illustra AutoSeq G-50 Dye Terminator Removal Kit
Contents
1. qn l supp SUUO O9 D 2 4 4 DJ anajua ino LIDNb uoy noq f 55 Jeuuo Iq1N0 3upsiD b b supp 0154 045 5 Ua 15 bi T Q 5 T A GD18 119 38 13 191WDU34AQ nbil s ssno s p suon p l s p uonp lyund pi inod 30303014 y Suonpsijund 000 T 0 07 6 2 suonp lul nd 052 20 0755 2 HA DAOUISY 10JDUIUHS 1 JAT 6 9 nib somny 015 1 suonpollund od 10 0225 2 apidoi 99U919 91 looo2oud 21D2 0102 10 24 25 29 1 62 2 02 D lilind uollnunu l J AJ SUOJ ADN 9 G A4 SUO2 6 x 000 z p nulul1 Q uonni3 UIOS 2 AD JUISI D 17U 9 ND anpu ua UO UDU28 p N S2 2T D Unajosiji3n IUJNOJ asb NG 5405 IW S T uonjobnjujua UN SUDP 2 DJ 189DJd uollnupu p uonp llddy Z 6 x 000 2 p nul lT Q llo supp JUUOJO H 1 9P d jupuJno 21nJ8UUJe D 1818 U2 107 MDNb un p uoy noq 55 d uuollIq4no UDSID bi SUUO O2 DJ SUPP ols dsns Ua is l bl2. pid ua uou noq l hawaj uls l D D 8 Hd VLA3 P WW S OT 1 001 5 uou noq a uonpupd ld T emo dB SHY ni sD nb s ow4 y1 suon p l s p uonp lyund p inod 30303014 9 suohpoiund 000 1 60 055 2 5 01021 0 052 20 0926 2 12777770 O 77 suonnayund 05 10 0765 22 pidb lo o old 21109 Q UONDUIBDWI AN VN6 ZdH JUOJIDYI min 20 4 UIDUSJSUIY p lluur 91405 39 S9DUSDS9J L09 S9DUSI9S9 9 MMM 7 a y S PUUOp 002 JNOd SINJISANO D 4104 snid s l SUOHDULIOJUI s l inod ajUDS 39 14014 2 201002 pupu p ins lqluodsip 159 SajlijopoW s p ajipidwaka un Juno s l Inb ajups 39 195 np 2121905 JU A SAJI DPOUI XND SILUNOS JUOS SNPUSA 5921 5 Ja SUBI S SNOL 9002 lu p oaid SJ101P SNOL A pdulo 2119813 DISUSD 0102 9002 Sih ds i 59 1019110010 sin tidold 1405 sil n s sod p sanbiouu s 591 39 5 191005 s p s sod p s nb ow s p 1405 09 01 ApDey je 39VgD6en 4 sp nb s ows y Ja JIWUZAJ 4 X
3. v3 1 PE Corporation num ro de catalogue 4337454 peut tre utilis pour pr parer des r actions pour analyse par tous les analyseurs de s quence ABI communs exemple 377 3730XL 6 Le protocole fourni avec illustra AutoSeg G 50 Dye Terminator Removal Kit a t optimis pour la purification des r actions de sequen age seulement GE Sant fournit une gamme de produits de purification des acides nucl iques pour d autres applications voir la section 6 3 4 2 Principe de base L utilisation des illustra AutoSeq G 50 columns comprend les tapes suivantes Preparation la colonne v 2 Application de l chantillon 3 lution L ADN purifi pr t pour les applications en aval Etape Commentaires Composant 1 Preparation de la La resine est remise illustra AutoSeg colonne en suspension et le Gen column tampon de stockage en exc s est limin par centrifugation 2 Application de L chantillon est l chantillon appliqu la colonne 3 lution L chantillon purifi est lu par centrifugation 4 3 Sp cifications du produit Type d chantillon R actions de s quen age automatis es Principe Filtration sur gel Matrice de la colonne ADN Sephadex G 50 de qualit F Tampon de conservation Edu distillee contenant du biocide Kathon de la colonne CG ICP 015 96 comme agent de conservation Volume de l chantillon 12
4. Contenu de la trousse Identification Taille de 50 250 1 000 l emballage purifications purifications purifications Nodelacat 27 5340 01 27 5340 02 27 5340 03 illustra 50 250 1000 b AutoSeq b G 50 Columns Tubes de 50 250 1 000 collecte et bouchons Se reporter au certificat d analyse pour une liste complete des composants de la trousse 3 2 l ments fournir par l utilisateur Jetables Microtubes de centrifugation de 1 5 ml sans DNase Produits chimiques Lors de la purification des r actions de s quen age des trousses de s quen age Thermo Sequenase Dye Terminator 100 ul d EDTA 10 5 mM pH 8 sont n cessaires pour chaque purification 3 3 quipement n cessaire Microcentrifugeuse capable d accueillir des microtubes de centrifugation de 1 5 ml M langeur tourbillon 4 Description 4 1 Introduction illustra AutoSeg G 50 columns contiennent de l ADN de r sine Sephadex de qualit F Elles permettent l limination du colorant terminateur des r actions de s quen age par le proc d de filtration sur gel Les mol cules plus grosses que les pores les plus larges dans la Sephadex sont exclues du gel et sont lu es en premier Les mol cules de taille interm diaire p n trent dans la matrice des degr s variables en fonction de leur taille et de la r sine utilis e La p n tration de la matrice retarde la progression dans la colonne les tr s petites mol cule
