Monoclonal Mouse
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1. English Intended use Synonyms for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions 117026 001 CE FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Tyrosinase Clone T311 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code 15061 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Tyrosinase Clone T311 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for the identification of melanocytic lesions and melanoma The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist T311 EC 1 14 18 1 Tyrosinase is a copper glycoenzyme involved in the production of melanin pigments including both eumelanin and pheomelanin 1 3 In this process tyrosinase catalyzes the hydroxylation of L tyrosine to L dopa and the oxidation of L dopa to L dopaquinone 1 3 As a marker of melanocytic lineage tyrosinase is localized to melanocytes which can be found on the dermal epidermal junction of normal skin but is not detected in other normal cells 2 Pigmented parts of the eye such as the choroid and iris also contain melanocytes Expression of tyrosinase is also found in2. Eine Tyrosinase Expression liegt ferner in melanozytischen L sionen wie benignen Naevi bei der Mehrzahl der prim ren und metastatisierenden malignen Melanome sowie bei nicht melanozytischen Tumortypen vor 2 4 5 Au erdem wird die Tyrosinase durch autologe zytotoxische T Zellen von Melanompatienten erkannt weshalb Tyrosinasepeptide in Impfstoffen gegen Melanome eingesetzt werden 6 7 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualitatskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L NaN enth lt Klon T311 Isotyp IgG2a Kappa Gereinigtes rekombinantes nicht glykosyliertes Tyrosinaseprotein aus 452 Aminos uren des aus insgesamt 511 Aminos uren bestehenden reifen humanen Tyrosinaseproteins 1 Immunblotting erfolgte an mit dem Tyrosinase Gen transfizierten L Zellen sowie den vier Tyrosinase mRNA exprimierenden Zelllinien SK MEL 13 SK MEL 19 SK MEL 30 und SK MEL 37 1 In bereinstimmung mit fr heren Berichten erkannte Klon T311 in den Immunblots aller f nf Zelllinien einen Cluster von
3. nkt ist 2 307138EFG_001 p 6 7 References 1 Chen YT Stockert E Tsang S Coplan KA Old LJ Immunophenotyping of melanomas for tyrosinase Bibliographie implications for vaccine development Proc Natl Acad Sci USA 1995 92 18 8125 8129 Literaturangaben 2 Jungbluth AA Iversen K Coplan K Kolb D Stockert E Chen YT Old LJ Busam K T311 an anti tyrosinase monoclonal antibody for the detection of melanocytic lesions in paraffin embedded tissues Pathol Res Pract 2000 196 4 235 242 3 Garcia Borron JC Solano F Molecular anatomy of tyrosinase and its related proteins beyond the histidine bound metal catalytic center Pigment Cell Res 2002 15 3 162 173 4 Clarkson KS Sturdgess IC Molyneux AJ The usefulness of tyrosinase in the immunohistochemical assessment of melanocytic lesions a comparison of the novel T311 antibody anti tyrosinase with S 100 HMB45 and A103 anti melan A J Clin Pathol 2001 54 3 196 200 5 Hofbauer GF Kamarashev J Geertsen R Boni R Dummer R Tyrosinase immunoreactivity in formalin fixed paraffin embedded primary and metastatic melanoma frequency and distribution J Cutan Pathol 1998 25 4 204 209 6 Slingluff CL Jr Petroni GR Yamshchikov GV Barnd DL Eastham S Galavotti H Patterson JW Deacon DH Hibbitts S Teates D Neese PY Grosh WW Chianese Bullock KA Woodson EM Wiernasz CJ Merrill P Gibson J Ross M Engelhard VH Clinical and immunologic results of a randomized phase Il trial of vaccin
4. 1 14 18 1 La tyrosinase est une enzyme glycosyl e contenant du cuivre et impliqu e dans la production des pigments de m lanine y compris l eumelanine et la ph om lanine 1 3 Lors du processus la tyrosinase catalyse hydroxylation de la L tyrosine en L dopa et l oxydation de la L dopa en L dopaquinone 1 3 En tant que marqueur du lignage m lanocytaire la tyrosinase est localis e dans les m lanocytes situ s au niveau de la jonction derme piderme de la peau saine mais elle n est pas d tect e dans d autres cellules 2 Les parties pigmentees de l il telles que la choroide et l iris contiennent galement des melanocytes La tyrosinase est galement exprim e dans les l sions m lanocytaires y compris les grains de beaut b nins et dans la majorit des melanomes malins primaires et m tastatiques mais elle n est pas exprim e dans les types de tumeurs non m tastatiques 2 4 5 De plus la tyrosinase peut tre reconnue par les lymphocytes T cytotoxiques autologues chez des patients atteints de m lanomes et par cons quent les peptides de la tyrosinase sont utiles dans les vaccins contre le m lanome 6 7 Se r f rer aux nstructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du systeme de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des c
5. dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li a l anticorps contacter l assistance technique de Dako 307138EFG 001 p 3 7 Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance 117026 001 L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Le pr traitement avec un d masquage d epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pretraitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 K8014 Coupes d paraffin es Le pr traitement des coupes de tissus d paraffin s fix s au formol et inclus en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice pour la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 K8014 Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Link Temp rature de pr chauffage 65 C temp rature et dur e de restauration de l
6. l anticorps ne pr sente pas de r action crois e la prot ine associ e aux m lanosomes TRP 1 gp75 1 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption imprim e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc
7. melanocytic lesions including benign nevi and the majority of primary and metastatic malignant melanomas and not in non melanocytic tumor types 2 4 5 Additionally tyrosinase can be recognized by autologous cytotoxic T cells from melanoma patients and therefore tyrosinase peptides have utility in melanoma vaccines 6 7 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L NaNs Clone T311 Isotype IgG2a kappa Purified recombinant unglycosylated tyrosinase protein consisting of 452 amino acids of the 511 amino acid mature human tyrosinase protein 1 Immunoblotting was performed using L cells transfected with the tyrosinase gene and on four cell lines that express tyrosinase MRNA SK MEL 13 SK MEL 19 SK MEL 30 and SK MEL 37 1 Consistent with previous reports a cluster of proteins ranging from 70 80 kDa was recognized by clone T311 in immunoblots of all five cell lines 1 An additional 55 kDa band was stained in blots from cell lines that are strongly reactive SK MEL 19 1 Furthermore immunoblots of untransfected L ce
8. Proteinen mit Molekulargewichten zwischen 70 80 kDa 1 Eine weitere 55 kDa Bande wurde in Blots stark reaktiver Zelllinien SK MEL 19 gef rbt 1 Dar ber hinaus waren Immunblots nicht transfizierter L Zellen sowie die drei keine Tyrosinase mRNA exprimierenden Zelllinien MZ2 MEL3 1 SK MEL 187 und MZ2 MEL2 2 mit Klon T311 negativ 1 Ferner blieben in Immunfluoreszenz und Immunblottingtests auch mit dem tyrosinase hnlichen Protein 1 TRP 1 gp75 transfizierte L Zellen mit Klon T311 unreaktiv ein Anzeichen daf r dass dieser Antik rper nicht mit dem melanosomassoziierten Protein TRP 1 gp75 kreuzreagiert 1 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen HS Bei 2 8 C aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen B
9. ation using four melanoma peptides either administered in granulocyte macrophage colony stimulating factor in adjuvant or pulsed on dendritic cells J Clin Oncol 2003 21 21 4016 4026 7 Zajac P Oertli D Marti W Adamina M Bolli M Guller U Noppen C Padovan E Schultz Thater E Heberer M Spagnoli G Phase I II clinical trial of a nonreplicative vaccinia virus expressing multiple HLA A0201 restricted tumor associated epitopes and costimulatory molecules in metastatic melanoma patients Hum Gene Ther 2003 14 16 1497 1510 Catalogue number d Temperature limitation In vitro diagnostic medical device R f rence du catalogue Limites de temp rature Dispositif m dical de diagnostic in vitro oul Bestellnummer Zulassiger Temperaturbereich In vitro Diagnostikum LEC REP Manufacturer Batch code Contains sufficient for lt N gt tests ee ea ee l i 6392 Via Real Produktionsvej 42 oul ranan Bau R Poen a podrai 1st Carpinteria California 93013 USA DK 2600 Glostrup Denmark Hersteller Chargenbezeichnung Inhalt ausreichend f r n Ans tze Tel 805 566 6655 Tel 45 4485 9500 Fax 805 566 6688 Fax 45 4485 9595 Technical Support 800 424 0021 Customer Service 800 235 5763 www dako com Use by Consult instructions for use Authorized representative in the European Community T Utiliser jusque pA Consulter les instructions d utilisation EC REP Repr sentant Autoris dans la Communaut Europ enne Verwendbar bis Gebrauchsanweisung beachten Autoris
10. atrix Protokoll FLEXRTU2 200 ul Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 ul Abgabevolumen Autoprogram ohne Gegenf rbung Tyr oder Autoprogram mit Gegenf rbung TyrH Bei Farbedurchlaufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dies gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssrige
11. der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 K8014 durchf hren F r PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorwarmtemperatur 65 C Temperatur und Zeit f r Epitopdemaskierung 97 C f r 20 1 Minuten auf 65 C abk hlen lassen Schnitte mit auf Raumtemperatur gebrachtem verd nntem EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 absp len Paraffineingebettete Schnitte Zur Probenpraparation kann f r Entparaffinierung und Epitopdemaskierung im PT Link auch ein modifiziertes Verfahren verwendet werden Weitere Informationen siehe PT Link Benutzerhandbuch Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und unter Verwendung eines permanenten Fixiermittels auf die Objekttr ger aufgebracht werden Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder w hrend des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von Dako Silanized Slides Code Nr S3003 empfohlen Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert M
