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Salivary Estradiol ELISA
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1. 10 GRENZEN DES TESTS Jede unsachgem e Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests k nnen die Ergebnisse beeinflussen 10 1 Interferenzen Eine Kontamination der Speichelproben mit Blut von mehr als 0 16 beeinflusst das Ergebnis Eine solche Verunreinigung kann bereits mit den Augen wahrgenommen werden Konzentrationen von Natriumazid 2 0 02 beeinflussen den Test und k nnen zu falschen Ergebnissen f hren 10 2 Beeinflussung durch Medikamente Uns sind bislang keine Stoffe Medikamente bekannt geworden deren Einnahme die Messung des Estradiol Gehaltes der Probe beeinflussen w rde 10 3 High Dose Hook Effekt Ein Hook Effekt tritt in diesem Test nicht auf Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 18 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 11 1 Zuverl ssigkeit der Ergebnisse Der Test muss exakt gem der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden Dar ber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP Good Laboratory Practice oder andere eventuell anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien Es ist sehr wichtig bei der Testdurchf hrung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur berpr fung der Genauigkeit und Pr zision mitlaufen zu lassen Die Testergebnisse sind nur g ltig wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen liegen und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebenen
2. 4 COMPOSITION DU KIT 21 5 CONSERVATION ET PREPARATION DES ECHANTILLONS 22 6 REALISATION DU TEST use 23 7 VALEURS NORMALES ATTENDUES 24 8 CONTROLE DE QUALITE ee 24 9 CARACTERISTIQUES DU TEST 25 10 LIMITES D UTILISATION oooocnnocccncccnnonanacnninananananino 25 11 ASPECTS LEGAUX kihai eee 26 12 REFERENCES BIBLIOGRAPHIE nsenesnnesnneene 26 SYMBOLS USED WITH DRG ELISAS ne 27 Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 1 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 1 INTRODUCTION 1 1 Intended Use Enzyme immunoassay for the in vitro diagnostic quantitative measurement of active free Estradiol an estrogenic steroid in saliva Results may be used in the diagnosis and treatment of various hormonal sexual disorders and in assessing placental function in complicated pregnancy 1 2 Summary and Explanation Estradiol 1 3 5 10 estratriene 3 17B diol 17B estradiol E21 is a C18 steroid hormone with a phenolic A ring This steroid hormone has a molecular weight of 272 4 It is the most potent natural Estrogen produced mainly by the Graffian follicle of the female ovary and the placenta and in smaller amounts by the adrenals and the male testes 1 3 Estradiol E2 is secreted into the blood stream where 98 of it circulates bound to sex hormone binding globulin SHBG and to a lesser extent to other serum proteins such as albumin Only a small fraction circulates as free hormone or in the conjug
3. actifs au del de la date d expiration inscrite sur l emballage Tous les volumes indiqu s doivent tre scrupuleusement respect s comme indiqu dans le protocole experimental Seule l utilisation de pipettes calibr es ou d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr garantit l obtention de r sultats optimaux ce test Ne pas m langer ou utiliser des r actifs contenus dans des kits de lots diff rents Il est conseill de ne pas changer les puits de diff rentes plaques m me si celles ci proviennent du m me lot Les kits peuvent avoir t transport s ou stock s diff remment et les caract ristiques de liaison de chaque plaque pourraient ainsi tre modifi es L elimination des solutions chimiques et des r actifs contenus dans ce kit utilis s ou non doit tre en accord avec la r glementation nationale en vigueur concernant l limination des d chets risque biologique La fiche de s curit concernant ce produit peut tre obtenue en contactant directement DRG Instruments GmbH Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 20 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 4 COMPOSITION DU KIT 4 1 Contenu du kit 1 Microtiterwells Plaques de micro titration 12 x 8 d tacher barrettes plaques de 96 puits Les puits sont recouverts avec un anticorps anti estradiol polyclonal 2 Standard Standard 0 5 6 flacons 1 mL pr t a l emploi Concentrations 0 0 1 5 10 50 100 pg mL Con