5. s est disponible sur demande Contactez votre repr sentant GE Sant pour les informations les plus r centes voir la couverture arri re pour les coordonn es http vvvvvv gelifesciences com GE Sant UK Limited Amersham Place Little Chalfont Buckinghamshire HP7 9NA UK 2 Manipulation 2 1 Avertissements et precautions de securite Avertissement Utiliser uniquement des fins de recherche Non recommand ni destin au diagnostic des maladies chez l homme ou l animal Usage interne ou externe interdit chez l homme ou l animal Tous les produits chimiques doivent tre consid r s comme potentiellement dangereux Seules les personnes form es aux techniques de laboratoire et famili res avec les principes des bonnes pratiques de laboratoire doivent manipuler ces produits Porter des v tements de protection appropri s comme des sarraus de laboratoire des lunettes de s curit et des gants Prendre soin d viter tout contact avec la peau ou les yeux en cas de contact laver imm diatement l eau voir la ou les fiches signal tiques et ou la ou les d clarations de s curit pour les recommandations sp cifiques 2 2 Conservation Tous les composants de la trousse doivent tre conserv s temp rature ambiante 20 25 C Ne pas congeler 2 3 Dates d expiration Pour la date d expiration veuillez vous r f rer l tiquette sur l emballage ext rieur 3 Composants 3 1
6. 2 Protocole pour la purification des r actions de s quen age des trousses de s quen age Thermo Sequenase Dye Terminator R P 1 Pr paration de la colonne a Retirer le bouchon sup rieur et ajouter 10 5 mM 100 ul d EDTA 10 5 mM pH 8 la r sine Remettre le bouchon en place 1 Remettre q resine en suspension dans la colonne en la faisant tourbillonner d Desserrer le bouchon d un guart de tour et enlever la fermeture inferieure en la ournant e Placer la colonne dans le tube de collecte ourni pour le support 1 minute 8 5 2 000 x g f Centrifuger pendant 1 minute 2 000 x g r alyemorque Voir la section 6 1 pour le calcul des tr min de lq FCR A Utiliser les colonnes imm diatement apr s la pr paration pour viter le dess chement de la r sine La vitesse de rotation peut tre r duite de 20 si n cessaire 12 Ne pas utiliser le bouton d impulsion sur la microcentrifugeuse car cela peut annuler le reglage de la vitesse g Proceder imm diatement l tape 2 ci dessous 2 Application de l chantillon a Placer la colonne dans un nouveau microtube de centrifugation de 1 5 ml sans DNase fourni par l utilisateur PTS 12 25 b Appliquer lentement 12 25 ul d chantillon chantillon b en haut au centre de la r sine en faisant attention de ne pas perturber le lit de r sine pNRemarque La
7. 25 ul d entr e Essai nucl ase Les composants de la colonne sont test s dans des preuves nickase gt exonucl ase simple et double brin et RNase Applications ult rieures D pendent de l chantillon d entr e mais importantes incluent des applications de transfert et de s quen age 4 4 Resultat typigue Figure 1 R sultats typiques de s quen age de l ADN 800 Longueur de lecture moyenne Phred 20 illustra 740 3 755 8 597 700 S quen age de g 600 l ADN 9 500 Op rateur 5 400 1 5 300 4 200 ji 100 3 0 KA x x NY est es oF oY Un stock en vrac de r actions de s quen age avec la trousse de s quen age cyclique BigDye Terminator v3 1 a t pr par en utilisant un plasmide base de pUC contenant le cadre de lecture ouvert TP53 prot ine tumorale p53 comme matrice et des amorces de s quen age avant et arri re M13 Les aliquotes de ce stock en vrac ont t purifi s par trois op rateurs diff rents Les r actions de s quen age purifi es ont t analys es par un fournisseur de services de s quen age externe l aide d un analyseur d ADN ABI PRISM 3730XL 5 Protocole Remarque Les colonnes NE sont PAS transf rables entre les trousses GE Sant par exemple la composition des colonnes AutoSeq G 50 n est pas la m me que la composition des colonnes MicroSpinTM G 50 Utilisation des ic nes La l g
