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Vasopressin - KC SOLID spol. s ro

1. English Frangais Deutsch Italiano European Conformit aux CE Konformit ts Conformit E normes Conformity kennzeichnung europea europ ennes Expiration Date Date limite Mindesthaltbar Data di P d utilisation keitsdatum scadenza Manufacturer Fabricant Hersteller Fabbricante Consult Consulter les Consultare le d Gebrauchsanwei SE Instructions instructions istruzioni per Geen sung beachten for Use d utilisation l uso In vitro Diagnostic in vitro In vitro Diagnostica in diagnostic 9 x Diagnostikum vitro Lot No No de lot Chargen Nr Lotto n Temperature Limitation de Limite della Re S Temperaturbereich limitation temp rature temperatura Antiserum Antis rum Antiserum Antisiero Precipitating R actif pr cipitant Fallungsreagenz Reagente reagent precipitante Tracciatore Tracer antigen Traceur antig ne Tracer 1 antigene labelled with 231 marqu l iode 128 markiertes Antigen etichettato con 125 Buffer Tampon Puffer Tampone Calibrator Etalon Kalibrator Calibratore Control serum S rum de contr le Kontrollserum Siero di controllo Radioactive Radioactif Radioaktiv Radioattivo Harmful Nocif EE Nocivo schadlich Distribu Par DiaSorin S A 11 rue Georges Besse 92160 Antony France ER ce DiaSorin Inc 1951 Northwestern Avenue For Customer Service in the Box 285 U S and Canada Call Toll Free Stillwater MN 55082 0285 U S A 800
2. Distribuer 500 uL de complexe pr cipitant GAGP PPT dans toutes les cupules l exception des tubes de num ration totale 10 Incuber pendant 15 25 minutes entre 20 et 25 C 11 Centrifuger 760 x g pendant 20 minutes 12 D canter les surnageants 13 Compter chaque tube dans un compteur gamma pendant 60 secondes ou plus g 1 118 x 10 rayon en cm tr min 30 VASOPRESSIN RADIOIMMUNOASSAY 1 VERWENDUNGSZWECK NUR ZUR IN VITRO DIAGNOSTIK Dieses Kit dient zur quantitativen Bestimmung von humanem Arginin Vasopressin AVP ADH in Plasma oder anderen Proben durch Radioimmunoassay RIA im Anschluss an eine Extraktion mit Hilfe von ODS Silica 2 BERBLICK UND ERKL RUNG Arginin Vasopressin AVP ist ein zyklisches Peptid das aus neun Aminos uren besteht Die Struktur von AVP ist der Struktur von Oxytocin sehr hnlich und unterscheidet sich nur durch zwei Aminos uren Aufgrund seiner starken antidiuretischen Wirkungen ist Vasopressin auch als antidiuretisches Hormon ADH bekannt AVP wirkt im Wesentlichen auf den Sammeltubulus der Niere indem es einen Anstieg der Durchlassigkeit f r Wasser und Harnstoff bewirkt jedoch nicht f r gr Bere Molek le AuBerdem besitzt AVP Neurotransmitterfunktionen dient als Freisetzungsfaktor und erf llt periphere humorale Funktionen Seit vielen Jahren ist bekannt dass AVP an zwei Orten im Hypothalamus dem supraoptischen und dem paraventrikul ren Kern produziert wird
3. M thanol de qualit r actif ou sup rieure Acide ac tique 4 Acide chlorhydrique 1 M Source d air comprim ou d azote Bain d eau 37 C Tubes en verre jetables de 16 x 100 mm Eau purifi e EXTRACTION DU PLASMA SUR LES COLONNES DE SILICE OCTADECYLSILYLE 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 Fixer chaque colonne Sep Pak a un raccord de seringue Ajouter 5 ml de m thanol dans chaque seringue Appuyer sur le piston de la seringue pour la vider Retirer les colonnes Sep Pak Retirer les pistons des seringues Remettre les colonnes Sep Pak en place sur les seringues Ajouter 10 ml d eau purifi e dans chaque seringue R p ter les tapes 9 3 a 9 6 R p ter l tape 9 7 puis les tapes 9 3 a 9 6 Acidifier 2 ml de plasma EDTA ou de contr le avec 200 ul d HCI 1 M Le pH doit se situer entre 3 et 4 Charger l chantillon dans la seringue et appuyer lentement pendant une minute pour le vider dans la colonne R p ter les tapes 9 4 9 6 Rincer la colonne avec 20 ml d acide ac tique 4 d tacher la colonne sep pak de l extr mit de la seringue avant de retirer le piston 21 10 afin de ne pas contaminer le contenu de la seringue avec le liquide situ dans la colonne 9 13 9 14 9 15 9 16 9 17 9 18 9 19 R p ter les tapes 9 3 9 6 Pr lever l luat dans des tubes de 16 x 100 mm en luant le peptide avec 3 ml de m thanol Appuyer lentement
4. Methanol reagent grade or better 4 acetic acid 1 M hydrochloric acid Compressed air or nitrogen supply 37 C water bath Disposable glass tubes 16 x 100 mm Purified water EXTRACTION OF PLASMA WITH ODS SILICA COLUMNS Attach each Sep Pak to a syringe hub Add 5 mL of methanol to each syringe Press through the syringe using the syringe plunger Remove the Sep Paks Remove the syringe plunger from the syringes Replace the Sep Paks on syringes Add 10 mL of purified water to each syringe 6 10 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 9 14 9 15 9 16 9 17 9 18 9 19 g 1118 x 10 radius in cm rpm Repeat steps 9 3 through 9 6 Repeat step 9 7 then steps 9 3 through 9 6 Acidify 2 mL of EDTA plasma or control plasma with 200 uL of 1 M HCI The pH should be 3 4 Load the sample in the syringe and push slowly over a period of one minute through the column Repeat steps 9 4 through 9 6 Rinse the column with 20 mL of 4 acetic acid Repeat steps 9 3 through 9 6 Collect the eluate in 16 x 100 mm tubes by eluting the peptide with 3 mL of methanol Push slowly so that the methanol remains in contact with the ODS silica for a minimum of 3 minutes Repeat steps 9 4 through 9 6 Put through another 1 mL of methanol to ensure complete elution Evaporate the methanol eluate to dryness in a 37 C water bath using an air jet compressed air or nitrogen Specimens must be completely dry Do not leave i
5. 16 3 Analytische Sensitivit t Wenn die geringste nachweisbare Konzentration als die scheinbare Konzentration bei 3 Standardabweichungen von den Zahlungen bei maximaler Bindung definiert wird betr gt sie 2 5 pg ml Wenn der Wert einer Patientenprobe vor der Korrektur mit dem entsprechenden Verd nnungsfaktor kleiner ist als 2 5 pg ml kann er nicht von dem Wert Null unterschieden werden 16 4 Analytische Spezifit t Der Vergleich der Reaktivit t des Vasopressin Antik rpers wurde mit den folgenden Peptiden durchgef hrt Peptid Kreuzreaktivit t Arginin Vasopressin 100 Lysin Vasopressin 600 Oxytocin lt 0 01 Vasotocin 0 14 LITERATURANGABEN FINDEN SIE AUF DER LETZTEN SEITE 44 TESTSCHEMA 1 Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Proben vollst ndig auftauen lassen Die Reagenzien d rfen nicht auf mehr als 25 C erwarmt werden R hrchen in doppelter Anordnung kennzeichnen 2 Extraktkontrollen und unbekannte Proben gemaB Abschnitt 9 3 Reagenzien wie folgt dispensieren Kontrollen Ge Totalaktivit t NSB Kalo Kalt 5 no Proben 196 BSA Boratpuffer 200 ul 200 ul Kalibratoren 1 5 S 200 ul Extrahierte D e 200 ul Kontrollen 200 pi Extrahierte unbekannte Proben gt 3 100 pl 100 pl 100 pl Antiserum 4 Die R hrchen mit Parafilm abdecken und vorsichtig sch tteln 5 18 24 Stunden lang bei 2 8 C inkubieren 6 100 ul des Tracers in
6. AVP wird vom supraoptischen Kern ber Axone durch den neurohypophys ren Trakt zum Hypophysenhinterlappenextrakt transportiert wo die Axone als Endf Bchen an Kapillaren enden Von dieser Region aus erfolgt die Sekretion von AVP in den peripheren Kreislauf m glicherweise in Verbindung mit proteintragenden Molek len die als Neurophysin bekannt sind Es scheint wahrscheinlich dass AVP aus dem paraventrikularen Kern in Kapillare des portalen Hypothalamus Hypophysen Systems sekretiert und zum Hypophysenvorder lappenextrakt geleitet wird wo es m glicherweise die Freisetzung von Adrenocorticotropin ACTH stimuliert Es ist bekannt dass die AVP Freisetzung durch eine Reihe von osmotischen und nicht osmotischen Reizen hervorgerufen wird Ein negatives R ckkopplungssystem das die Niere das zentrale Nervensystem und den Durstmechanismus umfasst ist vorhanden und erm glicht die Regulation der Konzentration in der K rperfl ssigkeit Die AVP Freisetzung wird auBerdem durch eine Reihe von anderen Faktoren beeinflusst darunter emotionaler Stress K rperhaltung Blutvolumen Temperatur und viele pharmakologische Wirkstoffe Durch Alkohol scheint de AVP Sekretion leicht gehemmt zu werden 7 Der AVP Test wird f r Untersuchungen in Bezug auf Diabetes insipidus das Syndrom der inad quaten ADH Sekretion SIADH das Syndrom der ektopischen AVP Produktion sowie psychogene Wasserintoxikation angewendet 5 31 Der AVP RIA ist sehr hilfreic
7. C Phase separation is completed in 15 25 minutes at 20 25 C with a pre precipitated complex of second antibody carrier and PEG added in a single pipetting step 4 REAGENTS PROVIDED IN THE KIT Vasopressin 196 BSA borate Buffer 1 vial 35 mL Vasopressin Calibrator 1 vial 2 0 mL Vasopressin Antiserum 1 vial 7 mL 125 Vasopressin 1 vial 7 mL Precipitating Complex GAGP PPT 1 vial 35 mL Vasopressin Control Plasma 2 vials 2 5 mL Number of tests 65 STORAGE Upon receipt and prior to reconstitution store all reagents at 2 8 C After reconstitution store all reagents at 15 or lower until the expiration date on the label Reagents should not be used past the expiration date When reconstituting the contents of the vials mix gently to avoid foaming Reagents from different batches must not be mixed 4 4 Vasopressin 1 BSA borate Buffer lyophilized reagent 1 BSA borate buffer contains thimerosal as a preservative Reconstitute the vial with 35 mL of purified water and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using 4 2 Arginine Vasopressin Calibrator lyophilized reagent Purified arginine vasopressin at a nominal concentration of 80 pg mL is made in BSA borate buffer containing thimerosal Exact values are assigned with each lot Reconstitute the vial with 2 0 mL of purified water mix and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely d
8. D terminer ensuite la moyenne et l cart type pour chaque contr le sur un minimum de dix dosages Une gamme de valeurs acceptable peut donc tre obtenue pour ces contr les en utilisant l cart type 2 par rapport aux valeurs pr c demment calcul es Le laboratoire de contr le qualit de DiaSorin a d termin un intervalle pour les contr les fournis dans cette trousse L intervalle appara t sur l tiquette des flacons de contr le 13 CALCUL DES R SULTATS Il existe de nombreuses m thodes de calcul des r sultats des dosages radio immunologiques Chacune est bas e sur l obtention d une courbe d talonnage en tra ant l ampleur de la liaison par rapport aux concentrations indiqu es pour les talons Ce graphe peut tre l chelle lin aire ou logarithmique Chacune de ces m thodes donne essentiellement les m mes valeurs pour les contr les et les chantillons m me si certains dosages peuvent tre mieux adapt s une m thode particuli re que d autres La m thode de calcul du laboratoire de contr le qualit DiaSorin est B Bo par rapport la concentration logarithmique 13 1 Calculer le CPM moyen pour chaque talon contr le et chantillon inconnu 13 2 Soustraire le CPM moyen des tubes NSB de toutes les num rations 13 3 Diviser le CPM corrig de chaque talon contr le ou chantillon inconnu par le CPM corrig de l talon 0 SEM de l talon ou de l chantillon inconnu CPM de NSB 0 7
9. L VEMENT ET PREPARATION DES CHANTILLONS Deux millilitres de plasma EDTA sont requis pour l extraction lors de cette proc dure Pr lever du sang par ponction veineuse dans un tube en verre vide de 5 ou 10 ml L EDTA 7 2 mg 5 ml de sang est utilis comme anticoagulant Centrifuger rapidement pendant 15 minutes 760 x g S parer le plasma dans les cellules et mettre dans des tubes de stockage Il a t prouv que la vasopressine est stable temp rature ambiante pendant plusieurs heures Pour une conservation prolong e congeler une temp rature inf rieure ou gale 15 C Tous les plastiques articles en verre ou autres produits entrant en contact avec l chantillon ne doivent absolument pas tre contamin s REMARQUE il a t constat que le plasma et le s rum h parin s permettent des r cup rations moindres Par ailleurs le plasma h parin bouche parfois la colonne Sep Pak g 1118 x 10 rayon en cm tr min 20 8 MAT RIEL ET PRODUITS REQUIS MAIS NON FOURNIS 8 1 8 2 8 3 8 4 8 5 8 6 8 7 8 8 8 9 8 10 8 11 8 12 8 13 Tubes en verre borosilicat jetables 12 x 75 mm Centrifugeuse thermostat pour tubes de 12 x 75 mm Compteur a scintillation gamma pouvant mesurer l iode 125 Agitateur Vortex Pipettes a Micropipettes calibr es pour d livrer 100 pl et 200 ul b Distributeurs r p tition calibr s pour distribuer 100 pl et 500 ul Seringues jetables de 12 ml
10. NSB 192 199 3 4 205 Calibratore 0 2 970 2 872 2 673 48 5 100 2 774 Calibratori pg mL A 5 2 537 2 566 2 367 88 6 2 595 B 10 2 374 2 324 2 125 79 5 2 274 C 20 1 772 1 779 1 580 59 1 1 785 D 40 1 200 1 234 1 035 38 7 1 268 E 80 819 819 620 23 2 818 Campioni non noti 1 2 591 2 556 2 357 88 2 5 5 1 4 2 521 2 1 265 1 297 1 098 41 1 36 5 9 1 1 329 La TABELLA Il e la FIGURA 1 riportano dati di campioni tipici queste informazioni servono solo a scopo di riferimento e non devono essere usate per il calcolo dei valori 56 ESEMPIO DI CURVA DI CALIBRAZIONE PER VASOPRESSINA FIGURA 1 Riduzione dei dati Il Laboratorio di controllo di qualit DiaSorin utilizza una retta curvilinea uniforme 14 LIMITI DELLA PROCEDURA 14 1 Fare attenzione ad estrarre uniformemente tutti i campioni 14 2 Il conteggio delle volte dovrebbe essere sufficiente per prevenire l introduzione di errori statistici nel conteggio ad esempio l accumulo di 2 000 CPM produrr un errore del 5 10 000 CPM produrr un errore dell 1 57 15 VALORI PREVISTI Range Normale Ogni laboratorio deve stabilire un range di riferimento proprio In campioni di uomini e donne n 27 DiaSorin ha stabilito che il valore medio di vasopressina di 1 4 pg mL con un range normale di ND 4 7 pg mL valori normali sono stati calcolati mediante estrazione di 2 mL di plasma EDTA Le risposte finali sono state divise per quattro dando il range normale di NR 4 7 pg m