4. 00 Pregnani om Pregnenolone 00 Progesterone om Testosterone oo 9 3 Sensitivity The lowest detectable level of Estradiol that can be distinguished from the Zero Standard is 0 4 pg mL at the 95 confidence limit Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 8 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 9 4 Reproducibility 9 4 1 Intra Assay The intra assay variation was determined by 20 replicate measurements of 4 saliva samples using DRG ELISA kit The within assay variability is shown below Sample 3 Sample 2 Sample 1 Sample 4 Mean am 46 o6 ms m2 SD pg ml vo 64 69 34 26 ns 2 2 x 9 4 2 Inter Assay The inter assay between run variation was determined by duplicate measurements of five saliva samples over 10 different days runs The between assay variability is shown below sample Sampie 1 Sample Semple Sample 3 SD pgmt 01 01 04 03 09 ns 20 20 20 20 2 9 4 3 Inter Lot The Inter Lot between lot variation was determined by triplicate measurements of five saliva samples in three different kit lots The between lot variability is shown below LT sample Sample 1 Sample 5 Sample 4 Sample mn eo 9s o s 9 Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 9 9 5 Recovery Recovery of the DRG ELISA was determined by adding increasing amounts of the analyte to three different saliva samples containing diff
5. also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer 12 REFERENCES LITERATURE 1 Tsang B K et al 1980 Steroid biosyntheses by isolated human ovarian follicular cells in vitro J Clin Endocrinol Metab 51 1407 11 2 Gore Langton R E et al 1988 Follicular steroidogenesis and its control In The physiology of Reproduction ED Knobil et al pp 331 385 Raven press New York 3 Hall P F 1988 Steroid synthesis Organization and Regulation In The Physiology of Reproduction Ed Knobil et al pp 975 988 Raven press New York 4 Siiteri P K et al 1982 The serum transport of steroid hormones Rec Progr Horm Res 38 457 510 5 Martin B et al 1981 Binding of steroids by proteins in follicular fluid of the human ovary J Clin Endocrinol Metab 35 443 447 6 Baird D T 1976 Ovarian steroid secretion and metabolism in women In The Endocrine function of the human ovary Eds James V H T Serio M and Guisti G pp 125 33 Academic press New York 7 McNtty K P et al 1976 Concentration of estrogens and androgens in human ovarian venous plasma and follicular fluid throughout the menstrual cycle J Endocrinol 71 77 85 8 March C M et al 1979 Roles of estradiol and progesterone in eliciting mid cycle
6. contenue dans l chantillon 3 PRECAUTIONS D UTILISATION Ce kit est uniquement destin aux tests diagnostiques in vitro Utilisez uniquement la version valide d instructions d utilisation qui est incluse dans le kit Les informations concernant la toxicit des r actifs contenus dans ce kit sont pr sent es dans la fiche de s curit Safety Data Sheets Tous les r actifs de ce kit contenant du s rum ou du plasma humain ont t test s avec des r sultats n gatifs pour le VIH I II le HBsAg et le HCV selon les normes FDA en vigueur N anmoins lors de leur utilisation tous les r actifs de ce kit doivent tre manipul s avec pr caution Eviter les contacts avec la Stop Solution celle ci contient 0 5 M de H2SO Cela pourrait engendrer irritations ou brdlures de la peau Ne jamais pipeter avec la bouche et viter tout contact de la peau ou des muqueuses avec les r actifs ou les chantillons Ne pas fumer manger boire ou utiliser des produits cosm tiques dans les zones ou les chantillons ou le kit ont t mani s Porter des gants d examen lors de l utilisation des chantillons ou des r actifs Une contamination microbienne des chantillons ou des r actifs pourrait fausser les r sultats L utilisation de ce kit devra tre en accord avec les normes ou recommandations nationales de s curit en vigueur concernant les produits a risque biologique Ne pas utiliser les r
7. from this study Agegroup Salivary Estradiol pg ml Women EN Therapy should not be decided based on results alone The results should be correlated to other clinical observations and diagnostic tests Salivary Estradiol values show a clear circadian rhythm We therefore recommend the saliva samples be obtained the same hour each day Furthermore we recommend that each laboratory establish its own range for the population tested because the values differ between age new born children adolescents and adults 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and tre
