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125I RIA Kit Instruction Manual

1. 16 3 Sensibilit analytique D finie comme la concentration obtenue 3 carts types de l activit de liaison maximale la quantit minimale d celable est de 15 pg mL pour l option qui dure la nuit et 20 pg mL pour l option de 3 heures 16 4 Sp cificit analytique La comparaison de la r activit crois e de l anticorps anti ACTH a t effectu e avec les peptides suivants 1 200 pg mL Peptide 96 r action crois e a MSH 0 01 b Endorphin 0 01 b Lipotropin 0 01 Leucine Enkephalin 0 01 Methionine Enkephalin 0 01 Bombesin 0 01 Calcitonin 0 01 Parathyroid Hormone 0 01 FSH 0 01 Human Growth Hormone 0 01 Vasopressin 0 01 Oxytocin 0 01 Substance P 0 01 Porcine ACTH 1 39 100 Human ACTH 1 24 100 Nous avons montr que l ACTH de rat peut aussi tre mesur e avec ce syst me le plasma de rat peut cependant contenir d autres substances interf rentes VOIR LA DERNIERE PAGE POUR LES R F RENCES 21 PROCEDURE DE DOSAGE Option A LE n 8 e o S Option B 1 a eo oo gt Reconstituer les r actifs lyophilis s et permettre aux chantillons congel s de d congeler compl tement Ne pas laisser les r actifs atteindre une temp rature sup rieure 25 C Identifier les tubes en double Distribuer les r actifs sur de la glace pil e conform ment au profil suivant ES Contr les et Tubes R actifs PA NSB SE chantillons inconnus Etalons 0 5 100 uL 1
2. 9 9 9 10 9 11 9 12 Set up labeled 12 x 75 mm disposable glass tubes in duplicate according to the Scheme of the Assay on the back page Place the rack of tubes on crushed ice Add reagents as follows a Total count tubes Set aside until Step 6 b Nonspecific binding tubes NSB 100 uL of Calibrator 0 c Calibrator 0 100 uL of Calibrator 0 200 uL of ACTH antiserum d ACTH Calibrators A E 100 uL of ACTH calibrator 200 uL of ACTH antiserum e Controls plasma and unknown samples 100 uL of plasma 200 uL of ACTH antiserum Add 200 pL of 251 ACTH to all tubes Mix and incubate for 16 24 hours at 2 8 C Vigorously mix the GAR PPT add 500 uL to all the tubes except the total count tubes Mix and incubate for 15 25 minutes at 20 25 C Centrifuge the tubes for 20 minutes using 760 x g at 20 25 C Immediately decant the supernatant from all the tubes except the total count tubes by inverting them for a minimum of 2 minutes Blot the tubes on absorbent paper to remove any drops of supernatant that may be remaining on the rims before turning the tubes upright Using a gamma scintillation counter count the precipitate of each tube and the total count tubes for a sufficient time to achieve statistical accuracy See Limitations of the Procedure 10 ASSAY PROCEDURE OPTION B 3 HOUR ASSAY 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 Thaw unknown samples and place on crushed ice Reconstitute the lyophilized reagents and allow any
3. In the United Kingdom Call 44 0 1344 401 430 FAX 44 0 7884 050812 PRINTED IN U S A
4. 4 1 Nullkalibrator lyophilisiertes Reagenz Zugabe von ACTH freiem Humanplasma mit 0 02 Natriumazid und anderen Stabilisatoren Das Fl schchen mit 3 0 mL destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten lang auf Crash Eis stehen lassen bis sich der Inhalt vollst ndig gel st hat vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 2 ACTH Kalibratoren A E lyophilisiertes Reagenz ACTH Kalibratoren Porcin werden bei Nominalkonzentrationen zwischen 20 und 500 pg mL 4 5 112 Pikomol L in Nullkalibrator vorverd nnt der 0 02 Natriumazid und andere Stabilisatoren enth lt Exakte Konzentrationswerte werden auf jeder Charge angegeben Jedes Fl schchen mit 1 0 mL destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten lang auf Crash Eis stehen lassen bis sich der Inhalt vollst ndig gel st hat vor dem Gebrauch gr ndlich mischen Um konsistente Ergebnisse zu erhalten k nnen diese Kalibratoren zum Gebrauch in einem Assay nur einmal aufgetaut werden Der DiaSorin ACTH Kalibrator wurde gegen den WHO Standard 74 555 kalibriert Ein Vergleich mit anderen Produkten oder Verfahren sollte auf der Grundlage dieses Referenzkalibrators erfolgen Die Kalibratoren des Kits sind mit Patientenproben austauschbar wenn sie mit Reagenzien verwendet werden und dieser diagnostische in vitro Test wie empfohlen durchgef hrt wird 4 3 ACTH Antiserum lyophilisiertes Reagenz Hase anti ACTH Serum wird in BSA Boratpuffer unter Zugabe von 0 002 Thimerosal und anderen S
5. COURBE D TALONNAGE DE L CHANTILLON ACTH 100 FIGURE 1 19 DONN ES DE R DUCTION Le laboratoire CQ DiaSorin utilise un programme d ajustement smoothed spline curve 14 LIMITATIONS DE LA PROCEDURE 141 Les valeurs de contr le ont t obtenues en utilisant l option A la proc dure de dosage qui dure la nuit Les valeurs obtenues avec le dosage de trois heures peuvent donner des r sultats l g rement diff rents 14 2 Les temps de num ration doivent tre suffisants pour emp cher l erreur statistique par exemple l accumulation de 2 000 CPM donnera une erreur de 5 96 10 000 CPM donneront une erreur de 1 96 15 VALEURS ATTENDUES 15 1 Intervalle normal Chaque laboratoire doit tablir sa propre plage de valeurs de r f rence Les valeurs normales obtenues dans le laboratoire DiaSorin sont bas es sur la comparaison des valeurs par rapport au standard 74 555 ACTH de l OMS uniquement ne pas utiliser d autre talon du commerce Le laboratoire DiaSorin a d termin un intervalle de valeurs 0 82 pg mL pour l option B n249 Comme notre calibration a t faite avec du plasma sur EDTA l utilisation de s rum ou de tout autre type de plasma peut donner un intervalle de valeurs normales sup rieur ou inf rieur 15 2 Non sp cificit Comme des r actions non sp cifiques peuvent avoir lieu lors des dosages radio immunologiques le laboratoire doit tre pr t effectuer des dilutions en s rie d un chanti
6. di B Bo rispetto alla concentrazione di log 13 1 Calcolare il CPM medio per ogni calibratore controllo e campione non noto 13 2 Sottrarre il CPM medio delle provette NSB da tutti i conteggi 13 3 Dividere il CPM corretto di ogni calibratore controllo o campione non noto per il CPM corretto del calibratore 0 B Bo CPM del calibratore o campione non noto CPM di NSB x 100 drug CPM del calibratore 0 CPM di NSB 13 4 Utilizzando carta millimetrata per modello log logit o semi logaritmica a due cicli tracciare la percentuale di B Bo per i calibratori ACTH asse verticale rispetto alla concentrazione asse orizzontale 13 5 Tracciare una linea di miglior interpolazione fra i punti 13 6 Interpolare i livelli di ACTH nei campioni non noti nel tracciato 13 7 Se un campione non noto d una lettura maggiore rispetto al calibratore superiore il campione dovr essere diluito correttamente con il calibratore 0 e analizzato nuovamente 13 8 Se un campione non noto stato diluito correggere con il fattore di diluizione idoneo 13 9 Calcolare il legame massimo dividendo il CPM del calibratore 0 per la media dei conteggi totali ottenuta nelle provette dei conteggi totali 41 TABELLA III DATI CAMPIONE DIASORIN ACTH RIA Percentuale CPM CPM CPM Legato Legato Conc duplicato medio corretto B T B Bo pg mL Conteggio totale 18 327 18 539 18 750 NSB 1 790 1 821 9 8 1 852 Calibratore 0 9 289 9 346 7 525 50
7. pituitary and adrenal glands Two factors in the hypothalamus will stimulate ACTH release One is vasopressin a well known peptide and the other is a lesser known substance CRF or corticotropin releasing factor Vasopressin infusion is a potentially useful provocative test however it has certain dangers and must be used cautiously ACTH measurement is a clinically useful tool in the assessment of adrenal and pituitary insufficiency 5 It is also useful in assessment of Cushing s syndrome whether related to pituitary or adrenal tumors Further information on the use of the DiaSorin ACTH assay is available upon request 3 PRINCIPLE OF THE ASSAY The DiaSorin ACTH assay is an equilibrium radioimmunoassay which can be performed by one of two methods In Option A sample first antibody and tracer are combined and incubated for 16 24 hours at 2 8 C A pre precipitated second antibody complex is added to separate the bound from free tracer The assay can then be centrifuged and decanted after a 15 minute incubation at 20 25 C In Option B sample first antibody and tracer are combined and incubated for 3 hours at 2 8 C A pre precipitated second antibody complex is added to separate the bound from free tracer The assay can then be centrifuged and decanted after a 15 minute incubation at 20 25 C The 3 hour option is less sensitive than the overnight procedure and the results obtained will be slightly higher Quality control wi
8. num ration totale Couvrir les tubes et agiter doucement l aide du vortex Incuber pendant 15 25 minutes entre 20 et 25 C Centrifuger 760 x g pendant 20 minutes D canter les surnageants Compter chaque tube dans un compteur gamma pendant 60 secondes minimum g 1118 x 105 rayon en cm tr min 22 RADIOIMMUNOASSAY F R DAS ADENOCORTICOTROPE HORMON 1 VERWENDUNGSZWECK NUR ZUR IN VITRO DIAGNOSTIK Dieses Kit enth lt Anleitungen und Material f r die quantitative Bestimmung von humanem ACTH mit dem Radioimmunoassay RIA 2 BERBLICK UND ERKL RUNG ACTH ist ein Hypophysenhormon aus 39 Aminos uren mit der folgenden Struktur NH Ser Tyr Ser Met Glu His Phe Arg Trp Gly Lys Pro Val Gly Lys Lys Arg Arg Pro Val Lys Val Tyr Pro Asn Gly Ala Glu Asp Glu Ser Ala Glu Ala Phe Pro Leu Glu Phe OH Die Sequenz 1 13 entspricht dem alpha Melanozyten stimulierenden Hormon Die Sequenz 1 24 gilt als aktiver Molek lteil Die Sequenz 18 39 ist als CLIP oder Corticotropin like intermediate lobe peptide Corticotropin hnliches Zwischen lappenpeptid bekannt Das Molek l ist im Allgemeinen ein basisches Protein und reagiert sehr labil auf die Aktion von Peptidasen Da sich ACTH leicht an Glas bindet und mit Serumproteinen verbindet ist eine spezielle Pufferzubereitung erforderlich um die Erhaltung von ACTH sicherzustellen und nichtspezifische Bindungen zu reduzieren ACTH stimuliert die Sekretion
9. thaw completely Do not allow reagents to reach above 25 C Identify tubes in duplicate 2 Dispense reagents according to the following scheme on crushed ice Tubes Reagents counts NSB 05 unknown samples Calibrators 0 5 100 uL 100 uL Controls 100 uL Unknown Samples 100 uL Antiserum 200 uL 200 uL Tracer 200 uL 200 uL 200 uL 200 uL 3 Cover the tubes with parafilm and vortex gently 4 Incubate for 16 24 hours at 2 8 C 5 Dispense 500 uL of the GAR PPT into all wells except the total count tubes 6 Cover the tubes and vortex gently 7 Incubate for 15 25 minutes at 20 25 C 8 Centrifuge using 760 x g for 20 minutes 9 Decant the supernatants 10 Count each tube in a gamma counter for 60 seconds or longer Option B 1 Reconstitute the lyophilized reagents and allow any frozen specimens to thaw completely Do not allow reagents to reach above 25 C Identify tubes in duplicate 2 Dispense reagents according to the following scheme on crushed ice Tubes Reagents counts NSB 05 unknown samples Calibrators 0 5 100 uL 100 uL Controls 100 uL Unknown Samples a 100 uL Antiserum 200 uL 200 uL Tracer 200 uL 200 pL 200 uL 200 pL 3 Cover the tubes with parafilm and vortex gently 4 Incubate for 3 hours 15 minutes at 2 8 C 5 Dispense 500 uL of the GAR PPT into all wells except the total count tubes 6 Cover the tubes and vortex gently 7 Incubate for 15 25 minute
10. 3 mL Calibratori ACTH 1 5 5 fiale 1 0 mL 5 fiale 1 0 mL Antisiero ACTH 1 fiala 14 mL 2 fiale 14 mL 13 ACTH 1 fiala 14 mL 2 fiale 14 mL Complesso precipitante GAR PPT 1 fiala 35 mL 2 fiale 35 mL Controlli ACTH livello 1 e 2 2 fiale 1 0 ML 2 fiale 1 0 ML Numero di test 65 130 35 CONSERVAZIONE Dopo il ricevimento dei reagenti e prima della ricostituzione conservarli a 2 8 C Dopo la ricostituzione conservare tutti i reagenti a 15 o a una temperatura inferiore fino alla data di scadenza indicata sull etichetta reagenti non devono essere utilizzati dopo la data di scadenza Durante la ricostituzione del contenuto delle fiale mescolare delicatamente al fine di evitare la formazione di schiuma Non si devono mescolare reagente di lotti diversi 4 4 Calibratore 0 reagente liofilizzato Plasma umano esente da ACTH con sodio azide allo 0 02 ed altri stabilizzanti aggiunti Ricostituire la fiala con 3 0 mL di acqua purificata e lasciare riposare su ghiaccio tritato per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso 4 2 Calibratori ACTH A E reagente liofilizzato I calibratori ACTH maiale a concentrazioni nominali varianti fra 20 500 pg mL 4 5 112 picomoli L sono prediluiti nel Calibratore 0 contenente 0 02 sodio azide ed altri stabilizzanti valori esatti della concentrazione sono assegnati per ogni lotto Ricostituire ogni fiala con 1 0 mL di acqua pu
11. aux produits radioactifs doit tre limit au personnel autoris Ne pas pipeter des solutions radioactives avec la bouche Ne pas manger ni boire dans les zones de travail radioactives En cas de d versement de produits radioactifs dans une zone nettoyer la zone puis la laver l aide d un produit d tergent base d alcali ou d une solution de d contamination radiologique Tout article en verre utilis doit tre enti rement lav l eau avant de laver les autres articles en verre du laboratoire Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence sp cifique La r ception l utilisation le transfert et la mise au rebut de produits radioactifs sont sujets aux r glementations et conditions de votre licence sp cifique AVERTISSEMENT Ce produit contient un produit chimique connu dans l Etat de Californie comme tant canc rig ne ATTENTION La radioactivit imprim e sur la notice d utilisation peut tre l g rement diff rente de celle qui est imprim e sur l tiquette de la boite et sur l tiquette du flacon du traceur Les tiquettes de la boite et du flacon du traceur indiquent la dose r elle de radioactivit la date de calibrage alors que la notice d utilisation indique la radioactivit th orique de la trousse 6 INDICATIONS D UNE D T RIORATION POSSIBLE DES R ACTIFS DE LA TROUSSE 6 4 Pr sence de particules anormales dans l un des r actifs 6 2 cart de pente
