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Test APTIMA COMBO 2

1. L tat NAAT 1 NAAT 2 APTIMA Test APTIMA tat des d infection du COMBO 2 COMBO 2 sympt mes Total patient FS FU FS FU PVS cvs Symp Asymp Infect 79 43 122 Infect 0 1 1 Infect 1 0 1 Infect S O 1 0 1 Infect 8 5 13 Infect 1 0 1 Infect S O 1 0 1 Infect 1 0 1 Infect 8 3 11 Infect 1 0 1 Infect 1 2 3 Infect S O 1 0 1 Infect 5 3 8 Infect 5 0 5 Infect 2 0 2 Infect 0 1 1 Infect 1 4 5 Infect 1 0 1 Infect 0 1 1 Non infect 0 4 4 Non infect 2 1 3 Non infect 2 1 3 Non infect 6 4 10 Non infect S O 1 0 1 Non infect S O 1 0 1 Non infect 4 2 6 Non infect 1 0 1 Non infect 0 2 2 Non infect 1 1 2 Non infect 1 2 3 Non infect 3 2 5 Non infect 2 7 9 Non infect 12 3 15 Non infect 623 516 1139 Non infect S O 0 2 2 Non infect 1 0 1 Non infect S O 0 1 1 Non infect S O 11 8 19 Non infect S O S O 1 0 1 Non infe
2. couvillon vaginal collect par la patiente couvillon vaginal collect par un clinicien Site 96 pr valence nbre positifs nbre test s 96 pr valence nbre positifs nbre test s CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 1 1 8 4 220 16 4 36 220 4 1 9 220 3 7 230 15 7 36 230 3 5 8 230 2 96 19 198 18 7 37 198 6 6 13 198 9 5 19 199 18 1 36 199 7 14 199 3 09 1 111 9 10 111 2 7 3 111 09 1113 97 11113 1 8 2 13 4 04 1 266 9 24 266 1 9 5 266 04 1 267 112 30 267 2 2 6 267 5 0 5 1 199 7 15 99 0 5 1 199 05 1 199 7 14 199 0 5 1 199 6 28 8 290 10 29 290 5 5 16 290 2 6 206 12 2 36 296 5 4 16 296 7 0 0 102 11 8 12 102 0 0 102 0 0 102 98 10 102 0 0 102 8 0 0 48 8 3 4 48 2 1 1 48 0 0 51 7 8 4 51 2 1 51 Tous 2 4 34 1434 11 6 167 1434 3 3 48 1434 2 4 35 1457 12 1 177 457 3 3 48 1457 Test APTIMA COMBO 2 45 502183FR R v C Valeurs attendues pour les DTS Systems Tableau 1c Echantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt Frottis en milieu liquide PreservCyt Site pr valence nbre positifs nbre CT GC CT GC CT GC 1 3 0 3 100 13 0 13 100 2 0 2 100 2 0 0 124 3 2 4 124 0 8 1 124 3 0 4 2 475 6 1 29 475 0 4 2 475 4 0 4 1 287 4 2 12 287 0 0 287 5 0 0 297 5 1 15 297 1 0 3 297 6 0 0 364 5 5 20 364 0 6 2 364 TOUS 0 4 6 1647 5 6 93 1647 0
3. 47 8 100 98 4 91 5 100 83 3 100 8 43 3 1 39 0 7 0 100 29 2 100 97 5 86 8 99 9 75 0 100 TOUS 628 60 18 549 1 9 7 98 4 91 2 100 96 8 95 0 98 1 76 9 99 8 1 227 34 9 182 2 15 9 94 4 81 3 99 3 95 3 91 2 97 8 79 1 98 9 2 196 50 5 139 2 265 96 2 86 8 99 5 96 5 92 1 98 9 90 9 98 6 3 13 9 3 101 0 8 0 100 66 4 100 97 1 91 8 99 4 75 0 100 Collect amp villon 4 262 19 11 231 1 7 6 95 0 75 1 99 9 95 5 92 0 97 7 63 3 99 6 parun Vaginal 5 199 13 2 184 0 6 5 100 75 3 100 98 9 96 2 99 9 86 7 100 clinicien 6 296 33 9 254 0 11 1 100 89 4 100 96 6 93 6 98 4 78 6 100 7 102 9 1 91 1 9 8 90 0 55 5 99 7 98 9 94 1 100 90 0 98 9 8 50 3 1 46 0 6 0 100 29 2 100 97 9 88 7 99 9 75 0 100 TOUS 1445 170 41 1228 6 12 2 96 6 92 7 98 7 96 8 95 6 97 7 80 6 99 5 TP Vrai positif FP Faux positif TN Vrai n gatif FN Faux n gatif Test APTIMA COMBO 2 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Tableau 6c Comparaison des chantillons PreservCyt du test APTIMA COMBO 2 l tat d infection des patients Site de se des d de pu Sensibilit IC 95 Sp cificit IC 95 ne p Positif 14 0 0 2 1 N gatif 0 0 1 83 140 100 76 8 100 97 7 91 9 99 7 87 5 100 Total 44 0 1 85 Positif 4 0 0 0 2 N gatif 0 0 2 118 32 100 39 8 100 100 97 0 100 100 100 Total 4 0 2 118
4. SD RLU CV ea 54 1055 76 588 73 83 711 7 9 150332 14 2 p pouble o e Bj 2338 93 449 4 0 90 317 3 9 142898 6 1 Elev e couvillon Double urine 54 2281 91 487 4 0 106 715 4 7 152747 6 7 ne 54 1265 30 561 24 55 642 4 4 34 413 27 he 54 1001 69 831 7 0 77 701 7 8 159774 16 0 Moy Double 54 2241 152 377 6 8 58 353 2 6 139983 6 2 couvillon res 54 1249 35 142 28 60 638 4 9 46 364 3 7 iic 54 1013 61 795 6 1 90 906 9 0 131207 13 0 Double Nr Cd 2085 286034 13 7 161 764 7 8 58 837 2 8 Faible couvillon Double urine 54 2201 95 705 4 3 118 760 54 106802 49 au 54 1177 42 478 3 6 69 821 5 9 29 836 2 5 Ecouvillon 54 7 1301 18 3 2311 32 5 1901 26 8 N gatif Urine 54 7 861 12 0 2299 32 1 1994 27 9 Les membres du panel doublement positifs contenaient CT et GC rRNA Tableau 14b Solution PreservCyt Concentration m D une s rie EET D un op rateur RLU Intra s rie D un site l autre fg test l autre l autre N Concordance moyenne CT GC x1000 SD CV SD CV SD CV SD CV x1000 x1000 x1000 x1000 0 0 162 97 5 96 9 7 31 6 S O 3 4 S O 6 4 S O 4 7 S O 0 5000 54 96 3 1296 146 11 3 54 8 4 2 0 0 0 0 0 0 0 0 2000 0 54 100 1140 54 1 4 7 79 8 7 0 101 8 9 2 4 0 2 2000 5000 54 100 2345 79 6 3 4 78 0 3 3 94 7 4 0 37 9 1 6 0 250 54 100 953 114 12 0 0 0 0 0 161 16 9 90 7 9 5 5 0 54 100 971 58 3 6 0 71 7 7 4 22 8 2 4 85 0 8 8 1000 2500 54 100 2294 11
5. chantillons d urine Les donn es destin es confirmer les conditions de transport et de conservation recommand es pour les chantillons d urine ont t g n r es avec 10 chantillons d urine f minins et 10 chantillons d urine masculins n gatifs Les chantillons d urine ont t ensemenc s avec CT et GC des concentrations finales respectives de 10 IFU et 100 CFU par r action Les deux jeux d chantillons d urine ensemenc s ont t maintenus a 4 C et 30 C pendant 24 heures avant d tre ajout s au Moyen de transport d urine UTM Les deux jeux d chantillons UTM ont t maintenus entre 4 C et 30 C et test s en triple aux jours 0 1 5 20 et 35 Tous les chantillons ont t positifs pour CT et GC lorsque les chantillons d urine ont t maintenus a 4 C avant l ajout de l UTM Lorsque les chantillons d urine ont t maintenus 30 C avant l ajout de l UTM tous les chantillons ont t positifs pour CT et 95 l ont t pour GC au Jour 35 Ces m mes chantillons ont t test s apr s 116 jours de conservation 20 C et 70 C Tous les chantillons ont t positifs pour CT et GC dans les deux conditions de conservation E Etude de stabilit suppl mentaire des chantillons congel s 20 C Les donn es destin es valider les conditions de conservation 20 C pr conis es pour les chantillons endocervicaux sur couvillon ur traux sur couvillon vaginaux su
6. 60 60 150 150 4500 GC et CT 1 85 85 250 250 4500 GC ind termin 1 85 85 4500 S O B R sultats du contr le de qualit et acceptabilit Les contr le positif CT contr le n gatif GC et les contr le positif GC contr le n gatif CT font office de contr le pour les tapes de capture de cible d amplification et de d tection du test Selon les recommandations ou exigences en vigueur dans votre pays ou aupr s des organismes d accr ditation des contr les suppl mentaire pour la lyse cellulaire et la stabilisation du RNA peuvent tre requis Le contr le positif CT contr le n gatif GC sert de contr le n gatif pour tous les r sultats de test GC Le contr le positif GC contr le n gatif CT sert de contr le n gatif pour tous les r sultats de test CT Si on le souhaite un double contr le n gatif fourni par l utilisateur peut tre ajout pour surveiller le bruit de fond du test La bonne pr paration des chantillons se confirme visuellement par la pr sence d un seul couvillon de collecte APTIMA dans un tube de transport d chantillons sur couvillon ou par un volume final d urine situ entre les lignes indicatrices noires d un tube de transport d chantillons d urine ou encore par l absence d un couvillon dans le tube de transport d chantillons APTIMA pour les chantillons de frottis en milieu liquide Les contr les positifs doivent produire les r sultats de test sui
7. tudes de la stabilit des chantillons A chantillons endocervicaux sur couvillon Les donn es destin es confirmer les conditions de transport et de conservation recommand es pour les chantillons endocervicaux sur couvillon ont t g n r es avec des chantillons sur couvillon n gatifs group s Cinq chantillons group s ont t ensemenc s avec CT et GC des concentrations finales respectives de 10 IFU et 100 CFU par r action Les chantillons ensemenc s ont t conserv s 70 C 20 C 4 C et 30 C Les chantillons ont t test s en double aux jours 0 20 35 60 et 90 Toutes les conditions de test taient positives la fois pour CT et pour GC pour toutes les dur es et toutes les temp ratures B chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt Les donn es destin es confirmer les conditions d exp dition et de conservation recommand es pour les chantillons de frottis en mileu liquide PreservCyt ont t g n r es partir d chantillons n gatifs group s de solution PreservCyt Quatre chantillons group s ont t ensemenc s avec CT et GC des concentrations finales respectives de 10 IFU et 100 CFU par r action Les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt taient plac s 30 C pendant 7 jours puis 1 0 mL de l chantillon a t ajout un tube de transfert APTIMA Les chantillons ensemenc s ont t maintenus 4 C 10 C et 30 C Les ch
8. 0 4 f 4 12 g 18 22 h 4 6 i 22 28 j 2 8 k 1 5 I 3 13 m 29 36 n 7 11 o 36 47 p 6 16 q 1 9 et r 7 25 Tableau 5b chantillons vaginaux sur couvillon du test APTIMA COMBO 2 compar s l tat d infection des patients Echantillon Etat des Sensibilit Sp cificit sympt mes N TP FP TN FN 95 96 C l 95 96 C l Collect par couvillon A A l patiente vaginal Asympt 628 60 18 549 1 98 496 91 2 100 96 8 95 0 98 1 Sympt 809 111 25 gt 669 4 96 5 91 3 99 0 96 4 94 7 97 7 Collect par couvillon uncelinfclen vaginal Asympt 636 59 16 559 2 96 7 88 7 99 6 97 2 95 5 98 4 Tous 1445 170 41 1228 6 96 6 92 7 98 7 96 8 95 6 97 7 EE TP Vrai positif FP Faux positif TN Vrai n gatif FN Faux n gatif Les r sultats du test TMA d amplification alternatif pour CT repr sentent le nbre de r sultats positifs le nbre d chantillons test s a 15 18 b 17 25 c 15 16 et d 32 41 Test APTIMA COMBO 2 52 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Tableau 5c Comparaison des chantillons PreservCyt du test APTIMA COMBO 2 l tat d infection des patients tat des R sultats AC2 CT eme 9 Panier an ik ER 4 Sensibilit IC 95 Sp cificit IC 95 Positif 58 1 0 6 Asympt N gatif 2 1 12 1208 96 7 88 5 99 6 99 4 98 8 99 8 Total 60 2 12 1214 Positif 29 0 0
9. 21 381 330 21 381 115 105049 705512 Fisher TU0022 104578 301041 301040 105575 301162 301154C 301078 Test APTIMA COMBO 2 502183FR R v C DTS Systems R f rence R cipient plastique large couvercle Bouchons p n trables APTIMA 105668 Bouchons de rechange non p n trables 103036A Mat riel optionnel R f rence Kit de collecte d chantillons PACE pour chantillons ur traux 103275 m les et conjonctivaux Kit de collecte d chantillons PACE pour chantillons 103300 endocervicaux Kit d adaptateurs APTIMA 301087 Activateur de javel GEN PROBE 302101 pour le nettoyage courant des surfaces et des appareils Kit de contr les APTIMA 301110 Solutions APTIMA 302002C solution de lavage APTIMA tampon APTIMA pour solution de d sactivation et r actif huileux APTIMA Panel d essai STD 102325 Embouts 1000 ul conductibles d tecteurs de liquide 10612513 Tecan TECAN Freedom EVO 100 4 comprenant 900932 Platine APTIMA COMBO 2 pour DTS 800 Systems Platine 105200 R servoir r actif quart de module de 40 mL 104765 R servoir r actif divis en deux quart de module de 19 mL x 2 104763 Proc dure de test avec les DTS Systems A Pr paration du mat riel 1 Pr parez un premier bain marie 62 C 1 C pour la capture de cible et l hybridation des amorces un second bain marie 42 C 1 C pour l amplification et un troisieme 62 C 1 C pour le test DKA Si vous utilis
10. Centres de contr le des maladies Centers for Disease Control des tats Unis ont recens sur le territoire am ricain un nombre de nouveaux cas d infections estim 1 307 893 426 0 cas pour 100 000 personnes pour la CT et 309 341 100 8 cas pour 100 000 personnes pour la GC 5 Les Chlamydiae sont des bact ries intracellulaires strictes non motiles et Gram n gatif L esp ce CT se compose de quinze s rotypes A B Ba C D E F G H l J K L1 L2 et L3 susceptibles de provoquer des maladies chez l homme 34 Les s rotypes D a K constituent la principale cause d infections g nitales Chlamydiae chez l homme et la femme 26 C trachomatis peut provoquer des ur trites pididymites rectites cervicites salpingites aigu s et des infections g nitales hautes PID non gonococciques 3 15 28 29 Les infections C trachomatis sont souvent asymptomatiques aussi bien chez l homme que la femme Les enfants n s de m res infect es pr sentent un risque sensiblement plus lev de conjonctivites inclusions et de pneumonies chlamydiales 1 11 28 Traditionnellement plusieurs m thodes de d tection de CT ont t utilis es en laboratoire clinique notamment la culture de cellules la r action d immunofluorescence technique des anticorps fluorescents et le test d immunoenzymologie Parmi les m thodologies plus r centes de d tection de CT figurent les tests de sonde DNA directs ainsi que les tests DNA d
11. E R actif enzymatique APTIMA COMBO 2 1 flacon Transcriptase inverse et polym rase RNA d shydrat es dans une solution tamponn e HEPES contenant lt 10 de diluant P R actif sonde APTIMA COMBO 2 1 flacon Sondes DNA chimiluminescentes non infectieuses d shydrat es dans une solution tamponn e de succinate contenant 5 de d tergent TCR B R actif de capture de cible B APTIMA COMBO 2 1x0 61 mL Acides nucl iques non infectieux dans une solution tamponn e contenant 5 6 de d tergent Boite non r frig r e APTIMA COMBO 2 Boite 2 sur 2 conserver entre 15 C et 30 C d s la r ception Symbole Composant Quantit AR Solution de reconstitution de l amplification APTIMA COMBO2 1x27 7mL Solution aqueuse contenant des conservateurs ER Solution de reconstitution enzymatique APTIMA COMBO 2 1x 11 1 mL Solution tamponn e HEPES contenant un surfactant et du glyc rol PR Solution de reconstitution de sonde APTIMA COMBO 2 1x 35 4 mL Solution tamponn e de succinate contenant lt 5 de d tergent S R actif de s lection APTIMA COMBO 2 1x 108 mL 600 mM de solution tamponn e de borate contenant un surfactant TCR R actif de capture de cible APTIMA COMBO 2 1x54mL Solution saline tamponn e contenant une phase solide et des oligom res de capture Collets de reconstitution 3 Fiche de code barres du lot de r f rence 1 fiche Test APTIMA COMBO 2 24 502183FR R v C TIGRI
12. Positif 20 0 0 2 3 N gatif 2 0 2 440 65 93 5 78 6 99 2 99 5 98 4 99 9 93 5 995 Total 34 0 2 442 Positif 8 1 0 4 4 N gatif 0 2 1 271 2 8 100 63 1 100 98 2 95 9 99 4 61 5 100 Total 8 3 1 275 Positif 13 0 0 2 5 N gatif 1 1 4 276 47 92 9 66 1 99 8 99 3 97 5 99 9 86 7 99 6 Total 14 1 4 278 Positif 19 0 0 1 6 N gatif 0 1 6 337 52 100 82 4 100 99 7 98 4 100 950 100 Total 19 1 6 338 Positif 87 1 0 Tous N gatif 3 4 16 1525 5 5 96795 90 6 99 99 2 98 7 99 6 879 998 Total 90 5 16 1536 RS RS HDCEO LLL CILL L EELL LLGO4xICLOQESULLIGGGCUDGIGLOE tt R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test ACT R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test ACT R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test ACT R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test ACT Test APTIMA COMBO 2 56 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Chlamydia trachomatis analyse de l tat d infection des patientes de sexe f minin Tableau 7a Ecouvillon end
13. chantillon et contr le Le volume d chantillon ou de contr le pouvant tre ajout un tube r actionnel est de 400 uL x 100 uL Pour de plus amples d tails consultez Pipetage des contr les et chantillons sous Remarques concernant la proc dure Capture de cible L utilisation du syst me de capture de cible Target Capture System GEN PROBE est d crite dans le Manuel de l op rateur du syst me de capture de cible Target Capture System Operator s Manual Si vous utilisez le bain chaleur s che vortexeur SB100 SB100 Dry Heat Bath Vortexer r f rez vous la fiche d application du SB100 11 Couvrez les TTU avec des cartes de protection et agitez d licatement le portoir manuellement Ne pas vortexer Faites incuber le portoir 62 C 1 C dans un bain marie pendant 30 5 minutes 12 Retirez le portoir du bain marie et s chez le fond des tubes sur un mat riau absorbant 13 V rifiez que les cartes de protection sont fermement positionn es Au besoin remplacez les par de nouvelles cartes de protection et fermez herm tiquement les TTU 14 Vortexez le portoir pendant 60 secondes sur le vortexeur m langeur tourbillon multi tubes Pour plus de d tails consultez Agitation au vortex sous Remarques concernant la proc dure Commencez l agitation au vortex du portoir dans les 2 minutes qui suivent son retrait du bain marie 15 Sans retirer les cartes de protection incubez le portoir temp rature ambiante p
14. cipient Notez les initiales de l op rateur la date de pr paration et les deux num ros de lot Remarque Pour un petit nombre de r actions chantillons et contr les utilisez la formule suivante pour calculer les volumes de TCR et TCHR B Volume du TCR mL nombre de r actions 5 r actions suppl mentaires x 0 1 mL Volume du TCR B mL Volume du TCR mL 100 C Capture de cible Le pipeteur r p tition utilis pour la capture de cible et l amplification doit tre r serv ces tapes uniquement Consultez Avertissements et pr cautions pour de plus amples informations Pr paration du portoir 1 Laissez les contr les ainsi que les chantillons parvenir temp rature ambiante avant toute proc dure 2 Ne pas vortexer les chantillons 3 Confirmez visuellement que chaque tube chantillon r pond un des crit res suivants a La pr sence d un seul couvillon de collecte APTIMA bleu dans un tube de transport d chantillons sur couvillon unisexe b La pr sence d un seul couvillon de collecte APTIMA rose dans un tube de transport d chantillons sur couvillon vaginal c Un volume final d urine situ entre les lignes de remplissage noires d un tube de transport d chantillons d urine d L absence d un couvillon dans le tube de transport d chantillons APTIMA specimen transport tube pour les chantillons de frottis en milieu liquide PreservC yt 4 V rifiez les tubes de transport ava
15. collect s dans la solution PreservCyt Recommandations sp cifiques aux DTS Systems Kit de pr l vement d chantillons PACE pour chantillons ur traux m les ou conjonctivaux en conjonction avec le kit d adaptateur APTIMA Kit de collecte d chantillons PACE pour chantillons endocervicaux en conjonction avec le kit d adaptateurs APTIMA A Instructions de collecte R f rez vous la notice du test correspondant au kit de collecte d chantillons utilis pour toute instruction B Transport et conservation des chantillons avant le test 1 chantillons sur couvillon a Une fois l couvillon collect transportez le et conservez le dans le tube de transport d chantillons sur couvillon entre 2 C et 30 C jusqu la r alisation du test Les chantillons doivent tre analys s avec le test APTIMA COMBO 2 dans les 60 jours qui suivent leur collecte Si une dur e de conservation sup rieure est n cessaire congelez entre 20 C et 70 C pendant 12 mois maximum apr s la collecte voir Etudes de la stabilit des chantillons 2 chantillons d urine a Les chantillons d urine qui sont encore dans le r cipient de collecte principal doivent tre transport s au laboratoire une temp rature de 2 C 30 C Transf rez l chantillon d urine dans le tube de transport pour chantillons d urine APTIMA dans les 24 heures qui suivent sa collecte Conservez entre 2 C et 30 C et testez d
16. montr s pour les DTS Systems lorsqu ils sont enrichis avec les m mes quantit s de sang Le sang ajout aux couvillons couvillons vaginaux chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt apr s traitement et chantillons d urine des taux bien sup rieurs ce que l on pourrait s attendre avec une collecte d chantillons normale n a pas interf r avec les r sultats sur le TIGRIS DTS System Test APTIMA COMBO 2 84 502183FR R v C Performance analytique du TIGRIS DTS System Etudes de la contamination de transfert pour le TIGRIS DTS System Afin d tablir que le TIGRIS DTS System minimise les risques de r sultats faussement positifs li s une contamination de transfert une tude analytique de plusieurs jours a t r alise l aide de panels ensemenc s sur trois TIGRIS DTS Systems L tude a utilis 20 96 des chantillons avec une valeur cible lev e contenant 1 0 x 10 cellules r action qui ont t al atoirement r partis parmi les 80 d chantillons n gatifs contenant le milieu de transport de l couvillon Pendant la dur e de l tude 1372 chantillons avec une valeur cible lev e et 5516 chantillons n gatifs ont t test s sur les trois TIGRIS DTS Systems Le taux de contamination de transfert global r sultats faussement positifs et quivoques compris a t en moyenne de 0 3 96 18 5491 Au total 25 chantillons n gatifs ont t signal s comme invalides et exclus
17. re de capture distinct est utilis pour chaque cible Lors de l tape d hybridation les r gions sp cifiques de la s quence des oligom res de capture se Test APTIMA COMBO 2 3 502183FR R v C Informations g n rales fixent sur des r gions pr cises des mol cules cibles Le complexe oligom re capture de cible est ensuite captur hors de la solution en ramenant la temp rature de la r action a temp rature ambiante Cette r duction de temp rature permet l hybridation de se produire entre la r gion d soxyad nosine de l oligomre de capture et les mol cules poly d soxythimidines li es covalentement aux particules magn tiques Les microparticules y compris les mol cules cible captur es auxquelles elles sont li es sont attir es sur la paroi de la cuve r action par des aimants et le surnageant est aspir Les particules sont lav es afin d liminer la matrice r siduelle de l chantillon qui peut contenir des inhibiteurs de la r action d amplification Une fois les tapes de capture de cible termin es les chantillons sont pr ts l amplification Les tests d amplification de cible reposent sur la capacit des amorces d oligonucl otides compl mentaires de tremper sp cifiquement et de permettre l amplification enzymatique des brins de l acide nucl ique cible Le test APTIMA COMBO 2 r plique une r gion sp cifique du rRNA 23S de CT et une r gion sp cifique du rRNA 16S de GC via des formes interm diai
18. rence pour vous assurer que les r actifs sont associ s correctement c Ouvrez le r actif lyophilis et ins rez fermement l extr mit encoche du collet de reconstitution dans l ouverture du flacon Figure 3 Etape 1 d Ouvrez le flacon de solution de reconstitution correspondante et posez le bouchon sur une surface de travail propre et couverte e Tout en tenant le flacon de solution de reconstitution au dessus de la paillasse ins rez fermement l autre extr mit du collet de reconstitution dans l ouverture du flacon Figure 3 Etape 2 f Retourner lentement les flacons assembl s Laissez la solution s couler depuis la bouteille en plastique vers le flacon en verre Figure 3 Etape 3 g Faites tournoyer en douceur la solution dans le flacon pour la m langer vitez de faire de la mousse en faisant tournoyer le flacon Figure 3 Etape 4 h Attendez que le r actif lyophilis soit dissout puis retournez nouveau les flacons assembl s en les inclinant un angle de 45 pour minimiser la formation de mousse Figure 3 Etape 5 Laissez la totalit du liquide retourner dans le flacon en plastique Test APTIMA COMBO 2 34 502183FR R v C PANTHER System i Retirez le collet de reconstitution et le flacon en verre Figure 3 tape 6 j Rebouchez le flacon en plastique Inscrivez les initiales de l op rateur ainsi que la date de reconstitution sur l tiquette Figure 3 Etape 7 k Jetez le collet
19. sultat CT quivoque sur les DTS Systems et a t exclu de cette analyse 8 9 ont concord avec les r sultats attendus 1 9 a t CT sur les DTS Systems La concentration CT de ce membre du panel est 1 log en dessous de 5 fg rRNA test Test APTIMA COMBO 2 83 502183FR R v C Performance analytique du TIGRIS DTS System tude de l quivalence de la sp cificit analytique Pour un test d amplification de l acide nucl ique la sp cificit analytique concernant les organismes individuels est largement d termin e par la chimie du test par ex s quences d olignucl otides plut t que par la plate forme tant donn que les r actifs du test APTIMA COMBO 2 sont identiques pour le TIGRIS DTS System et les DTS Systems les exp rimentations de sp cificit analytique sur le TIGRIS DTS System taient destin es porter sur les isolats de culture les plus complexes Parmi ces organismes figuraient ceux qui sont connus pour avoir une r activit crois e dans d autres tests d amplification Vingt quatre 24 isolats de culture ont t s lectionn s dans le panel d organismes du tableau 15 y compris 3 organismes qui sont tr s troitement apparent s CT et 17 organismes troitement apparent s GC Tous les organismes test s ont donn des r sultats n gatifs sur le TIGRIS DTS System tude de l quivalence des substances interf rentes Le sang une substance que l on trouve couramment dans les chantillons urog
20. tection d une IFU par test Un panel de sensibilit d un pool d chantillons vaginaux et un panel de sensibilit d un pool d chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt Pap apr s traitement ont t pr par s tune concentration de 5 fg rRNA de CT et 60 r plicats ont t test s sur le TIGRIS DTS System Le pourcentage de positivit avec le TIGRIS DTS System IC 95 tait de 100 95 1 100 pour les chantillons vaginaux sur couvillon et de 100 95 1 100 pour les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt apr s traitement Des dilutions de trois isolats cliniques de GC ont t test es en parall le sur le TIGRIS DTS System et sur les DTS Systems Les isolats de GC ont t dilu s dans le milieu de transport pour couvillon et un pool d chantillons d urine trait s Les concentrations variaient de 150 cellules par test 5 cellules par test soit un log au dessous de la sensibilit analytique revendiqu e pour le test de 50 cellules test 362 cellules couvillon 250 cellules mL d urine Le pourcentage de positivit entre le TIGRIS DTS System et les DTS Systems se situait dans l intervalle de confiance 95 pour les trois isolats jusqu au seuil de sensibilit analytique revendiqu Les dilutions inf rieures ce taux ont aussi donn des r sultats positifs sur les deux plate formes Dans l ensemble la sensibilit tait comparable entre le TIGRIS DTS System et les DTS Systems p
21. 1 73 74 Total 26 44 25 75 170 Pourcentage de concordance 100 86 8 100 100 92 0 100 96 0 79 6 99 9 97 3 90 7 99 7 S O IC 95 Pourcentage de concordance globale IC 95 98 2 94 9 99 6 d note un r sultat positif d note un r sultat n gatif s o sans objet Tableau 19 tude de concordance des chantillons cliniques r sultats pour les frottis en milieu liquide PreservCyt DTS Systems TIGRIS DTS System Total CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 26 0 0 0 26 CT GC 0 44 0 1 45 CT GC 0 0 24 0 24 CT GC 0 1 1 73 75 Total 26 45 25 74 170 Pourcentage de concordance 100 86 8 100 97 8 88 2 99 9 96 0 79 6 99 9 98 6 92 7 100 S O IC 95 Pourcentage de concordance globale IC 95 98 2 94 9 99 6 d note un r sultat positif d note un r sultat n gatif s o sans objet Test APTIMA COMBO 2 78 502183FR R v C Concordance des chantillons cliniques pour le TIGRIS DTS System Tableau 20 Etude de la concordance du panel clinique CT GC concordance avec les r sultats CT et GC pr vus pour les panels des couvillons endocervicaux des couvillons ur traux males et des chantillons d urine masculins et f minins Concentration des chantillons du panel Sr Ge memore du pane R plicats TIGRIS DTS TIGRIS DTS CT GC CT GC IFU mL CFU mL id Ks c
22. 2 Etape 5 Laissez la totalit du liquide retourner dans le flacon en plastique i Retirez le collet de reconstitution et le flacon en verre Figure 2 tape 6 j Rebouchez le flacon en plastique Notez les initiales de l op rateur et la date de reconstitution sur l tiquette Figure 2 Etape 7 k Jetez le collet de reconstitution et le flacon en verre Figure 2 tape 8 Avertissement vitez de faire de la mousse en reconstituant les r actifs La mousse interf re avec le d tecteur de niveau du TIGRIS DTS System EN 1 N 3 4 m o i ja d ND fl t3 J A 5 6 d 8 ja rs w dg TS 0o FS Figure 2 Proc dure de reconstitution pour le TIGRIS DTS System et le PANTHER System 2 Pr paration de la solution de r actif de capture de cible Working Target Capture Reagent wTCR a Associez les bouteilles de TCR et de TCR B appropri es b V rifiez les num ros de lot des r actifs sur la fiche de code barres du lot de r f rence pour vous assurer que les r actifs appropri s du kit se correspondent c Ouvrez le flacon de TCR et posez le bouchon sur une surface de travail propre et couverte d Retirez le bouchon du flacon de TCR B et versez la totalit du contenu dans le flacon de TCR Il est normal qu une petite quantit de liquide reste dans le flacon de TCR B e Rebouchez le flacon de TCR et agitez d licatement la solution pour m langer le con
