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1. avec un syst me automatis d j en place au laboratoire pr parer deux tubes diff rents et les passer en parall le au m me moment sur l iQ 200 et sur le syst me automatis en place Le technicien validera la s rie sur les deux automates en respectant les r gles de validation du fournisseur Le technicien confronte les deux r sultats iQ200 et autre syst me automatis En cas de discordance pr parer deux autres aliquotes diff rents sur tube apr s homog n isation du pot tube d urine primaire afin de le passer sur l iQ200 et sur le syst me automatis du laboratoire Confronter les deux r sultats obtenus sur chacun des syst mes Un consensus doit tre trouv par le biologiste Les r sultats sont saisis dans la fiche de calcul EXCEL iQ200_Correlation Report Le tableur permet le calcul de la sensibilit sp cificit faux positif faux n gatif et taux de concordance entre les deux techniques 5 7 Traitement statistique des essais et les r sultats Un classeur est constitu pour pr senter les r sultats 5 8 Conclusion et d cision Le biologiste conclu sur la validation de la m thode apr s analyse des r sultats Document interne Ne peut tre diffus l ext rieur de l entreprise sans l accord de la Direction de Beckman Coulter France Urinalysis Page 9 sur 9 Guide pour la v rification de la m thode iQ200_DL_rev6_Octobre 20142. discordances Oui Oui Tableau des param tres v rifier au laboratoire extrait du SH SHGTA 04 Chap 9 1 1 5 4 D termination des limites d acceptabilit Les limites d acceptabilit de la m thode sont r sum es dans le tableau en annexe 4 du compte rendu de la v rification de la m thode 5 5 V rification bibliographique Les r f rences bibliographiques sont pr sent es dans le compte rendu de la v rification de la m thode 5 6 Les essais Avant de d buter les essais v rifier la calibration qui doit dater de moins de 15 jours Calibrer l appareil si n cessaire L appareil doit tre contr l de la m me mani re qu une analyse de routine R aliser les op rations de maintenance et de contr le qualit du matin sur l iQ 200 IRIS cleanser diluent diluent focus contr le positif contr le n gatif 5 6 1 R p tabilit Sur les globules rouges et globules blancs d chantillons patients L essai de r p tabilit consiste effectuer l analyse d un m me chantillon dans des conditions standardis es et identiques m me op rateur m me lot de r actifs m me instrument m me calibrateur Extrait du SH GTA04 page 16 En pratique il est recommand d utiliser 2 niveaux de concentration ils sont choisis en fonction des valeurs physiopathologiques l effectif id al est de 30 un nombre d essais inf rieur devra tre argument en fonction de crit res pertin
3. l appareil M thode Cet essai est r alis sur 30 jours avec le m me coffret de contr le interne de qualit et avec le niveau haut R sultats Editer les r sultats par l interface de liQ 200 S lectionner l onglet Instrument et cliquer Stats C Q s lectionner le CIQ positif tudier et imprimer les r sultats sur un lot complet ou une p riode donn e du lot La fiche pr sente la moyenne l cart type et le coefficient de variation La valeur du CV est compar e au CV limite admissible de Beckman Coulter Gamme IRIS Elle doit tre inf rieure 10 Document interne Ne peut tre diffus l ext rieur de l entreprise sans l accord de la Direction de Beckman Coulter France Urinalysis Page 6 sur 9 Guide pour la v rification de la m thode iQ200_DL_rev6_Octobre 2014 accvur COULTER e 5 6 3 Utilisation du Precision kit IRIS IRIS a d velopp un kit Precision kit destin exclusivement la r alisation de cet essai Le coffret comprend les 3 niveaux en h maties stabilis es humaines Le precision kit permet sur une s rie de 50 chantillons de d terminer la lin arit la r p tabilit la contamination inter chantillon du banc optique de PiQ 200 et une estimation du biais Mat riel Le kit comprend un niveau bas Negative control environ 0 particules ul un niveau moyen Middle control environ 500 particules ul un niveau haut Positive control e