11. containing thimerosal Reconstitute the vial with 7 mL of purified water and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using 4 5 Precipitating Complex GAGP PPT lyophilized reagent Normal guinea pig serum pre precipitated with goat anti guinea pig serum and polyethy lene glycol PEG is diluted in BSA borate buffer with preservatives added Reconstitute the vial with 35 mL of purified water mix thoroughly until the suspension appears homogeneous and then allow it to stand for a minimum of 30 minutes at room temperature with occasional mixing 4 6 Vasopressin Control Plasma lyophilized reagent Human plasma is spiked if necessary with the appropriate amount of arginine vasopres sin to obtain a concentration within a specified range Sodium azide is added as a preser vative Reconstitute each vial with 2 5 mL of purified water and allow them to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly and treat the quality control plasma as an unknown sample 4 7 ODS Silica lyophilized reagent Octadecasilyl silica is enclosed in plastic columns Sep Paks The ODS silica columns included in the kit must be primed prior to applying sample see Procedure section The columns may be stored at room temperature 5 WARNINGS AND PRECAUTIONS FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE Not for internal or external use in humans or animals REAGENTS CONTAINING HU
12. ig hohen Wasserkonsum verursacht Sie ist nicht die Folge einer physischen Erkrankung sondern vielmehr wie durch den Namen angedeutet wird eine Verhaltensst rung 3 TESTPRINZIP Der DiaSorin AVP RIA besteht aus 2 Verfahren Beim ersten Verfahren werden die Proben mit Hilfe der in dem Kit enthaltenen Octadecasilyl Silica ODS Silica S ulen extrahiert Danach werden die extrahierten Proben mit Hilfe eines Dys quilibrium RIA Verfahrens zur Maximierung der Empfindlichkeit getestet Probe und erster Antik rper werden bei 2 8 C 18 24 Stunden lang vorinkubiert anschlieBend wird ein Tracer hinzugegeben gefolgt von einer zweiten Inkubation bei 2 8 C Die Phasentrennung erfolgt innerhalb von 15 25 Minuten bei 20 25 mit einem vorpr zipitierten Komplex aus einem zweiten Antik rper einem Tr ger und PEG der in einem einzigen Pipettenschritt hinzugegeben wird 4 REAGENZIEN DES KITS Vasopressin 196 BSA Boratpuffer 1 Fl schchen 35 ml Vasopressin Kalibrator 1 Fl schchen 2 0 ml Vasopressin Antiserum 1 Fl schchen 7 ml 13 Vasopressin 1 Fl schchen 7 ml Pr zipitierender Komplex GAGP PPT 1 Fl schchen 35 ml Vasopressin Kontrollplasma 2 Flaschchen 2 5 ml Anzahl der Tests LAGERUNG Nach Empfang und vor der Rekonstitution alle Reagenzien bei 2 8 C 32 aufbewahren Nach der Rekonstitution sind dagegen alle Reagenzien bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum bei h chstens 15 zu lagern Die Reagenz
13. le qualit comme un chantillon inconnu 4 7 Silice octadecylsilyle r actif lyophilis Les colonnes en plastique contiennent du silice octad cylsilyl Sep Pak Les colonnes fournies dans la trousse doivent tre amorc es avant d appliquer l chantillon voir la section intitul e Proc dure Elles peuvent tre conserv es temp rature ambiante 5 AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS POUR USAGE DIAGNOSTIQUE IN VITRO Non pr vu pour une utilisation interne ou externe sur l homme ou l animal R ACTIFS CONTENANT DES PRODUITS D ORIGINE HUMAINE Traiter comme potentiellement infectieux Chaque don de s rum plasma intervenant dans la pr paration de ce produit a t test par une m thode agr e par la FDA et s est av r non r actif en pr sence de HBsAg d anticorps anti VHC et d anticorps anti VIH1 2 M me si ces m thodes sont extr mement pr cises elles ne garantissent pas la d tection de tous les dons infect s Ce produit peut galement contenir d autres produits d origine humaine pour lesquelles il n existe aucun test agr Comme aucune m thode de test connue ne peut offrir l assurance compl te de l absence du virus de l h patite B HBV ou de l h patite C HCV du virus de l immunod ficience humaine VIH ou d autres agents infectieux tous les produits d origine humaine doivent tre manipul s conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire en prenant les pr cautions appropri es d crites dans le docu
14. 88 6 2 595 B 10 2 374 2 324 2 125 79 5 2 274 C 20 1 772 1 779 1 580 59 1 1 785 D 40 1 200 1 234 1 035 38 7 1 268 E 80 819 819 620 23 2 818 chantillons d terminer 1 2 591 2 556 2 357 88 2 5 5 1 4 2 521 2 1265 1297 1098 41 1 36 5 9 1 1329 Des donn es d chantillon typiques et une courbe d talonnage sont pr sent es au TABLEAU Il et la FIGURE 1 ces informations sont fournies titre de r f rence seulement et ne doivent pas tre utilis es pour le calcul d une valeur quelconque 25 COURBE D ETALONNAGE POUR L ECHANTILLON DE VASOPRESSINE FIGURE 1 Donn es de r duction Le laboratoire QC DiaSorin utilise un programme smoothed spline curve 14 LIMITATIONS DE LA PROC DURE 14 1 Prendre soin d extraire tous les chantillons de fa on uniforme 14 2 Les temps de num ration doivent tre suffisants pour emp cher l erreur statistique lors de la num ration par exemple l accumulation de 2 000 CPM donnera une erreur de 5 et 10 000 CPM donneront une erreur de 1 26 15 VALEURS ESCOMPT ES Valeurs Normales Chaque laboratoire doit tablir sa propre plage de valeurs de r f rence Dans les chantillons des hommes et des femmes n 27 DiaSorin a d termin que la valeur moyenne de la vasopressine tait de 1 4 pg ml avec des valeurs normales comprises entre non d celable et 4 7 pg ml Les valeurs normales ont t calcul es par l extraction de 2 ml de plasma EDTA Les r ponses finales on
15. Journal of Biology and Medicine 53 525 1980 Weitzman R E L Farnsworth R MacPhee C C Wang and C M Bennett Effect of Opposing Osmolar and Volume Factors on Plasma Arginine Vasopressin in Man Mineral and Electrolyte Metabolism 1 43 1978 Shimizu K and M Hoshino Application of Vasopressin Radioimmunoassay to Clinical Study Role of Vasopressin Hyponatremia and Hypernatremia and Some Other Dis orders of Water Metabolism Contr Nephrology 9 42 1978 Baylis P H and G L Robertson Case Reports Vasopressin Function in Familial Cranial Diabetes Insipidus Postgraduate Medical Journal 57 36 1981 Block L H J Furrer R A Locher W Siegenthaler and W Vetter Changes in Tissue Sensitivity to Vasopressin in Hereditary Hypothalamic Diabetes Insipidus Klinishe Wochenschrift 59 831 1981 Haas M and GM Glick Radioimmunoassayable Plasma Vasopressin Associated with Surgery Archives of Surgery 113 597 1978 Yamaji T M Ishibashi and S Katayama Nature of the Immunoreactive Neurophysins in Ectopic Vasopressin producing Oat Cell Carcinomas of the Lung Journal of Clinical Investigation 68 388 1981 Preibisz J J JE Sealy J H Laragh R J Cody and Weksler Plasma and Platelet Vasopressin in Essential Hypertension and Congestive Heart Failure Supplement I Hypertension 1 129 1983 Symbols used with devices CE 2 CH 4
16. Nr CDC 22 herausgegeben vom Centers for Disease Control and Prevention Atlanta Georgia 1976 Europ ische Gemeinschaften Gefahrenbezeichnungen f r gef hrliche Stoffe Richtlinie 1999 45 EG R20 21 22 Gesundheitssch dlich beim Einatmen Verschlucken und Ber hrung mit der Haut R32 Entwickelt bei Ber hrung mit S ure sehr giftige Gase S28 Bei Ber hrung mit der Haut sofort mit viel Wasser abwaschen THIMEROSALHALTIGE REAGENZIEN Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Thimerosal das unter anderem auch eine Quecksilberverbindung enth lt Die Entsorgung von elementarem oder anorganischem Quecksilber sowie von Quecksilberoxiden und komponenten muss unter strikter Einhaltung aller lokalen einzelstaatlichen und bundesstaatlichen Vorschriften erfolgen WARNHINWEIS Dieses Produkt enth lt eine Chemikalie die nach Angaben des US Bundesstaates Kalifornien krebserregend ist REAGENZIEN MIT IOD 125 Dieses Kit enth lt radioaktives Material mit maximal 1 uCi 37 kBq Jod 125 Bei der Lagerung Handhabung und Entsorgung dieses Materials sind entsprechende Vorsichtsma nahmen und gute Laborpraktiken einzuhalten F r rzte bzw Institutionen die im Rahmen einer Generallizenz Radioisotope erhalten gilt Folgendes Dieses radioaktive Material darf nur von rzten veterin rmedizinisch t tigen Tier rzten klinischen Laboren oder Krankenh usern und nur f r klinische In vitro Tests oder In vitro Labortests bei denen das Mater
17. afin que le m thanol reste en contact avec le silice octad cylsilyl pendant 3 minutes minimum R p ter les tapes 9 4 9 6 Passer 1 ml suppl mentaire de m thanol afin de garantir une lution compl te Laisser l luat de m thanol s vaporer siccit dans un bain d eau 37 C en utilisant un jet d air air comprim ou de l azote Les chantillons doivent compl tement secs Ne les laisser dans le bain d eau 37 C que le temps requis pour qu ils s chent Reconstituer l chantillon avec 0 5 ml de tampon BSA borate 1 Un chantillon dont on escompte des valeurs lev es peut galement tre dilu avec du BSA borate 1 ce moment l M langer avec l agitateur Vortex et placer 37 C pendant dix minutes pour obtenir une reconstitution de l chantillon d shydrat M langer avec l agitateur Vortex apr s incubation Doser 200 pl en double dans le dosage radio immunologique PROC DURE DE DOSAGE 10 1 10 2 10 3 Reconstituer les r actifs lyophilis s et laisser les r actifs congel s d congeler compl tement Ne pas laisser les r actifs atteindre une temp rature sup rieure 20 25 M langer d licatement tous les r actifs avant utilisation Installer des tubes jetables de 12 x 75 mm tiquet s en doublet selon le Profil de dosage de la derni re page Ajouter les r actifs comme suit a Tubes de num ration totale Laisser de c t jusqu l tape 5 b Tubes de
18. alle Wells dispensieren 7 Abdecken und vorsichtig sch tteln 8 18 24 Stunden bei 2 8 C inkubieren 9 500 ul des GAGP PPT Komplexes in alle Wells au er den Totalaktivit t R hrchen dispensieren 10 15 bis 25 Minuten lang bei 20 25 C inkubieren 11 20 Minuten lang mit 760 x g zentrifugieren 12 Die Uberstande dekantieren 13 Jedes R hrchen mindestens 60 Sekunden lang in einem Gammaszintillationszahler zahlen g 1118 x 10 Radius in cm U min 45 ANALISI RADIOIMMUNOLOGICA DI VASOPRESSINA 1 Uso previsto PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Questo kit serve per la determinazione quantitativa di arginina vasopressina umana AVP ADH nel plasma o in altri campioni mediante analisi radioimmunologica RIA a seguito di estrazione mediante silice ODS 2 SOMMARIO E SPIEGAZIONI L arginina vasopressina AVP un peptide ciclico costituito da 9 amminoacidi La struttura di AVP molto simile a quella dell ossitocina si differenzia solo in due aminoacidi La vasopressina per la sua potente azione antidiuretica nota anche come antidiuretina ADH L AVP agisce principalmente sul tubulo collettore del rene provocando un aumento di permeabilit all acqua e all urea ma non a molecole pi grandi L AVP inoltre ha funzioni neurotrasmettitrici nonch fattori di rilascio e funzioni umorali periferiche noto da molti anni che l AVP prodotta in due punti dell ipotalamo il nucleo sopraottico e il nucleo par
19. avant correction selon le facteur de dilution ne peut pas tre distingu de z ro 28 16 4 Sp cificit Analytique La comparaison de la r activit de l anticorps anti vasopressine a t effectu e avec les peptides suivants Peptide r action crois e Arginine vasopressine 100 Lysine vasopressine 600 Ocytocine lt 0 01 Vasotocine 0 14 VOIR LA DERNI RE PAGE POUR R F RENCE 29 PROC DURE DE DOSAGE 1 Reconstituer les r actifs lyophilis s et permettre aux chantillons congel s de d congeler compl tement Ne pas laisser les r actifs atteindre une temp rature sup rieure 25 C Identifier les tubes en double 2 Extraire les contr les et les chantillons inconnus selon les instructions donn es la section neuf 3 Ajouter les r actifs dans les tubes comme suit ENT Nume talon talon Controles Bt Tubes R actifs rations NSB 0 1 5 chantillons totales inconnus Tampon BSA borate 1 200 ul 200 ul Etalons 1 5 S 200 ul Contr les extraits 200 ul Echantillons inconnus 200 ul extraits 100 ul 100 pl 100 ul Antis rum 4 Couvrirles tubes avec du parafilm et agiter d licatement l aide du vortex 5 Laisser incuber pendant 18 24 heures entre 2 et 8 C 6 Distribuer 100 pl de traceur dans toutes les cupules 7 Couvrir et m langer doucement l aide du vortex 8 Laisser incuber pendant 18 24 heures entre 2 et 8 C 9
20. cas de d versement de produits radioactifs dans une zone nettoyer la zone puis la laver l aide d une produit d tergent base d alcali ou d une solution de d contamination radioactive Tout article de verre utilis doit tre enti rement lav l eau avant de laver les autres articles de verre du laboratoire DP ab 19 Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence sp cifique La r ception l utilisation le transfert et la mise au rebut de produits radioactifs sont sujets aux r glementations et conditions de votre licence sp cifique AVERTISSEMENT Ce produit contient un produit chimique connu dans l Etat de Californie comme tant canc rig ne ATTENTION La radioactivit imprim e sur la notice d utilisation peut tre l g rement diff rente de celle qui est imprim e sur l tiquette de la bo te et sur l tiquette du flacon du traceur Les tiquettes de la bo te et du flacon du traceur indiquent la dose r elle de radioactivit la date de calibrage alors que la notice d utilisation indique la radioactivit th orique de la trousse INDICATIONS D UNE D T RIORATION POSSIBLE DES R ACTIFS DE LA TROUSSE 6 1 Pr sence de particules anormales dans l un quelconque des r actifs 6 2 cart de pente ou de position de la courbe d talonnage par rapport la normale obtenue 6 3 Diminution de la liaison maximale 6 4 Haute liaison non sp cifique PR
