 600 nm La cantidad de calcio en la muestra es proporcional a la absorbancia Cloruro CL El m todo se basa en la determinaci n de la activaci n de la a amilasa dependiente del cloruro La a amilasa desactivada se reactiva al a adir el i n cloruro permitiendo que el calcio se vuelva a asociar con la enzima La reactivaci n de la a amilasa es proporcional a la concentraci n de iones de cloruro en la muestra La a amilasa reactivada convierte el substrato 2 cloro p nit
76. noqu micas que se consideran m todos de referencia pero son costosas y requieren mucho tiempo Las t cnicas de tinci n son los m todos usados con mayor frecuencia para el an lisis de la alb mina El verde de bromcresol BCG es el m todo de tinci n usado con mayor frecuencia pero puede sobrestimar la concentraci n de alb mina en especial dentro del extremo inferior de los valores normales La p rpura de bromcresol BCP es la m s espec fica de las tinturas en uso gt La p rpura de bromcresol BCP al unirse a la alb mina cambia su color de amarillo a azul La absorbancia m xima cambia con el cambio de color Surfactantes BCP Alb mina Complejo BCP Alb mina pH cido La alb mina unida es proporcional a la concentraci n de alb mina en la muestra Se trata de una reacci n de punto final que se mide como la diferencia en la absorbancia entre 600 nm y 550 nm Page 73 of 120 Fosfatasa alcalina ALP Las t cnicas para medir la fosfatasa alcalina fueron creadas hace m s de 60 a os En estos momentos a algunos de estos m todos espectrofotom tricos de criterio de valoraci n o de dos puntos se los considera obsoletos o demasiado complicados El uso de p nitrofenil fosfato p NPP aument la velocidad de la reacci n La fiabilidad de esta t cnica aument de manera considerable con el uso de un amortiguador de i n met lico para mantener la concentraci n de iones de magnesio y zinc en la reacci n
77. nterferenza degli ioni sodio e ammonio ridotta al minimo con l aggiunta rispettivamente di Kryptofix e di glutammina sintetasi Nella reazione enzimatica accoppiata la piruvato chinasi PK defosforila il fosfoenolpiruvato PEP formando piruvato La lattato deidrogenasi LDH catalizza la trasformazione del piruvato in lattato Allo stesso tempo I NADH viene ossidato in NAD K PK ADP PEP gt Piruvato ATP LDH Piruvato NADH H gt gt Lattato NAD Il tasso di cambiamento nell assorbanza tra 340 e 405 nm causata dalla trasformazione dell NADH in NAD ed direttamente proporzionale alla quantit di potassio presente nel campione Sodio NA Sono stati messi a punto metodi colorimetrici ed enzimatici che consentono di misurare la concentrazione di sodio con i normali strumenti di chimica clinica Nella reazione enzimatica Abaxis la B galattosidasi attivata dal sodio presente nel campione L enzima attivato catalizza la reazione della o nitrofenil B D galattopiranoside ONPG in o nitrofenolo e galattosio Na ONPG o nitrofenolo Galattosio B galattosidasi Bilirubina totale TBIL I livelli di bilirubina totale sono stati finora di norma rilevati mediane test basati sull uso di acido sulfanilico diazotato stato messo a punto un metodo pi moderno e specifico con l enzima bilirubina ossidasi 2 Oltre a utilizzare un metodo pi specifico
78. o con el reactivo en soporte s lido si sigue los procedimientos recomendados En el caso en que se manipule el reactivo en soporte s lido por ejemplo limpieza tras dejar caer y romper un disco de reactivo se debe evitar la ingesti n el contacto con la piel y la inhalaci n del mismo Instrucciones para la manipulaci n de los reactivos Los discos de reactivo pueden ser usados directamente del refrigerador sin calentar No permita que los discos sellados en sus bolsas de aluminio permanezcan a temperatura ambiente m s de 48 horas antes del uso Abra la bolsa de aluminio sellada retire el disco y selo de acuerdo con las instrucciones del Manual del usuario del analizador qu mico sangu neo Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress Debe desechar los discos no usados en los 20 minutos siguientes a la apertura de la bolsa Almacenamiento Almacene los discos de reactivo en sus bolsas selladas a 2 8 C 36 46 F No exponga los discos abiertos o sin abrir a la luz solar directa o a temperaturas superiores a los 32 C 90 F Los discos de reactivo pueden ser usados hasta la fecha de caducidad indicada en el paquete La fecha de caducidad tambi n aparece codificada en el c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras Si los reactivos han caducado aparecer un mensaje de error en la pantalla del analizador qu mico sangu neo Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress Indicaciones de inestabilidad deterioro del
