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β-HCG ELISA - DRG Diagnostics GmbH

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1. 17 INTRODUZIONE 18 PRINCIPIO DEL TEST 18 PRECAUZIONI i 18 COMPONENTI DEL KIT 19 CAMPION aiii nn 20 ATTUAZIONE DEL TEST 20 VALORI NORMALI 22 CONTROLLO QUALIT er 23 CARATTERISTICHE DEL TEST 23 LIMITAZIONE DEL TEST 23 ASPETTI LEGALI aa ia 24 BIBLIOGRAFIA erre iii 24 Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 1 1 INTRODUCCI N sino 25 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO 25 3 PRECAUCIONES iii 25 4 COMPONENTES DEL KIT 26 5 MUESTRAS eE E EE EE E REE 27 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 27 7 VALORES ESPERADOS nennen 29 8 CONTROL DE CALIDAD ii 30 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 30 10 LIMITACIONES DE USO 11 ASPECTOSLEGALES nnne 12 REFERENCIAS BIBLIOGRAF A 31 1 INTRODUCTION 32 2 PRINCIPE DU TEST iii 32 3 PRECAUTIONS D UTILISATION 32 4 COMPOSITION DU KIT iii 33 5 ECHANTILLON iiiriia 34 6 REALISATION DU TEST 34 7 VALEURS ATTENDUES eee 36 8 CONTROLE DE QUALITE n 37 9 CARACTERISTIQUES DU TEST 37 10 LIMITES D UTILISATION 38 11 ASPECTS LEGAUX 0 eee 38 12 REFERENCES BIBLIOGRAPHIE 38 SYMBOLS USED WITH DRG ELISAS ee 39 DRG B HCG ELISA ElA 1911 English 1 INTRODU
2. 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette 02 1388 001 permitir coagulaci n y separar el suero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 5 d as a 2 C 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo 5 3 Diluci n de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el est ndar mas concentrado ha de diluirse con Sample Diluent y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejemplo a diluci n 1 10 10 uL Suero 90 uL Sample Diluent mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Sample Diluent mezclar totalmente c diluci n 1 1000 10 uL diluci n b 1 100 90 uL Sample Diluent mezclar totalmente NOTA El suero de las mujeres embarazadas debe diluirse 1 100 en el diluyente de las muestras Sample Diluent antes de comenzar el ensayo 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1
3. 7 1 Gesunde nicht schwangere Erwachsene In einer Studie wurden die Proben von gesunden Erwachsenen untersucht Dabei ergaben sich mit dem DRG B HCG ELISA folgende Werte Population Alter Jahre N B hCG mIU mL 7 2 Schwangere Frauen im 2 Trimester Schwangerschafts N 5 Perzentile 95 Perzentile woche mIU mL mIU mL 14 103 10303 71980 15 96 9246 51666 16 91 5266 36947 17 14 4632 24033 ACHTUNG 1 F r den Schwangerschaftsnachweis mit der qualitativen Methode werden 50 mIU mL als Grenzwert eingesetzt Proben mit negativem oder grenzwertigem Ergebnis werden als zweifelhaft betrachtet Zur Best tigung des Ergebnisses 48 Stunden sp ter eine weitere Patientenprobe nehmen und nochmals bestimmen 2 Es hat sich gezeigt dass bei einem immunologischen Schwangerschaftstest einige Erkrankungen rheumatische Arthritis maligne Tumore das Testergebnis beeinflussen k nnen In solchen F llen muss die Interpretation der Ergebnisse besonders sorgf ltig durchgef hrt werden Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 15 DRG B HCG ELISA ElA 1911 8 QUALITATS KONTROLLE Es wird empfohlen die Kontrollproben gem den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag zu Tag berpr fung der Ergebnisse erzielt Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC Labor
4. des r actifs contenus dans ce kit sont pr sent es dans la fiche de s curit Material Safety Data Sheets Tous les r actifs de ce kit contenant du s rum ou du plasma humain ont t test s avec des r sultats n gatifs pour le VIH NII le HBsAg et le HCV selon les normes FDA en vigueur N anmoins lors de leur utilisation tous les r actifs de ce kit doivent tre manipul s avec pr caution Eviter les contacts avec la Stop Solution celle ci contient 0 5 M de H SO4 Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau Ne jamais pipeter avec la bouche et viter tout contact de la peau ou des muqueuses avec les r actifs ou les chantillons Ne pas fumer manger boire ou utiliser des produits cosm tiques dans les zones o les chantillons ou le kit ont t mani s Porter des gants d examen lors de l utilisation des chantillons ou des r actifs Une contamination microbienne des chantillons ou des r actifs pourrait fausser les r sultats L utilisation de ce kit devra tre en accord avec les normes ou recommandations nationales de s curit en vigueur concernant les produits risque biologique Ne pas utiliser les r actifs au del de la date d expiration inscrite sur l emballage Tous les volumes indiqu s doivent tre scrupuleusement respect s comme indiqu dans le protocole exp rimental Seule l utilisation de pipettes calibr es ou d un spectrophotom tre lect
5. 1 flacone 14 mL pronto all uso TMB benzidine tetrametilico 6 Stop Solution Soluzione d arresto 1 flacone 14 mL pronto all uso contiene 0 5M H GC Evitare il contatto con la soluzione d arresto Pu causare irritazioni cutanee e ustioni Nota Ulteriore Sample Diluent pu essere richiesto alla ditta 4 2 Materiali richiesti ma non contenuti nel kit Uno spettrofotometro calibrato per micropozzetti 450 10 nm p es il DRG Instruments Microtiterplate Reader Micropipette calibrate di precisione a volume variabile Carta assorbente Acqua distillata 4 3 Magazzinaggio e stabilit del kit A 2 C 8 C i reagenti non aperti rimangono reattivi fino alla data di scadenza indicata Non usare reagenti oltre questa data Tutti i reagenti aperti devono essere magazzinati a 2 C 8 C micropozzetti devono essere magazzinati a 2 C 8 C Una volta aperti i pacchi questi devono essere richiusi accuratamente 4 4 Preparazione dei reagenti Prima dell uso portare tutti i reagenti e il numero necessario di pozzetti a temperatura ambiente Standards Ricostituire il contenuto liofillizzato dei flaconi con gli standard con 1 0 mL acqua distillata Nota Gli standard ricostituiti sono stabili per 2 mesi a 2 C 8 C Per periodi piu lunghi congelare a 20 C 4 5 Smaltimento del kit Lo smaltimento del kit deve avvenire secondo le regole a norma di legge Informazioni particolareggiate per quest
6. Se in un campione di siero viene trovata una concentrazione oltre lo standard piu alto questo campione pu essere diluito con Sample Diluent e nuovamente determinato Della diluizione deve essere per tenuto conto Esempio a diluizione 1 10 10 uL siero 90 uL Sample Diluent agitare bene b diluizione 1 100 10 pL della diluizione a 1 10 90 uL Sample Diluent agitare bene c diluizione 1 1000 10 uL della diluizione b 1 100 90 uL Sample Diluent agitare bene NOTA sieri di donne gravide devono essere diluiti 1 100 nel Sample Diluent prima di incominciare l analisi 6 ATTUAZIONE DEL TEST 6 1 Indicazioni generali Tutti i reagenti e i campioni devono essere portati a temperatura ambiente e ben mescolati prima dell uso Evitare la formazione di schiume Una volta iniziato il procedimento del test questo deve essere portato alla fine senza interruzione Per ogni componente standard controllo o campione necessario utilizzare una nuova punta monouso per evitare reazioni incrociate La densit ottica dipende dal tempo d incubazione e dalla temperatura Perci si rende necessario di preparare tutti i reagenti di aprire i tappi dei flaconi e di appostare tutti i pozzetti nelle appropriate posizioni Soltanto una tale preparazione garantisce gli stessi tempi per ogni processo di pipettamento Come regola generale vale che la reazione enzimatica si svolge linearmente proporzionale con il tempo e
7. unterliegen nicht der Haftung des Herstellers 12 REFERENZEN LITERATUR Angaben zu den Referenzen entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 17 DRG B HCG ELISA ElA 1911 1 INTRODUZIONE Il test immuno enzimatico DRG B HCG ELISA contiene materiale per la determinazione quantitativa di gonadotropina corionica B HCG e HCG in siero Questo test kit adatto soltanto per l uso diagnostico 2 PRINCIPIO DEL TEST Il test kit DRG B HCG ELISA un test immunologico in fase solida con enzimi ancorati su un substrato ELISA basato sul principio sandwich micropozzetti sono ricoperti con un anticorpo monoclonale diretto contro un unico sito antigenico su una molecola B HCG Un aliquota di un campione di paziente contenente HCG B HCG endogeno viene incubato nel pozzetto ricoperto dell enzima coniugato che un anticorpo anti B HCG monoclonale coniugato alla perossidasi di rafano Dopo l incubazione il coniugato non legato eliminato attraverso lavaggi La quantita della perossidasi legata proporzionale alla concentrazione HCG B HCG nel campione Dopo l aggiunta della soluzione substrato l intensit del colore sviluppato proporzionale alla concentrazione di HCG B HCG nel campione del paziente 3 PRECAUZIONI Questo kit adatto soltanto per l uso diagnostico in vitro Si prega di usare la versione valida dell inserto del pacco a disposizione con il ki
8. Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer 12 REFERENCES LITERATURE Sancken U Bartels l Der sogenannte Triple Test Reproduktionsmedizin 15 276 284 1999 Cole L A Clinical Chemistry 43 12 2233 2243 1997 lles R K Javid M K Gunn L K Chard T Clinical Chemistry 45 4 532 538 1999 lles R K Javid M K Gunn L K Chard T Clinical Chemistry 40 3 484 485 1994 Korhonen J Alfthan H Yl stalo P Veldhuis J Stenman U H Clinical Chemistry 43 11 2155 2163 1997 aR NN Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 10 DRG B HCG ELISA ElA 1911 1 EINLEITUNG Der DRG HCG ELISA wird zur quantitativen Bestimmung des Gesamt HCG HCG und B HCG in Serum eingesetzt Nur fur In vitro Diagnostik 2 TESTPRINZIP Der DRG B HCG ELISA ist ein Festphasen Enzymimmunoassay der auf der Sandwichtechnik basiert Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem monoklonalen Antik rper beschichtet der gegen eine definierte Antik rper Bindungsstelle des B HCG Molek ls gerichtet ist Die Proben werden in die beschichteten Wells gegeben und mit einem Enzymkonjugat inkubiert Das Konjugat enth lt einen anti B HCG Antik rper der mit Meerrettichperoxidase konjugiert ist Es wird ein Sandwichkomplex gebildet Das nicht gebundene Konjugat wird durch Waschen der Wells entfernt Anschlie end wird die Substratl sung zugegeben und die Farbentwicklung nach einer definierten
9. Ce dilution on diluci n Diluente del tracciante Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 39