4. rond de 10 ml Utiliser l IRIS Diluent ou de l eau physiologique pour pr parer les 30 tubes avec un volume de 2 5 ml M thode Nettoyer l appareil avec un rack de maintenance du matin contenant seulement les 3 premier tubes Cleanser Diluent Diluent Lancer les 30 tubes dans une m me s rie Traitement des R sultats Les tubes ne pr sentant pas de code barres ils seront arr t s automatiquement l cran Cliquer sur Revoir Echantillon marqu puis nommer les chantillons de la mani re suivante Limit Detect 1 Limit Detect 2 etc Imprimer un rapport consolid de la s rie Les r sultats sont enregistr s sur la fiche Excel correspondante Le calculateur donne ensuite la limite de d tection de votre iQ200 Document interne Ne peut tre diffus l ext rieur de l entreprise sans l accord de la Direction de Beckman Coulter France Urinalysis Page 7 sur 9 Guide pour la v rification de la m thode iQ200_DL_rev6_Octobre 2014 accvur COULTER 5 6 5 Contamination inter chantillons ou Carry over pour les G R ou les G B Une tude de contamination est effectu e sur le banc optique lors des essais du precision kit IRIS Le laboratoire peut rajouter cependant une tude suppl mentaire Mat riel Les tubes utilis s sur liQ sont en PP ou PS transparents fond rond de 10 ml S lectionner des chantillons patients l tat frais moins de 4 heures r ception
5. troitesse de l accord entre la moyenne d un nombre lev de valeurs mesur es r p t es et une valeur de r f rence La valeur de r f rence peut tre une valeur vraie de la grandeur mesur e ou une valeur assign e d un mat riau de r f rence dont l incertitude de mesure est n gligeable La justesse s exprime qualitativement Elle varie en sens inverse de l erreur syst matique La justesse est quantifi e par le biais qui repr sente la diff rence entre l esp rance math matique des r sultats et la valeur de r f rence Le biais est une erreur syst matique totale Il peut y avoir plusieurs erreurs syst matiques qui contribuent au biais Document interne Ne peut tre diffus l ext rieur de l entreprise sans l accord de la Direction de Beckman Coulter France Urinalysis Page 3 sur 9 Guide pour la v rification de la m thode iQ200_DL_rev6_Octobre 2014 Erreur syst matique L erreur syst matique est d finie comme la composante de l erreur de mesure qui lors de mesurages r p t s demeure constante ou varie de fa on pr visible Documents de r f rence Document Cofrac SH SHGTA 04 SH FORM 43 m thode quantitative et SH FORM 44 m thode qualitative Normes ISO 15189 GBEA II Chap 1 1c 2 6 2 11 2 13 2 14 2 15 Directive 98 79 CE QUAMIC 2013 LA VERIFICATION DE LA METHODE 5 1 V rifications pr alables Les analyseurs s rie iQ 200 disposent du marquage CE le document est dispon
6. 014 accvur COULTER l nd Iris Objet et domaine d application Ce document constitue un guide lors de l installation de l automate iQ200 mod le Select Elite et Sprint et se r f re au COFRAC SH SHGTA 04 et la norme ISO 15189 Il ne peut en aucun cas se substituer aux textes r glementaires et normatifs aux quels il se rapporte Il d taille les diff rentes actions mettre en uvre afin de constituer le dossier de v rification de la m thode n cessaire lors de l int gration de notre appareil au sein de votre laboratoire Le SH GTA 04 tant un texte non exhaustif et non opposable le laboratoire peut se r server le droit d ajouter des essais compl mentaires qu il jugera judicieux pour son dossier en plus de ceux propos s dans le pr sent document Objectif Adopter la m thode du fournisseur IRIS pour liQ 200 en r alisant la v rification des donn es de performance de ce dernier selon les recommandations du SH SHGTA 04 pour m thode quantitative Port e de type A Terminologies et abr viations Fid lit Elle qualifie l troitesse de l accord entre les valeurs mesur es obtenues par des mesures r p t es du m me chantillon dans des conditions sp cifi es Elle est g n ralement exprim e num riquement en termes d infid lit par l cart type la variance ou le coefficient de variation La fid lit d pend uniquement de la distribution des erreurs al atoires aucune relation avec l