79. o realizar la prueba con un nuevo disco reactivo Page 81 of 120 Cualquier resultado para una prueba particular que supere los valores de la prueba deber ser analizado por otro m todo de prueba aprobado o enviado a un laboratorio de referencia No diluya la muestra ni vuelva a analizarla en el analizador qu mico sangu neo Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Advertencia Extensas pruebas realizadas con el sistema qu mico de sangre de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress demostraron que en muy raros casos una muestra colocada en el disco reactivo puede no fluir de manera adecuada en la c mara de muestras Debido al flujo asim trico puede analizarse una cantidad inadecuada de muestra y los resultados obtenidos pueden quedar fuera de los valores de referencia La muestra puede ser analizada de nuevo con un nuevo disco reactivo Interferencia Se probaron sustancias que interfieren con los sustratos Se prepararon mezclas de suero humano La concentraci n a la cual se prob cada interferente potencial se bas en los niveles de prueba en NCCLS EP7 P Efectos de las sustancias end genas Los factores de interferencia fisiol gicos hem lisis ictericia y lipidemia provocan cambios en las concentraciones analizadas de algunos analitos Los ndices de la muestra se imprimen en la base de cada tarjeta de resultados para informar al usuario sobre los niveles de factores de interferencia presentes en cada muestra
80. per l accertamento della bilirubina totale con gli analizzatori Piccolo il fotodeterioramento dell analita ridotto al minimo in quanto il campione pu essere analizzato immediatamente dopo il prelievo 49 50 Nella procedura enzimatica la bilirubina viene ossidata in biliverdina dalla bilirubina ossidasi Bilirubina ossidasi Bilirubina O gt Biliverdina H O La bilirubina viene misurata come differenza di assorbanza tra 467 nm e 550 nm L assorbanza iniziale di questa reazione di punto finale viene ricavata in base alla provetta di campione bianco per la bilirubina e l assorbanza finale si ottiene dalla provetta di campione test per la bilirubina La quantita di bilirubina presente nel campione proporzionale alla differenza tra le misure dell assorbanza iniziale e finale Anidride carbonica totale tCO L anidride carbonica totale presente nel siero o nel plasma in forma di anidride carbonica disciolta carbammino derivati delle proteine ioni bicarbonato e carbonato e acido carbonico L anidride carbonica totale pu essere misurata con i metodi enzimatici dell indicatore pH dell elettrodo CO e della spettrofotometria tutti con risultati accurati e precisi Il metodo enzimatico adatto all utilizzo con analizzatore chimico per analisi del sangue di routine senza complessit aggiunta Nel metodo enzimatico il campione viene prima reso alcalino per modificare tutte le forme
81. reducida NADH la enzima glutamato deshidrogenasa GLDH oxida la NADH en NAD Ureasa Urea H O 2NH CO GLDH NH a cetoglutarato NADH gt L Glutamato H O NAD El indice de cambio de la diferencia de absorbancia entre 340 nm y 405 nm se debe a la conversi n de NADH en NAD y es directamente proporcional a la cantidad de urea presente en la muestra 4 Principios de la operaci n Consulte el Manual del usuario del analizador qu mico sangu neo Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress para obtener informaci n sobre los principios y las limitaciones del procedimiento 5 Descripci n de los reactivos Reactivos Cada disco reactivo metab lico b sico de Piccolo contiene soportes reactivos espec ficos para pruebas secas descritas a continuaci n En cada disco se incluye un reactivo seco en blanco de muestra con amortiguador surfactantes excipientes y Page 77 of 120 estabilizadores para utilizar en el c lculo de las concentraciones de alanina aminotransferasa ALT alb mina ALB fosfatasa alcalina ALP aspartato aminotransferasa AST calcio CA cloruro CL glucosa GLU potasio K sodio NA di xido de carbono total tCO prote na total TP y nitr geno ureico sangu neo BUN En el disco se incluyen muestras de referencias dedicadas para creatinina CRE y bilirrubina total TBIL Cada disco contiene un diluyente que consta de surfactantes y estabilizantes
