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Free Estriol ELISA

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1. 1 1 Intended Use The DRG Free Estriol ELISA is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of free estriol unconjugated estriol in serum during the second half of pregnancy 1 2 Summary and Explanation Estriol E3 is the major estrogen formed by the fetoplacental unit during pregnancy Unconjugated E3 passes through the placenta into the maternal circulation where it is rapidly converted into glucuronide and sulfate derivatives to facilitate its excretion The half life of estriol in the maternal bloodstream is only 20 30 minutes lts measurement therefore offers a convenient and quick evaluation of current fetal status Plasma estriol levels increase steadily throughout pregnancy and most rapidly during the third trimester 28 40 weeks A sudden decrease in fetoplacental E3 production will result in a rapid fall in unconjugated E3 in the maternal serum There are several potential advantages to measuring unconjugated E3 rather than total serum or urinary E3 Unconjugated estriol levels are free from effects related to maternal renal or hepatic disease and are not altered by the administration of certain antibiotics Unconjugated E3 more accurately reflects fetal outcome in diabetic pregnancies and since no hydrolysis of unconjugated E3 is required a more rapid tumaround for the test result is possible 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DRG Free Estriol ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay
2. exces han Berk 11 2 PRINCIPE DU TEST 33 3 VORSICHTSMABNAHMEN rssssssssssns 12 3 PRECAUTIONS D UTILISATION iii 33 4 BESTANDTEILE DES KITS 13 4 COMPOSITION DU KIT eeeeeeeeeeeeeee 34 5 PROBENVORBEREITUNG nn 14 5 CHANTILLON i 35 6 TESTDURCHF HRUNG aaa ee 14 6 REALISATION DU TEST 35 7 ERWARTETE WERTE 16 7 VALEURS ATTENDUES 37 8 QUALIT TS KONTROLLE seisis 16 8 CONTROLE DE QUALITE nn 37 9 ASSAY CHARACTERISTIKA 17 9 CARACTERISTIQUES DU TEST n 38 10 GRENZEN DES TESTS 17 10 LIMITES D UTILISATION 38 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 18 11 ASPECTS LEGAUK Lane oe 39 12 REFERENZEN LITERATUR 18 12 REFERENCES BIBLIOGRAPHIE 39 1 INTRODUZIONE ns 19 SYMBOLS USED WITH DRG ELISAS ia 40 2 PRINCIPIO DEL TEST tai 19 3 PRECAUZIONI 0 narat adeirim 19 4 COMPONENTI DEL KIT 20 5 CAMPION suicidas 21 6 ATTUAZIONE DEL TEST 00 21 7 VALORI NORMALI 00000 23 8 CONTROLLO QUALIT 23 9 CARATTERISTICHE DEL TEST 24 10 LIMITAZIONE DEL TEST 24 11 ASPETTI LEGALI uaar 25 12 BIBLIOGRAFIA ii 25 Vers 10 0 2013 05 vk 1 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 English 1 INTRODUCTION
3. 4 COMPONENTES DEL KIT 4 1 Componentes del Kit 1 Microtiterwells Placas multipocillo 12 x 8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti Estriol policlonal 2 Standard Standard 0 4 Est ndar 6 viales 1 mL listo para usar Concentraciones 0 0 3 1 2 4 15 40 ng mL 3 Control Low amp High 2 viales 1 mL listo para usar Referir los valores y rangos del control a la etiqueta del vial o a la Hoja de datos QC Contiene conservante 4 Enzyme Conjugate Conjugado enzimatico 1 vial 14 mL listo para usar Estriol conjugado con la Peroxidasa de rabano Contiene conservante sin mercurio 5 Substrate Solution Soluci n de sustrato 1 vial 14 mL listo para usar Tetrametilbencidina TMB 6 Stop Solution Soluci n de parada 1 vial 14 mL listo para usar contiene 0 5 M H SO Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en al piel 7 Wash Solution Soluci n de lavado 1 vial 30 mL concentrado 40X ver Preparaci n de los Reactivos Nota Se puede solicitar el Standard 0 para la diluci n de la muestra 4 2 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450 10 nm ej DRG Instruments Microtiter Plate Reader Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada 4 3 Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 C 8 C los re
4. 6 2 Eseguimento del test Ogni analisi deve includere una curva standard 1 Fissare i pozzetti necessari sul supporto 2 Pipettare 10 uL di ogni Standard Control e campione nei pozzetti cambiando ogni volta la punta monouso 3 Pipettare 100 L Enzyme Conjugate in ogni pozzetto Agitare bene per 10 secondi E molto importante raggiungere un completo mescolamento 4 Incubare per 60 minuti a temperatura ambiente 5 Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti Lavare i pozzetti 4 volte con Wash Solution diluita 400 uL in ogni pozzetto Rimuovere le gocce d acqua rimanenti rivoltando la piastra su carta assorbente Importante La sensibilit e la precisazione di questo kit sono fortemente influenzate dal corretto eseguimento del lavaggio Aggiungere 100 uL della Substrate Solution ad ogni pozzetto Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente Fermare la reazione enzimatica aggiungendo 100 uL della Stop Solution ad ogni pozzetto Determinare la densit ottica a 450 10 nm con un fotometro per microtiter piastre entro 10 minuti dopo l aggiunta della Stop Solution OND 6 3 Rilevamento dei risultati 1 Determinarei valori medi della densit ottica per ogni set di standard controlli e campioni 2 Costruire una curva standard riportare i valori medi della densit ottica DO di ogni standard contro la rispettiva concentrazione dove i valori delle DO si devono trovare sull asse verticale Y e le concentrazioni sull asse oriz
5. 40 ng mL 3 Control Low amp High 2 vials 1 mL each ready to use For control values and ranges please refer to vial label or QC Datasheet Contain non mercury preservative 4 Enzyme Conjugate 1 vial 14 mL ready to use Estriol conjugated to horseradish peroxidase Contains non mercury preservative 5 Substrate Solution 1 vial 14 mL ready to use Tetramethylbenzidine TMB 6 Stop Solution 1 vial 14 mL ready to use contains 0 5 M H SO Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns 7 Wash Solution 1 vial 30 mL 40X concentrated see Preparation of Reagents Note Additional Standard 0 for sample dilution is available upon request 4 2 Materials required but not provided A microtiter plate calibrated reader 450 10 nm e g the DRG Instruments Microtiter Plate Reader Calibrated variable precision micropipettes Absorbent paper Distilled or deionized water Timer Semi logarithmic graph paper or software for data reduction 4 3 Storage Conditions When stored at 2 C to 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 C to 8 C Microtiter wells must be stored at 2 C to 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again Opened kits retain activity for two months if stored as described above 4 4 Reagent Prepa
6. hrung des Waschschrittes 100 uL Substrate Solution in jedes Well geben 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Die enzymatische Reaktion durch Zugabe von 100 uL Stop Solution in jedes Well abstoppen Die Optische Dichte bei 450 10 nm mit einem Mikrotiterplatten Leseger t innerhalb von 10 Minuten nach Zugabe der Stop Solution bestimmen Ergebnisermittlung Die durchschnittlichen Werte der Optischen Dichte OD f r jedes Set von Standards Controls und Patientenproben bestimmen Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragen der mittleren Optischen Dichte jedes Standards gegen die Konzentration wobei der OD Wert auf der vertikalen Y Achse und die Konzentration auf der horizontalen X Achse eingetragen wird Unter Verwendung der mittleren OD wird f r jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve ermittelt Automatische Methode Die in der Gebrauchsanweisung angegebenen Werte wurden automatisch mit Hilfe der 4 Parameter Gleichung bestimmt 4 Parameter Rodbard oder 4 Parameter Marquardt sind die bevorzugten Methoden Andere Auswertungsfunktionen k nnen leicht abweichende Werte ergeben Die Konzentration der Proben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden Proben die eine h here Konzentration als die des h chsten Standards enthalten m ssen verd nnt werden Dieser Verd nnungsfaktor muss bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden 1 Beispiel f r eine Standardkurve Nachfolgend wird ein t
7. n rales Tous les r actifs et chantillons doivent tre amen s a temp rature ambiante avant utilisation Tous les r actifs doivent tre m lang s sans formation de mousse Une fois la proc dure engag e toutes les tapes doivent tre r alis es sans interruption Utiliser un nouveau c ne de pipette pour chaque standard contr le ou chantillon ceci afin d viter toute contamination L absorbance est fonction du temps d incubation et de la temp rature Avant de commencer le test il est recommand de pr parer tous les r actifs bouchons ouverts de pr parer les puits des microplaques etc Cela garantira un intervalle de temps quivalent entre chaque tape sans interruption En r gle g n rale la r action enzymatique est lin airement proportionnelle au temps et la temp rature Vers 10 0 2013 05 vk 35 6 2 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 R alisation du dosage Chaque test doit inclure une courbe talon 1 2 oa Nm 6 3 Disposer le nombre de puits de micro titration d sir dans le support D poser 10 uL de chaque Standard Control et les chantillons avec de nouveaux c nes de pipette dans les puits appropri s D poser 100 uL d Enzyme Conjugate dans chaque puits Bien m langer pendant 10 secondes Il est important d obtenir un m lange parfait lors de cette tape Incuber pendant 60 minutes temp rature ambiante D canter le contenu des pu
8. 0 n 20 betr gt 0 075 ng mL Die Daten zu 9 4 Reproduzierbarkeit Pr zision 9 5 Wiederfindung 9 6 Linearit t entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 10 GRENZEN DES TESTS Jede unsachgem e Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests k nnen die Ergebnisse beeinflussen 10 1 Interferenzen Hamoglobin bis zu 4 mg mL Bilirubin bis zu 0 125 mg mL und Triglyceride bis zu 30 mg mL haben keinen Einfluss auf das Testergebnis 10 2 Beeinflussung durch Medikamente Uns sind bislang keine Stoffe Medikamente bekannt geworden deren Einnahme die Messung des Gehaltes an freiem Estriol in der Probe beeinflussen w rde 10 3 High Dose Hook Effekt Ein Hook Effekt tritt in diesem Test nicht auf Vers 10 0 2013 05 vk 17 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 11 1 Zuverl ssigkeit der Ergebnisse Der Test muss exakt gem der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden Dar ber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP Good Laboratory Practice oder andere eventuell anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien Es ist sehr wichtig bei der Testdurchf hrung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur berpr fung der Genauigkeit und Pr zision mitlaufen zu lassen Die Testergebnisse sind nur g ltig wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen li