10. Consideraciones generales Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada est ndar control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 27 6 2 DRG B HCG ELISA ElA 1911 Procedimiento de ensayo cuantitativo Cada uno debe incluir una curva de est ndares Oak WN 6 3 Asegurar el numero deseado de pocillos en el recipiente Dispensar 25 uL de cada Standard Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados Dispensar 100 pL de Enzyme Conjugate a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso Incubar durante 60 minutes a temperatura ambiente Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 5 veces con agua destilada 400 uL
11. HCG conjugado con la peroxidasa end gena Despu s de la incubaci n se lava el conjugado que no se ha unido La cantidad de peroxidasa unida es proporcional a la concentraci n de HCG B HCG en la muestra Cuando se a ade la soluci n del sustrato de la peroxidasa la intensidad del color desarrollado es proporcional a la concentraci n de HCG B HCG en la muestra del paciente 3 PRECAUCIONES Este kit es solamente para diagn stico in vitro Por favor se usa solo la version valida de la metodico t cnico incluido aqui en el kit Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV I II HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos Evitar contacto con Stop Solution que contiene H2SO 0 5 M Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas No fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microb
12. attention a bien refermer le flacon 44 Pr paration des r actifs Amener tous les r actifs et le nombre de barrettes n cessaires au test temp rature ambiante avant utilisation Standards Reconstituer le contenu lyophilis des flacons de standards avec 1 0 mL d eau distill e Remarque Les standards reconstitut s sont stables deux mois 2 C 8 C Pour un stockage prolong congeler 20 C 4 5 Elimination des d chets relatifs au kit L limination des d chets relatifs au kit doit tre r alis e selon les r gles nationales en vigueur Les informations sp cifiques au kit sont pr sent es dans la fiche de s curit voir chapitre 13 4 6 Kits endommag s Dans le cas de dommages importants survenus au kit ou ses composants informer la DRG au plus tard une semaine apr s r ception du kit Les composants endommag s ne doivent pas tre utilis s pour le test Ils doivent tre stock s jusqu ce qu une solution adapt e ait t trouv e Apr s cela ils doivent tre limin s selon les directives officielles en vigueur Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 33 DRG B HCG ELISA ElA 1911 5 ECHANTILLON S rum peuve tre utilis s pour ce test Ne pas utiliser des chantillons h molys s ict riques ou lip miques Remarque Les chantillons contenant de l azide de sodium ne doivent pas tre utilis s pour ce test 5 1 Pr l vement et pr paration des chantillons S rum Pr leve
13. especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DRG 11 2 Therapeutic Consequences Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences 11 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit
14. non utilizzare pozzetti di piastre diversi anche se si tratta dello stesso lotto kit potrebbero essere stati magazzinati o spediti a condizioni diverse cosicch le caratteristiche di legame potrebbero divergere leggermente componenti chimici e reagenti preparati o gi utilizzati devono essere trattati e smaltiti secondo le norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive regolamenti di sicurezza di questo prodotto possono essere richiesti direttamente dalla ditta DRG Instruments GmbH regolamenti di sicurezza corrispondono alle norme EU 91 155 EC Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 18 DRG B HCG ELISA ElA 1911 4 COMPONENTI DEL KIT 4 1 Contenuto del kit 1 Microtiterwells Micropozetti 12 x 8 file separatamente staccabili 96 pozzetti Pozzetti ricoperti con l anti B HCG anticorpo monoclonale 2 Standard Standard 0 5 6 flaconi liofillizzati 1 0 mL Concentrazione 0 5 25 50 100 200 mIU mL Conversione 1 pg mL 0 00916 mIU mL Gli standard sono calibrati contro lo 1 IRP per B HCG IRP 75 537 Vedi preparazionedei reagenti Contiene conservante senza mercurio 3 Sample Diluent Diluente dei campioni 1 flacone 10 mL pronto all uso Contiene conservante senza mercurio 4 Enzyme Conjugate Tracciante enzimatico 1 flacone 11 mL pronto all uso Anti B HCG anticorpo coniugato alla perossidasi di rafano Contiene conservante senza mercurio 5 Substrate Solution Soluzione di substrato
15. ssen verd nnt werden Dieser Verd nnungsfaktor muss bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden 1 Beispiel f r eine Standardkurve Nachfolgend wird ein typisches Beispiel f r eine Standardkurve mit dem DRG ELISA gezeigt Diese Werte sollten nicht zur Berechnung von Patientendaten verwendet werden Standard Optische Dichte 450nm Standard 0_ 0 mIU mL Standard 1 5 mIU mL Standard 2 25 mIU mL Standard 3 50 mIU mL Standard 4 100 mIU mL Standard 5 200 mIU mL Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 14 DRG B HCG ELISA ElA 1911 6 4 Testdurchf hrung Qualitative Methode Dieses Verfahren erm glicht die Unterscheidung zwischen positiven Schwangerschaftsnachweis und negativen Proben durch Vergleich der Patientenproben mit Standard 0 0 mIU mL und dem Standard 3 mit 50 mIU mL Testdurchf hrung wie unter Quantitative Methode beschrieben Die Schritte 9 und 10 entfallen 6 5 Qualitative Ergebnisse F r die qualitative Auswertung wird die Farbintensit t der Probe mit der Farbintensit t des Standard 0 und des Standard 3 50 mIU mL verglichen Ist die Farbintensit t der Probe geringer als die des Standard 3 mit 50 mIU mL ist die Probe als negativ zu betrachten Ist die Farbintensit t der Probe gleich oder st rker als die des Standard 3 mit 50 mIU mL ist die Probe als positiv zu betrachten 7 ERWARTETE WERTE Es wird empfohlen dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt
16. 0 vk 23 DRG B HCG ELISA ElA 1911 11 ASPETTI LEGALI 11 1 Affidabilit dei risultati Il test deve essere eseguito esattamente secondo il protocollo dato dal produttore Inoltre l utente deve seguire le regole del GLP Good Laboratory Practice o eventualmente altre regole comportamentali o disposizioni legali Questo vale soprattutto per l uso delle referenze molto importante utilizzare un numero appropriato di referenze in parallelo ai campioni test per poter controllare l esattezza e la precisione del test risultati del test sono validi soltanto se tutte le referenze cadono nei margini prestabiliti e se tutti gli altri parametri del test soddisfano la specificazione per questo test Se esistono dubbi o domande su questi risultati si prega di contattare la ditta DRG 11 2 Conseguenze terapeutiche Soltanto sulla base dei risultati dei laboratori non dovrebbero essere intraprese delle conseguenze terapeutiche di alcun tipo anche se i risultati del test sono d accordo con gli aspetti articolati nel punto 11 1 Ogni risultato di laboratorio soltanto una parte di un quadro clinico completo di un paziente Soltanto in casi in cui i risultati di un test del laboratorio si accordano con il quadro clinico dell ammalato si possono intraprendere delle conseguenze terapeutiche Il risultato del test da solo non base sufficiente per lo stabilimento di una terapia 11 3 Responsabilit legali Ogni cambiamento del protocollo
17. CTION 1 1 Intended Use The DRG pB HCG ELISA Kit is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of total human chorionic gonadotropin hCG and R hCG in serum 1 2 Summary and Explanation Chorionic Gonadotropin hCG is a glycoprotein hormone which is normally produced by the placenta during pregnancy After conception the hCG concentration increases rapidly to reach a peak near the end of the first trimester High concentrations are observed throughout pregnancy After delivery hCG levels fall rapidly and become undetectable after a few days Structurally intact hCG molecules are composed of an alpha and a beta subunit The alpha subunit is nearly identical to the alpha subunits of other glycoprotein hormones such as Thyroid Stimulating Hormone TSH Luteinizing Hormone LH and Follicle Stimulating Hormone FSH The differences in the beta subunit of the respective hormones account for their biological specificity and immunochemical distinctiveness Monoclonal antibodies recognizing unique sites on the beta chain of the R hCG hCG molecule are essential for differentiation between hCG and LH FSH and TSH Specific assays for beta hCG permit the early detection of pregnancy In addition to the elevated hCG levels during pregnancy high concentrations of RhCG hCG may be associated with neoplasms of trophoblastic and nontrophoblastic origin such as hydatiform mole chorionepithelioma embryonal cell carcinoma semi
18. Pr zision 9 5 Wiederfindung 9 6 Linearit t entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 10 GRENZEN DES TESTS Jede unsachgem e Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests k nnen die Ergebnisse beeinflussen 10 1 Interferenzen H moglobin bis zu 4 mg mL Bilirubin bis zu 0 5 mg mL und Triglyceride bis zu 30 mg mL haben keinen Einfluss auf das Testergebnis 10 2 Beeinflussung durch Medikamente Uns sind bislang keine Stoffe Medikamente bekannt geworden deren Einnahme die Messung des B HCG Gehaltes der Probe beeinflussen w rde 10 3 High Dose Hook Effekt Ein Hook Effekt tritt bei Proben mit bis zu 158 600 mIU mL B HCG nicht auf Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 16 DRG B HCG ELISA ElA 1911 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 11 1 Zuverl ssigkeit der Ergebnisse Der Test muss exakt gem der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden Dar ber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP Good Laboratory Practice oder andere eventuel anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien Es ist sehr wichtig bei der Testdurchf hrung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur berpr fung der Genauigkeit und Pr zision mitlaufen zu lassen Die Testergebnisse sind nur g ltig wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen liegen und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebenen Spezifi
