FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human IgA Ready-to
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1. La population de lymphocytes B normaux est polyclonale et exprime un grand nombre de mol cules d immunoglobulines diff rentes En revanche une majorit de n oplasies lymphocytes B est caract ris e par la prolif ration de cellules monoclonales exprimant un seul type de cha ne l g re alors que plusieurs cha nes lourdes peuvent tre exprim es par la m me cellule L expression restreinte des immunoglobulines par les prolif rations de lign es cellulaires B monoclonales rend les anticorps sp cifiques aux cha nes l g res et lourdes d immunoglobulines utiles pour l identification et l isotypage de ces n oplasies 6 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du systeme de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps polyclonal de lapin pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium IgA isol e partir d un pool de serums humains normaux L anticorps r agit aux cha nes alpha des IgA humaines Les traces d anticorps contaminants ont t limin es par absorption en phase2. 9 FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human IgA Ready to Use CE Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS510 ENGLISH Intended use Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 115313 002 For in vitro diagnostic use FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human IgA Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for the identification of plasma cells and related Iymphoid cells containing IgA and it is a useful tool for the classification of patients with B cell neoplasias 1 3 Additionally the antibody may be used for distinguishing neoplastic monoclonal proliferation from reactive hyperplasia of plasma cells 1 4 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist The human immunoglobulins basically consist of two identical heavy chains Mr about 50 000 and two identical light chains Mr about 20 000 The four chains are covalently linked together by disulphide bonds The light chains are either kappa or lambda
3. 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger polyklonaler Kaninchen Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L NaN enth lt Aus gepooltem gesundem Humanserum isoliertes IgA Der Antik rper reagiert mit den Alpha Ketten des humanen IgA Spuren von Verunreinigungen durch Antik rper wurden durch Festphasen Absorption mit Humanplasmaproteinen entfernt Die Spezifit t dieses Antik rpers wurde wie folgt ermittelt Gekreuzte Immunelektrophorese Bei Verwendung von 12 5 uL konzentriertem Antik rper pro Quadratzentimeter Gelfl che gegen 2 uL Humanplasma erscheint nur die halbmondf rmige IgA Immunpr zipitatlinie F rbung Coomassie Brilliant Blue ELISA Im indirekten ELISA wurde bei Nutzung von menschlichem IgG und IgM als Coating Antigene keine signifikante Reaktion festgestellt Beim Doppelantik rper Sandwich ELISA wurde bei Humanplasma das frei von IgA war keine signifikante Reaktion beobachtet 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung
4. The five immunoglobulins IgA IgD IgE IgG and IgM differ regarding the heavy chains and IgA and IgM also occur in polymeric forms The heavy chain of IgA is named the alpha chain In serum about 80 of IgA is monomeric while in secretions such as saliva intestinal and bronchial mucus nasal secretions sweat and breast milk and colostrum the predominant form is the dimeric secretory IgA sigA Besides 4 light chains and 4 alpha chains dimeric sigA also contains a J chain and a secretory component The latter protects sigA against secretory proteases The Mr of dimeric sigA is 390 000 5 The normal B cell population is polyclonal and expresses a range of different immunoglobulin molecules In contrast a majority of B cell neoplasias are characterized by the proliferation of monoclonal cells expressing only one type of light chain whereas more than one heavy chain can be expressed by the same cell The restricted expression of immunoglobulins by monoclonal B cell lineage proliferations makes antibodies specific for immunoglobulin light and heavy chains useful for the identification and isotyping of these neoplasias 6 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 Ge
5. solide en utilisant des prot ines de plasma humain La sp cificit de l anticorps a t tablie comme suit Immuno lectrophor se crois e Seul l arc d immunopr cipitation des IgA appara t lorsqu on utilise 12 5 uL d anticorps concentr par cm de gel contre 2 uL de plasma humain Coloration Bleu de Coomassie ELISA Aucune r action significative n est observ e dans les tests ELISA indirects utilisant des IgG et des IgM humaines comme antig nes de surface Lors d un test ELISA sandwich aucune r action significative n a t observ e avec le plasma humain lav des IgA 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas
6. stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen IS510 EFG MNI 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Lagerung Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl sch chen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Vorbereitung der Probe Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte und erforderliche aber von ca 4 um St rke geschnitten werden nicht mitgelieferte Die Vo
7. X Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent IS510 EFG MNI 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance DEUTSCH Zweckbestimmung Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifitat Vorsichtsma nahmen 115313 002 Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires deparaffinees fix es au formol et incluses en paraffine est recommand a l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 Le syst me de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 Les tapes de coloration et d incubation sont pr programm es dans le lo
8. al regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffi
9. e d une hyperplasie r active des cellules plasmatiques 1 4 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi La structure de base des immunoglobulines humaines comprend deux cha nes lourdes identiques poids mol culaire d environ 50000 et deux cha nes l g res identiques poids mol culaire d environ 20000 Ces quatre cha nes sont li es entre elles par des liaisons covalentes gr ce des ponts disulfures Il y a deux types de cha nes l g res kappa ou lambda Les cinq classes d immunoglobulines IgA IgD IgE IgG et IgM se differencient par leurs cha nes lourdes Les IgA et IgM sont aussi pr sentes sous forme polym rique La cha ne lourde d IgA est appel e cha ne alpha Dans le s rum environ 80 des IgA sont monom res alors que dans les s cr tions comme la salive le mucus intestinal et bronchique les s cr tions nasales la sueur ainsi que dans le lait maternel et le colostrum la forme pr dominante est l IgA s cr toire dim re IgAs Outre les 4 cha nes l g res et les 4 cha nes alpha les IgAs dim res contiennent une cha ne J et un composant s cr toire Ce dernier prot ge les IgAs des prot ases s cr toires La masse mol culaire des IgAs dim res est de 390 000 5
10. e retrouv e dans le s rum ou les urines Une nette distinction entre hyperplasie r active et n oplasie lymphocytes B monoclonale a t obtenue lorsque l anticorps a t utilis en association avec un panel d autres anticorps dirig s contre des immunoglobulines 2 et en particulier avec des anticorps dirig s contre des cha nes l g res 5 Zur In vitro Diagnostik FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human IgA Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper dient zur Erkennung von Plasmazellen und damit in Zusammenhang stehenden Lymphoidzellen mit IgA und hat sich f r die Klassifizierung von Patienten mit B Zell Neoplasien als n tzlich erwiesen 1 3 Au erdem erm glicht der Antik rper eine Differenzierung zwischen neoplastischer monoklonaler Proliferation und reaktiver Hyperplasie von Plasmazellen 1 4 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit geeigneten Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer diagnostischer Tests des Patienten vorgenommen werden Die menschlichen Immunglobuline bestehen im Prinzip aus zwei identischen H Ketten Mr ca 50 000 und zwei identischen L Ketten Mr ca 20 000 Die vier Ketten sind ber Disulfidverbindungen kovalent miteinander v
11. egative Control Rabbit Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS600 The cellular staining pattern is cytoplasm and or the cell membrane Normal tissues Anti IgA detects IgA in plasma cells of lymph nodes and tonsil in external seromucous secretions saliva tears nasal fluid colostrum and secretions of the lung and internal secretions synovial amniotic cerebrospinal fluid gastrointestinal 7 8 Abnormal tissues In two studies investigating 33 2 and 29 3 paraffin embedded tissues from cases of plasma cell neoplasia of various types the labeling with the antibody showed a good correlation with the monoclonal immunoglobulin found in serum or urine A clear distinction between reactive hyperplasia and monoclonal B cell neoplasia was obtained when the antibody was used in combination with a panel of other antibodies to immunoglobulins 2 and particularly with antibodies to light chains 5 Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human IgA Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Autostainer Link Cet anticorps facilite l identification des cellules plasmatiques et des cellules Iymphoides associ es contenant des IgA et s av re utile dans la classification des patients pr sentant des n oplasies lymphocytes B 1 3 De plus cet anticorps peut tre utilis pour diff rencier une prolif ration monoclonale n oplasiqu
