FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Epithelial Antigen
Contents
1. FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Epithelial Antigen Clone Ber EP4 Ready to Use CE Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS637 ENGLISH Intended use Synonym for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 117048 003 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Epithelial Antigen Clone Ber EP4 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody labels most epithelial cells and is useful in the differential diagnosis of adenocarcinoma versus malignant mesothelioma 1 The antibody may also aid in the detection of micrometastases in Iymph nodes of patients with esophageal carcinoma 2 and in differentiating between basal and squamous cell carcinomas of the skin 3 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Ep CAM Epithelial antigen is a transmembrane glycoprotein functioning as a cellular adhesion molecule This epithelium specific antigen is broadly distributed in2. 117048 003 The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 Cells labeled by the antibody display cytoplasmic and membrane staining The membrane staining is preferentially basolateral 4 Normal tissues All normal epithelial tissues are labeled by the antibody Epithelial cells of different origin display varying levels of staining but most epithelia are strongly positive Only parietal cells in gastric glands apical cell layers in squamous epithelia and adult hepatocytes are negative 4 The antibody does not label non epithelial tissues including spleen peripheral blood bone marrow brain connective tissue smooth and striated muscle heart endothelia and myoepithelia Additionally pleura and peritoneum lining cells are negative but cells covering the ovary display a slight staining 4 In colon the column epithelial cells show a moderate to strong staining reaction In kidney the epithelial cells lining the bowman capsule show a weak to moderate staining reaction Abnormal tissues The antibody labeled 142 of 144 epithelial tumor specimens irrespective of their differentiation derived from breast esophagus stomach colon rectum pancreas kidney liver lung thyroid and salivary glands vagina ovary cervix uteri and nasopharynx reflecting the staining pattern in their non malignant counterparts Hepatocellular carcinomas displayed heterogeneous staini
3. rmutterhals und Nasopharynx wobei die F rbemuster denen der jeweiligen gesunden Gewebe entsprachen Hepatozellul re Karzinome zeigten heterogene F rbung und schlossen die zwei negativen F lle ein In dieser Studie 4 waren 2 von 2 Plattenzellkarzinomen von Lunge bzw Geb rmutterhals als formalinfixierte paraffineingebettete Proben positiv obwohl in gesunden Geweben nur die basalen Zellschichten markiert waren Bei einigen Karzinomen wie z B Magenkarzinomen zeigte der Antik rper eine st rkere Markierung als im gesunden Gewebe insbesondere an der Membran Keiner der 88 nicht epithelialen Tumore wurde durch den Antik rper markiert ebenfalls keiner der 20 Leuk mie F lle 4 In einer Studie mit 83 Adenokarzinomen und 115 malignen Mesotheliomen wurden 72 von 83 Adenokarzinomen durch den Antik rper markiert dagegen nur 1 von 115 der malignen Mesotheliome 1 In einer weiteren Studie wurden 20 von 20 Adenokarzinomen der Lunge und 4 von 46 Mesotheliomen markiert Von den 4 positiven Mesotheliomen zeigten 2 eine stark rtlich begrenzte Markierung 6 In Lymphknoten die nach konventionellem histopathologischem Staging als tumorfrei eingestuft wurden markierte der Antik rper bei 89 von 126 Patienten mit vollst ndig entferntem Speiser hrenkarzinom mikrometastatische Tumorzellen 2 In einer Studie mit 75 Hauttumoren markierte der Antik rper 39 von 39 Basalzellkarzinomen O von 23 Plattenzellkarzinomen und zeigte einige gef rbte Regionen in 13 v
4. Dako PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x R f K8005 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires d paraffin es fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides r f K8020 Le syst me de visualisation recommand est EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 rempla ant la High pH Target Retrieval Solution de ce kit avec la EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x Code K8005 Les tapes de coloration et les temps d incubation sont pr programm s dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume d application de 200 uL ou FLEXRTUS volume d application de 300 uL Programme automatique B