23. 37 386 390 11 Frommell G T R Rothenberg S Wang and K Mcintosh 1979 Chlamydial infection of mothers and their infants Journal of Pediatrics 95 28 32 Test APTIMA COMBO 2 89 502183FR R v C Bibliographie 12 Gaydos C A T C Quinn D Willis A Weissfeld E W Hook D H Martin D V Ferraro and J Schachter 2003 Performance of the APTIMA COMBO 2 Assay for detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae in female urine and endocervical swab specimens J Clin Microbiol 41 304 309 13 Goessens W H F J W Mouton W I Van Der Meijden S Deelen T H Van Rijsoort Vos N L Toom H Verbrugh and R P Verkooyen 1997 Comparison of three commercially available amplification assays AMP CT LCx and COBAS AMPLICOR for detection of Chlamydia trachomatis in first void urine J Clin Microbiol 35 2628 2633 14 Holmes K K G W Counts and H N Beatz 1971 Disseminated Gonococcal infection Ann of Intern Med 74 979 993 15 Holmes K K H H Handsfield S P Wang B B Wentworth M Turck J B Anderson and E R Alexander 1975 Etiology of nongonococcal urethritis NEJM 292 1199 1205 16 Hook E W Ill and H H Handsfield 1999 Gonococcal infections in the adult p 458 In K Holmes et al eds Sexually Transmitted Diseases McGraw Hill New York NY 17 Jaschek G C A Gaydos L E Welsh and T C Quinn 1993 Direct detection of Chlamydia trachomatis in urine spec
24. 5 Sympt N gatif 1 3 4 317 96 7 82 8 99 9 98 5 96 5 99 5 Total 30 3 4 322 Positif 87 1 0 11 Tous N gatif 3 4 16 1525 96 7 90 6 99 3 99 2 98 7 99 6 Total 90 5 16 1536 R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test ACT R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test ACT R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test ACT R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test ACT Test APTIMA COMBO 2 53 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems C trachomatis performance par site clinique Tableau 6a Echantillon analys avec le test APTIMA COMBO 2 compar l tat d infection du patient chantillon Site N TP FP TN FN ps Peiper prn pa 1 18 35 6 115 1 229 97 2 85 5 99 9 95 0 89 5 98 2 854 99 1 2 93 19 2 72 0 204 10096 824 100 97 3 90 6 99 7 90 5 100 8 248 76 5 165 2 315 97 4 91 0 99 7 97 1 93 3 99
25. AB R servez des bains marie distincts aux tapes de capture de cible d amplification et du DKA lors du test AC Les cartes de protection doivent tre jet es dans le r cipient d chets imm diatement apr s avoir t retir es des tubes r actionnels Des cartes de protections neuves doivent toujours tre utilis es elles ne doivent jamais tre r utilis es d une tape l autre Les cartes de protection doivent tre fermement appos es sur le dessus de tous les tubes r actionnels Test APTIMA COMBO 2 7 502183FR R v C Informations g n rales Conditions de conservation et de manipulation des r actifs A Les r actifs suivants sont stables lorsqu ils sont conserv s entre 2 C et 8 C r frig r s R actif d amplification APTIMA COMBO 2 R actif enzymatique APTIMA COMBO 2 R actif sonde APTIMA COMBO 2 R actif de capture de cible B APTIMA COMBO 2 Contr le positif CT contr le n gatif GC APTIMA Contr le positif GC contr le n gatif CT APTIMA B Les r actifs suivants restent stables lorsqu ils sont conserv s entre 2 C et 30 C Solution de reconstitution de l amplification APTIMA COMBO 2 Solution de reconstitution enzymatique APTIMA COMBO 2 Solution de reconstitution de sonde APTIMA COMBO 2 R actif de s lection APTIMA COMBO 2 C Les r actifs suivants sont stables lorsqu ils sont conserv s entre 15 C et 30 C temp rature ambiante R actif de capture de cible Solution de lavage APTIM
26. CT 5 fg test PGC NCT Contr le positif GC contr le n gatif CT APTIMA 5x1 7mL Acide nucl ique GC non infectieux dans une solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent Chaque chantillon de 400 uL contient le rRNA estim quivalent 50 cellules de GC 250 fg test Les quivalents rRNA ont t calcul s d apr s la taille du g nome et le ratio estim DNA RNA cellule de chaque organisme Test APTIMA COMBO 2 32 502183FR R v C PANTHER System Mat riel requis mais disponible s par ment Remarque Le mat riel disponible aupr s de Gen Probe est indiqu par des r f rences catalogue sauf indication contraire PANTHER System Kit de solutions pour test APTIMA APTIMA Assay Fluids Kit solution de lavage APTIMA tampon APTIMA pour solution de d sactivation et r actif huileux APTIMA APTIMA Auto Detect Kit Unit s multi tube multi tube unit MTU Kit de sacs d chets PANTHER Couvre d chets PANTHER Ou Kit pour s ries PANTHER Contient les MTU les sacs d chets les solutions et auto detect Embouts 1000 uL conducteurs d tecteurs de liquide Kit de transfert d chantillons APTIMA utiliser avec des chantillons dans la solution PreservCyt Kit de collecte d chantillons couvillon vaginal APTIMA Kit de collecte d chantillons couvillon unisexe APTIMA pour chantillons endocervicaux et ur traux m les sur couvillon Kit de collecte d chantillons d urine APTIM
27. Infect 30 60 Non infect 4 12 Non infect 3 2 Non infect 322 1214 Total 359 1288 Test APTIMA COMBO 2 59 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems C trachomatis analyse de l tat d infection des patients de sexe masculin Tableau 8 Analyse des chantillons ur traux sur couvillon et d urine pour d terminer l tat d infection par C trachomatis des patients de sexe masculin L tat d infection du NAAT 1 NAAT 2 res Mesas patens MU MS MU MU MS Sympt Asympt Infect S O 2 0 Infect 10 4 Infect S O S O 4 6 Infect S O 2 0 Infect S O 21 1 Infect 3 3 Infect 4 3 Infect S O 0 Infect S O 8 2 Infect 12 4 Infect 1 0 Infect 1 3 Infect S O 1 0 Infect 1 1 Infect 131 53 Non infect S O 0 2 Non infect S O 13 8 Non infect 461 303 Non infect 10 5 Non infect 3 4 Non infect 5 0 Total 694 402 MU Urine homme MS Ecouvillon ur tral masculin S O repr sente un chantillon non obtenu ou non disponible pour un test Test APTIMA COMBO 2 60 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Neisseria gonorrhoeae tableaux de performance N gonorrhoe
28. Rebouchez le flacon d chets et tournez d licatement le contenu jusqu l obtention d un m lange homog ne f Laissez le flacon d chets reposer pendant 15 minutes puis jetez le contenu d chets g Rincez le flacon d chets l eau pour liminer tout r sidu ventuel h Rebouchez le flacon vide et mettez le dans le boitier du pi ge vide Fixez le raccord d connexion rapide sur l unit TCS Jetez avec pr caution les deux gants 4 Unit TCS Essuyez les surfaces de l unit TCS la rampe d aspiration et la surface des embouts d jection du tampon de lavage avec des serviettes en papier humidifi es l aide d une solution d hypochlorite de sodium dos e de 2 5 3 5 0 35 M 0 5 M Faites suivre l tape de javellisation par un rin age l eau puis s chez compl tement les surfaces avec des serviettes en papier 5 Portoirs Faites submerger les portoirs dans une solution d hypochlorite de sodium dos e de 2 5 96 3 5 0 35 M 0 5 M en veillant ce qu ils soient recouverts par la solution d hypochlorite de sodium Maintenez les portoirs immerg s pendant 10 minutes Toute exposition plus longue endommagerait les portoirs Rincez soigneusement les portoirs l eau et placez les sur un tampon absorbant propre avant de les laisser s cher parfaitement l air libre Pour prolonger la dur e de vie des portoirs faites les s cher debout et non invers s l Contamination des tests 1
29. S O IC 95 Pourcentage de concordance globale IC 95 98 3 97 3 99 0 d note un r sultat positif d note un r sultat n gatif s o sans objet Donn es non pr sent es les r sultats de deux chantillons taient quivoques pour CT GC aussi bien sur le TIGRIS DTS System que les DTS Systems Un chantillon a donn un r sultat CT GC sur le TIGRIS DTS System mais un r sultat CT GC quivoque sur les DTS Systems Lorsque cet chantillon a t r analys avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems le r sultat obtenu tait CT GC L chantillon a galement donn un r sultat GC dans un test d amplification TMA alternatif 21 1 tait CT GC lors du second test sur les DTS Systems et CT lors du test d amplification TMA alternatif 311 chantillons sur 12 ont t r analys s 11 11 taient CT GC lors de leur r analyse avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems 9 11 taient CT lors du test avec le test d amplification TMA alternatif et 2 11 taient CT 42 2 taient CT GC lors de leur r analyse avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems et GC avec le test d amplification TMA alternatif 52 2 taient CT GC lors de leur r analyse avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems et CT avec le test d amplification TMA alternatif Test APTIMA COMBO 2 77 502183FR R v C Concordance des chantillons cliniques pour le TIGRIS DTS System Tableau 17 Etude de
30. amplification de l acide nucl ique NAAT Auparavant la culture de cellules tait consid r e comme la norme de r f rence pour la d tection de CT Bien que la culture soit particuli rement pr cise les publications scientifiques ont d montr que les technologies NAAT de sonde DNA offrent une sensibilit clinique sup rieure aux cultures 2 9 17 30 Test APTIMA COMBO 2 2 502183FR R v C Informations g n rales En raison de sa sensibilit clinique plus faible et d une performance variable entre laboratoires la culture a t remplac e dans de nombreux laboratoires par les tests de sonde DNA directs et les NAAT N gonorrhoeae est l agent responsable des maladies gonococciques Les N gonorrhoeae sont des diplocoques Gram n gatifs non motiles La majorit des infections gonococciques prennent la forme d infections du tractus g nital inf rieur d nu es de complications et peuvent tre asymptomatiques Toutefois si elles ne sont pas trait es chez la femme ces infections peuvent remonter vers l ut rus et provoquer des infections g nitales hautes PID Ces infections g nitales hautes PID se manifestent sous forme d endom trites de salpingites de p ritonites pelviennes et d abc s ovario tubaires Un faible pourcentage des personnes souffrant d infections gonococciques peut d velopper des infections gonococciques diss min es DGI 14 20 Le diagnostic conventionnel de l infection GC n cessite l
31. analyses r p titives ont galement t effectu es avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems pour les chantillons dont les r sultats taient discordants entre le TIGRIS DTS System et les DTS Systems Les tableaux 16 et 17 pr sentent le pourcentage de concordance globale pour tous les r sultats de test appari s obtenus sur le TIGRIS DTS System et les DTS Systems respectivement pour les chantillons sur couvillon et d urine La concordance globale tait de 98 3 pour les chantillons sur couvillon et de 99 2 pour les chantillons d urine Se r f rer au tableaux 5a et 9a pour les estimations de la performance du test APTIMA COMBO 2 avec des chantillons endocervicaux sur couvillon ur traux m les sur couvillon ainsi que les chantillons d urine f minins et masculins test s sur les DTS Systems Les estimations de la performance clinique du TIGRIS DTS System avec des chantillons endocervicaux sur couvillon ur traux m les sur couvillon ainsi que des chantillons d urine masculins et f minins devraient tre similaires compte tenu de la concordance des r sultats Test APTIMA COMBO 2 75 502183FR R v C Concordance des chantillons cliniques pour le TIGRIS DTS System Etude de la concordance des chantillons cliniques chantillons vaginaux sur couvillon et de frottis en milieu liquide PreservCyt Des sujets f minins se rendant dans des centres pour MST des dispensaires et des cliniques d
32. collecte initiale s est limit e au d pistage des sujets symptomatiques Test APTIMA COMBO 2 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Tableau 10b chantillons vaginaux sur couvillon du test APTIMA COMBO 2 compar s l tat d infection des patients l tat d infection du patient chantillon Site N TP FP TN FN ur He Ho p p 1 70 5 1 465 0 71 100 47 8 100 98 5 91 7 100 83 3 100 2 46 7 O 39 0 152 100 59 0 100 100 91 0 100 100 100 3 45 2 0 43 O0 44 100 15 8 100 100 91 8 100 100 100 Collect amp ition 4 152 1 0 151 O 07 100 2 5 100 100 97 6 100 100 100 par la a 5 130 1 O 129 0 08 100 2 5 100 100 97 2 100 100 100 patiente 6 75 5 2 68 0 67 100 47 8 100 97 1 90 1 99 7 71 4 100 7 6 0 0 6 0 00 S O 100 94 7 100 S O 100 8 48 0 0 43 0 00 S O 100 91 8 100 S O 100 TOUS 629 21 3 605 0 33 100 83 9 100 99 5 98 6 99 9 87 5 100 1 227 12 3 212 0 53 100 73 5 100 98 6 96 0 99 7 80 0 100 2 196 31 2 163 O 158 100 88 8 100 98 8 95 7 99 9 93 9 100 3 13 3 0 109 1 3 5 75 0 19 4 99 4 100 96 7 100 100 99 1 Collect amp ition 4 262 5 2 255 O 1 9 100 47 8 100 99 2 97 2 99 9 71 4 100 par un eal 5 19 2 O 19 0 1 0 100 15 8 100 100 98 1 100 100 100 clinicien 6 296 18 4 272 2 6 8 90 0 68 3 98 8 98 6 96 3 99 6 81 8 99 3 7 402 0 0 102 0 00 S 0 10096 96 4 100 S O 100 8 50
33. concordance des chantillons cliniques r sultats pour les chantillons d urine f minins et masculins DTS Systems TIGRIS DTS System Total CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 32 0 0 0 32 CT GC 0 100 0 1 101 CT GC 0 0 52 0 52 CT GC 0 8 1 776 785 Total 32 108 53 777 970 Pourcentage de concordance 100 89 1 100 92 6 85 9 96 7 98 1 89 9 100 99 9 99 3 100 S O IC 95 Pourcentage de concordance globale IC 95 99 2 98 1 99 5 d note un r sultat positif d note un r sultat n gatif s o sans objet 1 7 8 taient CT GC lors de leur r analyse avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems et CT avec le test d amplification TMA alternatif 1 8 taient CT GC lors de leur r analyse avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems et CT avec le test d amplification TMA alternatif 1 1 tait CT GC lors de son r analyse avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems et CG avec le test d amplification TMA alternatif 3 1 1 tait CT GC lors de son r analyse avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems et CT avec le test d amplification TMA alternatif Tableau 18 tude de concordance des chantillons cliniques r sultats pour les chantillons vaginaux sur couvillon DTS Systems TIGRIS DTS System Total CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 26 0 0 0 26 CT GC 0 44 0 2 46 CT GC 0 0 24 0 24 CT GC 0 0
34. couvillon chantillons d urine masculins et f minins Des sujets masculins et f minins se rendant dans des cliniques pour MST des centres de soins d urgence des dispensaires et des centres de planning familial ont t enr l s dans sept sites cliniques g ographiquement r partis avec des taux de pr valence variant de faible lev pour CT et GC L tude de la concordance des chantillons cliniques a valu la concordance des deux syst mes en utilisant des chantillons sur couvillon et d urine de 485 sujets masculins et 576 sujets f minins Sur les 1991 chantillons test s un faible pourcentage a donn initialement des r sultats invalides ou quivoques pour CT ou GC sur le TIGRIS DTS System 20 1 0 96 et sur les DTS Systems 14 0 7 96 Lors de la r p tition des tests deux 2 chantillons cliniques ont donn des r sultats GC quivoques sur le TIGRIS DTS System et n ont pas t inclus dans les calculs d quivalence Le pourcentage de concordance globale ainsi que les pourcentages de concordances positifs et n gatifs ont t calcul s Les chantillons donnant des r sultats discordants entre les DTS Systems et le TIGRIS DTS System ont t test s avec les tests d amplification TMA alternatifs pour CT et GC qui sont des tests d amplification de l acide nucl ique nucleic acid amplification test NAAT ciblant les s quences rRNA de CT ou de GC distinctes de celles cibl es avec le test APTIMA COMBO 2 Des
35. d individus symptomatiques chantillons endocervicaux vaginaux et ur traux m les collect s par un clinicien l aide d un couvillon chantillons d urine f minins et masculins Ce test peut galement tre employ pour analyser les chantillons suivants provenant d individus asymptomatiques chantillons endocervicaux vaginaux et ur traux m les collect s par un clinicien l aide d un couvillon chantillons collect s par la patiente l aide d un couvillon vaginal chantillons d urine f minins et masculins Ce test est aussi pr vu pour tre utilis avec les tests d chantillons gyn cologiques de patientes la fois symptomatiques et asymptomatiques Ces chantillons cervicaux collect s dans les flacons de solution PreservCyt peuvent tre test s avant ou apr s le traitement du frottis L analyse des chantillons apr s traitement du frottis est limit e aux seuls chantillons trait s avec le syst me ThinPrep 2000 Les chantillons collect s par la patiente l aide d un couvillon vaginal offrent une option de d pistage chez les femmes lorsqu un examen pelvien n est pas autrement indiqu Le kit de collecte d chantillons couvillon vaginal n est pas pr vu pour une utilisation domicile R sum et explication du test Les infections Chlamydia trachomatis CT et Neisseria gonorrhoeae GC sont deux infections sexuellement transmissibles parmi les plus fr quentes au monde En 2010 les
36. d un bruit de fond lev d tect au luminom tre de l appareil L appareil pr sentait des raccords Detect 1 et 2 l ches qui auraient pu laisser l air p n trer dans les tubulures ou des quantit s incorrectes de r actifs de d tection s injecter Ces listes de travail se sont av r es valides lorsque le test a t r p t Sur les 340 chantillons test s aucun n a donn de r sultats de test invalides ou quivoques sur le TIGRIS DTS System Les tabeaux 18 et 19 pr sentent les pourcentages des concordances globales concernant la d tection de CT et GC pour tous les r sultats de tests appari s obtenus sur le TIGRIS DTS System et les DTS Systems pour les chantillons vaginaux sur couvillon et les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt Les concordances globales taient de 98 2 pour les chantillons vaginaux sur couvillon et de 98 2 pour les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt Se r f rer aux tableaux 5b 5c 9b et 9c pour consulter les estimations de la performance du test APTIMA COMBO 2 pour les chantillons vaginaux sur couvillon et de frottis en milieu liquide PreservCyt sur les DTS Systems Les estimations de la performance clinique pour le TIGRIS DTS System avec des chantillons vaginaux sur couvillon et des chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt devraient normalement tre similaires compte tenu des r sultats de la concordance tude de la concordance du panel cl
37. d un panel distinct tait CT sur les DTS Systems Trois des 5 r plicats du panel d urine f minine taient CT sur le TIGRIS DTS System Tableau 21 tude de la concordance du panel clinique CT GC r sultats CT pour les panels endocervicaux ur thraux sur couvillon et d urine f minine et masculine z Pise Dist DTS DTS Concordance Concordance Echantillon N TIGRIS TIGRIS TIGRIS TIGRIS positive IC 95 n gative IC 95 n n n n couvillon 129 80 0 0 49 100 95 5 100 100 92 7 100 Urine 130 76 3 1 50 96 2 89 3 99 2 98 0 89 6 100 d note un r sultat positif d note un r sultat n gatif IC intervalle de confiance Trois des 5 r plicats du panel d urine f minine dont la concentration se situait un log en dessous du seuil de sensibilit analytique revendiqu e pour le test APTIMA COMBO 2 soit 1 IFU test pour CT ont donn des r sultats CT sur le TIGRIS DTS System Un des 5 r plicats du panel d urine f minine tait CT sur les DTS Systems Test APTIMA COMBO 2 79 502183FR R v C Concordance des chantillons cliniques pour le TIGRIS DTS System Tableau 22 Etude de la concordance du panel clinique CT GC r sultats GC pour les panels endocervicaux ur thraux sur couvillon et d urine f minine et masculine DTS DTS DTS DTS z Concordance Concordance Echantillon N PR wd ee id positive IC 95 n gative IC 95 Ecouvillon 129 79 0 0 50 100 95
38. des calculs Une analyse s par e a t effectu e sur un sous ensemble de la population de l tude constitu des chantillons n gatifs ayant imm diatement suivi des r sultats positifs avec une valeur cible lev e Le taux de contamination de transfert pour ce sous ensemble de la population r sultats faussement positifs et quivoques compris a t en moyenne de 1 1 12 1 097 Concernant les r sultats faussement positifs de ce sous ensemble le taux de contamination de transfert a vari de 0 1 1 96 sur les trois TIGRIS DTS Systems Concernant les r sultats quivoques de ce sous ensemble le taux de contamination de transfert a vari de O 96 0 9 sur les trois TIGRIS DTS Systems Ces r sultats ont d montr que la contamination est minimis e sur le TIGRIS DTS System Test APTIMA COMBO 2 85 502183FR R v C Performance analytique du PANTHER System Performance analytique du PANTHER System Etude de la concordance du panel clinique ensemenc Des chantillons d urine individuel pour lesquels des r sultats n gatifs avaient t obtenus ont et ensemenc s avec CT s rotype G GC ou une combinaison de CT et de GC afin de constituer un panel de 120 chantillons positifs pour CT 120 chantillons positifs pour GC et 120 chantillons doublement positifs Les chantillons du panel positifs pour CT ont t ensemenc s avec des microorganismes a des concentrations de 0 25 IFU mL 2 5 IFU mL ou 25 IFU mL so
39. du contr le positif GC contr le n gatif CT peuvent tre plac s n importe quelle position sur le portoir ou dans n importe quelle colonne du compartiment chantillons Le pipetage des chantillons des patients d butera lorsqu une des deux conditions suivantes aura t remplie a Une paire de contr les est en cours de traitement par le syst me b Des r sultats valid s ont t enregistr s sur le syst me pour les contr les 2 D s que le pipetage des tubes des contr les a t r alis et que ces derniers sont en cours de traitement pour un kit de r actifs d fini l analyse d chantillons patient peut se poursuivre pendant 24 heures avec ce m me kit sauf si a Les r sultats des contr les sont invalides b Le kit de r actifs associ aux contr les est enlev du syst me c La dur e de stabilit du kit de r actifs associ aux contr les a t d pass e 3 Chaque tube de contr le APTIMA est pr vu pour un seul test Les tentatives de pipetage r p t es plus d une fois partir d un m me tube peuvent entrainer des erreurs de traitement B Temp rature La temp rature ambiante est d finie comme se situant entre 15 C et 30 C C Poudre sur les gants Comme avec tout syst me de r actif l exc s de poudre sur certains gants peut entrainer la contamination des tubes ouverts Il est recommand d utiliser des gants sans poudre D Protocole de contr le de la contamination en laboratoir
40. fiche de code barres du lot de r f rence b Notez les initiales de l op rateur ainsi que la date du jour sur l tiquette Remarque M langez fond les r actifs en les retournant doucement avant de les charger dans le syst me Evitez la formation de mousse pendant le retournement des r actifs Test APTIMA COMBO 2 35 502183FR R v C PANTHER System C Pr paration des r actifs pour les r actifs pr c demment reconstitu s 1 Les r actifs sonde d amplification et enzymatiques pr c demment reconstitu s doivent parvenir temp rature ambiante entre 15 C et 30 C avant le d but du test 2 Sile r actif sonde reconstitu contient un pr cipit qui ne se remet pas en solution temp rature ambiante chauffer le flacon bouch une temp rature n exc dant pas 62 C pendant 1 2 minutes Apr s cela le r actif sonde peut tre utilis m me s il reste des pr cipit s r siduels M langez le r actif sonde par retournement en veillant ne pas former de mousse avant de le charger sur le syst me 3 M langez fond chaque r actif par retournement en douceur avant de le charger sur le syst me Veillez viter la formation de mousse pendant le retournement des r actifs 4 Ne pas remplir nouveau les flacons de r actif Le PANTHER System reconna t et rejette les flacons qui ont t remplis nouveau D Manipulation des chantillons 1 Laissez les contr les ainsi que les chantil
41. maintenus dans des plages de temp rature pr cises 2 La temp rature ambiante est d finie comme se situant entre 15 C et 30 C 3 Les tapes de d tection du test doivent tre effectu es entre 18 C et 28 C Test APTIMA COMBO 2 20 502183FR R v C DTS Systems E Dur e Les r actions de capture de cible d amplification d hybridation et de s lection sont toutes fonction du temps coul Respectez les dur es indiqu es dans la Proc dure de test avec les DTS Systems F Agitation au vortex La qualit de l agitation au vortex est importante pour assurer la bonne performance du test APTIMA COMBO 2 Si l agitation au vortex est effectu e de mani re ad quate la suspension tourne de mani re circulaire a une vitesse capable de faire monter la solution dans la moiti sup rieure du tube Cette manipulation agitation au vortex est maintenue pendant une dur e pr cise Pour vortexer des r actions r glez la vitesse du vortexeur m langeur a tourbillon multi tubes sur le r glage le plus bas fixez solidement le portoir en place et mettez en marche Augmentez lentement la vitesse jusqu ce que le liquide atteigne la moiti sup rieure du tube Vortexez pendant 10 secondes la dur e recommand e ou jusqu l obtention d une teinte uniforme Ensuite tournez la vitesse sur le r glage le plus bas avant d teindre le vortexeur m langeur tourbillon multi tubes et de retirer le portoir Les m langes r ac
42. nitaux peut interf rer avec certains tests d amplification Le sang total a t utilis pour tablir le degr d interf rence du sang sur le TIGRIS DTS System et l quivalence entre le TIGRIS DTS System et les DTS Systems concernant ce potentiel d interf rence Du sang frais a t ajout aux pools d couvillons cliniques d couvillons vaginaux d chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt d j trait s et d chantillons d urine puis test s pour toute interf rence ventuelle avec le test en l absence ou en pr sence de CT et GC cible L quivalent rRNA estim d une CT IFU test 5 fg test et de 50 GC cellules test 250 fg test a t utilis tant donn qu il repr sente la sensibilit analytique du test Les quivalents rRNA ont t calcul s d apr s la taille du g nome et le ratio estim DNA RNA cellule de chaque organisme Les chantillons ont t test s sur deux TIGRIS DTS Systems Tous les chantillons contenant de l acide nucl ique cible ont t positifs lorsqu ils ont t test s un taux de 10 96 vol vol de sang dans les chantillons sur couvillon les chantillons vaginaux sur couvillon les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt apr s traitement et 30 vol vol de sang dans les chantillons d urine Tous les chantillons qui ne contenaient pas la cible ont t correctement identifi s comme tant n gatif CT et GC Ces r sultats sont identiques ceux d
43. non infect s si moins de deux r sultats NAAT de r f rence taient positifs Les tableaux 7b et 11b r sument le nombre des r sultats de sujets symptomatiques et asymptomatiques d sign s comme infect s ou non infect s respectivement par CT ou GC selon l algorithme de l tat d infection des patients Pour cette tude clinique deux NAAT disponibles dans le commerce ont t utilis s afin de d terminer l tat d infection GC La culture de cellules n a pas t utilis e comme test de r f rence car les r sultats du test APTIMA COMBO 2 ont d j t compar s ceux de la culture de cellules pour d autres types d chantillons se r f rer I Etude clinique des chantillons endocervicaux et ur traux m les sur couvillon et d urine pour de plus amples details La sensibilit et la sp cificit de d tection de CT par sexe type d chantillon et tat des sympt mes sont pr sent es dans le tableau 5b Le tableau 6b pr sente la sensibilit la sp cificit et les valeurs pr dictives du test APTIMA COMBO 2 pour CT compar l tat d infection des patients par site clinique et de mani re globale La sensibilit et la sp cificit de d tection de GC par sexe type d chantillon et tat des sympt mes sont pr sent es dans le tableau 9b La tableau 9b pr sente la sensibilit la sp cificit et les valeurs pr dictives du test APTIMA COMBO 2 pour GC compar l tat d infection des patients par site clinique e