21. di calibrazione Ad esempio monitorare i punti di soppressione a 80 50 e 20 della linea del calibratore 12 CONTROLLO DI QUALIT Ogni laboratorio dovrebbe includere almeno due controlli in ogni analisi per garantire la validit dei risultati di ogni analisi Determinare quindi la deviazione media e standard per ogni controllo usando un minimo di dieci analisi Si pu quindi ottenere un range 54 accettabile di valori per questi controlli utilizzando 2 deviazioni standard dei valori determinati in precedenza Il Laboratorio di Controllo della Qualit DiaSorin ha stabilito un range per i controlli inclusi nel kit range sono stampati sulle etichette delle fiale 13 CALCOLO DEI RISULTATI Esistono molti metodi per calcolare i risultati di RIA ognuno tende ad ottenere una curva di calibrazione mediante tracciamento dell estensione del legame rispetto alle concentrazioni indicate dei calibratori Il grafico pu essere su scala lineare o logaritmica Ciascun metodo d essenzialmente gli stessi valori per i controlli e i campioni anche se certe analisi possono essere pi adatte per un particolare metodo rispetto ad un altro Il metodo di calcolo del Laboratorio di controllo qualit di DiaSorin di B Bo rispetto alla concentrazione di log 13 1 Calcolare il CPM medio per ogni calibratore controllo e campione non noto 13 2 Sottrarre il CPM medio delle provette NSB da tutti i conteggi 13 3 Dividere il CPM corretto di ogni cal
22. males and females at any age In contrast nephrogenic diabetes insipidus is caused by failure of the renal tubules to respond to vasopressin rendering the tubules unable to reabsorb water Nephrogenic diabetes insipidus which is hereditary generally affects males and normally 1 occurs at infancy is characterized by normal circulating AVP levels 10 SIADH refers to a release of vasopressin that is inappropriate to a low serum osmo lality 5 It can be caused by a number of conditions including pulmonary disease head trauma injury or surgical local infection and cancer Certain neoplasms especially bronchogenic carcinoma produce AVP or AVP like peptides This ectopic vasopressin production syndrome is generally characterized by a sustained high elevation of AVP levels Psychogenic water intoxication is caused by compulsive and excessive water consumption It is not the result of a physical disorder rather as its name indicates psychogenic water intoxication is a behavioral disturbance 3 PRINCIPLE OF THE ASSAY The DiaSorin AVP RIA consists of 2 procedures The first involves extraction of the samples using the octadecasilyl silica ODS silica columns that are included in the kit The extracted samples are then assayed using a disequilibrium RIA procedure to maximize sensitivity There is a pre incubation of sample and first antibody for 18 24 hours at 2 8 C tracer is then added followed by a second incubation at 2 8
23. ml destilliertem Wasser rekonstituieren gr ndlich mischen bis die Suspension homogen erscheint und dann mindestens 30 Minuten bei Zimmertemperatur stehen lassen und hin und wieder sch tteln 4 6 Vasopressin Kontrollplasma lyophilisiertes Reagenz Falls notwendig wird Humanplasma mit der entsprechenden Menge Arginin Vasopressinversetzt um eine Konzentration innerhalb eines bestimmten Bereichs zu erzielen Zugabe von Natriumazid als Konservierungsmittel Jedes Fl schchen mit 2 5 ml destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen gr ndlich mischen und das Qualit tskontrollplasma als unbekannte Probe behandeln 4 7 ODS Silica lyophilisiertes Reagenz Octadecylsilyl Silica ist in Kunststoffs ulen Sep Paks enthalten Die im Kit enthaltenen ODS Silicas ulen m ssen vor Anwendung der Probe geprimed werden siehe Abschnitt ber das entsprechende Verfahren Die S ulen k nnen bei Raumtemperatur aufbewahrt werden 5 WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN NUR ZUR IN VITRO DIAGNOSTIK Nicht f r internen oder externen Gebrauch bei Menschen oder Tieren REAGENZIEN MIT MATERIAL HUMANEN URSPRUNGS Dieses Produkt ist als potenziell infekti s zu behandeln Ale der Herstellung dieses Produktes verwendeten Serum bzw Plasmaspendeeinheiten wurden nach einer FDA genehmigten Methode getestet und f r nicht reaktiv auf Hepatitis B Oberfl chenantigen HBsAg Hepatitis C Antik
24. procedure di sensibilit devono essere fatti in base a questo standard di riferimento Il calibratore dimostra commutabilit con i campioni del paziente quando usati con reagenti e con la procedura operativa di questo test diagnostico in vitro come consigliato 4 3 Antisiero vasopressina reagente liofilizzato Il siero di porcellino d India anti vasopressina diluito in un tampone BSA borato contenente timerosal Ricostituire la fiala con 7 mL di acqua purificata e lasciar riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso 4 4 51 Vasopressina reagente liofilizzato Lys Vasopressina etichetta con iodio 125 e diluita in un tampone BSA borato EDTA contenente timerosal Ricostituire la fiala con 7 mL di acqua purificata e lasciar riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso 4 5 Complesso precipitante GAGP PPT reagente liofilizzato Siero normale di porcellino d India pre precipitato con siero capra anti porcellino d india e polietilene glicolico PEG diluito in un tampone BSA borato e aggiunta di conservanti Ricostituire la fiala con 35 mL di acqua depurata mescolare accuratamente fino a quando la sospensione si presenta omogenea quindi lasciar riposare per almeno 30 minuti a temperatura ambiente mescolando occasionalmente 4 6 Plasma di controllo vasopressina reagente liofilizza
25. the U S Nuclear Regulatory Commission or of the state with which the Commission has entered into an agreement for the exercise of regulatory authority 1 Storage of radioactive material should be limited to a specifically designated area Access to radioactive materials must be limited to authorized personnel only Do not pipette radioactive material by mouth Do not eat or drink within designated radioactive work areas Areas where spills may occur should be wiped up then washed with an alkali detergent or radiological decontamination solution Any glassware used must be rinsed completely with water before washing with other laboratory glassware For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a specific license The receipt use transfer and disposal of radioactive materials are subject to the regulations and conditions of your specific license WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause cancer ATTENTION Radioactivity printed in the package insert may be slightly different from the radioactivity printed on the box label and on the tracer vial label The box label and the tracer vial label indicate the actual amount of radioactivity at the calibration date where the package insert indicates the theoretical radioactivity of the kit INDICATIONS OF POSSIBLE DETERIORATION OF KIT REAGENT 6 1 The presence of abnormal particulate matter in any of the reagents 6 2 A shift in the
26. 0 x 100 CPM de l talon 0 CPM de NSB 13 4 En utilisant du papier quadrill semi logarithmique ou logarithmique a deux cycles tracer le pourcentage B B pour les talons vasopressine axe vertical par rapport a la concentration axe horizontal 13 5 Tracer la droite de meilleur ajustement d un point a l autre 13 6 Interpoler les niveaux de vasopressine dans les chantillons inconnus d apr s le 24 trac 13 7 Calculer la valeur de la vasopressine comme il convient Par exemple si 2 ml de plasma ont t extraits et reconstitu s 0 5 ml diviser par quatre Si 2 ml de plasma ont t extraits et reconstitu s 1 0 ml diviser par deux 13 8 Si la valeur d un chantillon est sup rieure a l talon le plus lev il doit tre extrait une nouvelle fois avec un volume de plasma inf rieur et ou reconstitu avec un volume de BSA borate 1 sup rieur 13 9 S il reste un extrait il peut galement tre redilu et dos nouveau 13 10 Calculer la liaison maximale en divisant le CPM de l talon 0 par les num rations totales moyennes obtenues dans les tubes de num ration totale TABLEAU II Donn es d chantillon RIAVASOPRESSINE de DiaSorin Pourcentage Conc Conc Tube CPM CPM CPM li Pourcentagegraphe finale double moyen corrig B T B Bo pg ml pg ml Num tot 5 841 5917 5 992 NSB 192 199 3 4 205 talon 0 2970 2 872 2673 48 5 100 2774 talons pg ml A 5 2 537 2 566 2 367
27. 1976 European Communities Hazardous Substance Risk Phrases Council Directive 1999 45 EC R20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed R32 Contact with acids liberates very toxic gas 28 After contact with skin wash immediately with plenty of water REAGENTS CONTAINING THIMEROSAL Some reagents in this kit contain thimerosal which contains a mercury compound Disposal of elemental mercury inorganic mercury mercury oxides and mercury compounds should be done in strict compliance with all local state and federal regulations WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause cancer REAGENTS CONTAINING IODINE 125 This kit contains radioactive material which does not exceed 1 uCi 37 kBq of iodine 125 Appropriate precautions and good laboratory practices should be used in the storage handling and disposal of this material For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a general license This radioactive material may be received acquired possessed and used only by physicians veterinarians in the practice of veterinary medicine clinical laboratories or hospitals and only for in vitro clinical or laboratory tests not involving internal or external administration of the material or the radiation therefrom to human beings or animals Its receipt acquisition possession use and transfer are subject to the regulations and the general license of
28. 328 1482 In the United Kingdom Call 44 118 9364200 FAX 44 118 9792061 Phone 651 439 9710 FAX 651 779 7847 10397 PRINTED IN U S A
29. A Borat geben und mischen um 10 pg ml zu erhalten 500 ul von 10 pg ml Kalibrator zu 500 ul 196 BSA Borat geben und mischen um 5 pg ml zu erhalten Der DiaSorin Vasopressin Kalibrator wurde gegen die WHO Pr paration 77 501 kalibriert Ein Empfindlichkeitsvergleich mit anderen Produkten oder Verfahren sollte auf der Grundlage dieses Referenzstandards erfolgen Die Kalibratoren des Kits sind mit Patientenproben austauschbar wenn sie mit Reagenzien verwendet werden und dieser diagnostische in vitro Test wie empfohlen durchgef hrt wird 4 3 Vasopressin Antiserum lyophilisiertes Reagenz Guineaschwein anti Vasopressin Serum wird in thimerosalhaltigem BSA Boratpuffer verd nnt Das Fl schchen mit 7 ml destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten lang bis zur vollstandigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 33 4 4 25l Vasopressin lyophilisiertes Reagenz Lys Vasopressin wird mit Jod 125 markiert und in thimerosalhaltigem BSA Borat EDTA Puffer verd nnt Das Flaschchen mit 7 ml destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten bis zur vollstandigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 5 Pr zipitierender Komplex GAGP PPT lyophilisiertes Reagenz Normales Guineaschweinserum vorprazipitiert mit Ziege anti Guineaschwein Serum und Polyethylenglykol PEG wird in BSA Boratpuffer unter Zugabe von Konservierungsmitteln verd nnt Das Fl schchen mit 35
30. L La fase di estrazione e di concentrazione consente di riportare valori che diversamente sarebbero inferiori alla sensibilit dell analisi valori ottenuti da DiaSorin sono conformi con quelli ottenuti da altri ricercatori In uno studio in cui sono stati utilizzati 31 soggetti normali il range normale di vasopressina nel plasma stato stabilito essere 1 4 1 0 pg mL 16 CARATTERISTICHE SPECIFICHE DELLE PERFORMANCE 16 1 PRECISIONE Variazione intra analisi valori pg mL Numero Valore medio C V campione BASSO 0 54 11 2 MEDIO A 1 38 6 1 ALTO 41 5 2 25 5 4 Variazione intra analisi valori pg mL Numero Valore medio C V campione BASSO 5 0 0 14 2 8 ALTO 40 1 78 4 4 16 2 Accuratezza l accuratezza dell analisi stata verificata mediante test di diluizione e test di recupero LINEARIT PARALLELISMO STUDIO DI DILUIZIONE SERIALE DI TRE CAMPIONI VALORI PG ML Numero Non diluito 1 2 1 4 campione gt 0 58 RECUPERO ATTENDIBILIT VALUES PG ML Valore di fondo Calibratore Valore Valore Percentuale aggiunto previsto misurato di recupero d 90 102 85 93 e 11 5 0 16 3 Sensibilit Analitica La quantit minima rilevabile se definita come concentrazione apparente a tre deviazioni standard dai conteggi a legame massimo di 2 5 pg mL Se un campione d una lettura inferiore a 2 5 pg mL prima della correzione del fattore di diluizione questo non pu essere dis
31. MAN SOURCE MATERIAL Treat as potentially infectious Each serum plasma donor unit used in the preparation of this product has been tested by a U S FDA approved method and found non reactive for the presence of HBsAg antibody to HCV and antibody to HIV 1 2 While these methods are highly accurate they do not guarantee that all infected units will be detected This product may also contain other human source material for which there is no approved test Because no known test method can offer complete assurance that hepatitis B virus HBV hepatitis C virus HCV Human Immunodeficiency Virus HIV or other infectious agents are absent all products containing human source material should be handled in accordance with good laboratory practices using appropriate precautions as described in the U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed May 1999 or current edition REAGENTS CONTAINING SODIUM AZIDE CAUTION Some reagents in this kit contain sodium azide Sodium azide may react with lead or copper plumbing to form highly explosive metal azides On disposal flush with a large volume of water to prevent azide build up For further information refer to Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts in the Manual Guide Safety Management No CDC 22 issued by the Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA
32. Reconstituer le flacon avec 7 ml d eau purifi e et laisser reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu Bien m langer avant utilisation 4 4 Vasopressine l r actif lyophilis La lysine8 vasopressine est marqu e l iode 125 et dilu e dans un tampon BSA borate EDTA qui contient du thiomersal Reconstituer le flacon avec 7 ml d eau purifi e et laisser reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu Bien m langer avant utilisation 17 4 5 Complexe pr cipitant GAGP PPT r actif lyophilis Du s rum de cochon d Inde normal pr alablement pr cipit avec du s rum anti cochon d Inde de ch vre et du poly thyl ne glycol PEG est dilu dans un tampon BSA borate contenant des conservateurs Reconstituer le flacon avec 35 ml d eau purifi e bien m langer jusqu ce que la suspension soit homog ne puis laisser reposer pendant 30 minutes au moins temp rature ambiante en remuant de temps en temps 4 6 Plasma de contr le vasopressine r actif lyophilis Le s rum humain est dop si besoin est avec la quantit ad quate d arginine vasopressine afin d obtenir une concentration comprise dans l intervalle sp cifi De l azide de sodium est ajout comme conservateur Reconstituer chaque flacon avec 2 5 ml d eau purifi e et laisser reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu M langer soigneusement et traiter le plasma de contr