9. 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero No usar muestras hemoliticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette para el suero permitir coagulaci n y separar el suero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 4 d as a 2 C a 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo al menos un a o han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo 5 3 Dilucion de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el est ndar mas concentrado ha de diluirse con Standard 0 y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejemplo a diluci n 1 10 10 uL Suero 90 uL Standard 0 mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Standard 0 mezclar totalmente 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1 Consideraciones generales Todos los reactivos y
10. QC Labors sind im QC Zertifikat das dem Kit beiliegt aufgef hrt Die im QC Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden Es wird ebenfalls empfohlen an nationalen oder internationalen Qualit tssicherungs Programmen teilzunehmen um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll Werten und Trends angewendet werden Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials bereinstimmen sollten die Patientenergebnisse als ung ltig eingestuft werden In diesem Fall berpr fen Sie bitte die folgenden Bereiche Pipetten und Zeitnehmer Photometer Verfallsdatum der Reagenzien Lagerungs und Inkubationsbedingungen Absaug und Waschmethode Sollten Sie nach berpr fung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma DRG in Verbindung Vers 10 0 2013 05 vk 16 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 9 ASSAY CHARACTERISTIKA 9 1 Messbereich Der Messbereich des Testes liegt zwischen 0 075 40 ng mL 9 2 Spezifit t der Antik rper Kreuzreaktivit t Die Daten entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 9 3 Sensitivit t Die analytische Sensitivit t definiert als Mittelwert minus der zweifachen Standardabweichung des Standards
11. Soluzione d arresto 1 flacone 14 mL pronto all uso contiene 0 5M H2SO Evitare il contatto con la soluzione d arresto Pu causare irritazioni cutanee e ustioni 7 Wash Solution Soluzione di lavaggio 1 flacone 30 mL concentrata 40X vedi preparazione dei reagenti Nota Ulteriore Standard 0 per la diluizione dei campioni pu essere richiesto alla ditta 42 Materiali richiesti ma non contenuti nel kit Uno spettrofotometro calibrato per micropozzetti 450 10 nm p es il DRG Instruments Microtiterplate Reader Micropipette calibrate di precisione a volume variabile Carta assorbente Acqua distillata 4 3 Magazzinaggio e stabilit del kit A2 a8 Ci reagenti non aperti rimangono reattivi fino alla data di scadenza indicata Non usare reagenti oltre questa data Tutti i reagenti aperti devono essere magazzinati a 2 C a 8 C micropozzetti devono essere magazzinati a 2 a 8 C Una volta aperti i pacchi questi devono essere richiusi accuratamente Test kits aperti rimangono attivi per due mesi se magazzinati alle condizioni sopra descritte 4 4 Preparazione dei reagenti Prima dell uso portare tutti i reagenti e il numero necessario di pozzetti a temperatura ambiente Wash Solution Diluire 30 mL Wash Solution concentrata con 1170 mL di acqua deionizzata fino ad un volume finale di 1200 mL La soluzione di lavaggio diluita stabile per 2 settimane a temperatura ambiente 4 5 Smaltiment
12. combinati consigliabile di non utilizzare pozzetti di piastre diversi anche se si tratta dello stesso lotto kit potrebbero essere stati magazzinati o spediti a condizioni diverse cosicch le caratteristiche di legame potrebbero divergere leggermente componenti chimici e reagenti preparati o gi utilizzati devono essere trattati e smaltiti secondo le norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive regolamenti di sicurezza di questo prodotto possono essere richiesti direttamente dalla ditta DRG Instruments GmbH regolamenti di sicurezza corrispondono alle norme EU 91 155 EC Vers 10 0 2013 05 vk 19 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 4 COMPONENTI DEL KIT 4 1 Contenuto del kit 1 Microtiterwells Micropozetti 12x8 file separatamente staccabili 96 pozzetti Pozzetti ricoperti con l anti Estriolo anticorpo policlonale 2 Standard Standard 0 5 6 flaconi 1 mL pronto all uso Concentrazioni 0 0 3 1 2 4 15 40 ng mL 3 Control Low amp High Controllo 2 flaconi 1 mL pronto all uso valori dei controlli sono indicati sull etichetta dei flaconi o sulla descrizione QC Contiene conservante senza mercurio 4 Enzyme Conjugate Tracciante enzimatico 1 flacone 14 mL pronto all uso Estriolo coniugato alla perossidasi di rafano Contiene conservante senza mercurio 5 Substrate Solution Soluzione di substrato 1 flacone 14 mL pronto all uso TMB benzidine tetrametilico 6 Stop Solution
13. methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DRG directly 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 0 075 40 ng mL 9 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity The following substances were tested for cross reactivity of the assay Concentration Measured Aedes sterold of steroid 2059 concentration Estriol E3 40 ng mL 0 39 39 67 ng mL Testosterone 16 ng mL 1 758 n d Estradiol E2 2 ng mL 1 579 n d Estrone E1 2 ng mL 1 712 n d Cortisol 800 ng mL 1 775 n d n d non detectable 9 3 Sensitivity The analytical sensitivity of the DRG ELISA was calculated by subtracting 2 standard deviations from the mean of 20 replicate analyses of the Standard 0 and was found to be 0 075 ng mL 9 4 Reproducibility 9 4 1 Intra Assay The within assay variability is shown below Sample n Mean ngimt cv 5 9 4 2 Inter Assay The between assay variability is shown below Sample n Mean ng mL CV Vers 10 0 2013 05 vk 8 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 9 5 Recovery Recovery of the DRG ELISA was determined by adding increasing amounts of the analyte to three different patient sera containing different amounts of endogenous analyte Each sample non spiked and spiked was assayed and analyte concentrations of the samples were calculated from the standard curve The
14. pacco a disposizione con il kit Informazioni su sostanze pericolose contenute nel kit sono riportate nel regolamento di sicurezza Tutti i componenti del kit che contengono siero o plasma umano sono controllati e confermati negativi per la presenza di HIV I II HosAg e HCV con metodi conformi alle norme FDA Ciononostante tutti i componenti dovrebbero essere trattati come potenziali sostanze nocive nella manutenzione e nello smaltimento Il contatto con la Stop Solution dovrebbe essere evitato perch contiene 0 5 M H2SQ L acido solforico pu provocare irritazioni cutanee e ustioni Non pipettare con la bocca ed evitare il contatto con componenti del kit con la pelle o con le mucose Nelle aree in cui il test viene utilizzato non fumare mangiare bere o fare uso di prodotti cosmetici Nella manutenzione dei campioni o reagenti del kit portare guanti di latex monouso La contaminazione dei reagenti o dei campioni con microbi pu dare risultati falsi L utilizzo dovrebbe avvenire secondo regole che seguono le rispettive norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive Non utilizzare i reagenti dopo la scadenza indicata sul kit Ogni indicazione sulla quantit indicata del protocollo del kit deve essere accuratamente seguito Risultati ottimali possono essere ottenuti soltanto con l uso di pipette calibrate e spettrofotometro calibrato Componenti del kit con numeri di lotto diversi non devono essere
15. 371 380 Vers 10 0 2013 05 vk 10 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 Deutsch 1 EINLEITUNG Der DRG Free Estriol ELISA wird zur quantitativen Bestimmung von freiem Estriol in Serum eingesetzt Der Test wird eingesetzt zur Uberwachung von Risikoschwangerschaften bei Verdacht auf ein Notsyndrom des Feten Nur f r In vitro Diagnostik Klinische Bedeutung Estriol bildet den Hauptanteil der durch die fetoplazentale Einheit gebildeten Ostrogene Die Estriolbestimmung dient der Beurteilung der Funktionst chtigkeit der fetoplazentalen Einheit Diese kann gest rt werden durch eine Verschlechterung der Plazentafunktion oder durch eine Notsituation des Feten Hauptsymptom einer Funktionseinschr nkung der fetoplazentalen Einheit ist die intrauterine Wachstums retardierung des Feten Erniedrigte Estriolwerte im Serum oder Urin weisen auf eine intrauterine Wachstumsretardierung hin Pl tzlich abfallende Estriolwerte sind das Symptom einer Notsituation des Feten Urin und Serum Estriolwerte steigen wahrend der Schwangerschaft exponentiell an die starkste Zunahme erfolgt nach der 32 Schwangerschaftswoche Die Streubreite der Estriolwerte gesunder Schwangerer ist gro die Werte der einzelnen Schwangeren von Tag zu Tag sind jedoch relativ konstant Schwankung etwa 20 Estriolwerte im Referenzbereich sprechen mit einer Wahrscheinlichkeit von Uber 95 gegen eine St rung der fetoplazentalen Einheit Bei einer Risikoschwangerschaft sol