44. rRNA GC GC N g Pr sum n gatif pour rRNA GC GC Equiv L chantillon devra tre test nouveau Non valide L chantillon devra tre test nouveau b R sultats apr s r analyse CT Pos Positif pour rRNA CT CT N g Pr sum n gatif pour rRNA CT Ind termin un nouvel chantillon devra tre CT Equiv collect GC Pos Positif pour rRNA GC GC N g Pr sum n gatif pour rRNA GC Ind termin un nouvel chantillon devra tre GC Equiv A collect Ind termin un nouvel chantillon devra tre Non valide collect Hemarques l est conseill de consid rer attentivement les donn es de performance pour interpr ter les r sultats du test APTIMA COMBO 2 pour les individus asymptomatiques ou tout individu provenant d une population faible pr valence d infection Le premier r sultat valide pour chaque analyte est celui qui doit tre valid Un r sultat n gatif n exclut pas la pr sence d une infection CT ou GC tant donn que la qualit des r sultats d pend de la collecte des chantillons de l absence d inhibiteurs et de l obtention d une quantit de rRNA suffisante pour tre d tect e Les r sultats des tests peuvent tre affect s par une collecte impropre des chantillons une mauvaise conservation des chantillons une erreur technique ou une confusion entre chantillons Comme c est le cas avec toutes les m
45. rieure ceci peut indiquer un probleme li l chantillon Il est alors recommand d effectuer une nouvelle collecte de l chantillon D Amplification Si vous utilisez le bain chaleur s che vortexeur SB100 SB100 Dry Heat Bath Vortexer r f rez vous la fiche d application du SB100 1 A l aide du pipeteur r p tition ajoutez 75 uL de r actif d amplification reconstitu dans chaque tube r actionnel Tous les m langes r actionnels du portoir doivent maintenant tre rouges 2 A l aide du pipeteur r p tition ajoutez 200 uL de r actif huileux dans chaque tube r actionnel 3 Couvrez les tubes avec une carte de protection et vortexez les sur le vortexeur m langeur tourbillon multi tubes 4 Faites incuber le portoir 62 C 1 C dans un bain marie pendant 10 5 minutes 5 Transf rez le portoir dans un bain marie 42 C 1 C et incuber pendant 5 2 minutes 1 Consultez la Fiche des sp cifications de d pression du syst me de capture de cible situ e au verso du Manuel de l op rateur du syst me de capture de cible Target Capture System Operator s Manual ou contactez le Service technique Test APTIMA COMBO 2 18 502183FR R v C DTS Systems 6 Une fois le portoir dans le bain marie retirez soigneusement la carte de protection et a l aide du pipeteur r p tition ajoutez 25 pL du r actif enzymatique reconstitu dans chaque tube r actionnel Tous les m langes r ac
46. s a 3 3 b 6 7 c 3 4 et d 9 11 Test APTIMA COMBO 2 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Tableau 9c Comparaison des chantillons PreservCyt du test APTIMA COMBO 2 l tat d infection des patients Etat des R sultats AC2 GC Sensibilit Sp cificit sympt mes PreservCyt IC 95 IC 95 Positif 5 0 1 3 ET 83 3 96 99 7 96 Asympt N gatif 1 0 5 1273 85 9 99 6 99 2 99 9 Total 6 0 6 1276 Positif T 0 0 0 EET 100 96 100 96 Sympt N gatif 0 0 0 352 59 0 100 99 0 100 Total 7 0 0 352 Positif 12 0 1 3 RAE 92 3 96 99 8 96 Tous N gatif 1 0 5 1625 64 0 99 8 99 4 99 9 Total 13 0 6 1628 e eee o J a I c c J Un chantillon a donn un r sultat discordant r sultat quivoque d chantillon endocervical sur couvillon avec le test APTIMA COMBO 2 R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test GC APTIMA R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AGC R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AGC R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le
47. solutions de reconstitution sont r frig r es laissez leur temp rature s quilibrer temp rature ambiante avant de les utiliser a Mettez la solution de reconstitution appropri e avec le r actif lyophilis Les tiquettes ont diff rents codes couleur afin de pouvoir tre correctement associ es b Ouvrez le flacon de r actif lyophilis et ins rez fermement l extr mit du collet de reconstitution pr sentant une encoche dans l ouverture du flacon Figure 1 Etape 1 c Ouvrez la bouteille de solution de reconstitution correspondante et posez le bouchon sur une surface de travail propre et couverte d Tout en tenant la bouteille de solution de reconstitution au dessus de la paillasse ins rez fermement l autre extr mit du collet de reconstitution dans l ouverture de la bouteille Figure 1 Etape 2 e Retournez d licatement l assemblage bouteille flacon Laissez la solution s couler depuis la bouteille vers le flacon Figure 1 Etape 3 f Faites tourner d licatement la solution dans le flacon pour la m langer vitez de faire de la mousse dans le flacon pendant cette manipulation Figure 1 Etape 4 g Attendez que le r actif lyophilis se dissolve puis retournez nouveau l assemblage bouteille flacon en l inclinant un angle de 45 pour minimiser la formation de mousse Figure 1 Etape 5 Laissez la totalit du liquide retourner dans la bouteille h Retirez le collet de reconstitution de la boute
48. taille du g nome et le rapport estim DNA RNA par cellule pour chaque organisme 5 fg quivaut 1 IFU de CT et 250 fg quivaut 50 cellules de GC Test APTIMA COMBO 2 81 502183FR R v C Performance analytique du TIGRIS DTS System Performance analytique du TIGRIS DTS System Consultez la section Performance analytique du PANTHER System pour la performance analytique sp cifique au PANTHER System tude de l quivalence de la sensibilit analytique Les dilutions de trois s rotypes de CT E F G associ s aux infections de l appareil g nito urinaire ont t test s en parall le sur trois appareils du TIGRIS DTS System et sur les DTS Systems Les s rotypes CT ont t dilu s dans le milieu de transport pour couvillon et un pool d chantillons d urine trait s Les concentrations variaient de 3 Unit s de formation des inclusions IFU par test 0 1 IFU par test soit un log au dessous de la sensibilit analytique revendiqu e pour le test d une IFU par test 7 25 IFU couvillon 5 IFU mL d urine Le pourcentage de positivit entre le TIGRIS DTS System et les DTS Systems se situait dans l intervalle de confiance 95 pour les trois s rotypes jusqu au seuil de sensibilit analytique revendiqu Les dilutions inf rieures ce taux ont aussi donn des r sultats positifs sur les deux plate formes Dans l ensemble la sensibilit tait comparable entre le TIGRIS DTS System et les DTS Systems pour un seuil de d
49. test de CT rRNA et ou de 0 a 2433 fg test de GC rRNA Chaque liste de travail se composait de six panels de pr cision identiques de 12 membres contenant de 0 a 2000 fg test de CT rRNA et ou de 0 a 5000 fg test de GC rRNA Les chantillons des panels contenant CT et GC ont t class s comme ayant des concentrations de CT faibles 5 ou 100 fg test moyennes 1000 fg test ou lev es 2 2000 fg test et ayant des concentrations de GC faibles lt 250 fg test moyennes environ 2400 fg test ou lev es 5000 fg test La reproductibilit a t tablie en ensemangant le milieu de transport de l couvillon avec rRNA La reproductibilit lors des tests d chantillons sur couvillon et urinaires contenant l organisme cible n a pas t d termin e La pr cision a t estim e conform ment aux directives NCCLS NCCLS document EP5 A 22 Test APTIMA COMBO 2 80 502183FR R v C Concordance des chantillons cliniques pour le TIGRIS DTS System Tableau 23 Donn es de pr cision pour le TIGRIS DTS System Gane Intra s rie D un site D un lot D un op rateur D une s rie Moy Pautre l autre l autre l autre enne CT GC RLU iat dd ni d PLU GN ren d R EY N x1000 Concord 1000 x1000 x1000 x1000 x1000 N g N g 647 4 100 1 25 26 2 0 66 13 9 0 05 1 0 0 08 1 7 0 30 6 4 N g Elev e 215 1216 100 28 5 2 3 61 2 5 0 10 0 0 8 0 0 17 1 1 4 Elev e N g 216
50. texte de l tiquette indique CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT Si ces contr les sont plac s dans la mauvaise position la s rie chouera Tout contr le suppl mentaire doit tre entr en tant qu chantillon de patient et l op rateur veillera ce qu il soit acceptable B Pipetage des contr les et chantillons Le volume de contr le ou d chantillon ajout au tube r actionnel doit tre de 400 uL 100 uL Il est recommand d inspecter visuellement le volume pipet dans le tube r actionnel pour veiller ce que le volume transf r soit ad quat Le volume de contr le ou d chantillon doit tre ad quat pour obtenir des r sultats pr cis Si le volume pipet est incorrect pipetez nouveau la solution wTCR ainsi que le contr le ou l chantillon dans un nouveau tube r actionnel C R actifs La solution de reconstitution de sonde peut se pr cipiter pendant la conservation Si tel est le cas chauffez la solution de reconstitution de sonde 62 C pendant 1 2 minutes Apr s cette tape la solution de reconstitution de sonde peut tre utilis e m me s il reste des pr cipit s de r sidus Une fois la remise en suspension obtenue m langez le flacon d licatement par retournement en veillant ne pas former de mousse D Temp rature 1 Les tapes de capture de cible d amplification d hybridation et de s lection d pendent de la temp rature Il est donc imp ratif que les bains marie soient
51. 0 89 5 982 2 81 12 1 68 0 148 100 735 100 98 696 92 2 100 92 3 100 3 18 54 3 125 3 308 94796 854 98 97 7 93 3 99 5 94 7 97 7 Urine 4 99 24 2 167 3 188 889 708 976 98570 058 999 923 982 5 369 28 2 338 1 7 9 96 6 82 2 99 9 99 4 97 9 99 9 93 3 997 6 276 35 1 238 2 134 94 6 81 8 99 3 99 6 97 7100 97 2 992 7 134 10 0 124 O 75 100 69 2 100 100 97 1 100 100 100 TOUS 1391 197 13 1170 11 150 94 7 90 7 97 3 98 9 98 1 99 4 93 8 99 1 RE a M ES SE a a a TP Vrai positif FP Faux positif TN Vrai n gatif FN Faux n gatif Pr valence surestim e due au fait que la collecte initiale s est limit e au d pistage des sujets symptomatiques Test APTIMA COMBO 2 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Tableau 6b Echantillons vaginaux sur couvillon du test APTIMA COMBO 2 compar s l tat d infection des patients Echantillon Sie N TP FP TN FN jh edens d dos pH pis 1 70 14 3 53 O 20 0 100 76 8 100 94 6 85 1 98 9 82 4 100 2 45 13 3 29 0 289 100 75 3 100 90 6 75 0 98 0 81 3 100 3 45 4 2 39 0 8 9 100 39 8 100 95 1 83 5 99 4 66 7 100 Collect amp villon 4 152 6 3 142 1 4 6 85 7 42 1 99 6 99 7 94 1 99 6 66 7 99 3 parla Vaginal 5 130 7 3 120 0 5 4 100 59 0 100 97 6 93 0 99 5 70 0 100 patiente 6 75 8 2 65 0 107 10096 63 1 100 97 0 89 6 99 6 80 0 100 7 68 5 1 62 o0 7 4 100
52. 0 93 8 988 coua 4 51 12 1 38 0 235 100 73 5 100 97 496 86 5 99 9 92 3 100 vilon 5 138 24 0 113 1 1841 96 095 79 6 99 9 10096 96 8 100 100 99 6 353 74 6 268 5 224 93 7 85 8 97 9 97 8 95 3 99 2 925 982 7 2 20 0 3 2 880 90996 70 98 100 29 2 100 100 60 0 TOUS 1065 260 20 774 11 254 95 9 92 9 98 0 97 5 96 1 98 5 92 9 98 6 Homme 1 158 35 6 115 1 229 97 2 85 5 99 9 95 096 89 5 98 2 854 99 1 2 96 22 1 73 0O 229 10096 846 100 98 6 92 7 100 95 7 100 3 29 78 2 169 0 313 10096 954 100 100 95 8 99 9 97 5 100 Urine 4 5 12 0 39 Oo 235 10095 735 100 988 5 910 100 100 100 5 162 31 2 129 0 194 10096 88 100 98 5 94 6 99 8 93 9 100 6 353 74 1 273 5 224 93 7 85 8 97 9 99 696 98 0 100 987 982 7 27 24 0 3 0 889 100 85 8 100 10096 29 2 100 100 100 TOUS 1095 276 12 801 6 258 97 9 95 4 99 2 98 5 97 4 99 2 958 993 1 150 34 4 M0 2 240 94 4 81 3 99 3 96 590 91 3 99 0 89 5 982 2 81 1 1 68 1 148 91 7 61 5 99 8 98 69 92 2 100 91 7 98 6 3 184 51 13 114 6 310 805 78 5 06 0 89 8 83 1 94 4 79 7 950 Ecou 4 196 27 2 167 0 138 10096 87 2 100 98 896 95 8 99 9 93 1 100 vilon 5 370 27 1 34 1 7 6 96496 817 99 9 99 796 98 4 100 96 4 99 7 6 274 35 7 230 2 13 5 94 6 81 8 99 3 97 0 94 0 98 8 83 3 99 1 7 134 10 0 124 0 75 10096 69 2 100 10096 97 1 100 100 100 TOUS 1389 195 28 1154 12 149 94 2 90 1 97 0 97 6 96 6 98 4 874 99 0 Femme 1 150 34 4 M0 2 240 94 4 81 3 99 3 96 5 91 3 99
53. 0 et 96 7 58 60 La sp cificit pour les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt tait de 99 2 1545 1557 sur l ensemble Chez les sujets symptomatiques et asymptomatiques les sp cificit s taient respectivement de 98 5 324 329 et 99 4 1221 1228 Le tableau 6c donne les valeurs de sp cificit et de sensibilit du test APTIMA COMBO 2 pour CT dans les chantillons de frottis en milieu liquide PreservOyt par site clinique et de mani re globale Concernant CT la sensibilit s chelonnait de 92 9 100 96 La sp cificit s chelonnait de 97 7 100 96 Test APTIMA COMBO 2 50 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems La sensibilit et la sp cificit de d tection de GC obtenues pour les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt test s avec le test APTIMA COMBO 2 sont pr sent es par tat des sympt mes et de mani re globale dans le tableau 9c Pour GC la sensibilit globale tait de 92 3 12 13 Chez les sujets symptomatiques et asymptomatiques la sensibilit tait respectivement de 100 7 7 et 83 3 5 6 La sp cificit globale des chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt tait de 99 8 1630 1634 Chez les sujets symptomatiques et asymptomatiques la sp cificit tait respectivement de 100 352 352 et 99 7 1278 1282 Le tableau 10c donne les valeurs de sp cificit et de sensibilit du test APTIMA COMBO 2 pour GC d
54. 0 39 58 3 1 84 3 6 6 0 12 5 96 1081 100 18 44 1 7 2859 2 6 0 0 26 68 2 5 43 2 4 STM 0 125 96 1266 100 29 81 2 4 0 0 8 86 0 7 27 58 22 416 3 3 0 1250 96 1309 100 29 41 2 2 0 0 9 83 08 31 83 24 444 3 4 2 5 125 96 2456 100 86 58 3 5 0 0 0 0 52 99 2 2 101 5 4 1 2 5 2500 96 2509 100 73 13 2 9 0 0 19 8 0 8 46 77 1 9 89 3 5 1000 2500 96 2496 100 31 72 1 3 6 14 0 2 0 0 193 66 7 8 1963 7 9 1000 125 96 2471 100 83 63 3 4 9 36 0 4 0 0 52 35 2 1 99 1 4 0 0 94 6 100 0 2 3 2 0 66 108 0 36 5 9 1 163 1 3 21 2 0 25 0 95 863 100 70 73 8 2 165 65 19 2 47 97 5 6 132 27 15 3 228 6 26 5 2 5 0 95 1129 100 56 02 5 89 56 7 9 8 56 08 74 19 66 129 4 11 5 Urine 25 0 96 1246 100 60 45 4 9 13 97 1 1 13 36 1 1 43 03 3 5 76 7 6 2 0 12 5 96 1016 100 18 83 1 9 31 81 3 1 7 88 08 49 53 49 62 3 6 1 0 125 96 1209 100 49 32 4 1 23 5 19 1 68 0 1 4028 3 3 67 9 56 0 1250 96 1252 100 53 01 4 2 4034 32 7 72 06 4023 32 782 6 2 2 5 125 95 2290 100 73 92 3 2 40 88 1 8 1043 0 56 12 2 5 101 9 4 4 0 0 96 7 100 0 0 0 8 11 7 0 0 1 54 224 1 7 24 7 0 25 0 96 1113 100 92 29 83 30 08 2 7 0 0 63 57 5 7 116 10 4 2 5 0 96 1194 100 62 54 5 2 24 83 2 1 0 0 47 01 39 821 6 9 PreservCyt 25 0 95 1222 100 65 14 53 2636 2 2 14 67 1 2 3497 29 798 6 5 0 12 5 93 994 100 33 28 3 3 3692 3 7 15 97 1 6 2615 2 6 584 5 9 0 125 95 1189 100 40 1 3 4 4 45 0 4 10 87 0 9 2144 1 8 47 4 0 1250 95 1239 100 37 69 3 7 47 0 6 13 61 1 1 18 04 1 5 446 3 6 2 5 125 95 2333 100 99 68 4 3 35 27 1 5 12 61 0 5 48 86 2 1 117 2 5 Remarque
55. 0 49 0 20 100 2 5 100 100 92 7 100 100 100 TOUS 1444 72 11 1358 3 5 2 96 0 88 8 99 2 99 2 98 6 99 6 86 7 99 8 TP Vrai positif FP Faux positif TN Vrai n gatif FN Faux n gatif Test APTIMA COMBO 2 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Tableau 10c Comparaison des chantillons PreservCyt du test APTIMA COMBO 2 l tat d infection des patients Site R sultats AC2 GC Pr v Sensibilit Sp cificit PPV NPV PreservCyt 4 0 de l s IC 95 96 IC 95 96 96 Positif 5 0 0 0 1 N gatif 0 0 0 95 5 0 310096 47 8 100 100 96 2 100 100 100 Total 5 0 0 95 Positif 1 0 0 0 2 N gatif 0 0 O 123 0 8 100 2 5 100 100 97 0 100 100 100 Total 1 0 0 123 Positif 4 0 0 0 3 N gatif 1 0 O 470 1 1 80 0 28 4 99 5 10096 99 2 100 100 99 8 Total 5 0 0 470 Positif 1 0 0 0 4 N gatif 0 0 3 283 0 3 100 2 5 100 100 98 7 100 100 100 Total 1 0 3 283 Positif 0 0 0 3 5 N gatif 0 0 0 294 00 S O 99 0 97 1 99 8 0 0 100 Total 0 0 0 297 Positif 1 0 T 0 6 N gatif 0 0 2 360 0 3 10096 2 100 99 7 98 5 100 50 0 100 Total 1 0 3 360 Positif 12 0 1 3 Tous N gatif 1 0 5 1625 0 8 92 3 64 0 99 8 99 8 96 99 4 99 9 750 99 9 Total 13 0 6 1628 e O LBSSSLL LLEAL L OEELLUVUX GQQGGGGA re GIGGGGL fBZDOBZOCOQ GBGGOZO QCI BGD HQGQGZL OLLULULLLLCIHAAR EGZR ZIQOADADEDEDADEDUEDIUDEUDEDUOOD
56. 0 5 a 0 7 0 07 M 0 1 M ou si vous le pr f rez dos e de 2 5 3 5 0 35 M 0 5 M dans la cuve d amorgage Aspirez la totalit de la solution au moyen de la rampe d aspiration c Versez au moins 100 mL d eau d sionis e dans la cuve d amorgage Aspirez la totalit de l eau au moyen de la rampe d aspiration d Ejectez les embouts dans leur TTC d origine e Laissez fonctionner la pompe d aspiration jusqu ce que la tubulure de la rampe soit s che pour viter tout refoulement Test APTIMA COMBO 2 21 502183FR R v C DTS Systems f D contaminez les surfaces de la rampe d aspiration comme expliqu sous Unit TCS 3 R cipient d chets TCS Retirez le flacon d chets du syst me de capture de cible Target Capture System une fois par semaine ou lorsqu il est rempli 25 96 a teignez la pompe vide et laissez sa pression s quilibrer b D branchez les raccords d connexion rapide entre le flacon d chets et le flacon de trop plein ainsi que le flacon d chets et la rampe d aspiration Retirez le flacon d chets du boitier de pi ge vide Retirez le bouchon et ajoutez avec pr caution 400 mL de solution d hypochlorite de sodium dos e de 5 7 0 7 M 1 0 M dans le flacon ou 1 L si vous utilisez un flacon d chets de 10 L Remarque Cette manipulation peut tre effectu e sous une hotte pour viter de lib rer des manations dans le laboratoire e
57. 104772 02 Kit de sacs pour MTU embouts usag s 900907 D flecteurs de d chets pour MTU 900931 Couvre d chets pour MTU 105523 Kit de transfert d chantillons APTIMA 301154C a utiliser avec des chantillons dans la solution PreservCyt Kit de collecte d chantillons couvillon vaginal APTIMA 301162 Kit de collecte d chantillons couvillon unisexe APTIMA pour 301041 chantillons endocervicaux et ur traux m les sur couvillon Kit de collecte d chantillons d urine APTIMA pour chantillons 301040 d urine masculins et f minins Tubes de transport d chantillons d urine APTIMA pour chantillons 105575 d urine masculins et f minins Javel solution d hypochlorite de sodium dos e de 5 7 96 0 7 M 1 0 M Test APTIMA COMBO 2 25 502183FR R v C TIGRIS DTS System R f rence Eau pour le TIGRIS DTS System consultez le Manuel de l op rateur du TIGRIS DTS System TIGRIS DTS System Operator s Manual pour les caract ristiques techniques Gants jetables SysCheck pour talonnage 301078 Bouchons p n trables APTIMA 105668 Bouchons de rechange non p n trables 103036A Bouchons de rechange pour les kits de 250 tests Solutions de reconstitution du r actif sonde et du r actif d amplification CL0041 100 bouchons Solution de reconstitution du r actif enzymatique 501616 100 bouchons R actifs de s lection et TCR CL0040 100 bouchons Mat riel optionnel R f rence Kit de contr les APTIM
58. 1266 100 38 8 3 0 0 0 93 1 7 3 40 8 3 2 40 4 3 1 Elev e Elev e 210 2445 100 54 2 2 2 40 0 1 6 110 3 4 5 28 4 1 1 52 3 2 1 N g Faible 217 1132 100 30 3 2 6 61 0 5 3 0 0 0 20 7 1 8 18 5 1 6 Faible N g 214 1053 100 72 8 6 9 1 5 0 1 73 8 7 0 28 5 2 7 26 9 2 5 Moy Moy 214 2429 100 48 8 2 0 40 0 1 6 101 1 4 1 0 0 52 9 2 1 Faible Faible 216 2112 99 5 112 3 5 3 84 1 3 9 33 2 1 5 34 2 1 6 52 9 2 5 Faible Elev e 216 2282 100 77 3 3 3 97 8 4 2 59 3 2 6 0 0 41 7 1 8 Elev e Faible 215 2318 100 61 1 2 6 50 7 2 1 86 2 3 7 4 6 0 2 42 4 1 8 TU ua SD cart type CV pourcentage du coefficient de variation Concord pourcentage de concordance Conc concentration Remarque la variabilit de certains facteurs peut tre num riquement n gative ph nom ne pouvant survenir si la variabilit due ces facteurs est tr s minime Si tel est le cas la variabilit telle que mesur e avec l cart type et le CV est tabli z ro Consultez les directives NCCLS approuv es EP5 A 22 Des chantillons de panel faible concentration ont t ensemenc s aux seuils de sensibilit analytique revendiqu s pour le test 5 fg CT rRNA test 250 fg GC rRNA test ou les deux pour l chantillon doublement positif Pour CT le niveau cible test quivaut approximativement 36 fg couvillon et 25 fg mL d urine Pour GC le niveau cible test quivaut approximativement 1800 fg couvillon et 1250 fg mL d urine En se basant sur la
59. 16 96 5 94 4 98 0 99 4 96 99 0 99 7 EE A TP Vrai positif FP Faux positif TN Vrai n gatif FN Faux n gatif Comprend 1 sujet masculin chez qui aucun sympt me n a t signal 2 Comprend 1 sujet f minin chez qui aucun sympt me n a t signal Comprend 1 sujet masculin et 1 sujet f minin chez qui aucun sympt me n a t signal Les r sultats du test TMA alternatif pour GC repr sentent le nbre de r sultats positifs le nbre d chantillons test s a 5 5 b 12 12 c 17 17 d 0 1 e 2 2 f 2 8 g 13 15 h 2 2 i 15 17 j 4 7 k 0 2 4 9 m 18 20 n 14 14 0 32 34 p 4 8 q 2 4 et r 6 12 Tableau 9b chantillons vaginaux sur couvillon du test APTIMA COMBO 2 compar s l tat d infection des patients chantillon tat des Sensibilit Sp cificit sympt mes N TP FP TN FN IC 95 IC 95 96 Collbere per Eeouvillon Asympt 629 21 3 605 0 100 83 9 100 99 5 98 6 99 9 la patiente vaginal Sympt 807 51 7 747 2 96 2 87 0 99 5 99 1 98 1 99 6 Collecte per Eeouvillon Asympt 637 21 4 611 1 95 5 77 2 99 9 99 3 98 3 99 8 un clinicien vaginal Tous 1444 72 11 1358 3 96 0 88 8 99 2 99 2 98 6 99 6 LEE SU TP Vrai positif FP Faux positif TN Vrai n gatif FN Faux n gatif Les r sultats du test TMA d amplification alternatif pour GC repr sentent le nbre de r sultats positifs le nbre d chantillons test
60. 160 3 bain maries circulateurs 104586 62 T 1TC 42TC 1TC 62TC 1T 3 s parateurs pour bain marie 104627 OU 2 bains a chaleur s che vortexeurs SB100 SB100 Dry Heat Bath Vortexer 105524 Des bains SB100 suppl mentaires peuvent tre n cessaires si le volume de tests augmente APTIMA Auto Detect Kit 2 pipeteurs eppendorf Repeater Plus 2 pipeteurs 1000 uL RAININ PR1000 Pipeteur eppendorf 20 uL 200 uL Embouts pour pipeteur r p tition 2 5 mL Embouts pour pipeteur r p tition 5 0 mL Embouts pour pipeteur r p tition 25 0 mL Embouts style P1000 embout de diam tre sp cial disponible uniquement chez Gen Probe Embouts de pipette de 20 uL 200 uL Unit s de dix tubes Ten Tube Units TTU Cassettes de dix embouts Ten Tip Cassettes TTC Kit de collecte d chantillons couvillon unisexe APTIMA pour chantillons endocervicaux et ur traux m les sur couvillon Kit de collecte d chantillons d urine APTIMA pour chantillons d urine masculins et f minins Tubes de transport d chantillons d urine APTIMA pour chantillons d urine masculins et f minins Kit de collecte d chantillons couvillon vaginal APTIMA Kit de transfert d chantillons APTIMA Solution talon SysCheck Javel solution d hypochlorite de sodium dos e de 5 7 96 0 7 M 1 0 M R cipients standard pour la collecte d urine sans conservateurs R f rence 104747 01 104555 301048 105725 901715 105726 21 381 329
61. 3 1 Infect S O 0 1 Infect 11 2 Infect E 2 1 Infect 62 21 Non infect z S O 2 3 Non infect 768 559 Non infect 12 2 Non infect 7 E 4 3 Non infect 3 0 Total 883 599 FU Urine f minine FS couvillon endocervical f minin S O repr sente un chantillon non obtenu ou non disponible pour un test Test APTIMA COMBO 2 66 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Tableau 11b Analyse des chantillons vaginaux collect s par la patiente et par un clinicien l aide d un couvillon L tat NAAT 1 NAAT 2 Test APTIMA tat des d infection COMBO 2 symptomes Total du patient FS FU FS FU PVS cvs Sympt Asympt Infect 44 15 59 Infect 1 0 1 Infect S O 0 1 1 Infect 2 2 4 Infect S O 1 0 1 Infect 1 1 2 Infect 1 1 2 Infect 1 0 1 Infect 1 1 2 Infect 1 0 1 Infect 1 0 1 Infect 0 1 1 Infect 0 1 1 Infect 1 0 1 Non infect 5 1 6 Non infect 1 0 1 Non infect 1 0 1 Non infect 5 2 7 Non infect 0 1 1 Non infect 2 1 3 Non
62. 4 0 146 0 8 8 100 76 8 100 100 97 5 100 100 100 6 335 89 1 24 4 27 8 95 7 89 4 98 8 99 6 97 7 100 98 9 984 7 56 54 0 2 0 964 100 93 4 100 100 15 8 100 100 100 TOUS 1134 324 3 80 5 29 0 98 5 96 5 99 5 99 6 98 9 99 9 99 1 994 1 196 30 2 14 15 3 100 88 4 100 98 8 95 7 99 9 93 8 100 2 83 9 1 72 1 12 0 90 0 55 5 99 7 98 6 92 6 100 90 0 986 3 191 31 2 158 0 16 2 100 88 8 100 98 8 95 6 99 8 93 9 100 a 25 7 0 208 0 3 3 100 59 0 100 100 98 2 100 100 100 villon 5 382 8 1 33 0 21 10096 63 1 100 99 7 98 5 100 88 9 100 6 278 36 8 23 0 12 9 100 90 3 100 96 7 93 6 98 6 81 8 100 7 14 5 3 16 0 3 7 100 47 8 100 97 7 93 4 99 5 62 5 100 TOUS 1479 126 17 1335 1 8 6 99 2296 95 7 100 98 7 98 0 99 3 88 1 99 9 Femme 1 196 24 2 104 6 15 3 80 0 61 4 92 3 98 8 95 7 99 9 92 3 96 5 2 83 9 1 72 1 12 0 90 0 55 5 99 7 98 6 92 6 100 90 0 98 6 3 191 30 2 158 1 16 2 96 8 83 3 99 9 98 8 95 6 99 8 93 8 994 UN EE 2 206 2 33 71 4 29 0 96 3 99 0 96 6 99 9 71 4 99 0 5 383 8 0 375 0 2 1 10096 63 1 100 100 99 0 100 100 100 6 282 35 2 244 1 12 8 97 2 85 5 99 9 99 2 97 1 99 9 94 6 99 6 7 134 5 1 128 0 3 7 100 47 8 100 99 2 95 8 100 83 3 100 TOUS 1484 116 10 1347 1 8 6 91 3 85 0 95 6 99 3 98 6 99 6 92 1 99 2 TP Vrai positif FP Faux positif TN Vrai n gatif FN Faux n gatif Pr valence surestim e due au fait que la
63. 4 100 100 92 9 100 Urine 130 80 0 0 50 100 95 5 100 100 92 9 100 d note un r sultat positif d note un r sultat n gatif IC intervalle de confiance TIGRIS TIGRIS DTS System Etude de pr cision La pr cision du TIGRIS DTS System c a d la reproductibilit a t valu e chez Gen Probe et sur un site clinique externe La pr cision du test APTIMA COMBO 2 a t valu e pour trois TIGRIS DTS Systems sur deux sites d tude et avec deux lots de kits APTIMA COMBO 2 et quatre op rateurs Le tableau 23 pr sente les donn es de pr cision concernant des mesures RLU pour ce qui est des valeurs moyennes de l cart type SD du coefficient de variation CV et du pourcentage de concordance avec les r sultats attendus calcul s pour les variabilit s entre sites entre lots entre op rateurs entre s ries et au sein d une m me s rie Sur le site externe deux op rateurs ont r alis trois listes de travail autrement dit des s ries par lot de kit du test APTIMA COMBO 2 sur un TIGRIS DTS System effectuant un total de 6 listes de travail chacun Chez Gen Probe deux op rateurs ont r alis trois listes de travail par lot de kit APTIMA COMBO 2 sur chacun des deux TIGRIS DTS Systems effectuant ainsi un total de 12 listes de travail chacun Il y a donc eu au total 36 listes de travail effectu es Chaque liste de travail se composait de six panels de pr cision identiques de 12 membres contenant de 0 2000 fg
64. 4 5 0 88 9 3 9 153 6 7 0 0 0 0 100 250 54 98 1 1911 139 7 3 130 6 8 348 18 2 39 7 2 1 5 5000 54 100 2136 113 5 3 130 6 1 98 8 4 6 166 7 8 2000 250 54 96 3 2044 138 6 7 169 8 3 360 17 6 26 9 1 3 RLU Unit relative de lumi re SD cart type CV Coefficient de variation S O repr sente un chantillon non obtenu ou non disponible pour les membres de panel n gatifs Les chantillons offrant des r sultats discordants ou quivoques ont t inclus dans l analyse de variabilit du signal Pour les valeurs CV et SD quivalent 0 0 la variabilit due cette source est tr s faible compar e aux autres sources de variation Test APTIMA COMBO 2 70 502183FR R v C Performance analytique des DTS Systems Performance analytique des DTS Systems Consultez la section Performance analytique du TIGRIS DTS System apr s le chapitre Concordance des chantillons cliniques pour le TIGRIS DTS System pour les caract ristiques de performance analytique sp cifiques au TIGRIS DTS System Consultez la section Performance analytique du PANTHER System pour les caract ristiques de performance analytique sp cifiques au PANTHER System Sensibilit analytique La sensibilit analytique limites de d tection a Chlamydia trachomatis a t d termin e en comparant directement les dilutions des organismes CT dans la culture cellulaire et dans le test La sensibilit analytique revendiqu e pour le test est d une unit de formati
65. 400 77 4 316 3 96 3 89 4 99 2 98 8 96 8 99 7 Tous 1095 276 12 801 6 97 9 95 4 99 2 98 5 97 4 99 2 Sympt 819 133 229 653 11 92 4 86 7 96 1 96 7 95 1 97 9 couvillon Asympt 569 61 6 501 1 98 496 91 3 100 98 8 96 97 4 99 6 Tous 1389 195 28 1154 12 94 296 90 1 97 0 97 6 96 96 6 98 4 Femme Sympt 821 136 8 668 9 93 8 88 5 97 1 98 8 96 97 7 99 5 Urine Asympt 569 60 5 502 2 96 8 88 8 99 6 99 0 97 7 99 7 Tous 1391 197 13 1170 11 94 796 90 7 97 3 98 9 96 98 1 99 4 Sympt 1495 323 37 1117 18 94 796 91 8 96 8 96 8 96 95 6 97 7 couvillon Asympt 957 131 11 810 5 96 396 91 6 98 8 98 7 96 97 6 99 3 Tous 2454 455 48 1928 23 95 2 92 9 96 9 97 6 96 96 8 98 2 Total Sympt 1515 335 16 1152 12 96 596 94 0 98 2 98 6 96 97 8 99 2 Urine Asympt 969 137 9i 818 5 96 5 92 0 98 8 98 9 96 97 9 99 5 Tous 2486 473 25 1971 17 96 5 94 5 98 0 98 7 96 98 2 99 2 D RE SEES eee TP Vrai positif FP Faux positif TN Vrai n gatif FN Faux n gatif Comprend 1 sujet masculin chez qui aucun sympt me n a t signal Comprend 1 sujet f minin chez qui aucun sympt me n a t signal Comprend 1 sujet masculin et 1 sujet f minin chez qui aucun sympt me n a t signal Les r sultats du test TMA alternatif pour CT repr sentent le nbre de r sultats positifs le nbre d chantillons test s a 11 14 b 3 5 c 14 19 d 4 8 e