8. 495 IUDN EQOI x poud s basojny ADIN 0 15 1 Xupduuo 21172313 0 s sod p s p 1405 39 D uonoulbpul 39 De OZ D aljund uollupu q ISAJSSUOT 10n J8A18SUOD 6 x 000 z 0 tT Q YETER
9. 600 Hettich Mikro 24 48 4 300 Hettich Mikro EBA12 4 400 Eppendorf Centrifuge 5415C 4900 Eppendorf Centrifuge 5417C 4 400 14 6 2 Guide de depannage Ce guide peut tre utile dans un premier temps Cependant si les probl mes persistent ou pour de plus amples informations veuillez contacter les services techniques de GE Sant Les num ros de t l phone se trouvent sur la derni re page Vous pouvez galement vous connecter sur http www gelifesciences com illustra Probl me Degr de puret m diocre de l chantillon Cause possible Intensit faible du signal Suggestions e V rifiez que le volume de l chantillon tait de 12 ul avant le chargement Si vous n tes pas certain de l talonnage de votre pipette nous recommandons d augmenter le volume de l chantillon 20 pl avec de l eau distill e avant le chargement e V rifiez que le volume de l chantillon n tait pas sup rieur 20 ul avant le chargement nn V rifiez que l chantillon est q SOIGNEUSEMENT ajout dans le centre de la r sine Ne perturbez pas la colonne Ne laissez pas l chantillon s couler dans les c t s du lit de r sine e Utilisez la colonne imm diatement apr s avoir termin l tape de pr paration de la colonne Ne laissez pas la r sine s ass cher ou se fissurer 15 6 3 Produits connexes Le catalogue de GE Sant et son site web pr sentent une gamme complete de r actifs mol culaires bi
10. GE Sante Consultez la couverture arri re pour acc der la carte de illustra AutoSeq G 50 Dye Terminator Removal Kit Pour la purification des r actions de s quen age cyclique protocole de r f rence rapide Livret du produit Codes 27 5340 01 50 purifications 27 5340 02 250 purifications 27 5340 03 1 000 purifications Table des matieres 1 Mentions legales 2 Manipulation 2 1 Avertissements et pr cautions de s curit 2 2 Conservation 2 3 Dates d expiration 3 Composants 3 1 Contenu de la trousse 3 2 l ments fournir par l utilisateur 3 3 quipement n cessaire 4 Description 4 1 Introduction 4 2 Principe de base 4 3 Sp cifications du produit 4 4 R sultat typique 5 Protocole 5 1 Protocole de purification des r actions de s quen age des trousses de s quen age cyclique DYEnamic ET et ABI Big Dye v3 1 5 2 Protocole de purification des r actions de s quen age des trousses de s quen age Thermo Sequenase Dye Terminator 6 Annexe 6 1 Calcul des tr min partir de la FCR 6 2 Guide de d pannage 6 3 Produits connexes KO O O UT 1 Fo ud o 10 12 14 14 15 16 Carte de protocole de r f rence rapide Couverture arri re D tachez la feuille contenant les protocoles pour l utilisateur exp riment purifiant les r actions de s quen age avec les trousses de s quen age cyclique DYEnamic ET et ABI Big Dye v3 1 ou les t
11. dique g n ralement une surcentrifugation trop rapide ou trop longue R hydrater la colonne avec 250 ul d eau distill e st rile sans nucl ase faire tourbillonner et r p ter la centrifugation en v rifiant les r glages La vitesse de rotation peut tre r duite de 20 si n cessaire Ne pas utiliser le bouton d impulsion sur la microcentrifugeuse car cela peut annuler le r glage de la vitesse e Proc der imm diatement l tape 2 ci dessous 2 Application de l chantillon a Placer la colonne dans un nouveau U microtube de centrifugation de 1 5 ml sans DNase fourni par l utilisateur b Appliquer lentement 12 25 ul d chantillon N TN 12 25 chantillon en haut au centre de la r sine en faisant attention de ne pas perturber le lit de r sine Remarque La r sine se sera car e l g rement de la colonne pour former un pilier est essentiel d appliquer lentemen l chantillon tant purifi et de ne pas le laisser s couler sur les c t s du lit de r sine viter de de r sine avec l embout de la pipe oucher le lit te 3 Elution q Centrifuger pendant 1 minute 2 000 x g 4 R R Siir 1 minute Lechantillon purifi est recueilli dans le fond 2000xg du microtube de centrifugation de 1 5 ml ii b Proc der conform ment aux instructions fournies avec l analyseur d ADN ou conserver l chantillon purifi 20 C 5