16. Chargen Nr No de lot N mero de lote Lotto no Contains sufficient for lt n gt tests Ausreichend f r n Ans tze Contenu suffisant pour n tests Contenido suficiente para lt n gt ensayos Contenuto sufficiente per n saggi Storage Temperature Lagerungstemperatur Temp rature de conservation Temperatura de conservacion Temperatura di conservazione Expiration Date Mindesthaltbarkeits datum Date limite d utilisation Fecha de caducidad Data di scadenza EE Legal Manufacturer Hersteller Fabricant Fabricante Fabbricante Distributed by Distributor Vertreiber Distributeur Distribuidor Distributore Content Content Inhalt Contenu Contenido Contenuto Volume No Volume No Volumen Anzahl Volume Num ro Volumen N mero Volume Quantit Microtiterwells Microtiterwells Mikrotiterwells fae SES Placas multipocillo Micropozzetti Antiserum Antiserum Antiserum Antis rum Antisuero Antisiero Enzy me Enzyme Conjugate Enzymkonjugat Conjugu enzymatique Conjugado enzim tico Tracciante enzimatico Conjugate Enzyme Enzyme Complex Enzymkomplex Complexe Complex enzim tico Complesso enzimatico Complex enzymatique Substrate Substrate Solution Substratl sung Solution substrat Soluci n de sustrato Soluzione di substrato Solution Stop Solution Stop Solution Stoppl sung Solution d arr t Soluci n de parada Soluzione d arresto Zero Standard Zero Standard N
17. ELISA based on the principle of competitive binding The microtiter wells are coated with a polyclonal rabbit antibody directed towards an antigenic site on the Estriol molecule Endogenous Estriol of a patient sample competes with an Estriol horseradish peroxidase conjugate for binding to the coated antibody After incubation the unbound conjugate is washed off The amount of bound peroxidase conjugate is inversely proportional to the concentration of Estriol in the sample After addition of the substrate solution the intensity of colour developed is inversely proportional to the concentration of Estriol in the patient sample Vers 10 0 2013 05 vk 2 SOON 10 Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled 12 14 15 17 18 20 21 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 WARNINGS AND PRECAUTIONS This kit is for in vitro diagnostic use only For professional use only All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I II HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal Before starting the assay read the instructions completely and carefully Use the valid version of the package insert provided with the kit Be sure that everything is understood The microplate contains snap off strips Unused wells must be stored at 2 C t
18. Instructions for Use Free Estriol ELISA EIA 1612 Y 96 wells sl Legal Manufacturer Distributed by DRG DRG Instruments GmbH Germany Division of DRG International Inc Frauenbergstr 18 D 35039 Marburg Telefon 49 0 6421 17000 Fax 49 0 642 1 1700 50 Internet www drg diagnostics de E mail drg drg diagnostics de CE DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 Contents Inhaltsverzeichnis Contenuti Contenido Contenu 1 INTRODUC TON es irsin 32 24 ee 2 1 INTRODUCCIEN n 26 2 PRINCIPLE OF THE TEST 2 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO ire 26 3 WARNINGS AND PRECAUTIONS 3 3 PRECAUCIONES aiitem a 26 4 REAGENTS ona EN ee ne 4 A COMPONENTES DEL KIT 27 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION 5 5 MUESTRAS cion traidora 28 6 ASSAY PROCEDURE sers 5 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 28 7 EXPECTED NORMAL VALUES 7 7 VALORES ESPERADOS nin ann 30 8 QUALITY CONTROL 8 8 CONTROL DECALUIDAD 30 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 8 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 31 10 LIMITATIONS OF USE 9 10 LIMITACIONES DE USO nenn 31 11 SBEESALASPECTS Se es ee 10 11 ASPECTOS LEGALES enenenemenmnnenn 32 12 REFERENCES LITERATURE sin 10 12 REFERENCIAS BIBLIOGRAFIA 32 1 EINLEITUNG aaea aira ediino 11 1 INTRODUCTION nennen 33 2 TESTPRINZIP 2 4
19. aciones superiores al mayor est ndar han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n 1 Ejemplo de una Curva Est ndar T pica Los siguientes datos son solamente para la explicaci n y no pueden ser utilizados en lugar de los datos generados en el momento del ensayo StandardO D sst Standard 1 0 3 ng ml Standard 1 2 ng ml Standard 3 4 0 ngm Standard 4 _ 15 0 ng ml Standard 5 40 0 ng ml Vers 10 0 2013 05 vk 29 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales 7 1 Valores con adultos aparentemente sanos En un estudio con adultos aparentemente sanos utilizando el DRG Free Estriol ELISA se observaron los siguientes valores Poblaci n N v lido Percentil 5 ng mL Percentil 95 ng mL Semanas de embarazo con gemelo cin ng mL Ges ng mL 18 22 23 27 16 24 25 29 17 26 27 30 18 28 29 3 2 20 7 2 Valores durante embarazo p m post menstruationem Semanas de embarazo p m ea TENER EN CUENTA Para importancia cl nica consultar el manual de usuario en ingl s Cap tulo 7 EXPECTED VALUES 8 CONTROL DE CALIDAD Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar co
20. activos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos m s all de esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 C 8 C Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 C 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo Los kits abiertos conservan su actividad durante dos meses si se almacenan como se ha descrito arriba 4 4 Preparaci n de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el n mero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Wash Solution Mezclar 30 mL de Wash Solution concentrada con 1170 mL de agua desionizada hasta un volumen final de 1200 mL La soluci n del lavado diluida es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente 4 5 Eliminaci n del Kit La eliminaci n del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informaci n especial de este producto ver cap tulo 13 4 6 Kits de ensayo da ados En caso de que exista cualquier da o severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a DRG no mas tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n Despu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales Vers 10 0 2013 05 vk 27 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612
21. e Serum Blut durch Venenpunktion entnehmen z B mit Sarstedt Monovette f r Serum gerinnen lassen und das Serum durch Zentrifugation bei Raumtemperatur abtrennen Vor der Zentrifugation muss die Gerinnung vollstandig abgeschlossen sein Bei Patienten die Antikoagulantien erhalten kann die Gerinnungszeit langer dauern 5 2 Probenaufbewahrung Proben sollten stets gut verschlossen sein und k nnen vor Testbeginn bis zu 4 Tage bei 2 C bis 8 C gelagert werden F r eine l ngere Aufbewahrung mindestens 1 Jahr sollten die Proben eingefroren bei 20 C bis zum Testbeginn gelagert werden Nur einmal einfrieren Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden ohne Schaumbildung 5 3 Probenverdinnung Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Probe eine Konzentration h her als der h chste Standard gefunden wird kann diese Probe mit Standard 0 weiter verd nnt und nochmals bestimmt werden Die Verd nnung muss jedoch bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden Beispiel a Verd nnung 1 10 10 uL Serum 90 uL Standard 0 gr ndlich mischen b Verd nnung 1 100 10 uL Verd nnung a 1 10 90 uL Standard 0 gr ndlich mischen 6 TESTDURCHF HRUNG 6 1 Allgemeine Hinweise Alle Reagenzien und Proben m ssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchmischt werden Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden Wenn die Testdurchf hrung einmal begonnen wurde muss sie ohne Unt
22. ed Population Valid N 5 Percentile ng mL 95 Percentile ng mL Females not pregnant 0 057 0 822 The results alone should not be the only reason for any therapeutic consequences The results should be correlated to other clinical observations and diagnostic tests 7 2 Values during pregnancy p m post menstruationem Week of Expected range Week of Expected range Twin pregnancy gestation gestation p m ng mL m ng mL ng mL CLINICAL SIGNIFICANCE The measurement of Estriol E3 in body fluids has routinely been used for the monitoring and management of fetal well being particularly in the high risk pregnant patient The concentration of E3 in plasma increases gradually during the first 20 weeks gestation and more rapidly during the third trimester Since the ranges for normal and abnormal serum conjugated E3 are wide and overlap considerably a single E3 determination is of little value The patient should be monitored frequently to establish any individual trend Consistently low levels or a sudden and continual decrease of serum E3 during the third trimester is highly indicative of fetal distress and possibly intrauterine death When such observations are made the status of the fetus should be assessed by alternative methods Interpretation of serum unconjugated E3 levels should be made in conjunction with other clinical tests or diagnostic procedures such as amniocentesis and ultrasound Subnormal E3 levels may al
23. egen und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebenen Spezifikationen f r diesen Assay erf llen Wenn Sie bez glich eines Ergebnisses Zweifel oder Bedenken haben setzen Sie sich bitte mit der Firma DRG in Verbindung 11 2 Therapeutische Konsequenzen Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen selbst dann nicht wenn alle Testergebnisse mit den in 11 1 genannten Voraussetzungen bereinstimmen Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten Nur in F llen in denen die Laborergebnisse in akzeptabler bereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage f r die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen 11 3 Haftung Jegliche Ver nderungen des Testkits und oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen k nnen die gew nschten Ergebnisse und die G ltigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen Solche Ver nderungen und oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzanspr che zur Folge Reklamationen die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gem Punkt 11 2 erfolgen sind ebenfalls abzuweisen Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschr nkt Jeg
