FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD45, Leucocyte
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1. 4 CE FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD45 Leucocyte Common Antigen Clones 2B11 PD7 26 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS751 ENGLISH Intended use For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD45 Leucocyte Common Antigen Clones 2B11 PD7 26 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody labels CD45 in both normal and neoplastic cells and is useful for identifying tumor cells of lymphoid origin 1 3 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Synonym for antigen T200 4 Ly 5 5 Summary CD45 is a transmembrane glycoprotein expressed on most nucleated cells of haematopoietic origin CD45 encoded by a single gene mapped to and explanation chromosome 1 has various isoforms based on differential splicing of exons 4 5 and 6 On human leucocytes five different isoforms of CD45 named ABC AB BC B and 0 have been identified These isoforms are recognized by CD45RA CD45RB CD45RC and CD45R0 antibodies The isoforms range in Mr from 180000 to 220000 Allthe CD45 isoforms share the same intracellular segment which has been shown to have tyrosine phosp2. supplied Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin embedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended Staining procedure The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and including materials incubati
3. w ssrigen oder permanenten Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen F rbeverfahren Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision TM FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 Die F rbeschritte und und erforderliche aber Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert He a Matrixprotokoll FLEXRTU2 200 uL Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 uL Abgabevolumen aterialien Autoprogram CD45LCA ohne Gegenf rbung oder CD45LCAH mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dieses gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe un
4. 4 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Interpretation de la coloration Caracteristiques de performance DEUTSCH Zweckbestimmung Synonym f r das Antigen Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifit t Vorsichtsma nahmen Aufbewahrung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 115228 004 Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d hematoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R
5. 8 004 IS751 EFG MNI 2009 12 04 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Staining interpretation Performance characteristics FRANCAIS Utilisation prevue Synonyme de l antig ne Resume et explication Reactifs fournis Immunogene Specificite Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni 115228 004 permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include tonsil and brain and the cells structures should display reaction patterns as described for these tissues in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 Cells labeled by the antibody display membrane staining but cytoplasmic staining may also occur Normal tissues In tonsil the antibody labels germinal centres follicular mantle zones and interfollicular regions 1 In spleen white pulp and Iymphoid cells of red pulp are positive as also thymic Iymphocytes bone marrow Iymphoid cells mast cells cells of probable monocytic derivation and occasional plas
6. A 1 and leucocyte common antigens new and previously defined clusters In McMichael AJ Beverley PCL Cobbold S Crumpton MJ Gilks W Gotch FM et al editors Leukocyte typing Ill White cell differentiation antigens Proceedings of the 3rd International Workshop and Conference 1986 Sep 21 26 Oxford England Oxford New York Tokyo Oxford University Press 1987 p 788 803 7 Morimoto C T18 CD45 cluster report In Schlossman SF Boumsell L Gilks W Harlan JM Kishimoto T Morimoto C et al editors Leukocyte typing V White cell differentiation antigens Proceedings of the 5th International Workshop and Conference 1993 Nov 3 7 Boston USA Oxford New York Tokyo Oxford University Press 1995 p 386 9 Hall PA d Ardenne AJ Stansfeld AG Paraffin section immunohistochemistry I Non Hodgkin s lymphoma Histopathol 1988 13 149 60 Herman GE and Elfont E Aberrant CD45 leukocyte common antigen staining of non malignant breast lesions in zinc formalin fixed tissue J Histotechnol 1993 16 151 3 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole Catalogue number Temperature limitation Use by Reference catalogue Limites de temperature Utiliser avant Bestellnummer Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis In vitro diagnostic medical device Contains sufficient for lt n gt tests Manufacturer Dispositif medical de diagnostic in vitro Contenu suffisant pour lt n gt tests Fabricant In Vitro Diagnost