19. Reagenzien nicht nach dem auf dem Kit Etikett angegebenen Verfallsdatum verwenden Alle im Kit Protokoll angegebenen Mengen m ssen genau eingehalten werden Optimale Ergebnisse k nnen nur durch Verwendung kalibrierter Pipetten und Mikrotiterplatten Leseger te erreicht werden Komponenten von Kits mit unterschiedlichen Lotnummern nicht untereinander vertauschen Es wird empfohlen keine Wells von verschiedenen Platten zu verwenden auch nicht wenn es sich um das gleiche Lot handelt Die Kits k nnen unter anderen Bedingungen gelagert oder versendet worden sein so dass die Bindungscharakteristik der Platten leicht unterschiedlich ausf llt Chemikalien und zubereitete oder bereits benutzte Reagenzien m ssen gem den nationalen Gefahrenstoffvorschriften wie gef hrlicher Abfall behandelt werden Materialsicherheitsdatenbl tter f r dieses Produkt sind auf Anfrage direkt von der Firma DRG Instruments GmbH erh ltlich Die Materialsicherheitsdatenbl tter entsprechen den Verordnungen der EU Richtlinie 91 155 EC Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 11 DRG B HCG ELISA ElA 1911 4 BESTANDTEILE DES KITS 41 Kitinhalt 1 Microtiterwells 96 Wells 12 x 8 Wells einzeln brechbar Mit anti B hCG Antik rper monoklonal beschichtet 2 Standard Standard 0 5 6 Fl schchen lyoph je 1 0 mL Konzentrationen 0 5 25 50 100 200 mIU mL Umrechnungsfaktor 1 pg mL 0 00916 mIU mL Die Standards sind kalibriert gegen den 1 I
20. Recuperaci n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 6 Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 30 DRG B HCG ELISA ElA 1911 10 LIMITACIONES DE USO 10 1 Sustancias que pueden interferir Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados Hemoglobina hasta 4 mg mL Bilirrubina hasta 0 5 mg mL y Triglic ridos hasta 30 mg mL no influencian los resultados del ensayo 10 2 Interferencias con drogas Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de B HCG en una muestra 10 3 Efecto Gancho Dosis Elevada No se ha observado efecto gancho en este ensayo hasta 158600 mIU mL de B HCG 11 ASPECTOS LEGALES 11 1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas a n el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Pr cticas de Laboratorio o a otros est ndares y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un n mero suficiente de controles para validar la exactitud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par metros del ensayo s
21. Sample Diluent avant de commencer l essai 6 R ALISATION DU TEST 6 1 Remarques g n rales Tous les r actifs et chantillons doivent tre amen s temp rature ambiante avant utilisation Tous les r actifs doivent tre m lang s sans formation de mousse Une fois la proc dure engag e toutes les tapes doivent tre r alis es sans interruption Utiliser un nouveau c ne de pipette pour chaque standard contr le ou chantillon ceci afin d viter toute contamination L absorbance est fonction du temps d incubation et de la temp rature Avant de commencer le test il est recommand de pr parer tous les r actifs bouchons ouverts de pr parer les puits des microplaques etc Cela garantira un intervalle de temps quivalent entre chaque tape sans interruption En r gle g n rale la r action enzymatique est lin airement proportionnelle au temps et la temp rature Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 34 6 2 DRG B HCG ELISA ElA 1911 R alisation du dosage quantitative Chaque test doit inclure une courbe talon 1 2 oak o 6 3 Disposer le nombre de puits de micro titration d sir dans le support D poser 25 HL de chaque Standard Control et les chantillons avec de nouveaux c nes de pipette dans les puits appropri s D poser 100 uL d Enzyme Conjugate dans chaque puits Bien m langer pendant 10 secondes Il est important d obtenir un m lange parfait lo
22. Users Manual B HCG ELISA ElA 1911 NY 96 wells wl Legal Manufacturer Distributed by DRG DRG Instruments GmbH Germany Division of DRG International Inc Frauenbergstr 18 D 35039 Marburg Telefon 49 0 6421 17000 Fax 49 0 642 1 1700 50 Internet www drg diagnostics de E mail drg drg diagnostics de CE DRG B HCG ELISA ElA 1911 Contents Inhaltsverzeichnis Contenuti Contenidos Contenu 0 NOD O1 MM A 0 JO O1 P ND da 3 Vv N 2 d O O1 MM A da 3 N 2 INTRODUCTION in 2 PRINCIPLE OF THE TEST 2 WARNINGS AND PRECAUTIONS 3 REAGENTS ui 4 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION 5 ASSAY PROCEDURE 5 EXPECTED NORMAL VALUES 7 QUALITY CONTROL 8 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 8 LIMITATIONS OF USE 10 LEGAL ASPECTS u 22222unuueesnnnnnnsenenensennnnnnnnn 10 REFERENCES LITERATURE 10 EINLEITUNG ornon einsi na 11 TESTPRINZIP an 11 VORSICHTSMABNAHMEN 11 BESTANDTEILEDESKITS 12 PROBENVORBEREITUNG uueenn 13 TESTDURCHF HRUNG rene 13 ERWARTETE WERTE i 15 QUALIT TS KONTROLLE o ae aeiee nire rnn 16 ASSAY CHARACTERISTIKA 16 GRENZEN DES TESTS 16 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 17 REFERENZEN LITERATUR
23. Zeit gestoppt Die Intensit t der gebildeten Farbe ist proportional der HCG B HCG Konzentration in der Probe Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen 3 VORSICHTSMARNAHMEN Dieser Kit ist nur zum in vitro diagnostischen Gebrauch geeignet Nur die g ltige im Testkit enthaltene Arbeitsanleitung verwenden Informationen zu im Kit enthaltenen gef hrlichen Substanzen entnehmen Sie bitte dem Materialsicherheitsdatenblatt Alle Bestandteile dieses Testkits die humanes Serum oder Plasma enthalten wurden mit FDA gepr ften Methoden auf HIV I II HbsAg und HCV getestet und als negativ best tigt Jedoch sollten alle Bestandteile im Umgang und bei der Entsorgung wie m gliche Gefahrenstoffe betrachtet werden Der Kontakt mit der Stop Solution sollte vermieden werden da sie 0 5 M H SO enth lt Schwefels ure kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen Nicht mit dem Mund pipettieren und den Kontakt von Kitbestandteilen und Proben mit Haut und Schleimh uten vermeiden Inden Bereichen in denen Proben oder Kitbestandteile verwendet werden nicht rauchen essen oder Kosmetika verwenden Beim Umgang mit Proben oder Reagenzien Einweg Latexhandschuhe tragen Die Verunreinigung von Reagenzien oder Proben mit Mikroben kann zu falschen Ergebnissen f hren Der Gebrauch sollte gem der Vorschriften einer entsprechenden nationalen Gefahrenstoff Sicherheitsrichtlinie erfolgen
24. andard contro la rispettiva concentrazione dove i valori delle DO si devono trovare sull asse verticale Y e le concentrazioni sull asse orizzontale X Utilizzando il valore medio delle DO per ogni campione si determina la rispettiva concentrazione dalla curva standard Metodo automatico risultati in IFU sono stati calcolati automaticamente usando un fitting avvicinamento con il 4 PL 4 Parameter Logistics Altri funzioni usati per l elaborazioni dei dati possono dare risultati leggermente differenti La concentrazione dei campioni pu essere determinata direttamente dalla curva standard Campioni con una concentrazione piu elevata dello standard piu concentrato devono essere diluiti Di questo fattore di diluizione deve essere tenuto conto per il calcolo della concentrazione 6 3 1 Esempio di una curva standard tipica seguenti dati sono a scopo dimostrativo soltanto e non possono sostituire i dati generati dall eseguimento del test Standard Densit ottiche 450 nm Standard 0_ 0 mIU mL Standard 1 5 mIU mL Standard 2 25 mIU mL Standard 3_ 50 mIU mL Standard 4 100 mIU mL Standard 5 200 mIU mL Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 21 DRG B HCG ELISA ElA 1911 6 4 Eseguimento del test metodo qualitativo Questo procedimento distingue campioni positivi gravidanza da campioni negativi comparando i livelli B hCG con quelli del Standard 0 0 mIU mL e dello Standard 3 50 mIU mL campioni dei paz
25. ate as shown on the kit labels All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H SO It may cause skin irritation and burns Some reagents contain Proclin 300 BND and or MIT as preservatives In case of contact with eyes or skin flush immediately with water TMB substrate has an irritant effect on skin and mucosa In case of possible contact wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water Wash contaminated objects before reusing them If inhaled take the person to open air Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline or regulation For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets Material Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DRG Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 3 DRG B HCG ELISA ElA 1911 4 REAGENTS 4 1 Reagents pprovided 1 Microtiterwells 12 x 8 break apart stri
26. ben m ssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchgemischt werden Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden Wenn die Testdurchf hrung einmal begonnen wurde muss sie ohne Unterbrechung zu Ende gef hrt werden Fur jeden Standard jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden um Verschleppungen zu vermeiden Die Optische Dichte ist abh ngig von Inkubationszeit und Temperatur Deshalb ist es notwendig vor Beginn der Testdurchf hrung alle Reagenzien in einen arbeitsbereiten Zustand zu bringen die Deckel der Flaschchen zu ffnen alle ben tigten Wells in den Halter zu setzen Nur eine solche Vorbereitung garantiert gleiche Zeiten f r jeden Pipettiervorgang ohne Pausen Als generelle Regel gilt dass die enzymatische Reaktion linear proportional zu Zeit und Temperatur ist Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 13 6 2 DRG B HCG ELISA ElA 1911 Testdurchf hrung quantitative Methode Jeder Lauf muss eine Standardkurve beinhalten PGS a 6 3 Die ben tigte Anzahl Wells in der Halterung befestigen Je 25 uL Standards Control und Proben mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Wells geben 100 uL Enzyme Conjugate in jedes Well geben F r 10 Sekunden gut sch tteln Es ist sehr wichtig in diesem Schritt eine komplette Durchmischung zu erreichen 60 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells 5 mal mit destilliertem Wasser waschen Verbleiben
27. con la temperatura Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 20 6 2 DRG B HCG ELISA ElA 1911 Eseguimento del test metodo quantitativo Ogni analisi deve includere una curva standard 1 2 oa E o 6 3 N Fissare i pozzetti necessari sul supporto Pipettare 25 uL di ogni Standard Control e campione nei pozzetti cambiando ogni volta la punta monouso Pipettare 100 uL Enzyme Conjugate in ogni pozzetto Agitare bene per 10 secondi molto importante raggiungere un completo mescolamento Incubare per 60 minuti a temperatura ambiente Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti Lavare i pozzetti 5 volte con acqua distillata 400 uL in ogni pozzetto Rimuovere le gocce d acqua rimanenti rivoltando la piastra su carta assorbente Importante La sensibilit e la precisazione di questo kit sono fortemente influenzate dal corretto eseguimento del lavaggio Aggiungere 100 uL della Substrate Solution ad ogni pozzetto Incubare per 15 minuti a temperatura ambiente Fermare la reazione enzimatica aggiungendo 50 uL della Stop Solution ad ogni pozzetto Determinare la densit ottica a 450 10 nm con un fotometro per microtiter piastre entro 10 minuti dopo l aggiunta della Stop Solution Rilevamento dei risultati quantitativo Determinare i valori medi della densit ottica per ogni set di standard controlli e campioni Costruire una curva standard riportare i valori medi della densit ottica DO di ogni st