24. ekehrt proportional der Konzentration an freiem Estriol in der Probe Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen Vers 10 0 2013 05 vk 11 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 VORSICHTSMABNAHMEN Dieser Kit ist nur zum in vitro diagnostischen Gebrauch geeignet Nur die g ltige im Testkit enthaltene Arbeitsanleitung verwenden Informationen zu im Kit enthaltenen gef hrlichen Substanzen entnehmen Sie bitte dem Materialsicherheitsdatenblatt Alle Bestandteile dieses Testkits die humanes Serum oder Plasma enthalten wurden mit FDA gepr ften Methoden auf HIV I II HosAg und HCV getestet und als negativ best tigt Jedoch sollten alle Bestandteile im Umgang und bei der Entsorgung wie m gliche Gefahrenstoffe betrachtet werden Der Kontakt mit der Stop Solution sollte vermieden werden da sie 0 5 M H2SO enth lt Schwefels ure kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen Nicht mit dem Mund pipettieren und den Kontakt von Kitbestandteilen und Proben mit Haut und Schleimh uten vermeiden In den Bereichen in denen Proben oder Kitbestandteile verwendet werden nicht rauchen essen oder Kosmetika verwenden Beim Umgang mit Proben oder Reagenzien Einweg Latexhandschuhe tragen Die Verunreinigung von Reagenzien oder Proben mit Mikroben kann zu falschen Ergebnissen f hren Der Gebrauch sollte gem der Vorschriften einer entsprechenden nationalen Gefahrenstoff Sicherheitsrichtlinie erfolgen Reagenzien nic
25. erbrechung zu Ende gef hrt werden F r jeden Standard jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden um Verschleppungen zu vermeiden Die Optische Dichte ist abh ngig von Inkubationszeit und Temperatur Deshalb ist es notwendig vor Beginn der Testdurchf hrung alle Reagenzien in einen arbeitsbereiten Zustand zu bringen die Deckel der Fl schchen zu ffnen alle ben tigten Wells in den Halter zu setzen Nur eine solche Vorbereitung garantiert gleiche Zeiten f r jeden Pipettiervorgang ohne Pausen Als generelle Regel gilt dass die enzymatische Reaktion linear proportional zu Zeit und Temperatur ist Vers 10 0 2013 05 vk 14 6 2 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 Testdurchf hrung Jeder Lauf muss eine Standardkurve beinhalten 1 2 3 0 0 6 3 Die ben tigte Anzahl Wells in der Halterung befestigen Je 10 uL Standard Control und Proben mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Wells geben 100 uL Enzyme Conjugate in jedes Well geben F r 10 Sekunden gut sch tteln Es ist sehr wichtig in diesem Schritt eine komplette Durchmischung zu erreichen 60 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells 4 mal mit verd nnter Wash Solution 400 uL waschen Verbleibende Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfernen Achtung Die Sensitivit t und Pr zision dieses Assays wird erheblich beeinflusst von der korrekten Durchf
26. ero durante la gravidanza p m post menstruationem Settimana di Settimana di E relied dee sing ng mL Je ng mL ss Ban ng mL ez 27 16 2027 30 18 10 44 28 29 32 20 0 3 031 24 25 20 17 0 4 1 4 6 5 30 31 3 6 22 1 9 11 36 37 7 2 29 2 1 13 38 39 7 8 37 2 6 14 40 42 8 0 39 1 6 85 34 35 5 1 25 ATTENZIONE Per interpretazione clinica consultare la metodica in inglese Capitolo 7 EXPECTED VALUES 8 CONTROLLO QUALIT consigliabile utilizzare i campioni controllo secondo le norme di legge Attraverso l utilizzo dei campioni controllo si pu raggiungere una verifica dei risultati giorno per giorno Dovrebbero essere adoperati campioni controllo sia con un livello normale sia con uno patologico Le referenze con i rispettivi risultati del laboratorio QC sono elencati nel QC certificato che allegato al kit valori riportati nel QC certificato si riferiscono al lotto del kit attuale e dovrebbero essere utilizzati per un raffronto dei risultati E altres consigliabile di partecipare a programmi di sicurezza sulla qualit nazionali o internazionali per assicurarsi dell esattezza dei risultati Appropriati metodi statistici per l analisi dei valori controllo e delle rappresentazioni grafici dovrebbero essere adoperati Nel caso che i risultati del test non combaciano con il campo di accettazione indicato dal materiale di controllo i risultati dei pazienti devo
27. fied ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DRG 11 2 Therapeutic Consequences Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences 11 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer 12 REFERENCES LITERATURE Bashore R A Westlake J R Plasma unconjugated estriol values in high risk pregnancy Am J Obstet Gynecol June 15 1977 p
28. ht nach dem auf dem Kit Etikett angegebenen Verfallsdatum verwenden Alle im Kit Protokoll angegebenen Mengen m ssen genau eingehalten werden Optimale Ergebnisse k nnen nur durch Verwendung kalibrierter Pipetten und Mikrotiterplatten Leseger te erreicht werden Komponenten von Kits mit unterschiedlichen Lotnummern nicht untereinander vertauschen Es wird empfohlen keine Wells von verschiedenen Platten zu verwenden auch nicht wenn es sich um das gleiche Lot handelt Die Kits k nnen unter anderen Bedingungen gelagert oder versendet worden sein so dass die Bindungscharakteristik der Platten leicht unterschiedlich ausf llt Chemikalien und zubereitete oder bereits benutzte Reagenzien m ssen gem den nationalen Gefahrenstoffvorschriften wie gef hrlicher Abfall behandelt werden Materialsicherheitsdatenbl tter f r dieses Produkt sind auf Anfrage direkt von der Firma DRG Instruments GmbH erh ltlich Die Materialsicherheitsdatenbl tter entsprechen den Verordnungen der EU Richtlinie 91 155 EC Vers 10 0 2013 05 vk 12 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 4 BESTANDTEILE DES KITS 4 1 Kitinhalt 1 Microtiterwells 96 Wells 12 x 8 Wells einzeln brechbar mit anti Estriol Antik rper polyklonal beschichtet 2 Standard Standard 0 5 6 Fl schchen je 1 mL gebrauchsfertig Konzentrationen 0 0 3 1 2 4 15 40 ng mL 3 Control Low amp High Kontrolle 2 Fl schchen 1 mL gebrauchsfertig Kontrollwerte und bereiche e
29. ico dell ammalato si possono intraprendere delle conseguenze terapeutiche Il risultato del test da solo non base sufficiente per lo stabilimento di una terapia 11 3 Responsabilit legali Ogni cambiamento del protocollo del test e o lo scambio o il mescolamento di componenti provenienti da cariche diverse possono influenzare negativamente i risultati e compromettere la validit del test Questi cambiamenti e o scambi annullano ogni diritto al risarcimento Si respingano inoltre tutti i richiami risultanti da interpretazioni sbagliate da parte dell utente secondo il paragrafo 11 2 Nel caso di reclamazione la garanzia del produttore limitato al valore massimo del test kit Ogni danno provocato durante il trasporto del kit non sottost alla responsabilit del produttore 12 BIBLIOGRAFIA Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese Vers 10 0 2013 05 vk 25 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 1 INTRODUCCION El Kit de inmunoensayo enzimatico DRG Free Estriol proporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantitativa del Estriol libre en suero Este ensayo est dise ado solo para diagn stico in vitro 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DRG Free Estriol ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio de uni n competitiva Los pocillos de las placas est n recubiertos con un anticuerpo policlonal dirigido contra un foci antig nico en la m
30. ing time 5 2 Specimen Storage and Preparation Specimens should be capped and may be stored for up to 4 days at 2 C to 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time least one year should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen Dilution If in an initial assay a specimen is found to contain more than the highest standard the specimens can be diluted with Standard 0 and reassayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a dilution 1 10 10 uL Serum 90 uL Standard 0 mix thoroughly b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Standard 0 mix thoroughly 6 ASSAY PROCEDURE 6 1 General Remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each standard control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption Asa general rule the enzymatic reac
31. isez uniquement la version valide d instructions d utilisation qui est incluse dans le kit Les informations concernant la toxicit des r actifs contenus dans ce kit sont pr sent es dans la fiche de s curit Material Safety Data Sheets Tous les r actifs de ce kit contenant du s rum ou du plasma humain ont t test s avec des r sultats n gatifs pour le VIH I II le HBsAg et le HCV selon les normes FDA en vigueur N anmoins lors de leur utilisation tous les r actifs de ce kit doivent tre manipul s avec pr caution Eviter les contacts avec la Stop Solution celle ci contient 0 5 M de H2SO Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau Ne jamais pipeter avec la bouche et viter tout contact de la peau ou des muqueuses avec les r actifs ou les chantillons Ne pas fumer manger boire ou utiliser des produits cosm tiques dans les zones o les chantillons ou le kit ont t mani s Porter des gants d examen lors de l utilisation des chantillons ou des r actifs Une contamination microbienne des chantillons ou des r actifs pourrait fausser les r sultats L utilisation de ce kit devra tre en accord avec les normes ou recommandations nationales de s curit en vigueur concernant les produits risque biologique Ne pas utiliser les r actifs au del de la date d expiration inscrite sur l emballage Tous les volumes indiqu s doivent tre scrupuleusement
32. its et rincer les puits 4 fois avec de la Wash Solution dilu e 400 uL par puits Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d liminer les gouttelettes r siduelles Remarque importante La sensibilit et la pr cision de ce test sont fortement d pendantes de la bonne r alisation des tapes de lavage Ajouter 100 pL de Substrate Solution a chaque puits Incuber pendant 30 minutes temp rature ambiante Stopper la r action enzymatique en ajoutant 100 uL de Stop Solution a chaque puits Lire la densit optique 450 10 nm l aide d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques dans les 10 minutes apr s avoir ajout la Stop Solution Calcul des r sultats Calculer les valeurs moyennes des densit s optiques pour chaque s rie de standards contr les et chantillons Etablir la courbe talon en reportant la densit optique moyenne de chaque valeur standard en fonction de sa concentration en posant la densit optique en axe des ordonn es et la concentration en axe des abscisses L utilisation de la densit optique moyenne pour chaque chantillon d termine la concentration correspondante a partir de la courbe talon M thode automatique Les r sultats dans les instructions d utilisation ont t calcul s de fagon automatique en utilisant une courbe de r gression 4 Param tres 4 param tres Rodbard ou 4 param tres Marquardt sont les m thodes favorites D autres fonctions logistiques peuvent donne
