EnVision™ FLEX+, Mouse, High pH, (Link)
Contents
1. tre clairement diff renci e de la coloration sp cifique le marquage de l chantillon a analyser doit tre consid r comme non valide Interpr tation des r sultats La solution de travail du substrat contenant de la diaminobenzidine produit une coloration brune sur le site de l antig ne cible reconnu par l anticorps primaire La couleur brune doit tre pr sente sur l echantillon de contr le positif l o l antig ne cible est attendu Si une coloration non sp cifique est pr sente ceci sera identifi comme une coloration brune diffuse sur les lames trait es avec le r actif de contr le n gatif Les noyaux seront color s en bleu par le contre colorant h matoxyline Limites 1 Pour une utilisation automatis e sur les appareils Autostainer Link uniquement Lors de la r alisation de colorations manuelles la proc dure optimale doit tre d termin e et v rifi e par Putilisateur moins qu elle soit sp cifi e dans la notice de l anticorps primaire sp cifique de Dako 2 R serv a une utilisation sur des coupes de tissus fix es au formol et incluses en paraffine uniquement Lors de l utilisation de coupes congel es ou de frottis cellulaires la proc dure optimale doit tre d termin e et v rifi e par l utilisateur moins qu elle soit sp cifi e dans la notice de l anticorps primaire sp cifique de Dako Des modifications apport es la proc dure peuvent avoir une influence sur le nombre de tests q2. Entnahme und Vorbereitung der Probe Als Proben kommen formalinfixierte paraffineingebettete Gewebeschnitte in Betracht Die Fixation h ngt von Art Dicke des Fixationsmittels und des Gewebes ab Zum Beispiel sollten Gewebebl cke mit einer Dicke von 3 4 mm in neutral gepuffertem Formalin 18 24 Stunden fixiert werden Die optimale Dicke paraffineingebetteter Schnitte betr gt etwa 4 um 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 25 30 Die Proben sollten auf Objekttr ger zum Beispiel FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 aufgebracht werden Die Schnitte so flach und faltenfrei wie m glich auf den Objekttr gern aufbringen Zu viele Falten wirken sich negativ auf die F rbungsergebnisse aus HINWEIS Die Gr e der Objekttr ger muss zum Autostainer Link Ger t passen Angaben zu geeigneten Mikroskop Objekttr gern bitte dem Bedienungshandbuch des jeweiligen Dako Ger ts entnehmen Paraffineingebettete Schnitte sollten aus einem vorgew rmten Wasserbad mit destilliertem oder entionisiertem Wasser heraus fixiert werden Dieses Wasserbad darf keine Zus tze enthalten wie z B Gelatine Poly L Lysin usw Die Schnitte werden bis zu 60 Minuten lang unter W rme getrocknet gew hnlich bei einer Temperatur von h chstens 60 Damit die Schnitte gut auf den Objekttr gern haften muss vor dem Trockenprozess im Ofen alles Wasser unter den Schnitten entfernt worden sein Verfahren Um optimale F rbungsergebnisse zu erzielen arbeiten
3. the specimens must be mounted It is recommended to perform dehydration clearing and permanent mounting when slides have been treated with the 3 in 1 specimen preparation procedure Slides treated with HIER procedure can be mounted using aqueous 114817 004 K8002 EFG NAN 201 1 03 25 p 10 30 or permanent mounting medium For aqueous mounting mounting media such as Dako GlycergelTM Mounting Medium Code C0563 or Faramount Aqueous Mounting Medium Code S3025 is recommended Quality Control Each staining run should include a known positive control specimen to ascertain a proper performance of all the applied reagents If the positive control specimen fails to demonstrate positive staining labeling of test soecimens should be considered invalid A negative control reagent should be used with each specimen to identify any non specific staining If non specific staining cannot be clearly differentiated from the specific staining the labeling of the test specimen should be considered invalid Interpretation of Results The diaminobenzidine containing Substrate Working Solution gives a brown color at the site of the target antigen recognized by the primary antibody The brown color should be present on the positive control specimen at the expected localization of the target antigen If non specific staining is present this will be recognized as a rather diffuse brown staining on the slides treated with the negative control reagent Nuclei will
4. 1 EnVision FLEX PEROXIDASE BLOCKING REAGENT EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent 3 x 40 mL ready to use Phosphate buffer containing hydrogen peroxide 15 mmol L NaN and detergent suga EnVision FLEX HRP 3 x 40 mL ready to use Dextran coupled with peroxidase molecules and goat secondary antibody molecules against rabbit and mouse immunoglobulins In buffered solution containing stabilizing protein and preservative DM827 EnVision FLEX DAB Chromogen 3x3mL 3 3 diaminobenzidine tetrahydrochloride in organic solvent The color of this reagent may vary from strong violet to colorless without having any influence on the performance of the kit u EnVision FLEX Substrate Buffer 12x20 mL Buffered solution containing hydrogen peroxide and preservative DM828 EnVision FLEX TARGET RETRIEVAL SOLUTION HIGH pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x 9 x 30 mL 50x concentrated Tris EDTA buffer pH 9 DM831 eres 20X EnVision FLEX Wash Buffer 20x 4 x 1 L 20x concentrated Tris buffered saline solution containing Tween 20 pH 7 6 0 1 SE MOUSE LINKER EnVision FLEX Mouse LINKER 3 x 40 mL ready to use Buffered solution containing stabilizing protein and an antimicrobial agent B Materials required but not provided Autostainer Link instrument Dako PT Link Dako Proteinase K Ready to Use if necessary Dako FLEX Ready to Use Primary Antibodies or s
5. 1 x 200 uL oder 2 x 150 uL pro Objekttr ger Sollten die Protokolle auf dem verwendeten Autostainer Link Ger t nicht vorhanden sein wenden Sie sich bitte an den technischen Kundendienst von Dako Optimale Inkubationszeiten f r den prim ren Antik rper und EnVision FLEX HRP h ngen vom verwendeten prim ren Antik rper ab Angaben bitte der Packungsbeilage des jeweiligen prim ren Antik rpers von Dako entnehmen Die Verifizierung des verwendeten Protokolls obliegt dem Anwender Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Proben fixiert werden Es wird empfohlen eine Dehydrierung Reinigung und permanente Fixierung durchzuf hren wenn Objekttr ger mit der 3 in 1 Probenvorbereitung behandelt wurden Mit dem HIER Verfahren behandelte Objekttr ger k nnen mit einem w ssrigen oder permanenten Fixiermittel fixiert werden Zur Fixierung in w ssrigem Medium werden Fixiermittel wie Dako Glycergel Mounting Medium Code Nr C0563 oder Faramount Aqueous Mounting Medium Code Nr S3025 empfohlen Qualitatskontrolle Bei jedem Farbedurchlauf sollte eine als positiv bekannte Kontrollprobe mitgef hrt werden um die Leistung aller verwendeten Reagenzien zu bestatigen Wenn das positive Kontrollgewebe keine F rbung aufweist muss die Markierung der Testproben f r ung ltig erkl rt werden Zum Ausschluss einer unspezifischen F rbung sollte ferner stets eine Negativkontrolle mitlaufen Ist die unspezifische F rbung nicht eindeutig von der s
6. Mal verwendet werden Einmalgebrauch Einige Epitope vertragen das HIER Verfahren nicht und andere erfordern enzymatische Vorbehandlung Angaben bitte der Packungsbeilage des jeweiligen prim ren Antik rpers von Dako entnehmen 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 27 30 Die Gewebeschnitte d rfen weder w hrend der Behandlung noch w hrend des anschlie enden immunhistochemischen F rbevorgangs austrocknen F r eine bessere Haftung der Gewebeschnitte an den Glas Objekttr gern werden FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen B Arbeitsablauf des F rbens Dako FLEX Ready to Use Primary Antibodies k nnen mit dem Dako EnVision FLEX Nachweissystem auf formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitten verwendet werden Die Packungsbeilage der konzentrierten prim ren Antik rper enth lt Angaben zur Verd nnung konzentrierter prim rer Antik rper von Dako Die konzentrierten prim ren Antik rper sollten nur mit EnVisionTM FLEX Antibody Diluent DM830 Code Nr K8006 verd nnt werden Die Arbeitsschritte zur F rbung und die empfohlenen Inkubationszeiten sind in der Autostainer Link Software vorprogrammiert ebenso wie die Protokolle f r die Visualisierungssysteme FLEX und FLEX 2x5 DAB FLEX Protokolle FLEX Maus und FLEX Maus 2x5 DAB FLEX Maus LINKER Protokolle FLEX Kaninchen und FLEX Kaninchen 2x5 DAB FLEX Kaninchen LINKER Protokolle Die zur Anwendung empfohlene Menge des Reagenz betr gt
7. Target Retrieval Solution 50x dilu dans un bain marie 2 Porter le bain marie et les cuves remplies de produit EnVision FLEX Target Retrieval Solution solution de travail a 95 99 Couvrir les cuves pour stabiliser la temp rature et viter toute vaporation 3 Immerger les coupes se trouvant a temp rature ambiante dans la solution de d masquage des cibles EnVision FLEX Target Retrieval Solution solution de travail pr chauff e contenue dans les cuves de coloration 4 Porter de nouveau le bain marie et le produit EnVision FLEX Target Retrieval Solution a 95 99 Incuber pendant 20 minutes 1 minute 95 99 5 Retirer la cuve contenant les lames du bain marie Laisser les lames refroidir dans le produit EnVision FLEX Target Retrieval Solution pendant 20 minutes 1 minute temp rature ambiante 114817 004 K8002 EFG NAN 201 1 03 25 p 18 30 6 Vider le produit EnVision FLEX Target Retrieval Solution et rincer les coupes a l aide du produit EnVision FLEX Wash Buffer 20x dilu et temp rature ambiante pendant 1 5 minutes 7 Placer le portoir contenant les coupes rinc es dans un appareil Autostainer Link Lancer imm diatement le cycle de coloration pr programm REMARQUE lors d une proc dure HIER avec des cuves de Coplin n utiliser la solution de d masquage des cibles dilu e ainsi que le tampon de lavage dilu qu une seule fois usage unique Certains pitopes ne to