12. erbunden Bei den L Ketten handelt es sich entweder um Ketten des Kappa oder des Lambda Typs Die f nf Immunglobuline IgA IgD IgE IgG und IgM unterscheiden sich hinsichtlich der H Ketten IgA und IgM treten auch in polymeren Formen auf Die H Kette von IgA wird als Alpha Kette bezeichnet Im Serum sind rund 80 von IgA monomerisch w hrend in Sekreten wie z B Speichel Darm und Bronchialmukus Nasensekreten und Schwei sowie in Milch und Vormilch der Brust das dimere sekretorische IgA sigA vorherrscht Neben 4 L Ketten und 4 Alpha Ketten enth lt dimeres sigA auch eine J Kette und eine sekretorische Komponente Letztere sch tzt das sigA vor sekretorischen Proteasen Dimeres sigA hat ein Mr von 390 000 5 Die gesunde B Zellenpopulation ist polyklonal und exprimiert eine Reihe unterschiedlicher Immunglobulinmolek le Dagegen zeichnet sich ein Gro teil der B Zellen Neoplasmen durch eine Proliferation monoklonaler Zellen aus die nur einen L Kettentyp jedoch mehr als einen H Kettentyp exprimieren k nnen Durch die eingeschr nkte Expression von Immunglobulinen durch geradlinige Proliferationen monoklonaler B Zellen ist der Antik rper spezifisch f r L und H Ketten des Immunglobulins und somit n tzlich zur Erkennung und Isotypisierung dieser Neoplasmen 6 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip
13. erformance I est recommand d effectuer une contre coloration l aide de EnVision M FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre l amygdale et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Rabbit Dako Autostainer Autostainer Plus R f IS600 Le sch ma de coloration cellulaire est cytoplasmique et ou membranaire Tissus sains L anti IgA d tecte les IgA dans les cellules plasmatiques des ganglions lymphatiques et de l amygdale dans les s cr tions s ro muqueuses externes salive larmes s cr tions nasales colostrum et s cr tions du poumon et dans les s cr tions internes liquide synovial liquide amniotique liquide c phalorachidien et s cr tions gastro intestinales 7 8 Tissus tumoraux Dans deux tudes portant sur 33 2 et 29 3 tissus inclus en paraffine provenant de cas de n oplasie cellulaire plasmatique de divers types le marquage par l anticorps a pr sent une forte corr lation avec l immunoglobuline monoclonal
14. giciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 uL ou FLEXRTUS3 volume de distribution de 300 uL Autoprogram IgA sans contre coloration ou IgAH avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela garantit des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur la plateforme Dako Autostainer utilis e contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp amp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de p
15. ining interpretation Performance characteristics FRANCAIS Utilisation prevue Resume et explication Reactifs fournis Immunogene Specificite Precautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni 115313 002 If the protocols are not available on the used Dako Autostainer platform please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include tonsil and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX N
16. mmunohistology London Oxford University Press 1999 p 217 9 Curran RC Gregory J Demonstration of immunoglobulin in cryostat and paraffin sections of human tonsil by immunofluorescence and immunoperoxidase techniques Effects of processing on immunohistochemical performance of tissues and on the use of proteolytic enzymes to unmask antigens in sections J Clin Pathol 1978 31 974 Brandtzaeg P Baklien K Immunoglobulin producing cells in the intestine in health and disease Clin Gastroenterol 1976 5 2 251 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole Catalogue number Temperature limitation Use by R f rence catalogue Limites de temp rature Utiliser avant Bestellnummer Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis In vitro diagnostic medical device Contains sufficient for lt n gt tests Manufacturer Dispositif m dical de diagnostic in vitro Contenu suffisant pour lt n gt tests Fabricant In vitro Diagnostikum Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Consult instructions for use Batch code Voir les instructions d utilisation Num ro de lot Gebrauchsanweisung beachten Chargenbezeichnung 115313 002 IS510 EFG MNI 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17