12. esente da qualsiasi contaminazione PRECAUZIONE Il plasma eparinizzato produce valori falsamente bassi Gli inibitori di enzimi non sono necessari nella fase di raccolta dei campioni tuttavia importante conservare il campione al freddo 0 4 C dopo la raccolta fino ad 8 ore Per tempi di conservazione pi lunghi aggiungere nei campioni 500 KIU mL di aprotinina e conservarli a 15 C E importante che i campioni rimangano congelati preferibilmente in provette di plastica Si pu notare una diminuzione di ACTH quando i campioni vengono congelati e scongelati ripetutamente 8 ATTREZZATURE E MATERIALI NECESSARI NON FORNITI IN DOTAZIONE 8 1 Provette in vetro borosilicato monouso 12 x 75 mm 8 2 Centrifuga a temperatura controllata adatta per 12 provette da 75 mm 20 25 C 8 3 Contatore ad emissione di scintille gamma adatto per il conteggio di 25l gt g 1118x 10 raggio in cm rpm 38 8 4 8 5 8 6 Mixer Vortex Dispositivi per operazioni con pipetta a Micropipette calibrate per erogare 50 uL 100 pL e 200 uL b Dosatori a ripetizione calibrati per erogare 200 uL e 500 pL Acqua purificata 9 PROCEDURA DI ANALISI OPZIONE A TUTTA LA NOTTE 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 Scongelare i campioni non noti e metterli su ghiaccio tritato Ricostituire i reagenti liofilizzati e lasciare scongelare completamente eventuali reagenti congelati Evitare che i reag
13. frozen reagents to thaw completely Do not allow reagents to reach temperatures above 25 C Mix reagents gently and place on crushed ice before using Set up labeled 12 x 75 mm disposable glass tubes in duplicate according to the Scheme of the Assay on the back page Place the rack of tubes on crushed ice Add reagents as follows a Total count tubes Set aside until Step 6 b Nonspecific binding tubes NSB 100 uL of Calibrator 0 c Calibrator 0 100 uL of Calibrator 0 200 uL of ACTH antiserum d ACTH Calibrators A E 100 uL of ACTH calibrator 200 uL of ACTH antiserum g 1118 x 10 radius in cm rpm e Controls plasma and unknown samples 100 uL of plasma 200 uL of ACTH antiserum 10 6 Add 200 pL of 1 ACTH to all tubes 10 7 Mix and incubate for 3 hours 15 minutes at 2 8 C 10 8 Vigorously mix the GAR PPT add 500 pL to all the tubes except the total count tubes 10 9 Mix and incubate for 15 25 minutes at 20 25 C 10 10 Centrifuge the tubes for 20 minutes using 760 x g at 20 25 C 10 11 Immediately decant the supernatant from all the tubes except the total count tubes by inverting them for a minimum of 2 minutes Blot the tubes on absorbent paper to remove any drops of supernatant that may be remaining on the rims before turning the tubes upright 10 12 Using a gamma scintillation counter count the precipitate of each tube and the total count tubes for a sufficient time to achieve statistical accuracy See Li
14. un contatore ad emissione di scintille gamma contare il precipitato di ogni provetta e delle provette per il conteggio totale per un tempo sufficiente a raggiungere la precisione statistica vedere la sezione Limiti della procedura 10 PROCEDURA DI ANALISI OPZIONE B ANALISI DI 3 ORE 10 1 10 2 Scongelare i campioni non noti e metterli su ghiaccio tritato Ricostituire i reagenti liofilizzati e lasciare scongelare completamente eventuali reagenti congelati Evitare che i reagenti raggiungano temperature superiori a 25 C Mescolare delicatamente i reagenti e metterli sul ghiaccio prima di utilizzarli g 1118 x 10 raggio in cm rpm 39 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 8 10 9 10 10 10 11 10 12 Preparare ed etichettare due serie di 12 provette monouso da 75 mm in base allo Schema di analisi sul retro della copertina Mettere il portaprovette con le provette sul ghiaccio tritato Aggiungere i reagenti come indicato di seguito a Provette per il conteggio totale Lasciare da parte fino al punto 6 b Provette per legame non specifico NSB 100 uL di calibratore 0 c Calibratore 0 100 uL di calibratore 0 200 uL di antisiero ACTH d Calibratori ACTH A E 100 uL di calibratore ACTH 200 uL di antisiero ACTH e Plasma peri controlli e campioni non noti 100 uL di plasma 200 uL di antisiero ACTH Aggiungere 200 pL di 1 ACTH in tutte le provette Agitare e lasciare in incubazione per 3 ore 15 minut
15. 00 uL Contr les 100 uL chantillons 100 uL d terminer Antis rum 200 uL 200 uL Traceur 200 uL 200 uL 200 uL 200 pL Couvrir les tubes l aide d un parafilm et agiter doucement l aide du vortex Incuber pendant 16 24 heures entre 2 et 8 C Distribuer 500 uL de GAR PPT dans tous les puits l exception des tubes de num ration totale Couvrir les tubes et agiter doucement l aide du vortex Incuber pendant 15 25 minutes entre 20 et 25 C Centrifuger 760 x g pendant 20 minutes D canter les surnageants Compter chaque tube dans un compteur gamma pendant 60 secondes minimum Reconstituer les r actifs lyophilis s et permettre aux chantillons congel s de d congeler compl tement Ne pas laisser les r actifs atteindre une temp rature sup rieure 25 C Identifier les tubes en double Distribuer les r actifs sur de la glace pil e conform ment au profil suivant OM Num rations talon Contr les et Tubes R actifs totales NSB 0 5 chantillons inconnus Etalons 0 5 100 uL 100 uL Contr les 100 uL chantillons 100 uL d terminer Antis rum 200 uL 200 uL Traceur 200 uL 200 uL 200 uL 200 pL Couvrir les tubes l aide d un parafilm et agiter doucement l aide du vortex Incuber pendant 3 heures 15 minutes entre 2 et 8 C Distribuer 500 uL de GAR PPT dans tous les puits l exception des tubes de
16. 14 1 Die Kontrollwerte wurden mit Hilfe von Option A dem bernacht Testverfahren festgelegt Die mit Hilfe des 3 st ndigen Verfahrens ermittelten Werte ergeben m glicherweise geringf gig andere Ergebnisse 14 2 Die Z hlzeiten sollten ausreichend lang sein um statistische Fehler zu vermeiden 2 000 CPM ergeben z B 5 Fehler 10 000 CPM ergeben 1 Fehler 15 ERWARTETE WERTE 15 1 Normalbereich Jedes Labor sollte seinen eigenen Normalbereich ermitteln Die im DiaSorin Labor beobachteten Normalwerte basieren auf einem Wertevergleich mit dem WHO ACTH Standard 74 555 und nicht mit anderen kommerziellen Kalibratoren Der im DiaSorin Labor ermittelte Normalbereich im EDTA Plasma betrug 0 71 pg mL f r Option A n 50 und 0 82 pg mL f r Option B n 49 Da die Standardisierung bei DiaSorin mit EDTA Plasma vorgenommen wurde kann die Verwendung von Serum oder anderen Plasmaarten zu einem h heren oder niedrigeren Normalbereich f hren 15 2 Unspezifit t Da in einem Radioimmunoassay Unspezifit ten auftreten k nnen sollte das Labor stets darauf vorbereitet sein eine Probe zum Testen auf Parallelit t seriell zu verd nnen oder eine Affinit ts Gelextraktion der Probe durchzuf hren um zu pr fen ob die gemessene Substanz immunologisch adsorbierbar ist Der Arzt sollte seinerseits wissen dass Cortisol Messungen provokative Tests und oder Sup pressionstests h ufig mit ACTH durchgef hrt werden um den Hypophysen Nebennieren Zustand de
17. 4 100 9 402 Calibratori pg mL A 20 8 765 8 743 6 922 92 0 8 721 B 50 7 785 8 007 6 186 82 2 8 228 C 100 6 766 6 831 4 910 65 2 6 696 D 200 5 171 5 181 3 360 44 7 5 190 E 500 3 296 3 356 1 535 20 4 3 416 Campioni non noti 1 7 253 7 308 5 487 72 9 74 7 362 2 5 860 5 873 4 052 53 8 147 5 885 dati di campioni tipici e una curva di calibratore per l Opzione A sono riportati nella TABELLA Ill e nella FIGURA 1 queste informazioni servono solo a scopo di riferimento e non devono essere usate per il calcolo dei valori FIGURA 1 ESEMPIO DI CURVA DI CALIBRAZIONE ACTH 100 90 80 70 UI ETA 42 RIDUZIONE DEI DATI Il Laboratorio di controllo di qualit DiaSorin utilizza una retta curvilinea uniforme 14 LIMITI DELLA PROCEDURA 14 1 valori per il controllo di qualit sono stati stabiliti in base all Opzione A la procedura di analisi di 16 24 ore Risultati leggermente diversi si possono ottenere con la procedura di tre ore 14 2 conteggio delle volte dovrebbe essere sufficiente per prevenire errori statistici ad esempio l accumulo di 2 000 CPM produrr un errore del 596 10 000 CPM produrr un errore dell 1 15 VALORI PREVISTI 15 1 Range normale Ogni laboratorio deve stabilire un range di riferimento proprio valori normali ottenuti nel laboratorio DiaSorin sono stati confrontati con i valori indicati dall OMS nello standard 74 555 per ACTH e non con i calibratori disponibili in com
18. 571 1978 6 Singer W K Kovacs N Ryan and E Horvath Ectopic ACTH Syndrome Clinico pathological Correlations Journal of Clinical Pathology 31 591 1978 7 Yalow R S Ectopic ACTH in Carcinoma of the Lung Lung Cancer Progress in Therapeutic Research ed F M Muggia and M Rozencweig Raven Press New York p 209 1979 SYMBOLS USED WITH DEVICES Conformit aux normes europ ennes Date limite Mindesthaltbar Expraton Date Date d utilisation keitsdatum Datadiscadenza di scadenza Miei ilis Consult Consulter les Instructions instructions for Use d utilisation CE Konformit ts Conformit kennzeichnung europea European Conformity Gebrauchsanwei Consultare le sung beachten istruzioni per l uso Maximum Temp rature temperature maximale In vitro Diagnostic in vitro In vitro Diagnostica in diagnostic 9 Diagnostikum vitro Temperatura H chsttemperatur massima To FIRME Reagente precipitante Precipitating reagent R actif pr cipitant F llungsreagenz 125 Tracciatore antigene etichettato con SS Tracer antigen Traceur antig ne Tracer labelled with 1 marqu l iode 5 markiertes Antigen DiaSorin S p A 13040 Saluggia VC Italy DiaSorin Inc 1951 Northwestern Avenue P O Box 285 Stillwater MN 55082 0285 ee rer Phone 651 439 9710 FAX 651 351 5669 For Customer Service in the U S and Canada Call Toll Free 800 328 1482
19. ACTH 125 RIA Kit For the quantitative determination of human ACTH in EDTA plasma Instruction Manual Manuel d Instructions Testanleitung Manuale di Istruzioni REF 24130 DiaSorin Stillwater Minnesota 55082 0285 U S A TABLE OF CONTENTS English ea Ri Frangais Italiano ADRENOCORTICOTROPIC HORMONE RADIOIMMUNOASSAY 1 INTENDED USE FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE This kit contains instructions and materials for the quantitative determination of human ACTH in EDTA plasma by radioimmunoassay RIA 2 SUMMARY AND EXPLANATION ACTH is a 39 amino acid pituitary hormone with the following structure NH Ser Tyr Ser Met Glu His Phe Arg Trp Gly Lys Pro Val Gly Lys Lys Arg Arg Pro Val Lys Val Tyr Pro Asn Gly Ala Glu Asp Glu Ser Ala Glu Ala Phe Pro Leu Glu Phe OH The sequence 1 13 is the same as alpha melanocyte stimulating hormone Sequence 1 24 is considered the active portion of the molecule Sequence 18 39 is known as clip or corticotropin like intermediate lobe peptide The molecule is generally a basic protein and quite labile to the action of peptidases Since ACTH readily binds to glass and associates with serum proteins a special buffer preparation is necessary to ensure preservation of ACTH and to reduce nonspecific binding ACTH stimulates the secretion of cortisol from the adrenal gland and is under control of a feedback mechanism forming a tightly controlled loop between the hypothalamus
20. ACTH 9 6 Ajouter 200 uL d 5 ACTH dans tous les tubes 9 7 M langer et incuber pendant 16 24 heures entre 2 et 8 C 9 8 M langer vigoureusement le GAR PPT ajouter 500 uL dans tous les tubes l exception des tubes de num ration totale 9 9 M langer et incuber pendant 15 25 minutes entre 20 et 25 C 9 10 Centrifuger les tubes pendant 20 minutes 760 x g entre 20 et 25 C 9 11 D canter imm diatement le surnageant dans tous les tubes l exception des tubes de num ration totale en les renversant pendant 2 minutes minimum Placer les tubes sur du papier absorbant pour liminer toutes les gouttes de surnageant qui peuvent rester sur les bords avant de les replacer l endroit g 1118 x 10 8 rayon en cm tr min 2 16 9 12 A l aide d un compteur amp scintillation gamma effectuer la num ration du pr cipit dans chaque tube et dans les tubes de num ration totale pendant le temps n cessaire l obtention d une exactitude statistique consulter la section Limitations de la proc dure 10 PROC DURE DU DOSAGE OPTION B DOSAGE DE 3 HEURES 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 8 10 9 10 10 10 11 10 12 D congeler les chantillons inconnus et mettre sur de la glace pil e Reconstituer les r actifs lyophilis s et permettre aux r actifs congel s de d congeler compl tement Ne pas laisser les r actifs atteindre une temp rature sup rieure 25 C M langer d licateme