8. dans le kit En raison d une proc dure de lavage efficace et de la pr sence de prot ines stabilisantes dans les r actifs Dako des tapes de blocage suppl mentaires ne sont pas n cessaires pour r duire la coloration de fond non sp cifique Il est recommand d utiliser le tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer 20x DM831 inclus dans le kit ou disponible comme r actif en option r f K8007 Les anticorps primaires ne sont pas fournis dans le kit L utilisation des anticorps FLEX Ready to Use Primary Antibodies ou des anticorps primaires concentr s Dako est recommand e Le diluant EnVision FLEX Antibody Diluent r f K8006 est recommand pour la dilution des anticorps primaires concentr s Dako EnVision FLEX Mouse LINKER DM824 inclus dans le kit ou disponible comme r actif en option r f K8021 peut tre remplac par EnVision FLEX Rabbit LINKER r f K8009 lorsque des anticorps primaires de lapin sont utilis s Les produits EnVision FLEX Mouse LINKER et EnVision FLEX Rabbit LINKER peuvent tre appliqu s pour obtenir une amplification du signal des anticorps primaires de souris et de lapin respectivement De mani re g n rale le produit EnVision FLEX Mouse LINKER fournit une amplification du signal de 4 5 fois et le produit EnVision TM FLEX Rabbit LINKER fournit une amplification du signal de 2 3 fois Le r actif de d tection Dako EnVision FLEX HRP SM802 du ki
9. die Autostainer Link Ger te mit auf verschiedenen Prinzipien beruhenden Verfahren Bitte lesen Sie vor der Durchf hrung von F rbungen mit Ihrem Autostainer Link Ger t das Bedienerhandbuch des jeweiligen Dako Ger ts gr ndlich durch Um f r eine reproduzierbare Epitopdemaskierung zu sorgen wird empfohlen den Objekttr gerhalter immer voll zu beladen Dadurch wird eine gleichm ige Erhitzung der Schnitte in jedem Durchlauf erreicht A Arbeitsablauf der Vorbehandlung Empfohlenes Verfahren zur 3 in 1 Probenvorbereitung mit PT Link Entparaffierung Rehydration und hitzenduzierte Epitopdemaskierung HIER k nnen mit formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitten unter Ber cksichtigung des 3 in 1 Verfahrens durchgef hrt werden 1 Eine Arbeitsl sung durch Verd nnen der konzentrierten EnVisionTM FLEX Target Retrieval Solution 50x mit destilliertem oder deionisiertem Wasser im Verh ltnis 1 50 herstellen 2 Tanks des PT Link mit einer ausreichenden Menge Arbeitsl sung 1 5 L f llen um die Gewebeschnitte zu bedecken 3 PT Link auf Erw rmen der L sung auf 65 einste llen 4 Die formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte in die vorgew rmte EnVision FLEX Target Retrieval Solution Arbeitsl sung in den PT Link Tanks geben und 20 40 Minuten bei 97 inkubieren Die optimale Inkubationszeit muss vom Anwender bestimmt werden 5 Die Schnitte im PT Link auf 65 abk hlen lasse n 6 Die Autostain
10. or deionised water to the marked line Fill Line Unused diluted solution may be stored at 2 8 C for one month Discard solution if cloudy in appearance When used in PT Link for 3 in 1 specimen preparation procedure the diluted solution can be used 3 times within a 5 day period if stored at room temperature A 2 EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x DM829 Code K8005 Dilute a sufficient quantity of EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x 1 50 using distilled or deionised water for the staining procedure that is planned If Dako PT Link is used for pre treatment dilution can be performed by emptying the content of the Target Retrieval Solution 50x vial into the Dako PT Link tank and adding distilled or deionised water to the marked line Fill Line Unused diluted solution may be stored at 2 8 C for one month Discard solution if cloudy in appearance When used in PT Link for 3 in 1 specimen preparation procedure the diluted solution can be used 3 times within a 5 day period if stored at room temperature A 3 EnVision FLEX Wash Buffer 20x DM831 Code K8007 Dilute a sufficient quantity of EnVision FLEX Wash Buffer 20x 1 20 using distilled or deionised water for the staining procedure that is planned Dilute by adding the concentrated Wash Buffer to a pre measured quantity of distilled or deionised water to minimize foaming Stir gently until the diluted solution appears homogenous Unused dilut
11. when using rabbit primary antibodies EnVision FLEX Mouse LINKER and EnVision FLEX Rabbit LINKER may be applied for an optional signal amplification of mouse and rabbit primary antibodies respectively As a guideline EnVision FLEX Mouse LINKER provides 4 5 fold signal amplification and EnVision FLEX Rabbit LINKER provides 2 3 fold signal amplification Dako EnVision FLEX HRP detection reagent SM802 in the kit consists of a dextran backbone to which a large number of peroxidase HRP molecules and secondary antibody molecules have been coupled A unique chemistry is used for the coupling reaction which permits the binding of up to 100 HRP molecules and up to 20 antibody molecules per backbone The substrate system in the kit consists of two components EnVision FLEX DAB Chromogen DM827 a concentrated diaminobenzidine DAB solution and EnVision FLEX Substrate Buffer SM803 containing hydrogen peroxide Before use EnVision FLEX DAB Chromogen must be diluted in EnVision FLEX Substrate Buffer The substrate system produces a crisp brown end product at the site of the target antigen EnVision FLEX Hematoxylin Code K8008 is recommended for counterstaining The reagent provides a clear blue nuclear staining 114817 004 K8002 EFG NAN 201 1 03 25 p 4 30 The stained tissue sections may be mounted with either aqueous or organic solvent based mounting medium Reagents A Materials provided S M80
12. 04 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 22 30 B Erforderliches aber nicht mitgeliefertes Material Autostainer Link Ger t Dako PT Link Dako Proteinase K Ready to Use falls erforderlich Dako FLEX Ready to Use Primary Antibodies oder entsprechend verd nnte konzentrierte prim re Kaninchen bzw Mausantik rper von Dako Dako FLEX Ready to Use Rabbit oder Mouse Universal Negative Control oder anderes geeignetes Negativkontrollreagenz f r den prim ren Antik rper Zubeh r f r Dako Ger te Objekttr ger z B FLEX IHC Microscope Slides F r die Entparaffinierung bei paraffineingebetteten Gewebeschnitten gebr uchliche Laborreagenzien Fixiermittel w ssrig oder auf Basis organischer L sungsmittel und Deckgl ser C Optionale Reagenzien K8004 EE SOLUTION DM828 HIGH pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x 3 x 30 mL 50fach konzentriert Tris EDTA Puffer pH 9 K8005 TARGET RETRIEVAL SOLUTION DM829 LOW pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x 3 x 30 mL 50fach konzentriert _ K8006 DM830 EnVision FLEX Antibody Diluent 120 mL gebrauchsfertig Tris Puffer pH 7 2 mit 15 mmol L NaN und Protein Q Di v lt oO po RS o gt K8007 wash purrer 20X DM831 EnVision FLEX Wash Buffer 20x 1 L 20fach konzentriert Tris gepufferte Kochsalzl sung mit Tween 20 pH 7 6 0 1 K8008 SM806 EnVision FLEX Hematoxylin 3 x 45 mL gebrauchsfertig
13. EX HRP 3 x 40 mL pr t l emploi Dextrane coupl a des mol cules de peroxydase et a des mol cules d anticorps secondaires de ch vre dirig s contre les immunoglobulines de souris et de lapin Dans une solution tamponn e contenant une prot ine stabilisante et un agent conservateur DPMga EnVision FLEX DAB Chromogen 3x3 mL T trahydrochlorure de 3 3 diaminobenzidine dans un solvant organique La couleur de ce r actif peut varier de violet fonc incolore sans que cela ait une quelconque influence sur les performances du kit SES SUBSTRATE BUFFER EnVision FLEX Substrate Buffer 12 x 20 mL Solution tamponn e contenant du peroxyde d hydrog ne et un agent conservateur DM828 EnVision FLEX TARGET RETRIEVAL SOLUTION HIGH pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x 9 x 30 mL concentr 50x Tampon Tris EDTA pH 9 et Se 20x EnVision FLEX Wash Buffer 20x 4 x 1 L concentr 20x Solution saline de tampon Tris contenant du Tween 20 pH 7 6 0 1 SEH MOUSE LINKER EnVision FLEX Mouse LINKER 3 x 40 mL pr t l emploi Solution tampon contenant une prot ine stabilisante et un agent antimicrobien B Mat riel requis mais non fourni Appareil Autostainer Link 114817 004 K8002 EFG NAN 201 1 03 25 p 13 30 Dako PT Link Dako Proteinase K Ready to Use si n cessaire Dako FLEX Ready to Use Primary Antibodies ou anticorps primaires de lapin ou de sour
14. EnVision FLEX Mouse High pH Link Code K8002 Ath edition 4 me dition 4 Ausgabe O CE The kit contains reagents sufficient for 400 600 tests For Autostainer Link instruments Les r actifs contenus dans ce kit permettent d effectuer 400 600 tests Pour les appareils Autostainer Link Die in diesem Kit enthaltenen Reagenzien sind ausreichend f r 400 600 Tests F r Autostainer Link Ger te Optional reagents R actifs en option Optionale Reagenzien Code K8004 K8005 K8006 K8007 K8008 K8009 K8021 Product name Nom du produit Produktname EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x EnVision FLEX Antibody Diluent EnVision FLEX Wash Buffer 20x EnVision FLEX Hematoxylin Link EnVision FLEX Rabbit LINKER Link EnVision FLEX Mouse LINKER Link Other options Autres options Andere Optionen K8020 114817 004 FLEX IHC Microscope Slides Tests 200 430 200 430 400 600 400 600 130 200 130 200 500 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 1 30 Contents Table des mati res Inhalt Page Page Seite ENGLISH utile ERR EE 4 summary and Rei ue EE 4 REAGENTS iio A EE Te en 5 A Materials provided E 5 B Materials required but not provided 5 6 Opti nalireagents 25338223 2m eilig 6 PRECAUTIONS ita iii eS 7 SIMAO HR ET E A eats ates ca babi EE lea eek oe A NE cued recive 7 Reagent Preparatio