17. ne ausgepr gte Korrelation mit dem monoklonalen Immunglobulin das im Serum oder Urin nachgewiesen worden war Eine deutliche Differenzierung zwischen reaktiver Hyperplasie und monoklonaler B Zell Neoplasie wurde erhalten wenn der Antik rper zusammen mit einem Panel weiterer Antik rper gegen Immunglobuline 2 eingesetzt wurde Dies traf insbesondere auf Antik rper mit L Ketten zu 5 References References Literatur 1 2 Taylor CR Burns J The demonstration of plasma cells and other immunoglobulin containing cells in formalin fixed paraffin embedded tissues using peroxidase labeled antibody J Clin Pathol 1974 27 14 20 Taylor CR Mason DY The immunohistological detection of intracellular immunoglobulin in formalin paraffin sections from multiple myeloma and related conditions using the immunoperoxidase technique Clin exp Immunol 1974 18 417 29 Taylor CR Russell R Chandor S An immunohistologic study of multiple myeloma and related conditions using an immunoperoxidase method Am J Clin Pathol 1978 70 612 22 Beschorner R Horny H P Petrusch UR Kaiserling E Frequent expression of haemopoietic and non haemopoietic antigens by reactive plasma cells an immunohistochemical study using formalin fixed paraffin embedded tissue Histol Histopathol 1999 14 805 12 Klein J Ho ej i V Immunology 2nd ed Abingdon UK Blackwell Science Ltd 1999 p 226 7 238 46 Leong ASY Cooper K Leong FJWA Manual of diagnostic antibodies for i
18. neral Limitations Ready to use polyclonal rabbit antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L NaN IgA isolated from a pool of normal human sera The antibody reacts with the alpha chains of human IgA Traces of contaminating antibodies have been removed by solid phase absorption with human plasma proteins The specificity of the antibody has been ascertained as follows Crossed immunoelectrophoresis Only the IgA immunoprecipitation arch appears when using 12 5 uL concentrated antibody per square cm gel area against 2 uL human plasma Staining Coomassie Brilliant Blue ELISA No significant reaction is seen in indirect ELISA using human IgG and IgM as coating antigens In double antibody sandwich ELISA no significant reaction is observed with human plasma stripped of IgA 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Feder
19. nized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin embedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTUS3 300 uL dispense volume Autoprogram IgA without counterstaining or IgAH with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument IS510 EFG MNI 2009 12 04 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Sta
20. pfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 Die F rbeschritte und und erforderliche aber Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert nicht mitgelieferte Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 uL Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 uL Abgabevolumen Materialien Autoprogram IgA ohne Gegenf rbung oder IgAH mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dieses gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnenmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert we
21. rbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Materialien Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen F rbeverfahren Das em
22. rden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Mandelgewebe enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene negative Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Rabbit Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS600 Auswertung der F rbung Das zellul re F rbemuster ist zytoplasmatisch und oder membran s Leistungsmerkmale Gesundes Gewebe Anti IgA erkennt IgA in Plasmazellen von Lymphknoten und Mandelgewebe in externen seromuk sen Sekretionen Speichel Tr nen Nasenfl ssigkeit Colostrum und Sekretionen der Lunge und in internen Sekretionen Gelenkfl ssigkeit Fruchtwasser Hirn R ckenmarksfl ssigkeit Magensaft 7 8 Pathologisches Gewebe In zwei Studien wurden 33 2 und 29 3 paraffineingebettete Gewebeschnitte untersucht die von F llen von Plasmaneoplasien unterschiedlicher Typen gewonnen worden waren Die Markierung mit dem Antik rper zeigte ei
23. utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il ny a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probleme li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L epaisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pretraitement avec d masquage d pitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le Dako PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVision FLE
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