5. each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include colon and kidney and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens IS637 EFG MNI 2009 12 04 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Staining interpretation Performance characteristics FRANCAIS Utilisation prevue Synonyme de l antig ne Resume et explication Reactifs fournis Immunogene Specificite Precautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni
6. et 41 kDa tandis que la d glycosilation r duit la taille 31 kDa et 36 kDa Dans les exp rimentations d immunoprecipitation l anticorps Ber EP4 bloque la r action de l anticorps HEA125 avec le lysat de cellules MCF 7 et vice versa montrant que les deux anticorps r agissent avec le m me antig ne Les deux anticorps pr sentent aussi une coloration identique dans les cellules et les tissus 4 Sur 37 lign es cellulaires test es l anticorps a marqu de mani re homog ne toutes 10 10 les lign es cellulaires des carcinomes alors que toutes les lign es cellulaires non pith liales 26 27 sont n gatives l exception de la lign e cellulaire rythromy lo de K562 4 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre l
7. r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen IS637 EFG MNI 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale References References Literatur Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX High pH Link Code Nr K8010 welches die High pH Target Retrieval Solution dieses Systems durch EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x Code Nr K8005 ersetzt Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 ul Anwendungsvolumen oder FLEXRTU3 300 ul Anwendungsvolumen Autoprogramm BerEP4 ohne Gegenf rbung oder BerEP4H mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedu
8. Gewebe beschriebenen F rbemuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen eine zytoplasmatische und eine Membranf rbung auf Die Membranf rbung ist vorzugsweise basolateral 4 Gesundes Gewebe Alle gesunden epithelialen Gewebe werden durch den Antik rper markiert Epitheliale Zellen unterschiedlicher Herkunft weisen unterschiedliche Intensit ten der F rbung auf die meisten Epithelien sind aber stark positiv Nur Parietalzellen in Magendr sen apikale Zellschichten in Plattenepithelien und reife Hepatozyten sind negativ 4 Der Antik rper markiert keine nicht epithelialen Gewebe darunter Milz peripheres Blut Knochenmark Gehirn Bindegewebe glatte und gestreifte Muskulatur Herz Endothel und Myoepithel Weiterhin sind Pleurazellen und peritoneumauskleidende Zellen negativ dagegen weisen die den Eierstock bedeckenden Zellen eine leichte F rbung auf 4 Die S ulenepithelzellen des Dickdarms weisen eine m ige bis starke F rbung auf Die Epithelzellen die in der Niere die Bowmankapsel auskleiden zeigen eine schwache bis m ige F rbung Pathologisches Gewebe Der Antik rper markierte unabh ngig von deren Differenzierungsgrad 142 von 144 epithelialen Tumorproben von Brust Speiser he Magen Enddarm Rektum Pankreas Niere Leber Lunge Schilddr se Speicheldr sen Vagina Eierstock Geb
9. Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Der Antik rper markiert die meisten epithelialen Zellen und wird f r die Differenzialdiagnose von Adenokarzinom und malignem Mesotheliom verwendet 1 Der Antik rper kann auch zum Nachweis von Mikrometastasen in Lymphknoten von Patienten mit Speiser hrenkarzinom 2 sowie zur Unterscheidung zwischen Basalzell und Plattenzellkarzinomen der Haut eingesetzt werden 3 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Untersuchung mit geeigneten Kontrollen erg nzt und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte des Patienten und anderer diagnostischer Tests vorgenommen werden Ep CAM Epitheliales Antigen ist ein transmembranes Glykoprotein das als zellul res Adh sionsmolek l wirkt Dieses epithelspezifische Antigen ist in Epithelzellen weit verbreitet und zeigt eine stark konservierte Expression in Karzinomen 4 5 Ausnahmen bez glich der verbreiteten Expression in gesunden Epithelien stellen reife Hepatozyten im Unterschied zu f talen Hepatozyten Parietalzellen in Magendr sen und apikale Zellschichten in Plattenepithelen dar die negativ sind Epitheliales Antigen kommt selten in Mesotheliomen vor 1 4 Es ist gezeigt worden dass epitheliales Antigen als Tumorzellmarker in Lymphknoten von Patienten mi
10. aktion des HEA125 Antik rpers mit dem MCF 7 Zelllysat und umgekehrt was zeigt dass beide Antik rper mit demselben Antigen reagieren Beide Antik rper erzeugen auch identische F rbemuster in Zellen und Geweben 4 Von 37 getesteten Zelllinien markierte der Antik rper einheitlich alle 10 10 Karzinomzelllinien dagegen waren alle nicht epithelialen 26 27 Zelllinien negativ mit Ausnahme der erythromyeloiden Zelllinie K562 4 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schch en aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrol
11. ant comme marqueur de cellule canc reuse dans les ganglions lymphatiques de patients atteints de carcinome de l oesophage class s autrement comme ganglion negatifs 2 Il a galement t sugg r que l antig ne pith lial pouvait tre un discriminant entre les carcinomes basocellulaires basospinocellulaires et spinocellulaires de la peau 3 Se r f rer aux nstructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone Ber EP4 4 Isotype IgG1 kappa Cellules MCF 7 lign e cellulaire de carcinome mammaire humain 4 L analyse des immunocomplexes entre l anticorps et le Iysat de 1 cellules MCF 7 marqu es en surface en analyse PAGE SDS dans des conditions r ductrices montre que l anticorps marque deux polypeptides de 34 kDa et 39 kDa respectivement correspondant l antigene pith lial Dans des conditions non reductrices les polypeptides apparaissent comme faisant 39 kDa
12. epithelial cells and displays a highly conserved expression in carcinomas 4 5 As exceptions to the general expression in normal epithelia adult hepatocytes in contrast to fetal hepatocytes parietal cells in gastric glands and apical cells in squamous epithelia are negative Epithelial antigen is rarely present in mesotheliomas 1 4 It has been reported that epithelial antigen plays an important role as tumor cell marker in Iymph nodes from patients with esophageal carcinoma otherwise classified as node negative 2 Epithelial antigen has also been suggested as a discriminator between basal cell and basosquamous carcinomas and squamous cell carcinoma of the skin 3 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone Ber EP4 4 Isotype IgG1 kappa MCF 7 cells human breast carcinoma cell line 4 Analysis of immunocomplexes between the antibody and lysate of I surface labeled MCF 7 cells in SDS PAGE under reducing conditions shows that the antibody labels two polypeptides of 34 KDa and 39 kDa respecti
13. erEP4 sans contre coloration ou BerEP4H avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l amp tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l operateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire IS637 EFG MNI 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance DEUTSCH Verwendungszweck Synonym f r das Antigen Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifitat Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 117048 003 individuellement Si le pathologiste qui r alise l evaluation d sire une intensi
14. es should be mounted using aqueous or permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 replacing the High pH Target Retrieval Solution from this kit with EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x Code K8005 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram BerEP4 without counterstaining or BerEP4H with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by
15. gnostic in vitro In vitro Diagnostikum Consult instructions for use Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Temperature limitation Limites de temp rature Zul ssiger Temperaturbereich Use by Utiliser avant Verwendbar bis Manufacturer Fabricant Hersteller Contains sufficient for lt n gt tests Contenu suffisant pour lt n gt tests Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Batch code Numero de lot Chargenbezeichnung IS637 EFG MNI 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17
16. imin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L epaisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pr traitement avec d masquage d Epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link Ref PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x Ref K8005 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le
17. len sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x Code Nr K8005 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x Code Nr K8005 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie f
18. ng and included the two negative cases In this study 4 2 of 2 squamous cell carcinomas of the lung and cervix uteri respectively were positive in formalin fixed paraffin embedded specimens even though only the basal cell layers were labeled in normal tissues In some carcinomas such as gastric carcinomas the antibody demonstrated a stronger labeling than in normal tissues especially on the membrane None of 88 non epithelial tumors and 20 cases of leukemia were labeled by the antibody 4 In a study of 83 adenocarcinomas and 115 malignant mesotheliomas 72 83 adenocarcinomas were labeled by the antibody whereas only 1 115 malignant mesotheliomas was labeled 1 In another study 20 20 lung adenocarcinomas and 4 46 mesotheliomas were labeled Of the 4 positive mesotheliomas the 2 showed a strictly focal labeling 6 In lymph nodes classified as tumor free by conventional histopathological staging the antibody labeled micrometastatic tumor cells in 89 of 126 patients with completely resected esophageal carcinomas 2 In a study of 75 skin tumors the antibody labeled 39 39 basal cell carcinomas 0 23 squamous cell carcinomas and showed some areas of staining in 13 13 basosquamous carcinomas 3 Pour utilisation lors d un diagnostic in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Epithelial Antigen Clone Ber EP4 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Auto