66. 6 10 1647 Les pr valences de CT et de GC ont t calcul es en utilisant les r sultats du test APTIMA COMBO 2 de l chantillon de frottis en milieu liquide PreservCyt Valeurs pr dictives positives et n gatives des taux de pr valence hypoth tiques en Am rique du Nord Les valeurs pr dictives positives et n gatives PPV et NPV estim es pour diff rents taux de pr valence en utilisant le test APTIMA COMBO 2 sont pr sent es dans les tableaux 2 et 3 pour CT et GC respectivement Ces calculs sont bas s sur la pr valence hypoth tique d une sensibilit et d une sp cificit g n rales calcul es d apr s l tat d infection des patients dans deux tudes cliniques multicentriques La sensibilit et sp cificit globales pour CT taient respectivement de 96 1 et 98 0 tableau 2 La sensibilit et sp cificit globales pour GC taient respectivement de 97 8 et 99 2 96 tableau 3 Les PPV et NPV r elles calcul es en utilisant les donn es des tudes cliniques sont pr sent es dans les tableaux 6a et 10a chantillons sur couvillon et d urine les tableaux 6b et 10b chantillons vaginaux sur couvillon et les tableaux 6c et 10c chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt Tableau 2 PPV et NPV hypoth tiques pour CT Tableau 3 PPV et NPV hypoth tiques pour GC aR a eS DS RS a a SEE EES EE Taux de Valeur Valeur Taux d Valeur Valeur Sensibilit Sp cificit pr di
67. A Tampon APTIMA pour solution de d sactivation R actif huileux APTIMA D La pr paration de r actif de capture de cible working Target Capture Reagent wTCR est stable pendant 30 jours lorsqu elle est conserv e entre 15 C et 30 C Ne pas r frig rer E Une fois reconstitu s le r actif enzymatique le r actif d amplification et le r actif sonde restent stables pendant 30 jours s ils sont conserv s entre 2 C et 8 C F Jetez tout r actif reconstitu et wTCR non utilis au bout de 30 jours ou apr s la date de p remption du lot de r f rence si celle ci survient avant G Les contr les restent stables jusqu la date indiqu e sur les flacons H Si des r actifs sont conserv s en restant int gr s dans le TIGRIS DTS System leur stabilit int gr e ne d passera pas 48 heures l Si des r actifs sont conserv s en restant int gr s dans le PANTHER System leur stabilit int gr e ne d passera pas 72 heures J Le r actif sonde et le r actif sonde reconstitu sont photosensibles Conservez les r actifs l abri de la lumi re La stabilit reconstitu e indiqu e est bas e sur une exposition de 12 heures du r actif sonde reconstitu deux ampoules fluorescentes de 60 W situ es 43 cm de distance et une temp rature inf rieure 30 C L exposition la lumi re du r actif sonde reconstitu doit tre limit e en cons quence K Lorsqu ils parviennent temp rature ambiante certain
68. A 301110 Activateur de javel GEN PROBE 302101 pour le nettoyage courant des surfaces et des appareils Proc dure de test pour le TIGRIS DTS System Remarque Consultez le Manuel de l op rateur du TIGRIS DTS System TIGRIS DTS System Operator s Manual pour de plus amples informations sur la proc dure avec ce syst me A Pr paration de la zone de travail 1 Nettoyez les surfaces de travail o les r actifs et les chantillons doivent tre pr par s Nettoyez les surfaces de travail avec une solution d hypochlorite de sodium dos e de 2 5 96 3 5 0 35 M 0 5 M Laissez la solution d hypochlorite de sodium au contact des surfaces pendant au moins 1 minute puis rincez l eau Ne pas laisser s cher la solution d hypochlorite de sodium Couvrez la surface de la paillasse sur laquelle les r actifs et les chantillons seront pr par s avec des protections de paillasse de laboratoire absorbantes propres avec envers plastifi B Reconstitution des r actifs Pr paration d un nouveau kit Remarque La reconstitution des r actifs doit tre effectu e avant d entreprendre toute t che sur le TIGRIS DTS System 1 Afin de reconstituer les r actifs d amplification enzymatiques et de sonde combinez les bouteilles de r actif lyophilis la solution de reconstitution Si elles ont t r frig r es laissez les solutions de reconstitution parvenir temp rature ambiante avant l emploi a Faites correspondre chaq
69. A COMBO 2 est pr sent dans les tableaux 1a 1b et 1c pour trois tudes cliniques multicentriques Les r sultats sont pr sent s par site clinique et de mani re globale Pr valence des infections a C trachomatis et ou N gonorrhoeae telle que d termin e par les r sultats du test APTIMA COMBO 2 par site clinique Tableau 1a Echantillons endocervicaux et ur traux m les et chantillons d urine Ecouvillons endocervicaux et ur traux males sur A a Urine Site pr valence ee ibre test s pr valence nbre positifs nbre test s CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 1 10 0 39 392 12 8 50 392 14 5 57 392 84 33 395 12 9 51 395 13 9 55 395 2 7 0 13 186 12 9 24 186 6 5 12 186 5 3 13 245 13 9 34 245 86 21 245 3 104 48 462 22 9 106 462 14 3 66 462 10 3 48 465 20 9 97 465 12 7 59 465 4 33 9 270 12 2 33 270 7 0 19 270 3 3 9 270 11 5 31 270 6 7 18 270 5 1 9 10 533 84 45 533 2 3 12 533 2 1 12 567 9 4 53 567 1 8 10 567 6 6 3 43 678 12 8 87 678 16 2 110 678 5 9 40 681 10 9 74 681 13 5 92 681 7 44 11 252 87 22 252 21 8 55 252 4 1 12 295 9 2 27 295 18 0 53 295 Tous 6 2 173 2773 13 2 367 2773 11 9 331 2773 5 7 167 2918 12 6 367 2918 10 6 308 2918 Tableau 1b chantillons vaginaux collect s par la patiente l aide d un couvillon et chantillons vaginaux collect s par un clinicien l aide d un couvillon
70. A pour chantillons d urine masculins et f minins Tubes de transport d chantillons d urine APTIMA pour chantillons d urine masculins et f minins Javel solution d hypochlorite de sodium dos e de 5 7 96 0 7 M 1 0 M Gants jetables Solution talon SysCheck Bouchons p n trables APTIMA Bouchons de rechange non p n trables Bouchons de rechange pour les kits de 250 tests Solutions de reconstitution du r actif sonde et du r actif d amplification Solution de reconstitution du r actif enzymatique TCR et r actif de s lection Bouchons de rechange pour les kits de 100 tests Solutions de reconstitution des r actifs d amplification enzymatiques et de sonde TCR et r actif de s lection 501604 100 bouchons CL0041 100 bouchons 501616 100 bouchons CL0040 100 bouchons CL0041 100 bouchons R f rence 303095 303014 1000 tests 303013 1000 tests 104772 02 902731 902714 303096 5000 tests 10612513 Tecan 301154C 301162 301041 301040 105575 301078 105668 103036A Test APTIMA COMBO 2 33 502183FR R v C PANTHER System Materiel optionnel R f rence Kit de contr les APTIMA 301110 Activateur de javel GEN PROBE 302101 pour le nettoyage courant des surfaces et des appareils Proc dure de test pour le PANTHER System Remarque Consultez le Manuel de l op rateur du syst me PANTHER PANTHER System Operator s Manual pour de plus amples informations sur la pr
71. CT et 50 CFU test pour GC Le tableau 20 pr sente galement le pourcentage de concordance globale 99 3 96 entre les r sultats du panel CT GC avec le TIGRIS DTS System et les DTS Systems Les concordances positives et n gatives sont pr sent es dans les tableaux 21 et 22 pour les r sultats des panels CT et GC respectivement Pour les panels d couvillons et d urine les concordances positives taient respectivement de 100 et de 96 2 pour CT et tous deux de 100 96 pour GC Les concordances n gatives pour les couvillons et l urine taient respectivement de 100 et de 98 0 pour CT et tous deux de 100 pour GC Trois des 5 r plicats des panels d urine f minins dont la concentration tait inf rieure par un log au seuil de sensibilit analytique revendiqu pour le test APTIMA COMBO 2 de 1 IFU test pour CT ont donn des r sultats CT sur le TIGRIS DTS System Un des 5 r plicats du panel d urine f minin provenant d un panel distinct tait CT sur les DTS Systems Tableau 16 tude de concordance des chantillons cliniques r sultats pour les chantillons endocervicaux et ur thraux masculins sur couvillon DTS Systems TIGRIS DTS System Total CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 30 0 0 0 30 CT GC 0 108 0 2 110 CT GC 12 0 67 0 68 CT GC 0 125 2 796 810 Total 31 120 69 798 1018 Pourcentage de concordance 96 8 83 3 99 9 90 0 83 2 94 7 97 1 89 9 99 6 99 7 99 1 100
72. EE 9 GEN PROBE APT MA Test APTIMA COMBO 2 Pour diagnostic in vitro R serv l exportation am ricaine uniquement Informations g n rales 2 Usage pr vu secs dcp eee ERR hha deans ba bare wae 2 R sum et explication du test 2 Principes de la proc dure 3 Avertissements et pr cautions 4 Conditions de conservation et de manipulation des r actifs 8 Collecte et conservation des chantillons 9 Interpr tation du test QC R sultats patients 39 Limites ocio beum ner xal b E ea A TIVE 42 Valeurs attendues pour les DTS Systems 45 Performance clinique du test avec les DTS Systems 47 Performance analytique des DTS Systems 71 Concordance des chantillons cliniques pour le TIGRIS DTS System 75 Performance analytique du TIGRIS DTS System 82 Performance analytique du PANTHER System 86 Bibliographie 89 DTS xx TIGRIS li DTS DTS Systems eese tnnnnas 11 TIGRIS DTS System eet tns 24 R actifs et mat riels fournis sss 11 R actifs et mat riels fournis ssssssse 24 Mat riel requis mais disponible s par ment 13 Mat riel r
73. L introduction de substances contaminantes peut survenir si le protocole de test n est pas rigoureusement respect 2 Les TTU doivent tre d contamin es dans une solution de d sactivation comme indiqu dans le paragraphe D tection Ne pas r utiliser les unit s TTU 3 Effectuez une d contamination r guli re du mat riel et des surfaces de travail comme expliqu ci dessus dans le paragraphe D contamination sous Remarques concernant la proc dure 4 Comme avec tout syst me de r actif l exc s de poudre sur certains gants peut entra ner la contamination des tubes ouverts Il est recommand d utiliser des gants sans poudre Test APTIMA COMBO 2 22 502183FR R v C DTS Systems J Protocole de contr le de la contamination en laboratoire pour les DTS Systems Il existe plusieurs facteurs pr cis pouvant contribuer la contamination notamment le volume de tests la direction du sens du travail la pr valence de maladies et diverses activit s de laboratoire Ces facteurs doivent tre pris en compte lors de l tablissement de la fr quence du contr le des contaminations Les intervalles de contr le de la contamination doivent tre d finis en fonction des pratiques et proc dures propres chaque laboratoire Pour surveiller la contamination du laboratoire il est possible d effectuer la proc dure suivante au moyen du kit de collecte d chantillons couvillon unisexe APTIMA pour chantillons endocervicaux et ur
74. La variabilit de certains facteurs peut tre num riquement n gative ph nom ne pouvant survenir si la variabilit due ces facteurs est tr s minime Dans ces cas SD 0 et CV 0 Nombre total de r plicats pour chaque panel 96 Dans certaines s ries sp cifiques les r plicats individuels invalides n ont pas t r analys s Sp cificit analytique La sp cificit analytique n a pas t valu e pour le PANTHER System Se r f rer au chapitre Performance analytique du TIGRIS DTS System pour l Etude de l quivalence de la sp cificit analytique tude de l quivalence des substances interf rentes Le sang une substance que l on trouve couramment dans les chantillons urog nitaux peut interf rer avec certains tests d amplification Le degr d interf rence ventuel produit par la pr sence de sang a t d termin en utilisant du sang entier Cette interf rence potentielle au niveau de la d tection de la pr sence ou de l absence de CT et de GT a t valu e en rajoutant du sang frais aux pools cliniques d chantillons vaginaux sur couvillon de frottis en milieu liquide PreservCyt trait s et d urine Des concentrations quivalentes estim es de Test APTIMA COMBO 2 88 502183FR R v C Bibliographie rRNA de 1 IFU test 5 fg test de CT et de 50 cellules de GC test 250 fg test ont t utilis es car elles correspondent a la sensibilit analytique du test Les chantillons ont t
75. Le TIGRIS DTS System value automatiquement chacun des contr les de la liste de travail en fonction des crit res ci dessus et invalide tous les chantillons dans la ou les s ries encadr es de contr les affect s si les crit res de contr le ne sont pas r unis Consultez le Manuel de l op rateur du syst me TIGRIS DTS TIGRIS DTS System Operator s Manual pour de plus amples d tails 5 Les contr les n gatifs peuvent se r v ler inefficaces pour surveiller la contamination al atoire de transfert Voir Performance analytique du TIGRIS DTS System pour consulter les r sultats d une tude analytique sur la contamination de transfert avec une valeur cible lev e qui a t effectu e pour d montrer le contr le de la contamination de transfert sur le TIGRIS DTS System Voir Performance analytique du PANTHER System pour consulter les r sultats d une tude analytique sur la contamination de transfert avec une valeur cible lev e qui a t effectu e pour d montrer le contr le de la contamination de transfert sur le PANTHER System C Contr le de la pr paration des chantillons facultative Le contr le positif CT contr le n gatif GC et le contr le positif GC contr le n gatif CT fournis dans le kit servent de contr les aux tapes de capture de cible d amplification et dtection du test et doivent tre inclus dans chaque s rie de test Si on le souhaite des contr les de la lyse cellulaire et de la stabilisation
76. O 2 1x9 3mL Solution aqueuse contenant des conservateurs ER Solution de reconstitution enzymatique APTIMA COMBO 2 1x3 3mL Solution tamponn e HEPES contenant un surfactant et du glyc rol PR Solution de reconstitution de sonde APTIMA COMBO 2 1x 124 mL Solution tamponn e de succinate contenant 5 de d tergent S R actif de s lection APTIMA COMBO 2 1x31mL 600 mM de solution tamponn e de borate contenant un surfactant Collets de reconstitution 3 Cartes de protection 1 paquet Boite non r frig r e APTIMA COMBO 2 Boite 2 sur 2 conserver entre 15 C et 30 C d s r ception Symbole Composant Quantit TCR R actif de capture de cible APTIMA COMBO 2 1x22mL Solution saline tamponn e contenant une phase solide et des oligom res de capture W Solution de lavage APTIMA 1x402 mL 10 mM de solution tamponn e HEPES contenant 2 de d tergent DF Tampon APTIMA pour solution de d sactivation 1x402 mL 800 mM de solution tamponn e de bicarbonate 0 R actif huileux APTIMA 1 x 24 6 mL Huile de silicone Test APTIMA COMBO 2 12 502183FR R v C DTS Systems Mat riel requis mais disponible s par ment Remarque Le mat riel disponible aupr s de Gen Probe est indiqu par des r f rences catalogue sauf indication contraire LEADER HC luminom tre Syst me de capture de cible GEN PROBE Target Capture System TCS Incubateurs et vortexeurs 2 vortexeurs multi tubes 102
77. S DTS System Kit de contr les APTIMA conserver entre 2 et 8 C d s r ception Symbole Composant Quantit PCT NGC Contr le positif CT contr le n gatif GC APTIMA 5x1 7 mL Acide nucl ique CT non infectieux dans une solution tamponn e contenant 5 de d tergent Chaque chantillon de 400 uL contient le rRNA estim quivalent a 1 IFU unit de formation des inclusions de CT 5 fg test PGC NCT Contr le positif GC contr le n gatif CT APTIMA 5x1 7 mL Acide nucl ique GC non infectieux dans une solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent Chaque chantillon de 400 uL contient le rRNA estim quivalent 50 cellules de GC 250 fg test Les quivalents rRNA ont t calcul s d apr s la taille du g nome et le ratio estim DNA RNA cellule de chaque organisme Mat riel requis mais disponible s par ment Remarque Le mat riel disponible aupr s de Gen Probe est indiqu par des r f rences catalogue sauf indication contraire R f rence TIGRIS DTS System 105118 Kit de solutions pour test APTIMA APTIMA Assay Fluids Kit 302382 solution de lavage APTIMA tampon APTIMA pour solution de d sactivation et r actif huileux APTIMA APTIMA Auto Detect Kit 301048 Kit de conservateur de liquide systeme APTIMA 302380 Embouts 1000 uL conducteurs d tecteurs de liquide 10612513 Tecan Kit pour s ries TIGRIS DTS System comprenant 301191 Unit s multi tube multi tube unit MTU
78. SOOSDEQUSCULGLESGGIBLSL LLLELLLGGGG GIA 2 Un chantillon a donn un r sultat discordant r sultat quivoque d chantillon endocervical sur couvillon avec le test APTIMA COMBO 2 R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test GC APTIMA R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AGC R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AGC R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AGC R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AGC Test APTIMA COMBO 2 65 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Neisseria gonorrhoeae analyse de l tat d infection des patients de sexe f minin Tableau 11a Ecouvillon endocervical et chantillon d urine L tat d infection NAAT Culture peng a ae du patient FU FS FS FU FS Symp Asymp Infect S O 1 1 Infect 0 1 Infect 4 E 5 2 Infect 9 2 Infect S O 1 0 Infect
79. TIMA COMBO 2 Les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt et les chantillons endocervicaux sur couvillon ont t test s l aide du test APTIMA COMBO 2 La sensibilit et la sp cificit des chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt ont t calcul es en comparant les r sultats un algorithme de l tat d infection des patients Dans l algorithme la d signation d un sujet comme tant infect ou non infect par CT ou GC tait bas e sur les r sultats des chantillons endocervicaux sur couvillon ou d urine de deux NAAT disponibles dans le commerce Tableaux 7c et 11c Concernant CT les NAAT de r f rence comprenaient le test APTIMA COMBO 2 et le test APTIMA CT Concernant GC les NAAT de r f rence comprenaient le test APTIMA COMBO 2 et le test APTIMA GC Les r sultats positifs des deux NAAT de r f rence taient n cessaires pour tablir l infection du patient Le patient tait jug non infect en cas de discordance ou de r sultats n gatifs avec les deux NAAT de r f rence La sensibilit et la sp cificit de d tection de CT obtenues pour les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt test s avec le test APTIMA COMBO 2 sont pr sent es par tat des sympt mes et de mani re globale dans le tableau 5c Concernant CT la sensibilit a t de 96 7 87 90 sur l ensemble Chez les sujets symptomatiques et asymptomatiques la sensibilit tait respectivement de 96 7 29 3
80. a d tecter la pr sence de CT et de GC sont num r s ci dessous pour le PANTHER System Les symboles d identification des r actifs figurent galement a c t du nom du r actif R actifs et mat riels fournis Kit de tests APTIMA COMBO 2 100 tests 2 bo tes et 1 kit de contr les r f rence 302923 250 tests 2 bo tes et 1 kit de contr les r f rence 303094 Bo te r frig r e APTIMA COMBO 2 Bo te 1 sur 2 conserver entre 2 et 8 C d s la r ception Quantit Quantit Symbole Composant Kit de 250 Kit de 100 tests tests A R actif d amplification APTIMA COMBO 2 1 flacon 1 flacon Acides nucl iques d shydrat s non infectieux dans une solution tamponn e contenant 5 de diluant E R actif enzymatique APTIMA COMBO 2 1 flacon 1 flacon Transcriptase inverse et polym rase RNA d shydrat es dans une solution tamponn e HEPES contenant 10 96 de diluant P R actif sonde APTIMA COMBO 2 1 flacon 1 flacon Sondes DNA chimiluminescentes non infectieuses d shydrat es dans une solution tamponn e de succinate contenant lt 5 de d tergent TCR B R actif de capture de cible B APTIMA COMBO 2 1x0 61 mL 1x0 30 mL Acides nucl iques non infectieux dans une solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent Bo te non r frig r e APTIMA COMBO 2 Bo te 2 sur 2 conserver entre 15 C et 30 C d s la r ception Quantit Quantit Symbole Composant Kit de 250 Kit de 100 tests test
81. ae sensibilit et sp cificit Tableau 9a Echantillons du test APTIMA COMBO 2 compar s au statut des patients infect s tat des F Sensibilit Sp cificit Echantillon sympt mes TE ER INS ARN IC 95 IC 95 Sympt 724 304 b 412 3 99 0 97 2 99 8 98 8 97 2 99 6 couvillon Asympt 378 15 12 351 0 100 78 2 100 96 7 94 3 98 3 Tous 1103 319 17 764 3 99 1 97 3 99 8 97 8 96 5 98 7 Homme Sympt 750 311 1 433 5 98 4 96 3 99 5 99 8 98 7 100 Urine Asympt 383 13 2 368 0 100 75 3 100 99 5 96 98 1 99 9 Tous 1134 324 3 802 5 98 5 96 5 99 5 99 6 96 98 9 99 9 Sympt 881 94 15 772 0 100 96 2 100 98 1 96 96 9 98 9 couvillon Asympt 596 31 2 562 1 96 9 83 8 99 9 99 6 96 98 7 100 Tous 1479 126 17 1335 1 99 2 96 95 7 100 98 7 98 0 99 3 Femme Sympt 883 87 7 782 7 92 6 85 3 97 0 99 1 96 98 2 99 6 Urine Asympt 599 28 3 564 4 87 5 71 0 96 5 99 5 96 98 5 99 9 Tous 1484 116 10 1347 11 91 396 85 0 95 6 99 3 96 98 6 99 6 Sympt 1605 398 20 1184 3 99 3 97 8 99 8 98 3 97 4 99 0 couvillon Asympt 974 46 14 913 1 97 9 88 7 99 9 98 5 97 5 99 2 Tous 2582 445 34 2099 4 99 196 97 7 99 8 98 4 96 97 8 98 9 Total Sympt 1633 398 8 1215 12 97 1 94 9 98 5 99 3 96 98 7 99 7 Urine Asympt 982 41 5a 932 4 91 1 78 8 97 5 99 5 98 8 99 8 Tous 2618 440 13 2149
82. analys s sur le PANTHER System Tous les chantillons contenant de l acide nucl ique cible taient positifs lorsqu ils taient test s a une concentration de 10 vol vol de sang dans les chantillons sur couvillon les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt ou de 30 vol vol de sang dans les chantillons d urine Tous les chantillons qui ne contenaient pas la cible ont t correctement identifies comme tant n gatif a CT et GC Ces r sultats sont identiques ceux d montr s pour le TIGRIS DTS System lorsque les m mes quantit s de sang leur sont rajout es La pr sence de sang dans les chantillons sur couvillon de PreservCyt et d urine a des niveaux bien sup rieurs a ceux attendus lors du recueil normal d chantillons n a pas interf r avec les r sultats produits par le PANTHER System Etudes de contamination par transfert pour le PANTHER System Afin d tablir que le PANTHER System minimise les risques de r sultats faussement positifs li s a une contamination par transfert une tude analytique a t r alis e sur plusieurs s ries et sur trois PANTHER Systems l aide de panels ensemenc s La contamination de transfert a t valu e en r partissant des chantillons avec un titre lev de GC parmi les chantillons n gatifs environ 20 du total Les s ries comprenaient des regroupements d chantillons fortement positifs et des regroupements d chantillons n gatifs ainsi
83. anel de frottis en milieu liquide Panel des couvillons vaginaux fg de rRNA PreservCyt Membre du test CT Gc CT Gc Lhe R plicatS TIGRIS DTS TIGRIS DTS TIGRIS DTS TIGRIS DTS IGC GU 88 concor concor concor concor concor concor concor concor dance dance dance dance dance dance dance dance Faible Faible 5 250 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Faible lev e 5 250 000 10 100 100 100 100 100 100 100 100 lev e Faible 5000 250 10 100 100 100 100 100 100 100 100 lev e lev e 5000 250000 10 100 100 100 100 100 100 100 100 ae 0 5 0 10 100 88 9 100 100 100 100 100 100 Faible N g 5 0 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Moyen N g 50 0 10 100 100 100 100 100 100 100 100 lev e N g 5000 0 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Lu 0 25 10 100 100 100 100 100 100 100 100 N g Faible 0 250 10 100 100 100 100 100 100 100 100 N g Moyen 0 2500 10 100 100 100 100 100 100 100 100 N g lev e 0 250 000 10 100 100 100 100 100 100 100 100 N g N g 0 0 12 100 100 100 100 100 100 100 100 Pourcentage de concordance globale entre Pourcentage de concordance globale TIGRIS et DTS IC 95 96 entre TIGRIS et DTS IC 95 99 2 95 8 100 100 97 2 100 DTS Concordance concordance entre les DTS Systems et les r sultats attendus TIGRIS Concordance concordance entre le TIGRIS DTS System et les r sultats attendus 1 r plicat sur 10 a donn un r
84. ans les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt par site clinique et de mani re globale Concernant GC la sensibilit s chelonnait de 80 0 100 La sp cificit s chelonnait de 99 0 100 La distribution des dispositifs d chantillonnage cervical de cette tude clinique est d crite par site clinique dans le tableau 4 Tableau 4 R sum concernant les dispositifs d chantillonnage cervical utilis s ans l tude des chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt Dispositif d chantillonnage Site clinique de collecte Total cervical 1 2 3 4 5 6 Spatule cytobrosse 0 124 475 287 57 364 1307 Dispositif endocervical de type balai 100 0 0 0 240 0 340 Test APTIMA COMBO 2 51 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Tableaux des performances pour Chlamydia trachomatis Sensibilit et sp cificit a C trachomatis Tableau 5a Echantillons du test APTIMA COMBO 2 compar s au statut des patients infect s Echantillon Etat des Sensibilit Sp cificit sympt mes N TP FP TN FN IC 95 IC 95 Sympt 676 190 15 464 7 96 4 92 8 98 6 96 9 94 9 98 2 couvillon Asympt 388 70 5 309 4 94 6 86 7 98 5 98 4 96 3 99 5 Tous 1065 260 20 774 11 95 9 92 9 98 0 97 5 96 1 98 5 Homme Sympt 694 199 8 484 3 98 596 95 7 99 7 98 4 96 8 99 3 Urine Asympt
85. ans les 30 jours qui suivent la collecte b Une fois collect s transportez les chantillons d urine trait s dans le tube de transport pour chantillons d urine APTIMA entre 2 C et 30 C et conservez le tube entre 2 C et 30 C jusqu la r alisation du test Les chantillons d urine trait s doivent tre analys s avec le test APTIMA COMBO 2 dans les 30 jours qui suivent Test APTIMA COMBO 2 9 502183FR R v C Informations g n rales leur collecte Si une dur e de conservation sup rieure est n cessaire congelez entre 20 C et 70 C pendant 12 mois maximum apr s la collecte voir Etudes de la stabilit des chantillons 3 Echantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt a Les chantillons de frottis en solution PreservCyt destin s aux tests CT et ou GC doivent tre trait s en ce qui concerne la cytologie et ou transf r s dans un tube de transfert d chantillon APTIMA dans les 30 jours qui suivent leur collecte lorsqu ils sont conserv s entre 2 C et 30 C reportez vous la section Etudes de la stabilit des chantillons b Sila proc dure de retrait d aliquot ThinPrep est utilis e reportez vous l annexe du Manuel de l op rateur du processeur ThinPrep 2000 ou ThinPrep 3000 pour des instructions relatives au retrait d aliquots Transf rez 1 ml de l aliquot retir dans un tube de transfert d chantillon APTIMA conform ment aux instructions de la notice du kit de transfert d cha
86. antillons conserv s 4 C et 10 C ont t test s en double aux jours 0 6 13 26 30 et 36 Les chantillons conserv s 30 C ont t test s en double aux jours 0 5 8 14 et 17 Quatre pools d chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt ensemenc s ont t ajout s aux tubes de transfert APTIMA et plac s 30 C pendant 14 jours avant d tre conserv s 20 C ou 70 C Les chantillons 20 C et ceux 70 C ont t test s en double apr s 0 30 60 90 et 106 jours de conservation Toutes les conditions de test taient positives pour CT et GC pour toutes les dur es et toutes les temp ratures Test APTIMA COMBO 2 73 502183FR R v C Performance analytique des DTS Systems C Echantillons vaginaux sur couvillon Les donn es destin es a confirmer les conditions de transport et de conservation recommand es pour les chantillons sur couvillon vaginaux ont t g n r es avec des chantillons sur couvillon n gatifs combin s Quinze pools d chantillons vaginaux ont t ensemenc s avec CT et GC des concentrations finales respectives de 1 0 IFU et 50 CFU par r action Les chantillons ensemenc s ont t conserv s 70 C 20 C 4 C et 30 C Les chantillons ont t test s en utilisant un aliquot aux jours 0 20 36 73 et 114 Toutes les conditions de test taient positives la fois pour CT et pour GC pour toutes les dur es et toutes les temp ratures D
87. atifs ont t group s par type d chantillon ensemenc s ou non ensemenc s avec du rRNA de CT et ou de GC et aliquot s comme r plicats de chaque chantillon du panel Les r plicats de chacun des 13 chantillons du panel ensemenc s avec des concentrations de rRNA diff rentes ont t combin s pour cr er un panel clinique pour chaque type de pr l vement Chaque panel contenait un total de 132 r plicats Un r plicat d couvillon vaginal provenant d un chantillon de panel ayant une tr s faible concentration de CT 0 05 fg rRNA test a donn un r sultat CT quivoque sur les DTS Systems Le tableau 24 pr sente les pourcentages de concordance pour chaque concentration de rRNA respectivement pour les panels d couvillons vaginaux et de frottis en milieu liquide PreservCyt avec les r sultats attendus pour CT et GC sur le TIGRIS DTS System et les DTS Systems Les concentrations s chelonnaient de 1 log en dessous a 3 log au dessus des 5 fg rRNA test pour CT et 250 fg rRNA test pour GC Le tableau 24 montre galement les pourcentages de concordance globales 99 2 pour le panel d couvillons vaginaux et 100 pour le panel de frottis en milieu liquide PreservCyt Tableau 24 Etude clinique de la concordance des panels enrichis avec du rRNA CT GC concordance avec les r sultats attendus pour CT et GC pour le panel des couvillons vaginaux et le panel de Ifrottis en milieu liquide PreservCyt Concentration P