21. IA 44 SCHEMA DI ANALISI Opzione A 1 Ricostituire i reagenti liofilizzati e lasciar scongelare completamente eventuali campioni surgelati Evitare che i reagenti raggiungano temperature superiori a 25 C Contrassegnare due serie di provette 2 Versare i reagenti seguendo lo schema seguente su ghiaccio tritato x Conteggi CAL Controlli e Provette Reagenti totali NSB 0 5 campioni non noti Calibratori 0 5 100 uL 100 uL Controlli 5 100 uL Campioni non noti 100 uL Antisiero 200 uL 200 uL Tracciante 200 uL 200 uL 200 uL 200 uL 3 Coprire le provette con pellicola e agitare lentamente nel Vortex 4 Lasciare in incubazione per 16 24 ore a 2 8 C 5 Versare 500 uL di GAR PPT nei pozzetti eccetto le provette per il conteggio totale 6 Coprire tutte le provette e agitare lentamente nel Vortex 7 Lasciare in incubazione per 15 20 minuti a 20 25 C 8 Centrifugare a 760 x g per 20 minuti 9 Far decantare i liquidi superficiali 10 Contare ogni provetta in un contatore a raggi gamma per 60 secondi o pi Opzione B 1 Ricostituire i reagenti liofilizzati e lasciar scongelare completamente eventuali campioni congelati Evitare che i reagenti raggiungano temperature superiori a 25 C Contrassegnare due serie di provette 2 Versare i reagenti seguendo lo schema seguente su ghiaccio tritato Conteggi CAL Controlli e SE totali NSB 0 5 campioni non noti Calibrato
22. ICH BEN TIGTE GER TE UND MATERIALIEN 8 1 Einweg Borosilikatglasr hrchen 12 x 75 mm 8 2 Temperaturgesteuerte Zentrifuge 20 25 C f r 12 x 75 mm R hrchen 8 3 Gammasziniillationsz hler zur Z hlung von I 8 4 Vortexer 8 5 Pipettierger te a Auf die Abgabe von 50 uL 100 uL und 200 pL kalibrierte Mikropipetten b Auf die Abgabe von 200 uL und 500 ul kalibrierte Multipipetten 8 6 Destilliertes Wasser 9 TESTVERFAHREN OPTION A BER NACHT 9 1 Unbekannte Proben auftauen und auf Crash Eis belassen 9 2 Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Reagenzien vollst ndig auftauen lassen Die Reagenzien d rfen nicht auf mehr als 25 C erw rmt werden Die Reagenzien vorsichtig mischen und vor dem Gebrauch auf Crash Eis lagern 9 3 Markierte 12 x 75 mm Einweg Glasr hrchen in Zweierreihen aufstellen siehe Testplan auf der R ckseite 9 4 Den R hrchenst nder auf Crash Eis aufbewahren 9 5 Reagenzien wie folgt hinzugeben a R hrchen f r die Gesamtz hlung Bis Schritt 6 beiseite legen b NSB R hrchen 100 uL des Nullkalibrators c Nullkalibrator 100 uL des Nullkalibrators 200 uL ACTH Antiserum d ACTH Kalibratoren A E 100 uL ACTH Kalibrator 200 uL ACTH Antiserum e Kontrollplasma und unbekannte Proben 100 uL Plasma 200 uL ACTH Antiserum 9 6 200 uL I ACTH zu allen R hrchen hinzugeben 9 7 Mischen und 16 24 Stunden lang bei 2 8 C inkubieren 9 8 Den GAR PPT Komplex gr ndlich mischen 500
23. Laboratory are based on comparison of values to WHO ACTH standard 74 555 and not to any other commercial calibrator The normal range in EDTA plasma found in the DiaSorin Laboratory was 0 71 pg mL for the Option A n 50 0 82 pg mL for the Option B n249 Since our standardization was done with EDTA plasma the use of serum or any other type of plasma may lead to a higher or lower normal range 15 2 Nonspecificity Since nonspecificities can occur in any radioimmunoassay the laboratory should always be prepared to serially dilute a sample to test for parallelism or to do an affinity gel extraction of the sample to verify whether the measured substance is immunoadsorbable The physician in turn should be aware that cortisol measure ments provocative and or suppression tests are often performed with ACTH to evaluate the patient s pituitary adrenal state 16 SPECIFIC PERFORMANCE CHARACTERISTICS 16 1 Precision Intra Assay Variation values pg mL Sample Mean Value S D YC V Number Low 69 8 6 12 5 Medium 281 17 6 6 3 High 600 48 8 8 1 Inter Assay Variation values pg mL Sample Mean Value S D YC V Number Low 23 1 4 6 0 High 218 14 7 6 7 16 2 DILUTION TEST AND THE RECOVERY TEST Linearity Parallelis m Serial Dilution Study of four Patient Samples values pg mL TRUENESS THE ASSAY TRUENESS HAS BEEN VERIFIED BY THE ni Undilute
24. Materials ist auf einen speziell daf r bestimmten Bereich zu beschr nken Der Zugang zu radioaktivem Material ist nur befugten Personen zu gestatten Radioaktives Material nicht mit dem Mund pipettieren Im vorgesehenen radioaktiven Arbeitsbereich nicht essen oder trinken Versch ttetes Material aufwischen und Bereich anschlieBend mit alkalischem Reinigungsmittel oder radiologischer Dekontaminationsl sung waschen Alle benutzten Glasbeh lter gr ndlichst mit Wasser sp len bevor sie zusammen mit anderen Laborbeh ltern aus Glas ausgewaschen werden F r rzte oder Einrichtungen die im Rahmen einer Sondergenehmigung Radioisotope erhalten gilt Folgendes Entgegennahme Gebrauch Weitergabe und Entsorgung radioaktiven Materials unterliegen den Vorschriften und Bedingungen der jeweiligen Sondergenehmigung VORSICHT Dieses Produkt enth lt eine Chemikalie die nach Angaben des US Bundesstaates Kalifornien krebserregend ist WICHTIGER HINWEIS Die auf der Packungsbeilage angegebene Radioaktivit t kann von der auf dem Etikett des Kartons und des Tracer Fl schchens angegebenen etwas abweichen Sowohl das Etikett des Kartons als auch das Etikett des Tracer Fl schchens geben den tats chlichen Wert der Radioaktivit t am Kalibrationsdatum an w hrend die Packungsbeilage die theoretische Radioaktivit t des Kits angibt 6 ANZEICHEN F R M GLICHEN VERFALL DER KIT REAGENZIEN 6 1 Ungew hnliche Partikel in einem der Reagenzien 6 2 Eine Verschiebu
25. Numero campione Non diluito 1 2 1 4 1 8 1 156 161 158 2 483 476 555 3 gt 500 988 982 4 gt 500 930 1008 43 Recupero Attendibilit valori pg mL Calibratore Valore Valore Percentuale ZA aggiunto previsto misurato di recupero Set No 1 37 5 90 5 81 90 53 150 203 182 90 300 353 276 78 Set No 2 37 5 97 5 90 92 60 150 210 190 90 300 360 315 88 Set No 3 37 5 77 5 65 84 40 150 190 155 82 300 340 345 101 16 3 Sensibilit analitica La quantit minima rilevabile se definita come concentrazione apparente a tre deviazioni standard dai conteggi a legame massimo di 15 pg mL per l opzione di 16 24 ore e 20 pg mL per l opzione di tre ore 16 4 Specificit analitica Il confronto della reattivit incrociata dell anticorpo ACTH stato eseguito con i seguenti peptidi a 1200 pg mL Peptide di reattivit incrociata a MSH lt 0 01 b Endorfina lt 0 01 b Lipotropina lt 0 01 Leucina Encefalina lt 0 01 Metionina Encefalina lt 0 01 Bombesina lt 0 01 Calcitonina lt 0 01 Ormone paratiroideo lt 0 01 FSH lt 0 01 Somatotropina placentare umana lt 0 01 Vasopressina lt 0 01 Ossitocina lt 0 01 Sostanza P lt 0 01 ACTH di maiale 1 39 100 ACTH umano 1 24 100 Le nostre prove indicano che con questo sistema si pu misurare anche l ACTH del ratto tuttavia il plasma del ratto pu contenere altre sostanze interferenti FARE RIFERIMENTO ALL ULTIMA PAGINA PER LA BIBLIOGRAF
26. a HCV e anticorpi a HIV 1 2 Anche se questi metodi sono estremamente accurati non garantita la localizzazione di tutte le unit infette Questo prodotto pu inoltre contenere altro materiale di provenienza umana per il quale non esiste un test approvato Poich nessuna metodologia di test approvata pu offrire garanzia completa sull assenza del virus dell epatite B HBV dell epatite C HCV del virus di immunodeficienza umana HIV o di altri agenti infettivi tutto il materiale di provenienza umana deve essere trattato in conformit con le buone pratiche di laboratorio adottando le precauzioni appropriate come descritto nei manuali dei Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories quarta edizione Maggio 1999 o edizione corrente REAGENTI CONTENENTI SODIO AZIDE ATTENZIONE Alcuni reagenti di questo kit contengono sodio azide La sodio azide pu reagire con componenti in piombo o rame e formare quindi azidi metalliche altamente esplosive AI momento dello smaltimento lavare con abbondante acqua al fine di evitare la formazione di azide Per ulteriori informazioni consultare Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts nel manuale Guide Safety Management No CDC 22 pubblicato dai Centri per il controllo e la Prevenzione delle malattie di Atlanta GA 1976 Frasi di rischio per sostanze pericolose della Comunit Europea Direttiv
27. a del Consiglio 1999 45 CE R20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed Dannoso per inalazione per contatto con la pelle ed ingestione R32 Contact with acids liberates very toxic gas I contatto con acidi libera gas altamente tossico S28 After contact with skin wash immediately with plenty of water Dopo il contatto con la pelle lavare immediatamente con abbondante acqua REAGENTI CONTENENTI TIMEROSAL Alcuni reagenti di questo kit contengono timerosal in cui presente un composto di mercurio Lo smaltimento del mercurio allo stato di elemento inorganico di ossidi di mercurio e composti di mercurio deve essere effettuato in piena conformit con tutte le normative locali statali e federali AVVERTENZA Questo prodotto contiene un prodotto chimico noto nello Stato della California per provocare difetti congeniti o altre lesioni ai feti REAGENTI CONTENENTI IODIO 125 Questo kit contiene materiale radioattivo che non supera 1 5 uCi 55 5 kBq per il kit da 65 provette e 3 uCi 111 kBq per il kit per 130 provette di iodio 125 Adottare precauzioni adeguate e le buone pratiche di laboratorio per la conservazione la manipolazione e lo smaltimento di questo materiale Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una licenza generale Questo materiale radioattivo pu essere consegnato acquisito conservato e usato unicamente da personale medico veterinari abilitati alla pratic
28. a di medicina veterinaria laboratori clinici o ospedali e unicamente per test in vitro clinici o di laboratorio che non prevedano la somministrazione interna o esterna del materiale o di radiazioni da esso derivanti su persone o animali L acquisto il possesso la conservazione l uso e il trasferimento sono soggetti alle norme e alla licenza generale della Nuclear Regulatory Commission statunitense dello stato con cui la Commissione ha stipulato un accordo per l esercizio dell autorit normativa 37 1 La conservazione del materiale radioattivo deve essere limitata ad un area specificatamente designata 2 L accesso ai materiali radioattivi deve essere limitato esclusivamente al personale autorizzato 3 Non usare la bocca per versare con la pipetta materiale radioattivo Non mangiare o bere nelle aree di lavoro designate per materiale radioattivo 5 Le zone dove possono verificarsi perdite devono essere pulite quindi lavate con detergente alcalino o soluzione per la decontaminazione radiologica Tutti gli oggetti in vetro usati devono essere accuratamente risciacquati con acqua prima di lavarli con altri oggetti in vetro del laboratorio Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una licenza specifica L acquisto l uso il trasferimento e lo smaltimento di materiali radioattivi sono soggetti alle norme e alle condizioni della licenza specifica AVVERTENZA Questo prodotto contiene un prodotto chimico noto nel
29. al par rapport la concentration axe horizontal 13 5 Tracer la droite de meilleur ajustement d un point l autre 13 6 Interpoler les niveaux d ACTH dans les chantillons inconnus d apr s le trac 13 7 Si un chantillon d terminer est sup rieur l talon le plus lev il doit tre dilu avec l talon 0 et dos de nouveau 13 8 Si un chantillon inconnu a t dilu corriger en fonction du facteur de dilution appropri 13 9 Calculer la liaison maximale en divisant la CPM de l talon 0 par les num rations totales moyennes obtenues dans les tubes de num ration totale 18 _ TABLEAU III DONNEES D ECHANTILLON RIA ACTH DiaSorin Pourcentage Tube CPM en CPM CPM deliaison O cone double moyenne corrig e B T H pg mL Num ration 18 327 18 539 totale 18 750 NSB 1790 1821 9 8 1852 talon 0 9 289 9 346 7 525 50 4 100 9 402 Etalons pg mL A 20 8 765 8 743 6 922 92 0 8 721 B 50 7 785 8 007 6 186 82 2 8 228 C 100 6 766 6 831 4 910 65 2 6 696 D 200 5171 5 181 3 360 44 7 5 190 E 500 3 296 3 356 1 535 20 4 3416 chantillons d terminer 1 7 253 7 308 5 487 72 9 74 7 362 2 5 860 5 873 4 052 53 8 147 5 885 Des donn es d chantillons typiques et une courbe d talonnage pour l Option A sont pr sent es au TABLEAU III et la FIGURE 1 ces informations sont propos es titre de r f rence uniquement et ne peuvent en aucun cas tre utilis es pour calculer des valeurs
30. appears homogeneous and then allow the vial to stand for a minimum of 30 minutes at room temperature with occasional mixing 4 6 ACTH Control Level 1 and 2 lyophilized reagent Human plasma spiked if necessary with the appropriate amount of synthetic ACTH to obtain a concentration within a specified range 0 196 Sodium azide and other stabilizers are added Reconstitute each vial with 1 0 mL of purified water and place on crushed ice for 15 20 minutes until completely dissolved mix thoroughly and treat as an unknown sample For consistent results this control can be thawed only once for use in an assay Values for each lot are printed on the control vial 5 WARNINGS AND PRECAUTIONS FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE Not for internal or external use in humans or animals REAGENTS CONTAINING HUMAN SOURCE MATERIAL Treat as potentially infectious Each serum plasma donor unit used in the preparation of this product has been tested by a U S FDA approved method and found non reactive for the presence of HBsAg antibody to HCV and antibody to HIV 1 2 While these methods are highly accurate they do not guarantee that all infected units will be detected This product may also contain other human source material for which there is no approved test Because no known test method can offer complete assurance that hepatitis B virus HBV hepatitis C virus HCV Human Immunodeficiency Virus HIV or other infectious agents are absent all products con