12. ende ci dessous d crit la fonction des ic nes utilis es dans le livret du protocole Cette ic ne est utilis e pour mettre en vidence les tapes particuli rement critiques respecter dans le protocole Le non respect de ces conseils aura un impact n gatif sur les r sultats Cette ic ne est utilis e pour mettre en vidence les conseils techniques qui am liorent la description de l tape Ces conseils peuvent indiquer les zones de flexibilit dans le protocole ou fournir une recommandation pour optimiser le rendement de la trousse Voir les sections 3 2 et 3 3 pour les mat riaux et quipements fournir par l utilisateur 5 1 Protocole pour la purification des r actions de s quen age des trousses de s quen age cyclique DYEnamic ET et ABI BigDye v3 1 1 Pr paration de la colonne a Remettre la r sine en suspension dans la colonne en la faisant tourbillonner b Desserrer le bouchon d un quart de tour et enlever la fermeture inf rieure en la tournant uu j Placer la colonne dans le tube collecte fourni pour le support 10 d Centrifuger pendant 1 minute 2 000 x g 1 minute b g 2000xg FelRemarque Voir la section 6 1 pour le calcul des tr min de la FCR Ny Remargue Utiliser les colonnes g imm diatement apr s la pr paration pour viter le dess chement de la r sine Si la r sine de la colonne semble s che d plac e ou fissur e apr s le premier tour cela in
13. lonage par PCR Blunt ended PCR RPN5110 40 r actions des extr mit s Cloning Kit franches Pr paration des EXOSAP ITTM US78200 100 produits PCR pour r actions le s quen age automatis Extraction et illustra 28 9042 70 50 purification plasmidPrep Mini purifications rapides de l ADN Spin Kit plasmidique des cultures petite chelle d E coli Purification de illustra 28 9042 67 25 l ADN plasmidigue plasmidPrep Midi purifications de qualit de Flow Kit transfection d E coli 17 GE Sante offices GE Sant Bio Sciences AB Bj rkgatan 30 751 84 Uppsala Sweden GE Sant Europe GmbH Munzinger Strasse 5 D 79111 Freiburg Germany GE Sant Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue PO Box 1327 Piscataway NJ 08855 1327 USA GE Sant Japan Corporation Sanken Bldg 3 25 1 Hyakunincho Shinjuku ku Tokyo 169 0073 Japon Pour obtenir des informations sur les personnes contacter en cas de besoin consultez le site http www gelifesciences com contact GE Sant UK Limited Amersham Place Little Chalfont Buckinghamshire HP7 9NA UK http www gelifesciences com imagination l oeuvre 29 1362 52 AC 01 2010 UIOS UlS L D M ND INDY olinupu ip iri S2 2T O n psilnn 10d iuinoy spyq 5405 IW uonp nilnu np Anou un SUDP H D id uollnu p uonp ollddy Z 6 x 000 Z D
14. ologiques http www gehealthcare com illustra Si vous avez besoin de plus amples renseignements les services techniques de GE seront ravis de vous aider les num ros de t l phone pour le monde entier se trouvent sur la couverture arri re Application Pr paration de matrices d ADN circulaires Trousses de Produit 100 Trousse d amplification DVYEnamic Code du produit Taille de l emballage illustra TempliPhiT 25 6400 10 100 r actions US81050 100 matrices reaction de s quen age optimis es pour le syst me d analyse d ADN MegaBACE Terminator Cycle Sequencing Kit Purification illustra MicroSpin 27 5325 01 50 des sondes G 25 Columns purifications d ADN et des oligonucl otides Purification illustra 28 9034 08 50 des sondes ProbeQuant purifications d ADN et des G 50 Micro oligonucl otides Columns suite illustra NICK Columns illustra NAP 5 Columns 17 0855 02 50 purifications 17 0853 02 50 purifications 16 Application Purification de Produit Code du Taille de produit l emballage illustra GFX PCR 28 9034 70 100 l ADN de PCR DNA amp Gel Band purifications de bandes de Purification Kit gel d agaroseet illustra GFX 96 PCR 28 9034 45 10 x Plaques d enzymes Purification Kit de 96 puits Ligature de l ADN Ligate IT Rapid US78400 25 r actions Ligation Ki Ready To Go 27 0361 01 50 r actions T4 DNA ligase C