88. avec un NAAT de r f rence de toute forme de combinaison d couvillon et d chantillon d urine d signaient le sujet comme tant infect Si tous les r sultats du test de r f rence taient n gatifs le sujet tait d sign comme non infect Si un seul r sultat tait positif le sujet tait d sign comme non concluant Concernant l tat d infection GC une Test APTIMA COMBO 2 47 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems culture positive ou des r sultats d couvillon ou d urine positifs avec le test amplifi de r f rence d signaient le sujet comme tant infect Une culture n gative accompagn e d un seul r sultat positif avec le test amplifi de r f rence donnait lieu a un tat non concluant Si tous les r sultats du test de r f rence taient n gatifs le sujet tait d sign comme non infect Les tableaux 7a 7b 7c 8 11a 11b 11c et 12 r sument la fr quence des r sultats de test pour les deux NAAT de r f rence et le test APTIMA COMBO 2 pour les sujets des tudes cliniques Les r sultats du test APTIMA COMBO 2 pour les chantillons endocervicaux et ur traux m les collect s par des cliniciens l aide d un couvillon ainsi que les chantillons d urine masculins et f minins ont t compar s l algorithme de l tat d infection des patients pour d terminer la sensibilit la sp cificit et les valeurs pr dictives Au total 15 661 r sultats de
89. ce avec des chantillons autres que ceux collect s avec les kits de collecte d chantillons suivants n a pas t valu e Kitde collecte d chantillons couvillon unisexe APTIMA pour chantillons endocervicaux et ur traux m les sur couvillon Kitde collecte d urine APTIMA pour chantillons d urine masculins et f minins e Kitde collecte d chantillons couvillon vaginal APTIMA Kitde transfert d chantillons APTIMA utiliser avec les chantillons gyn cologiques collect s dans la solution PreservCyt Recommandations sp cifiques aux DTS Systems Kit de pr l vement d chantillons PACE pour chantillons ur traux males ou conjonctivaux en conjonction avec le kit d adaptateur APTIMA Kitde collecte d chantillons PACE pour chantillons endocervicaux en conjonction avec le kit d adaptateurs APTIMA F L chantillonnage des chantillons d urine vaginaux sur couvillon et de frottis en milieu liquide PreservCyt n est pas destin remplacer les examens cervicaux et les chantillons endocervicaux dans le diagnostic des infections urog nitales chez la femme Les patientes peuvent souffrir de cervicites ur trites infections urinaires ou infections vaginales dues d autres causes ou des infections parall les par d autres agents G Le test APTIMA COMBO 2 n est pas pr vu pour l valuation d abus sexuels pr sum s ou d autres fins m dico l gales Pour les patients chez qui des r sul
90. ct S O 0 1 1 Non infect 0 1 1 Non infect S O 2 2 4 Test APTIMA COMBO 2 58 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Tableau 7b chantillons vaginaux collect s par la patiente et par un clinicien l aide d un couvillon suite L tat NAAT 1 NAAT 2 APTIMA Test APTIMA tat des d infection du COMBO 2 COMBO 2 sympt mes Total patient FS FU FS FU PVS cvs Symp Asymp Non infect S O S O 0 1 1 Non infect 12 9 21 Non infect S O 0 1 1 Non infect 1 1 2 Non infect S O 0 1 1 Non infect S O 5 4 9 Non infect 1 0 1 Non infect 1 0 1 Total 811 640 1451 FS Ecouvillon endocervical f minin FU Urine f minine PVS Ecouvillon vaginal collect par une patiente asymptomatique CVS Ecouvillon vaginal collect par un clinicien S O repr sente un chantillon non obtenu ou non disponible pour un test Le symbole gal correspond a des r sultats quivoques ou ind termin s apr s r analyse Tableau 7c R sultats pour l tat d infection des patients par C trachomatis provenant de l tude clinique des chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt R sultat pour chantillon L tat d infection du endocervical sur couvillon Etat des sympt mes patient AC2 ACT Symp Asymp
91. ctive pr dictive Sensibilit Sp cificit pr dictive pr dictive pr valence E one pr valence 5 5 TIE 96 96 96 positive n gative 96 96 96 positive n gative Ce Ce Ce Ce 96 1 98 0 33 1 100 0 1 97 8 99 2 55 3 100 0 2 96 1 98 0 50 0 99 9 2 97 8 99 2 71 4 100 0 5 96 1 98 0 72 0 99 8 5 97 8 99 2 86 6 99 9 10 96 1 98 0 84 5 99 6 10 97 8 99 2 93 2 99 7 15 96 1 98 0 89 6 99 3 15 97 8 99 2 95 6 99 6 20 96 1 98 0 92 4 99 0 20 97 8 99 2 96 8 99 4 25 96 1 98 0 94 2 98 7 25 97 8 99 2 97 6 99 2 30 96 1 98 0 95 4 98 3 30 97 8 99 2 98 1 99 0 Test APTIMA COMBO 2 46 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Performance clinique du test avec les DTS Systems Consultez Concordance des chantillons cliniques pour le TIGRIS DTS System apr s la section Performance analytique des DTS Systems pour les caract ristiques de performance clinique sp cifiques au TIGRIS DTS System R sultats des tudes cliniques Les caract ristiques de performance du test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems ont t tablies lors de trois tudes cliniques multicentriques effectu es en Am rique du Nord La premi re tude clinique multicentrique a valu des chantillons endocervicaux et ur traux m les collect s par des cliniciens l aide d un couvillon et des chantillons d urine masculins et f minins provenant de 1363 sujets masculins et 1569 sujets f minins enrdl s dans sept sites cliniques
92. de RNA dans un milieu de transport ad quat solution PreservCyt STM peuvent tre test s conform ment aux recommandations ou exigences des organismes d accr ditation concern s ou encore selon les proc dures de laboratoire individuelles Les chantillons positifs connus peuvent servir de contr le s ils sont pr par s et test s avec des chantillons inconnus Les chantillons utilis s comme contr les de la pr paration doivent tre conserv s manipul s et test s conform ment la notice de test Les contr les de la pr paration des chantillons doivent tre interpr t s de la m me mani re que celle recommand e pour les chantillons de patients Voir les R sultats des tests de patients sous Interpr tation du test QC R sultats patients D R sultats des tests de patients 1 Siles contr les utilis s lors d une s rie ne donnent pas les r sultats attendus les r sultats des tests des chantillons des patients faisant partie de la m me s rie ne doivent pas tre valid s Test APTIMA COMBO 2 40 502183FR R v C Interpr tation du test QC R sultats patients 2 R sultats des chantillons sur couvillon des chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt et d urine voir les remarques ci dessous a R sultats initiaux CT Pos Positif pour rRNA CT CT N g Pr sum n gatif pour rRNA CT CT Equiv L chantillon devra tre test nouveau GC Pos Positif pour
93. de reconstitution et le flacon en verre Figure 3 tape 8 Avertissement vitez de faire de la mousse en reconstituant les r actifs La mousse interf re avec le d tecteur de niveau du PANTHER System 1 AS DTE 7 i 4 Les o i d INI SEMI t 3 N BERN 5 6 7 awe e lil sh 7 i o SA S 0 7 DEREN Io Figure 3 Proc dure de reconstitution pour le TIGRIS DTS System et le PANTHER System 2 Pr paration de la solution de r actif de capture de cible Working Target Capture Reagent wTCR a Associez les bouteilles de TCR et de TCR B appropri es b V rifiez les num ros de lot des r actifs sur la fiche de code barres du lot de r f rence pour vous assurer que les r actifs appropri s du kit se correspondent c Ouvrez le flacon de TCR et posez le bouchon sur une surface de travail propre et couverte d Retirez le bouchon du flacon de TCR B et versez la totalit du contenu dans le flacon de TCR Il est normal qu une petite quantit de liquide reste dans le flacon de TCR B e Rebouchez le flacon de TCR et agitez d licatement la solution pour m langer le contenu Evitez de cr er de la mousse pendant cette tape f Notez les initiales de l op rateur ainsi que la date du jour sur l tiquette g Jetez le flacon de TCR B et son bouchon 3 Pr paration du r actif de s lection a V rifiez que le num ro de lot sur le flacon de r actif correspond celui sur la
94. ditional Guidance on Appropriate Internal Quality Control Testing Practices 24 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2004 NCCLS EP5 A2 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods Approved Guideline 2nd edition Vol 24 No 25 25 Peterson E M V Darrow J Blanding S Aarnaes and L M de La Maza 1997 Reproducibility problems with the AMPLICOR PCR Chlamydia trachomatis test J Clin Microbiol 35 957 959 26 Schachter J 1985 Chlamydiae Psittacosis Lymphogranuloma Venereum Trachoma group p 856 862 n E H Lennette et al ed Manual of Clinical Microbiology 4 ed American Society for Microbiology Washington D C 27 Schachter J and M Grossman 1981 Chlamydial infections Ann Rev Med 32 45 61 28 Schachter J 1978 Medical progress chlamydial infections third of three parts NEJM 298 540 549 29 Schachter J E C Hill E B King V R Coleman P Jones and K F Meyer 1975 Chlamydial infection in women with cervical dysplasia Am J Obstet Gynecol 123 753 757 30 Stary A E Schuh M Kerschbaumer B Gotz and H Lee 1998 Performance of transcription mediated amplification and Ligase chain reaction assays for detection of chlamydial infection in urogenital samples obtained by invasive and noninvasive methods J Clin Microbiol 36 2666 2670 31 Toye B W Woods M Bobrowska and K Ramotar 1998 Inhibition of PCR in genital and urine specime
95. dolescents de moins de 16 ans W Ne pas utiliser ce kit apr s la date de p remption X Ne pas changer m langer ou combiner les r actifs de kits portant diff rents num ros de lots Il est possible d utiliser les contr les et les solutions provenant de kits APTIMA portant diff rents num ros de lots Test APTIMA COMBO 2 6 502183FR R v C Informations g n rales Recommandations sp cifiques aux DTS Systems Y Des pointes de pipette munies de filtres hydrophobes doivent tre utilis es Au moins deux pipeteurs a r p tition doivent tre d di s a une utilisation pour ce test un premier pour les tapes de capture de cible et d amplification et un deuxi me pour les tapes du DKA Deux micro pipeteurs doivent tre d di s a une utilisation pour ce test un premier pour le transfert des chantillons et un deuxi me pour la pr paration des r actifs Tous les pipeteurs doivent tre r guli rement nettoy s conform ment aux instructions indiqu es sous Proc dure de test avec les DTS Systems Remarques concernant la proc dure Z Si vous utilisez des pipeteurs a r p tition pour ajouter des r actifs ne touchez pas le tube avec l embout de la pipette afin d viter toute contamination d un tube l autre AA Un m lange ad quat est n cessaire pour obtenir des r sultats de test pr cis Pour de plus amples d tails consultez la Proc dure de test avec les DTS Systems Hemarques concernant la proc dure
96. e d tablir une corr lation entre la magnitude d un signal de test positif et le nombre d organismes dans un chantillon M Concernant les tudes cliniques des chantillons vaginaux endocervicaux et ur traux masculins sur couvillon ainsi que les chantillons d urine les caract ristiques de performance de la d tection de CT et GC sont obtenues chez des populations forte pr valence d infection Des r sultats positifs chez des populations faible pr valence doivent tre interpr t s avec prudence sachant que la probabilit d obtenir des r sultats faux positifs peut tre sup rieure celle d obtenir des r sultats vrais positifs N Concernant les tudes cliniques des chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt la performance du test APTIMA COMBO 2 pour la d tection de CT et de GC provient essentiellement de populations faible pr valence d infections N anmoins des r sultats positifs dans des populations faible pr valence doivent tre interpr t s avec prudence sachant que le nombre de r sultats faussement positifs peut tre sup rieur celui des r sultats vraiment positifs O La performance du kit de transfert d chantillons APTIMA n a pas t valu e pour ce qui est de l analyse d un m me chantillon de frottis en solution PreservCyt avant et apr s l analyse par le syst me ThinPrep P Les chantillons de frottis en solution PreservCyt trait s par des instruments autres que le pr
97. e du panel R plicats TIGRIS PANTHER TIGRIS PANTHER CT GC CT GC 96 96 96 96 concordance concordance concordance concordance Panels CT GC Faible Faible 2 5 125 5 250 90 100 100 100 100 M d M d 25 1250 50 2500 90 100 100 100 100 Faible lev e 2 5 2 500 000 5 5 000 000 90 100 100 100 100 lev e Faible 25 000 125 50 000 250 90 100 100 100 100 Panels GC N g Tr s faible 0 12 5 0 25 117 100 100 100 100 N g Faible 0 125 0 250 120 100 100 100 100 N g Moyen 0 1250 0 2500 120 100 99 2 100 100 Panels CT Tr s faible N g 0 25 0 0 5 0 120 100 100 100 100 Faible N g 2 5 0 5 0 120 100 100 100 100 Moyen N g 25 0 50 0 120 100 100 100 100 Panels n gatifs N g N g 0 0 0 0 360 100 100 99 7 99 7 Un chantillon du panel a t pr par incorrectement et a t exclu de l analyse Pourcentage de concordance CT positive globale entre TIGRIS DTS System et PANTHER System IC 95 96 100 99 5 100 Pourcentage de concordance GC positive globale entre TIGRIS DTS System et PANTHER System IC 95 96 100 99 5 a 100 Pourcentage de concordance n gative globale entre TIGRIS DTS System et PANTHER System IC 95 96 99 9 99 5 100 Test APTIMA COMBO 2 86 502183FR R v C Performance analytique du PANTHER System Etude de sensibilit analytique La sensibilit analytique du test APTIMA COMBO 2 a t analys e en utilisant trois matrices d chantillons repr sentatives Ces derni res se composa
98. e pour le PANTHER System Il existe plusieurs facteurs pr cis pouvant contribuer la contamination notamment le volume de tests la direction du sens du travail la pr valence de maladies et diverses activit s de laboratoire Ces facteurs doivent tre pris en compte lors de l tablissement de la fr quence du contr le des contaminations Les intervalles de contr le de la contamination doivent tre d finis en fonction des pratiques et proc dures propres chaque laboratoire Pour surveiller la contamination du laboratoire il est possible d effectuer la proc dure suivante au moyen du kit de collecte d chantillons couvillon unisexe APTIMA pour chantillons endocervicaux et ur traux m les sur couvillon Test APTIMA COMBO 2 37 502183FR R v C PANTHER System 1 Marquez les tubes de transport des couvillons avec les num ros correspondants aux zones a tester 2 Retirez l couvillon de collecte d chantillon couvillon tige bleue avec imprim vert de son emballage humidifiez l couvillon dans le milieu du tube de transport de l couvillon et couvillonnez la zone d sign e d un geste circulaire 3 Ins rez imm diatement l couvillon dans le tube de transport 4 Cassez d licatement la tige de l couvillon sur la ligne de score en vitant toute projection du contenu 5 Rebouchez herm tiquement le tube de transport de l couvillon 6 R p tez les tapes 2 5 pour toutes les zones couv
99. elui g n ralement obtenu lorsque les instructions de collecte ont t respect es centrifugez le tube pendant 5 minutes 420 FCR pour s assurer qu il ne reste pas de liquide dans le bouchon c Sile niveau de liquide dans un tube de transport d urine ne se situe pas entre les deux lignes indicatrices noires l chantillon doit tre rejet Ne pas perforer un tube trop rempli d Si un chantillon d urine contient un pr cipit chauffer l chantillon 37 C jusqu 5 minutes maximum Si le pr cipit ne se dissolve pas v rifiez visuellement qu il n interf re pas avec l obtention de l chantillon Remarque Le non respect des tapes 4a 4c peut entra ner l coulement de liquide par le bouchon du tube d chantillon Remarque Il est possible de tester jusqu 3 aliquots distincts provenant de chaque tube d chantillon Les tentatives de pipeter plus de 3 aliquots du tube d chantillon peuvent entra ner des erreurs d insuffisance de volume E Pr paration du syst me Configurez le syst me et la liste de travail selon les instructions du Manuel de l op rateur du syst me TIGRIS DTS TIGRIS DTS System Operator s Manual et de la section Remarques concernant la proc dure Test APTIMA COMBO 2 29 502183FR R v C TIGRIS DTS System Remarques concernant la proc dure A Contr les 1 Pour travailler correctement avec le logiciel de test APTIMA pour le TIGRIS DTS System des contr les avant et de fin son
100. endant 30 5 minutes 16 Placez le portoir sur la base magn tique du TCS pendant 5 10 minutes 17 Amorcez la conduite de la pompe du poste de distribution en pompant la solution de lavage APTIMA dans la rampe de distribution Pompez une quantit suffisante de liquide dans le syst me afin qu il ne reste aucune bulle d air dans les tubulures et que les dix t tes dispensent un flux r gulier de liquide Test APTIMA COMBO 2 17 502183FR R v C DTS Systems 18 Mettez la pompe a vide en marche et d branchez la rampe d aspiration du premier connecteur situ entre la rampe d aspiration et le flacon pi ge V rifiez que la jauge de d pression soit conforme la sp cification du test pour les fuites Lobtention de ce chiffre peut prendre 15 secondes Rebranchez la rampe d aspiration et v rifiez que la jauge de d pression soit conforme la sp cification du niveau de d pression N teignez pas la pompe vide avant que toutes les tapes de la capture de cible soient termin es et que la tubulure de la rampe d aspiration soit s che 19 Fixez fermement la rampe d aspiration au premier jeu d embouts Aspirez la totalit du liquide en abaissant les embouts dans la premi re unit TTU jusqu ce qu ils touchent bri vement le fond des tubes Ne pas maintenir les embouts en contact avec le fond des tubes 20 Une fois l aspiration termin e jectez les embouts dans leur TTC d origine Recommencez les tapes d aspiration
101. equis mais disponible s par ment 25 Mat riel optionnel ssssseeee 14 Mat riel optionnel sssssseeetee 26 Proc dure de test avec les DTS Systems 14 Proc dure de test pour le TIGRIS DTS System 26 Remarques concernant la proc dure 20 Remarques concernant la proc dure 30 BER E a PANTHER PANTHER System eese 31 R actifs et mat riels fournis 31 Mat riel requis mais disponible s par ment 33 Mat riel optionnel ssesssseseseeeenee 34 Proc dure de test pour le PANTHER System 34 Remarques concernant la proc dure 37 1 502183FR R v C Informations g n rales Usage pr vu Le test APTIMA COMBO 2 est un test par sonde d acide nucl ique pour l amplification de cible qui utilise la capture de cible pour la d tection qualitative et la diff renciation in vitro du RNA ribosomique rRNA de Chlamydia trachomatis CT et ou de Neisseria gonorrhoeae GC afin de faciliter le diagnostic des infections Chlamydia et ou gonococciques de l appareil g nito urinaire au moyen du TIGRIS DTS System ou du PANTHER System ou en utilisant l instrumentation semi automatique des DTS Systems comme indiqu Ce test peut tre employ pour analyser les chantillons suivants provenant
102. eu liquide PreservCyt des chantillons vaginaux sur couvillon et des chantillons d urine masculins et f minins La performance de cette m thode n a pas t valu e pour tout chantillon autre que ceux d crits au paragraphe Collecte et conservation des chantillons Les laboratoires peuvent valider d autres dispositifs de collecte d chantillons 21 23 L utilisation de kits de collecte PACE a t valid e pour les DTS Systems mais uniquement lorsqu ils sont associ s au kit d adaptateurs APTIMA L utilisation du kit de collecte PACE et du kit d adaptateurs APTIMA n est pas actuellement valid e pour le TIGRIS DTS System ou le PANTHER System Les chantillons gyn cologiques collect s pour tre pr par s avec le ThinPrep 2000 System devraient tre collect s uniquement au moyen de dispositifs de type balai ou brosse spatule en plastique endocervicaux L Les dates de p remption figurant sur les kits de collecte concernent le site de collecte et non l tablissement effectuant les tests Les chantillons collect s avant la date de p remption du kit de collecte puis transport s et conserv s conform ment la notice du test sont valides pour tre test s m me si la date de p remption du tube de collecte est d pass e M La solution PreservCyt a t valid e en tant que milieu alternatif pour l analyse par le test APTIMA COMBO 2 Les chantillons de frottis en solution PreservCyt trait s avec le processeur T
103. eure 2240 m tres W La performance du PANTHER System n a pas t d termin e des altitudes sup rieures 2000 m tres X Il n existe aucune preuve de la d gradation des acides nucl iques dans la solution PreservCyt Si un chantillon de frottis en milieu liquide PreservCyt pr sente une faible quantit de mat riel cellulaire de CT et GC il peut se produire une distribution irr guli re de ce mat riel cellulaire De m me lorsqu on le compare l chantillonnage direct avec le milieu de transport d chantillons APTIMA le volume additionnel de la solution PreservCyt donne des dilutions plus importantes du mat riel chantillonn Ces facteurs peuvent affecter la capacit d tecter des petites quantit s d organismes dans le mat riel collect Si les r sultats n gatifs de l chantillon ne correspondent pas l impression clinique il peut tre n cessaire d utiliser un nouvel chantillon Y Les clients doivent valider ind pendamment un processus de transfert LIS Test APTIMA COMBO 2 44 502183FR R v C Valeurs attendues pour les DTS Systems Valeurs attendues pour les DTS Systems Pr valence La pr valence d infections a CT et ou GC dans les populations de patients d pend des facteurs de risque tels que l ge le sexe la pr sence de sympt mes le type de clinique et la m thode de test Un r sum de la pr valence des r sultats de trois situations de CT et de GC obtenus par le test APTIM
104. ez le bain chaleur s che vortexeur SB100 r f rez vous la fiche d application du bain chaleur s che vortexeur SB100 Fiche d application SB 100 2 Avant d entreprendre le test essuyez les plans de travail et les pipeteurs avec une solution dhypochlorite de sodium dos e de 2 5 3 5 0 35 M 0 5 M Laissez la solution d hypochlorite de sodium au contact des surfaces et des pipeteurs pendant au moins 1 minute puis rincer l eau Ne pas laisser s cher la solution d hypochlorite de sodium Couvrez la surface de la paillasse sur laquelle le test sera effectu avec des protections de laboratoire absorbantes propres avec envers plastifi 3 Placez un nombre suffisant de cassettes dix embouts dans le syst me de capture de cible Target Capture System TCS V rifiez que la bouteille de solution de lavage du TCS est remplie avec la solution de lavage APTIMA et que la rampe d aspiration est branch e sur la pompe vide Se r f rer au Manuel de l op rateur du syst me de capture de cible Target Capture System Operator s Manual Test APTIMA COMBO 2 14 502183FR R v C DTS Systems B Reconstitution des r actifs Remarque La reconstitution des r actifs doit tre effectu e avant de commencer le transfert des chantillons 1 Afin de reconstituer le r actif d amplification le r actif enzymatique et le r actif sonde m langez la solution de reconstitution aux flacons de r actif lyophilis Si les
105. g ographiquement r partis La seconde tude clinique multicentrique a valu des chantillons vaginaux collect s par la patiente et par un clinicien l aide d un couvillon chez 1464 sujets f minins enr l s dans huit sites cliniques g ographiquement r partis La troisieme tude clinique multicentrique a valu les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt provenant de 1647 sujets enr l s sur six sites cliniques Lors des calculs de performance bas s sur l tat des sympt mes les sujets ont t class s comme symptomatiques s ils ont fait tat de d charges dysuries et douleurs pelviennes et autres sympt mes de cet ordre Les sujets ont t class s comme asymptomatiques s ils n ont fait tat d aucun sympt me tude clinique des chantillons endocervicaux et ur traux m les sur couvillon et d urine Dans l tude clinique multicentrique des chantillons endocervicaux sur couvillon ur traux sur couvillon et d urine 2932 sujets masculins et f minins symptomatiques et asymptomatiques ayant consult dans des cliniques pour MST des gyn cologues obst triciens et des centres de planning familial ont t enr l s dans l tude Jusqu trois couvillons ur traux et un chantillon d urine ont t collect s chez les sujets masculins et quatre couvillons endocervicaux et un chantillon d urine chez les sujets f minins Pour les sujets masculins fournissant un couvillon ur tral le test com
106. gen probe com GEN PROBE GEN PROBE et son logo APTIMA APTIMA et son logo APTIMA COMBO 2 DTS LEADER PACE PANTHER SB100 et TIGRIS sont des marques d pos es de Gen Probe Incorporated eppendorf stylis et REPEATER sont des marques de commerce d Eppendorf AG PRESERVCYT et THINPREP sont des marques commerciales de Hologic Inc TECAN et FREEDOM EVO sont des marques de commerce de Tecan Group AG Tout autre nom de marque pouvant apparaitre sur cette notice de test appartient son propri taire respectif 2001 2013 Gen Probe Incorporated 502183FR R v C 2013 04 Test APTIMA COMBO 2 91 502183FR R v C
107. hinPrep 3000 ou d autres instruments n ont pas t valu s pour la Test APTIMA COMBO 2 5 502183FR R v C Informations g n rales d tection de Chlamydia trachomatis et Neisseria gonorrhoeae au moyen du test APTIMA COMBO 2 N Une fois l urine vers e dans le tube de transport d urine le niveau de liquide de ce tube doit se situer entre les deux lignes indicatrices noires sur l tiquette du tube Dans le cas contraire l chantillon doit tre rejet O Observez des conditions de conservation ad quates pendant le transport des chantillons pour pr server leur int grit La stabilit des chantillons dans des conditions de transport autres que celles recommand es n a pas t valu e P Les chantillons peuvent tre infectieux Utilisez les Pr cautions universelles en effectuant ce test Le responsable du laboratoire devra avoir tabli des m thodes de manipulation et d limination des d chets ad quates Seul le personnel ayant regu une formation ad quate pour manipuler des substances infectieuses devrait tre autoris effectuer cette proc dure de diagnostic Q vitez toute contamination crois e lors des tapes de manipulation des chantillons Les chantillons peuvent contenir des taux d organismes tr s importants Veillez viter tout contact entre les diff rents r cipients d chantillons et ne pas passer au dessus d un r cipient ouvert en jetant le mat riel usag Changez de gants e
108. ient d urine trait e avec du milieu de transport d urine urine transport medium UTM du milieu liquide pour frottis PreservCyt dilu avec du milieu de transport pour couvillon Swab transport medium STM et du STM Des pools de ces trois matrices ont t ensemenc s avec du rRNA CT et GC aux concentrations suivantes 0 5 fg test 5 fg test et 50 fg test de CT conc rRNA quivalentes de 0 25 IFU mL 2 5 IFU mL et 25 IFU mL ou 25 fg test 250 fg test or 2500 fg test de GC conc rRNA quivalentes de 12 5 CFU mL 125 CFU mL ou 1250 CFU mL Les quivalents rRNA ont t calcul s d apr s la taille du g nome et le ratio estim DNA RNA cellule de chaque organisme Ces panels ont t analys s en r plicats de 96 sur trois PANTHER Systems avec trois lots de r actifs La concordance avec les r sultats attendus a t calcul La concordance avec les r sultats attendus tait de 100 IC 95 96 1 100 pour tous les panels d urine de 100 IC 95 96 0 100 96 pour tous les panels de frottis en milieu liquide PreservCyt et de 100 IC 95 96 96 1 100 96 pour tous les panels STM La sensibilit analytique du test tait de 2 5 IFU mL pour CT et de 125 CFU mL pour GC tude de reproductibilit La pr cision du test APTIMA COMBO 2 a t valu e sur trois PANTHER Systems et avec trois lots de kits APTIMA COMBO 2 pendant une p riode de 24 jours Des panels ont t constitu s en ensemen ant du
109. ifier le rRNA cible et d tecter l amplicon respectivement Des tudes comparant la performance et l inhibition des chantillons avec divers syst mes d amplification ont d montr les avantages des technologies de capture de cible de la TMA et du DKA 8 12 Le test APTIMA COMBO 2 d tecte le CT et ou GC rRNA dans les chantillons endocervicaux vaginaux et ur traux m les collect s par un clinicien l aide d un couvillon les chantillons vaginaux collect s par la patiente l aide d un couvillon les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt et les chantillons d urine masculins et f minins provenant d individus symptomatiques et asymptomatiques Principes de la proc dure Le test APTIMA COMBO 2 allie les technologies de capture de cible de la TMA et du DKA Les chantillons sont collect s et transf r s dans leurs tubes de transport d chantillon respectifs Les solutions de transport de ces tubes lib rent les cibles rRNA et les emp chent de se d t riorer pendant la p riode de conservation Lorsque le test APTIMA COMBO 2 est r alis en laboratoire les mol cules de rRNA cibles sont isol es partir des chantillons par la m thode de capture de cible l aide d oligom res de capture et de microparticules magn tiques Les oligom res de capture contiennent les s quences compl mentaires des r gions pr cises des mol cules cibles de m me qu une chaine de r sidus de d oxyad nosine Un oligom