7. In der Milz sind die wei e Pulpa und Iymphoide Zellen der roten Pulpa sowie Thymuslymphozyten Iymphoide Zellen des Knochenmarks Mastzellen Zellen von wahrscheinlich monozytischer Abstammung und gelegentlich Plasmazellen positiv Variable Markierungen von Immunoblasten epithelioiden Histiozyten Sinus Histiozyten sowie von Plasmazellen wurden beschrieben Myeloide Zellen Erythrozyten Zellen Megakaryozyten Langerhans Zellen in der Haut im Epithel und im Bindegewebe werden vom Antik rper nicht markiert 2 B und T Zellen in Mandelgewebe weisen eine m ige bis starke F rbereaktion auf w hrend die Mikrogliazellen in Hirngewebe eine schwache bis m ige F rbereaktion aufweisen Pathologisches Gewebe In Nicht Hodgkin Lymphomen wurden die neoplastischen Zellen vom Antik rper in 40 von 40 100 der F lle markiert 1 In einer anderen Studie lag die Zahl bei 74 von 80 93 Eine dritte Studie 8 zeigte dass 52 von 52 100 niegriggradigen B Zell Lymphomen 99 von 108 92 hochgradigen B Zell Lymphomen und 41 von 44 93 T Zell Lymphomen mit dem Antik rper positiv reagierten Insgesamt reagierten mit dem Antik rper 162 von 162 100 nicht Iymphoiden Neoplasmen negativ darunter kleinzellig anaplastische Karzinome amelanotische Melanome alveolare Rhabdomyosarkome Ewing Sarkome und Keimzellentumore 1 2 Au erdem wurde die Markierung der Oberfl chenmembran von Brustgangzellen in Proben von fibrozystischer Mastopathie und Fibroadenom
8. d Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens 7 Precautions 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Storage Store at 2 8 Do not use after expiration date sta mped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support Specimen preparation The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately including materials 4 um required but not
9. d Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Mandelgewebe und Hirn enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Auswertung der F rbung Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen eine Membranf rbung auf es kann jedoch auch eine zytoplasmatische F rbung auftreten Leistungsmerkmale Gesundes Gewebe In Mandelgewebe markiert der Antik rper Keimzentren follikul re Mantelzonen und interfollikul re Regionen 1
10. de mani re predominante l isoforme ABC et les monocytes et cellules dendritiques expriment de mani re pr dominante les isoformes B et 0 Les granulocytes expriment principalement et uniquement les isoformes B et 0 4 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone 2B11 1 et PD7 26 1 Isotype IgG kappa 2B11 Cellules n oplasiques isol es partir d un cas de lymphome leuc mie lymphocytes T 1 PD7 26 Lymphocytes de sang p riph rique humain conserv s sur le facteur de croissance des lymphocytes T 1 L anti CD45 est un m lange de deux anticorps monoclonaux clones 2B11 et PD7 26 dirig s contre diff rents pitopes Le clone 2B11 a t class comme un anti CD45 lors de la Third International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens Troisi me Conf rence et Atelier Internationaux sur les Antig nes de Diff renc
11. dritische Retikulumzellen vorwiegend die B und O Isoformen exprimieren Granulozyten exprimieren prinzipiell nur die B und O Isoformen 4 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon 2B11 1 und PD7 26 1 Isotyp IgG1 Kappa 2B11 Isolierte neoplastische Zellen aus einem Fall von T Zellen Lymphom Leuk mie 1 PD7 26 Menschliche Lymphozyten aus peripherem Blut in T Zell Wachstumsfaktor erhalten 1 Anti CD45 ist eine Mischung aus zwei monoklonalen Antik rpern Klon 2B11 und PD7 26 zum Nachweis unterschiedlicher Epitope Klon 2B11 wurde bei dem der Third International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens 3 Internationale r Workshop und Konferenz ber menschliche Leukozyten differenzierende Antigene als Anti CD45 geclustert und reagiert mit allen bekannten Isotypen der CD45 Familie 6 Klon PD7 26 wurde bei dem der Fifth International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differen
12. en nachgewiesen Diese Expression stellt jedoch kein differenzielles Diagnoseproblem dar das zu einer Fehlidentifizierung f hren k nnte 9 References References Literatur Warnke RA Gatter KC Falini B Hildreth P Woolston R E Pulford K et al Diagnosis of human Iymphoma with monoclonal antileukocyte antibodies N Engl J Med 1983 309 1275 81 2 Kurtin PJ Pinkus GS Leukocyte common antigen a diagnostic discriminant between hematopoietic and nonhematopoietic neoplasms in paraffin sections using monoclonal antibodies Correlation with immunologic studies and ultrastructural localization Hum Pathol 1985 16 353 65 3 Michie SA Spagnolo DV Dunn KA Warnke RA Rouse RV A panel approach to the evaluation of the sensitivity and specificity of antibodies for the diagnosis of routinely processed histologically undifferentiated human neoplasms Am J Clin Pathol 1987 88 457 62 4 Sewell WA Cooley MA Hegen M NL6 CD45 workshop panel report In Kishimoto T Kikutani H von dem Borne AEG Goyert SM Mason DY Miyasaka M et al editors Leucocyte typing VI White cell differentiation antigens Proceedings of the 6th International Workshop and Conference 1996 Nov 10 14 Kobe Japan New York London Garland Publishing Inc 1997 p 499 502 Saga Y Furukawa K Rogers P Tung JS Parker D Boyse EA Further data on the selective expression of Ly 5 isoforms Immunogenetics 1990 296 306 6 Cobbold S Hale G Waldmann H Non lineage LF