15. r sine se sera cart e l g rement de la colonne pour former un pilier Il est essentiel d appliquer lentement l chantillon tant purifi et de ne pas le laisser s couler sur les c t s du lit de r sine viter de toucher le lit de r sine avec l embout de la pipette 3 lution mm a Centrifuger pendant 1 minute 2 000 x g uu 2000xg Pechantillon purifi est recueilli dans le 5 fond du microtube centrifugation de 1 5 ml b Proc der conform ment aux instructions fournies avec l analyseur d ADN ou v conserver l chantillon purifi 20 C 13 6 Annexes 6 1 Calcul des tours par minutes partir de la force centrifuge relative La centrifugation appropri e pour un rotor sp cifique peut tre calcul e partir de la formule suivante tr min 1 000 x V FCR 1 12r O FCR la force centrifuge relative r le rayon en mm mesur partir de l axe de la broche jusqu la partie inf rieure du godet de rotor et tr min tours par minute Par exemple si une FCR de 735 x g est n cessaire en utilisant un rotor avec un rayon de 73 mm le nombre de tours par minute correspondant serait de 3 000 Le Tableau 2 ci dessous montre les tr min appropri s pour diverses microcentrifugeuses Tableau 2 Tr min appropri s pour une FCR de 2 000 x g Microcentrifugeuse Tr min appropri s pour une FCR de 2 000 x g Heraeus Biofuge 15 4 600 Beckman GS15R 3
16. rousses de s quen age Thermo Sequenase Dye Terminator 2 1 Mentions legales Restrictions l utilisation du produit L illustraT AutoSeq G 50 Dye Terminator Removal Kit et ses composants ont t con us d velopp s et vendus des fins de recherche seulement Ils conviennent pour l utilisation in vitro uniquement Aucune revendication ou repr sentation n est destin e leur utilisation pour identifier tout organisme sp cifique ou pour une utilisation clinique diagnostique pronostique th rapeutique ou concernant des banques de sang Il incombe l utilisateur de v rifier l utilisation des illustra AutoSeq G 50 columns pour une application sp cifique car les caract ristiques de performance de ce produit n ont pas t v rifi es pour un quelconque organisme sp cifique GE imagination l oeuvre et GE monogram sont des marques d pos es de General Electric Company illustra NICK AutoSeq Sephadex MicroSpin ProbeQuant GFX NAP DYEnamic et Thermo Sequenase TempliPhi MegaBACE et Ready To Go sont des marques d pos es des soci t s de GE Sant Toutes les marques d pos es de tiers sont la propri t de leurs propri taires respectifs 2006 2010 General Electric Company Tous droits r serv s dition pr c dente 2006 Tous les biens et services vendus sont sous r serve des modalit s de vente de la soci t au sein de GE Sant qui les fournit Un exemplaire des pr sentes modalit
17. s sont lu es en dernier Le volume requis pour luer ces petites mol cules d pend du volume disponible l int rieur et l ext rieur des pores c est dire le volume du lit Les r sines de filtration sur gel ne pr sentent pas une limite d exclusion fixe lorsqu elles sont utilis es dans un format de colonne rotative Les limites d exclusion des r sines de filtration sur gel ne sont significatives que dans les processus de flux continu o les mol cules tant purifi es ont suffisamment de temps pour atteindre l quilibre entre le temps pass dans le milieu de filtration sur gel et le temps pass dans le courant de l luant Dans la chromatographie colonne pivotante les propri t s d exclusion observ es qui permettent au produit de passer travers le gel tandis que les impuret s plus petites sont retenues d pendent de facteurs exp rimentaux comme la r sine utilis e le volume de l chantillon la taille des produits et les forces d acc l ration utilis es dans le proc d de purification Les illustra AutoSeq G 50 columns sont pr par es pour la purification des r actions de s quen age marqu es du colorant terminateur La trousse de s quen age cyclique GE Sant DYEnamicT ET terminator peut tre utilis pour pr parer des r actions de s quen age pour analyse sur des analyseurs de s quence MegaBACET de GE Sant En variante la trousse de s quen age cyclique AB TM BigDye
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