33. kit est n siendo usados Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultados err neos El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las placas pueden resultar diferentes Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a DRG Instruments GmbH Las hojas de los datos de seguridad se ajustan a las demandas de las gu a europea EU Guideline 91 155 EC Vers 10 0 2013 05 vk 26 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612
34. l analisi Congelare soltanto una volta Invertire campioni scongelati alcune volte prima dell uso 5 3 Diluizione dei campioni Se in un campione di siero viene trovata una concentrazione oltre lo standard piu alto questo campione pu essere diluito con lo Standard 0 e nuovamente determinato Della diluizione deve essere per tenuto conto Esempio a diluizione 1 10 10 uL siero 90 uL Standard 0 agitare bene b diluizione 1 100 10 uL della diluizione a 90 uL Standard 0 agitare bene 6 ATTUAZIONE DEL TEST 6 1 Indicazioni generali Tutti i reagenti e i campioni devono essere portati a temperatura ambiente e ben mescolati prima dell uso Evitare la formazione di schiume Una volta iniziato il procedimento del test questo deve essere portato alla fine senza interruzione Per ogni componente standard controllo o campione necessario utilizzare una nuova punta monouso per evitare reazioni incrociate La densit ottica dipende dal tempo d incubazione e dalla temperatura Perci si rende necessario di preparare tutti i reagenti di aprire i tappi dei flaconi e di appostare tutti i pozzetti nelle appropriate posizioni Soltanto una tale preparazione garantisce gli stessi tempi per ogni processo di pipettamento Come regola generale vale che la reazione enzimatica si svolge linearmente proporzionale con il tempo e con la temperatura Vers 10 0 2013 05 vk 21 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612
35. l etwa ab der 33 Schwangerschaftswoche in ein bis mehrt gigen Abstanden eine Estriolbestimmung erfolgen Niedrige Werte sprechen bei normalem Aufwartstrend gegen eine Notsituation des Feten sind jedoch h ufig Anzeichen eines reduzierten fetalen K rpergewichts Als ung nstig zu beurteilen ist ein Abfallen der Estriolwerte f r l nger als zwei Tage um 50 und mehr oder ein Absinken unter die entsprechenden Referenzwertbereiche Bei der Interpretation niedriger Estriolwerte m ssen sowohl rein fetale Ursachen anenzephale Missbildungen Mongolismus als auch plazentale Ursachen Molenschwangerschaft bedacht werden Hohe Estriolwerte werden bei Zwillingsschwangerschaften gemessen 2 TESTPRINZIP Der DRG Free Estriol ELISA ist ein Festphasen Enzymimmunoassay der auf dem Prinzip der kompetitiven Bindung basiert Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem polyklonalen Antik rper beschichtet der gegen eine Antik rper Bindungsstelle des Estriol Molek ls gerichtet ist Die Proben werden in die beschichteten Wells gegeben und zusammen mit einem Estriol Enzymkonjugat inkubiert Wahrend der Inkubation konkurriert das Estriol aus der Probe mit dem Estriol Enzymkonjugat um die freien Bindungsstellen auf den beschichteten Wells Das nicht gebundene Konjugat wird durch Waschen der Wells entfernt AnschlieBend wird die Substratl6sung zugegeben und die Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt Die Intensit t der gebildeten Farbe ist umg
36. lamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante 12 REFERENCIAS BIBLIOGRAF A Consultar el manual de usuario en ingl s Vers 10 0 2013 05 vk 32 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 Francais 1 INTRODUCTION Le kit de dosage immuno enzymatique DRG Free Estriol ELISA propose les mat riaux requis pour la mesure quantitative de Estriol libre dans le s rum Ce kit est utiliser uniquement dans le cadre de tests diagnostiques in vitro 2 PRINCIPE DU TEST Le kit DRG Free Estriol ELISA est bas sur une r action immuno enzymatique comp titive Les micro plaques sont recouvertes avec un anticorps polyclonal dirig contre un antig ne sp cifique de la mol cule Estriol L Estriol endog ne contenu e dans l chantillon du patient entre en comp tition avec le conjugu e la HRP pour la liaison l anticorps Apr s incubation le conjugu non li est limin durant le lavage des puits La quantit de peroxidase li e est inversement proportionnelle a la concentration d Estriol contenue dans l chantillon Suite l addition de solution substrat l intensit de coloration obtenue est inversement proportionnelle la concentration de Estriol libre contenue dans l chantillon 3 PRECAUTIONS D UTILISATION Ce kit est uniquement destin aux tests diagnostiques in vitro Util
37. les r gles de la bonne pratique de laboratoire ou autres lois nationales Cela est sp cialement le cas pour l utilisation des r actifs contr les Pour chaque test il est important d inclure un nombre suffisant de contr les afin de pouvoir valider l exactitude et la pr cision du test Les r sultats du test sont valides si et seulement si tous les contr les sont compris dans les gammes de mesure mentionn es et si tous les autres param tres du test sont galement compris dans les instructions de ce test En cas de doute ou d inqui tude contacter la DRG 11 2 Cons quences th rapeutiques Les suites th rapeutiques ne devront jamais tre bas es sur les r sultats de laboratoire seuls m me si les tous les r sultats du test sont en accord avec les points mentionn s dans le paragraphe 11 1 Tout r sultat n est qu une partie du tableau clinique complet d un patient Les suites th rapeutiques peuvent d couler des r sultats de laboratoire si et seulement si ceux ci sont en accord avec l ensemble du tableau clinique du patient Le r sultat du test en lui m me ne doit en aucun cas tre le seul d terminant des suites th rapeutiques a suivre 11 3 Responsabilit Toute modification du kit et ou change ou m lange d un des composants de diff rents lots d un kit un autre pourrait affecter de fagon n gative les r sultats attendus et la validit du test dans son ensemble De telles modifications ou changes inva
38. liche Sch den die w hrend des Transports am Kit entstanden sind unterliegen nicht der Haftung des Herstellers 12 REFERENZEN LITERATUR Angaben zu den Referenzen entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung Vers 10 0 2013 05 vk 18 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 1 INTRODUZIONE Il test immuno enzimatico DRG Free Estriol ELISA contiene materiale per la determinazione quantitativa di Estriolo in siero Questo test kit adatto soltanto per l uso diagnostico 2 PRINCIPIO DEL TEST Il test Free Estriol ELISA un test immunologico in fase solida con enzimi ancorati su un substrato ELISA basato sul principio del legame competitivo micropozzetti sono ricoperti con un anticorpo policlonale diretto contro un unico sito antigenico della molecola Estriolo Estriolo endogena di un campione compete con il Estriolo coniugato alla per ossidasi di rafano per il sito di legame sull anticorpo ancorato nel micropozzo Dopo l incubazione il coniugato non legato lavato via La quantit della perossidasi coniugata legata inversamente proporzionale alla concentrazione di Estriolo nel campione Dopo l aggiunta della soluzione substrato l intensit del colore sviluppato inversamente proporzionale alla concentrazione di Estriolo libero nel campione del paziente 3 PRECAUZIONI Questo kit adatto soltanto per l uso diagnostico in vitro Si prega di usare la versione valida dell inserto del
39. lidad Anal tica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media menos dos desviaciones est ndar de veinte 20 r plicas del Est ndar 0 y result ser 0 075 ng mL 9 4 Precisi n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 5 Recuperaci n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 6 Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s 10 LIMITACIONES DE USO Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados 10 1 Sustancias que pueden interferir Hemoglobina hasta 4 mg mL Bilirrubina hasta 0 125 mg mL y Triglic ridos hasta 30 mg mL no influencian los resultados del ensayo 10 2 Interferencias con drogas Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de Estriol libre en una muestra 10 3 Efecto Gancho Dosis Elevada No se ha observado efecto gancho en este ensayo Vers 10 0 2013 05 vk 31 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 11 ASPECTOS LEGALES 11 1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas aun el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Practicas de Laboratorio o a otros estandares y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un numero suficiente de co
40. lident toute r clamation pour remplacement Toutes les r clamations soumises relatives au paragraphe 11 2 et dues une mauvaise interpr tation des r sultats de laboratoire de la part du client sont galement invalides N anmoins en cas de r clamation la responsabilit du fabricant n est pas de d passer les limites de la valeur du kit Tout dommage caus au kit lors de son transport n est pas du ressort de la responsabilit du fabricant 12 REFERENCES BIBLIOGRAPHIE Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise Vers 10 0 2013 05 vk 39 SYMBOLS USED WITH DRG ELISAS DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 Symbol English Deutsch Frangais Espafiol Italiano CN MN European Conformity CE Konformit ts kennzeichnung Conforme aux normes europ ennes Conformidad europea Conformit europea Consult instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Consulter les instructions d utilisation Consulte las Instrucciones Consultare le istruzioni per l uso BE In vitro diagnostic device In vitro Diagnostikum Usage Diagnostic in vitro Para uso Diagn stico in vitro Per uso Diagnostica in vitro Nur f r Seulement dans le S lo para uso en na RUO For research use only Forschungszwecke cadre de recherches investigaci n Solo a scopo di ricerca Catalogue number Katalog Nr R f rence N mero de cat logo No di Cat Lot No Batch code