82. ri Y Uber die Phosphomonoesterase Enzymologia 1937 4 217 231 18 Fujita H Uber die Mikrobestimmung der Blutphosphatase J Biochem Japan 1939 30 69 87 Page 93 of 120 13 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 37 38 39 40 4l 42 43 44 45 46 47 48 49 Bibliograf a continuaci n Petitclerc C Delisle M Martel M Mechanism of action of Mg2 and Zn2 on rat placental alkaline phosphatase I Studies on the soluble Zn2 and Mg2 alkaline phosphatase Can J Biochem 1975 53 1089 1100 Tietz NW y otros A reference method for measurement of alkaline phosphatase activity in human serum Clin Chem 1983 29 751 761 Bowers GN Jr y otros IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part I General considerations concerning the determination of the catalytic concentration of an enzyme in the blood serum or plasma of man Clin Chim Acta 1979 98 163F 174F Karmen A A note on the spectrophotometric assay of glutamic oxalacetic transaminase in human blood serum J Clin Invest 1955 34 131 133 Bergmeyer HU y otros Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1977 23 887 899 Bergmeyer HU y otros Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 IFCC method for asparta
83. ro Se necesita un certificado de exoneraci n de la CLIA para realizar an lisis exonerados por la CLIA Un certificado de exoneraci n puede obtenerse de CMS Centers for Medicare amp Medicaid Services Si necesita ayuda para obtener este certificado dir jase a la comisi n de acreditaci n de laboratorios COLA en el tel fono 1 800 981 9883 2 Resumen y explicaci n de las pruebas El disco reactivo metab lico completo Piccolo y el analizador qu mico de sangre de Piccolo constituyen un sistema diagn stico in vitro que ayuda al m dico en el diagn stico de las siguientes enfermedades Alanina aminotransferasa Enfermedades hep ticas incluidas la hepatitis viral y la cirrosis ALT Alb mina Patolog as del h gado y del ri n Fosfatasa alcalina ALP Patolog as del h gado seas de la gl ndula paratiroides e intestinales Aspartato aminotransferasa Hepatopat as incluidas la hepatitis e ictericia viral shock AST Calcio Enfermedades de la gl ndula paratiroides seas y nefropat as cr nicas t tanos Cloruro Deshidrataci n diarrea y v mitos prolongados tubulopat a renal hiperparatiroidismo quemaduras nefropat as perdedoras de sal sobrehidrataci n y tratamiento con tiazidas Creatinina Nefropat a y control de di lisis renal Glucosa Alteraciones del metabolismo de carbohidratos incluida la diabetes mellitus del adulto y juvenil e hipoglucemia Potasio Glomerulopat a o tubulopat
84. ro da pazienti ricoverati hanno fornito una gamma di valori pi ampia e forse pi utile rispetto ai campioni di sangue intero venoso da pazienti ambulatoriali Le statistiche di correlazione per il test del calcio effettuato con Piccolo sono basate su questi campioni di siero Risultati di uno studio condotto con operatori inesperti stato condotto uno studio con operatori inesperti ai cui partecipanti sono state fornite unicamente le istruzioni per i test chiedendo loro di eseguire test di 3 dischi con campioni randomizzati in cieco I campioni erano costituiti da pool di siero preparati a tre livelli per ciascuno dei quattordici analiti ALT albumina ALP AST calcio cloruro creatinina glucosio potassio sodio bilirubina totale anidride carbonica totale proteine totali e azoto ureico ematico BUN I partecipanti non erano stati in alcun modo addestrati all esecuzione del test Sono stati complessivamente arruolati circa 60 partecipanti da 3 centri in rappresentanza di una popolazione demografica diversificata livello di istruzione et sesso ecc Le tabelle seguenti presentano la sintesi delle prestazioni per ciascun analita Page 114 of 120 Alanina aminotransferasi ALT Livello 1 Livello 2 Livello 3 N 62 62 62 Media 45 4 U L 98 9 U L 184 3 U L CV 3 7 1 7 1 5 Range osservato 42 53 96 103 175 191 Percentuale di 98 4 100 100 risultati nel range 61 62 62 62 62 62
