Monoclonal Mouse
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1. English Intended use Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied 115366 001 CE FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Melanosome Clone HMB45 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code 15052 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Melanosome Clone HMB45 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for the identification of melanocytes with immature melanosome formation in normal skin nevus and melanoma tissue Positive results aid in the classification of melanomas and melanocytic lesions and also aid in distinguishing metastatic amelanotic melanomas from other poorly differentiated tumors of uncertain origin Differential identification is aided by the results from a panel of antibodies The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Anti melanosome HMB45 has been shown to react with a 10 kDa segment of a neuraminidase sensitive sialylated glycoconjugate present in pre and early stage immature melanosomes 2 4 Refer t2. Keratinozyten Haarfollikel Hautnerven Schwei und Talgdr sen sowie Hoden Pathologisches Gewebe Anti Melanosom HMB45 f rbte 245 von 256 95 7 der Melanome ausgenommen desmoplastische Formen 1 3 5 6 9 14 und 245 von 291 84 2 der Melanome einschlie lich desmo plastische Formen 1 3 5 6 9 13 14 Auch atypische melanozytische Hyperplasie 2 von 2 1 melano zytisches Neuroektoderm im Kindesalter 1 von 1 6 Nieren Angiomyolipome 27 von 29 11 12 und verschiedene Navi 218 von 228 1 5 6 10 wurden durch Anti Melanosom HMB45 gef rbt 307120EFG_001 p 6 7 References Bibliographie Literaturangaben Catalogue number Reference du catalogue Bestellnummer Manufacturer oul Fabricant Hersteller Use by z Utiliser jusque Verwendbar bis PT0020 Rev C Edition 09 07 115366 001 10 11 12 13 14 Gown AM Vogel AM Monoclonal antibodies to intermediate filament proteins of human cells Unique and cross reacting antibodies J Cell Biol 1982 95 414 Kapur RP Bigler SA Skelly M Gown AM Anti melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated with immature melanosomes J Histochem Cytochem 1992 40 2 207 Esclamado RM Gown AM Vogel AM Unique proteins defined by monoclonal antibodies specific for human melanoma Amer J Surg 1986 152 376 Taatjes DJ Arendash Durand B von Turkovich M Trainer TD HMB 45 antibody demonstrates melanosome specifici
3. adultes peuvent r exprimer l antigene d fini par HMB45 tel qu il est exprim dans les m lanocytes foetaux Ces melanocytes sont activ s par divers stimuli Par exemple des cellules positives au HMB45 ont t detectees dans des tissus recouvrant ou adjacents au tissu de granulation aux hemangiomes au stroma de tumeurs riches en vaisseaux et au carcinome des cellules basales 5 8 Les follicules pileux se colorent occasionnellement en raison des melanocytes stimul s associ s 1 Aucune coloration positive au HMB45 n a et observee dans les melanocytes des lentigines ou dans les proliferations fibroblastiques recouvrantes telles que les ch lo des les dermatofibromes et les hemangiomes fibreux anciens 8 Les tissus sains non m lanocytaires ne r agissent pas l anticorps HMB45 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaNs3 produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropr
4. vesicule biliaire appareil digestif rein foie poumon tissu lymphoide cellules m senchymateuses pancr as tissu nerveux p riph rique epithelium pigmentaire r tinien adulte glande salivaire peau m lanocytes normaux au repos m lanophages lots de Langerhans keratinocytes follicules pileux nerfs cutan s glandes sudoripares et s bac es et testicule Tissus tumoraux L anti melanosome HMB45 colore 245 cas sur 256 95 7 de m lanomes except les m lanomes desmoplastiques 1 3 5 6 9 14 et 245 cas sur 291 84 2 de m lanomes y compris les melanomes desmoplastiques 1 3 5 6 9 13 14 L hyperplasie m lanocytaire atypique 2 2 1 le neuro ectoderme m lanocytaire infantile 1 1 6 l angiomyolipome renal 27 29 11 12 et diff rents n vi 218 228 1 5 6 10 sont color s par l anti m lanome HMB45 307120EFG 001 p 4 7 Deutsch Zweckbestimmung Zusammenfassung und Erklarung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifitat Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 115366 001 Code Nr IS052 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Melanosome Clone HMB45 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper dient zur Identifizierung von Melanozyten mit unreifer Mel