31. be gr er sind als die gr ten Kalibratorwerte ist die unbekannte Probe entsprechend mit Nullkalibrator zu verd nnen und neu zu testen 13 8 Wenn eine unbekannte Probe verd nnt wurde muss der Wert mit dem entsprechenden Verd nnungsfaktor korrigiert werden 13 9 Die maximale Bindung wird berechnet indem die CPM des Nullkalibrators durch die in den Totalaktivit t R hrchen erhaltenen Gesamtz hlungen dividiert wird 29 TABELLE III DIASORIN ACTH RIA Probendaten Prozent Doppelter Durchschn Korrigierter Gebunden Prozent Konz R hrchen UM UM UM B T B Bo pg mL Gesamtz hlung 18 327 18 539 18 750 NSB 1 790 1 821 9 8 1 852 Nullkalibrator 9 289 9 346 7 525 50 4 100 9 402 Kalibratoren pg mL A 20 8 765 8 743 6 922 92 0 8 721 B 50 7 785 8 007 6 186 82 2 8 228 C 100 6 766 6 831 4 910 65 2 6 696 D 200 5 171 5 181 3 360 44 7 5 190 E 500 3 296 3 356 1 535 20 4 3 416 Unbekannte Proben 1 7 253 7 308 5 487 72 9 74 7 362 2 5 860 5 873 4 052 53 8 147 5 885 Typische Probendaten und eine Kalibratorkurve f r Option A sind in TABELLE Ill und ABBILDUNG 1 dargestellt diese Informationen dienen nur als Referenz und d rfen nicht zur Berechnung von Werten verwendet werden ACTH MUSTEREICHKURVE 90 60 ITU TO 7D NT ABBILDUNG 1 30 DATEN NACH DER DATENREDUKTION Das Qualit tskontrolllabor von DiaSorin verwendet eine gegl ttete Spline Kurvenanpassung 14 GRENZEN DES VERFAHRENS
32. by the average total counts obtained in the total count tubes TABLE III DiaSorin ACTH RIA Sample Data Percent Duplicate Average Corrected Bound Percent Conc Tube CPM CPM CPM B T B Bo pg mL Total Count 18 327 18 539 18 750 NSB 1 790 1 821 9 8 1 852 Calibrator 0 9 289 9 346 7 525 50 4 100 9 402 Calibrators pg mL A 20 8 765 8 743 6 922 92 0 8 721 B 50 7 785 8 007 6 186 82 2 8 228 C 100 6 766 6 831 4 910 65 2 6 696 D 200 5 171 5 181 3 360 44 7 5 190 E 500 3 296 3 356 1 535 20 4 3 416 Unknown Samples 1 7 253 7 308 5 487 72 9 74 7 362 2 5 860 5 873 4 052 53 8 147 5 885 Typical sample data and a calibrator curve for Option A are shown in TABLE III and FIGURE 1 this information is for reference only and should not be used for the calcula tion of any value ACTH SAMPLE CALIBRATOR CURVE 100 90 ail 60 7D DIT FIGURE 1 REDUCTION DATA The DiaSorin QC lab uses a smoothed spline curve fit 14 LIMITATIONS OF THE PROCEDURE 14 1 Control values have been established using Option A the overnight assay procedure Values obtained using the three hour procedure may give slightly different results 14 2 Counting times should be sufficient to prevent statistical error for example accumulation of 2 000 CPM will yield 5 error 10 000 CPM will yield 1 error 15 EXPECTED VALUES 15 1 Normal Range Each laboratory should establish its normal range The normal values observed in the DiaSorin
33. d 1 2 1 4 1 8 1 156 161 158 2 483 476 555 3 gt 500 988 982 4 gt 500 930 1008 Recovery Accuracy values pg mL Calibrator Expected Measured Percent Background Added Value Value Recovery Set No 1 37 5 90 5 81 90 53 150 203 182 90 300 353 276 78 Set No 2 37 5 97 5 90 92 60 150 210 190 90 300 360 315 88 Set No 3 37 5 77 5 65 84 40 150 190 155 82 300 340 345 101 16 3 Analytical Sensitivity When defined as the apparent concentration at 3 standard deviations from the counts at maximum binding the minimum detectable amount is 15 pg mL for the overnight option and 20 pg mL for the 3 hour option 16 4 Analytical Specificity Comparison of the cross reactivity of ACTH antibody was made with the following peptides at 1200 pg mL Peptide Cross reactivity a MSH lt 0 01 b Endorphin lt 0 01 b Lipotropin lt 0 01 Leucine Enkephalin lt 0 01 Methionine Enkephalin lt 0 01 Bombesin lt 0 01 Calcitonin lt 0 01 Parathyroid Hormone lt 0 01 FSH lt 0 01 Human Growth Hormone lt 0 01 Vasopressin lt 0 01 Oxytocin lt 0 01 Substance P lt 0 01 Porcine ACTH 1 39 100 Human ACTH 1 24 100 Our evidence indicates that rat ACTH is also measurable with this system however rat plasma may contain other interfering substances REFER TO LAST PAGE FOR REFERENCES 10 SCHEME OF THE ASSAY Option A 1 Reconstitute the Iyophilized reagents and allow any frozen specimens to
34. enti raggiungano temperature superiori a 25 C Mescolare delicatamente i reagenti e metterli su ghiaccio tritato prima di utilizzarli Preparare ed etichettare due serie di 12 provette monouso da 75 mm in base allo Schema di analisi sul retro della copertina Mettere il portaprovette con le provette sul ghiaccio tritato Aggiungere i reagenti come indicato di seguito a Provette per il conteggio totale Lasciare da parte fino al punto 6 b Provette per legame non specifico NSB 100 uL di calibratore 0 c Calibratore 0 100 uL di calibratore 0 200 uL di antisiero ACTH d Calibratori ACTH A E 100 uL di calibratore ACTH 200 uL di antisiero ACTH e Plasma peri controlli e campioni non noti 100 uL di plasma 200 uL di antisiero ACTH Aggiungere 200 uL di 1 ACTH in tutte le provette Mescolare e lasciare in incubazione per 16 24 ore a 2 8 C Agitare energicamente il complesso GAR PPT aggiungere 500 pL in tutte le provette eccetto le provette per il conteggio totale Mescolare e lasciare in incubazione per 15 25 minuti a 20 25 C Centrifugare le provette per 20 minuti a 760 x g a 20 25 C Far decantare immediatamente i liquidi superficiali da tutte le provette eccetto le provette per il conteggio totale capovolgendole per almeno due minuti Asciugare su carta assorbente le provette per rimuovere eventuali gocce di liquido superficiale che possono essere rimaste sui bordi prima di riportare le provette in posizione verticale Usando
35. er refrigerated centrifugation is recommended All plastics glassware or other material coming into contact with the specimen should be entirely free of any contamination PRECAUTION Heparinized plasma yields falsely low values Enzyme inhibitors are unnecessary at the sample collection phase however it is important to keep the sample cold 0 4 C after collection for up to 8 hours For long term storage add 500 KIU mL of Aprotinin to the specimen and store it at 15 C It is very important to keep the specimen frozen preferably in plastic tubes A decrease in ACTH may be experienced with repeated freeze thaw of the specimen 8 EQUIPMENT AND MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 8 1 Disposable borosilicate glass tubes 12 x 75 mm 8 2 Temperature controlled centrifuge to accommodate 12 x 75 mm tubes 20 25 C 8 3 Gamma scintillation counter capable of counting 1 8 4 Vortex 8 5 Pipetting devices a Micropipettors calibrated to deliver 50 uL 100 uL and 200 uL b Repeating dispensers calibrated to deliver 200 uL and 500 uL 8 6 Purified water 9 ASSAY PROCEDURE OPTION A OVERNIGHT 9 1 Thaw unknown samples and place on crushed ice 9 2 Reconstitute the lyophilized reagents and allow any frozen reagents to thaw completely Do not allow reagents to reach temperatures above 25 C Mix reagents gently and place on crushed ice before using g 1118 x 10 radius in cm rpm 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8
36. i a 2 8 C Mescolare energicamente il complesso GAR PPT aggiungere 500 pL in tutte le provette eccetto le provette per il conteggio totale Mescolare e lasciare in incubazione per 15 25 minuti a 20 25 C Centrifugare le provette per 20 minuti a 760 x g a 20 25 C Far decantare immediatamente i liquidi superficiali da tutte le provette eccetto le provette per il conteggio totale capovolgendole per almeno due minuti Asciugare su carta assorbente le provette per rimuovere eventuali gocce di liquido superficiale che possono essere rimaste sui bordi prima di riportarle in posizione verticale Usando un contatore ad emissione di scintille gamma contare il precipitato di ogni provetta e delle provette per il conteggio totale per un tempo sufficiente a raggiungere la precisione statistica vedere la sezione Limiti della procedura 11 COMMENTI SULLA PROCEDURA 11 1 11 2 11 3 11 4 Aggiungere ogni aliquota di reagente al terzo inferiore della provetta di analisi al fine di garantire una miscela completa di reagenti Alcune provette monouso determinano legami aspecifici elevati Se si decide di aspirare il liquido superficiale dal precipitato fare attenzione a non smuovere quest ultimo Per monitorare completamente la costanza e la validit di un analisi RIA si devono controllare altri fattori DiaSorin consiglia di controllare i seguenti parametri per garantire prestazioni costanti del kit a Conteggi totali b Legame massimo Contegg
37. i medi al minuto CPM delle provette del calibratore 0 CPM medio delle provette per il conteggio totale c Legame non specifico CPM medio della provetta NSB CPM medio delle provette per il conteggio totale d Pendenza della curva del calibratore Ad esempio monitorare i punti a 80 50 e 20 della linea del calibratore g 1118 x 10 raggio in cm rpm 40 12 CONTROLLO DI QUALIT Ogni laboratorio dovrebbe includere plasma per il controllo di qualit in ogni analisi per garantire la validit dei risultati di ogni analisi Determinare quindi la deviazione media e standard per ogni controllo usando un minimo di dieci analisi Si pu quindi ottenere un range accettabile di valori per questi controlli utilizzando 2 deviazioni standard dei valori determinati in precedenza Il Laboratorio di controllo qualit DiaSorin ha stabilito un range per i controlli inclusi nel kit utilizzando l Opzione A 13 CALCOLO DEI RISULTATI Esistono molti metodi per calcolare i risultati di RIA ognuno tende ad ottenere una curva di calibrazione mediante tracciamento dell estensione del legame rispetto alle concentrazioni indicate dei calibratori Il grafico pu essere su scala lineare o logaritmica Ciascun metodo d essenzialmente gli stessi valori per i controlli e i campioni anche se certe analisi possono essere pi adatte per un particolare metodo rispetto ad un altro Il metodo di calcolo del Laboratorio di controllo qualit di DiaSorin
38. iali per la determinazione quantitativa di ACTH nel plasma umano EDTA mediante analisi radioimmunologica RIA 2 SOMMARIO E SPIEGAZIONI L ACTH un ormone surrenale formato da 39 aminoacidi con la seguente struttura NH Ser Tyr Ser Met Glu His Phe Arg Trp Gly Lys Pro Val Gly Lys Lys Arg Arg Pro Val Lys Val Tyr Pro Asn Gly Ala Glu Asp Glu Ser Ala Glu Ala Phe Pro Leu Glu Phe OH La sequenza 1 13 la stessa dell ormone alfa melanocita stimolante La sequenza 1 24 ritenuta la parte attiva della molecola La sequenza 18 39 nota come clip o peptide del lobo intermedio dell ipofisi simile a corticotropina La molecola generalmente una proteina di base suscettibile all azione dei peptidasi Poich l ACTH si lega facilmente con il vetro e si associa con le proteine nel siero richiesta una preparazione tampone speciale al fine di garantire la conservazione di ACTH e ridurre il legame non specifico 2 L ACTH stimola la secrezione di cortisolo dalla ghiandola surrenale ed governato da un meccanismo di feedback che forma un loop rigidamente controllato fra l ipotalamo e le ghiandole surrenale e pituitaria Nell ipotalamo due fattori stimolano il rilascio di ACTH Uno la vasopressina un peptide molto noto mentre l altro una sostanza meno conosciuta CRF o fattore di liberazione della corticotropina L infusione di vasopressina un test stimolante potenzialmente utile tuttavia presenta certi pericoli e deve essere utilizzato co
39. ilisatoren zugesetzt Jedes Fl schchen mit 1 0 mL destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten lang auf Crash Eis stehen lassen bis sich der Inhalt vollst ndig gel st hat gr ndlich mischen und als unbekannte Probe behandeln Um konsistente Ergebnisse zu erhalten kann diese Kontrolle zum Gebrauch in einem Assay nur einmal aufgetaut werden Die Werte f r die einzelnen Chargen sind auf den Kontrollfl schchen aufgedruckt 5 WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN NUR ZUR N VITRO DIAGNOSTIK Nicht f r internen oder externen Gebrauch bei Menschen oder Tieren REAGENZIEN MIT MATERIAL HUMANEN URSPRUNGS Dieses Produkt ist als potenziell infekti s zu behandeln Alle in der Herstellung dieses Produktes verwendeten Serum bzw Plasma spendeeinheiten wurden nach einer FDA genehmigten Methode getestet und f r nicht reaktiv auf Hepatitis B Oberfl chenantigen HBsAg Hepatitis C Antik rper HCV und Antik rper f r HIV 1 2 befunden Obwohl diese Methode u erst genau ist bietet sie keine Gew hr daf r dass alle infizierten Einheiten identifiziert werden k nnen Dieses Produkt kann auch Material humanen Ursprungs enthalten f r welches es noch kein genehmigtes Testverfahren gibt Da keine der zur Zeit bekannten Testmethoden absolute Gew hr f r die Abwesenheit des Hepatitis B Virus HBV des Hepatitis C Virus HCV des Retrovirus HIV oder anderer Infektionserreger bieten kann sind alle Produkte mit Komponenten humanen Urspru
40. irth defects or other reproductive harm REAGENTS CONTAINING IODINE 125 This kit contains radioactive material which does not exceed 1 5 uCi 55 5 kBa for the 65 tube kit and 3 uCi 111 kBq for the 130 tube kit of iodine 125 Appropriate precautionsand good laboratory practices should be used in the storage handling and disposal ofthis material For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a general license This radioactive material may be received acquired possessed and used only by physicians veterinarians in the practice of veterinary medicine clinical laboratories or hospitals and only for in vitro clinical or laboratory tests not involving internal or external administration of the material or the radiation therefrom to human beings or animals Its receipt acquisition possession use and transfer are subject to the regulations and the general license of the U S Nuclear Regulatory Commission or of the state with which the Commission has entered into an agreement for the exercise of regulatory authority 1 Storage of radioactive material should be limited to a specifically designated area 2 Access to radioactive materials must be limited to authorized personnel only 3 Do not pipette radioactive material by mouth 4 Do not eat or drink within designated radioactive work areas 5 Areas where spills may occur should be wiped up then washed with an alkali detergent or radiological decontamination solutio