15. FLEX DAB Chromogen contains 1 5 3 3 diaminobenzidine tetrahydrochloride and is labeled Harmful R40 Limited evidence of a carcinogenic effect R43 May cause sensitisation by skin contact R68 Possible risk of irreversible effects 35 This material and its container must be disposed of in a safe way 36 37 Wear suitable protective clothing and gloves As a general rule persons under 18 years of age are not allowed to work with this product Users must be carefully instructed in the proper work procedure the dangerous properties of the product and the necessary safety instructions per European Union Directive 94 33 EC Please refer to the Material Safety Sheet MSDS for additional information USA 3 3 diaminobenzidine DAB may be harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed Material is irritating to eyes and skin If skin contact should occur rinse affected area with soap and water NOTE Although diaminobenzidine is structurally related to benzidine there is no evidence for the carcinogenicity of diaminobenzidine Consult Federal State or local regulations for disposal 8 EnVisionTM FLEX Antibody Diluent Code K8006 contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent
16. SM804 EnVision FLEX Mouse LINKER 40 mL pr t a l emploi Solution tampon contenant une prot ine stabilisante et un agent antimicrobien Contient suffisamment de r actif pour 130 a 200 tests sur la base de 200 a 300 uL par test 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 14 30 Pr cautions Pour utilisateurs professionnels Les produits EnVision FLEX HRP EnVision FLEX Mouse LINKER et EnVision FLEX Rabbit LINKER contiennent des substances d origine animale et on ne peut exclure le fait que des quantit s infimes de substances humaines puissent tre pr sentes en raison des proc dures de fabrication Comme avec tout produit d origine biologique respecter les proc dures de manipulation appropri es Ne pas exposer les produits EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent EnVision FLEX HRP EnVision FLEX Substrate Buffer EnVision FLEX DAB Chromogen EnVision FLEX Substrate Working Solution ou EnVision FLEX Hematoxylin a une lumi re intense pendant la proc dure Une fiche technique de s curit destin e aux utilisateurs professionnels est disponible sur demande pour les produits EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x et EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x Une fiche technique de s curit destin e aux utilisateurs professionnels est disponible sur demande pour le produit EnVision FLEX Wash Buffer 20x Une fiche technique de s curit destin e
17. W ssrige H matoxylinl sung K8009 SM805 EnVision FLEX Rabbit LINKER 40 mL gebrauchsfertig Gepufferte L sung mit Stabilisatorprotein und einer antimikrobiellen Substanz Ausreichend f r 130 200 Tests bei Verwendung von 200 300 uL pro Test K8021 SM804 EnVision FLEX Mouse LINKER 40 mL gebrauchsfertig Gepufferte L sung mit Stabilisatorprotein und einer antimikrobiellen Substanz Ausreichend f r 130 200 Tests bei Verwendung von 200 300 uL pro Test 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 23 30 VorsichtsmaBnahmen 1 Zur Anwendung durch Fachpersonal 2 EnVision FLEX HRP EnVision FLEX Mouse LINKER und EnVision FLEX Rabbit LINKER enthalten Material tierischen Ursprungs es kann nicht ausgeschlossen werden dass aufgrund der Herstellungsverfahren auch Spuren von Material menschlichen Ursprungs enthalten sind Wie alle Produkte biologischen Ursprungs muss auch dieses entsprechend gehandhabt werden 3 EnVision M FLEX Peroxidase Blocking Reagent EnVision FLEX HRP EnVision FLEX Substrate Buffer EnVision FLEX DAB Chromogen EnVision FLEX Substrat Arbeitsl sung oder EnVision FLEX Hematoxylin wahrend des Verfahrens keinem starken Lichteinfall aussetzen 4 Fur EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x und EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x steht auf Anfrage f r professionelle Benutzer ein Sicherheitsdatenblatt zur Verf gung 5 Fur EnVision FLE
18. X Wash Buffer 20x steht auf Anfrage fiir professionelle Benutzer ein Sicherheitsdatenblatt zur Verf gung 6 F r EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent steht auf Anfrage f r professionelle Benutzer ein Sicherheitsdatenblatt zur Verf gung 7 EnvVision FLEX DAB Chromogen enth lt 1 5 3 3 Diaminobenzidin Tetrahydrochlorid und ist wie folgt gekennzeichnet Gesundheitssch dlich R40 Krebserregende Wirkung nicht auszuschlieBen R43 Sensibilisierung durch Kontakt mit der Haut m glich R68 Irreversible Sch den m glich S35 Abf lle und Beh lter m ssen auf sichere Weise entsorgt werden S36 37 Bei der Arbeit geeignete Schutzhandschuhe und Schutzkleidung tragen Personen unter 18 Jahren d rfen mit diesem Produkt grunds tzlich nicht arbeiten Alle Anwender m ssen sorgf ltig in das richtige Arbeitsverfahren die gef hrlichen Eigenschaften des Produkts und die notwendigen Sicherheitsma nahmen eingewiesen werden gem EU Richtlinie 94 33 EG Weitere Informationen bitte dem Material Sicherheitsdatenblatt MSDS entnehmen USA 3 3 Diaminobenzidin DAB kann bei Einatmen Hautkontakt und Verschlucken gesundheitssch dlich sein Reizt Augen und Haut Bei Hautkontakt betroffenen Bereich mit Seife und Wasser behandeln HINWEIS Zwischen Diaminobenzidin und Benzidin besteht zwar eine strukturelle hnlichkeit dennoch ist eine krebserregende Wirkung von Diaminobenzidin nicht erwiesen Entsprechend rtlichen und staat
19. aux utilisateurs professionnels est disponible sur demande pour le produit EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent EnVision FLEX DAB Chromogen contient 1 5 de t trahydrochlorure de 3 3 diaminobenzidine et est d sign comme Nocif R40 Effet canc rog ne suspect preuves insuffisantes R43 Peut entrainer une sensibilisation par contact avec la peau R68 Possibilit d effets irr versibles S35 Ne se d barrasser de ce produit et de son emballage qu en prenant toutes les pr cautions d usage S36 37 Porter un v tement de protection et des gants appropri s En r gle g n rale il n est pas permis aux personnes g es de moins de 18 ans de manipuler ce produit Les utilisateurs doivent tre inform s des proc dures de travail ad quates des propri t s dangereuses du produit et des instructions de s curit n cessaires conform ment la directive europ enne n 94 33 CE Veuillez vous reporter ala fiche technique de s curit MSDS pour plus d informations Etats Unis le 3 3 diaminobenzidine DAB peut tre nocif par inhalation par contact avec la peau et par ingestion Cette substance est irritante pour les yeux et la peau En cas de contact avec la peau rincer la zone concern e au savon et a l eau REMARQUE bien que la diaminobenzidine soit structurellement li e a la benzidine il n existe aucune preuve de la canc rog nicit de la diaminobenzidine Se reporter aux r glemen
20. be stained blue by the hematoxylin counterstain Limitations 1 For automated use on Autostainer Link instruments only When performing manual stainings the optimal procedure must be determined and verified by the user unless specified in the Package Insert for the specific Dako Primary Antibody 2 For use on formalin fixed paraffin embedded tissue sections only When using frozen sections or cell smears the optimal procedure must be determined and verified by the user unless specified in the Package Insert for the specific Dako Primary Antibody Changes in the procedure may have impact on the number of tests provided with the kit 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 11 30 FRANCAIS Utilisation pr vue Pour utilisation en diagnostic in vitro Le syst me de d tection Dako EnVision FLEX est destin tre utilis en immunohistochimie avec les appareils Autostainer Link Le syst me d tecte les anticorps primaires de souris et de lapin et la r action est visualis e a l aide de EnVision FLEX DAB Chromogen Utilis avec le produit EnVision FLEX Mouse LINKER ou le produit EnVision FLEX Rabbit LINKER r f K8009 une amplification du signal des anticorps primaires de souris ou de lapin respectivement peut tre obtenue Les r actifs EnVision FLEX sont destin s a tre utilis s sur des coupes de tissus fix es au formol et incluses en paraffine R sum et explication Le syst me de detection Dak
21. cnnnconcnnnnoncnnnnonnnnnnnnnnnancnnnnnnnnnnnnnnaninens 26 B Arbeitsablauf des E rbens nn 28 GualitatskontrollO cia 28 Auswertung der Ergebnisse Heer At dS 28 Einschr nkungen SEET SEENEN deed 29 Erl titerung der Symbole sreo aaaea eaa aaa aai aaa ta a aeaa adaa aaia 30 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 3 30 ENGLISH Intended Use For in vitro diagnostic use Dako EnVision FLEX detection system is intended for use in immunohistochemistry together with Autostainer Link instruments The system detects primary mouse and rabbit antibodies and the reaction is visualized by EnVision FLEX DAB Chromogen If used with EnVision FLEX Mouse LINKER or EnVision FLEX Rabbit LINKER Code K8009 signal amplification of primary mouse antibodies or primary rabbit antibodies respectively can be achieved The EnVision FLEX reagents are intended for use on formalin fixed paraffin embedded tissue sections Summary and Explanation Dako EnVision FLEX detection system has been designed to be a flexible system and gives an optimal staining on Autostainer Link instruments when using the protocol recommended in this package insert As a guideline using EnVision FLEX Mouse Code K8002 signal amplification increases 4 5 fold and using EnVision FLEX Rabbit Code K8009 optional reagent increases signal amplification 2 3 fold Prior to staining formalin fixed paraffin embedded tissue sections should be subjecte