85. rofenil B D galactopiranosida ONPG 22ug Peroxidasa rabano 1U Fosfoenolpiruvato 57ug Fosfoenolpiruvato carboxilasa 0 001U p NPP S6ug Ferrocianuro de potasio 0 4ug Yoduro de potasio 28ug Piruvato quinasa 0 01U Page 78 of 120 Tabla 1 Reactivos continuaci n Componente Cantidad disco Sarcosina oxidasa microorganismos 1U Potasio s dico tartrato 343ug Ureasa haba blanca 0 05U Sulfato de zinc 3ug Amortiguadores surfactantes excipientes y estabilizantes Advertencias y precauciones Para uso diagn stico in vitro e El envase del diluyente en el disco reactivo se abre autom ticamente cuando se cierra el caj n del analizador No puede reutilizarse un disco con un envase de diluyente abierto Compruebe que la muestra o la prueba fue colocada en el disco antes de cerrar el caj n e Los discos de reactivo usados contienen l quidos del cuerpo humano Siga buenas pr cticas de seguridad de laboratorio cuando manipule y elimine discos usados En el Manual del usuario del analizador qu mico sangu neo Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress puede consultar las instrucciones de limpieza de derrames biopeligrosos e Los discos reactivos son de pl stico y pueden romperse o estallarse si se caen Nunca use un disco que se haya ca do ya que puede diseminar material biol gico peligroso en el interior del analizador e El reactivo en soporte s lido puede contener sustancias cidas o causticas El usuario no entra en contact
86. rofenil a D maltotriosido CNPG3 en 2 cloro p nitrofenol CNP que produce color y una a maltotriosa G3 La reacci n se mide biocrom ticamente y el aumento en la absorbancia es directamente proporcional a la actividad de la a amilasa reactivada y la concentraci n de i n cloruro en la muestra Page 74 of 120 a Amilasa CNPG3 CNP G3 CI Ca Creatinina CRE El m todo Jaffe presentado en 1886 sigue siendo el m todo usado con mayor frecuencia para la determinaci n de los niveles de creatinina en la sangre El m todo de referencia actual combina el uso de tierra de Fuller floridina con la t cnica de Jaffe para aumentar la especificidad de la reacci n Se desarrollaron m todos enzim ticos que son m s espec ficos para la creatinina que las distintas modificaciones de la t cnica de Jaffe 4 7 Los m todos mediante la enzima creatinina amidohidrolasa eliminan el problema de la interferencia de i n amon aco encontrada en t cnicas que utilizan creatinina iminohidrolasa Creatinina amidohidrolasa Creatinina HO _ Creatina Creatina amidinohidrolasa Creatina H Q _ Sarcosina urea Sarcosina oxidasa Sarcosina HO O _ _ Glicina formaldeh do H20 Peroxidasa H 0 TBHBA 4 AAP _ Coloraci n roja de quinoneimina H O Se utilizan dos cubetas para determinar la concentraci n de creatinina en la muestra La creatina end
87. rol 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Nitr geno ureico mg dl Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Correlaci n Intraserial 21 4 2 29 10 7 10 5 0 90 8 6 6 8 0 05 0 8 4 7 0 09 2 0 19 0 35 1 9 65 1 06 1 6 Total 21 4 2 29 10 7 10 5 0 90 8 6 6 8 0 08 i 4 7 0 09 2 0 19 0 40 2 1 65 1 18 1 8 Las muestras de sangre heparinizada y suero entero se obtuvieron y analizaron en el analizador qu mico de sangre de Piccolo y por m todos de comparaci n Las muestras de sangre entera se analizaron con el analizador qu mico de sangre de Piccolo en los sitios de campo y las muestras de suero se analizaron con el analizador qu mico de sangre de Piccolo y por m todos de comparaci n En algunos casos se usaron muestras muy y poco enriquecidas para cubrir los rangos din micos Las muestras fueron elegidas para cumplir los valores de distribuci n en las instrucciones NCCLS EP9 A En la tabla 7 se muestran las estad sticas de la correlaci n representativa Tabla 7 Correlaci n del analizador qu mico de sangre de Piccolo con los m todos de comparaci n Correlaci n x Coeficiente Pendiente Intercepta VER ica 0 281 0 203 1 3 3 21 UN 0 985 0 946 2 5 2 84 Da 0 854 1 001 0 3 0 22 Spuma 0 896 0 877 01 021 Fosfatasa alcalina 0 988 0 970 5 9 3 97 U 1 0 929 1 136 17 6 4 79 se One noe 2 2 76 UM 1 0 0 97 3 0 1 9 Page 88 of 120 67 261 100 99 80