8. luteinizing hormone and follicle stimulating hormone surges J Clin Endocrinol Metab 49 507 12 9 Simpson E R and McDonald P C 1981 Endocrinology of pregnancy In Textbook of Endocrinology Ed Williams R H pp 412 22 Saunders Company Philadelphia Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 12 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 1 EINLEITUNG Der DRG Salivary Estradiol ELISA wird zur quantitativen Bestimmung von Estradiol in Speichel eingesetzt Nur f r In vitro Diagnostik 2 TESTPRINZIP Der DRG Salivary Estradiol ELISA ist ein Festphasen Enzymimmunoassay der auf dem Prinzip der kompetitiven Bindung basiert Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem polyklonalen Antik rper beschichtet der gegen eine Antik rper Bindungsstelle des Estradiol Molek ls gerichtet ist Die Proben werden in die beschichteten Wells gegeben und zusammen mit einem Estradiol Enzymkonjugat inkubiert W hrend der Inkubation konkurriert das Estradiol aus der Probe mit dem Estradiol Enzymkonjugat um die freien Bindungsstellen auf den beschichteten Wells Das nicht gebundene Konjugat wird durch Waschen der Wells entfernt Anschlie end wird die Substratl sung zugegeben und die Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt Die Intensitat der gebildeten Farbe ist umgekehrt proportional der Estradiol Konzentration in der Probe Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen 3 VORSICHTSMABNAHMEN e Dieser
9. must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national standards and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DRG 11 2 Therapeutic Consequences Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences 11 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2 are
10. ohne Unterbrechung zu Ende gef hrt werden Fur jeden Standard jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden um Verschleppungen zu vermeiden Die Optische Dichte ist abhangig von Inkubationszeit und Temperatur Deshalb ist es notwendig vor Beginn der Testdurchf hrung alle Reagenzien in einen arbeitsbereiten Zustand zu bringen die Deckel der Fl schchen zu ffnen alle ben tigten Wells in den Halter zu setzen Nur eine solche Vorbereitung garantiert gleiche Zeiten f r jeden Pipettiervorgang ohne Pausen Als generelle Regel gilt dass die enzymatische Reaktion linear proportional zu Zeit und Temperatur ist 6 2 Testdurchf hrung Jeder Lauf muss eine Standardkurve beinhalten Die ben tigte Anzahl Wells in der Halterung befestigen Je 100 uL Standards Controls und Proben mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Wells geben 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 200 uL Enzyme Conjugate in jedes Well geben 120 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells 3mal mit verd nnter Waschl sung waschen Verbleibende Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfernen Achtung Die Sensitivit t und Pr zision dieses Assays wird erheblich beeinflusst von der korrekten Durchf hrung des Waschschrittes 7 200 HL Substrate Solution in jedes Well geben 8 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 9 Die enzymatische Reaktion durch Zugabe von 100 pL Stop S
11. sind unterliegen nicht der Haftung des Herstellers 12 REFERENZEN LITERATUR Angaben zu den Referenzen entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 19 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 1 INTRODUCTION Dosage immuno enzymatique pour la mesure quantitative diagnostique in vitro de l osstradiol libre actif une hormone steroide cestrog nique dans la salive Les r sultats peuvent tre utilis s dans le diagnostic et le traitement de divers dysfonctionnements sexuels hormonaux et dans l valuation de la fonction placentaire en cas de grossesse avec complications Ce kit est a utiliser uniquement dans le cadre de tests diagnostiques in vitro 2 PRINCIPE DU TEST Le kit DRG Salivary Estradiol ELISA est bas sur une r action immuno enzymatique comp titive Les micro plaques sont recouvertes avec un anticorps polyclonal dirig contre un antig ne sp cifique de la mol cule estradiol L estradiol endog ne contenu e dans l chantillon du patient entre en comp tition avec le conjugu e la HRP pour la liaison a l anticorps Apres incubation le conjugu non li est limin durant le lavage des puits La quantit de peroxidase li e est inversement proportionnelle a la concentration d estradiol contenue dans l chantillon Suite a addition de solution substrat l intensit de coloration obtenue est inversement proportionnelle la concentration d estradiol