110. ille Figure 1 tape 6 i Rebouchez la bouteille Inscrivez les initiales de l op rateur ainsi que la date de reconstitution sur l tiquette Figure 1 Etape 7 j Jetez le collet de reconstitution et le flacon Figure 1 tape 8 1 2 3 180 EJ i Figure 1 Proc dure de reconstitution pour les DTS Systems 2 Lesr actifs sonde d amplification et enzymatiques pr c demment reconstitu s doivent parvenir temp rature ambiante entre 15 C et 30 C avant le d but du test Si le r actif sonde contient un pr cipit qui ne se remet pas en solution temp rature ambiante chauffez le 62 C pendant 1 2 minutes Apr s cela le r actif sonde peut tre utilis m me s il reste des pr cipit s r siduels M langez par retournement en veillant ne pas former de mousse Test APTIMA COMBO 2 15 502183FR R v C DTS Systems Remarque Ces retournements devraient tre effectu s chaque fois qu un pr cipit se forme dans la solution que ce soit par chauffage 62 ou par r chauffement temp rature ambiante 3 Pr paration de la solution de r actif de capture de cible Working Target Capture Reagent wTCR a Transf rez 20 mL de TCR dans un r cipient propre et sec de la taille appropri e et r serv cet effet b A l aide d un micro pipeteur ajoutez 200 uL de TCR B au TCR Tournez d licatement la solution pour bien la m langer Mettez une tiquette sur ce r
111. illonner Si les r sultats sont positifs ou non probants pour CT ou GC reportez vous la section Interpr tation du test QC R sultats patients Pour des informations suppl mentaires sur le contr le de la contamination sp cifiques au PANTHER System contactez le Service technique de Gen Probe Test APTIMA COMBO 2 38 502183FR R v C Interpr tation du test QC R sultats patients Interpr tation du test QC R sultats patients A Interpr tation des tests Les r sultats des tests sont automatiquement interpr t s par le logiciel de test APTIMA au moyen du protocole APTIMA COMBO 2 et pr sent s sous forme de r sultats de test CT et GC individuels Un r sultat de test peut tre n gatif quivoque positif ou invalide comme le d terminent le type de cin tique et le nombre total de RLU dans l tape de d tection voir ci dessous Un r sultat de test peut tre invalide si l un des param tres se situe en dehors des seuils normalement pr vus Si les premiers r sultats du test sont quivoques ou non valides le test doit tre refait Total de RLU x1000 pour obtenir le r sultat de CT Type cin tique N gatif Equivoque Positif CT uniquement 1 25 25 100 100 4500 CT et GC 1 85 85 250 250 4500 CT ind termin 1 85 85 4500 S O Total de RLU x1000 pour obtenir le r sultat de GC Type cin tique N gatif Equivoque Positif GC uniquement 1
112. illons cliniques est pr sent e dans le tableau 13 Tableau 13 Distribution du total de RLU des contr les de test APTIMA COMBO 2 Total de RLU x1000 Ftude ciinique des tude clinique des tude clinique des chantillons Contr le Statistiques chantillons chantillons de endocervicaux et ur traux males sur vaginaux sur frottis en milieu couvillon et urine couvillon liquide PreservCyt Maximum 1572 1996 1747 75 centile 1160 1279 1264 Contr le positif CT contr le n gatif GC M diane 1063 1135 1165 25 centile 996 933 1024 Minimum 274 174 494 Maximum 1359 1420 1438 75 centile 1202 1255 1288 Contr le positif GC contr le n gatif CT M diane 1093 1169 1201 25 centile 989 1084 1099 Minimum 167 249 166 tude de pr cision Des tests de pr cision ont t effectu s sur trois sites pour obtenir les mesures de r p tabilit et de reproductibilit Des tudes de pr cision ont t effectu es dans le cadre de l tude clinique sur les chantillons endocervicaux sur couvillon ur traux m les sur couvillon et d urine ainsi que dans celle portant sur les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt Lors de l tude pr c dente chaque site avait recu trois panels identiques de 13 chantillons contenant entre 0 et 500 fg de CT rRNA de 0 25 000 fg de GC rRNA ou des combinaisons de CT et GC rRNA Les tests ont t effectu s pendant trois j
113. imens from symptomatic and asymptomatic men by using a rapid polymerase chain reaction assay J Clin Microbiol 31 1209 1212 18 Krauss S J R C Geller G H Perkins and D L Rhoden 1976 Interference of Neisseria gonorrhoeae growth by other bacterial species J Clin Microbiol 4 288 295 19 Mahony J S Chong D Jang K Luinstra M Faught D Dalby J Sellors and M Chernesky 1998 Urine specimens from pregnant and nonpregnant women inhibitory to amplification of Chlamydia trachomatis nucleic acid by PCR Ligase chain reaction and transcription mediated amplification identification of urinary substances associated with inhibition and removal of inhibitory activity J Clin Microbiol 36 3122 3126 20 Masi A T and B I Eisenstein 1981 Disseminated Gonococcal Infections DGI and Gonococcal Arthritis GCA II Clinical Manifestations Diagnosis Complications Treatment and Prevention Semin Arthritis Rheum 10 173 21 McCurdy Brenda W 1997 Cumitech Guide on Verification and Validation of Procedures in the Microbiology Laboratory February 1997 American Society for Microbiology ASM Press 22 National Committee for Clinical Laboratory Standards 1999 NCCLS EP5 A Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline Vol 19 No 2 23 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2002 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance Approved Guideline for ad
114. ination doivent tre d finis en fonction des pratiques et proc dures propres chaque laboratoire Pour surveiller la contamination du laboratoire il est possible d effectuer la proc dure suivante au moyen du kit de collecte d chantillons couvillon unisexe APTIMA pour chantillons endocervicaux et ur traux m les sur couvillon 1 Marquez les tubes de transport des couvillons avec les num ros correspondants aux zones a tester 2 Retirez l couvillon de collecte d chantillon couvillon tige bleue avec imprim vert de son emballage humidifiez l couvillon dans le milieu du tube de transport de l couvillon et couvillonnez la zone d sign e d un geste circulaire 3 Ins rez imm diatement l couvillon dans le tube de transport 4 Cassez d licatement la tige de l couvillon sur la ligne de score en vitant toute projection du contenu 5 Rebouchez herm tiquement le tube de transport de l couvillon 6 R p tez les tapes 2 5 pour toutes les zones couvillonner Si les r sultats sont positifs ou non probants pour CT ou GC reportez vous la section Interpr tation du test QC R sultats patients Pour des informations suppl mentaires sur le contr le de la contamination sp cifiques au TIGRIS DTS System consultez le Manuel de l op rateur du TIGRIS DTS System Test APTIMA COMBO 2 30 502183FR R v C PANTHER System PANTHER System Les r actifs du test APTIMA COMBO 2 destin
115. infect 2 0 2 Non infect 1 1 2 Non infect 2 2 4 Non infect 698 577 1275 Non infect S O 0 2 2 Non infect 2 0 2 Non infect S O 15 9 24 Non infect S O S O 1 0 1 Non infect S O 2 2 4 Non infect S O S O 0 1 1 Non infect 11 10 21 Non infect S O 0 1 1 Non infect 1 1 2 Non infect S O 0 1 1 Non infect S O 5 4 9 Non infect 1 1 2 Total 810 640 1450 lA AE ee ee ee eee FS Ecouvillon endocervical f minin FU Urine f minine PVS Ecouvillon vaginal collect par une patiente asymptomatique CVS Ecouvillon vaginal collect par un clinicien S O repr sente un chantillon non obtenu ou non disponible pour un test Le symbole gal correspond des r sultats quivoques ou ind termin s apr s r analyse Test APTIMA COMBO 2 67 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems N gonorrhoeae analyse de l tat d infection des patients de sexe f minin Tableau 11c R sultats pour l tat d infection des patients par N gonorrhoeae provenant de l tude clinique des chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt inten gu endocervical sur couvillon tat des sympt mes patient AC2 AGC Symp Asymp Infect 7 6 Non infect 0 1 Non infect 0 5 Non
116. infect 352 1276 Total 359 1288 N gonorrhoeae analyse de l tat d infection des patients de sexe masculin Tableau 12 Ecouvillon ur tral et chantillon d urine L tat d infection du NAAT 1 Culture ee ood patient MU MS MS MU MS Symp Asymp Infect S O 1 0 Infect S O S O 0 1 Infect S O 1 0 Infect 1 0 Infect 4 1 Infect S O S O 0 1 Infect S O S O 8 0 Infect S O 1 0 Infect S O 50 1 Infect 4 1 Infect S O 1 0 Infect 11 1 Infect 1 0 Infect 3 0 Infect S O 1 0 Infect 229 9 Non infect S O 0 1 Non infect S O 0 1 Non infect S O 17 9 Non infect 411 349 Non infect 5 10 Non infect 1 1 Non infect 0 1 Total 750 387 MU Urine homme MS Ecouvillon ur tral masculin S O Echantillon non obtenu ou non disponible pour un test Test APTIMA COMBO 2 68 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Distribution des RLU des contr les APTIMA La distribution des RLU pour le contr le positif GC contr le n gatif CT APTIMA et le contr le positif CT contr le n gatif GC APTIMA pour toutes les s ries de test APTIMA COMBO 2 effectu es lors des tudes d chant
117. inique CT GC chantillons endocervicaux et ur traux masculins sur couvillon chantillons d urine masculins et f minins L tude de concordance du panel clinique CT GC a valu l quivalence entre les deux syst mes en utilisant 13 panels cliniques CT GC pr par s par Gen Probe et contenant de 0 2500 Unit s de formation des inclusions Inclusion Forming Units IFU mL de CT et ou de 0 125 000 Unit s formatrices de colonie Colony Forming Units CFU mL de GC Les panels cliniques CT GC ont t cr s partir d chantillons sur couvillon et d urine collect s aupr s de 222 sujets masculins et de 117 sujets f minins qui ont t d finis comme tant non infect s sur la base de r sultats n gatifs obtenus avec le test APTIMA COMBO 2 avec les DTS Systems Chacun des 13 panels CT GC consistait en 5 r plicats de chaque type d chantillon couvillon endocervical couvillon ur tral m le chantillon d urine f minin chantillon d urine masculin pour un total de 20 r plicats par panel Le tableau 20 pr sente les pourcentages de concordance avec les r sultats CT et GC pr vus pour le TIGRIS DTS System et pour les DTS Systems pour chacun des 13 Test APTIMA COMBO 2 76 502183FR R v C Concordance des chantillons cliniques pour le TIGRIS DTS System panels CT GC La plage de concentrations s tendait d un dixi me a 1000 fois les seuils d analyse revendiqu s pour le test APTIMA COMBO 2 soit 1 IFU test pour
118. isant un autre NAAT disponible dans le commerce pour CT ainsi qu un autre NAAT disponible dans le commerce pour GC Les chantillons endocervicaux sur couvillon et d urine test s avec le test APTIMA COMBO 2 ainsi que les autres NAAT disponibles dans le commerce ont t utilis s comme NAAT de r f rence pour d terminer l tat d infection de chaque sujet de l tude clinique des chantillons vaginaux sur couvillon L analyse des chantillons a t effectu e soit sur le site d enr lement des sujets soit dans un site d analyse externe Tous les calculs de performance ont t bas s sur le nombre total des r sultats du test APTIMA COMBO 2 pour les couvillons vaginaux collect s par des patientes et par des cliniciens compar s l algorithme de l tat d infection d un patient Au total 2073 r sultats de test CT et 2073 de test GC ont t utilis s dans l analyse de donn es Dans l algorithme la d signation d un sujet comme tant infect ou non infect par CT ou GC tait bas e sur les r sultats des chantillons endocervicaux sur couvillon ou d urine du test APTIMA COMBO 2 disponible dans le commerce ainsi que de l autre NAAT du commerce Les sujets taient consid r s infect s par CT or GC si deux des quatre chantillons endocervicaux sur couvillon et d urine taient positifs avec le test APTIMA COMBO 2 et l autre NAAT de r f rence un chantillon testant positif dans chaque NAAT Les sujets taient consid r s
119. isolation de l organisme dans un mileu s lectif ou l observation des diplocoques sur des frottis coloration de Gram 16 Les m thodes de culture peuvent offrir une bonne sensibilit clinique mais elles d pendent fortement de la qualit de la manipulation des chantillons De mauvaises conditions de conservation ou de transport des chantillons peuvent affecter la viabilit des organismes et donner des r sultats faussement n gatifs En outre des techniques d chantillonnages m diocres du mat riel d chantillonnage toxique et l inhibition de la croissance par des composants de s cr tion corporelle peuvent galement entrainer des r sultats faussement n gatifs 7 18 Mis part les cultures les m thodes couramment utilis es pour la d tection de GC comprennent les tests de sonde DNA directs ainsi que les tests NAAT La premi re g n ration de NAAT pour CT et GC pr sentait des probl mes techniques qui en ont limit la performance Ces probl mes taient notamment li s des difficult s de traitement des chantillons et leur inhibition pouvant introduire des r sultats faussement n gatifs 6 10 13 19 25 31 32 33 Le test APTIMA COMBO 2 est un NAAT de deuxi me g n ration qui utilise les techniques de capture de cible d amplification par transcription Transcription Mediated Amplification TMA ainsi que le double test cin tique Dual Kinetic Assay DKA pour simplifier le traitement des chantillons ampl
120. it 0 5 fg test 5 fg test ou 50 fg test Les chantillons du panel positifs pour GC ont t ensemenc s avec des microorganismes a des concentrations de 12 5 CFU mL 125 CFU mL ou 1250 CFU mL 25 fg test 250 fg test ou 2500 fg test Les chantillons doublement positifs ont t ensemenc s avec 2 5 IFU mL 5 fg test de CT et 2 500 000 CFU mL 5 000 000 fg test de GC ou 25 IFU mL 50 fg test de CT et 1250 CFU mL 2500 fg test de GC ou 25 000 IFU mL 50 000 fg test de CT et 125 CFU mL 250 fg test de GC ou 2 5 IFU mL 5 fg test de CT et 125 CFU mL 250 fg test de GC De plus 120 chantillons d urine n gatifs pour CT et GC ont t collect s Les trois panels positifs et n gatifs ont t analys s sur trois PANTHER Systems et trois TIGRIS DTS Systems Le pourcentage de concordance positive entre le PANTHER System et le TIGRIS DTS System tait de 100 avec une borne inf rieure de l intervalle de confiance 95 96 situ e 99 5 pour CT et GC Le pourcentage de concordance n gative entre le PANTHER System et le TIGRIS DTS System tait de 99 9 avec une borne inf rieure de l intervalle de confiance 95 situ e 99 5 Les r sultats de cette tude sont pr sent es dans le tableau 25 Tableau 25 tude de la concordance du panel clinique ensemenc Concordance avec les r sultats CT et GC attendus Concentration Concentration CT GC IFU ou CFU mL fg test Membr
121. lons parvenir temp rature ambiante avant toute proc dure 2 Ne pas vortexer les chantillons 3 Confirmez visuellement que chaque tube chantillon r pond un des crit res suivants a La pr sence d un seul couvillon de collecte APTIMA bleu dans un tube de transport d chantillons sur couvillon unisexe b La pr sence d un seul couvillon de collecte APTIMA rose dans un tube de transport d chantillons sur couvillon vaginal c Un volume final d urine situ entre les lignes de remplissage noires d un tube de transport d chantillons d urine d L absence d un couvillon dans l APTIMA tube de transport d chantillons APTIMA specimen transport tube pour les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt 4 Inspectez les tubes d chantillon avant de les charger dans le portoir a Siun tube de transport contient des bulles dans l espace situ entre le liquide et le bouchon centrifugez le tube pendant 5 minutes 420 FCR pour liminer les bulles b Sile tube de transport pr sente un volume inf rieur celui g n ralement obtenu lorsque les instructions de collecte ont t respect es centrifugez le tube pendant 5 minutes 420 FCR pour s assurer qu il ne reste pas de liquide dans le bouchon c Sile niveau de liquide dans un tube de transport d urine ne se situe pas entre les deux lignes indicatrices noires l chantillon doit tre rejet Si un tube de transport d urine pr sente un v
122. n cas de contact avec l chantillon R Si le laboratoire recoit un tube de transport d chantillons sur couvillon sans couvillon avec deux couvillons un couvillon de nettoyage ou un couvillon non fourni par Gen Probe l chantillon doit tre rejet Avant de rejeter un tube de transport d chantillons sans couvillon v rifiez qu il ne s agit pas d un tube de transfert d chantillons APTIMA tant donn que ce type de tube ne comporte pas d couvillon S Concernant les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt effectuez leur collecte conform ment aux instructions du fabricant Les aliquots qui ont t retir s ult rieurement du flacon PreservCyt pour tre analys s au moyen du test APTIMA COMBO 2 doivent tre trait s en utilisant uniquement le kit de transfert d chantillons APTIMA T Si le bouchon d un tube de transport APTIMA venait tre perfor le liquide pourrait s couler sous certaines conditions Suivez les instructions de la Proc dure de test appropri e afin d viter cette situation Recommandations concernant les tests U La performance des chantillons collect s l aide d un couvillon vaginal n a pas t valu e chez les femmes enceintes V La performance des chantillons endocervicaux vaginaux et ur traux masculins sur couvillon des chantillons d urine masculins et f minins et des chantillons de frottis en solution PreservCyt n a pas valu e chez des a
123. ns submitted for Chlamydia trachomatis testing J Clin Microbiol 36 2356 2358 32 Verkooyen R P A Luijendijk W M Huisman W H F Goessens J A J W Kluytmans J H Rijsoort Vos and H A Verbrugh 1996 Detection of PCR inhibitors in cervical specimens by using the AMPLICOR Chlamydia trachomatis assay J Clin Microbiol 34 3072 3074 33 Vincelette J J Schirm M Bogard A Bourgault D Luijt A Bianchi P C Van Voorst Vader A Butcher and M Rosenstraus 1999 Multicenter evaluation of the fully automated COBAS AMPLICOR PCR test for detection of Chlamydia trachomatis in urogenital specimens J Clin Microbiol 3 74 80 34 Yuan Y Y X Zhang N G Watkins and H D Caldwell 1989 Nucleotide and deduced amino acid sequences for the four variable domains of the major outer membrane proteins of the 15 Chlamydia trachomatis serovars Infect Immun 57 1040 1049 Test APTIMA COMBO 2 90 502183FR R v C Mal C 0843 Gen Probe Incorporated San Diego CA 92121 USA EMERGO EUROPE Pour nous contacter aux tats Unis et dans d autres pays Molenstraat 15 Service Client 1 858 410 8002 2513 BH La Haye customerservice gen probe com Pays Bas Service Client 1 858 410 8002 customerservice gen probe com Service technique 1 858 410 8511 technicalsupport gen probe com Num ro d appel gratuit partir des tats Unis et du Canada Service Client 1 800 523 5001 Service technique 1 888 484 4747 www
124. nt de les perforer a Siun tube de transport contient des bulles dans l espace situ entre le liquide et le bouchon centrifugez le tube pendant 5 minutes 420 FCR pour liminer les bulles b Sile tube de transport pr sente un volume inf rieur celui g n ralement obtenu lorsque les instructions de collecte ont t respect es centrifugez le tube pendant 5 minutes 420 FCR pour s assurer qu il ne reste pas de liquide dans le bouchon C Sile niveau de liquide dans un tube de transport d urine ne se situe pas entre les deux lignes indicatrices noires l chantillon doit tre rejet Ne pas perforer un tube trop rempli d Si un chantillon d urine contient des pr cipit s chauffez l chantillon 37 C jusqu 5 minutes Si le pr cipit ne se dissolve pas v rifiez visuellement qu il n interf re pas avec l obtention de l chantillon Remarque Le non respect des tapes 4a 4c peut entra ner l coulement de liquide par le bouchon du tube d chantillon Test APTIMA COMBO 2 16 502183FR R v C DTS Systems 5 Sides chantillons munis de bouchons standard non p n trables sont test s ils doivent tre centrifug s pendant 5 minutes a 420 FCR force centrifuge relative pour que la totalit du liquide s coule au fond du tube avant de les d boucher Evitez les projections et les contaminations crois es 6 Placez un nombre suffisant d unit s de dix tubes Ten Tube Unit TTU pour les contr les e
125. nt maintenant avoir une teinte rouge b Couvrez les tubes avec une carte de protection vortexez le portoir pendant 10 secondes ou jusqu l obtention d une teinte uniforme puis incubez le dans un bain marie 62 C 1 C pendant 10 1 minutes c Retirez le portoir du bain marie 3 D tection La d tection doit tre effectu e entre 18 C et 28 C a Incubez le portoir entre 18 C et 28 C pendant 15 3 minutes Remarque Cette plage de temp rature est indispensable pour la performance du test b Pour utiliser le LEADER HC Luminometer et le logiciel de test APTIMA r f rez vous au Manuel de l op rateur du luminom tre LEADER HC LEADER HC Luminometer Operator s Manual ainsi qu au Manuel de l op rateur du logiciel de test APTIMA APTIMA Assay Software Operator s Manual V rifiez que les volumes d Auto Detect 1 et 2 sont suffisants pour effectuer les tests Pr parez le LEADER HC Luminometer en pla ant une unit TTU vide dans la position de cassette num ro 1 et effectuez le protocole de Wash Lavage e Chargez les unit s TTU dans le luminom tre f Connectez vous l ordinateur Cliquez sur New Run nouvelle s rie choisissez le protocole de test APTIMA COMBO 2 puis entrez le nombre de tubes contr les et chantillons Cliquez sur Next suivant pour commencer la s rie Test APTIMA COMBO 2 19 502183FR R v C DTS Systems Remarque La s rie doit tre compl t e dans les 2 heures qui s
126. ntillons APTIMA c Sil chantillon est test apr s analyse sur le processeur ThinPrep 2000 traitez l chantillon de frottis en solution PreservCyt conform ment au Manuel de l op rateur du processeur ThinPrep 2000 et la notice du kit de transfert d chantillons APTIMA Transf rez 1 ml du liquide restant dans le flacon de solution PreservCyt dans un tube de transfert d chantillon APTIMA conform ment aux instructions de la notice de test du kit de transfert d chantillons APTIMA d Une fois l chantillon de frottis en solution PreservCyt transf r dans le tube de transfert d chantillon APTIMA il doit tre test avec le test APTIMA COMBO 2 dans les 30 jours s il est conserv entre 2 C et 8 C ou 14 jours s il est conserv entre 15 C et 30 C Si une dur e de conservation plus longue est n cessaire congelez le entre 20 C et 70 C jusqu 12 mois maximum apr s son transfert reportez vous la section tudes de la stabilit des chantillons C Conservation des chantillons apr s les tests 1 Les chantillons qui ont t test s doivent tre rang s dans un portoir en position verticale 2 Lestubes de transport d chantillons doivent tre recouverts avec une nouvelle barri re de film plastique ou d aluminium propre 3 Si certains des chantillons test s doivent tre congel s ou envoy s retirez les bouchons p n trables et placez de nouveaux bouchons non p n trables sur les tubes de
127. obs trique gyn cologie ont contribu aux chantillons vaginaux sur couvillon et aux chantillons de Ifrottis en milieu liquide PreservCyt Les chantillons vaginaux sur couvillon ont t transf r s directement chez Gen Probe pour tre test s alors que les chantillons de Ifrottis en mileiu liquide PreservCyt Pap ont t trait s dans 2 laboratoires de cytopathologie avant leur transfert Chez Gen Probe les chantillons vaginaux sur couvillon et de frottis en milieu liquide PreservCyt ont d abord t analys s avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems Les chantillons ayant des r sultats d finitifs invalides ou quivoques sur les DTS Systems n ont pas t retenus pour des tests suppl mentaires sur le TIGRIS DTS System Les chantillons positifs avec le test APTIMA COMBO 2 et un sous ensemble d chantillons n gatifs avec le test APTIMA COMBO 2 ont t retenus pour des analyses comparatives sur le TIGRIS DTS System Cent soixante dix 170 chantillons vaginaux sur couvillon et 170 chantillons en solution PreservCyt provenant de 181 sujets f minins ont t test s sur les deux syst mes La majorit des chantillons 110 chantillons vaginaux sur couvillon et 107 chantillons en solution PreservCyt s lectionn s pour des tests comparatifs provenaient de femmes symptomatiques Dix sept 17 listes de travail ont t initi es 13 76 5 96 taient valides et 4 23 5 96 ont t invalid es en raison
128. oc dure du PANTHER System A Pr paration de la zone de travail 1 Nettoyez les surfaces de travail o les r actifs et les chantillons doivent tre pr par s Nettoyez les surfaces de travail avec une solution d hypochlorite de sodium dos e de 2 5 96 3 5 0 35 M 0 5 M Laissez la solution d hypochlorite de sodium au contact des surfaces pendant au moins 1 minute puis rincez l eau Ne pas laisser s cher la solution d hypochlorite de sodium Couvrez la surface de la paillasse sur laquelle les r actifs et les chantillons seront pr par s avec des protections de paillasse de laboratoire absorbantes propres avec envers plastifi B Reconstitution des r actifs Pr paration d un nouveau kit Remarque La reconstitution des r actifs doit tre effectu e avant d entreprendre toute t che sur le PANTHER System 1 Afin de reconstituer les r actifs d amplification enzymatiques et de sonde m langer le contenu des bouteilles de r actif lyophilis la solution de reconstitution Si elles ont t r frig r es laissez les solutions de reconstitution parvenir temp rature ambiante avant l emploi a Faites correspondre chaque solution de reconstitution avec son r actif lyophilis V rifiez que la solution de reconstitution et le r actif ont des tiquettes de couleur identiques avant de mettre en place le collet de reconstitution b V rifiez les num ros de lot sur la fiche de code barres du lot de r f
129. ocervical et chantillon d urine Test APTIMA Etat des L tat d infection du NAAT 1 NAAT 2 COMBO 2 sympt mes patient FU FS FU FS FU FS Sympt Asympt Infect S O S O 1 0 Infect S O S O 1 0 Infect S O 0 1 Infect S O 1 0 Infect 4 0 Infect 6 1 Infect 1 0 Infect 7 3 Infect S O 1 0 Infect S O 1 0 Infect 1 0 Infect 7 1 Infect 2 1 Infect 1 0 Infect 3 3 Infect S O 6 2 Infect S O 1 0 Infect 7 3 Infect S O 1 0 Infect 2 2 Infect 1 0 Infect 1 1 Infect S O 1 0 Infect 88 44 Non infect S O 1 1 Non infect S O 2 1 Non infect 648 497 Non infect 18 4 Non infect 4 3 Non infect 4 2 Total 822 570 FU Urine f minine FS Ecouvillon endocervical f minin S O repr sente un chantillon non obtenu ou non disponible pour un test Test APTIMA COMBO 2 57 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Tableau 7b chantillons vaginaux collect s par la patiente et par un clinicien l aide d un couvillon
130. ocesseur ThinPrep 2000 n ont pas t valu s par rapport leur utilisation dans des tests APTIMA Q Les chantillons collect s par la patiente l aide d un couvillon vaginal offrent une option de d pistage chez les femmes lorsqu un examen pelvien n est pas autrement indiqu R L utilisation d chantillons collect s par la patiente l aide d un couvillon vaginal est limit e aux centres de soins de sant o des conseils un soutien sont offerts pour expliquer les proc dures et pr cautions d emploi Test APTIMA COMBO 2 43 502183FR R v C S Le test APTIMA COMBO 2 n a pas t valid pour tre utilis avec des chantillons collect s par la patiente l aide d un couvillon vaginal domicile T La performance des chantillons vaginaux sur couvillon n a pas t valu e chez les femmes enceintes U La performance des chantillons endocervicaux vaginaux et ur traux masculins sur couvillon des chantillons d urine masculins et f minins et des chantillons de frottis en solution PreservCyt n a pas valu e chez des adolescents de moins de 16 ans V La performance du TIGRIS DTS System n a pas t d termin e des altitudes sup rieures 2240 m tres Des v rifications volum triques ainsi que des tudes sp cifiques au test suppl mentaires seront effectu es avant ou dans le cadre du processus d installation et d acceptation pour les laboratoires situ s une altitude sup ri