22. d formalin fixed paraffin embedded tissue sections into the pre heated EnVision FLEX Target Retrieval Solution working solution in PT Link tanks and incubate for 20 40 minutes at 97 The optimal incubation time should be determined by the user 5 Leave the sections to cool in PT Link to 65 6 Remove each Autostainer slide rack with the slides from the PT Link tank and immediately dip slides into a jar tank e g PT Link Rinse Station Code PT109 with diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 20x 7 Leave slides in the diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 20x for 1 5 minutes 8 Place slides on an Autostainer Link instrument and proceed with staining The sections should not dry out during the treatment or during the immunohistochemical staining procedure 9 After staining it is recommended to perform dehydration clearing and permanent mounting NOTE When used in PT Link for 3 in 1 specimen preparation procedure the diluted Target Retrieval Solution and diluted Wash Buffer can be used 3 times within a 5 day period if stored at room temperature Gei HIER procedure using PT Link After deparaffinization and hydration to buffer water the tissue sections should be subjected to heat induced epitope retrieval HIER 1 Prepare a working solution by diluting the EnVision FLEX Target Retrieval Solution 50x concentrate 1 50 in distilled or deionized water 2 Fill PT Link tanks with s
23. d to deparaffinization and hydration followed by heat induced epitope retrieval HIER using the target retrieval method specified in the package insert for the primary antibody Please also see Procedure section for 3 in 1 specimen preparation Code K8002 includes EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Alternatively EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8004 or EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x Code K8005 is recommended Some primary antibodies require enzymatic pre treatment of tissue for optimal staining instead of HIER Endogenous peroxidase should be blocked with EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent SM801 included in the kit Due to an effective washing procedure and the presence of stabilizing proteins in the Dako reagents extra blocking steps to reduce non specific background staining are unnecessary EnVision FLEX Wash Buffer 20x DM831 included in the kit or available as optional reagent Code K8007 is recommended Primary antibodies are not provided with the kit We recommend the use of FLEX Ready to Use Primary Antibodies or Dako concentrated Primary Antibodies EnVision FLEX Antibody Diluent Code K8006 is recommended for the dilution of Dako concentrated Primary Antibodies EnVision FLEX Mouse LINKER DM824 included in the kit or available as optional reagent Code K8021 may be replaced by EnVision FLEX Rabbit LINKER Code K8009
24. e appareil Dako pour la d finition des lames de microscope utilisables Les coupes en paraffine doivent tre mont es depuis un bain pr chauff contenant de l eau distill e ou d ionis e Le bain marie ne doit contenir aucun additif tel que de la g latine de la poly L lysine etc Les coupes doivent tre s ch es en les chauffant en g n ral a une temp rature ne d passant pas 60 C pendant 60 minutes maximum Pour garantir une bonne adh rence des coupes aux lames il est important d goutter l eau se trouvant sous les coupes avant de passer la proc dure de s chage dans une tuve Proc dure Les appareils Autostainer Link utilisent des techniques bas es sur diff rents principes afin d obtenir un r sultat de coloration optimal Avant d ex cuter des protocoles sur votre appareil Autostainer Link veuillez lire attentivement le Manuel de l operateur sp cifique a l appareil Dako utilis Pour assurer un d masquage des pitopes reproductible il est recommand de toujours remplir compl tement le portoir a lames Ceci assure un chauffage identique des coupes lors de chaque cycle A Proc dure de pr traitement Proc dure 3 en 1 recommand e pour la pr paration des chantillons l aide du PT Link Le d paraffinage la r hydratation et le d masquage d pitope induit par la chaleur HIER peuvent tre r alis s sur des coupes de tissus fix es au formol et incluses en paraffine en utilisant la
25. e lesen Sie dazu auch 3 in 1 Probenvorbereitung im Abschnitt Verfahren Code Nr K8002 enthalt EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Alternativ kann EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8004 oder EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x Code Nr K8005 eingesetzt werden Bei einigen primaren Antik rpern sind die Farbeergebnisse besser wenn anstelle des HIER Verfahrens eine Gewebevorbehandlung mit Enzymen vorgenommen wird Endogene Peroxidase sollte mit dem im Kit enthaltenen EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent SM801 blockiert werden Das wirkungsvolle Waschverfahren und die in den Dako Reagenzien vorhandenen Stabilisierungsproteine machen weitere Blockierungsschritte zur Verminderung einer unspezifischen Hintergrundf rbung berfl ssig Empfohlen wird der EnVision FLEX Wash Buffer 20x DM831 der im Kit enthalten oder auf Wunsch auch als optionales Reagenz einzeln Code Nr K8007 erh ltlich ist Prim re Antik rper geh ren nicht zum Lieferumfang Wir empfehlen FLEX Ready to Use Primary Antibodies bzw Dako Concentrated Primary Antibodies Zur Verd nnung von Dako Concentrated Primary Antibodies wird EnVision FLEX Antibody Diluent Code Nr K8006 empfohlen Bei der Verwendung von prim ren Kaninchenantik rpern kann der im Kit enthaltene oder auch als optionales Reagenz Code Nr K8021 zur Verf gung stehende EnVision FLEX Mouse LINKER DM824 durc
26. ed solution may be stored at 2 8 C for one month Discard solution if cloudy in appearance When used in PT Link for 3 in 1 specimen preparation procedure the diluted solution can be used 3 times within a 5 day period if stored at room temperature A 4 EnVision FLEX Substrate Working Solution The DAB containing EnVision FLEX Substrate Working Solution is prepared by mixing it thoroughly with 1 drop EnVision FLEX DAB Chromogen DM827 per 1 mL EnVision FLEX Substrate Buffer SM803 Use EnVision FLEX Substrate Working Solution within 5 days store in the dark at 2 8 C Specimen Collection and Preparation The specimens may be formalin fixed paraffin embedded tissue sections Fixation time is dependent on fixative and tissue type thickness For example tissue blocks with a thickness of 3 4 mm should be fixed in neutral buffered formalin for 18 24 hours The optimal thickness of paraffin embedded sections is approximately 4 um The specimens should be mounted on microscope slides e g FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 The sections should be mounted on the slides as flat and wrinkle free as possible Too many wrinkles will have an impact on the staining results NOTE The microscope slides must have a width suitable for the Autostainer Link instrument Please refer to the Operator s Manual for the individual Dako instrument for definition of usable microscope slides Paraffin sections should be mounted from a pre
27. er Gestelle mit den Objekttr gern aus dem PT Link Tank nehmen und die Objekttrager sofort in einen Beh lter Tank z B PT Link Rinse Station Code Nr PT109 mit verd nntem auf Raumtemperatur gebrachtem EnVision FLEX Wash Buffer 20x tauchen 7 Die Objekttr ger f r 1 5 Minuten im verd nnten und auf Raumtemperatur gebrachten EnVisionTM FLEX Wash Buffer 20x belassen 8 Objekttr ger in ein Autostainer Link Ger t einsetzen und mit der F rbung fortfahren Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen 9 Nach der F rbung sollte eine Dehydrierung Sp lung und Permanentfixierung erfolgen HINWEIS Bei Verwendung im PT Link f r die 3 in 1 Probenvorbereitung k nnen die verd nnte Target Retrieval Solution und der verd nnte Wash Buffer 3 Mal innerhalb von 5 Tagen verwendet werden wenn sie bei Raumtemperatur gelagert werden 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 26 30 HIER Verfahren mit PT Link Nach der Entparaffinierung und Rehydrierung mit Puffer Wasser ist bei den meisten Gewebeschnitten eine hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER erforderlich 1 Eine Arbeitsl sung durch Verd nnen der konzentrierten EnVision FLEX Target Retrieval Solution 50x mit destilliertem oder deionisiertem Wasser im Verh ltnis 1 50 herstellen 2 Tanks des PT Link mit einer ausreichenden Menge Arbeitsl sung 1 5 L f llen um die Gewebeschnitte zu bedecken 3 PT L
28. h den EnVision FLEX Rabbit LINKER Code Nr K8009 ersetzt werden EnVision FLEX Mouse LINKER und EnVision FLEX Rabbit LINKER k nnen wahlweise zur Verst rkung des Signals von prim ren Maus bzw Kaninchen Antik rpern eingesetzt werden Als Richtwert EnVisionTM FLEX Mouse LINKER liefert vier bis f nffache Signalverst rkung EnVision FLEX Rabbit LINKER zwei bis dreifache Signalverst rkung Dako EnVisionTM FLEX HRP Detection Reagent SM802 im Kit besteht aus einem Dextran Backbone an das zahlreiche Peroxidase HRP Molek le und Molek le sekund rer Antik rper gekoppelt sind Die Kopplungsreaktion besteht aus einer einzigartigen chemischen Reaktion die es erm glicht pro Backbone bis zu 100 HRP Molek le und bis zu 20 Antik rper Molek le zu binden 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 21 30 Das Substratsystem im Kit besteht aus zwei Komponenten EnVision FLEX DAB Chromogen DM827 einer konzentrierten Diaminobenzidinl sung DAB L sung und dem wasserstoffperoxidhaltigen EnVision FLEX Substrate Buffer SM803 Vor der Anwendung muss EnVision FLEX DAB Chromogen mit EnVision FLEX Substrate Buffer verd nnt werden Das Substratsystem f hrt zu einem kontrastreichen braunen Endprodukt am Ort des Zielantigens Zur Gegenfarbung wird EnVision FLEX Hematoxylin Code Nr K8008 empfohlen Dieses Reagenz ruft eine deutliche Blaufarbung der Zellkerne hervor Fur die Fixierung der gefarbten Gewebe