41. ituer chaque tube avec 14 mL d eau purifi e et laisser reposer pendant 15 20 minutes sur de la glace pil e jusqu dissolution compl te bien m langer avant utilisation 4 4 5 ACTH r actif lyophilis De l ACTH synth tique marqu e l iode 125 et dilu e dans un tampon BSA borate EDTA contenant 0 008 de thim rosal et d autres stabilisants Reconstituer chaque tube avec 14 mL d eau purifi e et laisser reposer pendant 15 20 minutes sur de la glace pil e jusqu dissolution compl te bien m langer avant utilisation Pour obtenir des r sultats consistants ne d congeler qu une seule fois avant le dosage 4 5 Complexe pr cipitant GAR PPT r actif lyophilis Du s rum de lapin normal pr alablement pr cipit avec du s rum anti lapin de ch vre et du poly thyl ne glycol PEG est dilu dans un tampon BSA borate contenant 0 03 de thim rosal Reconstituer le tube avec 35 mL d eau purifi e BIEN m langer jusqu ce que la suspension apparaisse homog ne puis laisser reposer le tube temp rature ambiante pendant 30 minutes minimum m langer de temps en temps 4 6 Contr le ACTH niveaux 1 et 2 r actif lyophilis Le s rum humain est dop si besoin est avec la quantit ad quate d ACTH synth tique afin d obtenir une concentration comprise dans l intervalle sp cifi 0 1 d azide de sodium et d autres stabilisants sont ajout s Reconstituer chaque tube avec 1 0 mL d eau purifi e et laisser reposer
42. ken und vorsichtig vortexen T 15 25 Minuten lang bei 20 25 C inkubieren 8 Mit 760 x g 20 Minuten lang zentrifugieren 9 Die berst nde dekantieren 10 Jedes R hrchen mindestens 60 Sekunden oder l nger in einem Gamma Z hler z hlen Option B 1 Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Proben vollst ndig auftauen lassen Die Reagenzien d rfen nicht auf mehr als 25 C erw rmt werden R hrchen in doppelter Anordnung kennzeichnen 2 Reagenzien nach dem folgenden Schema auf Crash Eis dispensieren R hrchen Reagenzie Sie Kal Kontrollen und n ARRE NSB 0 5 unbekannte Proben Kalibratoren 0 5 100 uL 100 uL Kontrollen z 100 uL Unbekannte Proben S x 100 uL Antiserum 200 uL 200 uL Tracer 200 uL 200 uL 200 pL 200 uL 3 Die R hrchen mit Parafilm abdecken und vorsichtig vortexen 4 3 Stunden 15 Minuten lang bei 2 8 C inkubieren 5 500 uL des GAR PPT Komplexes in alle Wells mit Ausnahme der Total aktivit t R hrchen dispensieren 6 Die R hrchen abdecken und vorsichtig vortexen T 15 25 Minuten lang bei 20 25 C inkubieren 8 Mit 760 x g 20 Minuten lang zentrifugieren 9 Die berst nde dekantieren 10 Jedes R hrchen mindestens 60 Sekunden oder l nger in einem Gamma Z hler z hlen g 1118 x 10 Radius in cm U min 34 ANALISI RADIOIMMUNOLOGICA DELL ORMONE ADRENOCORTICOTROPO 1 USO PREVISTO PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Questo kit contiene istruzioni e mater
43. l obtention d une exactitude statistique Consulter le paragraphe Limitations de la Proc dure 11 COMMENTAIRES SUR LA PROC DURE 11 1 11 2 11 3 Ajouter chaque aliquote de r actif au tiers inf rieur du tube essai pour garantir le m lange complet des r actifs Certains fabricants vendent des tubes jetables qui donnent des liaisons non sp cifiques lev es Si le surnageant est aspir dans le pr cipit prendre soin de ne pas remuer le pr cipit g 1118 x 105 rayon en cm tr min 17 11 4 Pour surveiller enti rement la constance des performances d un dosage RIA certains facteurs suppl mentaires doivent tre v rifi s DiaSorin sugg re un contr le des param tres suivants pour garantir la pr cision constante de la trousse a Num rations totales b Liaison maximale Num rations moyennes par minute CPM du tube de l talon 0 CPM moyenne des tubes de num ration totale c Liaison non sp cifique CPM moyenne du tube NSB CPM moyenne des tubes de num ration totale d Pente de la courbe d talonnage Par exemple surveiller les points 80 50 et 20 de la courbe d talonnage 12 CONTR LE QUALIT Chaque laboratoire doit inclure un plasma de contr le dans chaque dosage pour garantir la validit de leurs r sultats D terminer ensuite la moyenne et l cart type pour chaque contr le sur un minimum de dix dosages Une gamme de valeurs acceptable peut donc tre obtenue pour ces cont
44. lgenden Peptiden durchgef hrt Peptid Kreuzreaktivit t a MSH lt 0 01 b Endorphin lt 0 01 b Lipotropin lt 0 01 Leucin Enkephalin lt 0 01 Methionin Enkephalin lt 0 01 Bombesin lt 0 01 Calcitonin lt 0 01 Nebenschilddr senhormon lt 0 01 FSH lt 0 01 Somatotropes Hormon lt 0 01 Vasopressin lt 0 01 Oxytocin lt 0 01 Substanz P lt 0 01 Porcin ACTH 1 39 100 Menschliches ACTH 1 24 100 Unsere Nachweise deuten darauf hin dass Ratten ACTH mit diesem System ebenfalls messbar ist jedoch enth lt Rattenplasma m glicherweise andere st rende Substanzen LITERATURANGABEN FINDEN SIE AUF DER LETZTEN SEITE 33 TESTSCHEMA Option A f Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Proben vollst ndig auftauen lassen Die Reagenzien d rfen nicht auf mehr als 25 C erw rmt werden R hrchen in doppelter Anordnung kennzeichnen Reagenzien nach dem folgenden Schema auf Crash Eis dispensieren R hrchen Reagenzie Dee Kal Kontrollen und n Tota SIM NSE 0 5 unbekannte Proben Kalibratoren 0 5 100 uL 100 uL Kontrollen 2 z 100 uL Unbekannte Proben 100 uL Antiserum S b 200 uL 200 uL Tracer 200 pL 200 uL 200 uL 200 pL 3 Die R hrchen mit Parafilm abdecken und vorsichtig vortexen 4 F r 16 24 Stunden bei 2 8 C inkubieren 5 500 uL des GAR PPT Komplexes in alle Wells mit Ausnahme der Total aktivit t R hrchen dispensieren 6 Die R hrchen abdec
45. ll be performed at DiaSorin using only Option A 4 REAGENT PROVIDED IN THE KIT ACTH Calibrator 0 1 vial 3 mL 1 vial 3 mL ACTH Calibrators 1 5 5 vials 1 0 mL 5 vials 1 0 mL ACTH Antiserum 1 vial 14 mL 2 vials 14 mL 12351 ACTH 1 vial 14 mL 2 vials 14 mL Precipitating Complex GAR PPT 1 vial 35 mL 2 vials 35 mL ACTH Controls level 1 and 2 2 vials 1 0 mL 2 vials 1 0 mL Number of tests 65 130 STORAGE Upon receipt and prior to reconstitution store all reagents at 2 8 C After reconstitution store all reagents at 15 or lower until the expiration date on the label Reagents should not be used past the expiration date When reconstituting the contents of the vials mix gently to avoid foaming Reagents from different batches must not be mixed 4 4 Calibrator 0 lyophilized reagent ACTH free human plasma with 0 0296 sodium azide and other stabilizers added Reconstitute the vial with 3 0 mL of purified water and let stand on crushed ice for 15 20 minutes until completely dissolved mix thoroughly before using 4 2 ACTH Calibrators A E lyophilized reagent ACTH calibrators porcine at nominal concentrations ranging from 20 500 pg mL 4 5 112 picomoles L are pre diluted in Calibrator 0 containing 0 0296 sodium azide and other stabilizers Exact concentration values are assigned with each lot Reconstitute each vial with 1 0 mL of purified water and let stand on crushed ice for 15 20 minutes until completely diss
46. llon afin de tester le parall lisme ou une extraction de l chantillon sur gel d affinit pour v rifier si la substance dos e est immuno adsorbable De son c t le m decin doit savoir que le mesures de cortisol les tests de provocation et ou d inhibition sont souvent effectu s avec l ACTH pour valuer l tat de la glande pituitaire surr nale du patient 16 CRIT RES DE QUALIT 16 1 Pr cision Variation intra essai valeurs pg mL Num ro Valeur R d chantillon moyenne Ecart type C V pas 69 8 6 12 5 Moyen 281 17 6 6 3 Elev 600 48 8 8 1 Variation entre les essais valeurs pg mL Num ro Valeur n d chantillon moyenne Ecart type C V Bas 23 14 6 0 Elev 218 14 7 6 7 16 2 PURET LA PURET DU DOSAGE A T V RIFI E PAR LES TESTS DE DILUTION ET DE R CUP RATION Lin arit Parall lisme tude de dilution en s rie sur quatre chantillons patient valeurs pg mL Reie Non dilu 1 2 1 4 118 1 156 161 158 2 483 476 555 3 gt 500 E 988 982 4 gt 500 930 1008 20 R cup ration Exactitude valeurs pg mL Valeur de P CERO Valeur Valeur Pourcentage de r f rence Etalon ajout escompt e mesur e r cup ration Lot N 1 37 5 90 5 81 90 53 150 203 182 90 300 353 276 78 Lot N 2 37 5 97 5 90 92 60 150 210 190 90 300 360 315 88 Lot N 3 37 5 77 5 65 84 40 150 190 155 82 300 340 345 101
47. lo Stato della California per provocare cancro ATTENZIONE La radioattivit stampata sulle istruzioni allegate alla confezione pu essere leggermente diversa dalla radioattivit stampata sull etichetta della scatola e sull etichetta della fiala di tracciante L etichetta sulla scatola e sulla fiala di tracciante indicano la quantit effettiva di radioattivit alla data di calibrazione mentre il materiale informativo della confezione indica la radioattivit teorica del kit 6 INDICAZIONI DI POSSIBILE DETERIORAMENTO DEI REAGENTI DEL KIT 6 1 La presenza di particolato anomalo in uno qualsiasi dei reagenti 6 2 Uno sfasamento nella pendenza o posizione della curva di calibrazione rispetto a quella che normalmente si ottiene 6 3 Una diminuzione del legame massimo 6 4 Un legame altamente non specifico 7 RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Sono richiesti cento 100 microlitri di plasma EDTA in due serie per l analisi Prelevare il sangue mediante venopuntura in una provetta di vetro da 5 o 10 mL sotto vuoto L EDTA 7 2 mg 5 mL sangue intero usato come anticoagulante Mescolare delicatamente e porre i campioni sul ghiaccio Centrifugare per 15 minuti a 760 x g per ottenere plasma privo di emolisi Una breve centrifugazione a 20 C non sar dannosa tuttavia si consiglia di centrifugare il campione a freddo Tutto il materiale in plastica oggetti in vetro o altro materiale che viene a contatto con i campioni deve essere completamente
48. m canisme de r trocontr le qui forme une boucle sous haute surveillance entre l hypothalamus l hypophyse et les glandes surr nales Deux facteurs dans l hypothalamus stimuleront la s cr tion d ACTH Le premier est la vasopressine un peptide bien connu et le deuxi me est une substance moins connue la CRF ou substance lib ratrice de corticotrophine Une injection de vasopressine peut tre un test de provocation potentiellement utile elle comporte cependant certains dangers et doit tre utilis e avec pr caution Le dosage de l ACTH est un outil cliniquement utile lors de l valuation des insuffisances surr nale et pituitaire l est galement utile lors de l valuation du syndrome de Cushing qu il soit li des tumeurs de la glande pituitaire ou surr nale f 7 D autres informations sur l utilisation du dosage DiaSorin ACTH sont disponibles sur demande 3 DESCRIPTION DE LA M THODE DE DOSAGE Le dosage DiaSorin ACTH est un dosage radio immunologique l quilibre qui peut se faire selon une ou deux m thodes Dans l option A l chantillon le premier anticorps et le traceur sont combin s et incub s entre 16 et 24 heures entre 2 et 8 C Un second complexe d anticorps pr pr cipit est ajout pour s parer le traceur li du traceur non li Le dosage peut alors tre centrifug et d cant apr s 15 minutes d incubation entre 20 et 25 C Dans l option B l chantillon le premier anticorps et le traceur son
49. main exempt d ACTH contenant 0 02 d azide de sodium et d autres stabilisants Reconstituer le flacon avec 3 0 mL d eau purifi e et laisser reposer pendant 15 20 minutes sur de la glace pil e jusqu dissolution compl te bien m langer avant utilisation 4 2 Etalons ACTH A E r actif lyophilis Des talons ACTH porcin une concentration nominale allant de 20 500 pg mL 4 5 112 picomoles L sont pr dilu s dans de l talon 0 contenant 0 02 d azide de sodium et d autres stabilisants Les concentrations exactes sont attribu es chaque lot Reconstituer chaque tube avec 1 0 mL d eau purifi e et laisser reposer pendant 15 20 minutes sur de la glace pil e jusqu dissolution compl te bien m langer avant utilisation Pour obtenir des r sultats constants ces talons ne peuvent tre d congel s qu une seule fois avant le dosage L talon ACTH DiaSorin a t calibr selon la norme 74 555 de l Organisation mondiale de la sant OMS Toute comparaison avec d autres produits ou proc dures de dosage doit tre effectu e selon cet talon de r f rence L talon d montre sa commutabilit avec les chantillons des patients lorsqu il est utilis avec les r actifs et selon le mode d emploi de ce dosage diagnostique in vitro comme recommand 4 3 Antis rum ACTH r actif lyophilis Du s rum anti ACTH de lapin dilu dans un tampon BSA borate contenant 0 002 de thim rosal et d autres stabilisants Reconst
50. mercio Il range normale nel plasma EDTA osservato nei laboratori DiaSorin era 0 71 pg mL per l Opzione A n 50 e 0 82 pg mL per l Opzione B n 49 Poich la nostra standardizzazione stata effettuata con plasma EDTA l uso di siero o di altro tipo di plasma pu dare un range normale pi alto o pi basso 15 2 Aspecificit Poich nell analisi radioimmunologica si pu ottenere aspecificit il laboratorio deve essere sempre pronto ad eseguire la diluizione seriale di un campione per testare il parallelismo oppure eseguire un estrazione per affinit del campione mediante gel per verificare se la sostanza misurata sia immuno assorbibile Il medico a sua volta dovr tenere conto che la misurazione di cortisolo i test di provocazione e o soppressione vengono spesso eseguiti con ACTH per valutare lo stato ipofisario surrenale del paziente 16 CARATTERISTICHE SPECIFICHE DELLE PERFORMANCE 16 1 Precisione Variazione intra analisi valori pg mL o Numero campione Valore medio D S En Basso 69 8 6 12 5 Medio 281 17 6 6 3 Alto 600 48 8 8 1 Variazione intra analisi valori pg mL Numero campione Valore medio D S C V Basso 23 1 4 6 0 Alto 218 14 7 6 7 16 2 Linearit Parallelismo Studio di diluizione seriale di 4 campioni valori pg mL ACCURATEZZA L ACCURATEZZA DELL ANALISI STATA CONTROL LATA MEDIANTE TEST DI DILUIZIONE E TEST DI RECUPERO