28. cubazione metodi di aspirazione e di lavaggio Se dopo il controllo dei suddetti fattori non rilevabile alcun errore si prega di contattare il fornitore o direttamente la ditta DRG 9 CARATTERISTICHE DEL TEST 9 1 Assay Dynamic Range Le concentrazioni determinabili con questo test stanno tra 1 200 mIU mL 9 2 Specificit degli anticorpi reazioni ad incrocio Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 3 Sensitivita analitica La sensitivit analitica stata calcolata dai valori medi piu due deviazioni standard di venti 20 repliche dello Standard 0 ed erano lt 1 mIU mL 9 4 Precisione Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 5 Ritrovato Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 6 Linearit Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 10 LIMITAZIONE DEL TEST Ogni manutenzione impropria dei campioni o modificazione del protocollo pu influenzare risultati 10 1 Sostanze interferenti Emoglobina fino a 4 mg mL bilirubina fino a 0 5 mg mL e trigliceridi fino a 30 mg mL non influenzano i risultati di questo test 10 2 Droghe interferenti Fino ad oggi nessuna sostanza farmaco conosciuta a noi che abbia influenzato la determinazione di B HCG nel campione 10 3 Effetto Hook di alti dosaggi Nessun effetto hook di aglomerazione stato osservato in questo test fino a 158600 mIU mL di B HCG Vers 7 0 Effective 2011 1
29. de Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfernen Achtung Die Sensitivit t und Pr zision dieses Assays wird erheblich beeinflusst von der korrekten Durchf hrung des Waschschrittes 100 uL Substrate Solution in jedes Well geben 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Die enzymatische Reaktion durch Zugabe von 50 uL Stop Solution in jedes Well abstoppen Die Optische Dichte bei 450 10 nm mit einem Mikrotiterplatten Leseger t innerhalb von 10 Minuten nach Zugabe der Stop Solution bestimmen Ergebnisermittlung quantitativ Die durchschnittlichen Werte der Optischen Dichte OD f r jedes Set von Standards Controls und Patientenproben bestimmen Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragen der mittleren Optischen Dichte jedes Standards gegen die Konzentration wobei der OD Wert auf der vertikalen Y Achse und die Konzentration auf der horizontalen X Achse eingetragen wird Unter Verwendung der mittleren OD wird f r jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve ermittelt Automatische Methode Die in der Arbeitsanleitung ermittelten Werte wurden automatisch mit Hilfe der 4 Parameter Gleichung 4PL 4 Parameter Logistics 4 Parameter Rodbard bestimmt Andere Auswertungsfunktionen k nnen leicht abweichende Werte ergeben Die Konzentration der Proben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden Proben die eine h here Konzentration als die des h chsten Standards enthalten m
30. del test e o lo scambio o il mescolamento di componenti provenienti da cariche diverse possono influenzare negativamente i risultati e compromettere la validit del test Questi cambiamenti e o scambi annullano ogni diritto al risarcimento Si respingano inoltre tutti i richiami risultanti da interpretazioni sbagliate da parte dell utente secondo il paragrafo 11 2 Nel caso di reclamazione la garanzia del produttore limitato al valore massimo del test kit Ogni danno provocato durante il trasporto del kit non sottost alla responsabilit del produttore 12 BIBLIOGRAFIA Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 24 DRG B HCG ELISA ElA 1911 Espaniol 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzim tico DRG B HCG proporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantitativa del Gonadotropina cori nica HCG B HCG en suero Este ensayo est dise ado solo para diagn stico in vitro 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DRG B HCG ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio del s ndwich Los pocillos de las placas est n recubiertos con un anticuerpo monoclonal policlonal dirigido contra un nico foci antig nico en una mol cula de B HCG Se incuba una al cuota de una muestra perteneciente a un paciente que contiene HCG B HCG end gena en los pocillos recubiertos con el enzima conjugado que es un anticuerpo anti B
31. e qualitative method This procedure differentiates positive pregnant from negative samples by comparing the sample beta hCG levels with the Standard 0 0 mIU mL and Standard 3 50 mIU mL Patient samples are run with the Standard 0 and the 50 mIU mL Standard The assay procedure is identical with the Quantitative Method but step 9 and 10 is omitted 6 5 Calculation of Results qualitative For a qualitative analysis of the B hCG level the color development of the specimen is compared with the color of the O mIU mL and 50 mIU mL standards If the blue color is less intense than the color of the 50 mIU mL standard the sample is considered as negative If the blue color is more intense than or equal to the color of the 50 mIU mL standard the sample is considered as positive 7 EXPECTED NORMAL VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values 7 1 Normal healthy adults non pregnant In a study conducted with apparently normal healthy adults using the DRG B HCG ELISA the following values are observed Population Age years Valid N B hCG mIU mL 2 7 2 Pregnant women in the 2 trimester Week of Valid 5 Percentile 95 Percentile pregnancy samples mIU mL mIU mL 14 103 10303 71980 15 96 9246 51666 16 91 5266 36947 17 14 4632 24033 CAUTION 1 For the detection of pregnancy in serum a qualitative assay is used with a cut off
32. e encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con DRG 11 2 Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente se pueden derivar consecuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 11 3 Responsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante 12 REFERENCIAS BIBLIOGRAF A Consultar e
33. e esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 C 8 C Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 C 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo 4 4 Preparaci n de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el n mero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Standards Reconstituir los contenidos liofilizados de los viales de los est ndares con 1 0 mL de agua destilada Nota Los est ndares reconstituidos son estables durante 2 meses a 2 C 8 C Para per odos m s largos congelar a 20 C 4 5 Eliminaci n del Kit La eliminaci n del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informaci n especial de este producto ver cap tulo 13 4 6 Kits de ensayo da ados En caso de que exista cualquier da o severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a DRG no mas tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n Despu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 26 DRG B HCG ELISA ElA 1911 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero No usar muestras hemol ticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica
34. eur de micro plaques calibr garantit l obtention de r sultats optimaux ce test Ne pas m langer ou utiliser des r actifs contenus dans des kits de lots diff rents Il est conseill de ne pas changer les puits de diff rentes plaques m me si celles ci proviennent du m me lot Les kits peuvent avoir t transport s ou stock s diff remment et les caract ristiques de liaison de chaque plaque pourraient ainsi tre modifi es L elimination des solutions chimiques et des r actifs contenus dans ce kit utilis s ou non doit tre en accord avec la r glementation nationale en vigueur concernant l limination des d chets risque biologique La fiche de s curit concernant ce produit peut tre obtenue en contactant directement DRG Instruments GmbH Les fiches de s curit sont en accord avec les directives europ ennes EU 91 155 EC Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 32 DRG B HCG ELISA ElA 1911 4 COMPOSITION DU KIT 4 1 Contenu du kit 1 Microtiterwells Plaques de micro titratio 12 x 8 d tacher barrettes plaques de 96 puits Les puits sont recouverts avec un anticorps anti B HCG monoclonal 2 Standard Standard 0 5 6 flacons lyophilis s 1 0 mL Concentrations 0 5 25 50 100 200 mIU mL Conversion 1 pg mL 0 00916 mlU mL Les standards ont t calibr s selon le WHO 1 International Standard for B HCG IRP 75 537 Voir Pr paration des r actifs Contient agent de conser
35. gistiques peuvent donner des r sultats l g rement diff rents La concentration des chantillons peut tre lue directement partir de cette courbe talon Les chantillons avec une concentration sup rieure celle du plus haut standard doivent tre dilu s de nouveau Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration 1 Exemple d une courbe standard typique Les r sultats suivants sont ici pr sent s titre d exemple et ne peuvent tre utilis s au moment de l essai Standard Unit s optiques 450 nm Standard 0 0 mIU mL Standard 1 5 mIU mL Standard 2 25 mIU mL Standard 3 50 mIU mL Standard 4 100 mIU mL 6 4 Standard 5 200 mIU mL R alisation du dosage qualitative Les chantillons sont analys s avec les standards 0 mlU ml et 50 mlU ml Standard 0 et Standard 3 La m thode est exactement la m me que la m thode quantitative mais les tapes 9 et 10 sont omises Voir le manuel de Putilisateur en version anglaise 6 5 Calcul des r sultats qualitative Pour une analyse qualitative du niveau de B HCG la coloration de l chantillon est compar e avec la coloration des Standard 0 et Standard 3 Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 35 7 VALEURS ATTENDUES DRG B HCG ELISA ElA 1911 7 1 Normal healthy adults non pregnant Dans une tude r alis e avec des adultes normaux et sa