12. e r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application specialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d hematoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis
13. edingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen 307138EFG_001 p 5 7 Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale 117026 001 Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER ist erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 K8014 erzielt werden Entparaffinierte Schnitte Die Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte sollte mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 erfolgen Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Vorbehandlung gem
14. epitope 97 C pour 20 1 minutes laisser refroidir jusqu 65 C Rincer les coupes avec un EnVision FLEX Wash Buffer 10x dilu temp rature ambiante Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 Coupes incluses en paraffine Comme pr paration alternative des chantillons le d paraffinage et la restauration de l pitope peuvent tre r alis s dans le PT Link l aide d une proc dure modifi e Se r f rer aux instructions du Guide d utilisation du PT Link Une fois que la proc dure de coloration est termin e les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ou lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames Dako Silanized Slides R f S3003 Le systeme de visualisation recommande est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 Les tapes de coloration et d incubation sont preprogrammees dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 ul ou FLEXRTU3 volume de distribution de 300 ul Autoprogram sans contre coloration Tyr ou Autoprogram avec contre coloration TyrH L tape Auxiliary doit tr
15. hantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone T311 Isotype IgG2a kappa Prot ine tyrosinase purifi e non glycosyl e recombinante compos e de 452 acides amin s provenant de la prot ine tyrosinase humaine mature de 511 acides amin s 1 Un immunoblot a t r alis l aide de cellules L transfect es avec le g ne de la tyrosinase et sur quatre lign es cellulaires exprimant ARNm de la tyrosinase SK MEL 13 SK MEL 19 SK MEL 30 et SK MEL 37 1 Conform ment des rapports ant rieurs un groupe de prot ines de poids mol culaire allant de 70 80 kDa ont t reconnues par le clone T311 dans les immunoblots des cinq lign es cellulaires 1 Une bande suppl mentaire de 55kDa tait color e dans les blots des lign es cellulaires fortement positives SK MEL 19 1 En outre les immunoblots de cellules L non transfect es et de trois lign es cellulaires MZ2 MEL3 1 SK MEL 187 et MZ2 MEL2 2 n exprimant pas ARNm de la tyrosinase taient n gatives au clone T311 1 Les cellules L transfect es avec la prot ine 1 li e la tyrosinase TRP 1 gp75 n ont pas non plus r agi au clone T311 lors de tests d immunofluorescence et d immunoblot ce qui indique que
16. ierter Repr sentant in der EU PT0020 Rev C Edition 09 07 117026 001 307138EFG_001 p 7 7
17. lls and three cell lines that do not express tyrosinase MRNA MZ2 MEL3 1 SK MEL 187 and MZ2 MEL2 2 were negative with clone T311 1 L cells transfected with the tyrosinase related protein 1 TRP 1 gp75 were also unreactive with clone T311 in immunofluorescent and immunoblotting assays indicating this antibody does not cross react with the melanosome associated protein TRP 1 gp75 1 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaNsz a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations gi e g 307138EFG_001 p 1 7 Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied Staining interpretation Performance characteristics 117026 001 Store at 2 8 C Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by
18. nocytes of the skin remained negative 1 2 Abnormal tissues Clone T311 was tested on benign and malignant melanocytic lesions and was found to stain the majority of benign nevi and melanomas tested Low tyrosinase immunoreactivity was observed in melanomas of the desmoplastic and spindle cell type 1 2 4 5 The specificity of anti Tyrosinase for melanocytic lesions has been demonstrated by immunostaining more than 70 different non melanocytic tumors types with no immunoreactivity found indicating that expression of tyrosinase is restricted to cells of melanocytic lineage 2 307138EFG_001 p 2 7 Fran ais Utilisation pr vue Synonymes de l antig ne R sum et explication R actifs fournis Immunog ne Sp cificit Pr cautions Conservation 117026 001 Ref 15061 Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Tyrosinase clone T311 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destine a une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps est pr cieux pour l identification des l sions melanocytaires et des m lanomes L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi T311 EC