51. mitations of the Procedure 11 PROCEDURAL COMMENTS 11 1 Add each aliquot of reagent to the lower third of the assay tube to ensure complete mixture of reagents 11 2 Some manufacturers disposable borosilicate glass tubes yield elevated nonspecific bindings 11 3 If you choose to aspirate the supernatant from the precipitate be careful not to disturb the precipitate 11 4 To completely monitor the consistent performance of an RIA there are additional factors which must be checked DiaSorin suggests a check of the following parameters to ensure consistent kit performance a Total Counts b Maximum Binding Average counts per minute CPM of Calibrator 0 Tube Average CPM of Total Count Tubes c Nonspecific Binding Average CPM of NSB Tube Average CPM of Total Count Tubes d Slope of Calibrator Curve For example monitor the 80 50 and 20 points of the calibrator line 12 QUALITY CONTROL Each laboratory should include control plasma in every assay to ensure the validity of each assay s results A mean and standard deviation should then be determined for each control using a minimum of ten assays An acceptable range of values may then be obtained for these controls using 2 standard deviations of the values previously determined The DiaSorin Quality Control Laboratory has determined a range for the controls included in this kit using Option A 13 CALCULATION OF RESULTS There are many methods in existence for calculating res
52. n Any glassware used must be rinsed completely with water before washing with other laboratory glassware For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a specific license The receipt use transfer and disposal of radioactive materials are subject to the regulations and conditions of your specific license WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause cancer ATTENTION Radioactivity printed in the package insert may be slightly different from the radioactivity printed on the box label and on the tracer vial label The box label and the tracer vial label indicate the actual amount of radioactivity at the calibration date where the package insert indicates the theoretical radioactivity of the kit 6 INDICATIONS OF POSSIBLE DETERIORATION OF KIT REAGENTS 6 1 The presence of abnormal particulate matter in any of the reagents 6 2 A shift in the slope or position of the calibrator curve from what is normally obtained 6 3 A decrease in maximum binding 6 4 A high nonspecific binding 7 COLLECTION AND PREARATION OF SPECIMEN One hundred microliters in duplicate of EDTA plasma are required for the assay Collect blood by venipuncture in a 5 or 10 mL evacuated glass tube EDTA 7 2 mg 5 mL whole blood is used as anticoagulant Mix gently and place on ice Centrifuge for 15 minutes at 760 x g to obtain hemolysis free plasma A short centrifugation at 20 C will not be detrimental howev
53. n cautela La misurazione di ACTH uno strumento clinicamente utile per la valutazione dell insufficienza surrenalica e pituitaria E inoltre utile nell accertamento se la sindrome di Cushing sia correlata a tumore surrenale o pituitario Ulteriori informazioni sull uso dell analisi ACTH DiaSorin sono disponibili su richiesta 3 PRINCIPIO DELL ANALISI L analisi ACTH DiaSorin un analisi radioimmunologica di equilibrio che pu essere eseguita in due modi Nell Opzione A il campione il primo anticorpo e il tracciante vengono combinati e lasciati incubare per 16 24 ore a 2 8 C Viene aggiunto un complesso pre precipitante il secondo anticorpo per separare il legato dal tracciante libero L analisi pu essere quindi centrifugata e lasciata decantare dopo un incubazione di 15 minuti a 20 25 C Nell Opzione B il campione il primo anticorpo e il tracciante vengono combinati e lasciati incubare per 3 ore a 2 8 C Viene aggiunto un complesso pre precipitante il secondo anticorpo per separare il legato dal tracciante libero L analisi pu essere quindi centrifugata e lasciata decantare dopo un incubazione di 15 minuti a 20 25 C L opzione di tre ore meno sensibile rispetto alla procedura che dura una notte e i risultati ottenuti saranno leggermente superiori Il controllo di qualit sar effettuato da DiaSorin utilizzando soltanto l Opzione A 4 REAGENTI FORNITI CON IL KIT Calibratore 0 ACTH 1 fiala 3 mL 1 fiala
54. ng Bis Schritt 6 beiseite legen b NSB R hrchen 100 uL des Nullkalibrators c Nullkalibrator 100 uL des Nullkalibrators 200 uL ACTH Antiserum d ACTH Kalibratoren A E 100 uL ACTH Kalibrator 200 uL ACTH Antiserum e Kontrollplasma und unbekannte Proben 100 uL Plasma 200 uL ACTH Antiserum 200 uL 25I ACTH zu allen R hrchen hinzugeben Mischen und 3 Stunden 15 Minuten lang bei 2 8 C inkubieren Den GAR PPT Komplex gr ndlich mischen 500 uL zu allen R hrchen au er den Totalaktivit t R hrchen hinzugeben Mischen und 15 25 Minuten lang bei 20 25 C inkubieren Die R hrchen 20 Minuten lang mit 760 x g bei 20 25 C zentrifugieren Die berst nde durch mindestens 2 Minuten langes Umdrehen der R hrchen sofort aus allen R hrchen au er den Totalaktivit t R hrchen dekantieren Bevor Sie die R hrchen aufrecht stellen die R hrchen auf Saugpapier abtupfen um alle eventuellen Tropfen von Uberst nden auf den R ndern zu entfernen Mit einem Gammaszintillationsz hler das Pr zipitat jedes R hrchens und der Totalaktivit t R hrchen eine ausreichende Zeit lang messen um statistische Genauigkeit zu erhalten siehe Abschnitt Grenzen des Verfahrens ANMERKUNGEN ZUM VERFAHREN 11 1 11 2 11 3 Jedes Aliquot des Reagenzes in das untere Drittel des Testr hrchens hinzugeben damit sich die Reagenzien vollst ndig vermischen Die Einweg Borosilikatglasr hrchen einiger Hersteller k nnen erh hte nichtspezifische Bindu
55. ng lations et d cong lations r p t es de l chantillon 8 MAT RIEL ET PRODUITS REQUIS MAIS NON FOURNIS 8 1 Tubes en verre borosilicat jetables 12 x 75 mm 8 2 Centrifugeuse thermostat 20 25 C pour tubes 12 x 75 mm 8 8 Compteur scintillation gamma pouvant mesurer l iode 125 8 4 Vortex 8 5 Pipettes a Micropipettes gradu es pour distribuer 50 uL 100 uL et 200 uL b Distributeurs r p tition gradu s pour distribuer 200 uL et 500 uL 8 6 Eau purifi e 9 PROC DURE DE DOSAGE OPTION A PENDANT LA NUIT 9 1 D congeler les chantillons inconnus et mettre sur de la glace pil e 9 2 Reconstituer les r actifs lyophilis s et permettre aux r actifs congel s de d congeler compl tement Ne pas laisser les r actifs atteindre une temp rature sup rieure 25 C M langer d licatement les r actifs puis mettre sur de la glace pil e avant utilisation 9 3 Installer des tubes en verre jetables de 12 x 75 mm tiquet s en doublet selon le Profil de dosage de la derni re page 9 4 Mettre le portoir sur de la glace pil e 9 5 Ajouter les r actifs comme suit a Tubes de num ration totale Laisser de c t jusqu l tape 6 b Tubes de liaison non sp cifique NSB 100 uL d talon 0 c Etalon 0 100 uL d talon 0 200 uL d antis rum ACTH d Etalons ACTH A E 100 uL d talon ACTH 200 uL d antis rum ACTH e Contr les plasma et chantillons inconnus 100 uL de plasma 200 uL d antis rum
56. ng der Steigung oder Position der Kalibratorkurve im Vergleich zu den normalen Ergebnissen 6 3 Eine Abnahme der maximalen Bindung 6 4 Eine hohe nichtspezifische Bindung 7 PROBENGEWINNUNG UND VORBEREITUNG F r den Test werden 100 Mikroliter EDTA Plasma in doppelter Ausf hrung ben tigt Das Vollblut durch Venenpunktion in einem evakuierten Glasr hrchen f r 5 mL oder 10 mL sammeln Als Antikoagulationsmittel wird EDTA 7 2 mg 5 mL Gesamtblut verwendet Vorsichtig mischen und auf Eis lagern Die Blutproben 15 Minuten lang bei 760 x g zentrifugieren um h molysefreies Plasma zu gewinnen Eine kurze Zentrifugierung bei 20 C ist nicht nachteilig jedoch wird eine Zentrifugierung im gek hlten Zustand empfohlen Alle mit der Probe in Kontakt gekommenen Kunst stoffbeh lter Glasbeh lter oder anderen Materialien sind von jeder Verunreinigung freizuhalten mA ON g 1118 x 105 Radius in cm U Min 26 VORSICHT Heparinisiertes Plasma ergibt f lschlich geringe Werte Enzymhemmer sind in der Probengewinnungsphase nicht notwendig es ist jedoch wichtig die Probe nach der Gewinnung bis zu 8 Stunden lang k hl 0 4 C zu halten F r eine langfristige Lagerung 500 KIU ml Aprotinin zu den Proben hinzugeben und diese bei 15 C lagern Es ist sehr wichtig die Proben gefroren zu halten vorzugsweise in Kunststoffr hrchen Wiederholtes Einfrieren und Auftauen der Probe f hrt m glicherweise zu einer Verringerung von ACTH 8 ZUS TZL
57. ngen ergeben Falls Sie es vorziehen den berstand vom Pr zipitat abzusaugen achten Sie dabei darauf das Pr zipitat nicht aufzur hren g 1118 x 10 Radius in cm U Min 28 11 4 Um die konsistente Leistung eines Radioimmunoassays vollst ndig zu ber wachen m ssen weitere Faktoren berpr ft werden DiaSorin empfiehlt die folgenden Parameter zu berpr fen um eine konsistente Leistung des Kits sicherzustellen a Gesamtz hlung b Maximale Bindung Durchschnittliche Z hlungen pro Minute CPM des Nullkalibrator R hrchens Durchschnittliche CPM der Totalaktivit t R hrchen c Nichtspezifische Bindung Durchschnittliche CPM des NSB R hrchens Durchschnittliche CPM der Totalaktivit t R hrchen d Steigung der Kalibratorkurve Z B berwachung der Punkte 80 50 und 20 der Kalibratorkurve 12 QUALIT TSKONTROLLE Jedem Labor wird empfohlen bei jedem Assay Kontrollplasma mitzutesten um die G ltigkeit aller Testergebnisse zu gew hrleisten Ein Mittelwert und eine Standard abweichung sind dann f r jede Kontrolle in mindestens zehn Versuchs g ngen zu bestimmen Ein zul ssiger Wertebereich kann dann f r diese Kontrollen mit 2 Standardabweichungen der zuvor bestimmten Werte ermittelt werden Das Qualit ts kontrolllabor von DiaSorin hat f r die in diesem Kit enthaltenen Kontrollen unter Anwendung von Option A einen Bereich ermittelt 13 ERGEBNISBERECHNUNG Es gibt viele M glichkeiten die Ergeb
58. ngs unter Einhaltung guter Labor praktiken und entsprechender VorsichtsmaBnahmen laut Empfehlungen des Leitfadens der Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health amerikanische Krankheitsforschungszentren Staatliche Gesundheitsinstitute Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Biosicherheit in mikro biologischen und biomedizinischen Laboren 4 Auflage Mai 1999 oder aktuelle Auflage als potenzielle infekti se Substanzen zu behandeln REAGENZIEN MIT NATRIUMAZID ACHTUNG Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Natriumazid das ggf mit Blei oder Kupferleitungen reagieren und h chst explosive Metallazide bilden kann Zur Entsorgung mit reichlich Wasser nachsp len um Azidbildung zu vermeiden Weitere Informationen finden Sie im Abschnitt Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts des Handbuches Safety Management Nr CDC 22 herausgegeben vom Centers for Disease Control and Prevention Atlanta Georgia 1976 Europ ische Gemeinschaften Gefahrenbezeichnungen f r gef hrliche Stoffe Richtlinie 1999 45 EG R20 21 22 Gesundheitssch dlich beim Einatmen Verschlucken und Ber hrung mit der Haut R32 Entwickelt bei Ber hrung mit S ure sehr giftige Gase S28 Bei Ber hrung mit der Haut sofort mit viel Wasser abwaschen THIMEROSALHALTIGE REAGENZIEN Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Thimerosal das unter anderem auch eine Quecksilberverbindung e
59. nisse von Radioimmunoassays zu berechnen Bei jeder Methode wird eine Kalibrationskurve angelegt indem die prozentualen Bindungen gegen die angegebenen Konzentrationen der Kalibratoren aufgetragen werden Diese Kurve kann entweder eine lineare oder eine logarithmische Skala besitzen Jede dieser Methoden f hrt im Wesentlichen zu denselben Werten f r Kontrollen und Proben bei einigen Tests ist die eine Methode jedoch m glicherweise besser geeignet als die andere Die Umrechnungsmethode f r das DiaSorin Qualit tskontrolllabor lautet B Bo gegen log Konzentration 13 1 Die durchschnittliche CPM f r die einzelnen Kalibratoren Kontrollen und unbekannten Proben berechnen 13 2 Die durchschnittliche CPM der NSB R hrchen von allen Z hlungen subtrahieren 13 3 Die korrigierten CPM jedes Kalibrators jeder Kontrolle oder unbekannten Probe durch die korrigierten CPM des Nullkalibrators dividieren B Bo CPM des Kalibrators oder der unbekannten Probe CPM der NSB x 100 TCR CPM des Nullkalibrators CPM der NSB 13 4 Auf halblogarithmischem Millimeterpapier 2 Zyklen oder doppeltlogarith mischem Millimeterpapier prozentuale Bindungen B Bo f r die ACTH Kalibratoren vertikale Achse gegen die Konzentration horizontale Achse auftragen 13 5 Durch die Punkte eine Ausgleichsgerade legen 13 6 Die Konzentrationen von ACTH in den unbekannten Proben aus der Auftragung interpolieren 13 7 Wenn die Werte einer unbekannten Pro