5. 45 Isotyp IgG1 Kappa Extrakt pigmentierter Melanommetastasen aus Lymphknoten Das Vorliegen des Antigens ist ein Anzeichen f r die aktive Melanosombildung und somit Melanozytendifferenzierung 5 Es wird ebenfalls in gesunden f talen Melanozyten exprimiert 2 3 nicht aber in gesunden ruhenden adulten Melanozyten unabh ngig vom Pigmentierungsgrad 1 3 6 Nach Aktivierung k nnen adulte Melanozyten ebenso wie f tale Melanozyten das HMB45 definierte Antigen erneut exprimieren Die Aktivierung dieser Melanozyten erfolgt durch unterschiedliche Stimuli So wurden beispielsweise HMB45 positive Zellen in Granulationsgewebe berlagernden oder daran angrenzenden Geweben in H mangiomen gefakreichem Tumorstroma und Basalzellenkarzinomen nachgewiesen 5 8 Gelegentlich f rben sich Haarfollikel aufgrund benachbarter stimulierter Melanozyten 1 Bei Melanozyten in Muttermalen oder berlagernden fibroblastischen Proliferationen wie Keloiden Dermatofibromen und alten fibrotischen Hamangiomen kam es nicht zur positiven HMB45 Farbung 8 Gesunde nicht melanozytische Gewebe reagieren nicht mit dem HMB45 Antikorper 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Met
6. R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link 307120EFG_ 001 p 3 7 Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Interpretation de la coloration Caracteristiques de performance 115366 001 Suivre la proc dure de pre traitement indiqu e dans la notice pour la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Ref K8010 K8014 Les parametres suivants doivent amp tre utilis s pour le PT Link Temp rature de pr chauffage 65 C temp rature et dur e de restauration de lepitope 97 C pour 20 1 minutes laisser refroidir jusqu 65 C Rincer les coupes avec un EnVision FLEX Wash Buffer 10x dilu a temperature ambiante Dako Autostainer Autostainer Plus Ref K8010 Coupes incluses en paraffine Comme preparation alternative des chantillons le deparaffinage et la restauration de l Epitope peuvent tre r alis s dans le PT Link l aide d une proc dure modifi e Se r f rer aux instructions du Guide d utilisation du PT Link Une fois que la proc dure de coloration est termin e les coupes doivent tre deshydratees lav es et mont es a l aide d un milieu de montage permanent Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ou lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de ve
7. Schnitte Die Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte sollte mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 erfolgen Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch 307120EFG_001 p 5 7 Farbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der Farbung Leistungsmerkmale 115366 001 Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 K8014 durchfuhren Fur PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorwarmtemperatur 65 C Temperatur und Zeit f r Epitopdemaskierung 97 C f r 20 1 Minuten auf 65 C abk hlen lassen Schnitte mit auf Raumtemperatur gebrachtem verd nntem EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 absp len Paraffineingebettete Schnitte Zur Probenpr paration kann f r Entparaffinierung und Epitopdemaskierung im PT Link auch ein modifiziertes Verfahren verwendet werden Weitere Informationen siehe PT Link Benutzerhandbuch Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und unter Verwendung eines permanenten Fixiermittels auf die Objekttr ger aufgebracht werden Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder w hrend des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur bes
8. allazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 C aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER ist erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 K8014 erzielt werden Entparaffinierte
9. anosombildung in gesunder Haut N vuszellen und melanomem Gewebe Positive Ergebnisse unterst tzten sowohl die Klassifizierung von Melanomen und melanozytische L sionen als auch die Differenzierung amelanotischer Melanommetastasen von anderen schwach differenzierten Tumoren deren Ursprung unsicher ist Die Differenzialdiagnose wird durch die Ergebnisse eines Antik rper Panels unterst tzt Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden Anti Melanosom HMB45 reagiert nachweislich mit einem 10 kDa gro en Segment eines Neuroaminidase empfindlichen in Vor und Fr hstadien unreifer Melanosome vorhandenen sialylierten Glykokonjugats 2 4 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualitatskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L NaN enth lt Klon HMB
10. at the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnvVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include melanoma cells and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code 1S750 The cellular staining pattern is cytoplasmic Normal tissues Normal adult tissues that exhibit positive staining with anti melanosome HMB45 include melanocytes fetal and subset melanocytes containing immature melanosomes retinal pigment epithelia prenatal and infantile Negative tissues include adrenal gland brain breast gallbladder gastrointestinal tract kidney liver lung lymphoid tissue mesenchymal cells pancreas peripheral nervous tissue retinal pigment epithelia adult salivary gland skin melanocytes normal resting melanophages Langerhans cells keratinocytes hair follicles cutaneous nerves sweat glands sebaceous and testis Abnormal tissues Anti melanosome HMB45 stains 245 256 95 7 of m