7. Ca gcc Iris GUIDE POUR L ACCOMPAGNEMENT DE LA VERIFICATION DE LA METHODE Port e de tupe A DE l AUTOMATE i0 200 Beckman Coulter Urinalysis accvur ni COULTER Iris SOMMAIRE 1 Objet et domaine d application 3 2 Objectifs 3 8 Terminologies et abr viations 4 4 Documents de r f rence 4 5 La v rification de la m thode Port e de type A 5 5 1 V rifications pr alables 5 5 2 Pr sentation de la technique 5 5 2 1 But de la v rification 5 5 2 2 Domaine d application 5 5 3 D termination des crit res des performances pour l appareil 6 5 4 D termination des limites d acceptabilit 7 5 5 V rification bibliographique 7 5 6 Les essais 7 5 6 1 R p tabilit Sur les globules rouges et blancs d chantillons patients 7 5 6 2 Fid lit interm diaire interne au laboratoire 8 5 6 3 Utilisation du Precision kit IRIS 8 5 6 4 Limite de d tection 9 5 6 5 Lin arit des globules rouges et globules blancs pour des chantillons patients 10 5 6 6 Contamination inter chantillons ou Carry over pour les G R ou les G B 11 5 6 7 Corr lation avec la m thode d j utilis e au laboratoire 12 5 7 Traitement statistique des essais et les r sultats 12 5 8 Conclusion et d cision 12 Document interne Ne peut tre diffus l ext rieur de l entreprise sans l accord de la Direction de Beckman Coulter France Urinalysis Page 2 sur 9 Guide pour la v rification de la m thode iQ200_DL_rev6_Octobre 2
8. a valeur vraie Les conditions sp cifi es peuvent tre des conditions de r p tabilit des conditions de fid lit interm diaire ou des conditions de fid lit interm diaire R p tabilit Elle sera tablie dans des conditions o les r sultats sont obtenus par la m me m thode avec des chantillons identiques dans le m me laboratoire par le m me op rateur avec le m me quipement la m me m thodologie le m me lot de r actif et de calibrant et pendant un intervalle de temps restreint Fid lit interm diaire Elle sera tablie dans des conditions o les r sultats sont obtenus par la m me m thode avec des chantillons identiques dans diff rents laboratoires et ou un op rateur diff rents et ou un quipement diff rent et ou un lot de r actif et de calibrant diff rents pendant un intervalle de temps assez important On d finit en fonction des conditions sp cifi es une fid lit interm diaire intra laboratoire et une fid lit interm diaire inter laboratoires Erreur al atoire Elle repr sente la composante de l erreur de mesure qui lors de mesures r p t es varie de fa on impr visible Dans ce cas la valeur de r f rence pour une erreur al atoire est la moyenne qui r sulterait d un nombre infini de mesures r p t es du m me mesurande grandeur mesur e Les erreurs al atoires d un ensemble de mesure peuvent tre d crites par la variance Justesse Elle qualifie l
9. araison avec la m thode d j utilis e au laboratoire SHGTA 04 Chap 11 9 page 21 Cette tude de la comparaison ne peut intervenir qu apr s la v rification des crit res suivants r p tabilit fid lit interm diaire justesse limite de d tection ou de quantification limite de lin arit Mat riel Les tubes utilis s ensuite sur liQ sont en PP ou PS transparents fond rond de 10 ml S lectionner des chantillons patients l tat frais moins de 4 heures r ception au laboratoire ne pas mettre les urines au r frig rateur pour viter la formation de cristaux Utiliser les codes barres du laboratoire pour identifier les tubes M thode SHGTA 04 Chap 11 9 page 21 Pour comparer les r sultats d une m thode Y avec ceux d une m thode X utilis e au laboratoire ou prise comme r f rence on analyse au moins 30 chantillons de patients couvrant de fa on homog ne l tendue du domaine physiopathologique Ces chantillons frais de pr f rence sont analys s en simple par les 2 techniques dans un d lai le plus court possible Document interne Ne peut tre diffus l ext rieur de l entreprise sans l accord de la Direction de Beckman Coulter France Urinalysis Page 8 sur 9 Guide pour la v rification de la m thode iQ200_DL_rev6_Octobre 2014 accvur COULTER y La lecture en manuel et le passage sur l iQ des chantillons doivent se faire en une
10. au laboratoire ne pas mettre les urines au r frig rateur afin de pr venir la formation de cristaux et en vitant la pr sence de mucus spermatozo des levures et de cristaux amorphes M thode Nous ne s lectionnerons pas d chantillons h t rog nes qui pourraient boucher l appareil Pour rappel les urines h t rog nes doivent tre dilu es selon la proc dure IRIS afin de pr server l appareil S lectionner un chantillon haut not H avec une valeur en globules blancs ou rouges d environ 1000 5 000 p uL S lectionner un chantillon bas not B avec une valeur en globules blancs ou rouges d environ 30 50 p uL alternatif prenez de l eau physiologique R aliser la pr paration du rack avec 3 tubes de l chantillon haut identifi H1 H2 et H3 Puis les 3 tubes de l chantillon bas identifi s B1 B2 et B3 H1 H2 H3 B1 B2 B3 Les s quences sont r p t es plusieurs fois 5 fois Cf SH GTA04 page 19 Remarque importante pr parer pour chaque passage un nouveau rack Le rack pr par est analys dans la foul e sur liQ L homog n isation des chantillons doit tre r alis e avec la plus grande des attentions La formule pour le calcul est contamination en moyenne B1 moyenne B3 moyenne H moyenne B3 x 100 Avec moyenne H moyenne H1 1 H2 1 H3 1 H2 1 Hi j aveci 1 5etj 1 3 Les r sultats sont saisis sur la fiche Excel correspondante 5 6 6 Comp