60. nt les r actifs puis placer sur de la glace pil e avant utilisation Installer des tubes en verre jetables de 12 x 75 mm tiquet s en doublet selon le Profil de dosage de la derni re page Mettre le portoir sur de la glace pil e Ajouter les r actifs comme suit a Tubes de num ration totale Laisser de c t jusqu l tape 6 b Tubes de liaison non sp cifique NSB 100 uL d talon 0 c Etalon 0 100 uL d talon 0 200 uL d antis rum ACTH d talons ACTH A E 100 uL d talon ACTH 200 uL d antis rum ACTH e Contr les plasma et chantillons inconnus 100 uL de plasma 200 uL d antis rum ACTH Ajouter 200 uL d G ACTH dans tous les tubes M langer et incuber pendant 3 heures 15 minutes entre 2 et 8 C M langer vigoureusement le GAR PPT ajouter 500 uL dans tous les tubes l exception des tubes de num ration totale M langer et incuber pendant 15 25 minutes entre 20 et 25 C Centrifuger les tubes pendant 20 minutes 760 x g entre 20 et 25 C D canter imm diatement le surnageant dans tous les tubes l exception des tubes de num ration totale en les renversant pendant 2 minutes minimum Placer les tubes sur du papier absorbant pour liminer toutes les gouttes de surnageant qui peuvent rester sur les bords avant de les replacer l endroit A l aide d un compteur scintillation gamma effectuer la num ration du pr cipit dans chaque tube et des tubes num ration totale le temps n cessaire
61. nte liofilizzato Il normale siero di coniglio pre precipitato con siero di capra anti coniglio e polietilene glicolico PEG diluito in un tampone BSA borato con 0 03 timerosal aggiunto Ricostituire la fiala con 35 mL di acqua purificata Mescolare ACCURATAMENTE fino a quando la sospensione si presenta omogenea e lasciare riposare la fiala per almeno 30 minuti a temperatura ambiente agitando di tanto in tanto 4 6 Controllo ACTH Livello 1 e 2 reagente liofilizzato Nel siero umano si aggiunge se necessario la quantit necessaria di ACTH sintetico per ottenere una concentrazione entro il range specificato Vengono aggiunti 0 1 sodio azide ed altri stabilizzanti Ricostituire ogni fiala con 1 0 mL di acqua purificata e porla su ghiaccio tritato per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente e trattare come campione non noto Per ottenere risultati costanti questo controllo pu essere congelato solo una volta valori per ogni lotto sono stampati sulle fiale dei controlli 36 5 AVVERTENZE E PRECAUZIONI PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Non per uso interno o esterno su animali o persone REAGENTI CONTENENTI MATERIALE DI PROVENIENZA UMANA Trattare come potenzialmente infettivi Ogni unit di siero plasma da donatore usata nella preparazione di questo prodotto stata testata con una metodica approvata dalla FDA statunitense e trovata non reattiva per la presenza di HBsAg anticorpi
62. nth lt Die Entsorgung von elementarem oder anorganischem Quecksilber sowie von Quecksilberoxiden und komponenten muss unter strikter Einhaltung aller lokalen einzelstaatlichen und bundesstaatlichen Vorschriften erfolgen ACHTUNG Dieses Produkt enth lt eine Chemikalie die nach Erkenntnissen des Staates Kalifornien zu Sch den des Erbgutes sowie zu Missbildungen f hren kann 25 REAGENZIEN MIT IOD 125 Dieses Kit enth lt radioaktives Material mit maximal 1 5 uCi 55 5 kBq beim Kit mit 65 R hrchen und 3 yCi 111 kBq beim Jod 125 Kit mit 130 R hrchen Bei der Lagerung Handhabung und Entsorgung dieses Materials sind entsprechende Vorsichts ma nahmen und gute Laborpraktiken einzuhalten F r rzte bzw Institutionen die im Rahmen einer Generallizenz Radioisotope erhalten gilt Folgendes Dieses radioaktive Material darf nur von Arzten veterin rmedizinisch t tigen Tier rzten klinischen Laboren oder Krankenh usern und nur f r klinische n vitro Tests oder In vitro Labortests bei denen das Material oder dessen Strahlung keinen Menschen oder Tieren intern oder extern verabreicht wird empfangen erworben besessen und verwendet werden Entgegennahme Erwerb Besitz Verwendung und Weitergabe des Materials unterliegen den Vorschriften und der Generallizenz der US Nuclear Regulatory Commission bzw des Staates mit dem diese Beh rde ein Abkommen zur Aus bung ihrer Uberwachungsfunktion abgeschlossen hat 1 Die Lagerung des radioaktiven
63. olved mix thoroughly before using For consistent results these calibrators can be thawed only once for use in an assay The DiaSorin ACTH calibrator has been calibrated against the World Health Organization W H O standard 74 555 Any comparison with other products or procedures should be done with this reference calibrator The calibrator demonstrates commutability with patient samples when used with reagents and operating procedure of this in vitro diagnostic test as recommended 4 3 ACTH Antiserum lyophilized reagent Rabbit anti ACTH serum diluted in BSA borate buffer with 0 00296 Thimerosal and other stabilizers added Reconstitute each vial with 14 mL of purified water and let stand on crushed ice for 15 20 minutes until completely dissolved mix thoroughly before using 4 4 5 ACTH lyophilized reagent Synthetic ACTH labeled with iodine 125 diluted in BSA borate EDTA buffer with 0 008 Thimerosal and other stabilizers added Reconstitute each vial with 14 mL of purified water and let stand on crushed ice for 15 20 minutes until completely dissolved mix thoroughly before using For consistent results thaw only once for use in an assay 4 5 Precipitating Complex GAR PPT lyophilized reagent Normal rabbit serum pre precipitated with goat anti rabbit serum and polyethylene glycol PEG is diluted in BSA borate buffer with 0 03 Thimerosal added Reconstitute the vial with 35 mL of purified water Mix THOROUGHLY until the suspension
64. ou de position de la courbe d talonnage par rapport la normale obtenue 6 3 Diminution de la liaison maximale 6 4 Haute liaison non sp cifique 7 PR L VEMENT ET PR PARATION DES CHANTILLONS Cent microlitres de plasma sur EDTA en doublet sont n cessaires pour le dosage Pr lever du sang par ponction veineuse dans un tube en verre vide de 5 ou 10 mL L EDTA 7 2 mg 5 mL sang entier est utilis comme anticoagulant M langer d licatement puis placer sur de la glace Centrifuger pendant 15 minutes 760 x g pour obtenir du plasma non h molys Centrifuger rapidement 20 C n aura pas d effet n gatif on recommande cependant d effectuer une centrifugation r frig r e Tous les plastiques articles en verre ou autres produits entrant en contact avec l chantillon ne doivent absolument pas tre contamin s PR CAUTION Du plasma h parin donne des r sultats faussement bas Il est inutile d ajouter des inhibiteurs d enzyme au stade de pr l vement de l chantillon il faut cependant conserver l chantillon basse temp rature 0 4 C apr s son pr l vement jusqu 8 heures IRON g 1118 x 10 rayon en cm tr min 15 Pour des dur es de conservation long terme ajouter 500 KIU mL d aprotinine l chantillon et conserver 15 C Il est important de conserver l chantillon congel de pr f rence dans des tubes en plastique On peut observer une diminution d ACTH suite des co
65. pendant 15 20 minutes sur de la glace pil e jusqu dissolution compl te bien m langer et traiter comme un chantillon inconnu 13 Pour obtenir des r sultats consistants ce contr le ne peut tre d congel qu une seule fois avant le dosage Les valeurs d finies pour chaque lot figurent sur l tiquette du tube de contr le 5 AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS POUR USAGE DIAGNOSTIQUE IN VITRO Non pr vu pour une utilisation interne ou externe sur l homme ou l animal R ACTIFS CONTENANT DES PRODUITS D ORIGINE HUMAINE Traiter comme potentiellement infectieux Chaque don de s rum plasma intervenant dans la pr paration de ce produit a t test par une m thode US agr e par la FDA et s est av r non r actif en pr sence de HBsAg d anticorps anti VHC et d anticorps anti VIH1 2 M me si ces m thodes sont extr mement pr cises elles ne garantissent pas la d tection de tous les dons infect s Ce produit peut galement contenir d autres produits d origine humaine pour lesquels il n existe aucun test agr Comme aucune m thode de test connue ne peut offrir l assurance compl te de l absence du virus de l h patite B HBV ou de l h patite C HCV du virus de l immunod ficience humaine VIH ou d autres agents infectieux tous les produits d origine humaine doivent tre manipul s conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire en prenant les pr cautions appropri es d crites dans le document U S Centers for Di
66. ption B werden Probe erster Antik rper und Tracer kombiniert und 3 Stunden lang bei 2 8 C inkubiert Ein vorpr zipitierter zweiter Antik rperkomplex wird hinzugef gt um gebundenen und freien Tracer voneinander zu trennen Der Test kann nach 15 Minuten Inkubation bei 20 25 C zentrifugiert und dekantiert werden Die 3 st ndige Option weist eine geringere Empfindlichkeit auf als das Ubernacht Verfahren und die erzielten Ergebnisse werden geringf gig h her ausfallen Eine Qualit tskontrolle wird bei DiaSorin nur mit Option A durchgef hrt 23 4 KITREAGENZIEN ACTH Nullkalibrator 1 Fl schchen 3 mL 1 Fl schchen 3 mL ACTH Kalibratoren 1 5 5 Fl schchen 1 0 mL 5 Fl schchen 1 0 mL ACTH Antiserum 1 Fl schchen 14 mL 2 Fl schchen 14 mL 135 LACTH 1 Fl schchen 14mL 2 Fl schchen 14 mL Pr zipitierender Komplex 1 Fl schchen 35 mL 2 Fl schchen 35 mL GAR PPT ACTH Kontrollen Stufe 1 und 2 2 Fl schchen 1 0 mL 2 Fl schchen 1 0 mL Anzahl der Tests 65 130 LAGERUNG Nach Empfang und vor der Rekonstitution alle Reagenzien bei 2 8 C aufbewahren Nach der Rekonstitution sind dagegen alle Reagenzien bis zum Verfalls datum bei h chstens 15 zu lagern Die Reagenzien d rfen nach dem Verfallsdatum nicht verwendet werden Bei der Rekonstitution den Inhalt der Fl schchen vorsichtig mischen um Schaumbildung zu vermeiden Reagenzien aus verschiedenen Chargen d rfen nicht vermischt werden
67. r les en utilisant l cart type 2 par rapport aux valeurs pr c demment calcul es Le laboratoire de contr le qualit de DiaSorin a d termin un intervalle de valeurs pour les contr les de la trousse dans le cas du dosage selon l option A 13 CALCUL DES R SULTATS Il existe de nombreuses m thodes de calcul des r sultats des dosages radio immunologiques Chacune est bas e sur l obtention d une courbe d talonnage en tracant l ampleur de la liaison par rapport aux concentrations indiqu es pour les talons Ce graphe peut tre l chelle lin aire ou logarithmique Chacune de ces m thodes donne essentiellement les m mes valeurs pour les contr les et les chantillons m me si certains dosages peuvent tre mieux adapt s une m thode particuliere que d autres La m thode de calcul pour le laboratoire de contr le qualit DiaSorin est B Bo par rapport la concentration logarithmique 13 1 Calculer la CPM moyenne pour chaque talon contr le et chantillon inconnu 13 2 Soustraire la CPM moyenne des tubes NSB de toutes les num rations 13 3 Diviser la CPM corrig e de chaque talon contr le ou chantillon inconnu par la CPM corrig e de l talon 0 CPM de l talon ou de l chantillon inconnu CPM de NSB B Bo CPM de l talon 0 CPM de NSB x 100 13 4 En utilisant du papier semi logarithmique ou logarithmique 2 cycles tracer le pourcentage B Bo pour les talons ACTH axe vertic
68. ri 0 5 100 uL 100 uL Controlli 100 uL Campioni non noti E 100 uL Antisiero 200 uL 200 uL Tracciante 200 pL 200 pL 200 uL 200 uL 3 Coprire le provette con pellicola e agitare lentamente nel Vortex 4 Lasciare in incubazione per 3 ore 15 minuti a 2 8 C 5 Versare 500 uL di GAR PPT nei pozzetti eccetto le provette per il conteggio totale 6 Coprire le provette e agitare lentamente nel Vortex T Lasciare in incubazione per 15 20 minuti a 20 25 C 8 Centrifugare a 760 x g per 20 minuti 9 Far decantare i liquidi superficiali 10 Contare ogni provetta in un contatore a raggi gamma per 60 secondi o pi g 1118 x 10 raggio in cm rpm 45 REFERENCES BIBLOGRAPHIE LITERATUR BIBLIOGRAFIA 1 Yalow R S Big ACTH and Bronchogenic Carcinoma Annual Review of Medicine 30 241 1979 2 Orth D N Adrenocorticotropic Hormone ACTH in Methods of Hormone Radioimmunoassay 2nd Edition Academic Press New York p 245 1979 3 Krieger D T Factors Influencing Circadian Periodicity of ACTH and Corticosteroids The Medical Clinics of North America 62 251 1978 4 Krieger D T Rhythms of CRF ACTH and Corticosteroids Endocrine Rhythms ed D T Krieger Raven Press New York p 123 1979 5 Scott R S R A Donald and E A Espiner Plasma ACTH and Cortisol Profiles in Addisonian Patients Receiving Conventional Substitution Therapy Clinical Endocrinology 9
69. rificata e lasciare riposare su ghiaccio tritato per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso Per ottenere risultati costanti questo calibratori possono essere congelati solo una volta Il calibratore ACTH DiaSorin stato calibrato in base allo standard 74 555 dell OMS Eventuali confronti con altri prodotti o procedure devono essere fatti in base a questo calibratore di riferimento Il calibratore dimostra commutabilit con i campioni del paziente quando usati con reagenti e con la procedura operativa di questo test diagnostico in vitro come consigliato 4 3 Antisiero ACTH reagente liofilizzato Siero coniglio anti ACTH diluito in un tampone BSA borato con 0 002 timerosal ed altri stabilizzanti aggiunti Ricostituire ogni fiala con 14 mL di acqua purificata e lasciar riposare su ghiaccio tritato per 15 20 minuti fino a quando il contenuto com pletamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso 4 4 131 ACTH reagente liofilizzato ACTH sintetico etichettato con iodio 125 diluito in un tampone BSA borato EDTA con 0 008 timerosal ed altri stabilizzanti aggiunti Ricostituire ogni fiala con 14 mL di acqua purificata e lasciar riposare su ghiaccio tritato per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso Per ottenere risultati costanti congelare solo una volta 4 5 Complesso precipitante GAR PPT reage