41. llos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado Adicionar 100 uL de Substrate Solution a cada pocillo Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 100 HL de Stop Solution a cada pocillo Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution C lculo de los Resultados Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de est ndares controles y muestras de pacientes Construir una curva est ndar mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada est ndar frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva est ndar M todo automatizado Los resultados en las instrucciones de uso se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 Par metros 4 Par metros Rodbard o 4 Par metros Marquardt son los m todos preferidos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes La concentraci n de las muestra puede leerse directamente de la curva de est ndares Las muestras con concentr
42. muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada est ndar control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura Vers 10 0 2013 05 vk 28 6 2 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 Procedimiento de ensayo Cada uno debe incluir una curva de estandares 1 2 3 Jo 6 3 Asegurar el numero deseado de pocillos en el recipiente Dispensar 10 HL de cada Standard Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados Dispensar 100 uL de Enzyme Conjugate a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso Incubar durante 60 minutes a temperatura ambiente Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 4 veces con Wash Solution diluida 400 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los poci
43. nd microtiter plate readers Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H2SQ It may cause skin irritation and burns Some reagents contain Proclin 300 BND and or MIT as preservatives In case of contact with eyes or skin flush immediately with water TMB substrate has an irritant effect on skin and mucosa In case of possible contact wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water Wash contaminated objects before reusing them If inhaled take the person to open air Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline or regulation For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets Material Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DRG Vers 10 0 2013 05 vk 3 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 4 REAGENTS 4 1 Reagents provided 1 Microtiterwells 12 x 8 break apart strips 96 wells Wells coated with anti Estriol antibody polyclonal 2 Standard Standard 0 5 6 vials 1 mL ready to use Concentrations 0 0 3 1 2 4 0 15
44. no essere considerati invalidi In questo caso si prega di controllare i seguenti fattori d errore pipette cronometri fotometro data di scadenza dei reagenti condizione di magazzinaggio e d incubazione metodi di aspirazione e di lavaggio Se dopo il controllo dei suddetti fattori non rilevabile alcun errore si prega di contattare il fornitore o direttamente la ditta DRG Vers 10 0 2013 05 vk 23 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 9 CARATTERISTICHE DEL TEST 9 1 Assay Dynamic Range Le concentrazioni determinabili con questo test stanno tra 0 075 40 ng mL 9 2 Specificit degli anticorpi reazioni ad incrocio Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 3 Sensitivita analitica La sensitivit analitica stata calcolata dai valori medi meno due deviazioni standard di venti 20 repliche dello Standard 0 ed erano 0 075 ng mL 9 4 Precisione Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 5 Ritrovato Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 6 Linearita Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 10 LIMITAZIONE DEL TEST Ogni manutenzione impropria dei campioni o modificazione del protocollo pu influenzare risultati 10 1 Sostanze interferenti Emoglobina fino a 4 mg mL bilirubina fino a 0 125 mg mL e trigliceridi fino a 30 mg mL non influenzano i risultati di questo test 10 2 Droghe interferenti Fino ad oggi nessuna sostan
45. ntnehmen Sie bitte dem Flaschchenetikett oder dem QC Datenblatt Enthalt quecksilberfreies Konservierungsmittel 4 Enzyme Conjugate Enzymkonjugat 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Estriol mit Meerrettichperoxidase konjugiert Enthalt quecksilberfreies Konservierungsmittel 5 Substrate Solution Substratl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Substratl sung TMB 6 Stop Solution Stoppl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Kontakt mit der Stoppl sung vermeiden Kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen 7 Wash Solution Waschl sung 40X konzentriert 1 Fl schchen 30 mL Siehe Vorbereitung der Reagenzien Anmerkung Zus tzlicher Standard 0 zur Probenverd nnung ist auf Anfrage erh ltlich 4 2 Erforderliche aber nicht enthaltene Ger te und Materialien Kalibriertes Mikrotiterplattenleseger t mit 450 10 nm Filter z B das DRG Instruments Mikrotiterplattenleseger t Kalibrierte variable Pr zisions Mikropipette Saugf higes Papier Destilliertes Wasser 4 3 Lagerung und Haltbarkeit des Kits Die unge ffneten Reagenzien behalten bei Lagerung um 2 C bis 8 C ihre Reaktivitat bis zum Verfallsdatum Nach dem Verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden Nach dem Offnen sollten alle Reagenzien bei 2 C bis 8 C gelagert werden Die Mikrotiterwells sollten bei 2 C bis 8 C gelagert werden Der einmal gedffnete Folienbeutel sollte stets sehr sorgfaltig wieder verschlo
46. ntr les selon les r glementations nationales en vigueur L utilisation des chantillons contr les est recommand afin de s assurer jour apr s jour de la validit des r sultats Utiliser les contr les de valeurs normales et pathologiques Les contr les et les r sultats correspondants issus du laboratoire QC sont mentionn s dans le certificat QC fourni avec le kit Les valeurs et les limites mentionn es sur la fiche QC font toujours r f rence au lot de kit courant et doivent tre utilis es pour une comparaison directe avec les r sultats Il est galement recommand d utiliser les programmes d valuation de qualit nationaux ou internationaux afin de s assurer de l exactitude des r sultats Utiliser les m thodes d analyses statistiques appropri es pour l analyse des valeurs contr les et des tendances Si les r sultats ne correspondent pas aux limites tablies des contr les les r sultats concernant ces patients doivent tre consid r es comme non valides Dans ce cas tester les zones techniques suivantes m canisme de pipettage et temps spectrophotometre dates d expiration des r actifs conditions de stockage et d incubation m thodes d aspiration et de lavage Apr s avoir tester les points mentionn s si aucune erreur n est d tect e contacter votre distributeur ou directement la DRG Vers 10 0 2013 05 vk 37 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 9 CARACTERISTIQUES DU TEST 9 1 Zone de me
47. ntroles para validar la exactitud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par metros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con DRG 11 2 Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente se pueden derivar consecuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 11 3 Responsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier rec
48. ntroles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparaci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utilizar m todos estad sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ning n error contactar con su distribuidor o con DRG directamente Vers 10 0 2013 05 vk 30 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 9 CARACTERISTICAS DEL ENSAYO 9 1 Rango din mico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre 0 075 40 ng mL 9 2 Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Consultar el manual de usuario en ingl s 9 3 Sensibi
49. o 8 C in the sealed foil pouch and used in the frame provided Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same sequence for each step Use reservoirs only for single reagents This especially applies to the substrate reservoirs Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution coloured Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur Mix the contents of the microplate wells thoroughly to ensure good test results Do not reuse microwells Do not let wells dry during assay add reagents immediately after completing the rinsing steps Allow the reagents to reach room temperature 21 26 C before starting the test Temperature will affect the absorbance readings of the assay However values for the patient samples will not be affected Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes a
50. o del kit Lo smaltimento del kit deve avvenire secondo le regole a norma di legge Informazioni particolareggiate per questo prodotto si trovano nel regolamento di sicurezza capitolo 13 4 6 Test kits danneggiati Nel caso di gravi danneggiamenti del kit o dei suoi componenti deve avvenire una dichiarazione scritta alla ditta DRG al piu tardi una settimana dopo il ricevimento del kit Componenti danneggiati non dovrebbero essere utilizzati per il test Questi componenti devono essere magazzinati fino ala soluzione del problema Dopo di che essi devono essere smaltiti secondo le norme ufficiali Vers 10 0 2013 05 vk 20 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 5 CAMPIONI Siero pu essere usato per questo test Non usare campioni emolitici itterici o lipemici Attenzione Se i campioni contengono sodio azide non devono essere utilizzati per questo test 5 1 Collezione dei campioni Siero Collezionare sangue tramite puntura venale p es Sarstedt Monovette per siero far coagulare e separare il siero centrifugando a temperatura ambiente Non centrifugare prima che la coagulazione sia completata Campioni di pazienti con una terapia anticoagulante possono richiedere pi tempo per la coagulazione 5 2 Magazzinaggio dei campioni I campioni dovrebbero essere magazzinati ben chiusi fino a 4 giorni a 2 C a 8 C Campioni magazzinati per un periodo pi lungo almeno 1 anno dovrebbero essere congelati solo una volta a 20 prima del