36. has been opened care should be taken to close it tightly again 4 4 Reagent Preparation Allow all reagents and required number of strips to reach room temperature prior to use Standards Reconstitute the lyophilized contents of the standard vial with 1 0 mL deionized water Note The reconstituted standards are stable for 2 months at 2 C 8 C For longer storage freeze at 20 C 4 5 Disposal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheets see chapter 13 4 6 Damaged Test Kits In case of any severe damage to the test kit or components DRG has to be informed in writing at the latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 4 DRG B HCG ELISA ElA 1911 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Serum should be used in this assay Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette 02 1388 001 allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting ha
37. iana de los reactivos o las muestras puede dar resultados err neos El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las placas pueden resultar diferentes Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a DRG Instruments GmbH Las hojas de los datos de seguridad se ajustan a las demandas de las gu a europea EU Guideline 91 155 EC Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 25 DRG B HCG ELISA ElA 1911 4 COMPONENTES DEL KIT 4 1 Componentes del Kit 1 Microtiterwells Placas multipocillo 12 x 8 tiras separables 96 poci
38. ienti vanno analizzati assieme al Standard 0 0 mIU mL e allo Standard 3 50 mIU mL Il procedimento del test e identico a quello del metodo quantitativo soltanto i passaggi 9 e 10 sono omessi 6 5 Risultati qualitativi Per una analisi qualitativa dei livelli hCG B hCG lo sviluppo del colore dei campioni e paragonato a quello del Standard 0 0 mIU mL e dello Standard 3 50 mlU mL Se il colore blu e meno intenso di quello dello Standard 3 50 mIU mL il campione e da considerare negativo Se il colore blu e piu intenso o uguale a quello dello Standard 3 50 mIU mL il campione e da considerare positivo 7 VALORI NORMALI E consigliabile che ogni laboratorio determini i propri valori normali e anormali 7 1 Adulti normali sani non in gravidanza In uno studio condotto su persone apparentemente sane usando il test DRG B HCG ELISA i seguenti valori sono stati ottenuti Populzione E ann N Valori eerst uomini Bee 7 2 Livelli normali di B hCG nel siero durante la gravidanza settimana di N 5 Percentile 95 Percentile gravidanza mIU mL mIU mL 14 103 10303 71980 15 96 9246 51666 16 91 5266 36947 17 14 4632 24033 PRECAUZIONI 1 Perla determinazione di gravidanza si usa il procedimento qualitativo con un valore soglia di 50 mIU mL Risultati negativi o borderline dovrebbero essere ripetuti con campioni freschi al piu tardi 48 ore dopo l analisi dei primi campioni 2 E stato riporta
39. in 10 minutes after adding the Stop Solution Calculation of Results quantitative Calculate the average absorbance values for each set of standards controls and patient samples Construct a standard curve by plotting the mean absorbance obtained from each standard against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the standard curve Automated method The results in the IFU have been calculated automatically using a 4 PL 4 Parameter Logistics curve fit 4 Parameter Logistics is the preferred method Other data reduction functions may give slightly different results The concentration of the samples can be read directly from this standard curve Samples with concentrations higher than that of the highest standard have to be further diluted or reported as gt 200 mIU mL For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account 1 Example of Typical Standard Curve The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay Standard Optical Units 450 nm Standard 0 0 mIU mL Standard 1 5 mIU mL Standard 2 25 mIU mL Standard 3 50 mIU mL Standard 4 100 mIU mL Standard 5 200 mIU mL Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 6 DRG B HCG ELISA ElA 1911 6 4 Assay Procedur
40. ins l aide du kit DRG B HCG ELISA les valeurs suivantes sont observ es Population Age ans Valid N B hCG mIU mL Hommes 7 2 Pregnant women in the 2 trimester Week of Valid 5 Pourcentage 95 Pourcentage pregnancy N mIU mL mIU mL 14 103 10303 71980 15 96 9246 51666 16 91 5266 36947 17 14 4632 24033 CAUTION 1 For the detection of pregnancy in serum a qualitative assay is used with a cut off point of 50 mIU mL Negative or borderline results should be repeated on a fresh specimen obtained at least 48 hours after the first specimen 2 Ithas been shown that immunological pregnancy tests may yield false results in cases of several medications and diseases such as rheumatoid arthritis In such cases the interpretation of the pregnancy test should be done carefully Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 36 DRG B HCG ELISA ElA 1911 8 CONTROLE DE QUALITE Il est recommand d utiliser les chantillons contr les selon les r glementations nationales en vigueur L utilisation des chantillons contr les est recommand afin de s assurer jour apr s jour de la validit des r sultats Utiliser les contr les de valeurs normales et pathologiques Les contr les et les r sultats correspondants issus du laboratoire QC sont mentionn s dans le certificat QC fourni avec le kit Les valeurs et les limites mentionn es sur la fiche QC font toujours r f rence au lot de kit courant et doi
41. ion of half of the values determined for the undiluted samples and half of the values of the known solutions The Recovery has been calculated by multiplication of the ratio of the measurements and the expected values with 100 Added Concentration Measured Conc Expected Conc Recovery 1 1 v v mIU mL mIU mL mIU mL Le Ge 148 148 4 100 113 124 5 110 111 5 9 6 Linearity Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 9 DRG B HCG ELISA ElA 1911 10 LIMITATIONS OF USE Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a complete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results 10 1 Interfering Substances Haemoglobin up to 4 mg mL Bilirubin up to 0 5 mg mL and Triglyceride up to 30 mg mL have no influence on the assay results 10 2 Drug Interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of B HCG in a sample 10 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test up to 158 600 mIU mL of B HCG 11 LEGAL ASPECTS 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national standards and or laws This is
42. iores al mayor est ndar han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n 1 Ejemplo de una Curva Est ndar Tipica Los siguientes datos son solamente para la explicaci n y no pueden ser utilizados en lugar de los datos generados en el momento del ensayo Unidades Opticas 450 nm Standard 0 0 mIU mL Standard 1 5 mIU mL Standard 2 25 mIU mL Standard 3_ 50 mIU mL Standard 4 100 mIU mL Standard 5 200 mIU mL Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 28 DRG B HCG ELISA ElA 1911 6 4 Procedimiento de ensayo M todo cualitativo Este procedimiento diferencia entre muestras positivas embarazada y negativas mediante la comparaci n de los niveles de B hCG de la muestra con el Standard 0 0 mIU mL y el est ndar 3 50 mIU mL Las muestras de los pacientes son analizadas con los est ndares 0 mIU mL y 50 mIU mL Standard 0 y Standard 3 El procedimiento de ensayo es id ntico con el M todo cuantitativo pero se omiten los pasos 9 y 10 6 5 C lculo de los Resultados cualitativo Para un an lisis cualitativo de los niveles de B hCG el desarrollo del color de la muestra se compara con el color del diluyente de est ndar 0 0 mIU mL y del est ndar 3 50 mIU mL Si el color azul es menos intenso que el color del est ndar 3 50 mIU mL la muestra se considera negativa Si el color azul es mas intenso que el color del est ndar 3 50 mIU mL la muestra se considera
43. kationen f r diesen Assay erf llen Wenn Sie bez glich eines Ergebnisses Zweifel oder Bedenken haben setzen Sie sich bitte mit der Firma DRG in Verbindung 11 2 Therapeutische Konsequenzen Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen selbst dann nicht wenn alle Testergebnisse mit den in 11 1 genannten Voraussetzungen bereinstimmen Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten Nur in F llen in denen die Laborergebnisse in akzeptabler bereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage f r die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen 11 3 Haftung Jegliche Ver nderungen des Testkits und oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen k nnen die gew nschten Ergebnisse und die G ltigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen Solche Ver nderungen und oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzanspr che zur Folge Reklamationen die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gem Punkt 11 2 erfolgen sind ebenfalls abzuweisen Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschr nkt Jegliche Sch den die w hrend des Transports am Kit entstanden sind
44. l de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparaci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utilizar m todos estad sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ning n error contactar con su distribuidor o con DRG directamente 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 9 1 Rango din mico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre 1 200 mIU mL 9 2 Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Consultar el manual de usuario en ingl s 93 Sensibilidad Anal tica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media mas dos desviaciones est ndar de veinte 20 r plicas del Est ndar 0 y result ser lt 1 mIU mL 9 4 Precisi n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 5
45. l manual de usuario en ingl s Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 31 DRG B HCG ELISA ElA 1911 Francais 1 INTRODUCTION Le kit de dosage immuno enzymatique DRG B HCG ELISA propose les mat riaux requis pour la mesure quantitative de gonadotrophine chorionique humaine HCG et B HCG dans le s rum Ce kit est utiliser uniquement dans le cadre de tests diagnostiques in vitro 2 PRINCIPE DU TEST Le kit DRG B HCG ELISA est bas sur une r action immuno enzymatique en sandwich en phase solide Les microplaques sont recouvertes avec un anticorps monoclonal dirig contre un antig ne sp cifique de la mol cule B HCG Un aliquot de l chantillon contenant HCG B HCG endog ne est incub dans un puits avec enzyme conjugu e c est dire un anticorps anti B HCG conjugu e avec la peroxidase de Raifort horseradish peroxidase HRP Apres l incubation le conjugu non li est limin durant le lavage des puits La quantit de conjugu HRP li e est proportionnelle la concentration de HCG B HCG contenu e dans l chantillon Suite l addition de solution substrat l intensit de la coloration obtenue est proportionnelle la concentration de HCG B HCG contenu e dans l chantillon 3 PRECAUTIONS D UTILISATION Ce kit est uniquement destin aux tests diagnostiques in vitro Utilisez uniquement la version valide d instructions d utilisation qui est incluse dans le kit Les informations concernant la toxicit