19. on 13 basosquam sen Karzinomen 3 1 Sheibani K Shin SS Kezirian J Weiss LM Ber EP4 antibody as a discriminant in the differential diagnosis of malignant mesothelioma versus adenocarcinoma Am J Surg Pathol 1991 15 779 84 2 Hosch S Kraus J Scheunemann P Izbicki JR Schneider C Schumacher U et al Malignant potential and cytogenetic characteristics of occult disseminated tumor cells in esophageal cancer Cancer Res 2000 60 6836 40 3 Beer TW Shepherd P Theaker JM Ber EP4 and epithelial membrane antigen aid distinction of basal cell squamous cell and basosquamous carcinomas of the skin Histopathology 2000 37 218 23 Latza U Niedobitek G Schwarting R Nekarda H Stein H Ber EP4 new monoclonal antibody which distinguishes epithelia from mesothelia J Clin Pathol 1990 43 213 9 Momburg F Moldenhauer G H mmerling GJ M ller P Immunohistochemical study of the expression of a M 34 000 human epithelium specific surface glycoprotein in normal and malignant tissues Cancer Res 1987 47 2883 91 6 Carella R Deleonardi G D Errico A Salerno A Egarter Vigl E Seebacher C et al Immunohistochemical panels for differentiating epithelial malignant mesothelioma from lung adenocarcinoma Am J Surg Pathol 2001 25 43 50 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole 117048 003 Catalogue number Reference catalogue Bestellnummer In vitro diagnostic medical device Dispositif medical de dia
20. rchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dies gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte bei Raumtemperatur durchf hren N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Die optimalen Bedingungen k nnen sich je nach Probe und Pr parationsverfahren unterscheiden und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten parallel zu den Patientenproben und nach demselben Protokoll angef rbt werden Als positives Kontrollgewebe sollte Dickdarm und Nierengewebe verwendet werden und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die unter Leistungsmerkmale f r dieses
21. ri s mais la plupart des pith liums sont fortement positifs Seuls les cellules pari tales des glandes gastriques les cellules apicales des pith liums simples pavimenteux et les h patocytes adultes sont n gatifs 4 L anticorps ne marque pas les tissus non pith liaux notamment la rate le sang p riph rique la moelle osseuse le cerveau le tissu conjonctif les muscles lisses et stri s le c ur les endoth liums et les myo pith liums En outre les cellules tapissant la pl vre et le p ritoine sont n gatives mais les cellules couvrant l ovaire pr sentent une l g re coloration 4 Dans le c lon les cellules pith liales pr sentent une coloration mod r e forte Dans le rein les cellules pith liales tapissant la capsule de Bowman pr sentent une coloration faible mod r e Tissus tumoraux l anticorps a marqu 142 chantillons de tumeurs pith liales sur 144 ind pendamment de leur diff renciation qu elles soient d riv es du sein de l oesophage de l estomac du c lon du rectum du pancr as du rein du poumon des glandes thyro de ou salivaires du vagin de l ovaire du col de l ut rus et du nasopharynx reprenant le sch ma de coloration de leurs contreparties non malignes Les carcinomes h patocellulaires pr sentaient une coloration h t rog ne et comprenaient les deux cas n gatifs Dans cette tude 4 2 sur 2 carcinomes spinocellulaires du poumon et du col de l ut rus respectivemen
22. stainer Autostainer Plus Cet anticorps marque la plupart des cellules pith liales et est tr s utile pour le diagnostic diff rentiel entre un ad nocarcinome et un m soth liome malin 1 L anticorps peut galement aider la d tection de micro m tastases dans les ganglions Iymphatiques de patients atteints d un carcinome de l oesophage 2 et pour la diff renciation entre les carcinomes spinocellulaires et basocellulaires de la peau 3 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi Ep CAM L antigene pith lial est une glycoprot ine transmembranaire fonctionnant comme une mol cule d adh sion cellulaire Cet antig ne sp cifique de l pith lium est largement r parti dans les cellules pith liales et pr sente une expression hautement conserv e dans les carcinomes 4 5 Faisant exception l expression g n rale dans les pith liums normaux les h patocytes adultes contrairement aux h patocytes foetaux les cellules pari tales des glandes gastriques et les cellules apicales dans les pith liums simples pavimenteux sont n gatifs L antig ne pith lial est rarement pr sent dans les m soth liomes 1 4 On a rapport que l antig ne pith lial joue un r le import