29. heated water bath containing distilled or deionized water The water bath should contain no additives such as gelatin poly L lysine etc Sections should be dried by heating generally at a temperature not above 60 C for up to 60 minutes To ensure proper adherence of sections to slides it is important to drain the water from beneath the sections prior to the oven drying process 114817 004 K8002 EFG NAN 201 1 03 25 p 8 30 Procedure Autostainer Link instruments use techniques based on different principles to obtain an optimal staining result Before running protocols on your Autostainer Link instrument please read carefully the Operator s Manual for the dedicated Dako instrument In order to ascertain reproducible epitope retrieval it is recommended always to load the slide holder fully with slides This ensures an identical heating of sections in every run A Pre treatment procedure Recommended 3 in 1 specimen preparation procedure using PT Link Deparaffinization rehydration and heat induced epitope retrieval HIER can be performed on formalin fixed paraffin embedded tissue sections using the 3 in 1 procedure 1 Prepare a working solution by diluting the EnVision FLEX Target Retrieval Solution 50x concentrate 1 50 in distilled or deionized water 2 Fill PT Link tanks with sufficient quantity 1 5 L of working solution to cover the tissue sections Set PT Link to pre heat the solution to 65 4 Immerse the mounte
30. ilis e 3 fois sur une p riode de 5 jours si elle est conserv e temp rature ambiante AA EnVision FLEX Substrate Working Solution La solution de travail du substrat EnVision FLEX Substrate Working Solution contenant de la DAB est pr par e en m langeant vigoureusement 1 goutte de EnVision FLEX DAB Chromogen DM827 par 1 mL de EnVision FLEX Substrate Buffer SM803 Utiliser la EnVision FLEX Substrate Working Solution dans les 5 jours conserver dans l obscurit entre 2 et 8 C 114817 004 K8002 EFG NAN 201 1 03 25 p 16 30 Pr l vement et pr paration des chantillons Les chantillons peuvent tre des coupes de tissus fix es au formol et incluses en paraffine Le temps de fixation d pend du fixateur et du type de l paisseur du tissu Par exemple les blocs de tissu d une paisseur de 3 4 mm doivent tre fix s au formol neutre tamponn pendant 18 24 heures L paisseur optimale des coupes incluses en paraffine est d environ 4 um Les chantillons doivent tre mont s sur des lames de microscope par ex les lames FLEX IHC Microscope Slides r f K8020 Les coupes doivent tre mont es sur les lames aussi plates que possible et avec le moins de plis possible Trop de plis aurait un impact sur les r sultats de la coloration REMARQUE les lames de microscope doivent poss der une largeur adapt e a l appareil Autostainer Link Veuillez vous reporter au manuel de l op rateur de chaqu
31. in K vetten Nach der Entparaffinierung und Rehydrierung mit Puffer Wasser ist bei den meisten Gewebeschnitten eine hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER erforderlich 1 Die F rbeschalen mit verd nnter EnVision FLEX Target Retrieval Solution 50x in ein Wasserbad stellen 2 Die Schalen mit der EnVision FLEX Target Retrieval Solution Arbeitsl sung im Wasserbad auf 95 99 erwarmen Zur Temperaturstabilisierung und zum Vermeiden von Verdunstung die Schalen mit Deckeln abdecken 3 Die auf Raumtemperatur gebrachten Gewebeschnitte in die vorgew rmte EnVision FLEX Target Retrieval Solution Arbeitsl sung in den F rbeschalen eintauchen 4 Die Temperatur von Wasserbad und EnVision FLEX Target Retrieval Solution wieder auf 95 99 bringen 20 1 Minuten bei 95 99 inku bieren 5 Die Schale mit den Objekttragern aus dem Wasserbad nehmen Die Objekttrager in der EnVision FLEX Target Retrieval Solution bei Raumtemperatur 20 1 Minuten abk hlen lassen 6 Die EnVision FLEX Target Retrieval Solution ausgieBen und die Schnitte mit verd nntem EnVision FLEX Wash Buffer 20x bei Raumtemperatur 1 5 Minuten sp len 7 Das Gestell mit den gesp lten Schnitten in ein Autostainer Link Ger t einsetzen Sofort mit dem vorprogrammierten Farbedurchlauf beginnen HINWEIS Bei Verwendung von Coplin Schalen f r das HIER Verfahren k nnen die verd nnte Target Retrieval Solution und der verd nnte Wash Buffer nur ein
32. in Problem mit dem Produkt hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Reagenzvorbereitung A 1 EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x DM828 Code Nr K8004 Eine f r das geplante F rbeverfahren ausreichende Menge EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x mit destilliertem oder entionisiertem Wasser im Verh ltnis 1 50 verd nnen Wenn Dako PT Link zur Vorbehandlung genutzt wird kann die Verd nnung durch berf hren des Inhalts des Fl schchens Target Retrieval Solution 50x in den Dako PT Link Tank und Hinzuf gen von destilliertem oder deionisiertem Wasser bis zur Markierung Fill Line erfolgen Unverbrauchte verd nnte L sung kann bei 2 8 einen Monat lang aufbewahrt werden Getr bte L sung verwerfen Bei Verwendung im PT Link f r die 3 in1 Probenvorbereitung kann die verd nnte L sung 3mal innerhalb von 5 Tagen verwendet werden wenn sie bei Raumtemperatur gelagert wird A 2 EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x DM829 Code Nr K8005 Eine f r das geplante F rbeverfahren ausreichende Menge EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x mit destilliertem oder entionisiertem Wasser im Verh ltnis 1 50 verd nnen Wenn Dako PT Link zur Vorbehandlung genutzt wird kann die Verd nnung durch berf hren des Inhalts des Fl schchens Target Retrieval Solution 50x in den Dako PT Link Tank und Hinzuf gen von destilliertem oder deionisiertem Was
33. ink auf Erwarmen der L sung auf 65 einste llen 4 Gewebeschnitte auf Objekttragern manuell entparaffinieren und rehydrieren Zur besseren Haftung des Gewebes auf dem Objekttrager werden beschichtete oder silanisierte Objekttrager empfohlen 5 Die auf Raumtemperatur gebrachten Gewebeschnitte in die vorgewarmte Target Retrieval Solution Arbeitsl sung in den PT Link Tanks geben und 20 40 Minuten bei 97 inkubieren Die optimale Inkubationszeit muss vom Anwender bestimmt werden 6 Die Schnitte im PT Link auf 65 abk hlen lasse n 7 Die Gestelle aus dem PT Link Tank nehmen und die Objekttrager sofort in einen Behalter Tank z B PT Link Rinse Station Code Nr PT109 mit verd nntem auf Raumtemperatur gebrachtem Dako Wash Buffer 20x tauchen 8 Die Objekttrager f r 1 5 Minuten im verd nnten und auf Raumtemperatur gebrachten EnVision FLEX Wash Buffer 20x belassen 9 Objekttr ger in ein Autostainer Link Ger t einsetzen und mit der F rbung fortfahren Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des immunhistochemischen Farbeverfahrens nicht austrocknen 10 Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Fixiermittel fixieren HINWEIS Bei Verwendung im PT Link f r das HIER Verfahren k nnen die verd nnte Target Retrieval Solution und der verd nnte Wash Buffer 3 Mal innerhalb von 5 Tagen verwendet werden wenn sie bei Raumtemperatur gelagert werden HIER Arbeitsverfahren mit Copl
34. is concentr s dilu s de facon appropri e obtenus aupr s de Dako Dako FLEX Ready to Use Rabbit ou Mouse Universal Negative Control ou r actif de contr le n gatif appropri pour l anticorps primaire Ustensiles pour l appareillage Dako Lames de microscope par ex les lames FLEX IHC Microscope Slides R actifs g n raux de laboratoire pour le d paraffinage des coupes de tissus incluses en paraffine Milieu de montage aqueux ou organique base de solvant et lamelles C R actifs en option K8004 TARGET RETRIEVAL SOLUTION DM828 HIGH geen EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x 3 x 30 mL concentr 50x K8005 TARGET RETRIEVAL SOLUTION DM829 LOW pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x 3 x 30 mL concentr 50x Tampon citrate pH 6 1 K8006 DM830 EnVision FLEX Antibody Diluent 120 mL pr t a l emploi Tampon Tris pH 7 2 NaN 15 mmol L et une prot ine K8007 wast aurrer 20X DM831 EnVision FLEX Wash Buffer 20x 1 L concentr 20x Solution saline de tampon Tris contenant du Tween 20 pH 7 6 0 1 K8008 SM806 EnVision FLEX Hematoxylin 3 x 45 mL pr t l emploi Solution aqueuse d h matoxyline K8009 SM805 EnVision FLEX Rabbit LINKER 40 mL pr t l emploi Solution tampon contenant une prot ine stabilisante et un agent antimicrobien Contient suffisamment de r actif pour 130 200 tests sur la base de 200 300 uL par test K8021
35. l rent pas la proc dure HIER et requi rent un pr traitement enzymatique Veuillez vous reporter a la notice de chaque anticorps primaire Dako Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides r f K8020 B Proc dure de coloration Les anticoros Dako FLEX Ready to Use Primary Antibodies peuvent tre utilis s avec le systeme de d tection Dako EnVision FLEX appliqu sur des coupes de tissus fix es au formol et incluses en paraffine Une directive de dilution pour les anticorps primaires concentr s Dako est fournie dans la notice de l anticorps primaire concentr Les anticorps primaires concentr s doivent tre dilu s dans le diluant EnVision FLEX Antibody Diluent DM830 ref K8006 Les tapes de la coloration ainsi que les temps d incubation recommand s sont pr programm s dans le logiciel de l Autostainer Link sous les protocoles des syst mes de visualisation suivants FLEX et FLEX 2x5 DAB protocoles FLEX FLEX Mouse et FLEX Mouse 2x5 DAB protocoles FLEX Mouse LINKER FLEX Rabbit et FLEX Rabbit 2x5 DAB protocoles FLEX Rabbit LINKER Le volume de r actif recommand devant tre appliqu est de 1 x 200 uL ou 2 x 150 uL par lame Si les protocoles ne sont pas disponibles su