46. laise Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 38 DRG B HCG ELISA ElA 1911 SYMBOLS USED WITH DRG ELISAS Sym bol English Deutsch Frangais Espafiol Italiano C European Conformity e Conforme aux normes Conformidad europea Conformit europea kennzeichnung europ ennes ha Consult instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Consulter les instructions d utilisation Consulte las Instrucciones Consultare le istruzioni per Puso lt oO In vitro diagnostic device In vitro Diagnostikum Usage Diagnostic in vitro Para uso Diagn stico in vitro Per uso Diagnostica in vitro Nur f r Seulement dans le S lo para uso en u RUO For research use only Forschungszwecke cadre de recherches investigaci n GEESS Catalogue number Katalog Nr R f rence N mero de cat logo No di Cat Lot No Batch code Chargen Nr No de lot N mero de lote Lotto no Contains sufficient for lt n gt tests Ausreichend f r n Ans tze Contenu suffisant pour n tests Contenido suficiente para lt n gt ensayos Contenuto sufficiente per n saggi Storage Temperature Lagerungstemperatur Temp rature de conservation Temperatura de conservacion Temperatura di conservazione Expiration Date Mindesthaltbarkeits datum Date limite d utilisation Fecha de caducidad Data di scadenza Eroa 5 H Legal Manufacturer He
47. llos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti B HCG monoclona 2 Standard Standard 0 5 Est ndar 6 viales liofilizados 1 0 mL Concentraciones 0 5 25 50 100 200 mIU mL Conversi n 1pg mL 0 00916 mlU mL Los est ndares est n calibrados seg n WHO 1 International Standard IRP 75 537 Contiene conservante sin mercurio 3 Sample Diluent Soluci n para diluci n de la muestra 1 vial 10 mL listo para usar Contiene conservante sin mercurio 4 Enzyme Conjugate Conjugado enzim tico 1 vial 11 mL listo para usar Anticuerpo anti B HCG conjudado con la Peroxidasa de r bano Contiene conservante sin mercurio 5 Substrate Solution Soluci n de sustrato 1 vial 14 mL listo para usar Tetrametilbencidina TMB 6 Stop Solution Soluci n de parada 1 vial 14 mL listo para usar contiene 0 5 M H2S0O4 Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en al piel Note Se puede solicitar el Sample Diluent para la diluci n de la muestra 4 2 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450 10 nm ej DRG Instruments Microtiter Plate Reader Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada 4 3 Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 C 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos m s all d
48. mal ge ffnete Folienbeutel sollte stets sehr sorgf ltig wieder verschlossen werden 4 4 Vorbereitung der Reagenzien Alle Reagenzien sowie die ben tigte Anzahl von Wells sollen vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden Standards Rekonstituieren Sie den lyophilisierten Inhalt der Standardfl schchen mit 1 0 mL destilliertem Wasser Achtung Bei 2 C 8 C sind die rekonstituierten Standards 2 Monate haltbar Bei einer l ngeren Aufbewahrung bei 20 C einfrieren 4 5 Entsorgung des Kits Die Entsorgung des Kits muss gem den nationalen gesetzlichen Vorschriften erfolgen Spezielle Informationen f r dieses Produkt finden Sie im Materialsicherheitsdatenblatt Kapitel 13 4 6 Beschadigte Testkits Im Falle einer starken Besch digung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma DRG in schriftlicher Form sp testens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden Stark besch digte Einzelkomponenten sollten nicht f r den Testlauf verwendet werden Sie m ssen gelagert werden bis eine endgultige L sung gefunden wurde Danach sollten Sie gem t den offiziellen Richtlinien entsorgt werden Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 12 DRG B HCG ELISA ElA 1911 5 PROBENVORBEREITUNG Serum sollte in diesem Test als Probenmaterial eingesetzt werden Lip mische ikterische und oder stark h molysierte Proben sollten nicht verwendet werden Achtung Proben die Natriumazid enthalten sollten nicht verwendet werden 5 1 P
49. noma and many others 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DRG p HCG ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the sandwich principle The microtiter wells are coated with a monoclonal antibody mouse directed towards a unique antigenic site on a B HCG molecule An aliquot of patient sample containing endogenous B HCG and or HCG is incubated in the coated well with enzyme conjugate which is an anti B HCG antibody conjugated with horseradish peroxidase After incubation the unbound conjugate is washed off The amount of bound peroxidase is proportional to the concentration of B HCG HCG in the sample Having added the substrate solution the intensity of colour developed is proportional to the concentration of B HCG HCG in the patient sample Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 2 Ni OO N 10 Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 DRG B HCG ELISA ElA 1911 WARNINGS AND PRECAUTIONS This kit is for in vitro diagnostic use only For professional use only All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I II HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal Before starting the assay read the instructions completely and carefully Use the valid ver
50. nternationalen WHO Standard IRR code 75 537 siehe Vorbereitung der Reagenzien Enth lt quecksilberfreies Konservierungsmittel 3 Sample Diluent Probenverd nnungsmedium 1 Fl schchen 10 mL gebrauchsfertig Enth lt quecksilberfreies Konservierungsmittel 4 Enzyme Conjugate Enzymkonjugat 1 Fl schchen 11 mL gebrauchsfertig Anti hCG Antiserum mit Meerrettichperoxidase konjugiert Enth lt quecksilberfreies Konservierungsmittel 5 Substrate Solution Substratl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Substratl sung TMB 6 Stop Solution Stoppl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig enth lt 0 5 M H2SO4 Kontakt mit der Stop Solution vermeiden Kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen Anmerkung Zusatzliches Sample Diluent zur Probenverd nnung ist auf Anfrage erhaltlich 4 2 Nicht im Kit enthaltene aber erforderliche Ger te und Materialien Kalibriertes Mikrotiterplattenleseger t mit 450 10 nm Filter z B das DRG Instruments Mikrotiterplattenleseger t Kalibrierte variable Pr zisions Mikropipette Saugf higes Papier Aqua dest 4 3 Lagerung und Haltbarkeit des Kits Die unge ffneten Reagenzien behalten bei Lagerung um 2 C 8 C ihre Reaktivitat bis zum Verfallsdatum Nach dem Verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden Nach dem Offnen sollten alle Reagenzien bei 2 C 8 C gelagert werden Die Microtiterwells sollten bei 2 C 8 C gelagert werden Der ein
51. o prodotto si trovano nel regolamento di sicurezza capitolo 13 4 6 Test kits danneggiati Nel caso di gravi danneggiamenti del kit o dei suoi componenti deve avvenire una dichiarazione scritta alla ditta DRG al piu tardi una settimana dopo il ricevimento del kit Componenti danneggiati non dovrebbero essere utilizzati per il test Questi componenti devono essere magazzinati fino ala soluzione del problema Dopo di che essi devono essere smaltiti secondo le norme ufficiali Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 19 DRG B HCG ELISA ElA 1911 5 CAMPIONI Siero pu essere usato per questo test Non usare campioni emolitici itterici o lipemici Attenzione Se i campioni contengono sodio azide non devono essere utilizzati per questo test 5 1 Collezione dei campioni Siero Collezionare sangue tramite puntura venale p es Sarstedt Monovette 02 1388 001 far coagulare e separare il siero centrifugando a temperatura ambiente Non centrifugare prima che la coagulazione sia completata Campioni di pazienti con una terapia anticoagulante possono richiedere pi tempo per la coagulazione 5 2 Magazzinaggio dei campioni I campioni dovrebbero essere magazzinati ben chiusi fino a 5 giorni a 2 C 8 C Campioni magazzinati per un periodo pi lungo dovrebbero essere congelati solo una volta a 20 C prima dell analisi Congelare soltanto una volta Invertire campioni scongelati alcune volte prima dell uso 5 3 Diluizione dei campioni
52. ol materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DRG directly 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 1 200 mIU mL 9 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity The following substances were tested for cross reactivity of the assay Produced Colour Intensity Equivalent to B HCG in serum mIU mL Concentration 300 mIU mL 200 mIU mL 80 mIU mL 75 ulU mL 50 ulU mL 25 ulU mL 200 mIU mL 50 mIU mL 9 3 Sensitivity The analytical sensitivity was calculated from the mean plus two standard deviations of twenty 20 replicate analyses of the Standard 0 and was found to be lt 1 mIU mL 9 4 Reproducibility 9 4 1 Intra Assay Variation The within assay variability is shown below non n wean nti Ss di 20 ei 2 20 es 40 Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 8 DRG B HCG ELISA ElA 1911 9 4 2 Inter Assay Variation The between assay variability is shown below Sample Mean mIU mL CV Er ae a ee 9 5 Recovery Samples have been spiked by adding B hCG solutions with known concentrations in a 1 1 ratio The expected values were calculated by addit
53. point of 50 mIU mL Negative or borderline results should be repeated on a fresh specimen obtained at least 48 hours after the first specimen 2 lthas been shown that immunological pregnancy tests may yield false results in cases of several medications and diseases such as rheumatoid arthritis In such cases the interpretation of the pregnancy test should be done carefully Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 7 DRG B HCG ELISA ElA 1911 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of contr