11. ce technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d hematoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre les cellules de m lanome et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus R f IS750 Le schema de coloration cellulaire est cytoplasmique Tissus sains Les tissus sains pr sentant une coloration positive l anti melanosome HMB45 incluent les melanocytes m lanocytes foetaux et sous groupes contenant des melanosomes immatures l epithelium pigmentaire r tinien chez le foetus et l enfant Les tissus n gatifs sont les suivants glande surr nale cerveau sein
12. edure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of Dako Silanized Slides Code 3003 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram without counterstaining HMB45 or Autoprogram with counterstaining HMB45H The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating th
13. elanoma excluding desmoplastic 1 3 5 6 9 14 and 245 291 84 2 of melanoma including desmoplastic 1 3 5 6 9 13 14 Melanocytic atypical hyperplasia 2 2 1 melanocytic neuroectoderm of infancy 1 1 6 renal angiomyolipoma 27 29 11 12 and various nevi 218 228 1 5 6 10 are stained by anti melanoma HMB45 307120EFG_001 p 2 7 Fran ais Utilisation pr vue R sum et explication R actifs fournis Immunog ne Sp cificit Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni 115366 001 R f 15052 Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Melanosome clone HMB45 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps est utile pour l identification des m lanocytes avec une formation immature du m lanosome dans les tissus de peau sains les nevi et les m lanomes Des r sultats positifs facilitent la classification des melanomes et des l sions melanocytaires et permettent galement de distinguer les melanomes metastatiques non m laniques d autres tumeurs mal diff renci es d origine incertaine L identification diff rentielle est facilit e par les r sultats provenant d un panel d anticorps L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tude
14. etreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 K8014 307120EFG_001 p 1 7 Staining procedure including materials required but not supplied Staining interpretation Performance characteristics 115366 001 Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 K8014 The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 C epitope retrieval temperature and time 97 C for 20 1 minutes cool down to 65 C Rinse sections with diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 Paraffin embedded sections As alternative specimen preparation both deparaffinization and epitope retrieval can be performed in the PT Link using a modified procedure See the PT Link User Guide for instructions After the staining procedure has been completed the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining proc
15. euprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Melanomzellen enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr 15750 Das zellul re F rbemuster ist zytoplasmatisch Gesundes Gewebe Gesunde adulte Gewebe die mit Anti Melanosom HMB45 eine positive F rbung zeigen sind Melanozyten f tale Formen und solche mit unreifen Melanosomen sowie Netzhautpigmentepithel pr natal und infantil Negativ reagieren Nebennieren Gehirn Brust Gallenblase Verdauungstrakt Nieren Leber Lunge Lymphgewebe Mesenchymzellen Pankreas peripheres Nervengewebe Netzhautpigmentepithel adult Speicheldr sen Haut Melanozyten gesunde ruhende Zellen Melanophagen Langerhans sche Zellen
16. i pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption imprim e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li a l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Le pr traitement avec un demasquage d pitope induit par la chaleur HIER est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pretraitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Ref K8010 K8014 Coupes d paraffin es Le pr traitement des coupes de tissus d paraffin s fix s au formol et inclus en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link
17. ickey RC Comparison of HMB 45 monoclonal antibody and S 100 protein in the immunohistochemical diagnosis of melanoma Amer J Clin Pathol 1988 90 4 385 Bacchi CE Goldfogel GA Greer BE Gown AM Paget s disease and melanoma of the vulva Gyn Oncol 1992 46 216 Temperature limitation In vitro diagnostic medical device Limites de temp rature Dispositif m dical de diagnostic in vitro ml Zulassiger Temperaturbereich In vitro Diagnostikum LEC REP Dako North America Inc Dako Denmark A S Batch code Contains sufficient for lt N gt tests 6392 Via Real Produktionsvej 42 Code du lot 4 Contenu suffisant pour lt n gt tests Carpinteria California 93013 USA DK 2600 Glostrup Denmark ci Chargenbezeichnung Inhalt ausreichend f r n Ans tze Consult instructions for use Authorized representative in the European Community L m oc L E We gt Consulter les instructions d utilisation EC REP Repr sentant Autoris dans la Communaut Europ enne ax 8055 ax 45 4485 oe Technical Support 800 424 0021 Gebrauch beacht Autorisierter R tant in der EU ebrauchsanweisung beachten utorisierter Reprasentant in der Customer Service 800 235 5763 es 307120EFG 001 p 7 7