19. ns As alternative specimen preparation both deparaffinization and epitope retrieval can be performed in the PT Link using a modified procedure See the PT Link User Guide for instructions After the staining procedure has been completed the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of Dako Silanized Slides Code 3003 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram without counterstaining Tyr or Autoprogram with counterstaining TyrH The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dak
20. o Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnvVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include melanocytes of the basal layer and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 The cellular staining pattern is cytoplasmic and or perinuclear Normal tissues A panel of 33 normal tissues was tested with anti Tyrosinase clone T311 using immunohistochemistry and only skin was positive 2 In normal skin melanocytes were immunoreactive while basal kerati
21. ovenant d un lignage m lanocytaire 2 307138EFG_001 p 4 7 Deutsch Zweckbestimmung Synonyme f r das Antigen Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifit t Vorsichtsma nahmen Lagerung 117026 001 Code Nr 15061 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Tyrosinase Clone T311 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper dient zur Erkennung von melanozytischen L sionen und Melanomen Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden T311 EC 1 14 18 1 Tyrosinase ist ein an der Produktion von Melaninpigmenten einschlie lich Eumelanin und Pheomelanin beteiligtes Kupfer Glykoenzym 1 3 Hierbei katalysiert die Tyrosinase die Hydroxylierung von L Tyrosin zu L Dopa sowie die Oxidation von L Dopa zu L Dopaquinon 1 3 Als Marker f r den melanozytischen Ursprung kommt Tyrosinase auf den Melanozyten aus dem Bereich der dermo epidermalen Verbindung gesunder Haut vor nicht jedoch in anderen gesunden Zellen 2 Pigmentierte Bereiche der Augen wie Choroidea oder Iris enthalten ebenfalls Melanozyten
22. s permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Melanozyten der Basalschicht enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Das zellul re F rbemuster ist zytoplasmatisch und oder perinukle r Gesundes Gewebe Ein Panel von 33 gesunden Geweben wurde mit Anti Tyrosinase Klon 1311 immunhistochemisch untersucht wobei nur Hautgewebe eine positive Reaktion zeigte 2 In gesunder Haut waren die Melanozyten immunreaktiv die basalen Keratinozyten der Haut blieben hingegen negativ 1 2 Pathologisches Gewebe Klon T311 wurde an benignen und malignen melanozytischen L sionen getestet Es markierte die meisten untersuchten benignen Naevi und Melanome Eine nur geringe Tyrosinase Immunreaktivit t wurde bei desmoplastischen und Spindelzellmelanomen beobachtet 1 2 4 5 Die Spezifit t von Anti Tyrosinase f r melanozytische L sionen wurde durch Immunf rbungen an ber 70 verschiedenen nicht melanozytischen Tumortypen aufgezeigt die durchweg keine Immunreaktivit t aufweisen was darauf hindeutet dass die Tyrosinase Expression auf Zellen melanozytischen Ursprungs beschr
23. s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre les m lanocytes de la couche basale et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus R f IS750 Le sch ma de coloration cellulaire est cytoplasmique et ou p rinucl aire Tissus sains Un panel de 33tissus sains a t test avec l anticorps anti tyrosinase clone T311 par immunohistochimie et seule la peau s est av r e positive 2 Dans la peau saine les m lanocytes taient immunor actifs alors que les k ratinocytes basaux de la peau sont rest s n gatifs 1 2 Tissus tumoraux Le clone T311 a t test sur des l sions melanocytaires benignes et malignes et il a marqu la majorit des grains de beaut b nins et des m lanomes test s On a observ une faible immunor activit de la tyrosinase dans les m lanomes de type cellulaire fusiforme et desmoplastique 1 2 4 5 La sp cificit de l anticorps anti tyrosinase pour les l sions m lanocytaires a t d montr e en colorant plus de 70 types de tumeurs non m lanocytaires diff rentes n ayant aucune immunor activit Ceci indique que l expression de la tyrosinase est restreinte aux cellules pr
24. the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 K8014 Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 K8014 The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 C epitope retrieval temperature and time 97 C for 20 1 minutes cool down to 65 C Rinse sections with diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 Paraffin embedded sectio
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