33. VERTISSEMENT ce produit contient un produit chimique connu dans l tat de Californie comme tant canc rig ne R ACTIFS CONTENANT DE L IODE 125 Cette trousse contient un produit radioactif qui ne d passe pas 1 uCi 37 kBq d iode 125 Les pr cautions appropri es et les bonnes pratiques de laboratoire doivent tre utilis es pour la conservation la manipulation et la mise au rebut de ce produit Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence g n rale Ce produit radioactif peut tre re u acquis d tenu et utilis uniquement par des m decins des v t rinaires pratiquant la m decine v t rinaire des laboratoires cliniques et des h pitaux et uniquement pour des analyses cliniques ou de laboratoire in vitro n impliquant pas l administration interne ou externe du produit ni par rayonnement l homme ou l animal Sa r ception son acquisition sa d tention son utilisation et son transfert sont sujets aux r glementations et la licence g n rale de l US Nuclear Regulatory Commission de l tat avec lequel la Commission a conclu un accord pour l exercice de l autorit r glementaire 1 Le produit radioactif doit tre conserv un endroit d sign L acc s aux produits radioactifs doit tre limit au personnel autoris uniquement Ne pas pipeter des solutions radioactives avec la bouche Ne pas manger ni boire dans les zones de travail radioactives En
34. Vasopressin 125 RIA Kit For the quantitative determination of human arginine vasopressin AVP ADH Instruction Manual Manuel d Instructions Testanleitung Manuale di Istruzioni Catalog No REF KAT NR Numero di Catalogo 23065 DiaSorin Stillwater Minnesota 55082 0285 U S A TABLE OF CONTENTS English EAE 22 iaia Page 1 ECT MERIT EE 15 M 31 Italiano VASOPRESSIN RADIOIMMUNOASSAY 1 INTENDED USE FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE This kit is intended for the quantitative determination of human arginine vasopressin AVP ADH in plasma or other samples by radioimmunoassay RIA following an extraction using ODS silica 2 SUMMARY AND EXPLANATION Arginine vasopressin AVP is a cyclic nine amino acid peptide The structure of AVP is very similar to that of oxytocin differing in only two amino acids Due to its powerful antidiuretic actions vasopressin is also known as the antidiuretic hormone ADH Basically AVP acts on the collecting tubule of the kidney causing an increase in permeability to water and urea but not to larger molecules AVP also possesses neurotransmitter functions as well as releasing factor and peripheral humoral functions For many years it has been known that AVP is produced in two locations in the hypo thalamus the supraoptic and the paraventricular nuclei AVP is transported from the supraoptic nucleus via axons through the neurohypo physeal tract to the posteri
35. al punto 9 4 al punto 9 6 Risciacquare la colonna con 20 mL di acido acetico al 4 Ripetere le operazioni dal punto 9 3 al punto 9 6 Raccogliere l eluato in 16 provette da 100 mm eluendo il peptide con 3 mL di azoto Spingere lentamente in modo che l azoto rimanga in contatto con silice ODS per almeno 3 minuti Ripetere le operazioni dal punto 9 4 al punto 9 6 Aggiungere 1 mL di azoto per garantire la completa eluizione Far evaporare l eluato di metanolo fino ad asciugatura completa in un bagno di acqua a 37 C usando un getto di aria aria compressa o azoto campioni devono essere completamente asciutti Non lasciare nel bagno di acqua a 37 pi del tempo richiesto per l asciugatura Ricostituire il campione con 0 5 mL di tampone BSA borato 1 se si ritiene che un campione sia elevato diluirlo in questa operazione con una quantit maggiore di BSA borato 1 Agitare nel Vortex e porre a 37 C per dieci minuti per garantire la ricostituzione del campione asciutto Agitare nel Vortex dopo l incubazione 52 Analizzare due serie da 200 uL mediante analisi radioimmunologica TOGLIERE IL SEP PAK DALL ESTREMIT DELLA SIRINGA PRIMA DI TOGLIERE IL PISTONE PER EVITARE DI CONTAMINARE IL CONTENUTO DELLA SIRINGA CON IL LIQUIDO CONTENUTO NEL SEP PAK 10 PROCEDURA DELL ANALISI 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 8 10 9 Ricostituire i reagenti liofilizzati e lasciare scongelare completamente eventual
36. alibrators pg mL A 5 2 537 2 566 2 367 88 6 2 595 B 10 2 374 2 324 2 125 79 5 2 274 C 20 1 772 1 779 1 580 59 1 1 785 D 40 1 200 1 234 1 035 38 7 1 268 E 80 819 819 620 23 2 818 Unknown Samples 1 2 591 2 556 2 357 88 2 5 5 1 4 2 521 2 1 265 1 297 1 098 41 1 36 5 9 1 1 329 Typical sample data and a calibrator curve are shown in TABLE Il and FIGURE 1 this information is for reference only and should not be used for the calculation of any value 10 VASOPRESSIN SAMPLE CALIBRATOR CURVE B B 100 E EFFHHE ECERHHI 80 70 60 50 40 30 20 FIGURE 1 Reduction Data The DiaSorin QC lab uses a smoothed spline curve fit 14 LIMITATIONS OF THE PROCEDURE 14 1 Care must be taken so that all samples are extracted uniformly 14 2 Counting times should be sufficient to prevent the introduction of statistical error in counting for example accumulation of 2 000 CPM will yield 5 error 10 000 CPM will yield 1 error 11 15 EXPECTED VALUES Normal Range Each laboratory should establish its own normal range In male and female specimens n 27 DiaSorin determined the mean vasopressin value to be 1 4 pg mL with a normal range of ND 4 7 pg mL Normal values were calculated by extracting 2 mL of EDTA plasma The final answers were divided by four to give the normal range of ND 4 7 pg mL The extraction and concentration step allows reporting of values that would otherwise be les
37. ato da sete eccessiva polidipsia e dal passaggio di grandi quantit di urina diluita poliuria causato da una inadeguata produzione di AVP Il diabete insipido centrale pu essere o di natura familiare o idiopatica e pu colpire sia uomini che donne di qualsiasi et AI contrario il diabete insipido nefrogenico causato dalla mancata risposta dei tubuli renali alla vasopressina rendendo i tubuli incapaci di riassorbire l acqua Il diabete insipido nefrogenico che ereditario in genere colpisce gli uomini normalmente 46 si presenta nell infanzia ed caratterizzato da livelli normali di AVP in circolo 49 1 SIADH si riferisce ad un rilascio di vasopressina non adeguato per una bassa osmolalit del siero 5 Pu essere causata da varie condizioni fra cui malattie polmonari trauma cranico ferita o intervento chirurgico infezione locale e tumore Certi neoplasmi in particolare il carcinoma broncogeno producono AVP o peptidi AVP simili Questa sindrome di produzione ectopica di vasopressina generalmente caratterizzata da un aumento decisamente elevato di livelli di AVP L intossicazione psicogena da acqua causata da un consumo eccessivo e compulsivo di acqua Non il risultato di un disturbo fisico piuttosto come indica il nome l intossicazione psicogena da acqua un disturbo comportamentale 3 PRINCIPIO DELL ANALISI L analisi RIA DiaSorin AVP consta di 2 procedure La prima prevede l estrazione dei cam
38. aventricolare L AVP viene trasportata dal nucleo sopraottico mediante assoni attraverso il tratto neuroipofisario al pituitario posteriore dove gli assoni terminano come bottoni terminali sui capillari da questa regione che avviene la secrezione di AVP nella circolazione periferica probabilmente in associazione con molecole di trasporto di proteine note come neurofisina probabile che l AVP dal nucleo paraventricolare sia secreta nei capillari del sistema portale ipofisario ipotalamico e inviata al pituitario anteriore dove potrebbe stimolare il rilascio di adrenocorticotropina ACTH noto che vari stimoli osmotici e non osmotici provocano il rilascio di AVP Esiste un sistema di feedback negativo che comprende il rene il sistema nervoso centrale e il meccanismo della sete questo sistema favorisce la regolazione della concentrazione dei liquidi corporei Il rilascio di AVP inoltre condizionato da vari altri fattori fra cui stress emotivo postura volume ematico temperatura e molti agenti farmacologici Sembra che l alcool inibisca lievemente la secrezione di AVP 57 L analisi di AVP utilizzata negli studi che riguardano diabete insipido sindrome di inadeguata secrezione di ADH SIADH sindrome di produzione di AVP ectopica e intossicazione psicogena da acqua 8 L analisi RIA per AVP molto utile nella distinzione fra diabete insipido centrale da diabete insipido nefrogenico Il diabete insipo centrale che contrassegn
39. c 2 0 ml d eau purifi e m langer et laisser reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu Bien m langer avant utilisation Afin d obtenir la courbe d talonnage compl te effectuer des dilutions en s rie en ajoutant 500 ul d talon 500 ul de BSA borate 1 et cr er ainsi des talons de 40 20 10 et 5 pg ml Ces valeurs varient en fonction de la concentration exacte du lot d talons Ajouter 500 ul d talon 80 pg ml 500 ul de BSA borate 1 et m langer pour obtenir 40 pg ml Ajouter 500 ul d talon 40 pg ml 500 ul de BSA borate 1 et m langer pour obtenir 20 pg ml Ajouter 500 ul d talon 20 pg ml 500 ul de BSA borate 1 et m langer pour obtenir 10 pg ml Ajouter 500 ul d talon 10 pg ml 500 ul de BSA borate 1 et m langer pour obtenir 5 pg ml L talon vasopressine de DiaSorin a t calibr selon la pr paration 77 501 de l Organisation mondiale de la sant OMS Toute comparaison de sensibilit avec d autres produits ou proc dures de dosage doit tre effectu e selon ce standard de r f rence L talon d montre sa commutabilit avec les chantillons des patients lorsqu il est utilis avec les r actifs et selon le mode d emploi de ce dosage diagnostique in vitro comme recommand 4 3 Antis rum vasopressine r actif lyophilis Du s rum anti vasopressine de cochon d Inde est dilu dans le tampon BSA borate contenant du thiomersal
40. ct with skin wash immediately with plenty of water Dopo il contatto con la pelle lavare immediatamente con abbondante acqua REAGENTI CONTENENTI TIMEROSAL Alcuni reagenti di questo kit contengono timerosal in cui presente un composto di mercurio Lo smaltimento del mercurio allo stato di elemento inorganico di ossidi di mercurio e composti di mercurio deve essere effettuato in piena conformit con tutte le normative locali statali e federali AVVERTENZA Questo prodotto contiene un prodotto chimico noto nello Stato della California per provocare cancro REAGENTI CONTENENTI IODIO 125 Questo kit contiene materiale radioattivo che non supera 1uCi 37kBq di iodio 125 Adottare precauzioni adeguate e le buone pratiche di laboratorio per la conservazione la manipolazione e lo smaltimento di questo materiale Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una licenza generale Questo materiale radioattivo pu essere consegnato acquisito conservato e usato unicamente da personale medico veterinari abilitati alla pratica di medicina veterinaria laboratori clinici o ospedali e unicamente per test in vitro clinici o di laboratorio che non prevedano la somministrazione interna o esterna del materiale o di radiazioni da esso derivanti su persone o animali L acquisto il possesso la conservazione l uso e il trasferimento sono soggetti alle norme e alla licenza generale della Nuclear Regulatory Commission statu
41. e et des tubes de num ration totale pendant le temps n cessaire a l obtention d une exactitude statistique consulter le paragraphe Limitations de la Proc dure COMMENTAIRES SUR LA PROCEDURE 11 1 Doser tous les chantillons en double pour garantir la validit des valeurs obtenues 11 2 Ajouter chaque aliquote de r actif au tiers inf rieur du tube a essai pour garantir le m lange complet des r actifs 11 3 Certains fabricants vendent des tubes jetables en verre borosilicat qui donnent des liaisons non sp cifiques lev es 11 4Si le surnageant est aspir dans le pr cipit prendre soin de ne pas remuer le pr cipit 11 5 Pour surveiller compl tement la pr cision constante d un dosage RIA il faut parfois v rifier des facteurs suppl mentaires DiaSorin sugg re de v rifier les param tres suivants afin d assurer la constance des performances de la trousse a Activit totale b Liaison maximale Coups moyens par minute CPM du tube de l talon 0 CPM moyen des tubes de num ration totale c Liaison non sp cifique CPM moyen du tube NSB CPM moyen des tubes de num ration totale d Pente de la courbe d talonnage 23 Par exemple surveiller les points d inhibition de 80 50 et 20 de la courbe d talonnage g 1118x 10 rayon en cm tr min 12 CONTROLE QUALIT Chaque laboratoire doit inclure au moins deux chantillons de contr le dans chaque dosage pour garantir la validit de leurs r sultats
42. es Nullkalibrators durch die in den Totalaktivit t R hrchen erhaltenen Gesamtzahlungen dividiert wird TABELLE Il DiaSorin Vasopressin RIA Probendaten Prozent Kurven End R hrchen Doppelte Durchschn Korrigierte gebunden Prozent konz konz CPM CPM CPM B T B Bo pg ml pg ml Gesamtz hlung 5 841 5 917 5 992 NSB 192 199 3 4 205 Nullkalibrator 2 970 2 872 2 673 48 5 100 2 774 Kalibratoren pg ml A 5 2 537 2 566 2 367 88 6 2 595 B 10 2 374 2 324 2 125 79 5 2 274 C 20 1 772 1 779 1 580 59 1 1 785 D 40 1 200 1 234 1 035 38 7 1 268 E 80 819 819 620 23 2 818 Unbekannte Proben 1 2 591 2 556 2 357 88 2 5 5 1 4 2 521 2 1 265 1 297 1 098 41 1 36 5 9 1 1 329 Typische Probendaten und eine Eichkurve werden in TABELLE II und ABBILDUNG 1 gezeigt diese Informationen dienen nur als Beispiel und sollten nicht zur Berechnung von Probenwerten verwendet werden 41 VASOPRESSIN BEISPIELKALIBRATORKURVE ABBILDUNG 1 Daten nach der Datenreduktion Das Qualit tskontrollabor von DiaSorin verwendet eine gegl ttete Spline Kurvenanpassung 14 GRENZEN DES VERFAHRENS 14 1 Das Verfahren muss vorsichtig durchgef hrt werden so dass alle Proben einheitlich extrahiert werden 14 2 Die Z hlzeiten sollten ausreichend lang sein um das Auftreten von statistischen Fehlern bei der Z hlung zu vermeiden 2 000 CPM ergeben z B 5 Fehler 10 000 CPM ergeben 1 Fehler 42 15 ERWARTETE WERTE Normalbereich Jedes Labor s