51. ol cula Estriol En las muestras de los pacientes Estriol compite con un conjugado Estriol peroxidasa de r bano en la uni n al anticuerpo inmovilizado Despu s de la incubaci n el conjugado no unido se lava La cantidad de conjugado de peroxidasa unido es inversamente proporcional a la concentraci n de Estriol en la muestra Despu s de la adici n de la soluci n sustrato la intensidad de color desarrollado es inversamente proporcional a la concentraci n de Estriol libre en la muestra del paciente 3 PRECAUCIONES Este kit es solamente para diagn stico in vitro Por favor se usa solo la version valida de la metodico t cnico incluido aqui en el kit Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV I II HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos Evitar contacto con Stop Solution que contiene HSO 0 5 M Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas No fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del
52. percentage recoveries were determined by comparing expected and measured values of the samples Range of Recovery 9 6 Linearity 10 LIMITATIONS OF USE Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a complete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results 10 1 Interfering Substances Haemoglobin up to 4 mg mL bilirubin up to 0 125 mg mL and triglyceride up to 30 mg mL have no influence on the assay results 10 2 Drug Interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of Estriol in a sample 10 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test Vers 10 0 2013 05 vk 9 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 11 LEGAL ASPECTS 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national standards and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the speci
53. pr t a l emploi Les valeurs contr les et limites sont indiqu es sur l tiquette du flacon ou sur la fiche QC Contient agent de conservation sans mercure 4 Enzyme Conjugate Conjugu enzymatique 1 flacon 14 mL pr t l emploi Estriol conjugu e a la HRP Contient agent de conservation sans mercure 5 Substrate Solution Solution substrat 1 flacon 14 mL pr t l emploi T tram thylbenzidine TMB 6 Stop Solution Solution d arr t 1 flacon 14 mL pr t a l emploi contient 0 5 M de H SO Eviter les contacts avec la solution stop Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau 7 Wash Solution Solution de lavage 1 flacon concentr 40X voir Pr paration des r actifs Remarque Un Standard 0 suppl mentaire peut tre fourni sur demande 4 2 Equipement et mat riel requis mais non fournis Un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr 450 10 nm ex le lecteur de microplaques de DRG Instruments GmbH Des micro pipettes de pr cision variables et calibr es Du papier absorbant De l eau distill e 4 3 Stockage et stabilit du kit Les r actifs contenus dans des flacons non ouverts stock s 2 C 8 C seront stables jusqu la date d expiration inscrite sur l tiquette Ne pas utiliser les r actifs au del de cette date Les r actifs contenus dans des flacons ouverts doivent tre stock s 2 C 8 C Les micro plaques doivent
54. r des r sultats l g rement diff rents La concentration des chantillons peut tre lue directement partir de cette courbe talon Les chantillons avec une concentration sup rieure celle du plus haut standard doivent tre dilu s de nouveau Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration 1 Exemple d une courbe standard typique Les r sultats suivants sont ici pr sent s titre d exemple et ne peuvent tre utilis s au moment de l essai Standard 0 0 0 ng mL 1 79 Standard 1 0 3 ng mL 1 48 Vers 10 0 2013 05 vk 36 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 7 VALEURS ATTENDUES Il est fortement recommande a chaque laboratoire de d terminer ses propres valeurs normales ou anormales 7 1 Adultes normaux non enceinte Dans une tude r alis e avec des adultes normaux et sains l aide du kit DRG Free Estriol ELISA les valeurs suivantes sont observ es Population 5 Percentile ng mL 95 Percentile ng mL Hommes 42 0 146 0 573 Femmes 43 0 057 0 822 7 2 Valeur durant la grossesse grossesse gestation avec semaines jumeaux p m ng mL ng mL grossesse semaines p m ng mL 1 02 44 0 3 0 4 1 5 6 6 REMARQUE pour I importance clinique voir le manuel d utilisateur en version anglaise chapitre 7 EXPECTED VALUES 8 CONTROLE DE QUALITE Il est recommand d utiliser les chantillons co
55. ration Bring all reagents and required number of strips to room temperature prior to use Wash Solution Add deionized water to the 40X concentrated Wash Solution Dilute 30 mL of concentrated Wash Solution with 1170 mL deionized water to a final volume of 1200 mL The diluted Wash Solution is stable for 2 weeks at room temperature 4 5 Disposal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheet 4 6 Damaged Test Kits In case of any severe damage to the test kit or components DRG has to be informed in writing at the latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations Vers 10 0 2013 05 vk 4 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Serum should be used in this assay Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette for serum allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting has occurred Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clott
56. respect s comme indiqu dans le protocole exp rimental Seule l utilisation de pipettes calibr es ou d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr garantit l obtention de r sultats optimaux ce test Ne pas m langer ou utiliser des r actifs contenus dans des kits de lots diff rents Il est conseill de ne pas changer les puits de diff rentes plaques m me si celles ci proviennent du m me lot Les kits peuvent avoir t transport s ou stock s diff remment et les caract ristiques de liaison de chaque plaque pourraient ainsi tre modifi es L 6limination des solutions chimiques et des r actifs contenus dans ce kit utilis s ou non doit tre en accord avec la r glementation nationale en vigueur concernant l limination des d chets risque biologique La fiche de s curit concernant ce produit peut tre obtenue en contactant directement DRG Instruments GmbH Les fiches de s curit sont en accord avec les directives europ ennes EU 91 155 EC Vers 10 0 2013 05 vk 33 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 4 COMPOSITION DU KIT 4 1 Contenu du kit 1 Microtiterwells Plaques de micro titratio 12 x 8 d tacher barrettes plaques de 96 puits Les puits sont recouverts avec un anticorps anti Estriol polyclonal 2 Standard Standard 0 5 6 flacons 1 mL pr t a l emploi Concentrations 0 0 3 1 2 4 15 40 ng mL 3 Control Low amp High Contr le 2 flacons 1 mL
57. so be observed in patients being administered certain antibiotics or corticosteroids or in patients with impaired maternal hepatic function Vers 10 0 2013 05 vk Zw DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing
58. ssen werden Unter den beschriebenen Lagerbedingungen behalten ge ffnete Kits zwei Monate ihre Reaktivit t 4 4 Vorbereitung der Reagenzien Alle Reagenzien sowie die ben tigte Anzahl von Wells sollen vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden Wash Solution Die 40 fach konzentrierte Wash Solution 30 mL mit 1170 mL destilliertem Wasser auf ein Gesamtvolumen von 1200 mL verd nnen Die verd nnte Waschl sung ist bei Raumtemperatur f r 2 Wochen stabil 4 5 Entsorgung des Kits Die Entsorgung des Kits muss gem den nationalen gesetzlichen Vorschriften erfolgen Spezielle Informationen f r dieses Produkt finden Sie im Materialsicherheitsdatenblatt Kapitel 13 4 6 Besch digte Testkits Im Falle einer starken Besch digung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma DRG in schriftlicher Form sp testens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden Stark besch digte Einzelkomponenten sollten nicht f r den Testlauf verwendet werden Sie m ssen gelagert werden bis eine endg ltige L sung gefunden wurde Danach sollten Sie gem den offiziellen Richtlinien entsorgt werden Vers 10 0 2013 05 vk 13 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 5 PROBENVORBEREITUNG Serum sollte n in diesem Test als Probenmaterial eingesetzt werden Lipamische ikterische und oder stark hamolysierte Proben sollten nicht verwendet werden Achtung Proben die Natriumazid enthalten sollten nicht verwendet werden 5 1 Probenentnahm
59. sure Les limites du dosage sont comprises entre 0 075 40 ng mL 9 2 Sp cificit des anticorps R action crois e Voir le manuel d utilisateur en version anglaise 9 3 Sensibilit de l analyse La sensibilit de l analyse a t calcul e partir de la moyenne la plus faible de deux d viations standards de l analyse de vingt r plicats du Standard 0 et a t mesur e 0 075 ng mL 9 4 Pr cision Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 9 5 Recouvrement Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 9 6 Lin arit Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 10 LIMITES D UTILISATION Toute utilisation impropre des chantillons ou toute modification du test peut influencer les r sultats 10 1 Substances parasites L h moglobine jusqu 4 mg mL la bilirubine jusqu 0 125 mg mL et les triglyc rides jusqu 30 mg mL n ont aucune influence sur les r sultats du dosage 10 2 Drogues parasites Jusqu pr sent nous ne connaissons aucune substance drogues capable d influencer la mesure d Estriol libre dans un chantillon 10 3 Effet de surdosage Aucun effet de surdose n a t observ avec ce test Vers 10 0 2013 05 vk 38 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 11 ASPECTS LEGAUX 11 1 Fiabilit des r sultats Ce test doit tre exactement utilis selon les instructions d utilisation du fabricant De plus les utilisateurs doivent strictement respecter