131. ococcus neoformans meningitidis S rogroupe A Streptococcus mutans Cytom galovirus meningitidis S rogroupe B Streptococcus pneumoniae Deinococcus radiodurans meningitidis S rogroupe C 4 Streptococcus pyogenes Derxia gummosa meningitidis S rogroupe D Streptococcus salivarius Eikenella corrodens meningitidis S rogroupe Y Streptococcus sanguis Enterobacter aerogenes z z Z Z Z Z meningitidis S rogroupe W135 Streptomyces griseinus Enterobacter cloacae Neisseria cinerea 4 Trichomonas vaginalis Entercoccus avium Neisseria dentrificans Ureaplasma urealyticum Entercoccus faecalis Neisseria elongata 3 Vibrio parahaemolyticus Entercoccus faecium Neisseria flava Yersinia enterocolitica Erwinia herbicola Neisseria flavescens 2 Erysipelothrix rhusiopathiae Neisseria lactamica 9 n repr sente le nombre de souches test es Tous les organismes test s ont produit un r sultat n gatif dans le test APTIMA COMBO 2 bas sur le type de profil cin tique et les RLU Test APTIMA COMBO 2 502183FR R v C Performance analytique des DTS Systems Substances interf rentes Les substances interf rentes suivantes ont t ensemenc es individuellement dans des chantillons d couvillon et de solution PreservCyt sang 10 gel contraceptif spermicide hydratant anesth siant h morroidal huile c
132. olume inf rieur celui g n ralement observ centrifuger le tube pendant 5 minutes 420 FCR pour s assurer qu il ne reste pas de liquide dans le bouchon Ne pas perforer un tube trop rempli d Si un chantillon d urine contient un pr cipit chauffer l chantillon 37 C jusqu 5 minutes maximum Si le pr cipit ne se dissolve pas v rifiez visuellement qu il n interf re pas avec l obtention de l chantillon Remarque Le non respect des tapes 4a 4c peut entra ner l coulement de liquide par le bouchon du tube d chantillon Remarque Il est possible de tester jusqu 3 aliquots distincts provenant de chaque tube d chantillon Les tentatives de pipetage de plus de 3 aliquots d un tube d chantillon peuvent entrainer des erreurs de traitement Test APTIMA COMBO 2 36 502183FR R v C PANTHER System E Pr paration du systeme 1 Configurez le syst me selon les instructions du Manuel de l op rateur du syst me PANTHER PANTHER System Operator s Manual et les Remarques concernant la proc dure Veillez ce que des portoirs r actifs et des adaptateurs TCR de taille appropri e soient utilis s 2 Chargez les chantillons Remarques concernant la proc dure A Contr les 1 Une paire de contr les doit tre utilis e pour permettre au logiciel de test APTIMA pour le PANTHER System de fonctionner correctement Sur le PANTHER System les tubes du contr le positif CT contr le n gatif GC et
133. on des inclusions Inclusion Forming Unit IFU par test 7 25 IFU couvillon 5 0 IFU mL d urine et 9 75 IFU mL de frottis en solution PreservCyt pour l ensemble des 15 s rotypes CT A B Ba C D E F G K I J K L1 L2 et L3 Toutefois les dilutions inf rieures 1 0 IFU test de l ensemble des s rotypes ont donn des r sultats positifs avec le test APTIMA COMBO 2 La sensibilit analytique Neisseria gonorrhoeaea a t d termin e en comparant directement les dilutions de 57 isolats cliniques diff rents par culture cellulaire et avec le test APTIMA COMBO 2 pour des chantillons sur couvillon et d urine et pour 20 isolats cliniques avec des chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt La sensibilit analytique revendiqu e pour le test est de 50 cellules test 362 cellules couvillon 250 cellules mL d urine et 488 cellules mL de frottis en solution PreservCyt Toutefois toutes les souches ont donn des r sultats positifs avec moins de 50 cellules test Sp cificit analytique Un total de 154 isolats de culture ont t valu s l aide du test APTIMA COMBO 2 Ces isolats comprenaient 86 organismes pouvant tre isol s du tractus urog nital et 68 organismes suppl mentaires qui repr sentent un croisement phylog n tique d organismes Les organismes test s comprenaient des bact ries champignons levures parasites et virus Tous les organismes l exception de C psittaci C pneumoniae et les vi
134. oncordance concordance concordance concordance Faible Faible 2 5 125 20 100 100 100 100 Faible lev e 2 5 125 000 20 100 95 100 100 lev e Faible 2500 125 20 100 100 100 100 lev e lev e 2500 125 000 20 100 100 100 100 Tr s faible N g 0 25 0 20 85 100 100 100 Faible N g 2 5 0 20 100 100 100 100 Moyen N g 25 0 20 100 100 100 100 lev e N g 2500 0 20 100 100 100 100 N g Tr s faible 0 12 5 20 100 100 100 100 N g Faible 0 125 20 100 100 100 100 N g Moyen 0 1250 19 100 100 100 100 N g lev e 0 125 000 20 100 100 100 100 N g N g 0 0 20 100 100 100 100 Pourcentage de concordance globale entre TIGRIS et DTS IC 95 99 3 98 3 99 8 IFU Inclusion Forming Units unit s de formation d inclusions CFU Colony Forming Units unit s de formation de colonies TIGRIS concordance concordance entre les r sultats attendus et TIGRIS DTS System DTS concordance concordance entre les r sultats attendus et DTS Systems Un tube de collecte contient environ 2 9 mL de milieu de transport pour les chantillons sur couvillon et 4 0 mL de milieu de transport m lange pour urine pour les chantillons d urine La concentration de CT pour cet chantillon du panel clinique CT GC se situe un log en dessous du seuil de sensibilit analytique revendiqu e pour le test APTIMA COMBO 2 qui est de 1 IFU test 7 25 IFU couvillon 5 IFU mL d urine Un des 5 r plicats du panel d urine f minin provenant
135. orporelle poudre creme anti fongique lubrifiants vaginaux spray intime et leucocytes 1 0 x 10 cellules mL Les substances interf rentes suivantes ont t ensemenc es individuellement dans des chantillons d urine sang 30 analytes d urine prot ines glucose c tones bilirubine nitrates urobilinog ne pH 4 acide pH 9 alcalin leucocytes 1 0 x 10 cellules mL d bris cellulaires vitamines min raux ac taminoph ne aspirine et ibuprof ne Toutes ces substances ont t test es pour une interf rence ventuelle au test en l absence et en pr sence de CT et GC pour un rRNA estim quivalent 1 0 IFU CT test 5 fg test et 50 cellules GC test 250 fg test Les quivalents rRNA ont t calcul s d apr s la taille du g nome et le ratio estim DNA RNA cellule de chaque organisme I n a t relev aucune interf rence avec l ensemble des substances test es Aucun inhibiteur d amplification n a t observ avec le test APTIMA COMBO 2 R cup ration Escherichia coli et Gardnerella vaginalis 2 4 x 10 cellules test et Lactobacillus acidophilus Gardnerella vaginalis Bacteroides ureolyticus et Staphylococcus epidermis 1 0 x 10 cellules test ont t ajout s aux chantillons contenant l quivalent rRNA d approximativement 1 0 IFU CT 5 fg et 50 cellules GC 250 fg Ces ajouts n ont pas interf r avec l amplification ou la d tection de CT ou GC rRNA en utilisant le test APTIMA COMBO 2
136. our un seuil de d tection de 50 cellules par test Un panel de sensibilit d un pool d chantillons vaginaux et un panel de sensibilit d un pool d chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt apr s traitement ont t pr par s cune concentration de 250 fg rRNA de GC et 60 r plicats ont t test s sur le TIGRIS DTS System Le pourcentage de positivit avec le TIGRIS DTS System IC 95 tait de 100 95 1 100 pour les chantillons vaginaux sur couvillon et de 100 95 1 100 pour les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt apr s traitement tude des panels cliniques enrichis avec du rRNA CT GC chantillons vaginaux sur couvillon et chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt L tude des panels cliniques enrichis avec du rRNA de CT GC a valu lla concordance entre les deux syst mes en utilisant deux panels cliniques CT GC pr par s par Gen Probe et enrichis avec de 0 5000 fg rRNA test de CT et ou de 0 250 000 fg rRNA test de GC Les panels cliniques CT GC ont t cr s partir d chantillons vaginaux sur couvillon et de frottis en milieu liquide PreservCyt recueillis chez 309 sujets f minins dont les Test APTIMA COMBO 2 82 502183FR R v C Performance analytique du TIGRIS DTS System chantillons avaient donn des r sultats n gatifs avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems lorsqu ils ont t test s chez Gen Probe Les chantillons n g
137. ours en utilisant un lot de kit diff rent chaque jour Les statistiques descriptives de l ensemble des RLU de l intra cycle de l inter cycle et l inter site sont r sum es dans le tableau 14a Pour l tude de pr cision suivante la reproductibilit a t tablie avec un panel de 12 membres g n r en enrichissant la solution PreservCyt de 0 2000 fg test de CT et de 0 5000 fg test de GC rRNA et en aliquotant 1 0 mL dans le tube de pr l vement du kit de transfert d chantillon APTIMA Deux 2 op rateurs sur chacun des trois sites ont effectu une s rie par jour pendant trois jours soit un total de trois s ries valides par op rateur Les tests ont t effectu s en utilisant un lot de kit de test Les r sultats de cette tude de pr cision sont r sum s dans le tableau 14b Dans les deux tudes la reproductibilit a t tablie en enrichissant le milieu de transport STM solution PreservCyt avec rRNA La reproductibilit lors des tests d chantillons collect s l aide d un couvillon d urine ou de frottis en milieu liquide PreservCyt contenant l organisme cible n a pas t d termin e Test APTIMA COMBO 2 69 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Tableau 14a Milieu de transport des couvillons RLU Intra s rie D une s rie l autre D un site l autre Membre du panel N moyenne x1000 SD RLU CV SD RLU CV
138. permicides Les chantillons d urine ont t valu s pour la recherche d ventuelles interf rences avec le sang des vitamines couramment utilis es des min raux et des analg siques en vente libre L ventuelle interf rence avec le sang a t aussi valu e sur le TIGRIS DTS System et le PANTHER System Les donn es n ont soulign aucune interf rence de ces substances sur le test C Les effets de l utilisation de tampons hygi niques de toilettes vaginales et l impact des variables de la collecte des chantillons n ont pas t valu s pour la d tection de CT ou GC D La pr sence de mucus dans les chantillons endocervicaux n interf re pas avec la d tection de CT ou de GC par le test APTIMA COMBO 2 Toutefois afin d assurer la collecte des cellules infect es par CT les cellules pith liales cylindriques tapissant la r gion endocervicale doivent tre chantillonn es Si l exc s de mucus n est pas retir l chantillonnage de ces cellules n est pas assur E Cette m thode a t test e en utilisant uniquement les chantillons suivants e chantillons endocervicaux vaginaux et ur traux m les collect s par un clinicien l aide d un couvillon e chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt collect s par un clinicien e chantillons vaginaux collect s par les patientes l aide d un couvillon e chantillons d urine f minins et masculins collect s par les patients La performan
139. pour les unit s TTU restantes en utilisant un embout par chantillon 21 Placez la rampe de distribution sur chaque TTU et l aide de la pompe du poste de distribution versez 1 0 mL de solution de lavage APTIMA dans chacun des tubes de la TTU 22 Couvrez les tubes avec une carte de protection et retirez le portoir de la base magn tique TCS Vortexez le portoir une fois sur le vortexeur m langeur tourbillon multi tubes Pour plus de d tails consultez Agitation au vortex sous Remarques concernant la proc dure 23 Placez le portoir sur la base magn tique du TCS pendant 5 10 minutes 24 Aspirez tout le liquide comme dans les tapes 19 et 20 25 Apr s l aspiration finale retirez le portoir de la base magn tique du TCS et inspectez visuellement les tubes pour v rifier que le liquide a t totalement aspir et que tous les tubes contiennent des billes de particules magn tiques S il reste visiblement du liquide remettez le portoir sur la base magn tique du TCS pendant 2 minutes et refaites l aspiration pour cette TTU en utilisant les m me embouts que ceux utilis s pr c demment avec chaque chantillon Remarque Si une bille de particule magn tique est visible une fois l aspiration termin e le tube peut tre accept Si aucune bille n est visible l chantillon doit tre test nouveau Si le m me chantillon ne contient pas de bille de particule magn tique dans cette tape et lors d une s rie ult
140. prenait uniquement la culture de GC Pour les sujets masculins fournissant trois couvillons les tests comprenaient la culture de GC le test APTIMA COMBO 2 et des NAAT disponibles dans le commerce pour CT et GC Les tests des couvillons endocervicaux comprenaient le test APTIMA COMBO 2 deux NAAT du commerce pour CT un NAAT du commerce pour GC et la culture de GC L couvillon de culture de GC a t collect en premier et l ordre de collecte des couvillons restants a t altern pour minimiser les biais de pr l vement L urine a t test e avec le test APTIMA COMBO 2 deux NAAT disponibles dans le commerce pour CT et un test amplifi du commerce pour GC Les tests d amplification disponibles dans le commerce ont t utilis s comme tests de r f rence dans l tude clinique du test APTIMA COMBO 2 Tous les calculs de performance ont t bas s sur le nombre total d chantillons endocervicaux et ur traux m les sur couvillon et d chantillons d urine masculins et f minins du test APTIMA COMBO 2 compar s un algorithme de l tat d infection des patients pour chacun des deux sexes Dans chaque algorithme sp cifique au sexe la d signation d un sujet comme tant infect non infect ou avec r sultats non concluant se basait sur les r sultats combin s des couvillons endocervicaux et ur traux m les du NAAT de r f rence et des chantillons d urine Concernant l tat d infection CT deux r sultats positifs
141. que des chantillons fortement positifs isol s dispos s de mani re sp cifique dans la s rie Les chantillons titre lev s taient pr par s en ajoutant du rRNA de GC dans du STM pour obtenir une concentration finale de 5 x 10 fg rRNA r action conc quivalente de rRNA de 2 5 x 10 CFU mL Les analyses ont t effectu es pour 5 s ries sur chacun des trois PANTHER Systems soit un total de 2936 chantillons n gatifs Le taux de contamination de transfert global tait de 0 96 avec un intervalle de confiance de 95 0 0 1 96 Quatre chantillons n gatifs ont t signal s comme invalides et exclus des calculs Bibliographie 1 Beem M O and E M Saxon 1977 Respiratory tract colonization and a distinctive pneumonia syndrome in infants infected with Chlamydia trachomatis NEJM 296 306 310 2 Buimer M G J J Van Doornum S Ching P G H Peerbooms P K Plier D Ram and H H Lee 1996 Detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae by Ligase chain reaction based assays with clinical specimens from various sites implications for diagnostic testing and screening J Clin Microbiol 34 2395 2400 3 Cates Jr W and J N Wasserheit 1991 Genital chlamydia infections epidemiology and reproductive sequelae Am J Obstet Gynecol 164 1771 1781 4 Centers for Disease Control and Prevention 2002 Screening Tests to Detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections Uni
142. r couvillon d urine f minins et masculins et de frottis en milieu liquide PreservCyt ont t obtenues l aide de 90 chantillons pour chaque type ayant produit un r sultat n gatif Parmi ces chantillons 30 d entre eux ont t ensemenc s avec CT et GC 1 0 IFU et 50 CFU par r action respectivement 30 chantillons ont t ensemenc s 0 1 IFU et 5 CFU respectivement et 30 chantillons n ont pas t ensemenc s Les chantillons ont t conserv s 20 C et puis analys s au jours 0 200 et 400 Tous les chantillons ensemenc s ont r uni les criteres d acceptation savoir une concordance sup rieure a 95 concernant les r sultats attendus Test APTIMA COMBO 2 74 502183FR R v C Concordance des chantillons cliniques pour le TIGRIS DTS System Concordance avec le TIGRIS DTS System La concordance entre les r sultats du test APTIMA COMBO 2 g n r s par le TIGRIS DTS System enti rement automatique et les DTS Systems semi automatiques a t valu en analysant les chantillons endocervicaux sur couvillon ur traux males sur couvillon d urine masculins et f minins vaginaux sur couvillon et de frottis en milieu liquide PreservCyt Chacun des chantillons cliniques a t analys individuellement avec le test APTIMA COMBO 2 sur le TIGRIS DTS System et les DTS Systems chez Gen Probe Etude de la concordance des chantillons cliniques Echantillons endocervicaux et m les ur traux sur
143. rRNA de CT et ou de GC dans du STM aux concentrations pr sent es dans le tableau 26 Les op rateurs ont effectu deux s ries d analyses par jour chaque chantillon de panels tant pr sent en duplicat dans les s ries La concordance avec les r sultats attendus a t calcul et la pr cision du test a t estim selon les directives NCCLS EP5 A2 24 Le nombre total de r plicats par panel tait de 96 Le tableau 26 pr sente les donn es de pr cision concernant des mesures RLU pour ce qui est des valeurs moyennes de l cart type SD du coefficient de variation CV et du pourcentage de concordance avec les r sultats attendus calcul s pour les variabilit s entre instruments entre lots entre s ries et au sein d une m me s rie ainsi que la variabilit globale Test APTIMA COMBO 2 87 502183FR R v C Performance analytique du PANTHER System Tableau 26 Pr cision du test APTIMA COMBO 2 pour le PANTHER System Entre D une s rie a er CT GC a NUUS instruments Entre lots Pautre Intra s rie Total IFU mL CFU mL x1000 Concord SD CV SD CV SD CV sD CV SD CV 1000 x1000 x1000 x1000 x1000 0 0 96 6 100 0 06 1 0 88 13 5 0 0 1 02 157 1 3 20 1 0 25 0 95 1226 100 70 03 5 7 2003 1 6 843 07 47 05 3 8 87 1 7 1 2 5 0 96 1249 100 77 97 6 2 6 11 0 5 0 0 32 87 2 6 84 8 6 8 25 0 95 1268 100 72 85 5 7 15 3 1 2 0
144. rase RNA d shydrat es dans une solution tamponn e HEPES contenant lt 10 de diluant P R actif sonde APTIMA COMBO 2 1 flacon Sondes DNA chimiluminescentes non infectieuses d shydrat es dans une solution tamponn e de succinate contenant lt 5 de d tergent TCR B R actif de capture de cible B APTIMA COMBO 2 1x0 35 mL Acides nucl iques non infectieux dans une solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent PCT NGC Contr le positif CT contr le n gatif GC APTIMA 3x1 7mL Acide nucl ique CT non infectieux dans une solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent Chaque chantillon de 400 uL contient le rRNA estim quivalent 1 IFU unit de formation des inclusions de CT 5 fg test PGC NCT Contr le positif GC contr le n gatif CT APTIMA 3x1 7mL Acide nucl ique GC non infectieux dans une solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent Chaque chantillon de 400 uL contient le rRNA estim quivalent 50 cellules de GC 250 fg test Les quivalents rRNA ont t calcul s d apr s la taille du g nome et le ratio estim DNA RNA cellule de chaque organisme Test APTIMA COMBO 2 11 502183FR R v C DTS Systems La bo te r frig r e comprend galement les articles suivants plateau de stockage conserver entre 2 C et 30 d s la r ception Symbole Composant Quantit AR Solution de reconstitution de l amplification APTIMA COMB
145. res de DNA On utilise un seul jeu d amorces pour chaque mol cule cible La d tection des s quences du produit de l amplification du rRNA amplicon s effectue par l hybridation de l acide nucl ique Des sondes DNA chimiluminescentes monocat naires qui sont compl mentaires une r gion de l amplicon cible sont marqu es avec diff rentes mol cules d ester d acridinium Les sondes DNA marqu es se combinent l amplicon pour former des hybrides RNA DNA stables Le r actif de s lection diff rencie la sonde hybrid e de celle qui ne l est pas liminant ainsi la g n ration de signal par la sonde non hybrid e Lors de l tape de d tection la lumi re mise par les hybrides RNA DNA marqu s est mesur e en signaux de photons dans le luminom tre et exprim e en unit s relatives de lumi re RLU Dans la m thode DKA le signal est diff renci selon les diff rences qui existent au niveau des profils cin tiques des sondes marqu es CT et GC ces profils cin tiques proviennent de mesures de l mission de photons pendant la dur e de lecture La r action de d tection chimiluminescente du signal de CT a une cin tique tr s rapide et un profil cin tique de type signal clair La r action de d tection chimiluminescente du signal de GC est relativement plus lente et son profil cin tique est de type signal brillant Les r sultats du test sont d termin s par des valeurs limites bas es sur les unit s RLU totales et le t
146. rger sur le syst me Veillez viter la formation de mousse pendant le retournement des r actifs 4 Ne pas remplir nouveau les flacons de r actif Le TIGRIS DTS System reconnait et rejette les flacons qui ont t remplis nouveau D Manipulation des chantillons 1 Laissez les contr les ainsi que les chantillons parvenir temp rature ambiante avant toute proc dure 2 Ne pas vortexer les chantillons 3 Confirmez visuellement que chaque tube chantillon r pond un des crit res suivants a La pr sence d un seul couvillon de collecte APTIMA bleu dans un tube de transport d chantillons sur couvillon unisexe b La pr sence d un seul couvillon de collecte APTIMA rose dans un tube de transport d chantillons sur couvillon vaginal c Un volume final d urine situ entre les lignes de remplissage noires d un tube de transport d chantillons d urine d L absence d un couvillon dans l APTIMA tube de transport d chantillons APTIMA specimen transport tube pour les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt Test APTIMA COMBO 2 28 502183FR R v C TIGRIS DTS System 4 Inspectez les tubes d chantillon avant de les charger dans le portoir a Siun tube de transport contient des bulles dans l espace situ entre le liquide et le bouchon centrifugez le tube pendant 5 minutes 420 FCR pour liminer les bulles b Sile tube de transport pr sente un volume inf rieur c
147. rus ont t test s 1 0 x 10 cellules test la fois dans le milieu de transport de l couvillon et dans celui de l urine Les organismes Chlamydia et Neisseria ont t test s dans le milieu PreservCyt C psittaci et C pneumoniae ont t test es 1 0 x 10 IFU test Les virus ont t analys s de la mani re suivante a les virus herpes simplex et Il 2 5 x 10 TCIDao test b papillomavirus humain 16 2 9 x 10 copies de DNA test et c cytomegalovirus 4 8 x 10 cellules cultiv es infect es test Seuls les chantillons CT et GC ont donn des r sultats positifs avec le test APTIMA COMBO 2 La liste des organismes test s est pr sent e dans le tableau 15 Test APTIMA COMBO 2 71 502183FR R v C Performance analytique des DTS Systems Tableau 15 Sp cificit analytique Organisme Organisme Organisme Achromobacter xerosis Escherichia coli Neisseria mucosa 3 Acinetobacter calcoaceticus Flavobacterium meningosepticum Neisseria sicca 3 Acinetobacter lwoffi Fusobacterium nucleatum Neisseria subflava 14 Actinomyces israelii Gardnerella vaginalis Neisseria perflava Actinomyces pyogenes Gemella haemolysans Neisseria polysaccharea Aerococcus viridans Haemophilus ducreyi Paracoccus denitrificans Aeromonas hydrophila Haemophilus influenzae Peptostreptococcus anaerobius Agrobacterium radiobacter Virus de l herp s simple
148. s AR Solution de reconstitution de l amplification 1x27 7 mL 1x11 9 mL APTIMA COMBO 2 Solution aqueuse contenant des conservateurs ER Solution de reconstitution enzymatique APTIMA 1x 11 1 mL 1x6 3mL COMBO 2 Solution tamponn e HEPES contenant un surfactant et du glyc rol Test APTIMA COMBO 2 31 502183FR R v C PANTHER System Boite non r frig r e APTIMA COMBO 2 Boite 2 sur 2 conserver entre 15 C et 30 C d s la r ception Quantit Quantit Symbole Composant Kit de 250 Kit de 100 tests tests PR Solution de reconstitution de sonde APTIMA 1x354mL 1x152mL COMBO 2 Solution tamponn e de succinate contenant 5 de d tergent S R actif de s lection APTIMA COMBO 2 1x 108 mL 1x 43 0 mL 600 mM de solution tamponn e de borate contenant un surfactant TCR R actif de capture de cible APTIMA COMBO 2 1x54mL 1x 2600 mL Solution saline tamponn e contenant une phase solide et des oligom res de capture Collets de reconstitution 3 3 Fiche de code barres du lot de r f rence 1 fiche 1 fiche Kit de contr les APTIMA conserver entre 2 et 8 C d s la r ception Symbole Composant Quantit PCT NGC Contr le positif CT contr le n gatif GC APTIMA 5x1 7mL Acide nucl ique CT non infectieux dans une solution tamponn e contenant 5 de d tergent Chaque chantillon de 400 uL contient le rRNA estim quivalent 1 IFU unit de formation des inclusions de
149. s tubes de contr le peuvent tre troubles ou contenir des pr cipit s La turbidit ou la pr cipitation associ e ces contr les n en affecte pas la performance Les contr les peuvent tre utilis s en tant Test APTIMA COMBO 2 8 502183FR R v C Informations g n rales limpides ou troubles pr cipit s Si l on souhaite travailler avec des contr les limpides il est possible d acc l rer la solubilisation en les incubant aux valeurs maximales de la plage de temp rature ambiante 15 C 30 C L Ne pas congeler les r actifs Collecte et conservation des chantillons Le test APTIMA COMBO 2 est concu pour d tecter la pr sence de CT et de GC dans les chantillons endocervicaux et ur traux m les collect s l aide d un couvillon les chantillons vaginaux collect s l aide d un couvillon les chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt et les chantillons d urine masculins et f minins La performance avec des chantillons autres que ceux collect s avec les kits de collecte d chantillons suivants n a pas t valu e Kit de collecte d chantillons couvillon unisexe APTIMA pour chantillons endocervicaux et ur traux m les sur couvillon Kit de collecte d urine APTIMA pour chantillons d urine masculins et f minins Kit de collecte d chantillons couvillon vaginal APTIMA Kit de transfert d chantillons APTIMA utiliser avec les chantillons gyn cologiques
150. t exclus de l analyse Un chantillon tait invalide pour les r sultats CT et GC et a t exclu de l tude Test APTIMA COMBO 2 48 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Etude clinique des chantillons vaginaux sur couvillon Dans l tude clinique multicentrique des couvillons vaginaux 1464 sujets f minins symptomatiques et asymptomatiques se rendant dans des centres pour MST chez des gyn cologues obst triciens dans des cliniques pour adolescents et des centres de planning familiaux ont t valu s lors de l tude clinique Sur les 646 sujets asymptomatiques participant l tude deux avaient moins de 16 ans 158 entre 16 et 20 ans 231 entre 21 et 25 ans et 255 avaient plus de 25 ans Sur les 818 sujets symptomatiques participant l tude 160 avaient entre 16 et 20 ans 324 entre 21 et 25 ans et 334 avaient plus de 25 ans Cinq chantillons ont t recueillis chez sujet ligible un chantillon d urine un chantillon vaginal sur couvillon collect par la patiente un chantillon vaginal sur couvillon collect par un clinicien et chantillons endocervicaux randomis s sur couvillon Les r sultats du test APTIMA COMBO 2 ont t obtenus partir des deux couvillons vaginaux d un des couvillons endocervicaux et d un aliquot de l chantillon d urine Le deuxi me couvillon endocervical et le deuxi me aliquot de l chantillon d urine ont t test s en util
151. t chantillons dans le portoir pour TTU 7 Si vous d sirez tablir une liste de travail faites le ce moment l Pour cr er une liste de travail r f rez vous au Manuel de l op rateur du logiciel de test APTIMA APTIMA Assay Software Operator s Manual 8 M langez fond la solution wTCR A l aide du pipeteur r p tition ajoutez 100 uL dans chaque tube r actionnel 9 Pour utiliser le logiciel de test APTIMA comme il se doit le contr le positif CT contr le n gatif GC doit tre plac dans la premi re position de la premi re TTU a Tenez le tube de contr le positif CT contr le n gatif GC dans une main ou laissez le dans un portoir L tiquette de ce contr le est rose Le texte de l tiquette indique CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC A l aide d un micro pipeteur perforez le bouchon en veillant ne pas enfoncer l embout au fond du tube Ajoutez 400 uL de contr le positif CT contr le n gatif GC dans le premier tube r actionnel b En proc dant de la m me mani re et l aide d un nouvel embout de pipette ajoutez 400 yL de contr le positif GC contr le n gatif CT au second tube r actionnel L tiquette de ce second contr le est bleu vert Le texte de l tiquette indique CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT 10 Continuez la pr paration du portoir en ajoutant 400 uL chaque chantillon dans les tubes r actionnels restants Utilisez un nouvel embout de pipette pour chaque