43. h bei der Unterscheidung von zentralem Diabetes insipidus und nephrogenem Diabetes insipidus Der zentrale Diabetes insipidus der durch UbermaBig starken Durst Polydipsie und die Passage von groBen Mengen verd nnten Urins Polyurie gekennzeichnet ist wird durch unzureichende AVP Produktion hervorgerufen Zentraler Diabetes insipidus kann entweder familiar bedingt oder idiopathisch sein und kann sowohl m nnliche als auch weibliche Personen jeden Alters betreffen Dagegen wird nephrogener Diabetes insipidus dadurch hervorgerufen dass die Nierentubuli nicht auf Vasopressin reagieren wodurch sie unf hig zur Reabsorption von Wasser werden Nephrogener Diabetes insipidus der erblich bedingt ist im Allgemeinen m nnliche Personen betrifft und normalerweise in der fr hen Kindheit auftritt ist durch normale zirkulierende AVP Konzentrationen charakterisiert 4 1 SIADH bezieht sich auf eine unangemessene Freisetzung von Vasopressin bei geringer Serum Osmolalitat 5 Es kann durch zahlreiche Umst nde verursacht werden darunter Lungenerkrankungen Sch deltrauma Verletzung oder chirurgischer Eingriff lokale Infektionen und Krebs Bestimmte Neoplasmen vor allem Bronchialkarzinome produzieren AVP oder AVP hnliche Peptide Dieses Syndrom der ektopischen Vasopressinproduktion ist im Allgemeinen durch eine anhaltend starke Erh hung der AVP Konzentrationen charakterisiert Die psychogene Wasserintoxikation wird durch zwanghaften und berm
44. hrung im Radioimmunoassay testen TESTVERFAHREN 10 1 Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Reagenzien vollst ndig auftauen lassen Die Reagenzien d rfen maximal auf 20 25 C erw rmt werden Alle Reagenzien vor dem Gebrauch leicht mischen 10 2 Markierte 12 x 75 mm Einwegr hrchen in Zweierreihen aufstellen siehe Testplan auf der R ckseite 10 3 Reagenzien wie folgt zugeben a R hrchen f r die Gesamtz hlung Bis Schritt 5 beiseite legen b NSB R hrchen 200 ul 1 BSA Borat c Nullkalibrator 200 ul 1 BSA Borat 100 pl Vasopressin Antiserum d Kalibratoren 200 ul Vasopressin Kalibrator 38 100 pl Vasopressin Antiserum 11 e Extrahierte Kontrolle und unbekannte Proben 200 ul Extrakt 100 ul Vasopressin Antiserum 10 4 Die R hrchen vorsichtig ohne Schaumbildung vortexen und 18 24 Stunden lang bei 2 8 C inkubieren 10 5 100 yl l Vasopressin zu allen R hrchen hinzugeben 10 6 Die R hrchen vorsichtig ohne Schaumbildung vortexen und 18 24 Stunden lang bei 2 8 C inkubieren 10 7 Den GAGP PPT Komplex gr ndlich mischen und 500 ul zu allen R hrchen auBer den Totalaktivit t R hrchen hinzugeben 10 8 Die R hrchen vorsichtig ohne Schaumbildung vortexen und 15 25 Minuten bei 20 25 C inkubieren 10 9 Die R hrchen 20 Minuten lang mit 760 x g bei 20 25 C zentrifugieren 10 10 Die berst nde durch mindestens 2 Minuten langes Umdrehen der R hrchen sofort aus allen R hrchen au er den Totalakt
45. i reagenti congelati Evitare che i reagenti raggiungano temperature superiori a 20 25 C Mescolare lentamente tutti i reagenti prima dell uso Preparare ed etichettare due serie di 12 provette monouso da 75 mm in base allo Schema di analisi sul retro della copertina Aggiungere i reagenti come indicato di seguito a Provette per il conteggio totale Lasciare da parte fino al punto 4 b Provette per legame non specifico NSB 200 uL di BSA borato 1 c Calibratore 0 200 uL di BSA borato 1 100 pL di antisiero vasopressina d Calibratori 200 uL di calibratore vasopressina 100 pL di antisiero vasopressina e Controllo estratto e campioni non noti 200 uL di estratto 100 uL antisiero vasopressina Agitare lentamente le provette nel Vortex senza formare schiuma e lasciare in incubazione per 18 24 ore a 2 8 C Aggiungere 100 uL di 251 vasopressina in tutte le provette Agitare lentamente le provette nel Vortex senza formare schiuma e lasciare in incubazione per 18 24 ore a 2 8 C Mescolare vigorosamente il complesso GAGP PPT ed aggiungere 500 uL in tutte le provette eccetto le provette per il conteggio totale Agitare lentamente le provette nel Vortex senza formare schiuma e lasciare in incubazione per 15 25 minuti a 20 25 C Centrifugare le provette per 20 minuti a 760 x g a 20 25 C 10 10 Far decantare immediatamente i liquidi superficiali da tutte le provette eccetto le 53 11 provette per il conteggio totale capovolge
46. ial oder dessen Strahlung keinen Menschen oder Tieren intern oder extern verabreicht wird empfangen erworben besessen und verwendet werden Entgegennahme Erwerb Besitz Verwendung und Weitergabe des Materials unterliegen den Vorschriften und der Generallizenz der US Nuclear Regulatory Commission bzw des Staates mit dem diese Beh rde ein Abkommen zur Aus bung ihrer berwachungsfunktion abgeschlossen hat 35 1 Die Lagerung des radioaktiven Materials ist auf einen speziell daf r bestimmten Bereich zu beschr nken Der Zugang zu radioaktivem Material ist nur befugten Personen zu gestatten Radioaktives Material nicht mit dem Mund pipettieren Im vorgesehenen radioaktiven Arbeitsbereich nicht essen oder trinken Versch ttetes Material aufwischen und den Bereich anschlieBend mit alkalischem Reinigungsmittel oder radiologischer Dekontaminationsl sung wischen Alle benutzten Glasbeh lter gr ndlichst mit Wasser sp len bevor sie zusammen mit anderen Laborbeh ltern aus Glas ausgewaschen werden Fir Arzte oder Einrichtungen die im Rahmen einer Sondergenehmigung Radioisotope erhalten gilt Folgendes Entgegennahme Gebrauch Weitergabe und Entsorgung radioaktiven Materials unterliegen den Vorschriften und Bedingungen der jeweiligen Sondergenehmigung VORSICHT Dieses Produkt enth lt eine Chemikalie die nach Angaben des US Bundesstaates Kalifornien krebserregend ist WICHTIGER HINWEIS Die auf der Packungsbeilage angegebene Radioakti
47. ibratore controllo o campione non noto per il CPM corretto del calibratore 0 SEM del calibratore o campione non noto CPM di NSB CPI del calibratore 0 CPM di NSB x 100 13 4 Utilizzando carta millimetrata per modello log logit o semi logaritmica a due cicli tracciare la percentuale di B B per i calibratori della vasopressina asse verticale rispetto alla concentrazione asse orizzontale 13 5 Tracciare una linea di migliore interpolazione fra i punti 13 6 Interpolare i livelli di vasopressina nei campioni non noti 13 7 Calcolare il valore di vasopressina Ad esempio se sono stati estratti 2 mL di plasma e ricostituiti a 0 5 mL dividere per quattro se sono stati estratti 2 mL di plasma e ricostituirli a 1 0 mL dividere per due 13 8 Se un campione d una lettura maggiore rispetto al calibratore superiore si deve eseguire nuovamente l estrazione del campione con un volume inferiore di plasma e o ricostituire il campione con un volume superiore di BSA borato 1 13 9 Se dovesse rimanere dell estratto potr essere diluito e analizzato nuovamente 13 10 Calcolare il legame massimo dividendo il CPM del calibratore 0 per la media dei conteggi totali ottenuta nelle provette dei conteggi totali 55 TABELLA Il Dati campione DiaSorin Vasopressina RIA Percentuale Conc Conc Provetta CPM CPM CPM legame Percentuale Graf finale in duplicato medio corretto B T B Bo pg mL pg mL Conteggio tot 5 841 5 917 5 992
48. ibrazione mentre il materiale informativo della confezione indica la radioattivit teorica del kit 6 INDICAZIONI DI POSSIBILE DETERIORAMENTO DEI REAGENTI DEL KIT 6 1 La presenza di particolato anomalo in uno qualsiasi dei reagenti 6 2 Uno sfasamento nella pendenza o posizione della curva di calibrazione rispetto a quella che normalmente si ottiene 6 3 Una diminuzione del legame massimo 6 4 Un legame altamente non specifico 7 RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Sono richiesti due millilitri di plasma EDTA per l estrazione Prelevare il sangue mediante venopuntura in una provetta di vetro da 5 o 10 mL sotto vuoto L EDTA 7 2 mg 5 mL di sangue usato come anticoagulante Centrifugare subito er minuti a 760 x g Separare il plasma dalle cellule e disporlo nelle provette di conservazione La vasopressina si dimostrata stabile a temperatura ambiente per diverse ore Per conservazione prolungata congelare a 15 C o a temperatura inferiore Tutto il materiale in plastica oggetti in vetro o altro materiale che viene a contatto con i campioni deve essere completamente esente da qualsiasi contaminazione NOTA E stato osservato che si possono avere tempi inferiori di recupero quando si usano plasma o siero contenenti eparina Inoltre il plasma eparinizzato pu saltuariamente otturare la colonna Sep Pak 8 ATTREZZATURE E MATERIALI NECESSARI NON FORNITI IN DOTAZIONE 8 1 Provette in vetro borosilicato monouso 12 x 75 mm 8 2 Centrifuga a
49. ien d rfen nach dem Verfallsdatum nicht verwendet werden Bei der Rekonstitution den Inhalt der Fl schchen vorsichtig mischen um Schaumbildung zu vermeiden Reagenzien aus verschiedenen Chargen d rfen nicht vermischt werden 4 4 Vasopressin 1 BSA Boratpuffer lyophilisiertes Reagenz 1 BSA Boratpuffer enthalt Thimerosal als Konservierungsmittel Das Flaschchen mit 35 ml destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten lang bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 2 Arginin Vasopressin Kalibrator lyophilisiertes Reagenz Gereinigtes Arginin Vasopressin wird bei einer Nominalkonzentration von 80 pg ml in thimerosalhaltigem BSA Boratpuffer verd nnt Jeder Charge sind genaue Werte zugeteilt Das Fl schchen mit 2 0 ml destilliertem Wasser rekonstituieren mischen und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen Um die vollst ndige Eichkurve zu erhalten Reihenverd nnungen durch Zugabe von 500 yl Kalibrator zu 500 ul 1 BSA Borat vornehmen um Kalibratoren mit 40 20 10 und 5 pg ml zu erhalten Diese Werte schwanken je nach der genauen Konzentration der Kalibrator Charge 500 ul von 80 pg ml Kalibrator zu 500 ul 196 BSA Borat geben und mischen um 40 pg ml zu erhalten 500 ul von 40 pg ml Kalibrator zu 500 ul 196 BSA Borat geben und mischen um 20 pg ml zu erhalten 500 ul von 20 pg ml Kalibrator zu 500 ul 196 BS
50. ination des Spritzeninhalts mit der in der Sep Pak S ule enthaltenen Fl ssigkeit zu vermeiden 37 10 9 10 2 ml EDTA Plasma oder Kontrollplasma mit 200 ul 1 M HCI ans uern Der pH Wert sollte bei 3 4 liegen Die Probe in die Spritze ziehen und langsam Uber einen Zeitraum von einer Minute durch die Saule pressen 9 11 Die Schritte 9 4 bis 9 6 wiederholen 9 12 Die Saule mit 20 ml 4 iger Essigsaure sp len 9 13 Die Schritte 9 3 bis 9 6 wiederholen 9 14 Das Eluat durch Elution des Peptids mit 3 ml Methanol in 16 x 100 mm R hrchen sammeln Langsam dr cken so dass das Methanol mindestens 3 Minuten lang in Kontakt mit der ODS Silicas ule bleibt 9 15 Die Schritte 9 4 bis 9 6 wiederholen 9 16 Zus tzlich mit 1 ml Methanol eluieren um eine vollst ndige Elution sicherzustellen 9 17 Das Methanol Eluat in einem Wasserbad bei 37 C mit einem Luftstrahl Druckluft oder mit Stickstoff zu trockenem Methanol verdampfen lassen Die Proben m ssen vollstandig getrocknet sein Die Proben nicht l nger als zum Trocknen erforderlich in dem 37 warmen Wasserbad belassen 9 18 Die Probe mit 0 5 ml 196 BSA Boratpuffer rekonstituieren Eine Probe bei der ein erh hter Wert erwartet wird kann in diesem Schritt mit mehr 1 BSA Borat verd nnt werden Vortexen und 10 Minuten lang in ein 37 C warmes Wasserbad stellen um die Rekonstitution der getrockneten Probe sicherzustellen Nach der Inkubation vortexen 9 19 200 pl in doppelter Ausf
51. inute CPM of Calibrator 0 Tube Average CPM of Total Count Tubes g 1118 x 10 radius in cm rpm c Nonspecific Binding Average CPM of NSB Tube Average CPM of Total Count Tubes d Slope of Calibrator Curve For example monitor the 80 50 and 20 suppression points of the calibrator line 12 QUALITY CONTROL Each laboratory should include at least two control samples in every assay to ensure the validity of each assay s results A mean and standard deviation should then be determined for each control using a minimum of ten assays An acceptable range of values may then be obtained for these controls using 2 standard deviations of the values previously determined The DiaSorin Quality Control Laboratory has determined a range for the control included with this kit The range is printed on the control vial 13 CALCULATION OF RESULTS There are many methods in existence for calculating results of RIAs Each is based on obtaining a calibration curve by plotting the extent of binding against stated concentrations of the calibration calibrators This graph may be neither linear or logarithmic scale Each of these methods gives essentially the same values for controls and samples although certain assays may fit better into one particular method versus another The calculation method for the DiaSorin quality control laboratory is B Bo versus log concentration 13 1 Calculate the average CPM for each calibrator control and unkno
52. issolved mix thoroughly before using In order to obtain the entire calibrator curve make serial dilutions by adding 500 uL of calibrator to 500 uL of 1 BSA borate to give calibrators of 40 20 10 and 5 pg mL These values will vary according to the exact concentration of the calibrator lot Add 500 uL of 80 pg mL calibrator to 500 uL of 1 BSA borate and mix to give 40 pg mL Add 500 uL of 40 pg mL calibrator to 500 uL of 1 BSA borate and mix to give 20 pg mL Add 500 uL of 20 pg mL calibrator to 500 uL of 1 BSA borate and mix to give 10 pg mL Add 500 uL of 10 pg mL calibrator to 500 pL of 1 BSA borate and mix to give 5 pg mL The DiaSorin vasopressin calibrator has been calibrated against the World Health Organization WHO preparation 77 501 Any comparison of sensitivity with other products or procedures should be done with this reference standard The calibrator demonstrates commutability with patient samples when used with reagents and operating procedure of this in vitro diagnostic test as recommended 4 3 Vasopressin Antiserum lyophilized reagent Guinea pig anti vasopressin serum is diluted in BSA borate buffer containing thimerosal Reconstitute the vial with 7 mL of purified water and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using 4 4 1251 Vasopressin lyophilized reagent Lys8 Vasopressin is labeled with iodine 125 and diluted in BSA borate EDTA buffer