88. sangu neo de rutina sin agregar complejidad Page 76 of 120 En el m todo enzim tico la muestra primero se hace alcalina para convertir todas las formas de di xido de carbono CO2 a bicarbonato HCO El fosfoenolpiruvato PEP y el HCO reaccionan para formar oxaloacetato y fosfato en presencia de fosfoenolpiruvato carboxilasa PEPC La malato deshidrogenasa MDH cataliza la reacci n de oxaloacetato y nicotinamida adenina dinucle tido reducida NADH a NAD y malato La velocidad del cambio en la absorbancia debido a la conversi n de NADH en NAD es directamente proporcional a la cantidad de tCO en la muestra PEPC PEP HCO Oxaloacetato Fosfato MDH Oxaloacetato NADH H gt NAD Malato Prote na total TP El m todo de la prote na total es una modificaci n de la reacci n de Biuret mencionado por su precisi n exactitud y especificidad Originariamente fue desarrollado por Riegler y modificado por Weichselbaum Doumas y otros La reacci n de Biuret es un posible m todo de referencia para la prote na total 795 En la reacci n de Biuret la soluci n de prote nas es tratada con ones c pricos Cu ID en un medio fuertemente alcalino Se agregan tartrato s dico de potasio y ioduro de potasio para impedir la precipitaci n del hidr xido de cobre y la auto reducci n del cobre respectivamente Los iones Cu II reaccionan con uniones peptidicas entre el ox geno del carbonilo y el nitr
89. sio tra cellule Page 104 of 120 e I campioni di sangue intero prelevati per puntura di una vena si devono sottoporre a test entro 60 minuti dal prelievo Le concentrazioni di glucosio sono soggette a variazioni in funzione del tempo trascorso da quando il paziente ha ingerito cibo e del tipo di campione prelevato dal paziente Per interpretare in modo corretto i risultati relativi al glucosio i campioni si devono prelevare da pazienti a digiuno da almeno 12 ore Le concentrazioni di glucosio diminuiscono di circa 5 12 mg dL in 1 ora se lasciate in campioni non centrifugati a temperatura ambiente e Nei campioni di sangue intero refrigerati le concentrazioni di aspartato transaminasi creatinina e glucosio possono subire variazioni significative Il campione pu essere diviso in plasma o siero e conservato in provette con tappo a 2 8 C 36 46 F qualora non fosse possibile sottoporlo a test entro 60 minuti I risultati relativi alla bilirubina totale possono subire deterioramento da luce I campioni di sangue intero non analizzati immediatamente si devono conservare al buio per non oltre 60 minuti Qualora il campione non possa essere analizzato entro tale arco di tempo si dovr suddividere in plasma o siero e conservare al buio a bassa temperatura in una provetta con tappo e Utilizzare solo provette da prelievo evacuate all eparina di litio tappo verde per i campioni di sangue intero o di plasma Utilizzare provette d
90. te aminotransferase Clin Chem 1978 24 720 721 Kramer B y otros A simple technique for the determination of calcium and magnesium in small amounts of serum J Biol Chem 1921 47 475 481 Clark EP y otros A study of the Tisdall method for the determination of blood serum calcium with suggested modification J Biol Chem 1925 63 461 464 Katzman E y otros The determination of serum calcium by titration with ceric sulfate J Biol Chem 1937 118 539 544 Cali y otros A reference method for the determination of total calcium in serum En Selected Methods of Clinical Chemistry Vol 8 Cooper GR comp Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1977 3 8 Kessler G y otros An automated procedure for the simultaneous determination of calcium and phosphorus Clin Chem 1964 10 686 703 Michaylova V y otros Photometric determination of micro amounts of calcium with arsenazo III Anal Chim Acta 1971 53 194 198 Scarpa A y otros Metallochromic indicators of ionized calcium Ann NY Acad Sci 1978 307 86 112 Ono T y otros A new enzymatic assay of chloride in serum Clin Chem 1988 34 552 553 Knoll VE y otros Spezifische Kreatininbetimmung Im Serum Z Klin Chemi Clin Biochem 1970 8 582 587 Haeckel R y otros Simplified determinations of the true creatinine concentration in serum and urine J Cklin Chem Clin Biochem 1980 18 385 394 Moss GA y otros Kinetic enzymatic method for determining serum creatinine 197