36. lichen Richtlinien entsorgen 8 EnVisionTM FLEX Antibody Diluent Code Nr K8006 enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Ansammlungen von Natriumazid k nnen auch in Konzentrationen die nicht als gef hrlich klassifiziert sind mit Blei und Kupferabflussrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Azidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 9 Entsprechende Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 10 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Lagerung EnVision FLEX und EnVisionTM FLEX Reagenzien bei 2 8 C lagern EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent EnVision FLEX HRP und EnVision FLEX Substrate Buffer im Dunkeln bei 2 8 C lagern EnVisionTM FLEX Hematoxylin Code Nr K8008 im Dunkeln bei Raumtemperatur lagern Nach Ablauf des auf den Fl schchen aufgedruckten Verfallsdatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien anders als entsprechend den in der Packungsbeilage angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen die Bedingungen vom Anwender verifiziert werden Die fertige 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 24 30 Substrat Arbeitsl sung im Dunkeln bei 2 8 C aufbewahren und innerhalb von 5 Tagen verbrauchen Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf e
37. ll e ou d ionis e pour la proc dure de coloration pr vue Si l appareil Dako PT Link est utilis pour effectuer un pr traitement la dilution peut tre r alis e en vidant le contenu du flacon de solution de d masquage des cibles 50x dans la cuve du Dako PT Link et en ajoutant de l eau distill e ou d ionis e jusqu au trait indiqu ligne de remplissage La solution dilu e non utilis e peut tre conserv e entre 2 et 8 pe ndant un mois Jeter la solution si elle semble trouble Quand on l utilise sur un appareil PT Link pour une proc dure de pr paration des chantillons 3 en 1 la solution dilu e peut tre r utilis e 3 fois sur une p riode de 5 jours si elle est conserv e temp rature ambiante A 3 EnVision FLEX Wash Buffer 20x DM831 r f K8007 Diluer une quantit suffisante de EnVision FLEX Wash Buffer 20x au 1 20 amp me en utilisant de l eau distill e ou d ionis e pour la proc dure de coloration pr vue Diluer en ajoutant le tampon de lavage concentr a une quantit pr mesur e d eau distill e ou d ionis e afin de minimiser la formation de mousse M langer doucement jusqu a ce que la solution dilu e apparaisse homog ne La solution dilu e non utilis e peut tre conserv e entre 2 et 8 pendant un mois Jeter la solution si elle sem ble trouble Quand on l utilise sur un appareil PT Link pour une proc dure de pr paration des chantillons 3 en 1 la solution dilu e peut tre r ut
38. metal azide build up in plumbing 9 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 10 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Storage Store EnVision FLEX and EnVision FLEX reagents at 2 8 C Store EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent EnVision FLEX HRP and EnVision FLEX Substrate Buffer in the dark at 2 8 C Store EnVision FLEX Hematoxylin Code K8008 in the dark at room temperature Do not use after expiration date stamped on the vials If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user The prepared Substrate Working Solution should be stored in the dark at 2 8 C and used within 5 days If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the product is suspected contact Dako Technical Services 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 7 30 Reagent Preparation A 1 EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x DM828 Code K8004 Dilute a sufficient quantity of EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x 1 50 using distilled or deionised water for the staining procedure that is planned If Dako PT Link is used for pre treatment dilution can be performed by emptying the content of the Target Retrieval Solution 50x vial into the Dako PT Link tank and adding distilled
39. n hernie A ee seeded EE dee EE 8 Specimen Collection and Preparaton ss 8 lee IEN 9 A Pre treatment procedure umi is 9 ASE AAA lee tem Ns oc daa aaa a Aaaa aaa aaa Ta naaran ia de nenn 10 Quality Control SS Ai A AA ee ese ee 11 Interpretation of ResuliS icons aa is 11 ul le 11 Sei Vie ue RENE 20 FRANCAIS RE dee Ree TEE 12 IER e ee sitiada 12 e Le 13 ELN AAA NR EE 13 B Mat riel requis Mais non foumt cn nnnraninnanennss 13 C Reactii S EN Optlon rer A aan eee ee es a ees 14 Lage Le EE 15 Re le 16 Pr paration des e 16 Pr l vement et pr paration des chantillons oooonooccccnnnidiniccccccccnoccnananacononcnnonnanrnc cnn na nonnannnnos 17 elei LI 17 A Proc dure de pr traitement nn 17 B Proc dure de coloraiion cnn rn ninnanennss 19 Gontr lequallt oriol Ita a 20 Int rpr tation des r sultats 0 coniisala anat ea dee es 20 Bt ul 20 Explication Ges SyMbOles 2 22 12 meet is nennen 30 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 2 30 DEUTSCH VerWenduUngSZWECkK iia da daria 21 Zusammenfassung und Erkl rung 21 Reagenzien EE 22 A Mitgelieferte Materialien se 22 B Erforderliches aber nicht mitgeliefertes Material 23 C Optionale Reagenzien a la tr 23 VorsiCchtsMaBN E D 24 Re E ln WEE 24 ReagenzvorberetU inne hades oh ide A A A AA Rte anus 25 Entnahme und Vorbereitung der Probe ss 25 VE 26 A Arbeitsablauf der Vorbehandlung cccocoonococcccccccnconncnc
40. not dry out during the treatment or during the following immunohisto chemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended B Staining procedure Dako FLEX Ready to Use Primary Antibodies can be used with Dako EnVision FLEX detection system applied on formalin fixed paraffin embedded tissue sections A dilution guideline for Dako concentrated primary antibodies is provided in the package insert of the concentrated primary antibody The concentrated primary antibodies should be diluted in EnVision FLEX Antibody Diluent DM830 Code K8006 The staining steps and recommended incubation times are pre programmed into the Autostainer Link software as the following visualization system protocols FLEX and FLEX 2x5 DAB FLEX protocols FLEX Mouse and FLEX Mouse 2x5 DAB FLEX Mouse LINKER protocols FLEX Rabbit and FLEX Rabbit 2x5 DAB FLEX Rabbit LINKER protocols The recommended reagent application volume is 1 x 200 uL or 2 x 150 uL per slide If the protocols are not available on the used Autostainer Link instrument please contact Dako Technical Services Optimal incubation times of primary antibody and EnVision FLEX HRP are dependent on the applied primary antibody Please refer to the package insert for the individual Dako primary antibody The user must verify the applied protocol When the staining procedure is completed
41. o EnVision FLEX a t con u comme un dispositif flexible et permet d obtenir une coloration optimale sur les appareils Autostainer Link sous r serve de respecter le protocole recommand dans la pr sente notice En regle g n rale le produit EnVision FLEX Mouse r f K8002 fournit une amplification du signal de 4 5 fois et le produit EnVisionTM FLEX Rabbit r f K8009 en option fournit une amplification du signal de 2 a 3 fois Avant de proc der a la coloration les coupes de tissus fix es au formol et incluses en paraffine doivent tre soumises a un d paraffinage et a une r hydratation puis a une proc dure de d masquage d pitope induit par la chaleur HIER l aide de la m thode de restauration des cibles indiqu e dans la notice de l anticorps primaire Pour la proc dure de pr paration des chantillons 3 en 1 consulter aussi la section Proc dure La r f rence K8002 inclut la solution EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Il est galement possible d utiliser les solutions EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x r f K8004 ou EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x r f K8005 Certains anticorps primaires n cessitent un pr traitement enzymatique du tissu pour une coloration optimale au lieu d une proc dure HIER La peroxydase endog ne doit tre bloqu e l aide du r actif EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent SM801 inclus
42. oles Erl uterung der Symbole Catalogue number Temperature limitation Batch code Harmful R f rence du catalogue X Limites de temperature LOT Code du lot Nocif Bestellnummer Zul ssiger Temperaturbereich Chargenbezeichnung 7 Gesundheitssch dlich In vitro diagnostic medical device Store in the dark Use by IVD Dispositif m dical de Q Conserver dans l obscurit o Utiliser avant diagnostic in vitro F E Im Dunkeln aufbewahren Verwendbar bis In vitro Diagnostikum Consult instructions for use y ER Consulter les instructions Contains sufficient for lt n gt tests Manufacturer li d utilisation Vi Contenu suffisant pour lt n gt tests mal Fabricant Gebrauchsanweisung Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller beachten The Dako EnVision Systems are covered by U S Patent 5 543 332 and European Patent 594 772 Les systemes Dako EnVision sont couverts par le brevet am ricain 5 543 332 et le brevet europ en 594 772 Die Dako EnVision Systeme sind durch folgende Patente gesch tzt US Patent 5 543 332 und Europ isches Patent 594 772 Produced by Produit par Hersteller Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Danemark D nemark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 30 30
43. oloration immunohistochimique 9 Apres coloration il est recommand d effectuer une d shydratation un claircissement et un montage permanent REMARQUE lors d une utilisation pour une proc dure de pr paration des chantillons 3 en 1 sur un appareil PT Link la solution de d masquage des cibles dilu e ainsi que le tampon de lavage dilu peuvent tre utilis s 3 fois sur une p riode de 5 jours a condition d tre conserv s a temp rature ambiante Proc dure HIER l aide du PT Link Apres un d paraffinage et une r hydratation dans un bain de tampon eau les coupes de tissus doivent tre soumises a un d masquage d pitope induit par la chaleur HIER 1 Pr parer une solution de travail en diluant la solution de d masquage des cibles EnVision FLEX Target Retrieval Solution 50x concentr e au 1 50 me dans de l eau distill e ou d ionis e 2 Remplir les cuves du PT Link avec une quantit de solution de travail suffisante 1 5 litres pour recouvrir les coupes de tissus 3 Regler le PT Link afin de pr chauffer la solution a 65 4 D paraffiner et r hydrater manuellement les coupes de tissus mont es sur des lames de verre Pour une meilleure adh rence du tissu sur la lame il est recommand d utiliser des lames pr trait es ou silanis es 5 Immerger les coupes de tissus se trouvant a temp rature ambiante dans la solution de d masquage des cibles EnVision FLEX Target Retrieval Solu