53. ivit t R hrchen dekantieren Bevor die R hrchen aufrecht gestellt werden die R hrchen auf Saugpapier abtupfen um alle eventuellen Tropfen von berst nden auf den R hrchen zu entfernen 10 11 Mit einem Gammaszintillationsz hler den Niederschlag in jedem R hrchen und den Totalaktivit t R hrchen f r eine ausreichend lange Zeit ausz hlen um statistische Genauigkeit zu erhalten Siehe Abschnitt Grenzen des Verfahrens ANMERKUNGEN ZUM VERFAHREN 11 1 Alle Proben in doppelter Ausf hrung testen um die gemessenen Werte zu best tigen 11 2 Jedes Aliquot des Reagenzes in das untere Drittel des Testr hrchens hinzugeben damit sich die Reagenzien vollst ndig vermischen 11 3 Die Einweg Borosilikatglasr hrchen einiger Hersteller f hren zu hohen nichtspezifischen Bindungen 11 4 Falls Sie es vorziehen den berstand vom Pr zipitat abzusaugen achten Sie dabei sorgf ltig darauf das Pr zipit t nicht aufzur hren 11 5 Um die konsistente Leistung eines Radioimmunoassays vollst ndig zu berwachen m ssen m glicherweise weitere Faktoren berpr ft werden DiaSorin empfiehlt die folgenden Parameter regelm ig zu berpr fen um eine konsistente Leistung des Kits sicherzustellen a Gesamtz hlung b Maximale Bindung Durchschnittliche Z hlungen pro Minute CPM des Nullkalibrator R hrchens Durchschnittliche CPM der Totalaktivit t R hrchen 39 g 1118 x 10 Radius in cm U min c Nichtspezifische Bind
54. liaison non sp cifique NSB 200 ul de BSA borate 1 c talon 0 200 ul de BSA borate 1 100 ul d antis rum vasopressine d talons 200 ul d talon vasopressine 100 ul d antis rum vasopressine e Contr les et chantillons inconnus extraits 200 ul d extrait 22 100 ul d antis rum vasopressine 11 10 4 M langer les tubes d licatement l aide du Vortex en vitant la formation de mousse et incuber pendant 18 24 heures entre 2 et 8 10 5 Ajouter 100 pl de vasopressine 125 dans tous les tubes 10 6 M langer les tubes d licatement l aide du Vortex en vitant la formation de mousse et incuber pendant 18 24 heures entre 2 et 8 10 7 M langer vigoureusement le complexe pr cipitant GAGP PPT et ajouter 500 ul dans tous les tubes l exception des tubes de num ration totale 10 8 M langer d licatement les tubes a l aide du vortex en vitant la formation de mousse et incuber pendant 15 a 25 minutes entre 20 et 25 C 10 9 Centrifuger les tubes pendant 20 minutes 760 x g entre 20 et 25 C 10 10 D canter imm diatement le surnageant dans tous les tubes a l exception des tubes de num ration totale en les renversant pendant 2 minutes minimum Placer les tubes sur du papier absorbant pour liminer toutes les gouttes de surnageant qui peuvent rester dessus avant de les replacer a l endroit 10 11 A l aide du compteur a scintillation gamma effectuer la num ration du pr cipit de chaque tub
55. ment U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 d mai 1999 ou derni re dition R ACTIFS CONTENANT DU NITRURE DE SODIUM ATTENTION Certains r actifs de cette trousse contiennent du nitrure de sodium Le nitrure de sodium peut r agir avec la plomberie en plomb ou en cuivre et former des azotures ultra explosifs Pour leur mise au rebut rincer grande eau pour emp cher l accumulation de nitrure Pour plus d informations consulter Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts dans le manuel Guide Safety 18 Management No CDC 22 publi par les Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 D claration des risques relatifs aux substances dangereuses des Communaut s europ ennes Directive du conseil 1999 45 EC R20 21 22 Nocif en cas d inhalation d ingestion et de contact avec la peau R32 Un contact avec les acides d gage des gaz tr s toxiques S28 Apr s un contact avec la peau laver imm diatement a grande eau REACTIFS CONTENANT DU THIMEROSAL Certains r actifs de cette trousse contiennent du thim rosal contenant un composant de mercure La mise au rebut du mercure l mentaire du mercure inorganique des oxydes de mercure et des composants de mercure doit tre effectu e en respectant scrupuleusement les r glementations locales nationales et f d rales A
56. n the 37 water bath longer than required to dry Reconstitute the sample with 0 5 mL of 196 BSA borate buffer A sample that is expected to be elevated can be diluted with more 196 BSA borate at this step Vortex and place at 37 for ten minutes to ensure reconstitution of the dried sample Vortex after incubation Assay 200 uL in duplicate in the radioimmunoassay ASSAY PROCEDURE 10 1 10 2 10 3 Reconstitute the lyophilized reagents and allow any frozen reagents to thaw completely Do not allow reagents to reach temperatures greater than 20 25 Mix all reagents gently before using Set up labeled 12 x 75 mm disposable tubes in duplicate according to the Scheme of the Assay on the back page Add reagents as follows a Total count tubes Set aside until step 5 b Nonspecific binding tubes NSB 200 uL of 1 BSA borate c Calibrator 0 200 uL of 1 BSA borate 100 pL of vasopressin antiserum 7 11 Remove the Sep Pak from the end of the syringe before removing the plunger to avoid contaminating the syringe contents with the fluid in the Sep Pak d Calibrators 200 uL of vasopressin calibrator 100 pL of vasopressin antiserum e Extracted control and unknown samples 200 uL of extract 100 pL of vasopressin antiserum 10 4 Vortex the tubes gently without foaming and incubate for 18 24 hours at 2 8 C 10 5 Add 100 uL of 251 vasopressin to all tubes 10 6 Vortex the tubes gently without foaming and inc
57. ndole per un periodo minimo di due minuti Asciugare le provette con carta assorbente per eliminare eventuali gocce di liquidi superficiali che possono essere rimaste sulle provette prima di riportarle in posizione verticale g 1118x 10 raggio in cm rpm 10 11 Usando un contatore ad emissione di scintille gamma contare il precipitato di ogni provetta e delle provette per il conteggio totale per un tempo sufficiente a raggiungere la precisione statistica vedere la sezione Limiti della procedura COMMENTI SULLA PROCEDURA 11 1 Analizzare tutti i campioni in duplice serie per garantire l affidabilit dei valori ottenuti 11 2 Aggiungere ogni aliquota di reagente al terzo inferiore della provetta di analisi al fine di garantire una miscela completa di reagenti 11 3 Alcune provette monouso determinano legami aspecifici elevati 11 4 Se si decide di aspirare il liquido superficiale dal precipitato fare attenzione a non smuovere quest ultimo 11 5 Per un monitoraggio completo della costanza di performance di un analisi RIA si possono controllare altri fattori DiaSorin consiglia di controllare i seguenti parametri per garantire prestazioni costanti del kit a Conteggi totali b Legame massimo Conteggi medi al minuto CPM delle provette del calibratore 0 CPM medio delle provette per il conteggio totale c Legame non specifico CPM medio della provetta NSB CPM medio delle provette per il conteggio totale d Pendenza della curva
58. ne vasopressine AVP est un peptide cyclique form de neuf acides amin s Sa structure est tr s similaire celle de l ocytocine la seule diff rence r sidant dans deux acides amin s De par ses propri t s antidiur tiques puissantes la vasopressine est galement connue sous le nom d hormone antidiur tique ADH Concr tement l AVP agit sur le tube collecteur du rein entrainant une augmentation de sa perm abilit l eau et l ur e mais pas des mol cules plus grosses L AVP agit galement comme neurotransmetteur et facteur de d clenchement et poss de des fonctions humorales p riph riques On sait depuis de nombreuses ann es que l AVP est produite dans deux zones de l hypothalamus les noyaux supra optique et paraventriculaire Elle est transport e depuis le noyau supra optique le long des axones et par le faisceau neurohypophysaire vers la neurohypophyse o les axones se terminent par des boutons synaptiques sur les capillaires C est de l que l AVP est s cr t e dans la circulation p riph rique elle est probablement associ e des mol cules porteuses de prot ines appel es neurophysines L AVP issue du noyau paraventriculaire est vraisemblablement s cr t e dans les capillaires du syst me porte hypothalamo hypophysaire avant d tre conduite a l ant hypophyse o elle peut stimuler la lib ration de corticotrophine ACTH Un certain nombre de stimuli osmotiques et non osmotiques sont connus pour pro
59. nitense dello stato con cui la Commissione ha stipulato un accordo per l esercizio dell autorit normativa 1 La conservazione del materiale radioattivo deve essere limitata ad un area specificatamente designata 2 L accesso ai materiali radioattivi deve essere limitato esclusivamente al personale autorizzato 3 Non usare la bocca per versare con la pipetta materiale radioattivo Non mangiare o bere nelle aree di lavoro designate per materiale radioattivo 5 Le zone dove possono verificarsi perdite devono essere pulite quindi lavate con detergente alcalino o soluzione per la decontaminazione radiologica Tutti gli oggetti in vetro usati devono essere accuratamente risciacquati con acqua prima di lavarli con altri oggetti in vetro del laboratorio Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una licenza specifica L acquisto l uso il trasferimento e lo smaltimento di materiali radioattivi sono soggetti alle norme e alle condizioni della licenza specifica AVVERTENZA Questo prodotto contiene un prodotto chimico noto nello Stato della California per provocare cancro ATTENZIONE La radioattivit stampata sulle istruzioni allegate alla confezione pu 50 gt essere leggermente diversa dalla radioattivit stampata sull etichetta della scatola sull etichetta della fiala di tracciante L etichetta sulla scatola e sulla fiala di tracciante indicano la quantit effettiva di radioattivit alla data di cal
60. ollte seinen eigenen Normalbereich ermitteln Bei Proben von m nnlichen und weiblichen Personen n 27 hat DiaSorin den mittleren Vasopressin Wert auf 1 4 pg ml bei einem ND Normalbereich von 4 7 pg ml festgelegt ND Non detectable nicht nachweisbar Die Normalwerte wurden durch Extraktion von 2 ml EDTA Plasma berechnet Die endgiltigen L6sungen wurden durch 4 dividiert um den Normalbereich von ND 4 7 pg ml zu erhalten Durch den Extraktions und den Konzentrationsschritt k nnen Werte berichtet werden die ansonsten unterhalb der Empfindlichkeit des Tests liegen w rden Die von DiaSorin erhaltenen Werte stimmen mit den von anderen Forschern ermittelten Werten Uberein Bei einer Untersuchung mit 31 normalen Versuchspersonen wurde der Normalbereich f r Plasma Vasopressin auf 1 4 1 0 pg ml festgelegt 16 TESTCHARAKTERISTIKA 16 1 Prazision Intra Testvarianz Werte pg ml Probennummer Mittelwert SA VK Niedrig Mittel Hoch Inter Testvarianz weg pg ml Niedrig 5 0 0 14 8 Hoch 40 1 78 4 4 16 2 Richtigkeit Die Richtigkeit des Assays wurde mit Hilfe des Verdunnungs und des Wiederfindungstests berpr ft Linearit t Parallelit t Serienverd nnung von 3 PRUSHSNBIOREA Werte pg ml 3 3 5 3 1 2 8 43 Wiederfindung Genauigkeit Werte pg ml Hinzugef gter Erwarteter Gemessener Prozent Hintergrund Kalibrator Wert Wert Wiederfindung Satz Nr 1 2 2 2 2 2 2 Satz Nr 2 1 9 1 9 1 9
61. on heparinisiertem Plasma oder Serum m glicherweise geringere Wiederfindungen erhalten werden AuBerdem kann durch heparinisiertes Plasma gelegentlich die Sep Pak S ule verstopft werden ZUSATZLICH BENOTIGTE GERATE UND MATERIALIEN 8 1 8 2 8 3 8 4 8 5 8 6 8 7 8 8 8 9 8 10 8 11 8 12 8 13 Einweg Borosilikatglasr hrchen 12 x 75 mm Zentrifuge f r 12 x 75 mm R hrchen temperaturgesteuert Gammaszintillationszahler zur Z hlung von Jod 125 Vortexer Pipettierger te a Auf die Abgabe von 100 pl und 200 ul kalibrierte Mikropipetten b Auf die Abgabe von 100 ul und 500 ul kalibrierte Multipipetten 12 ml Einwegspritzen Methanol Reagenzgrad oder besser 4 ige Essigs ure 1 M Salzs ure Luftdruck oder Stickstoffversorgung Wasserbad bei 37 C Einweg Glasr hrchen 16 x 100 mm Destilliertes Wasser EXTRAKTION VON PLASMA MIT ODS SILICASAULEN 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 Jede Sep Pak S ule an einem Spritzenverteiler befestigen 5 ml Methanol in jede Spritze geben Den Inhalt mit Hilfe des Spritzenkolbens durch die Spritze pressen Die Sep Paks entfernen Den Spritzenkolben aus den Spritzen entfernen Die Sep Paks wieder an den Spritzen anbringen 10 ml destilliertes Wasser in jede Spritze geben Die Schritte 9 3 bis 9 6 wiederholen Schritt 9 7 und anschlieBend die Schritte 9 3 bis 9 6 wiederholen Die Sep Pak S ule vom Spritzenende entfernen bevor der Kolben entfernt wird um eine Kontam
62. onservante Ricostituire la fiala con 35 mL di acqua purificata e lasciar riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso 47 4 2 Calibratore arginina vasopressina reagente liofilizzato L arginina vasopressina purificata a concentrazione nominale di 80 pg mL diluita in un tampone BSA borato contenente timerosal valori esatti vengono indicati per ogni lotto Ricostituire la fiala con 2 0 mL di acqua purificata mescolare e lasciare riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso Per ottenere l intera curva di calibrazione fare diluizioni in serie aggiungendo 500 pL di calibratore a 500 uL di tampone BSA borato 1 per ottenere calibratori di 40 20 10 e 5 pg mL questi valori variano in base alla concentrazione esatta del lotto del calibratore Aggiungere 500 di calibratore 80 pg mL a 500 uL di BSA borato 1 e mescolare per ottenere 40 pg mL Aggiungere 500 uL di calibratore 40 pg mL a 500 uL di BSA borato 1 e mescolare per ottenere 20 pg mL Aggiungere 500 di calibratore 20 pg mL a 500 uL di BSA borato 1 e mescolare per ottenere 10 pg mL Aggiungere 500 di calibratore 10 pg mL a 500 uL di BSA borato 1 e mescolare per ottenere 5 pg mL Il calibratore vasopressina DiaSorin stato calibrato in base alla preparazione dell OMS 77 501 Eventuali confronti con altri prodotti o