91. teine La quantita di proteina totale presente nel campione direttamente proporzionale all assorbanza del complesso Cu proteine Il test per le proteine totali una reazione di punto finale e l assorbanza si misura come differenza dell assorbanza tra 550 nm e 850 nm Azoto ureico ematico BUN possibile misurare l urea sia direttamente che indirettamente La reazione al diacetil monoxime unico metodo diretto per misurare l urea ampiamente usata ma si basa su reagenti pericolosi I metodi indiretti misurano l ammoniaca formatasi dall urea l uso dell enzima ureasi ha aumentato la specificit di questi test L ammoniaca si pu quantificare con svariati metodi tra i quali la nesslerizzazione titolazione acida la tecnica Berthelot e le reazioni enzimatiche accoppiate Le procedure Berthelot catalizzate per risultano poco affidabili nel misurare l ammoniaca Le reazioni enzimatiche accoppiate sono rapide altamente specifiche per l ammoniaca e ampiamente usate Una di tali reazioni stata proposta come possibile metodo di riferimento Nella reazione enzimatica accoppiata l ureasi idrolizza l urea in ammoniaca e anidride carbonica Combinando l ammoniaca con a chetoglutarato e nicotinammide adenin dinucleotide NADH ridotta enzima glutammato deidrogenasi GLDH ossida PNADH in NAD Ureasi Urea HO gt 2NH CO GLDH NH a chetoglutarato NADH gt L glutammato
92. teine totali 2 g dL 20 g L azoto ureico ematico 2 0 mg dL 0 7 mmol urea L Page 110 of 120 Precisione Gli studi sulla precisione sono stati effettuati seguendo le linee guida NCCLS EP5 A con modifiche in base a NCCLS EP18 P relative ai dispositivi a utilizzo unitario I risultati relativi alla precisione nel corso dello svolgimento e totali sono stati ricavati utilizzando due livelli di materiali di controllo reperibili in commercio Per gli studi sono stati usati diversi strumenti e due lotti di dischi reagente I test sul calcio il glucosio il sodio e l azoto ureico sono stati svolti in un sito quelli sul potassio e l anidride carbonica totale sono stati svolti presso due siti nell arco di 20 giorni i test sul cloruro sono stati svolti presso due siti nell arco di cinque giorni I risultati degli studi sulla precisione sono evidenziati nella tabella 6 Tabella 6 Precisione Analita Quantit del campione In corso di svolgimento Alanina transaminasi U L Controllo 1 N 80 Media 21 SD 2 76 CV 13 4 Controllo 2 Media 52 SD 2 7 CV 5 2 Albumina g dL Controllo 1 N 80 Media 5 6 SD 0 09 CV 1 7 Controllo 2 Media 3 7 SD 0 07 CV 2 0 Fosfatasi alcalina U L Controllo 1 N 80 Media 39 SD 1 81 CV 4 6 Controllo 2 Media 281 SD 4 08 CV 1 5 Aspartato transaminasi U L Controllo 1 N 80 Media 49 SD 0 98 CV 2 07 Controllo 2 Media 147 SD 1 83 CV 1 26 Calcio mg dL Controllo 1 N 80 Media 8 6 SD 0 21 C
93. trazione di albumina superiore a quella effettiva soprattutto in prossimit dei valori normali pi bassi Il violetto di bromocresolo BCP il pi specifico dei coloranti in uso Il violetto di bromocresolo BCP legato con l albumina cambia colore da giallo a blu L assorbanza massima si modifica con il cambiamento di colore Tensioattivi BCP Albumina _ Complesso BCP albumina pH acido L albumina legata proporzionale alla concentrazione di albumina nel campione Si tratta di una reazione di punto finale misurata come differenza di assorbanza tra 600 nm e 550 nm Fosfatasi alcalina ALP Le prime tecniche per la misurazione della fosfatasi alcalina sono state messe a punto oltre 60 anni fa Diversi di questi metodi spettrofotometrici di punto finale o a due punti sono oggi considerati antiquati o troppo complessi L uso di p nitrofenil fosfato p NPP aumenta la velocit della reazione L affidabilit di questa tecnica stata molto rafforzata mediante l uso di una sostanza tampone con ioni metallo per mantenere la concentrazione di ioni magnesio e zinco nella reazione Il metodo di riferimento dell American Association for Clinical Chemistry AACC basato sull uso di p NPP come substrato e una sostanza tampone con ioni metallo Page 98 of 120 La procedura Piccolo una variante dei metodi AACC e IFCC La fosfatasi alcalina idrolizza p NPP in una sostanza tampone con io