13. es le pr traitement des coupes tissulaires d paraffin es fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 Le systeme de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 Les tapes de coloration et d incubation sont pr programm es dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 uL ou FLEXRTUS volume de distribution de 300 uL Autoprogram CD45LCA sans contre coloration ou CD45LCAH avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables IS751 EFG MNI 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 4
14. f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Les tissus de contr le positifs doivent comprendre les amygdales et le cerveau et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance dans tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus R f 1S750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration membranaire mais une coloration cytoplasmique peut galement se produire Tissus sains Dans l amygdale l anticorps marque les centres germinatifs les zones du manteau folliculaire et les r gions interfolliculaires 1 Dans la rate la pulpe blanche et les cellules lympho des de la pulpe rouge sont positives ainsi que les lymphocytes thymiques les lymphocytes de la moelle osseuse les mastocytes les cellules de d rivation monocytaire probables et les plasmocytes occasionnels Un marquage variable des immunoblastes des histiocytes pith lio des des histiocytes sinusaux et des plasmocytes a t observ Les cellules my lo des les cellules rythro des les megacaryocytes les cellules de Langerhans de la peau de l epithelium et du tissu conjonctif ne sont
15. hatase activity Various leucocytes express characteristic CD45 isoforms thus T cells express CD45 isoforms corresponding to their development and activation B cells predominantly express the ABC isoform and monocytes and dendritic cells predominantly express the B and 0 isoforms Granulocytes principally express only the B and 0 isoforms 4 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Reagent provided Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone 2B11 1 and PD7 26 1 Isotype IgG1 kappa Immunogen 2B11 Isolated neoplastic cells from a case of T cell lymphoma leukemia 1 PD7 26 Human peripheral blood Iymphocytes maintained in T cell growth factor 1 Specificity Anti CD45 is a mixture of two monoclonal antibodies clones 2B11 and PD7 26 directed against different epitopes Clone 2B11 was clustered as anti CD45 at the Third International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens and reacts with all tne known isotypes of tne CD45 family 6 Clone PD7 26 was clustered as anti CD45RB at the Fifth International Workshop an
16. iation des Leucocytes Humains HLDA et r agit tous les isotypes connus de la famille du CD45 6 Le clone PD7 26 a t class comme un anti CD45RB lors de la Fifth International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens Cinqui me Conf rence et Atelier Internationaux sur les Antig nes de Diff renciation des Leucocytes Humains HLDA 7 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosives Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vide
17. ikum Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Consult instructions for use Batch code Voir les instructions d utilisation Numero de lot Gebrauchsanweisung beachten Chargenbezeichnung 115228 004 IS751 EFG MNI 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17
18. immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps marque la CD45 la fois dans les cellules normales et n oplasiques et il est utile pour identifier les cellules tumorales d origine lympho de 1 3 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi T200 4 Ly 5 5 La CD45 est une glycoprot ine transmembranaire exprim e sur la plupart des cellules nucl es d origine h matopo tique La CD45 cod e par un seul gene localis sur le chromosome 1 poss de plusieurs isoformes selon l pissage diff rentiel des exons 4 5 et 6 Sur les leucocytes humains cinq isoformes diff rents de la CD45 appel s ABC AB BC Beet 0 ont t identifi s Ces isoformes sont reconnus par les anticorps dirig s contre la CD45RA la CD45RB la CD45RC et la CD45R0 Les isoformes ont un poids mol culaire compris entre 180 000 et 220 000 Tous les isoformes de la CD45 partagent le m me segment intracellulaire qui poss de une activit tyrosine phosphatase Les divers leucocytes expriment des isoformes caract ristiques de la CD45 Ainsi les lymphocytes T expriment des isoformes de la CD45 correspondant leur d veloppement et leur activation les lymphocytes B expriment