54. por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado Adicionar 100 uL de Substrate Solution a cada pocillo Incubar durante 15 minutes a temperatura ambiente Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 50 uL de Stop Solution a cada pocillo Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution C lculo de los Resultados cuantitativo Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de est ndares controles y muestras de pacientes Construir una curva est ndar mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada est ndar frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva est ndar M todo automatizado Los resultados en la IFU se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 PL 4 Par metros Log sticos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes La concentraci n de las muestra puede leerse directamente de la curva de est ndares Las muestras con concentraciones super
55. positiva 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales 7 1 Normal healthy adults non pregnant En un estudio con adultos aparentemente sanos utilizando el DRG B HCG ELISA se observaron los siguientes valores Edad a os B hCG mIU mL S GE 7 2 Pregnant women in the 2 trimester Week of N 5 Percentil 95 Percentil pregnancy valido mIU mL mIU mL 14 103 10303 71980 15 96 9246 51666 16 91 5266 36947 17 14 4632 24033 CAUTION 1 For the detection of pregnancy in serum a qualitative assay is used with a cut off point of 50 mIU mL Negative or borderline results should be repeated on a fresh specimen obtained at least 48 hours after the first specimen 2 Ithas been shown that immunological pregnancy tests may yield false results in cases of several medications and diseases such as rheumatoid arthritis In such cases the interpretation of the pregnancy test should be done carefully Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 29 DRG B HCG ELISA ElA 1911 8 CONTROL DE CALIDAD Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de contro
56. ps 96 wells Wells coated with anti B HCG antibody monoclonal 2 Standard Standard 0 5 6 vials lyophilized 1 mL Concentrations 0 5 25 50 100 200 mIU mL Conversion 1 pg mL 0 00916 mIU mL The standards are calibrated against WHO approved Reference material IRR B HCG code 75 537 See Preparation of Reagents Contain non mercury preservative 3 Sample Diluent 1 vial 10 mL ready to use Contains non mercury preservative 4 Enzyme Conjugate 1 vial 11 mL ready to use Anti B HCG antibody conjugated to horseradish peroxidase Contains non mercury preservative 5 Substrate Solution 1 vial 14 mL ready to use Tetramethylbenzidine TMB 6 Stop Solution 1 vial 14 mL ready to use contains 0 5 M H SO Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns Note Additional Sample Diluent for sample dilution is available upon request 4 2 Materials required but not provided A microtiter plate calibrated reader 450 10 nm e g the DRG Instruments Microtiter Plate Reader Calibrated variable precision micropipettes Distilled or deionized water Timer Graph paper or software for data reduction 4 3 Storage Conditions When stored at 2 C 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 C 8 C Microtiter wells must be stored at 2 C 8 C Once the foil bag
57. r le sang par ponction veineuse ex Sarstedt Monovette 02 1388 001 laisser coaguler puis s parer le s rum par centrifugation temp rature ambiante Ne pas centrifuger avant que la coagulation ne soit termin e Les patients sous traitement anti coagulant peuvent demander un temps de coagulation plus important 5 2 Conservation des chantillons Les tubes contenant les chantillons doivent tre ferm s et peuvent tre stock s jusqu cinq jours 2 C 8 C avant d tre test s Les chantillons stock s pour un temps prolong doivent tre congel s 20 C avant d tre test s Les chantillons d congel s doivent tre retourn s plusieurs fois avant le test 5 3 Dilution de l chantillon Si lors d un test pr liminaire la concentration de l chantillon se r v le tre sup rieure celle du standard le plus concentr alors l chantillon doit tre dilu avec le Sample Diluent et test de nouveau comme d crit dans R alisation du test Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration Exemple a dilution 1 10 10 uL Serum 90 uL Sample Diluent bien m langer b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Sample Diluent bien m langer b dilution 1 1000 10 pL dilution b 1 100 90 uL Sample Diluent bien m langer Remarque Les s rums de femmes enceintes doivent tre dilu s au 1 100 dans la solution pour dilution de l chantillon
58. rit Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 37 DRG B HCG ELISA ElA 1911 10 LIMITES D UTILISATION Toute utilisation impropre des chantillons ou toute modification du test peut influencer les r sultats 10 1 Substances parasites L h moglobine jusqu a 4 mg mL la bilirubine jusqu a 0 5 mg mL et les triglyc rides jusqu a 30 mg mL n ont aucune influence sur les r sultats du dosage 10 2 Drogues parasites Jusqu pr sent nous ne connaissons aucune substance drogues capable d influencer la mesure de B HCG dans un chantillon 10 3 Effet de surdosage Jusqu a 158600 mIU mL de B HCG aucun effet de surdosage n a t d tect avec ce test 11 ASPECTS LEGAUX 11 1 Fiabilit des r sultats Ce test doit tre exactement utilis selon les instructions d utilisation du fabricant De plus les utilisateurs doivent strictement respecter les r gles de la bonne pratique de laboratoire ou autres lois nationales Cela est sp cialement le cas pour l utilisation des r actifs contr les Pour chaque test il est important d inclure un nombre suffisant de contr les afin de pouvoir valider l exactitude et la pr cision du test Les r sultats du test sont valides si et seulement si tous les contr les sont compris dans les gammes de mesure mentionn es et si tous les autres param tres du test sont galement compris dans les instructions de ce test En cas de do
59. robenentnahme Serum Blut durch Venenpunktion entnehmen z B mit Sarstedt Monovette 02 1388 001 gerinnen lassen und das Serum durch Zentrifugation bei Raumtemperatur abtrennen Vor der Zentrifugation muss die Gerinnung vollstandig abgeschlossen sein Bei Patienten die Antikoagulantien erhalten kann die Gerinnungszeit langer dauern 5 2 Probenaufbewahrung Proben sollten stets gut verschlossen sein und k nnen vor Testbeginn bis zu 5 Tage bei 2 C 8 C gelagert werden Fur eine l ngere Aufbewahrung sollten die Proben eingefroren bei 20 C bis zum Testbeginn gelagert werden Nur einmal einfrieren Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden ohne Schaumbildung 5 3 Probenverdiinnung Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Probe eine Konzentration h her als der h chste Standard gefunden wird kann diese Probe mit Sample Diluent weiter verd nnt und nochmals bestimmt werden Die Verd nnung muss jedoch bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden Beispiel a Verd nnung 1 10 10 uL Serum 90 uL Sample Diluent gr ndlich mischen b Verd nnung 1 100 10 uL Verd nnung a 1 10 90 uL Sample Diluent gr ndlich mischen c Verd nnung 1 1000 10 uL Verd nnung b 1 100 90 uL Sample Diluent gr ndlich mischen Achtung Seren von Schwangeren m ssen vor Testbeginn 1 100 mit Sample Diluent verd nnt werden 6 TESTDURCHFUHRUNG 6 1 Allgemeine Hinweise Alle Reagenzien und Pro
60. rs de cette tape Incuber pendant 60 minutes temp rature ambiante Decanter le contenu des puits et rincer les puits 5 fois avec de l eau distill e 400 uL par puits Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d liminer les gouttelettes r siduelles Remarque importante La sensibilit et la pr cision de ce test sont fortement d pendantes de la bonne r alisation des tapes de lavage Ajouter 100 uL de Substrate Solution chaque puits Incuber pendant 15 minutes temp rature ambiante Stopper la r action enzymatique en ajoutant 50 uL de Stop Solution chaque puits Lire la densit optique 450 10 nm l aide d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques dans les 10 minutes apr s avoir ajout la Stop Solution Calcul des r sultats quantitative Calculer les valeurs moyennes des densit s optiques pour chaque s rie de standards contr les et chantillons Etablir la courbe talon en reportant la densit optique moyenne de chaque valeur standard en fonction de sa concentration en posant la densit optique en axe des ordonn es et la concentration en axe des abscisses L utilisation de la densit optique moyenne pour chaque chantillon d termine la concentration correspondante partir de la courbe talon M thode automatique Les r sultats dans le IFU ont t calcul s de facon automatique en utilisant une courbe de r gression 4 PL 4 Parameter Logistics D autres fonctions lo
61. rsteller Fabricant Fabricante Fabbricante Distributed by Distributor Vertreiber Distributeur Distribuidor Distributore Content Content Inhalt Contenu Contenido Contenuto Volume No Volume No Volumen Anzahl Volume Num ro Volumen N mero Volume Quantit Microtiterwells Microtiterwells Mikrotiterwells nen Placas multipocillo Micropozzetti Antiserum Antiserum Antiserum Antis rum Antisuero Antisiero Enzyme Enzyme Conjugate Enzymkonjugat Conjugu enzymatique Conjugado enzimatico Tracciante enzimatico Conjugate Enzyme Enzyme Complex Enzymkomplex Complexe Complex enzimatico Complesso enzimatico Complex enzymatique Substrate Substrate Solution Substratl sung Solution substrat Soluci n de sustrato Soluzione di substrato Solution Stop Solution Stop Solution Stoppl sung Solution d arr t Soluci n de parada Soluzione d arresto Zero Standard Zero Standard Nullstandard Zero Standard Est ndar cero Standard zero Standard Standard Standard Standard Est ndar Standard Control Control Kontrolle Contr le Control Controllo Assay Buffer Assay Buffer Assaypuffer Tampon d essai Tampon de ensayo Tampone del test Wash Solution Wash Solution Waschl sung Solution de lavage Soluci n de lavado Soluzione di lavaggio 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH eer idrossido di 1 N HCI 1NHCI 1NHCI 1N HCI 1N HCI Sample Diluent Sample Diluent nee un a diluci n Dituente dei campioni oo Conjugate Diluent E
62. s occurred Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time 5 2 Specimen Storage and Preparation Specimens should be capped and may be stored for up to 5 days at 2 C 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen Dilution If in an initial assay a specimen is found to contain more than the highest standard the specimens can be diluted with Sample Diluent and reassayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a dilution 1 10 10 uL Serum 90 uL Sample Diluent mix thoroughly b dilution 1 100 10 pL dilution a 1 10 90 uL Sample Diluent mix thoroughly c dilution 1 1000 10 uL dilution b 1 100 90 uL Sample Diluent mix thoroughly NOTE Sera of pregnant women must be diluted 1 100 in Sample Diluent before starting the assay 6 ASSAY PROCEDURE 6 1 General Remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each standard control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and tempera