63. or pituitary where the axons end as terminal buttons on capillaries It is from this region that secretion of AVP into peripheral circulation occurs possibly in association with protein carrying molecules known as neurophysin It seems likely that AVP from the paraventricular nucleus is secreted into capillaries of the hypothalamic hypophyseal portal system and conducted to the anterior pituitary where it may stimulate adrenocorticotropin ACTH release It is known that a number of both osmotic and non osmotic stimuli will cause AVP release A negative feedback system which includes the kidney central nervous system and thirst mechanism exists and allows for regulation of body fluid concentration AVP release is also influenced by a number of other factors including emotional stress posture blood volume temperature and many pharmacological agents Alcohol appears to weakly inhibit AVP secretion 5 7 The AVP assay is utilized in studies involving diabetes insipidus syndrome of inappro priate ADH secretion SIADH syndrome of ectopic AVP production and psychogenic water intoxication 5 8 AVP RIA is very useful in separating central diabetes insipidus from nephrogenic diabetes insipidus Central diabetes insipidus which is marked by excessive thirst polydipsia and the passage of large amounts of dilute urine polyuria is caused by inadequate AVP production Central diabetes insipidus can be either familial or idiopathic and can affect both
64. pioni utilizzando colonne octadecisilano silice silice ODS incluse nel kit 1 campioni estratti vengono quindi analizzati mediante una procedura DIA di disequilibrio per aumentare la sensibilit C una pre incubazione del campione e del primo anticorpo per 18 24 ore a 2 8 C viene quindi aggiunto il tracciante a cui fa seguito una seconda incubazione a 2 8 C La separazione di fase completa in15 25 minuti a 20 25 C con un complesso pre precipitato di secondo anticorpo carrier e PEG aggiunti con un unica operazione con pipetta 4 REAGENTI FORNITI CON IL KIT Tampone BSA borato 1 per vasopressina 1 fiala 35 mL Calibratore per vasopressina 1 fiala 2 0 mL Antisiero vasopressina 1 fiala 7 mL 125 Vasopressina 1 fiala 7 mL Complesso precipitante GAGP PPT 1 fiala 35 mL Plasma di controllo per vasopressina 2 fiale 2 5 mL Numero di test CONSERVAZIONE Dopo il ricevimento dei reagenti e prima della ricostituzione conservarli a 2 8 C Dopo la ricostituzione conservare tutti i reagenti a 15 o a una temperatura inferiore fino alla data di scadenza indicata sull etichetta reagenti non devono essere utilizzati dopo la data di scadenza Durante la ricostituzione del contenuto delle fiale mescolare delicatamente al fine di evitare la formazione di schiuma Non si devono mescolare reagente di lotti diversi 4 1 Tampone BSA borato 1 per vasopressina 1 reagente liofilizzato Il tampone BSA borato 1 contiene timerosal come c
65. rifugare a 760 x g per 20 minuti Far decantare i liquidi superficiali Contare ogni provetta in un contatore a raggi gamma per 60 secondi o pi g 1118 x 10 raggio in cm rpm 60 REFERENCES BIBLOGRAPHIE LITERATUR BIBLIOGRAFIA 1 10 11 12 13 Cowley A W Jr W C Cushamn EW Quillen Jr M M Skelton and H G Langford Vasopressin Elevation in Essential Hypertension and Increased Responsiveness to Sodium Intake Hypertension 3 93 1981 Clark G P Wood L Merrick and D W Lincoln Opiate Inhibition of Peptide Release from the Neurohumoral Terminals of Hypothalamic Neurones Nature 282 746 1979 Malvin R L Possible Role of the Renin angiotensin System in the Regulation of Antidiuretic Hormone Secretion Federation Proceedings Am Physiological Soc 30 1383 1971 Pullan P T Clappison and C I Johnston Plasma Vasopressin and Human Neurophysins in Physiological and Pathological States Associated with Changes in Vasopressin Secretion Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 49 580 1979 Lester M C and P B Nelson Neurological Aspects of Vasopressin Release and the Syndrome of Inappropriate Secretion of Antidiuretic Hormone Neurosurgery 8 735 1981 Schrier R W and J P Goldberg The Physiology of Vasopressin Release and the Pathogenesis of Impaired Water Excretion in Adrenal Thyroid and Edematous Dis orders The Yale
66. rper HCV und Antik rper f r HIV 1 2 befunden Obwohl diese Methode u erst genau ist bietet sie keine Gew hr daf r dass alle infizierten Einheiten identifiziert werden k nnen Dieses Produkt kann auch Material humanen Ursprungs enthalten f r welches es noch kein genehmigtes Testverfahren gibt Da keine der zur Zeit bekannten Testmethoden absolute Gewahr fiir die Abwesenheit des Hepatitis B Virus HBV des Hepatitis C Virus HCV des Retrovirus HIV oder anderer Infektionserreger bieten kann sind alle Produkte mit Komponenten humanen Ursprungs unter Einhaltung guter Laborpraktiken und entsprechender VorsichtsmaBnahmen laut Empfehlungen des Leitfadens der Centers for 34 Disease Control and Prevention National Institutes of Health amerikanische Krankheitsforschungszentren Staatliche Gesundheits institute Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Biosicherheit in mikrobiologischen und biomedizinischen Laboren 4 Auflage Mai 1999 oder aktuelle Auflage als potenzielle infekti se Substanzen zu behandeln REAGENZIEN MIT NATRIUMAZID ACHTUNG Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Natriumazid das ggf mit Blei oder Kupferleitungen reagieren und h chst explosive Metallazide bilden kann Zur Entsorgung mit reichlich Wasser nachsp len um Azidbildung zu vermeiden Weitere Informationen finden Sie im Abschnitt Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts des Handbuches Safety Management
67. s than the sensitivity of the assay The values obtained by DiaSorin are consistent with those found by other researchers In a study using thirty one normal subjects the normal range of plasma vasopressin was determined to be 1 4 1 0 pg mL 16 SPECIFIC PERFORMANCE CHARACTERISTICS 16 1 Precision Intra Assay Variation values pg mL Sample Mean Value S D C V Number Inter Assay Variation values pg mL Sample Mean Value C V Number 5 0 0 14 2 8 veh 40 1 78 4 4 12 16 2 Trueness The assay truness has been verified by the dilution test and the recovery test Linearity Parallelism SERIAL DILUTION STUDY OF THREE PATIENT SAMPLES VALUES PG ML Sample Undiluted 1 2 1 4 Number E Recovery Accuracy Values pg mL Background Calibrator Expected Measured Percent Added Value Value Recovery 16 3 Analytical Sensitivity When defined as the apparent concentration at 3 standard deviations from the counts at maximum binding the minimum detectable amount is 2 5 pg mL Any patient sample that reads less than 2 5 pg mL before correcting for the dilution factor cannot be distinguished from zero 16 4 Analytical Specificity Comparison of the reactivity of the vasopressin antibody was made with the following peptides Peptide Cross reactivity Arginine vasopressin 100 Lysine vasopressin 600 Oxytocin lt 0 01 Vasotocin 0 14 SEE LAST PAGE FOR REFERENCES 13 SCHEME OF THE ASSAY Reconsti
68. slope or position of the calibrator curve from what is normally obtained 6 3 Adecrease in maximum binding 6 4 Ahigh nonspecific binding mob oO 7 COLLECTION AND PREPARATION OF SPECIMEN Two milliliters of EDTA plasma are required for the extraction in this procedure Collect blood by venipuncture in a 5 or 10 mL evacuated glass tube EDTA 7 2 mg 5 mL blood is used as an anticoagulant Centrifuge promptly for 15 minutes using 760 x g Separate the plasma from the cells and place in storage tubes Vasopressin has been demonstrated to be stable at room temperature for several hours For prolonged storage freeze at 15 C or lower All plastics glassware or other materials coming into contact with the specimen should be entirely free of any contamination NOTE It has been observed that lower recoveries may be obtained when using heparinized plasma or serum In addition heparinized plasma will occasionally plug the Sep Pak column 8 EQUIPMENT AND MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 8 1 8 2 8 3 8 4 8 5 8 6 8 7 8 8 8 9 8 10 8 11 8 12 8 13 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 Disposable borosilicate glass tubes 12 x 75 mm Centrifuge to accommodate 12 x 75 mm tubes temperature controlled Gamma scintillation counter capable of counting iodine 125 Vortex Pipetting devices a Micropipettors calibrated to deliver 100 uL and 200 pL b Repeating dispensers calibrated to deliver 100 uL and 500 uL 12 mL disposable syringes
69. t t divis es par quatre pour obtenir les valeurs normales comprises entre non d celable et 4 7 pg ml L tape d extraction et de concentration permet de reporter des valeurs qui dans le cas contraire seraient inf rieures au seuil de sensibilit du dosage Les valeurs obtenues par DiaSorin sont conformes celles recueillies par d autres chercheurs Dans une tude portant sur trente et un sujets normaux l intervalle normal d termin pour la vasopressine dans le plasma est de 1 4 1 0 pg ml 16 CRIT RES DE QUALIT SP CIFIQUES 16 1 Pr cision Variation intra essai valeurs pg ml Num ro Valeur d chantillon moyenne Ecart type C V Variation inter essai valeurs pg ml Num ro Valeur d chantillon Ecart type Bas 5 0 0 14 2 8 Elev 40 1 78 4 4 27 16 2 Exactitude l exactitude du dosage a t v rifi e par le test de dilution et le test de r cup ration Lin arit parall lisme ETUDE DE DILUTION EN S RIE SUR TROIS CHANTILLONS PATIENT VALEURS PG ML Numi 93 gt 90 R cup ration pr cision Valeurs pg ml Valeur de Valeur Valeur Pourcentage de talon ajout r f rence escompt e mesur e r cup ration 16 3 Sensibilit Analytique D finie comme la concentration obtenue 3 carts types de l activit de liaison maximale la quantit minimale d celable est de 2 5 pg ml Tout chantillon patient dont la valeur est inf rieure 2 5 pg ml
70. ta pu offrire garanzia completa sull assenza del virus dell epatite B HBV dell epatite C HCV del virus di immunodeficienza umana HIV o di altri agenti infettivi tutto il materiale di provenienza umana deve essere trattato in conformit con le buone pratiche di laboratorio adottando le precauzioni appropriate come descritto nei manuali dei Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories quarta edizione Maggio 1999 o edizione corrente REAGENTI CONTENENTI SODIO AZIDE ATTENZIONE Alcuni reagenti di questo kit contengono sodio azide La sodio azide pu reagire con componenti in piombo o rame e formare quindi azidi metalliche altamente esplosive AI momento dello smaltimento lavare con abbondante acqua al fine di evitare la formazione di azide Per ulteriori informazioni consultare Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts nel manuale Guide Safety Management No CDC 22 pubblicato dai Centri per il controllo e la Prevenzione delle malattie di Atlanta GA 1976 Frasi di rischio per sostanze pericolose della Comunit Europea Direttiva del Consiglio 1999 45 CE R20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed Dannoso per inalazione per contatto con la pelle ed ingestione R32 Contact with acids liberates very toxic gas Il contatto con acidi libera gas altamente tossico 49 S28 After conta
71. temperatura controllata adatta per 12 provette da 75 mm 8 3 Contatore ad emissione di scintille gamma adatto per il conteggio di iodio 125 8 4 Mixer Vortex 8 5 Dispositivi per operazioni con pipetta a Micropipette calibrate per erogare 100 uL e 200 uL b Dosatori a ripetizione calibrati per erogare 100 uL e 500 pL 8 6 Siringhe monouso da 12 mL 8 7 Metanolo reagente di grado o migliore 8 8 Acido acetico al 4 51 8 9 8 10 8 11 8 12 8 13 1 M acido cloridrico Aria compressa o azoto g 1118x 10 raggio in cm rpm Bagno di acqua a 37 Provette in vetro monouso 16 x 100 mm Acqua purificata ESTRAZIONE DI PLASMA CON COLONNE IN SILICE ODS 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 9 14 9 15 9 16 9 17 9 18 9 19 Collegare ogni Sep Pak allo stantuffo di una siringa Aggiungere 5 mL di azoto in ogni siringa Comprimere nella siringa con il pistone Togliere i Sep Pak Togliere il pistone dalle siringhe Applicare i Sep Pak alle siringhe Aggiungere 10 mL di acqua purificata in ogni siringa Ripetere le operazioni dal punto 9 3 al punto 9 6 Ripetere l operazione al punto 9 7 quindi le operazioni dal punto 9 3 al punto 9 6 Acidificare 2 mL di plasma EDTA o plasma di controllo con 200 uL di 1 M HCI acido cloridrico Il pH dovr essere 3 4 Caricare il campione nella siringa e spingere lentamente per un minuto attraverso la colonna Ripetere le operazioni d
72. teur et du PEG 4 R ACTIFS FOURNIS DANS LA TROUSSE Tampon vasopressine de BSA borate 1 1 tube 35 ml talon vasopressine 1 tube 2 0 ml Antis rum vasopressine 1 tube 7 ml vasopressine 1 tube 7 ml Complexe pr cipitant GAGP PPT 1 flacon 35 ml Plasma de contr le vasopressine 2 tubes 2 5 ml Nombre de dosages CONSERVATION D s r ception et avant reconstitution tous les r actifs doivent tre stock s entre 2 et 8 C Apr s reconstitution stocker tous les r actifs une temp rature inf rieure ou gale 15 C jusqu la date de p remption sur l tiquette Les r actifs ne 16 doivent pas tre utilis s au del de la date de p remption Pendant la reconstitution du contenu des tubes agiter d licatement pour viter la formation de mousse Les r actifs de lots diff rents ne doivent pas tre m lang s 4 1 Tampon vasopressine BSA borate 1 r actif lyophilis Le tampon BSA borate 1 contient du thiomersal comme conservateur Reconstituer le flacon avec 35 ml d eau purifi e et laisser reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu Bien m langer avant utilisation 4 2 talon arginine vasopressine r actif lyophilis L arginine vasopressine purifi e une concentration nominale de 80 pg ml est dilu e dans le tampon BSA borate contenant du thiomersal Les valeurs exactes de ces concentrations sont fournies avec chaque lot Reconstituer le flacon ave