18. o Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L NaNs Clone HMB45 Isotype IgG1 kappa Extract of pigmented melanoma metastases from lymph nodes The presence of the antigen indicates active melanosome formation and thus melanocytic differentiation 5 It is also expressed in normal fetal melanocytes 2 3 but not in normal resting adult melanocytes regardless of the degree of pigmentation 1 3 6 Upon activation adult melanocytes can re express the HMB45 defined antigen as it is expressed in fetal melanocytes Such melanocytes are activated by a variety of stimuli For example HMB45 positive cells have been detected in tissue overlying or adjacent to granulation tissue hemangiomas vessel rich tumor stroma and basal cell carcinoma 5 8 Hair follicles stain occasionally due to associated stimulated melanocytes 1 Positive HMB45 staining has not been observed with melanocytes in lentigines or overlying fibroblastic proliferations such as keloids dermatofibromas and old fibrotic hemangiomas 8 Non melanocytic normal tissues do n
19. ot react with the HMB45 antibody 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 C Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required Optimal results are obtained by pr
20. rre il est recommand d utiliser des lames Dako Silanized Slides R f S3003 Le syst me de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 Les tapes de coloration et d incubation sont pr programm es dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 ul ou FLEXRTU3 volume de distribution de 300 ul Autoprogram sans contre coloration HMB45 ou Autoprogram avec contre coloration HMB45H L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du servi
21. s morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi L anti melanosome HMB45 r agit un segment de 10kDa d un glycoconjugu sialylat sensible a la neuraminidase pr sent dans les pr m lanosomes et les m lanosomes pr coces immatures 2 4 Se r f rer aux nstructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du systeme de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone HMB45 Isotype IgG kappa Extrait de m tastases pigmentees de m lanome pr lev es sur des ganglions lymphatiques La pr sence de l antigene indique la formation active de m lanosomes et donc une diff renciation melanocytaire 5 Il est egalement exprime dans les melanocytes foetaux sains 2 3 mais pas dans les melanocytes adultes au repos quel que soit le degr de pigmentation 1 3 6 Sous l activation les melanocytes
22. seren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von Dako Silanized Slides Code Nr S3003 empfohlen Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 ul Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 ul Abgabevolumen Autoprogram ohne Gegenfarbung HMB45 oder Autoprogram mit Gegenf rbung HMB45H Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttragern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttragern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dieses gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der N
23. ty by immunoelectron microscopy Arch Pathol Lab Med 1993 117 264 Skelton HG Smith KJ Barrett TL Lupton GP Graham JH HMB 45 staining in benign and malignant melanocytic lesions Amer J Dermatopathol 1991 13 543 Colombari R Bonetti F Zamboni G Scarpa A Marino F Tomezzoli A Capelli P Menestrina F Chilosi M Fiore Donati L Distribution of melanoma specific antibody HMB 45 in benign and malignant melanocytic tumors Virch Arch A Pathol Anat 1988 413 17 Smoller BR Hsu A Krueger J HMB 45 monoclonal antibody recognizes an inducible and reversible melanocyte cytoplasmic protein J Cutan Pathol 1991 18 315 Smoller BR McNutt NS Hsu A HMB 45 recognizes stimulated melanocytes J Cutan Pathol 1989 16 49 Wick MR Swanson PE Rocamora A Recognition of malignant melanoma by monoclonal antibody HMB 45 An immunohistochemical study of 200 paraffin embedded cutaneous tumors J Cutan Pathol 1988 15 201 Ashfaq R Weinberg AG Albores Saavedra J Renal angiomyolipomas and HMB 45 reactivity Canc 1993 71 3091 Pea M Bonetti F Zamboni G Martignoni G Riva M Colombari R Mombello A Bonzanini M Scarpa A Ghimenton C Donati LF Melanocyte marker HMB 45 is regularly expressed in angiomyolipoma of the kidney Pathol 1991 23 185 Bonetti F Chiodera PL Pea M Martignoni G Bosi F Zamboni G Mariuzzi GM Transbronchial biopsy in lymphangiomyomatosis of the lung HMB45 for diagnosis Amer J Surg Pathol 1993 17 11 1092 Ordonez NG Xiaolong JI H
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