63. s sind im QC Zertifikat das dem Kit beiliegt aufgef hrt Die im QC Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden Es wird ebenfalls empfohlen an nationalen oder internationalen Qualit tssicherungs Programmen teilzunehmen um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll Werten und Trends angewendet werden Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials bereinstimmen sollten die Patientenergebnisse als ung ltig eingestuft werden In diesem Fall berpr fen Sie bitte die folgenden Bereiche Pipetten und Zeitnehmer Photometer Verfallsdatum der Reagenzien Lagerungs und Inkubationsbedingungen Absaug und Waschmethode Sollten Sie nach berpr fung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma DRG in Verbindung 9 ASSAY CHARACTERISTIKA 9 1 Messbereich Der Messbereich des Testes liegt zwischen 1 200 mIU mL 9 2 Spezifit t der Antik rper Kreuzreaktivitat Die Daten entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 9 3 Sensitivit t Die analytische Sensitivit t definiert als Mittelwert plus der zweifachen Standardabweichung des Standards 0 n 20 betr gt lt 1 mIU ml Die Daten zu 9 4 Reproduzierbarkeit
64. sion of the package insert provided with the kit Be sure that everything is understood The microplate contains snap off strips Unused wells must be stored at 2 C to 8 C in the sealed foil pouch and used in the frame provided Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same sequence for each step Use reservoirs only for single reagents This especially applies to the substrate reservoirs Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution colored Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur Mix the contents of the microplate wells thoroughly to ensure good test results Do not reuse microwells Do not let wells dry during assay add reagents immediately after completing the rinsing steps Allow the reagents to reach room temperature 21 C 26 C before starting the test Temperature will affect the absorbance readings of the assay However values for the patient samples will not be affected Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation Do not use reagents beyond expiry d
65. t Informazioni su sostanze pericolose contenute nel kit sono riportate nel regolamento di sicurezza Tutti i componenti del kit che contengono siero o plasma umano sono controllati e confermati negativi per la presenza di HIV I II HbsAg e HCV con metodi conformi alle norme FDA Ciononostante tutti i componenti dovrebbero essere trattati come potenziali sostanze nocive nella manutenzione e nello smaltimento Il contatto con la Stop Solution dovrebbe essere evitato perch contiene 0 5 M H SO L acido solforico pu provocare irritazioni cutanee e ustioni Non pipettare con la bocca ed evitare il contatto con componenti del kit con la pelle o con le mucose Nelle aree in cui il test viene utilizzato non fumare mangiare bere o fare uso di prodotti cosmetici Nella manutenzione dei campioni o reagenti del kit portare guanti di latex monouso La contaminazione dei reagenti o dei campioni con microbi pu dare risultati falsi L utilizzo dovrebbe avvenire secondo regole che seguono le rispettive norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive Non utilizzare i reagenti dopo la scadenza indicata sul kit Ogni indicazione sulla quantit indicata del protocollo del kit deve essere accuratamente seguito Risultati ottimali possono essere ottenuti soltanto con l uso di pipette calibrate e spettrofotometro calibrato Componenti del kit con numeri di lotto diversi non devono essere combinati consigliabile di
66. to che test di gravidanza immunologici possono risultare falsi in casi di malattie gravi come artrite reumatica o mieloma In questi casi il test di gravidanza dovrebbe essere interpretato con molta precisione Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 22 DRG B HCG ELISA ElA 1911 8 CONTROLLO QUALIT consigliabile utilizzare i campioni controllo secondo le norme di legge Attraverso l utilizzo dei campioni controllo si pu raggiungere una verifica dei risultati giorno per giorno Dovrebbero essere adoperati campioni controllo sia con un livello normale sia con uno patologico Le referenze con i rispettivi risultati del laboratorio QC sono elencati nel QC certificato che allegato al kit valori riportati nel QC certificato si riferiscono al lotto del kit attuale e dovrebbero essere utilizzati per un raffronto dei risultati altres consigliabile di partecipare a programmi di sicurezza sulla qualit nazionali o internazionali per assicurarsi dell esattezza dei risultati Appropriati metodi statistici per l analisi dei valori controllo e delle rappresentazioni grafici dovrebbero essere adoperati Nel caso che i risultati del test non combaciano con il campo di accettazione indicato dal materiale di controllo i risultati dei pazienti devono essere considerati invalidi In questo caso si prega di controllare i seguenti fattori d errore pipette cronometri fotometro data di scadenza dei reagenti condizione di magazzinaggio e d in
67. ture Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption Asa general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature Vers 7 0 Effective 2011 10 vk 5 6 2 DRG B HCG ELISA ElA 1911 Test Procedure quantitative method Each run must include a standard curve 1 2 oa E o 6 3 Secure the desired number of Microtiter wells in the holder Dispense 25 uL of each Standard Control and samples with new disposable tips into appropriate wells Dispense 100 uL Enzyme Conjugate into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step Incubate for 60 minutes at room temperature Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 5 times with distilled water 400 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure Add 100 uL of Substrate Solution to each well Incubate for 15 minutes at room temperature Stop the enzymatic reaction by adding 50 uL of Stop Solution to each well Determine the absorbance OD of each well at 450 10 nm with a microtiter plate reader It is recommended that the wells be read with
68. ute ou d inqui tude contacter la DRG 11 2 Cons quences th rapeutiques Les suites th rapeutiques ne devront jamais tre bas es sur les r sultats de laboratoire seuls m me si les tous les r sultats du test sont en accord avec les points mentionn s dans le paragraphe 11 1 Tout r sultat rest qu une partie du tableau clinique complet d un patient Les suites th rapeutiques peuvent d couler des r sultats de laboratoire si et seulement si ceux ci sont en accord avec l ensemble du tableau clinique du patient Le r sultat du test en lui m me ne doit en aucun cas tre le seul d terminant des suites th rapeutiques suivre 11 3 Responsabilit Toute modification du kit et ou change ou m lange d un des composants de diff rents lots d un kit un autre pourrait affecter de facon n gative les r sultats attendus et la validit du test dans son ensemble De telles modifications ou changes invalident toute r clamation pour remplacement Toutes les r clamations soumises relatives au paragraphe 11 2 et dues une mauvaise interpr tation des r sultats de laboratoire de la part du client sont galement invalides N anmoins en cas de r clamation la responsabilit du fabricant n est pas de d passer les limites de la valeur du kit Tout dommage caus au kit lors de son transport n est pas du ressort de la responsabilit du fabricant 12 REFERENCES BIBLIOGRAPHIE Voir le manuel de l utilisateur en version ang
69. vation sans mercure 3 Sample Diluent Solution pour dilution de l chantillon 1 flacon 10 mL pr t l emploi Contient agent de conservation sans mercure 4 Enzyme Conjugate Conjugu enzymatique 1 flacon 11 mL pr t l emploi Anticorps anti B HCG conjugu la HRP Contient agent de conservation sans mercure 5 Substrate Solution Solution substrat 1 flacon 14 mL pr t l emploi T tram thylbenzidine TMB 6 Stop Solution Solution d arr t 1 flacon 14 mL pr t l emploi contient 0 5 M de H SO Eviter les contacts avec la solution stop Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau Remarque Un Sample Diluent pour la dilution de l chantillon peut tre fourni sur demande 4 2 Equipement et mat riel requis mais non fournis Un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr 450 10 nm ex le lecteur de microplaques de DRG Instruments GmbH Des micro pipettes de pr cision variables et calibr es Du papier absorbant De l eau distillee 4 3 Stockage et stabilit du kit Les r actifs contenus dans des flacons non ouverts stock s 2 C 8 C seront stables jusqu la date d expiration inscrite sur l tiquette Ne pas utiliser les r actifs au dela de cette date Les r actifs contenus dans des flacons ouverts doivent tre stock s 2 C 8 C Les micro plaques doivent tre stock es 2 C 8 C Une fois la capsule d aluminium ouverte
70. vent tre utilis es pour une comparaison directe avec les r sultats Il est galement recommand d utiliser les programmes d valuation de qualit nationaux ou internationaux afin de s assurer de l exactitude des r sultats Utiliser les m thodes d analyses statistiques appropri es pour l analyse des valeurs contr les et des tendances Si les r sultats ne correspondent pas aux limites tablies des contr les les r sultats concernant ces patients doivent tre consid r es comme non valides Dans ce cas tester les zones techniques suivantes m canisme de pipettage et temps spectrophotom tre dates d expiration des r actifs conditions de stockage et d incubation m thodes d aspiration et de lavage Apr s avoir tester les points mentionn s si aucune erreur n est d tect e contacter votre distributeur ou directement la DRG 9 CARACTERISTIQUES DU TEST 9 1 Zone de mesure Les limites du dosage sont comprises entre 1 200 mIU mL 9 2 Sp cificit des anticorps R action crois e Voir le manuel d utilisateur en version anglaise 9 3 Sensibilit de l analyse La sensibilit de l analyse a t calcul e partir de la moyenne la plus lev e de deux d viations standards de l analyse de vingt r plicats du Standard 0 et a t mesur e lt 1 mIU mL 9 4 Pr cision Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 9 5 Recouvrement Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 9 6 Lin a

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