73. tinto da zero 16 4 Specificit Analitica Il confronto della reattivit dell anticorpo vasopressina stato eseguito con i seguenti peptidi Peptide di reattivit incrociata Arginina vasopressina 100 Lisina vasopressina 600 Ossitocina lt 0 01 Vasotocina 0 14 FARE RIFERIMENTO ALL ULTIMA PAGINA PER LA BIBLIOGRAFIA 59 Schema di analisi 1 Ricostituire i reagenti liofilizzati e lasciar scongelare completamente eventuali campioni congelati Evitare che i reagenti raggiungano temperature superiori a 25 C Contrassegnare due serie di provette 2 Estrarre i controlli e i campioni non noti in base alle istruzioni nella Sezione 9 3 Versare il reagente seguendo lo schema seguente Conteg NSB CAL CAL Controlli e Provette Reagenti gi totali 0 1 5 campioni non noti Tampone BSA borato 196 a 200 uL 200 uL 5 Calibratori 1 5 200 uL Controlli estratti 200 uL Campioni non noti estratti 200 uL Antisiero 100 uL 100 uL 100 uL 0 9 no er 10 11 12 13 Coprire le provette con pellicola e agitare lentamente nel Vortex Lasciare in incubazione per 18 24 ore a 2 8 C Versare 100 uL di tracciante in tutti i pozzetti Coprire e agitare lentamente nel Vortex Lasciare in incubazione per 18 24 a 2 8 C Versare 500 uL del complesso GAGP PPT in tutti i pozzetti eccetto le provette per il conteggio totale Lasciare in incubazione per 15 25 minuti a 20 25 C Cent
74. tliche CPM f r die einzelnen Kalibratoren Kontrollen und unbekannten Proben berechnen 13 2 Die durchschnittliche CPM der NSB R hrchen von allen Z hlungen abziehen 13 3 Die korrigierten CPM jedes Kalibrators jeder Kontrolle oder unbekannten Probe durch die korrigierten CPM des Nullkalibrators dividieren SEM des Kalibrators oder der unbekannten Probe CPM der NSB 0 CPM des Nullkalibrators CPM der NSB 13 4 Auf halblogarithmischem Millimeterpapier 2 Zyklen oder doppeltlogarithmischem Millimeterpapier prozentuale Bindungen B B f r die Vasopressin Kalibratoren vertikale Achse gegen die Konzentration horizontale Achse auftragen 13 5 Durch die Punkte eine Ausgleichsgerade legen 13 6 Die Konzentrationen von Vasopressin in den unbekannten Proben aus der Auftragung interpolieren x 100 40 13 7 Den Vasopressin Wert entsprechend berechnen Beispiel Wenn 2 ml Plasma zu 0 5 ml extrahiert und rekonstituiert wurden den Wert durch 4 dividieren wenn 2 pl Plasma zu 1 0 ml extrahiert und rekonstituiert wurden den Wert durch 2 dividieren 13 8 Wenn der Wert f r eine Probe gr er ist als der gr te Kalibratorwert sollte die Probe mit einem geringeren Plasmavolumen erneut extrahiert und oder mit einem h heren Volumen an 1 BSA Borat rekonstituiert werden 13 9 Wenn Extrakt Ubrig bleibt kann dieser ebenfalls weiter verd nnt und erneut getestet werden 13 10 Die maximale Bindung wird berechnet indem die CPM d
75. to Nel plasma umano si aggiunge se necessario una quantit necessaria di arginina 48 vasopressina per ottenere una concentrazione nei range specificati La sodio azide aggiunta come conservante Ricostituire ogni fiala con 2 5 mL di acqua purificata e lasciar riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente e trattare il plasma per il controllo di qualit come campione non noto 4 7 Silice ODS reagente liofilizzato Octadecilsilano silice contenuta in colonne di plastica Sep Paks Le colonne silice ODS in dotazione nel kit devono essere primed prima dell applicazione del campione vedere la sezione Procedura Le colonne possono essere conservate a temperatura ambiente 5 AVVERTENZE E PRECAUZIONI PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Non per uso interno o esterno su animali o persone REAGENTI CONTENENTI MATERIALE DI PROVENIENZA UMANA Trattare come potenzialmente infettivi Ogni unit di siero plasma da donatore usata nella preparazione di questo prodotto stata testata con una metodica approvata dalla FDA statunitense e trovata non reattiva per la presenza di HBsAg anticorpi a HCV e anticorpi ad HIV 1 2 Anche se questi metodi sono estremamente accurati non garantita la localizzazione di tutte le unit infette Questo prodotto pu inoltre contenere altro materiale di provenienza umana per il quale non esiste un test approvato Poich nessuna metodologia di test approva
76. tute the lyophilized reagents and allow any frozen specimens to thaw completely Do not allow reagents to reach above 25 C Identify tubes in duplicate 2 Extract controls and unknows according section nine 3 Dispense reagents according to the following scheme Total NSB Cal Cal Controls and Tubes Reagents Counts 0 1 5 unknown samples 196 BSA borate Buffer 200 ul 200 uL Calibrators 1 5 200 uL Extracted Controls 200 uL Extracted Unknown 200 uL Samples 100 ul 100 pL 100 uL Antiserum 4 Cover the tubes with parafilm and vortex gently 5 Incubate for 18 24 hours at 2 8 C 6 Dispense 100 uL of the tracer into all wells 7 Cover and vortex gently 8 Incubate for 18 24 hours at 2 8 C 9 Dispense 500 uL of the GAGP PPT into all wells except the total count tubes 10 Incubate for 15 25 minutes at 20 25 C 11 Centrifuge using 760 x g for 20 minutes 12 Decant the supernatants 13 Count each tube in a gamma counter for 60 seconds or longer g 1118 x 10 radius in cm rpm 14 DOSAGE RADIO IMMUNOLOGIQUE DE LA VASOPRESSINE 1 INDICATION POUR USAGE DIAGNOSTIQUE N VITRO Cette trousse permet la d termination quantitative de l arginine vasopressine humaine AVP ADH dans le plasma ou d autres chantillons par dosage radio immunologique RIA la suite d une extraction au silice octad cylsilyl 2 R SUM ET COMMENTAIRE L argini
77. ubate for 18 24 hours at 2 8 C 10 7 Vigorously mix the GAGP PPT and add 500 uL to all the tubes except the total count tubes 10 8 Vortex the tubes gently without foaming and incubate for 15 25 minutes at 20 25 C 10 9 Centrifuge the tubes for 20 minutes using 760 x g at 20 25 10 10 Immediately decant the supernatant from all the tubes except the total count tubes by inverting them for a minimum time of 2 minutes Blot the tubes with absorbent paper to remove any drops of supernatant that may be remaining on the tubes before turning the tubes upright 10 11 Using a gamma scintillation counter count the precipitate of each tube and the total count tubes for a sufficient time to achieve statistical accuracy See Limitations of the Procedure section PROCEDURAL COMMENTS 11 1 Assay all samples in duplicate to ensure confidence in values obtained 11 2 Add each aliquot of reagent to the lower third of the assay tube to ensure complete mixture of reagents 11 3 Some manufacturers disposable borosilicate glass tubes yield elevated nonspecific bindings 11 41f you choose to aspirate the supernatant from the precipitate be careful not to disturb the precipitate 11 5 To completely monitor the consistent performance of an RIA there are additional factors which may be checked DiaSorin suggests a check of the following parameters to assure consistent kit performance a Total Counts b Maximum Binding Average counts per m
78. ui ne convient pas une faible pression osmotique du s rum 5 Il peut avoir un certain nombre de conditions pour origine affection pulmonaire traumatisme cr nien accidentel ou chirurgical infection locale et cancer Certains n oplasmes surtout le carcinome bronchog nique produisent de l AVP ou des peptides mim tiques de l AVP Ce syndrome de s cr tion ectopique de la vasopressine est g n ralement caract ris par une l vation significative et prolong e des taux d AVP 12 L intoxication hydrique psychog ne est due une consommation compulsive et excessive d eau Il ne s agit pas d un trouble physique mais comme son nom l indique d un trouble du comportement 3 DESCRIPTION DE LA METHODE DE DOSAGE Le dosage radio immunologique de l AVP con u par DiaSorin se compose de 2 proc dures La premi re implique l extraction des chantillons sur des colonnes de silice octad cylsilyl silice ODS qui sont fournies dans la trousse Les chantillons extraits sont ensuite dos s l aide d un RIA de d s quilibrage afin d optimiser la sensibilit L chantillon et le premier anticorps sont mis en pr incubation pendant 18 24 heures entre 2 et 8 C Le traceur est ensuite ajout avant une deuxi me incubation entre 2 et 8 C La s paration en phases s accomplit en15 25 minutes entre 20 et 25 C avec l ajout en une seule phase de pipetage d un complexe pr alablement pr cipit contenant le deuxi me anticorps le vec
79. ung Durchschnittliche CPM des NSB R hrchens Durchschnittliche CPM der Totalaktivit t R hrchen d Steigung der Kalibratorkurve Z Uberwachung der Suppressionspunkte 80 50 und 20 der Kalibratorkurve 12 QUALITATSKONTROLLE Jedes Labor sollte mindestens zwei Kontrollproben f r jeden Test vorsehen damit die G ltigkeit der Testergebnisse berpr ft werden kann Ein Mittelwert und eine Standardabweichung sind dann f r jede Kontrolle in mindestens zehn Versuchsg ngen zu bestimmen Ein zul ssiger Wertebereich kann dann f r diese Kontrollen mit 2 Standardabweichungen der zuvor bestimmten Werte ermittelt werden Das Qualit tskontrolllabor von DiaSorin hat f r die in diesem Kit enthaltene Kontrolle einen Bereich festgelegt der auf dem Kontrollfl schchen aufgedruckt ist 13 ERGEBNISBERECHNUNG Es gibt viele M glichkeiten die Ergebnisse von Radioimmunoassays zu berechnen Bei jeder Methode wird eine Kalibratorkurve angelegt indem die prozentualen Bindungen gegen die angegebenen Konzentrationen der Kalibrations Kalibratoren aufgetragen werden Diese Kurve kann entweder eine lineare oder eine logarithmische Skala besitzen Jede dieser Methoden f hrt im Wesentlichen zu denselben Werten f r Kontrollen und Proben bei einigen Tests ist die eine Methode jedoch m glicherweise besser geeignet als die andere Die Umrechnungsmethode f r das DiaSorin Qualit tskontrolllabor lautet B Bo gegen log Konzentration 13 1 Die durchschnit
80. vit t kann von der auf dem Etikett des Kartons und des Tracer Fl schchens angegebenen etwas abweichen Sowohl das Etikett des Kartons als auch das Etikett des Tracer Fl schchens geben den tats chlichen Wert der Radioaktivit t am Kalibrationsdatum an w hrend die Packungsbeilage die theoretische Radioaktivit t des Kits angibt ANZEICHEN F R M GLICHEN VERFALL DER KITREAGENZIEN 6 1 Das Vorhandensein abnormer Partikel in einem der Reagenzien 6 2 Eine Verschiebung der Steigung oder Position der Kalibratorkurve im Vergleich zu den normalen Ergebnissen 6 3 Eine Abnahme der maximalen Bindung 6 4 Eine hohe nichtspezifische Bindung PROBENGEWINNUNG UND VORBEREITUNG F r die Extraktion in diesem Verfahren sind 2 Milliliter EDTA Plasma erforderlich Das Vollblut durch Venenpunktion in einem evakuierten Glasr hrchen f r 5 ml oder 10 ml sammeln Als Antikoagulationsmittel wird EDTA 7 2 mg 5 ml Blut verwendet Unverz glich 15 Minuten lang mit 760 x g zentrifugieren Das Plasma von den Zellen trennen und in R hrchen f llen Vasopressin hat sich bei Raumtemperatur mehrere Stunden lang als stabil erwiesen F r eine l ngere Lagerung bei 15 C oder tieferen Temperaturen einfrieren Alle Kunststoffteile Glasteile und sonstigen Materialien die Kontakt mit den Proben haben m ssen frei von jeglichen Verunreinigungen sein a Pon g 1118 x 10 radius in cm u min 36 8 HINWEIS Es wurde beobachtet dass bei Verwendung v
81. voquer la s cr tion d AVP Un syst me de r trocontr le n gatif comprenant le rein le syst me nerveux central et le m canisme de la soif r gule la concentration des liquides organiques La lib ration d AVP est galement influenc e par un certain nombre de facteurs suppl mentaires stress motionnel posture vol mie temp rature et de nombreux agents pharmacologiques L alcool semble l g rement inhiber la s cr tion d AVP 57 Le dosage de l AVP est utilis lors d tudes concernant le diab te insipide le syndrome d antidiur se inappropri e SIADH le syndrome de s cr tion ectopique d AVP et l intoxication psychog ne par l eau 5 8 15 Le dosage radio immunologique de l AVP permet de distinguer le diab te insipide central du diab te insipide n phrog nique Le diab te insipide central caract ris par une soif excessive polydipsie et le passage de grandes quantit s d urine dilu e polyurie est une s cr tion d AVP inad quate Familial ou idiopathique il peut toucher les hommes comme les femmes tout En revanche le diab te insipide n phrog nique est une absence de r ponse des tubes urinif res la vasopressine ce qui les rend incapables de r absorber l eau Ce diab te qui est h r ditaire touche g n ralement les hommes pendant leur petite enfance Il se caract rise par des taux normaux d AVP en circulation 9 10 Le SIADH correspond une s cr tion de vasopressine q
82. wn sample 13 2 Subtract the average CPM of the NSB tubes from all counts 13 3 Divide the corrected CPM of each calibrator control or unknown sample by the corrected CPM of the Calibrator 0 DEM e E E or Unknown Sample CPM of NSB of Calibrator 0 CPM of NSB x 100 13 4 Using two cycle semi log or log logit graph paper plot percent B By for the vasopressin calibrators vertical axis versus the concentration horizontal axis 13 5 Draw a best fit line through the points 13 6 Interpolate the levels of vasopressin in the unknown samples from the plot 13 7 Calculate the vasopressin value appropriately For example if 2 mL of plasma was extracted and reconstituted to 0 5 mL divide by four if 2 mL of plasma was extracted and reconstituted to 1 0 mL divide by two 9 13 8 If any sample reads greater than the highest calibrator it should be re extracted with a lesser volume of plasma and or reconstituted with more volume of 1 BSA borate 13 9 If any extract should remain it could also be diluted further and reassayed 13 10 Calculate maximum binding by dividing CPM of Calibrator 0 by the average total counts obtained in the total count tubes TABLE Il DiaSorin Vasopressin RIA Sample Data Percent Graph Final Tube Duplicate Average Corrected Bound Percent Conc Conc CPM CPM CPM B T B Bo pg mL pg mL Total Count 5 841 5 917 5 992 NSB 192 199 3 4 205 Calibrator 0 2 970 2 872 2 673 48 5 100 2 774 C

Vasopressin - KC SOLID spol. s ro

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