70. s Patienten zu beurteilen 31 16 TESTCHARAKTERISTIKA 16 1 Genauigkeit Intra Testvarianz Werte pg mL Probennummer Mittelwert SA VK Niedrig 69 8 6 12 5 Mittel 281 17 6 6 3 Hoch 600 48 8 8 1 Inter Testvarianz Werte pg mL Probennummer Mittelwert SA VK Niedrig 23 1 4 6 0 Hoch 218 14 7 6 7 16 2 RICHTIGKEIT DIE RICHTIGKEIT DES ASSAYS WURDE MIT HILFE DES VERDUNNUNGS UND DES WIEDERFINDUNGSTESTS BERPR FT Linearit t Parallelit t Serienverd nnung von 4 Patientenproben Werte pg mL Probennummer Unverd nnt 1 2 1 4 1 8 1 156 161 158 2 483 476 555 3 gt 500 988 982 4 gt 500 930 1008 Wiederfindung Genauigkeit Werte pg mL Hintergrund Hinzugef gter Erwarteter Gemessener Prozent Kalibrator Wert Wert Wiederfindung Satz Nr 1 37 5 90 5 81 90 53 150 203 182 90 300 353 276 78 Satz Nr 2 37 5 97 5 90 92 60 150 210 190 90 300 360 315 88 Satz Nr 3 37 5 77 5 65 84 40 150 190 155 82 300 340 345 101 16 3 Analytische Sensitivit t Wenn die geringste nachweisbare Konzentration als die scheinbare Konzentration bei 3 Standardabweichungen von den Z hlungen bei maximaler Bindung definiert wird betr gt sie 15 pg mL f r die Ubernacht Option und 20 pg mL f r die 3 st ndige Option 32 16 4 Analytische Spezifit t Der Vergleich der Kreuzreaktivit t des ACTH Antik rpers wurde bei 1 200 pg mL mit den fo
71. s at 20 25 C 8 Centrifuge using 760 x g for 20 minutes 9 Decant the supernatants 10 Count each tube in a gamma counter for 60 seconds or longer g 1118x 10 radius in cm rpm 11 DOSAGE RADIO IMMUNOLOGIQUE DE L HORMONE CORTICOTROPE 1 INDICATION POUR USAGE DIAGNOSTIQUE N VITRO Cette trousse contient les instructions et les r actifs permettant d effectuer la d termination quantitative par dosage radio immunologique RIA de l ACTH humaine dans le plasma sur EDTA 2 R SUM ET COMMENTAIRE L ACTH est une hormone pituitaire qui contient 39 amino acides et qui a la structure suivante NH Ser Tyr Ser Met Glu His Phe Arg Trp Gly Lys Pro Val Gly Lys Lys Arg Arg Pro Val Lys Val Tyr Pro Asn Gly Ala Glu Asp Glu Ser Ala Glu Ala Phe Pro Leu Glu Phe OH La s quence 1 13 est la m me que l hormone de stimulation alpha du m lanocyte La s quence 1 24 est consid r e comme tant la portion active de la mol cule La s quence 18 39 est connue sous le nom de clip corticotropin like intermediate lobe peptide En g n ral la mol cule est une prot ine basique et relativement labile sous l action des peptidases Comme l ACTH se fixe facilement sur le verre et s associe aux prot ines s riques il est n cessaire d utiliser un tampon sp cial pour garantir la conservation de l ACTH et r duire les liaisons non sp cifiques L ACTH stimule la s cr tion de cortisol par la glande surr nale et est contr l e par un
72. sease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 d mai 1999 ou derni re dition R ACTIFS CONTENANT DE L AZIDE DE SODIUM ATTENTION Certains r actifs de cette trousse contiennent de l azide de sodium L azide de sodium peut r agir avec la plomberie en plomb ou en cuivre et former des azotures ultra explosifs Pour leur mise au rebut rincer grande eau pour emp cher l accumulation d azide Pour plus d informations consulter Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts dans le manuel Guide Safety Management No CDC 22 publi par les Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 D claration des risques relatifs aux substances dangereuses des communaut s europ ennes Directive du conseil 1999 45 EC R20 21 22 Nocif en cas d inhalation d ingestion et de contact avec la peau R32 Un contact avec les acides d gage un gaz tr s toxique S28 Apr s un contact avec la peau laver imm diatement grande eau R ACTIFS CONTENANT DU THIM ROSAL Certains r actifs de cette trousse contiennent du thim rosal contenant un composant de mercure La mise au rebut du mercure l mentaire du mercure inorganique des oxydes de mercure et des composants de mercure doit tre effectu e en respectant scrupuleusement les r glementations locales nationales et f d rales AVERTISSEMENT Ce produit contient
73. t combin s et incub s pendant 3 heures entre 2 et 8 C Un second complexe d anticorps pr pr cipit est ajout pour s parer le traceur li du traceur non li Le dosage peut alors tre centrifug et d cant apr s 15 minutes d incubation entre 20 et 25 C La m thode qui dure 3 heures est moins sensible que la m thode qui dure une nuit et les r sultats obtenus seront l g rement plus lev s DiaSorin effectue le contr le qualit en n utilisant que l option A 12 R ACTIFS FOURNIS DANS LA TROUSSE Etalon 0 ACTH Antis rum ACTH 1 ACTH talons ACTH 1 5 Complexe pr cipitant GAR PPT Contr les ACTH niveaux 1 et 2 1 tube 3 mL 5 tubes 1 0 mL 1 tube 14 mL 1 tube 14 mL 1 flacon 35 mL 2 tubes 1 0 mL 1 tube 3 mL 5 tubes 1 0 mL 2 tubes 14 mL 2 tubes 14 mL 2 tubes 35 mL 2 tubes 1 0 mL Nombre de dosages 65 130 CONSERVATION Des r ception et avant reconstitution tous les r actifs doivent amp tre stock s entre 2 et 8 C Apr s reconstitution stocker tous les r actifs une temp rature inf rieure ou gale 15 C jusqu la date de p remption sur l tiquette Les r actifs ne doivent pas tre utilis s au del de la date de p remption Pendant la reconstitution du contenu des tubes agiter d licatement pour viter la formation de mousse Les r actifs de lots diff rents ne doivent pas tre m lang s 4 1 talon 0 r actif lyophilis Plasma hu
74. tabilisatoren verd nnt Jedes Fl schchen mit 14 mL destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten lang auf Crash Eis stehen lassen bis sich der Inhalt vollst ndig gel st hat vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 4 5 ACTH lyophilisiertes Reagenz Synthetisches ACTH wird mit Jod 125 markiert und in BSA Borat EDTA Puffer unter Zugabe von 0 008 Thimerosal und anderen Stabilisatoren verd nnt Jedes Fl schchen mit 14 mL destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten lang auf Crash Eis stehen lassen bis sich der Inhalt vollst ndig gel st hat vor dem Gebrauch gr ndlich mischen Um konsistente Ergebnisse zu erhalten dieses Reagenz zum Gebrauch in einem Assay nur einmal auftauen 4 5 Pr zipitierender Komplex GAR PPT lyophilisiertes Reagenz Normales Hasenserum das zuvor mit Ziegen anti Hasenserum und Polyethylenglykol PEG prazipitiert wird wird in BSA Boratpuffer unter Zugabe von 0 03 Thimerosal verd nnt Das Fl schchen mit 35 mL destilliertem Wasser rekonstituieren GRUNDLICH mischen bis die Suspension homogen aussieht und anschlieBend das Fl schchen bei Raumtemperatur mindestens 30 Minuten lang stehen lassen und gelegentlich mischen 24 4 6 ACTH Kontrolle Stufe 1 und 2 lyophilisiertes Reagenz Falls notwendig wird das Humanplasma mit der entsprechenden Menge an synthetischem ACTH versetzt um eine Konzentration innerhalb des angegebenen Bereichs zu erhalten Es werden 0 196 Natriumazid und andere Stab
75. taining human source material should be handled in accordance with good laboratory practices using appropriate precautions as described in the U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed May 1999 or current edition REAGENTS CONTAINING SODIUM AZIDE CAUTION Some reagents in this kit contain sodium azide Sodium azide may react with lead or copper plumbing to form highly explosive metal azides On disposal flush with a large volume of water to prevent azide build up For further information refer to Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts in the Manual Guide Safety Management No CDC 22 issued by the Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 European Communities Hazardous Substance Risk Phrases Council Directive 1999 45 EC R20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed R32 Contact with acids liberates very toxic gas S28 After contact with skin wash immediately with plenty of water REAGENTS CONTAINING THIMEROSAL Some reagents in this kit contain thimerosal which contains a mercury compound Disposal of elemental mercury inorganic mercury mercury oxides and mercury compounds should be done in strict compliance with all local state and federal regulations WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause b
76. uL zu allen R hrchen au er den Totalaktivit t R hrchen hinzugeben 9 9 Mischen und 15 25 Minuten lang bei 20 25 C inkubieren 9 10 Die R hrchen 20 Minuten lang mit 760 x g bei 20 25 C zentrifugieren 9 11 Die berst nde durch mindestens 2 Minuten langes Umdrehen der R hrchen sofort aus allen R hrchen auBer den Totalaktivit t R hrchen dekantieren Bevor Sie die R hrchen aufrecht stellen die R hrchen auf Saugpapier abtupfen um alle eventuellen Tropfen von Uberst nden auf den R ndern zu entfernen g 1118 x 10 Radius in cm U Min 27 9 12 Mit einem Gammaszintillationszahler das Pr zipitat jedes R hrchens und der Totalaktivit t R hrchen eine ausreichende Zeit lang messen um statistische Genauigkeit zu erhalten siehe Abschnitt Grenzen des Verfahrens 10 TESTVERFAHREN OPTION B 3 ST NDIGER TEST 11 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 8 10 9 10 10 10 11 10 12 Unbekannte Proben auftauen und auf Crash Eis belassen Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Reagenzien vollst ndig auftauen lassen Die Reagenzien d rfen nicht auf mehr als 25 C erw rmt werden Die Reagenzien vorsichtig mischen und vor dem Gebrauch auf Crash Eis lagern Markierte 12 x 75 mm Einweg Glasr hrchen in Zweierreihen aufstellen siehe Testplan auf der R ckseite Den R hrchenst nder auf Crash Eis aufbewahren Reagenzien wie folgt hinzugeben a R hrchen f r die Gesamtz hlu
77. ults of RIAs Each is based on obtaining a calibration curve by plotting the extent of binding against stated concen trations of the calibration calibrators This graph may be either linear or logarithmic scale Each of these methods gives essentially the same values for controls and samples although certain assays may fit better into one particular method versus another The calculation method for DiaSorin Quality Control Laboratory is B Bo versus log concentration g 1118 x 10 radius in cm rpm 13 1 Calculate the average CPM for each calibrator control and unknown sample 13 2 Subtract the average CPM of the NSB tubes from all counts 13 3 Divide the corrected CPM of each calibrator control or unknown sample by the corrected CPM of the Calibrator 0 CPM of Calibrator or Unknown Sample CPM of NSB B Bo l P x 100 CPM of Calibrator 0 CPM of NSB 13 4 Using 2 cycle semi log or log logit graph paper plot percent B Bo for the ACTH calibrators vertical axis versus the concentration horizontal axis 13 5 Draw a best fit line through the points 13 6 Interpolate the levels of ACTH in the unknown samples from the plot 13 7 If any unknown sample reads greater than the highest calibrator it should be diluted appropriately with Calibrator 0 and assayed again 13 8 If an unknown sample has been diluted correct for the appropriate dilution factor 13 9 Calculate maximum binding by dividing CPM of Calibrator 0
78. un produit chimique connu dans l Etat de Californie comme provoquant des malformations la naissance et des troubles de la reproduction R ACTIFS CONTENANT DE L IODE 125 Cette trousse contient un produit radioactif qui ne d passe pas 1 5 uCi 55 5 kBq pour la trousse de 65 tubes et 3 uCi 111 kBq pour la trousse de 130 tubes d iode 125 Les pr cautions appropri es et les bonnes pratiques de laboratoire doivent tre utilis es pour la conservation la manipulation et la mise au rebut de ce produit Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence g n rale Ce produit radioactif peut tre recu r ceptionn d tenu et utilis uniquement par des m decins des laboratoires cliniques des h pitaux des v t rinaires et des centres de recherche dans le cadre de la pratique de m decine v t rinaire de laboratoires cliniques ou des h pitaux et uniquement pour des analyses cliniques ou de laboratoire in vitro n impliquant pas l administration interne ou externe du produit ni par 14 rayonnement l homme ou l animal Sa r ception son acquisition sa d tention son utilisation et son transfert sont sujets aux r glementations et la licence g n rale de l U S Nuclear Regulatory Commission de l tat avec lequel la Commission a conclu un accord pour l exercice de l autorit r glementaire 1 Le produit radioactif doit tre conserv dans un endroit d sign L acc s
79. von Cortisol aus der Nebenniere und wird durch einen R ckkopplungsmechanismus gesteuert der eine eng kontrollierte Schleife zwischen Hypothalamus Hypophyse und Nebennieren bildet 4 Die ACTH Freisetzung wird durch zwei Faktoren im Hypothalamus stimuliert Ein Faktor ist Vasopressin ein bekanntes Peptid w hrend der andere eine weniger bekannte Substanz mit der Bezeichnung CRF oder Corticotropin releasing factor Corticotropin freisetzender Faktor ist Eine Vasopressin Infusion ist ein m glicher weise n tzlicher provokativer Test der jedoch mit gewissen Gefahren verbunden ist und vorsichtig angewendet werden muss Die ACTH Messung ist ein klinisch n tzliches Hilfsmittel bei der Beurteilung von Nebennieren und Hypophyseninsuffizienz Au erdem ist sie bei der Beurteilung des Cushing Syndroms sowohl im Zusammenhang mit Hypophysen als auch mit Nebennierentumoren hilfreich 9 7 Weitere Informationen zur Anwendung des DiaSorin ACTH Assays sind auf Anfrage erh ltlich 3 TESTPRINZIP Der DiaSorin ACTH Assay ist ein quilibrium Radioimmunoassay der mit zwei verschiedenen Verfahren durchgef hrt werden kann Bei Option A werden Probe erster Antik rper und Tracer kombiniert und 16 24 Stunden lang bei 2 8 C inkubiert Der pr zipitierende zweite Antik rperkomplex wird hinzugef gt um den gebundenen vom ungebundenen Tracer zu trennen Der Test kann nach 15 Minuten Inkubation bei 20 25 C zentrifugiert und dekantiert werden Bei O

125I RIA Kit Instruction Manual

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