23. t taient positifs sur des chantillons fix s au formol inclus dans de la paraffine m me si seules les couches de cellules basales taient marqu es dans les tissus normaux Dans certains carcinomes comme le cancer de l estomac l anticorps a montr un marquage plus fort que dans les tissus normaux en particulier sur la membrane Aucune des 88 tumeurs non pith liales ni aucun des 20 cas de leuc mie n ont t marqu s par l anticorps 4 Dans une tude de 83 ad nocarcinomes et 115 m soth liomes malins 72 ad nocarcinomes sur 83 taient marqu s par l anticorps tandis que seul 1 m soth liome malin sur 115 l tait 1 Dans une autre tude 20 ad nocarcinomes du poumon sur 20 et 4 m soth liomes sur 46 ont t marqu s Sur les 4 m soth liomes positifs deux ont pr sent un marquage strictement focal 6 Dans les ganglions lymphatiques class s comme non tumoraux selon les cat gories histopathologiques conventionnelles l anticorps a marqu des cellules tumorales micro m tastatiques chez 89 patients sur 126 dont les carcinomes de l oesophage avaient t compl tement r s qu s 2 Dans une tude de 75 tumeurs cutan es l anticorps a marqu 39 carcinomes basocellulaires sur 39 0 carcinome spinocellulaire sur 23 et 13 carcinomes basospinocellulaires sur 13 pr sentaient une coloration sur certaines zones 3 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Epithelial Antigen Clone Ber EP4
24. t de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d hematoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre le rein et le c lon et les cellules structures doivent pr senter les sch mas de r action d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code 1S750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration cytoplasmique et membranaire La coloration membranaire est plut t basolat rale 4 Tissus sains tous les tissus pith liaux normaux sont marqu s par l anticorps Les cellules pith liales d origines diff rentes affichent des niveaux de coloration va
25. t Speiser hrenkarzinomen die andernfalls als Lymphknoten negativ diagnostiziert wurden eine wichtige Rolle spielt 2 Epitheliales Antigen wird auch f r die Unterscheidung zwischen Basalzell und basosquam sen Karzinomen und Plattenzellkarzinomen der Haut vorgeschlagen 3 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder der Gebrauchsanweisung f r das jeweilige IHC Detektionsverfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Proben 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper gel st in einem Puffer der Stabilisierungsprotein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon Ber EP4 4 Isotyp IgG1 Kappa MCF 7 Zellen menschliche Mammakarzinom Zelllinie 4 Die Untersuchung von Immunkomplexen zwischen dem Antik rper und Lysat von I oberfl chenmarkierten MCF 7 Zellen mit SDS PAGE unter reduzierenden Bedingungen zeigt dass der Antik rper zwei Polypeptide mit 34 kDa bzw 39 kDa markiert die dem epithelialen Antigen entsprechen Unter nicht reduzierenden Bedingungen erscheinen die Polypeptide als 39 kDa bzw 41 kDa Proteine w hrend Deglykosylierung ihre Gr e auf 31 kDa bzw 36 kDa reduziert In Immunpr zipitationsexperimenten blockiert der Ber EP4 Antik rper die Re
26. t be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x Code K8005 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 50x Code K8005 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin embedded sections After staining the slid
27. vely corresponding to epithelial antigen Under non reducing conditions the polypeptides appear as 39 kDa and 41 kDa while deglycosylation reduces the size to 31 kDa and 36 kDa In immunoprecipitation experiments the Ber EP4 antibody blocks the reaction of the HEA125 antibody with MCF 7 cell lysate and vice versa showing that the two antibodies react with the same antigen The two antibodies also produce identical staining results in cells and tissues 4 Of 37 cell lines tested the antibody homogeneously labels all 10 10 carcinoma cell lines whereas all non epithelial cell lines 26 27 are negative except for the erythromyeloid cell line K562 4 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions mus
Download Pdf Manuals
Related Search