11. ents Document interne Ne peut tre diffus l ext rieur de l entreprise sans l accord de la Direction de Beckman Coulter France Urinalysis Page 5 sur 9 Guide pour la v rification de la m thode iQ200_DL_rev6_Octobre 2014 accvur COULTER x Iris Mat riel Les tubes utilis s sont en PP ou PS transparents fond rond de 10 ml S lectionner des chantillons patients l tat frais moins de 4 heures r ception au laboratoire ne pas mettre les urines au r frig rateur afin de pr venir la formation de cristaux et en vitant la pr sence de mucus spermatozo des levures et de cristaux amorphes M thode Agiter le pot primaire par retournements entre chaque pr paration de tube et remplir les tubes avec 2 5 ml d urine Chaque rack doit tre pr par extemporan ment S lectionner un chantillon avec une valeur en globules rouges d environ 10 15 p pl niveau 1 S lectionner un chantillon avec une valeur en globules rouges d environ 200 500 p ul niveau 2 S lectionner un chantillon avec une valeur en globules blancs d environ 10 15 p ul niveau 1 S lectionner un chantillon avec une valeur en globules blancs d environ 200 500 p ul niveau 2 Pr parer les tubes sur un rack patient et lancer imm diatement l analyse Remarque pr lever plusieurs fois dans un m me tube fausse la concentration en l ments Si vous n avez pas assez d urine pour confectio
12. heure au maximum afin d viter les variabilit s dues aux d gradations des matrices L agitation des chantillons doit tre r alis e avec la plus grande des attentions chaque chantillonnage iQ200 vs technique manuelle Les urines sont mont es en manuel en cellule par un technicien selon le protocole du fournisseur des cellules Le pr l vement se fera avec une pipette et non pas l oese Respecter les temps d attente avant la lecture des chantillons Pr parer en parall les les tubes avec code barres et les passer sans attendre sur l iQ 200 Le technicien validera la s rie l cran de liQ Le technicien confronte les deux r sultats iQ200 et manuel En cas de discordance un deuxi me technicien remonte une lame partir d un 2 pipetage et apr s homog n isation du flacon tube d urine primaire Si la discordance persiste entre manuel et iQ200 pr parer un autre aliquote sur tube apr s homog n isation du pot tube d urine primaire afin de le passer sur l iQ200 Confronter les deux validations de liQ Un consensus doit tre trouv par le biologiste Les r sultats sont saisis dans la fiche de calcul EXCEL iQ200_Correlation Report _iQ200 et m thode manuelle Le tableur permet le calcul de la sensibilit sp cificit faux positif faux n gatif et taux de concordance entre les deux techniques iQ200 vs Syst me automatis du laboratoire En cas de comparaison
13. ible dans le manuel utilisateur et le num ro du marquage est accessible l arri re de l appareil Les consommables comme le liquide de gainage Lamina les contr les internes de qualit le calibrant les solutions de lavage et de rin age resp Cleanser et Diluent sont marqu s CE Les fiches techniques et les fiches de s curit des consommables sont accessibles sur demande au si ge de la soci t Beckman Coulter France Le certificat ISO 13189 d IRIS INTERNATIONAL est disponible sur demande au service qualit de Beckman Coulter France 5 2 Pr sentation de la technique de l appareillage et du mode op ratoire Le principe de la m thode de l appareillage et du mode op ratoire sont d taill s dans le manuel de l op rateur au format PDF accessible sur liQ 200 Une description simplifi e est accessible au chapitre 1 du dossier de v rification de la m thode 5 2 1 But de la v rification L objectif est de v rifier les performances de l automate iQ 200 sp cifi es par la soci t Beckman Coulter Nous d montrerons que la m thode fonctionne correctement dans les conditions op ratoires du laboratoire et que les r sultats sont s rs pour les patients 5 2 2 Domaine d application L iQ 200 r alise les analyses de cytologie urinaire partir d chantillons d urine L iQ 200 d nombre les diff rents l ments contenus dans les urines aussi bien les cellules que les s diments globules rouges globules bla