44. pezifischen F rbung zu unterscheiden muss die Markierung der Testproben f r ung ltig erkl rt werden Auswertung der Ergebnisse Die Diaminobenzidin enthaltende Substrat Arbeitsl sung erzeugt am Ort des vom prim ren Antik rper erkannten Zielantigens ein braunes Endprodukt Die Braunf rbung muss am erwarteten Ort des Zielantigens auf der Positivkontrolle vorhanden sein Eine unspezifische F rbung stellt sich als eher diffuse Braunf rbung der mit der Negativkontrolle behandelten Objekttr ger dar Zellkerne werden durch die H matoxylin Gegenf rbung blau gef rbt 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 28 30 Einschr nkungen 1 Nur f r die automatisierte Benutzung in Autostainer Ger ten Falls das F rben manuell durchgef hrt wird muss der optimale Arbeitsablauf vom Benutzer ermittelt und festgelegt werden solange dieser nicht in der Packungsbeilage f r den spezifischen Dako Primary Antibody beschrieben ist 2 Nur zur Benutzung mit formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitten Bei der Benutzung gefrorener Gewebeschnitte oder Zellabstriche muss der optimale Arbeitsablauf vom Benutzer ermittelt und festgelegt werden solange dieser nicht in der Packungsbeilage f r den spezifischen Dako Primary Antibody beschrieben ist Anderungen des Arbeitsablaufes k nnen Auswirkungen auf die Anzahl der im Kit mitgelieferten Tests haben 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 29 30 Explanation of symbols Explication des symb
45. proc dure 3en1 1 Pr parer une solution de travail en diluant la solution de d masquage des cibles EnVision FLEX Target Retrieval Solution 50x concentr e au 1 50 me dans de l eau distill e ou d ionis e 2 Remplir les cuves du PT Link avec une quantit de solution de travail suffisante 1 5 litres pour recouvrir les coupes de tissus 3 Regler le PT Link afin de pr chauffer la solution a 65 4 Immerger les coupes de tissus fix es au formol et incluses en paraffine mont es dans la solution de d masquage des cibles EnVision FLEX Target Retrieval Solution solution de travail pr chauff e contenue dans les cuves du PT Link et incuber a 97 pendant 20 a 40 minutes L utilisateur doit d terminer le temps d incubation optimal 5 Laisser les coupes refroidir dans le PT Link jusqu a 65 6 Retirer chaque portoir lames Autostainer contenant les lames de la cuve du PT Link et plonger imm diatement les lames dans un r cipient une cuve par ex PT Link Rinse Station r f PT109 contenant du tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer 20x dilu et a temp rature ambiante 7 Laisser les lames dans le tampon EnVision FLEX Wash Buffer 20x dilu et a temp rature ambiante pendant 1 a 5 minutes 114817 004 K8002 EFG NAN 201 1 03 25 p 17 30 8 Placer les lames sur un appareil Autostainer Link et proc der a la coloration Les coupes ne doivent pas s cher lors du traitement ni pendant la proc dure de c
46. protein and an antimicrobial agent Contains reagent sufficient for 130 200 tests based on the use of 200 300 uL per test EnVision FLEX Mouse LINKER 40 mL ready to use Buffered solution containing stabilizing protein and an antimicrobial agent Contains reagent sufficient for 130 200 tests based on the use of 200 300 uL per test K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 6 30 Precautions 1 For professional users 2 EnVision FLEX HRP EnVision FLEX Mouse LINKER and EnVision FLEX Rabbit LINKER contain material of animal origin and it cannot be excluded that trace amounts of human material could be present due to manufacturing procedures As with any product derived from biological sources proper handling should be used 3 Do not expose EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent EnVision FLEX HRP EnVisionTM FLEX Substrate Buffer EnVision FLEX DAB Chromogen EnVision FLEX Substrate Working Solution or EnVision FLEX Hematoxylin to strong light during the procedure 4 For EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x and EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x a safety data sheet is available for professional users on request 5 For EnVision FLEX Wash Buffer 20x a safety data sheet is available for professional users on request 6 For EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent a safety data sheet is available for professional users on request 7 EnvVision
47. r l appareil Autostainer Link utilis contacter le service technique de Dako Les temps d incubation optimaux de l anticorps primaire et du produit EnVision FLEX HRP d pendent de l anticorps primaire utilis Veuillez vous reporter la notice de chaque anticorps primaire Dako L utilisateur doit v rifier le protocole appliqu Une fois la proc dure de coloration termin e les chantillons doivent tre mont s ll est recommand de r aliser une d shydratation un claircissement et un montage permanent quand les lames ont subi une proc dure de pr paration des chantillons 3 en 1 Pour les lames ayant subi une proc dure HIER elles peuvent tre mont es avec un milieu de montage aqueux ou permanent Pour un montage aqueux un milieu de montage de type Dako Glycergel Mounting Medium r f CO563 ou Faramount Aqueous Mounting Medium r f S3025 est recommand 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 19 30 Contr le qualit Chaque cycle de coloration doit comprendre un chantillon de contr le positif connu pour v rifier la bonne performance de tous les r actifs appliqu s Si l chantillon de contr le positif ne pr sente pas de coloration positive le marquage des chantillons a analyser doit tre consid r comme non valide Un r actif de contr le n gatif doit tre utilis avec chaque chantillon afin d identifier toute coloration non sp cifique Si une coloration non sp cifique ne peut pas
48. schnitte eignen sich sowohl Fixiermittel auf wassriger Basis als auch auf Basis organischer L sungsmittel Reagenzien A Mitgelieferte Materialien SM801 EnVision FLEX PEROXIDASE BLOCKING REAGENT EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent 3 x 40 mL gebrauchsfertig Wasserstoffperoxidhaltiger Phosphatpuffer 15 mmol L NaN3 und Detergenz Se EnVision FLEX HRP 3 x 40 mL gebrauchsfertig Mit Peroxidasemolek len und sekund ren Ziegenantik rpermolek len gegen Kaninchen und Maus Immunglobuline gekoppeltes Dextran In gepufferter L sung mit Stabilisatorprotein und Konservierungsmittel DM827 EnVision FLEX DAB Chromogen 3x3 mL 3 3 Diaminobenzidin Tetrahydrochlorid in organischem L sungsmittel Farbschwankungen bei diesem Reagenz kr ftig violett bis farblos haben keinerlei Einfluss auf die Leistung des Kits omens EnVision FLEX Substrate Buffer 12x20 mL Gepufferte L sung mit Wasserstoffperoxid und Konservierungsmittel DM828 EnVision FLEX TARGET RETRIEVAL SOLUTION HIGH pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x 9 x 30 mL 50fach konzentriert Tris EDTA Puffer pH 9 DM831 EnVision FLEX DO X EnVision FLEX Wash Buffer 20x 4 x 1 L 20fach konzentriert Tris gepufferte Kochsalzl sung mit Tween 20 pH 7 6 0 1 SH EnVision FLEX Mouse LINKER 3 x 40 mL gebrauchsfertig Gepufferte L sung mit Stabilisierungsprotein und antimikrobieller Substanz 114817 0
49. ser bis zur Markierung Fill Line erfolgen Unverbrauchte verd nnte L sung kann bei 2 8 einen Monat lang aufbewahrt werden Getr bte L sung verwerfen Bei Verwendung im PT Link f r die 3 in1 Probenvorbereitung kann die verd nnte L sung 3mal innerhalb von 5 Tagen verwendet werden wenn sie bei Raumtemperatur gelagert wird A 3 EnVision FLEX Wash Buffer 20x DM831 CodeNr K8007 Eine f r das geplante F rbeverfahren ausreichende Menge EnVisionTM FLEX Wash Buffer 20x mit destilliertem oder deionisiertem Wasser im Verh ltnis 1 20 verd nnen Um ein Aufsch umen so weit wie m glich zu vermeiden f gen Sie konzentrierten Wash Buffer zu einer abgemessenen Menge destilliertem oder entionisiertem Wasser hinzu R hren Sie gleichm ig bis die verd nnte L sung homogen erscheint Unverbrauchte verd nnte L sung kann bei 2 8 einen Monat lang aufbewahrt werden Getr bte L sung verwerfen Bei Verwendung im PT Link f r die 3 in1 Probenvorbereitung kann die verd nnte L sung 3mal innerhalb von 5 Tagen verwendet werden wenn sie bei Raumtemperatur gelagert wird AA EnVision FLEX Substrate Working Solution Die DAB haltige EnVision FLEX Substrate Working Solution wird durch gr ndliches Mischen von 1 Tropfen EnVision FLEX DAB Chromogen DM827 und 1 mL EnVision FLEX Substrate Buffer SM803 angesetzt Die EnVision FLEX Substrate Working Solution innerhalb von 5 Tagen verbrauchen bei 2 8 im Dunkeln aufbewahren
50. t entre 2 et 8 C et utilis e dans les 5 jours suivant sa pr paration En cas de coloration inattendue ne pouvant tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et de suspicion d un probleme avec le produit contacter le service technique de Dako Pr paration des r actifs A 1 EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x DM828 r f K8004 Diluer une quantit suffisante de EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x au 1 50 me en utilisant de l eau distill e ou d ionis e pour la proc dure de coloration pr vue Si l appareil Dako PT Link est utilis pour effectuer un pr traitement la dilution peut tre r alis e en vidant le contenu du flacon de solution de d masquage des cibles 50x dans la cuve du Dako PT Link et en ajoutant de l eau distill e ou d ionis e jusqu au trait indiqu ligne de remplissage La solution dilu e non utilis e peut tre conserv e entre 2 et 8 pe ndant un mois Jeter la solution si elle semble trouble Quand on l utilise sur un appareil PT Link pour une proc dure de pr paration des chantillons 3 en 1 la solution dilu e peut tre r utilis e 3 fois sur une p riode de 5 jours si elle est conserv e temp rature ambiante A 2 EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x DM829 r f K8005 Diluer une quantit suffisante de EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x au 1 50 me en utilisant de l eau disti