94. trico por dinitrofenilhidracina y la prueba enzim tica fluorescente se usan muy raramente La t cnica m s com n para la determinaci n de las concentraciones de ALT en suero es un m todo enzim tico basado en el trabajo de Wr blewski y LaDue La Federaci n Internacional de Qu mica Cl nica International Federation of Clinical Chemistry IFCC ha propuesto un procedimiento Wr blewski y LaDue modificado como el recomendado El m todo desarrollado para usar con los analizadores de Piccolo es una modificaci n del procedimiento recomendado por la IFCC En esta reacci n la ALT cataliza la transferencia de un grupo amino de la L alanina al a cetoglutarato para formar L glutamato y piruvato La lactato deshidrogenasa cataliza la conversi n de piruvato a lactato Al mismo tiempo NADH se oxida a NAD como se muestra en el esquema siguiente de la reacci n ALT L Alanina a cetoglutarato L Glutamato Piruvato LDH Piruvato NADH H Lactato NAD El indice de cambio de la diferencia de absorbancia entre 340 nm y 405 nm se debe a la conversi n de NADH a NAD y es directamente proporcional a la cantidad de ALT presente en la muestra Alb mina ALB Los primeros m todos usados para medir la alb mina incluyen t cnicas de fraccionamiento y el contenido en tritofano de las globulinas Estos m todos son dif ciles de utilizar y no tienen una especificidad elevada Hay dos t cnicas inmu
95. vati da astucci danneggiati 6 Strumento Per informazioni dettagliate sull uso dell analizzatore vedere il manuale dell operatore dell analizzatore chimico del sangue Piccolo o dell analizzatore chimico Piccolo xpress 7 Prelievo e preparazione dei campioni Le tecniche di prelievo dei campioni sono descritte nella sezione Prelievo dei campioni del manuale dell operatore dell analizzatore chimico del sangue Piccolo o dell analizzatore chimico Piccolo xpress La quantita minima del campione di 100 uL di sangue intero eparinizzato plasma eparinizzato siero o materiale di controllo Il ricettacolo del campione sul disco reagente pu contenere fino a 120 uL I campioni di sangue intero prelevati da una vena devono essere omogenei prima che il campione venga trasferito nel disco reagente Invertire delicatamente la provetta di prelievo varie volte subito prima di trasferire il campione Non scuotere la provetta di prelievo tale manovra potrebbe causare emolisi L emolisi puo dar luogo a risultati erroneamente elevati nelle analisi relative al potassio Tale problema potrebbe non essere rilevato se si analizza sangue intero il rilascio di potassio anche solo dallo 0 5 degli eritrociti pu far aumentare il livello di potassio nel siero di 0 5 mmol L Inoltre anche i campioni non emolizzati che non vengono elaborati immediatamente potrebbero presentare livelli di potassio maggiori a causa del passaggio di potas
96. w York Harper and Row 1974 417 421 1058 1059 Scott M G Electrolytes and Blood Gases In Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia WB Saunders Company 1999 1065 1066 National Committee For Clinical Laboratory Standards Interference testing in clinical chemistry proposed guideline NCCLS Document EP7 A Wayne PA NCCLS 2002 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 3 ed Washington DC AACC Press 1990 National Committee For Clinical Laboratory Standards How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory approved guidelines 2 ed NCCLS Document C28 A2 Wayne PA NCCLS 2000 Painter PC Cope JY Smith JI Reference Information for the clinical laboratory In Burtis CA Ashwood ER eds Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 ed Philadelphia WB Saunders Company 1999 pp 676 684 National Committee For Clinical Laboratory Standards Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices approved guideline NCCLS Document EP5 A Wayne PA NCCLS 1999 National Committee For Clinical Laboratory Standards Quality management for unit use testing proposed guideline NCCLS Document EP18 A Wayne PA NCCLS 2002 National Committee For Clinical Laboratory Standards Method comparison and bias estimation using patient samples approved guideline NCCLS Document EP9 A2 Wayne PA NCCLS 2002 Page 120 of 120

Disco reactivo metabólico completo de Piccolo

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