19. ko Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper markiert CD45 sowohl in gesunden als auch in neoplastischen Zellen und dient zur Identifizierung von Tumorzellen Iymphoiden Ursprungs 1 3 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden T200 4 Ly 5 5 CD45 ist ein Transmembran Glykoprotein das auf den meisten nukleierten Zellen h matopoietischen Ursprungs exprimiert wird Von CD45 das von einem einzigen auf Chromosom 1 befindlichen Gen kodiert wird wurden aufgrund unterschiedlicher Splicing Vorg nge der Exonen 4 5 und 6 f nf verschiedene Isoformen ABC AB BC B und 0 identifiziert Diese Isoformen werden von Antik rpern gegen CD45RA CD45RB CD45RC und CD45RO nachgewiesen Das Mr der Isoformen liegt zwischen 180 000 und 220 000 Allen CD45 Isoformen gemeinsam ist das intrazellul re Segment das nachweislich eine Tyrosinphosphatase Aktivit t aufweist Verschiedene Leukozyten exprimieren charakteristische CD45 Isoformen weswegen T Zellen CD45 Isoformen exprimieren die ihrer Entwicklung und Aktivierung entsprechen B Zellen vorwiegend die ABC Isoform exprimieren und Monozyten und den
20. ma cells Variable labeling of immunoblasts epithelioid histiocytes sinus histiocytes and plasma cells has been reported Myeloid cells erythroid cells megakaryocytes Langerhans cells in skin epithelium and connective tissue are not labeled by the antibody 2 Band T cells in tonsil show a moderate to strong staining reaction whereas microglial cells in the brain show a weak to moderate staining reaction Abnormal tissues In non Hodgkin s lymphoma the neoplastic cells were labeled by the antibody in 40 40 100 of cases 1 In another study 2 the figure was 74 80 93 A third study 8 showed that 52 52 100 low grade B cell lymphomas 99 108 92 high grade B cell lymphomas and 41 44 93 T cell lymphomas were positive with the antibody Altogether 162 162 100 non Iymphoid neoplasms were negative with the antibody including small cell anaplastic carcinomas amelanotic melanomas alveolar rhabdomyosarcomas Ewing s sarcoma and germ cell tumors 1 2 Labeling of the surface membrane of mammary ductal cells in specimens of fibrocystic disease and fibroadenoma has been reported for the antibody This expression however is not considered to present a differential diagnostic problem that might lead to misidentification 9 Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD45 Leucocyte Common Antigen clones 2B11 PD7 26 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin une utilisation en
21. nt indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L amp paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pr traitement avec demasquage d Epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de details se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le Dako PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Coupes d paraffin
22. on times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols required but not supplied Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram CD45LCA without counterstaining or CD45LCAH with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operators Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory Ifthe evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous 11522
23. pas marqu s par l anticorps 2 Les lymphocytes B et T dans les amygdales ont pr sent une coloration mod r e forte tandis que la coloration des cellules microgliales du cerveau tait faible mod r e Tissus tumoraux Dans le cas du lymphome non hodgkinien les cellules n oplasiques ont t marqu es par l anticorps dans 40 40 des cas 100 1 Dans une autre tude 2 le chiffre tait de 74 80 93 Une troisi me tude 8 a montr que 52 52 100 des lymphomes lymphocytes B de faible grade 99 108 92 des lymphomes lymphocytes B de grade lev et 41 44 93 des lymphomes lymphocytes T taient marqu s positivement par l anticorps Dans l ensemble 162 162 100 des n oplasmes non lympho des taient n gatifs l anticorps y compris les carcinomes anaplasiques petites cellules les m lanomes non m laniques les rhabdomyosarcomes alv olaires le sarcome d Ewing et les tumeurs des cellules germinales 1 2 Un marquage par l anticorps de la membrane de surface des cellules canalaires de la glande mammaire dans les chantillons de fibroad nome et de maladie fibrokystique a t observ Cette expression cependant n est pas consid r e comme pr sentant un probl me de diagnostic diff rentiel susceptible d entra ner une identification erron e 9 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD45 Leucocyte Common Antigen Clones 2B11 PD7 26 Ready to Use Da
24. t ndigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden IS751 EFG MNI 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem
25. tiation Antigens 5 Internationale r Workshop und Konferenz ber menschliche Leukozyten differenzierende Antigene als Anti CD45RB geclustert 7 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu vers
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