51. t se compose d une cha ne de dextrane sur laquelle un grand nombre de mol cules de peroxydase HRP et de mol cules d anticorps secondaire ont t coupl es Une seule r action chimique est utilis e pour la r action de couplage ce qui permet la liaison de 100 mol cules de HRP maximum et de 20 mol cules d anticorps maximum par cha ne Le syst me du substrat contenu dans le kit est form de deux composants le produit EnVision FLEX DAB Chromogen DM827 une solution de diaminobenzidine DAB concentr e et le tampon EnVision FLEX Substrate Buffer SM803 contenant du peroxyde d hydrog ne Avant emploi le 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 12 30 EnVision FLEX DAB Chromogen doit tre dilu dans le tampon substrat EnVision FLEX Substrate Buffer Le syst me du substrat forme un produit brun vif sur le site de l antig ne cible L h matoxyline EnVision FLEX Hematoxylin r f K8008 est recommand e pour la contre coloration Le r actif provoque une coloration nucl aire bleu clair Les coupes de tissus color es peuvent tre mont es soit avec un milieu de montage aqueux soit avec un milieu de montage organique base de solvant R actifs A Mat riel fourni SM801 EnVision FLEX PEROXIDASE BLOCKING REAGENT EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent 3 x 40 mL pr t l emploi Tampon phosphate contenant du peroxyde d hydrog ne NaN 15 mmol L et un d tergent ZER EnVision FL
52. tations locales et nationales pour l limination Le produit EnVision FLEX Antibody Diluent r f K8006 contient de l azide de sodium NaNs produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosives Lors de l elimination rincer abondamment a l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales 114817 004 K8002 EFG NAN 201 1 03 25 p 15 30 Conservation Conserver les r actifs EnVision FLEX et EnVision FLEX entre 2 et 8 C Conserver les produits EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent EnVision FLEX HRP et EnVision FLEX Substrate Buffer dans l obscurit entre 2 et 8 C Conserver le produit EnVision FLEX Hematoxylin r f K8008 dans l obscurit a temp rature ambiante Ne pas utiliser apr s la date de p remption imprim e sur les flacons Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par Putilisateur La solution de travail du substrat pr par e doit tre conserv e dans l obscuri
53. tion solution de travail pr chauff e et incuber a 97 pendant 20 40 minutes L utilisateur doit d terminer le temps d incubation optimal 6 Laisser les coupes refroidir dans le PT Link jusqu a 65 7 Retirer chaque portoir lames de la cuve du PT Link et plonger imm diatement les lames dans un r cipient une cuve par ex PT Link Rinse Station r f PT109 contenant du tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer 20x dilu et temp rature ambiante 8 Laisser les lames dans le tampon EnVision FLEX Wash Buffer 20x dilu et a temp rature ambiante pendant 1 a 5 minutes 9 Placer les lames sur un appareil Autostainer Link et proc der a la coloration Les coupes ne doivent pas s cher lors du traitement ni pendant la proc dure de coloration immunohistochimique 10 Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand REMARQUE lors d une utilisation pour une proc dure HIER sur un appareil PT Link la solution de d masquage des cibles dilu e ainsi que le tampon de lavage dilu peuvent tre utilis s 3 fois sur une p riode de 5 jours a condition d tre conserv s a temp rature ambiante Proc dure HIER utilisant des cuves de Coplin Apres un d paraffinage et une r hydratation dans un bain de tampon eau les coupes de tissus doivent tre soumises a un d masquage d pitope induit par la chaleur HIER 1 Placer les cuves de coloration contenant le produit EnVision FLEX
54. ue le kit permet d effectuer 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 20 30 DEUTSCH Verwendungszweck Zur In vitro Diagnostik Das Dako EnVision FLEX Nachweissystem ist f r immunhistochemische Verfahren mit Autostainer Link Ger ten bestimmt Das System weist prim re Maus und Kaninchen Antik rper nach und stellt die Reaktion mittels EnVision FLEX DAB Chromogen dar Durch Verwendung von EnVision FLEX Mouse LINKER bzw EnVision FLEX Rabbit LINKER Code Nr K8009 k nnen die Signale der primaren Maus bzw Kaninchenantik rper verst rkt werden Die EnVision FLEX Reagenzien sind zur Verwendung auf formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitten vorgesehen Zusammenfassung und Erklarung Das Dako EnVision FLEX Nachweissystem wurde als flexibles System konzipiert das bei Verwendung des in dieser Packungsbeilage angegebenen Protokolls optimale Farbeergebnisse auf Autostainer Link Ger ten liefert Als Richtwert ergibt sich mit EnVision FLEX Mouse Code Nr K8002 eine vier bis funffache Signalverstarkung und mit EnVision FLEX Rabbit Code Nr K8009 optionales Reagenz eine zwei bis dreifache Signalverstarkung Vor der Farbung m ssen die formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte einer Entparaffinierung und Rehydrierung gefolgt von hitzeinduzierter Epitopdemaskierung HIER mit der in der Packungsbeilage des prim ren Antik rpers angegebenen Demaskierungsmethode unterzogen werden Bitt
55. ufficient quantity 1 5 L of working solution to cover the tissue sections 3 Set PT Link to pre heat the solution to 65 4 Manually deparaffinize and rehydrate tissue sections mounted on glass slides For better adhesion of tissue to slide use of coated or silanized slides is recommended 5 Immerse room temperature tissue sections into the pre heated EnVision FLEX Target Retrieval Solution working solution and incubate for 20 40 minutes at 97 The optimal incubation time should be determined by the user 6 Leave the sections to cool in PT Link to 65 7 Remove each slide rack from PT Link tank and immediately dip slides into a jar tank e g PT Link Rinse Station Code PT109 with diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 20x 8 Leave slides in the diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 20x for 1 5 minutes 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 9 30 9 Place slides on an Autostainer Link instrument and proceed with staining The sections should not dry out during the treatment or during the immunohistochemical staining procedure 10 After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium NOTE When used in PT Link for HIER procedure the diluted Target Retrieval Solution and diluted Wash Buffer can be used 3 times within a 5 day period if stored at room temperature HIER procedure using Coplin jars After deparaffinization and hydration to buffer
56. uitably diluted concentrated primary rabbit or mouse antibodies from Dako 114817 004 K8002 EFG NAN 2011 03 25 p 5 30 Dako FLEX Ready to Use Rabbit or Mouse Universal Negative Control or suitable negative control reagent for the primary antibody Dako instrumentation utensils Microscope slides e g FLEX IHC Microscope Slides General laboratory reagents for deparaffinization of paraffin embedded tissue sections Mounting medium aqueous or organic solvent based and coverslips C Optional reagents K8004 DM828 K8005 DM829 K8006 DM830 K8007 DM831 K8008 SM806 K8009 SM805 K8021 SM804 114817 004 EnVision FLEX TARGET RETRIEVAL SOLUTION HIGH pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x 3 x 30 mL 50x concentrated Tris EDTA buffer pH 9 EnVision FLEX TARGET RETRIEVAL SOLUTION LOW pH 50x EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x 3 x 30 mL 50x concentrated Citrate buffer pH 6 1 EnVision FLEX Antibody Diluent 120 mL ready to use Tris buffer pH 7 2 containing 15 mmol L NaN and protein EnVision FLEX was eurrer 20X EnVision FLEX Wash Buffer 20x 1 L 20x concentrated Tris buffered saline solution containing Tween 20 pH 7 6 0 1 HEMATOXYLIN EnVision FLEX Hematoxylin 3 x 45 mL ready to use Aqueous solution of hematoxylin EnVision FLEX Rabbit LINKER 40 mL ready to use Buffered solution containing stabilizing
57. water the tissue sections should be subjected to heat induced epitope retrieval HIER 1 Place staining jars containing diluted EnVision FLEX Target Retrieval Solution 50x in water bath 2 Heat water bath and jars filled with EnVision FLEX Target Retrieval Solution working solution to 95 99 Cover jars with lids to stabilize the temperature and avoid evaporation 3 Immerse the room temperature sections in the preheated EnVision FLEX Target Retrieval Solution working solution in the staining jars 4 Bring temperature of the water bath and EnVision FLEX Target Retrieval Solution back to 95 99 Incubate for 20 1 minutes at 95 99 5 Remove the entire jar with slides from the water bath Allow slides to cool in the EnVision FLEX Target Retrieval Solution for 20 1 minutes at room temperature 6 Decant the EnVision FLEX Target Retrieval Solution and rinse sections with diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 20x for 1 5 minutes 7 Place the rack with rinsed sections on an Autostainer Link instrument Immediately begin the pre programmed staining run NOTE When used in Coplin jars HIER procedure the diluted Target Retrieval Solution and diluted Wash Buffer can be used only 1 time single use A few epitopes do not tolerate the HIER and some require enzymatic pre treatment Please refer to the package insert for the individual Dako primary antibody The tissue sections should
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