60. tained from each standard against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the standard curve Automated method The results in the Instructions for Use have been calculated automatically using a 4 Parameter curve fit 4 Parameter Rodbard or 4 Parameter Marquardt are the preferred methods Other data reduction functions may give slightly different results The concentration of the samples can be read directly from this standard curve Samples with concentrations higher than that of the highest standard have to be further diluted or reported as gt 40 ng mL For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account 1 Example of Typical Standard Curve The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay Standard 0 0 0 ng mL 1 79 Standard 1__ 03 et Standard __ 12 ngml Standard G rt Standard 4 15 0 ng mL Standard 5 40 0 ng mL Vers 10 0 2013 05 vk 6 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 7 EXPECTED NORMAL VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values 7 1 Normal healthy adults In a study conducted with apparently normal healthy adults using the DRG Free Estriol ELISA the following values are observ
61. tion is linearly proportional to time and temperature Vers 10 0 2013 05 vk 25 gt 6 2 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 Test Procedure Each run must include a standard curve 1 2 SZ ER 6 3 Secure the desired number of Microtiter wells in the frame holder Dispense 10 uL of each Standard Control and samples with new disposable tips into appropriate wells Dispense 100 pL Enzyme Conjugate into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step Incubate for 60 minutes at room temperature Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 4 times with diluted Wash Solution 400 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure Add 100 uL of Substrate Solution to each well Incubate for 30 minutes at room temperature Stop the enzymatic reaction by adding 100 uL of Stop Solution to each well Determine the absorbance OD of each well at 450 10 nm with a microtiter plate reader It is recommended that the wells be read within 10 minutes after adding the Stop Solution Calculation of Results Calculate the average absorbance values for each set of standards controls and patient samples Using semi logarithmic graph paper construct a standard curve by plotting the mean absorbance ob
62. tre stock es 2 8 C Une fois la capsule d aluminium ouverte attention a bien refermer le flacon Les kits ouverts conservent leur activit durant deux mois s ils sont stock s comme pr c demment mentionn 4 4 Pr paration des r actifs Amener tous les r actifs et le nombre de barrettes n cessaires au test temp rature ambiante avant utilisation Wash Solution Diluer 30 mL de Wash Solution concentr e avec 1170 mL d eau d sionis e pour un volume final de 1200 mL Remarque La solution de lavage dilu e est stable deux semaines temp rature ambiante 4 5 Elimination des d chets relatifs au kit L limination des d chets relatifs au kit doit tre r alis e selon les r gles nationales en vigueur Les informations sp cifiques au kit sont pr sent es dans la fiche de s curit voir chapitre 13 4 6 Kits endommag s Dans le cas de dommages importants survenus au kit ou ses composants informer la DRG au plus tard une semaine apr s r ception du kit Les composants endommag s ne doivent pas tre utilis s pour le test Ils doivent tre stock s jusqu ce qu une solution adapt e ait t trouv e Apr s cela ils doivent tre limin s selon les directives officielles en vigueur Vers 10 0 2013 05 vk 34 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 5 ECHANTILLON S rum peuvent tre utilis s pour ce test Ne pas utiliser des chantillons h molys s ict riques ou lip miques Remarq
63. ue Les chantillons contenant de l azide de sodium ne doivent pas tre utilis s pour ce test 5 1 Pr l vement et pr paration des chantillons S rum Pr lever le sang par ponction veineuse ex Sarstedt Monovette pour s rum laisser coaguler puis s parer le s rum par centrifugation temp rature ambiante Ne pas centrifuger avant que la coagulation ne soit termin e Les patients sous traitement anti coagulant peuvent demander un temps de coagulation plus important 5 2 Conservation des chantillons Les tubes contenant les chantillons doivent tre ferm s et peuvent tre stock s jusqu 4 jours a 2 C 8 C avant d tre test s Les chantillons stock s pour un temps prolong au moins 1 an doivent tre congel s 20 C avant d tre test s Les chantillons d congel s doivent tre retourn s plusieurs fois avant le test 5 3 Dilution de l chantillon Si lors d un test pr liminaire la concentration de l chantillon se r v le tre sup rieure celle du standard le plus concentr alors l chantillon doit tre dilu avec le Standard 0 et test de nouveau comme d crit dans R alisation du test Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration Exemple a dilution 1 10 10 uL S rum 90 uL Standard 0 bien m langer b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Standard 0 bien m langer 6 R ALISATION DU TEST 6 1 Remarques g
64. ullstandard Zero Standard Estandar cero Standard zero Standard Standard Standard Standard Estandar Standard Control Control Kontrolle Contr le Control Controllo Assay Buffer Assay Buffer Assaypuffer Tampon d essai Tampon de ensayo Tampone del test Wash Solution Wash Solution Waschl sung Solution de lavage Soluci n de lavado Soluzione di lavaggio 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 2 nn iatsseidesdl 1NHCI 1NHCI 1NHCI 1N HCI 1N HCI A Probenverd nnungs Solution pour dilution Soluci n para diluci n e KE Sample Diluent Sample Diluent medium de l chantillon de la muestra EEN Conjugate i Konjugatverd nnungs Solution pour dilution Soluci n para diluci n Diluent Conjugate Diluent medium du conjugu del conjugado Diluente del tracciante Vers 10 0 2013 05 vk 40
65. ypisches Beispiel f r eine Standardkurve mit dem DRG ELISA gezeigt Diese Werte sollten nicht zur Berechnung von Patientendaten verwendet werden Standard 0__ 0 0 nom Standard 1__ 0 3 ng mL Standard 1 2 ngm Standard 3 4 0 ngm Standard 4 _ 15 0 ng ml Standards 40 0 ng ml Vers 10 0 2013 05 vk 15 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 7 ERWARTETE WERTE Es wird empfohlen dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt 7 1 Gesunde Erwachsene In einer Studie wurden die Proben von gesunden Erwachsenen untersucht Dabei ergaben sich mit dem DRG Free Estriol ELISA folgende Werte Population EI 5 Perzentile ng mL 95 Perzentile ng mL Frauen nicht schwanger 0 057 0 822 7 2 Werte in der Schwangerschaft p m post menstruationem Erwartete Erwartete Zwillings Schwanger Schwanger schaftewoche Werte schaftswoche Werte schwangerschaft p m ng mL a ng mL ng mL ACHTUNG Fur die klinische Interpretation beachten Sie bitte Kapitel 7 EXPECTED VALUES CLINICAL SIGNIFICANCE in der englischen Version 8 QUALITATS KONTROLLE Es wird empfohlen die Kontrollproben gem den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag zu Tag berpr fung der Ergebnisse erzielt Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des
66. za farmaco conosciuta a noi che abbia influenzato la determinazione di Estriolo nel campione 10 3 Effetto Hook di alti dosaggi Nessun effetto gancio effetto hook stato osservato in questo test Vers 10 0 2013 05 vk 24 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 11 ASPETTI LEGALI 11 1 Affidabilit dei risultati Il test deve essere eseguito esattamente secondo il protocollo dato dal produttore Inoltre l utente deve seguire le regole del GLP Good Laboratory Practice o eventualmente altre regole comportamentali o disposizioni legali Questo vale soprattutto per l uso delle referenze E molto importante utilizzare un numero appropriato di referenze in parallelo ai campioni test per poter controllare l esattezza e la precisione del test risultati del test sono validi soltanto se tutte le referenze cadono nei margini prestabiliti e se tutti gli altri parametri del test soddisfano la specificazione per questo test Se esistono dubbi o domande su questi risultati si prega di contattare la ditta DRG 11 2 Conseguenze terapeutiche Soltanto sulla base dei risultati dei laboratori non dovrebbero essere intraprese delle conseguenze terapeutiche di alcun tipo anche se i risultati del test sono d accordo con gli aspetti articolati nel punto 11 1 Ogni risultato di laboratorio soltanto una parte di un quadro clinico completo di un paziente Soltanto in casi in cui i risultati di un test del laboratorio si accordano con il quadro clin
67. zontale X 3 Utilizzando il valore medio delle DO per ogni campione si determina la rispettiva concentrazione dalla curva standard 4 Metodo automatico valori riportati in questo istruzioni per l uso sono stati determinati tramite l equazione a 4 parametri methodi preferiti sono 4 Parameter Rodbard oppure 4 Parameter Marquardt Altri funzioni usati per l elaborazioni dei dati possono dare risultati leggermente differenti 5 La concentrazione dei campioni pu essere determinata direttamente dalla curva standard Campioni con una concentrazione piu elevata dello standard piu concentrato devono essere diluiti Di questo fattore di diluizione deve essere tenuto conto per il calcolo della concentrazione 6 3 1 Esempio di una curva standard tipica seguenti dati sono a scopo dimostrativo soltanto e non possono sostituire i dati generati dall eseguimento del test Standard 0__ 00 agin Standard 1 0 3 ng ml Standard5 40 0 ng mL Vers 10 0 2013 05 vk 22 DRG Free Estriol ELISA EIA 1612 7 VALORI NORMALI consigliabile che ogni laboratorio determini i propri valori normali e anormali 7 1 Adulti normali sani In uno studio condotto su persone apparentemente sane usando il test DRG Free Estriol ELISA i seguenti valori sono stati ottenuti Populazione 5 Percentile ng mL 95 Percentile ng mL Uomini 0 146 0 573 Donne non in gravidanza 0 057 0 822 7 2 Livelli normali di Estriol libero nel si

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