14. ncs amas de globule blancs bact ries mucus spermatozo des cylindres hyalins cylindres pathologiques petites cellules rondes cellules pith liales cristaux et levures Document interne Ne peut tre diffus l ext rieur de l entreprise sans l accord de la Direction de Beckman Coulter France Urinalysis Page 4 sur 9 Guide pour la v rification de la m thode iQ200_DL_rev6_Octobre 2014 COULTER 5 3 D termination des crit res des performances pour l appareil Les performances v rifier sont celles d crites dans le SH SHGTA 04 chap 9 1 1 page 11 pour une technique quantitative port e de type A Param tres v rifier Bibliographie Port e de type A Sp cificit analytique Oui Non Fid lit Oui Oui r p tabilit et fid lit interm diaire Oui Justesse approche Oui d s que possible Intervalle de mesure limite de quantification et limites de Oui Si besoin lin arit Incertitudes facteurs de variabilit et Oui Oui valuation Contamination entre chantillons Oui pour les a Oui param tres s il y a lieu sensibles Stabilit des r actifs i Oui Non apr s ouverture embarqu Robustesse Non Non A v rifier si interf rences Oui n e lt aife A v rifi d s que Intervalles de r f rence Oui possible si justifi Comparaison d une m thode d j utilis e Oui Oui au laboratoire si existe si possible Analyse des
15. nner les tubes vous pouvez r aliser deux passages au minimum sur un rack de 10 tubes de 2 1 ml r f rence QUAMIC 2013 page 49 La r p tabilit doit tre valu e sur les h mat es et les leucocytes dans des conditions standardis es m me op rateur m me lot de r actifs en passant cons cutivement si possible 20 fois un chantillon dans une m me s rie Traitement des R sultats Les tubes ne pr sentant pas de code barres ils seront arr t s automatiquement l cran Cliquer sur Revoir Echantillon marqu puis nommer les chantillons de la mani re suivante Repet GR N1 1 Repet GR N1 2 etc Avec N1 1 pour niveau 1 chantillon 1 N1 2 niveau 1 chantillon 2 etc Imprimer un rapport consolid de la s rie Les r sultats sont enregistr s sur la fiche Excel Le calculateur donne ensuite la moyenne l cart type et le coefficient de variation pour chaque niveau La valeur du CV est compar e au CV limite admissible de Beckamn Coulter Gamme Iris Cf Tableau A du Chapitre 4 5 6 2 Fid lit interm diaire La fid lit interm diaire consiste effectuer l analyse d un m me chantillon pour la m me analyse dans des conditions diff rentes l op rateur la date etc sont consid r s comme des donn es variables Mat riel Les tubes utilis s sont en PP ou PS transparents fond rond de 10 ml Le flacon Positive Control issu du coffret du contr le interne de qualit de
16. nviron 1000 particules ul selon le lot du coffret la valeur est mentionn e sur le flacon Les tubes utilis s sont en PP transparents fond rond de 10 ml Ce kit permet de r aliser des essais sur 50 chantillons 5 rack de 10 tubes M thode Le protocole utilis est d crit dans le document Protocole pour le Precision kit d IRIS La justesse quantifi e par le biais est estim e en comparant la moyenne obtenue m lors de l tude de r p tabilit la valeur cible attendue assimil e la valeur v de l chantillon test On r alisera le calcul pour le niveau haut positive control La justesse est exprim e en pourcentage de la valeur cible selon le calcul suivant Biais en m v v x 100 R sultats Les r sultats sont calcul s dans la fiche Excel correspondante 5 6 4 Limite de d tection Il s agit du plus petit signal exprim en quantit ou en concentration qui peut tre distingu avec une probabilit donn e d un blanc de r action r alis dans les meilleures conditions Elle repr sente la quantit minimale d tectable pour laquelle la r ponse peut tre distingu e avec une probabilit donn e d un blanc de r action L tude de la limite de d tection est bas e sur l analyse statistique de la diff rence de signaux observ s pour les blancs et les chantillons Mat riel Les tubes utilis s ensuite sur liQ sont en PP ou PS transparents fond
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