152. t 2 avec la peau les yeux et les muqueuses En cas de contact de ces liquides avec la peau ou les yeux lavez la zone affect e a l eau En cas de d versement de ces liquides diluez le produit r pandu l eau avant de l essuyer H Les plans de travail pipettes et tout autre mat riel doivent tre r guli rement d contamin s avec une solution d hypochlorite de sodium dos e de 2 5 3 5 96 0 35 M 0 5 M Recommandations sp cifiques aux DTS Systems I Il est fortement recommand de r server un espace de travail sp cifique au test DKA pour minimiser la contamination par l amplicon lors du test Cet espace de travail devrait tre loign du lieu de pr paration du r actif de capture de cible et d amplification J Pour viter la contamination des diff rentes zones du laboratoire par l amplicon le sens de travail du laboratoire devrait tre unidirectionnel de la pr paration des r actifs vers le DKA Les chantillons le mat riel et les r actifs ne doivent pas tre ramen s l ou une tape pr c dente a t effectu e De la m me mani re le personnel ne devra pas retourner dans les zones de travail des tapes pr c dentes sans s entourer de pr cautions ad quates pour viter toute contamination Recommandations concernant les chantillons K Cette m thode a t test e en utilisant uniquement des chantillons endocervicaux et ur traux m les sur couvillon des chantillons de frottis en mili
153. t de mani re globale Les chantillons pour lesquels le test APTIMA COMBO 2 tait positif alors que l tat d infection du patient tait n gatif c d priori des faux positifs ont t analys s par des tests TMA alternatifs pour CT et GC les s quences cibles de ces tests TMA alternatifs tait distinctes de celles cibl es par le test APTIMA COMBO 2 Les r sultats des tests TMA alternatifs n ont pas tre utilis s pour modifier les cat gories initiales des patients tableaux 5b et 9b Test APTIMA COMBO 2 49 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Sur les 1464 sujets enr l s 13 sujets avaient un tat d infection a CT inconnu et 14 sujets un tat d infection a GC inconnu Les sujets ont t d sign s comme ayant un tat d infection inconnu si des r sultats incomplets emp chaient de d terminer de mani re concluante leur tat d infection Les r sultats obtenus aupr s de ces sujets n ont t inclus dans aucuns des calculs de performance Sur les 5782 r sultats d couvillons vaginaux du test APTIMA COMBO 2 de l tude clinique multicentrique seul un faible pourcentage 28 0 5 96 d chantillons vaginaux sur couvillon a initialement donn des r sultats de test invalides ou quivoques pour CT ou GC Lors des tests de r p tition seulement trois r sultats CT et deux r sultats GC taient quivoques et ont t exclus de l analyse Aucun chantillon n a t test comme in
154. t n cessaires Le contr le positif CT contr le n gatif GC doit tre plac dans la premi re position et l avant derni re position d une liste de travail L tiquette de ce contr le est rose Le texte de l tiquette indique CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC Le contr le positif GC contr le n gatif CT doit tre plac dans la seconde position et la derni re position d une liste de travail Le contr le porte une tiquette bleu vert Le texte de l tiquette indique CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT 2 Chaque tube de contr le APTIMA est pr vu pour un seul test Les tentatives de pipeter plus d une fois partir du tube peuvent entrainer des erreurs d insuffisance de volume B Temp rature La temp rature ambiante est d finie comme se situant entre 15 C et 30 C C Poudre sur les gants Comme avec tout syst me de r actif l exc s de poudre sur certains gants peut entrainer la contamination des tubes ouverts Il est recommand d utiliser des gants sans poudre D Protocole de contr le de la contamination en laboratoire pour le TIGRIS DTS System Il existe plusieurs facteurs pr cis pouvant contribuer la contamination notamment le volume de tests la direction du sens du travail la pr valence de maladies et diverses activit s de laboratoire Ces facteurs doivent tre pris en compte lors de l tablissement de la fr quence du contr le des contaminations Les intervalles de contr le de la contam
155. tats faussement Test APTIMA COMBO 2 42 502183FR R v C positifs peuvent avoir un impact psychosocial d favorable le CDC recommande d effectuer un nouveau test 4 H La fiabilit des r sultats d pend de la qualit de la collecte des chantillons Etant donn que le syst me de transport utilis pour ce test ne permet pas l valuation microscopique de la qualit des chantillons il est n cessaire que les cliniciens soient form s aux techniques de collecte d chantillons appropri es Consultez la notice du kit de collecte d chantillons GEN PROBE correspondante L chec ou la r ussite d une th rapie ne peut tre d termin par le test APTIMA COMBO 2 tant donn que les acides nucl iques peuvent persister apr s une th rapie antimicrobienne appropri e J Les r sultats du test APTIMA COMBO 2 doivent tre interpr t s en conjonction avec les autres donn es de laboratoire et cliniques dont dispose le clinicien K Un r sultat n gatif n exclut pas une ventuelle infection tant donn que les r sultats d pendent la qualit de la collecte de l chantillon Les r sultats des tests peuvent tre affect s par une collecte impropre des chantillons une mauvaise conservation des chantillons une erreur technique une confusion entre chantillons ou des niveaux de cible inf rieurs au seuil de d tection du test L Le test APTIMA COMBO 2 fournit des r sultats qualitatifs n est donc pas possibl
156. ted States Morbid and Mortal Weekly Rep 51 RR 15 5 Centers for Disease Control and Prevention 2011 Sexually Transmitted Disease Surveillance 2010 Atlanta GA U S Department of Health and Human Services November 6 Chernesky M A D Jang J Sellors K Luinstra S Chong S Castriciano and J B Mahony 1996 Urinary inhibitors of polymerase chain reaction and Ligase chain reaction and testing of multiple specimens may contribute to lower assay sensitivities for diagnosing Chlamydia trachomatis infected women Mol Cell Probes 11 243 249 7 Ching S H Lee E W Hook III M R Jacobs and J Zenilman 1995 Ligase chain reaction for detection of Neisseria gonorrhoeae in urogenital swabs J Clin Microbiol 33 3111 3114 8 Chong S D Jang X Song J Mahony A Petrich P Barriga and M Chernesky 2003 Specimen processing and concentration of Chlamydia trachomatis added can influence false negative rates in the LCx assay but not in the APTIMA COMBO 2 Assay when testing for inhibitors J Clin Microbiol 41 778 782 9 Crotchfelt K A B Pare C Gaydos and T C Quinn 1998 Detection of Chlamydia trachomatis by the Gen Probe AMPLIFIED Chlamydia Trachomatis assay AMP CT in urine specimens from men and women and endocervical specimens from women J Clin Microbiol 36 391 394 10 Farrel D J 1999 Evaluation of AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae PCR using cppB nested PCR and 16S rRNA PCR J Clin Microbiol
157. tenu Evitez de cr er de la mousse pendant cette tape Test APTIMA COMBO 2 27 502183FR R v C TIGRIS DTS System f Notez les initiales de l op rateur ainsi que la date du jour sur l tiquette g Jetez le flacon de TCR B et son bouchon 3 Pr paration du r actif de s lection a V rifiez que le num ro de lot sur le flacon de r actif correspond celui sur la fiche de code barres du lot de r f rence b Notez les initiales de l op rateur ainsi que la date du jour sur l tiquette Remarque M langer fond tous les r actifs par retournement en douceur avant de les charger sur le syst me Veillez viter la formation de mousse pendant le retournement des r actifs C Pr paration des r actifs pour les r actifs pr c demment reconstitu s 1 Les r actifs sonde d amplification et enzymatiques pr c demment reconstitu s doivent parvenir temp rature ambiante entre 15 C et 30 C avant le d but du test 2 Sile r actif sonde reconstitu contient un pr cipit qui ne se remet pas en solution temp rature ambiante chauffer le flacon bouch une temp rature n exc dant pas 62 C pendant 1 2 minutes Apr s cela le r actif sonde peut tre utilis m me s il reste des pr cipit s r siduels M langez le r actif sonde par retournement en veillant ne pas former de mousse avant de le charger sur le syst me 3 M langez fond chaque r actif par retournement en douceur avant de le cha
158. test AC2 R sultat positif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AGC R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AC2 R sultat n gatif d chantillon endocervical sur couvillon avec le test AGC Test APTIMA COMBO 2 62 502183FR R v C Performance clinique du test avec les DTS Systems Neisseria gonorrhoeae performance par site clinique Tableau 10a Echantillons du test APTIMA COMBO 2 compar s au statut des patients infect s Echantillon Site N TP FP TN FN Pr v cee feces p c 1 159 56 1 101 1 35 8 98 2 90 6 100 99 0 94 7 100 98 2 99 0 2 97 B 0 8 O 134 100 75 3 100 100 95 7100 100 100 3 264 71 6 187 0 26 9 100 94 9 100 96 9 93 4 98 9 92 22 100 tous 4 5 20 0 3 0 37 7 100 83 2 100 100 89 4 100 100 100 vilon 5 4139 12 0 17 0 8 6 100 73 5 100 100 97 1 100 100 100 6 336 94 10 231 1 28 3 98 9 94 3 100 95 9 92 5 98 0 90 4 99 6 7 55 53 0 1 1 98 2 98 1 90 1 100 100 2 5 100 100 50 0 TOUS 1103 319 17 764 3 29 2 99 196 97 3 99 8 97 8 96 5 98 7 94 9 99 6 Homme 1 1 57 0 105 1 36 0 98 3 90 8 100 10096 96 5 100 100 99 0 2 104 19 0 8 0 18 3 100 82 4100 100 95 8 100 100 100 3 265 71 2 382 0 26 8 100 94 9 100 99 0 96 3 99 9 97 3 100 Urine 4 3 20 0 33 0 37 7 100 83 2 100 100 89 4 100 100 100 5 160 1
159. test CT et 14 144 de test GC ont t utilis s dans l analyse de donn es La sensibilit et la sp cificit CT par sexe type d chantillon et tat des sympt mes sont pr sent es au tableau 5a Le tableau 6a compare la sensibilit la sp cificit et les valeurs pr dictives du test APTIMA COMBO 2 pour CT l tat d infection des patients par site clinique et de mani re globale La sensibilit et la sp cificit de d tection de GC par sexe type d chantillon et tat des sympt mes sont pr sent es dans le tableau 9a Le tableau 10a compare la sensibilit la sp cificit et les valeurs pr dictives du test APTIMA COMBO 2 pour GC l tat d infection des patients par site clinique et de mani re globale Les chantillons positifs avec le test APTIMA COMBO 2 et avec un tat d infection des patients n gatif autrement dit faussement positifs en apparence ont t test s avec d autres tests d amplification GEN PROBE pour CT et GC Ces tests amplifient des s quences de CT et GC qui sont diff rentes de celles amplifi es avec le test APTIMA COMBO 2 Les tests ont t effectu s sur un chantillon la fois autrement dit pas n cessairement sur des chantillons sur couvillon et d urine associ s et les r sultats des tests d amplification alternatifs n ont pas t utilis s pour changer les cat gories initiales des patients tableaux 5a et 9a L impact du sang a t valu dans les chantillons endocer
160. thodes sans culture un chantillon positif obtenu sur un patient apr s un traitement th rapeutique ne peut pas tre interpr t comme indiquant la pr sence de CT ou GC viables Comme c est le cas avec toutes les m thodes de test urinaire un test d urine n gatif chez une patiente cliniquement soup onn e d infection Chlamydia ou gonococcique n exclut pas la pr sence de CT ou GC dans le tractus urog nital Dans ces situations il est recommand de tester un chantillon endocervical De la m me fa on un test d urine n gatif pour GC chez un sujet f minin a une valeur pr dictive n gative inf rieure celle du r sultat d un couvillon endocervical Le test d un chantillon endocervical est recommand pour les patientes cliniquement soupconn es d infection Chlamydia ou gonococcique Si un frottis et un couvillon endocervical sont collect s l chantillon de frottis en milieu liquide PreservCyt doit tre collect avant l chantillon endocervical sur couvillon Test APTIMA COMBO 2 41 502183FR R v C Limites A L utilisation de ce test est limit e au personnel ayant t form la proc dure Le non respect des instructions figurant dans cette notice peut donner lieu des r sultats erron s B Les chantillons sur couvillon ont t valu s avec le test APTIMA COMBO 2 sur les DTS Systems pour la recherche d ventuelles interf rences avec le sang les lubrifiants gyn cologiques et les s
161. tionnels doivent maintenant avoir une teinte orange 7 Couvrez imm diatement les tubes avec une nouvelle carte de protection retirez le portoir du bain marie et m langez les tubes r actionnels en agitant d licatement le portoir manuellement 8 Faites incuber le portoir 42 C 1 C dans un bain marie pendant 60 15 minutes E Double test cin tique Dual Kinetic Assay DKA Si vous utilisez le bain chaleur s che vortexeur SB100 SB100 Dry Heat Bath Vortexer r f rez vous la fiche d application du SB100 Le pipeteur r p tition utilis pour l hybridation et la s lection doit tre r serv ces tapes uniquement Voir Avertissements et pr cautions 1 Hybridation a Retirez le portoir du bain marie et transf rez le dans la zone de test DKA l aide du pipeteur r p tition ajoutez 100 pL du r actif sonde reconstitu dans chaque tube r actionnel Tous les m langes r actionnels doivent maintenant avoir une teinte jaune b Couvrez les tubes avec une carte de protection et vortexez les sur le vortexeur m langeur tourbillon multi tubes Faites incuber le portoir dans un bain marie 62 C 1 C pendant 20 5 minutes Retirez le portoir du bain marie et laissez incuber temp rature ambiante pendant 5 1 minutes 2 S lection a A l aide du pipeteur r p tition ajoutez 250 uL de r actif de s lection dans chaque tube r actionnel Tous les m langes r actionnels doive
162. tionnels ne doivent jamais toucher les cartes de protection G Bains marie 1 Le niveau d eau des bains marie doit avoir une profondeur de 3 8 cm 5 cm 1 5 po 2 0 po depuis le plateau de support m tallique fond du bain marie la surface de l eau Cette pr caution permettra d assurer un transfert de chaleur ad quat 2 Pour viter toute contamination crois e les bains marie doivent tre r serv s une tape pr cise du test H D contamination 1 Surfaces et pipeteurs Les surfaces des paillasses et les pipeteurs du laboratoire doivent tre d contamin s r guli rement avec une solution d hypochlorite de sodium dos e de 2 5 3 5 0 35 M 0 5 M Laissez la solution d hypochlorite de sodium au contact des surfaces pendant au moins 1 minute puis rincez l eau Ne pas laisser s cher la solution d hypochlorite de sodium Les solutions base de chlore peuvent piquer le m tal et le mat riel Rincez soigneusement le mat riel pass l eau de javel pour viter toute piqdre de corrosion 2 Rampe d aspiration TCS a Placez une nouvelle TTC dans le portoir TTC Mettez la pompe vide en marche Fixez la rampe d aspiration aux embouts de la TTC Aspirez enti rement la solution de lavage restant dans la cuve d amorcage du poste de distribution de solution de lavage Placez la rampe de distribution de facon ce qu elle ne g ne pas b Versez au moins 100 mL de solution d hypochorite de sodium dos e de
163. transport d chantillons Si les chantillons doivent tre envoy s dans un autre tablissement pour y tre test s les temp ratures recommand es doivent tre maintenues Avant de d boucher et de reboucher des chantillons qui ont d j t test s les tubes de transport d chantillons doivent tre centrifug s pendant 5 minutes 420 FCR Force centrifuge relative pour faire descendre la totalit du liquide au fond du tube vitez les projections et les contaminations crois es Remarque Le transport des chantillons doit s effectuer conform ment aux r glementations nationales et internationales applicables relatives au transport Test APTIMA COMBO 2 10 502183FR R v C DTS Systems DTS Systems Les r actifs du test APTIMA COMBO 2 destin a d tecter la pr sence de CT et de GC sont num r s ci dessous pour les DTS Systems Les symboles d identification des r actifs figurent galement c t du nom du r actif DTS as R actifs et mat riels fournis Kit de tests APTIMA COMBO 2 100 tests 2 bo tes r f rence 301032 Bo te r frig r e APTIMA COMBO 2 Bo te 1 sur 2 conserver entre 2 et 8 C d s r ception Symbole Composant Quantit A R actif d amplification APTIMA COMBO 2 1 flacon Acides nucl iques d shydrat s non infectieux dans une solution tamponn e contenant lt 5 de diluant E R actif enzymatique APTIMA COMBO 2 1 flacon Transcriptase inverse et polym
164. traux m les sur couvillon 1 Marquez les tubes de transport des couvillons avec les num ros correspondants aux zones a tester 2 Retirez l couvillon de collecte d chantillon couvillon tige bleue avec imprim vert de son emballage humidifiez l couvillon dans le milieu du tube de transport de l couvillon et couvillonnez la zone d sign e d un geste circulaire 3 Ins rez imm diatement l couvillon dans le tube de transport 4 Cassez d licatement la tige de l couvillon sur la ligne de score en vitant toute projection du contenu 5 Rebouchez herm tiquement le tube de transport de l couvillon 6 R p tez les tapes 2 5 pour toutes les zones couvillonner 7 Analysez l couvillon l aide du test APTIMA COMBO 2 selon la Proc dure de test avec les DTS Systems Si les r sultats sont positifs ou quivoques pour CT ou GC consultez Interpr tation du test QC R sultats patients il est possible que la surface soit contamin e Elle doit alors tre d contamin e la javel selon les recommandations indiqu es au paragraphe Pr paration du mat riel sous Proc dure de test avec les DTS Systems Remarque Si l on soup onne le bain marie d tre contamin il est possible de le tester en suivant la proc dure de test des chantillons d urine et en ajoutant 2 0 mL d eau dans un tube de transport d chantillons d urine K D pannage 1 Des valeurs de contr le positif faibles peuvent
165. tre dues des temp ratures incorrectes lors des diff rentes tapes du test ou un temps de s lection ayant d pass la dur e recommand e lors de l tape de s lection 2 Des bruits de fond lev s peuvent survenir si le temps de s lection de l tape de s lection est court la s lection de temp rature est incorrecte ou en cas de m lange insuffisant apr s l ajout du r actif de s lection 3 Sile contr le positif CT contr le n gatif GC est positif ou quivoque pour GC ou si le contr le positif GC contr le n gatif CT est positif ou quivoque pour CT voir Contamination des tests sous Remarques concernant la proc dure pour de plus amples informations Test APTIMA COMBO 2 23 502183FR R v C TIGRIS DTS System TIGRIS DTS System Les r actifs du test APTIMA COMBO 2 destin a d tecter la pr sence de CT et de GC sont num r s ci dessous pour le TIGRIS DTS System Les symboles d identification des r actifs figurent galement c t du nom du r actif TIGRIS A R actifs et mat riels fournis Kit de tests APTIMA COMBO 2 250 tests 2 bo tes et 1 kit de contr le r f rences 301130 et 301130B Boite r frig r e APTIMA COMBO 2 Boite 1 sur 2 conserver entre 2 C et 8 C d s la r ception Symbole Composant Quantit A R actif d amplification APTIMA COMBO 2 1 flacon Acides nucl iques d shyarat s non infectieux dans une solution tamponn e contenant 5 de diluant
166. ue solution de reconstitution avec son r actif lyophilis V rifiez que la solution de reconstitution et le r actif lyophilis ont des tiquettes de couleur correspondantes avant de mettre en place le collet de reconstitution b V rifiez les num ros de lot sur la fiche de code barres du lot de r f rence pour vous assurer que les r actifs sont associ s correctement Test APTIMA COMBO 2 26 502183FR R v C TIGRIS DTS System c Ouvrez le flacon de r actif lyophilis et ins rez fermement l extr mit a encoche du collet de reconstitution dans l ouverture du flacon Figure 2 Etape 1 d Ouvrez la bouteille de solution de reconstitution correspondante et posez le bouchon sur une surface de travail propre et couverte e Tout en tenant la bouteille de solution de reconstitution au dessus de la paillasse ins rez fermement l autre extr mit du collet de reconstitution dans l ouverture de la bouteille Figure 2 Etape 2 f Retourner lentement les flacons assembl s Laisser la solution s couler depuis le flacon en plastique dans le flacon en verre Figure 2 Etape 3 g Faites tournoyer d licatement la solution dans le flacon pour la m langer vitez de faire de la mousse dans le flacon pendant cette manipulation Figure 2 Etape 4 h Attendez que le r actif lyophilis se dissolve puis retournez nouveau les flacons assembl s en les inclinant un angle de 45 pour minimiser la formation de mousse Figure
167. uivent la fin de l ncubation de l tape de s lection g Pr parez une solution de d sactivation en m langeant un volume quivalent d hypochlorite de sodium dos de 5 7 0 7 M 1 0 M et de tampon APTIMA pour solution de d sactivation dans un r cipient en plastique quip d un grand couvercle Mettez une tiquette et inscrivez la date de p remption sur le r cipient en plastique La solution de d sactivation reste stable pendant 4 semaines temp rature ambiante Jetez la solution de d sactivation une fois les 4 semaines coul es ou apr s avoir d sactiv 100 chantillons trait s si cela survient avant h Apr s avoir retir les unit s TTU utilis es du luminom tre placez les dans le r cipient de solution de d sactivation Laissez les unit s TTU dans le r cipient pendant 15 minutes avant de les jeter Le responsable du laboratoire devra avoir tabli des m thodes de manipulation et d limination des d chets ad quates Remarques concernant la proc dure A Contr les Pour utiliser le logiciel de test APTIMA comme il se doit le contr le positif CT contr le n gatif GC doit tre plac dans la premi re position de la premi re TTU L tiquette de ce contrle est rose Le texte de l tiquette indique CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC Le contr le positif GC contr le n gatif CT doit tre plac dans la seconde position de la premi re TTU Le contr le porte une tiquette bleu vert Le
168. valide lors des tests de r p tition Etude clinique des chantillons de frottis en milieu liquide PreservCyt Une tude clinique prospective multicentrique a t effectu e pour valuer l utilisation de la solution PreservCyt un composant du ThinPrep 2000 System comme milieu alternatif pour les chantillons gyn cologiques dans la d tection de CT et GC Mille six cent quarante sept 1647 sujet f minins symptomatiques et asymptomatiques se rendant chez des gyn cologues obst triciens des centres de planning familial des dispensaires et des cliniques pour femmes et pour MST ont t valu es lors de l tude clinique Sur les 1647 sujets valuables 1288 taient des sujets asymptomatiques et 359 des sujets symptomatiques Les sujets ont t enr l s dans des sites o la pr valence de CT s chelonnait de 3 2 14 0 96 et de 0 0 5 0 pour GC Deux chantillons ont t recueillis chez chaque sujet ligible un frottis en milieu liquide PreservCyt et un chantillon endocervical sur couvillon Les chantillons de frottis en solution PreservCyt ont t trait s conform ment au Manuel de l op rateur du processeur ThinPrep 2000 et la notice du kit de transfert d chantillons APTIMA Apr s traitement de l chantillon de frottis en milieu liquide PreservCyt avec le processeur ThinPrep 2000 l chantillon a t transf r dans le kit de transfert d chantillons APTIMA pour tre test l aide du test AP
169. vants Contr le Total de RLU x1000 R sultat de CT R sultat GC Contr le positif CT Contr le n gatif GC Contr le positif GC Contr le n gatif CT 2 100 et lt 3000 Positif N gatif 2 150 et lt 3000 N gatif Positif 1 Le logiciel de test APTIMA value automatiquement les contr les selon les crit res ci dessus et indique que la s rie a PASS R ussi ou a FAIL chec si les crit res de contr le de la s rie ne sont pas r unis 2 Sile Run Status tat de la s rie indique FAIL chec tous les r sultats des tests d une m me s rie sont invalides et ne doivent pas tre pris en compte Test APTIMA COMBO 2 39 502183FR R v C Interpr tation du test QC R sultats patients 3 Chaque laboratoire devra mettre en place des proc dures de contr le appropri es pour r pondre aux exigences des r glementations CLIA paragraphe 493 1256 Remarque Voir D pannage ou appeler le Service technique de Gen Probe pour toute assistance avec des contr les hors plage sur les DTS Systems 4 L un des param tres du TIGRIS DTS System permet chaque site de pr ciser une fr quence de s rie encadr e de contr les o des jeux de contr le suppl mentaires peuvent tre plac s des intervalles d finis dans la liste de travail Si ce param tre est pr cis le TIGRIS DTS System exigera de placer un jeu de contr les apr s le nombre d fini d chantillons de la srie encadr e de contr les
170. vicaux sur couvillon pour tablir la performance des tests CT et GC Sur les 2454 chantillons dont la performance CT a t valu e 234 9 5 taient teint s de sang Sur les 2829 chantillons dont la performance GC a t valu e 247 8 7 96 taient teint s de sang La performance du test aussi bien pour CT que pour GC n a pas t statistiquement diff rente pour les chantillons teint s de sang que pour ceux qui ne l taient pas Des informations suppl mentaires sur les tests de d tection du sang peuvent tre consult es sous Substances interf rentes La performance du test avec des chantillons endocervicaux sur couvillon et d urine chez les femmes enceintes a t valu e lors de l tude clinique Pour CT la sensibilit des chantillons endocervicaux sur couvillon et d urine a t respectivement de 100 8 8 et 100 8 8 La sp cificit des chantillons endocervicaux sur couvillon et d urine a t respectivement de 95 8 23 24 et 100 24 24 Pour GC la sensibilit des chantillons endocervicaux sur couvillon et d urine a t respectivement de 100 96 8 8 et 100 8 8 La sp cificit des chantillons endocervicaux sur couvillon et d urine a t respectivement de 100 26 26 et 100 26 26 Sur les 11 406 r sultats des tests APTIMA COMBO 2 de cette tude clinique multicentrique trois r sultats pour CT et neuf pour GC taient quivoques sur les tests successifs et ont
171. x Peptostreptococcus productus Alcaligenes faecalis Virus de l herp s simplex II Plesiomonas shigelloides Bacillus subtilis Papillomavirus 16 Propionibacterium acnes Bacteriodes fragilis Kingella dentrificans Proteus mirabilis Bacteriodes ureolyticus Kingella kingae Proteus vulgaris Bifidobacterium adolescentis Klebsiella oxytoca Providencia stuartii Bifidobacterium brevi Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Branhamella catarrhalis Lactobacillus acidophilus Pseudomonas fluorescens Brevibacterium linens Lactobacillus brevis Pseudomonas putida Campylobacter jejuni Lactobacillus jensonii Rahnella aquatilis Candida albicans Lactobacillus lactis Rhodospirillum rubrum Candida glabrata Legionella pneumophila 2 Saccharomyces cerevisiae Candida parapsilosis Leuconostoc paramensenteroides Salmonella minnesota Candida tropicalis Listeria monocytogenes Salmonella typhimurium Chlamydia pneumoniae Micrococcus luteus Serratia marcescens Chlamydia psittaci 2 Moraxella lacunata Staphylococcus saprophyticus Chromobacterium violaceum Moraxella osloensis Staphylococcus aureus Citrobacter freundii Morganella morganii Staphylococcus epidermidis Clostridium perfringens Mycobacterium smegmatis Streptococcus agalactiae Corynebacterium genitalium Mycoplasma genitalium Streptococcus bovis Corynebacterium xerosis Mycoplasma hominis Streptococcus mitis Crypt
172. ype de courbe cin tique Avertissements et pr cautions A Pour diagnostic in vitro B Pour tout avertissement pr caution ou proc dure compl mentaire concernant le contr le de la contamination avec le TIGRIS DTS System consultez le Manuel de l op rateur du syst me TIGRIS DTS TIGRIS DTS System Operator s Manual C Pour tout avertissement pr caution ou proc dure compl mentaire concernant le contr le de la contamination pour le PANTHER System consultez le Manuel de l op rateur du syst me PANTHER PANTHER System Operator s Manual Recommandations concernant les laboratoires D Le test n a pas t valu dans des populations de patients pr sentant une pr valence faible pour les infections Chlamydiae ainsi la performance du test dans un environnement ou la pr valence est faible n a pas t tablie E N utilisez que le mat riel de laboratoire jetable fourni ou recommand Test APTIMA COMBO 2 4 502183FR R v C Informations g n rales F Prenez les pr cautions de laboratoire habituelles Ne pas manger boire ou fumer dans les zones de travail signal es Portez des gants jetables sans poudre des lunettes de protection et des blouses de laboratoire pour manipuler les chantillons et les r actifs du kit Lavez vous bien les mains apr s avoir manipul les chantillons et r actifs du kit G Avertissement produits irritants et corrosifs vitez tout contact d Auto Detect 1 et d Auto Detec

Test APTIMA COMBO 2

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