12. zentrifugiert werden Nach der Ankunft im Labor muss eine Probe mindestens ber Nacht tiefgek hlt gelagert werden Am n chsten Morgen wird die eingefrorene Probe auf Raumtemperatur gebracht und vorsichtig gemischt Dann muss die Probe 5 bis 10 Minuten zentrifugiert werden bei 3000 2000 x g Der klare farblose berstand kann jetzt einfach pipettiert werden Wird ein solches Set an Mehrfach Proben getestet nach mindestens einem Einfrier Auftau und Zentrifugationszyklus muss im Labor in einem separaten Probengef eine Mischprobe aus Aliquots aller 5 Einzelproben hergestellt werden Diese Mischprobe wird im Test eingesetzt 5 3 Probenverd nnung Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Probe eine Konzentration h her als der h chste Standard gefunden wird kann diese Probe mit 0 9 NaCl weiter verd nnt und nochmals bestimmt werden Die Verd nnung muss jedoch bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden Beispiel a Verd nnung 1 10 10 uL Speichelprobe 90 uL 0 9 NaCl gr ndlich mischen b Verd nnung 1 100 10 ul Verd nnung a 1 10 90 uL 0 9 NaCl gr ndlich mischen Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 15 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 6 TESTDURCHFUHRUNG 6 1 Allgemeine Hinweise Alle Reagenzien und Proben mussen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchgemischt werden Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden Wenn die Testdurchf hrung einmal begonnen wurde muss sie
13. 1 Flaschchen 25 mL gebrauchsfertig Substratl sung TMB 6 Stop Solution Stoppl sung 1 Flaschchen 14 mL gebrauchsfertig Enth lt 0 5 M H2SO4 Kontakt mit der Stoppl sung vermeiden Kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen 7 Wash Solution Waschl sung 40X konzentriert 1 Fl schchen 30 mL Siehe Vorbereitung der Reagenzien Anmerkung Zus tzlicher Standard 0 zur Probenverd nnung ist auf Anfrage erh ltlich 4 2 Nicht im Kit enthaltene aber erforderliche Ger te und Materialien Kalibriertes Mikrotiterplattenleseger t mit 450 10 nm Filter z B das DRG Instruments Mikrotiterplattenleseger t Kalibrierte variable Pr zisions Mikropipette 100 uL 200 uL Saugf higes Papier Aqua dest 0 9 NaCl L sung 4 3 Lagerung und Haltbarkeit des Kits Die unge ffneten Reagenzien behalten bei Lagerung um 2 C 8 C ihre Reaktivit t bis zum Verfallsdatum Nach dem Verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden Nach dem ffnen sollten alle Reagenzien bei 2 C 8 C gelagert werden Die Mikrotiterwells sollten bei 2 C 8 C gelagert werden Der einmal ge ffnete Folienbeutel sollte stets sehr sorgf ltig wieder verschlossen werden Unter den beschriebenen Lagerbedingungen behalten ge ffnete Kits zwei Monate ihre Reaktivit t 4 4 Vorbereitung der Reagenzien Alle Reagenzien sowie die ben tigte Anzahl von Wells sollen vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden Wash Solution Di
14. HANTILLONS Il faut viter de manger de boire de m cher du chewing gum ou de se brosser les dents pendant 30 minutes avant le pr l vement de l chantillon Sinon il est recommand de se rincer soigneusement la bouche avec de l eau froide 5 minutes avant le pr l vement de l chantillon Ne pas pr lever d chantillon en pr sence de maladies d inflammation ou de l sions au niveau la bouche contamination par du sang En cas de contamination visible de l chantillon du patient par du sang il faut jeter l chantillon rincer le dispositif de pr l vement avec de l eau attendre 10 minutes et pr lever un nouvel chantillon Remarque Les chantillons contenant de l azoture de sodium ne doivent pas tre utilis s dans le test 5 1 Pr l vement des chantillons Il est recommand de pr lever les chantillons de salive au moyen d un quipement disponible dans le commerce p ex SALI TUBES 100 REF SLV 4158 de DRG N utilisez pas d couvillons de coton tels que les dispositifs Salivette pour le pr l vement des chantillons dans la plupart des cas ceux ci entrainent des interf rences importantes En raison du sch ma de s cr tion cyclique des hormones st roides il est important de choisir soigneusement le moment du pr l vement des chantillons Pour viter des r sultats arbitraires nous recommandons de toujours pr lever cinq chantillons sur une p riode de deux trois heures pr l vem
15. Instructions for Use Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 Y 96 sell Legal Manufacturer DRG DRG Instruments GmbH Germany Division of DRG International Inc Frauenbergstr 18 D 35039 Marburg Telefon 49 0 6421 17000 Fax 49 0 6421 1700 50 Internet www drg diagnostics de E mail drg drg diagnostics de CE Distributed by DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 Contents Inhaltsverzeichnis 1 INTRODUCTION ue nenne 2 2 PRINCIPLE OF THE TEST sainnonnennsennennsnnnnnsnennn 2 3 WARNINGS AND PRECAUTIONS enee 2 4 REAGENIS vin AA AE easiest 3 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION 5 6 ASSAY PROCEDURE 6 7 EXPECTED NORMAL VALUES m vvvvrvvvvrvvvnrreersrenrrrenn 7 8 QUALITY CONTROL 7 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 8 10 LIMITATIONS OF USE 11 11 LEGAL ASPECTS 12 12 REFERENCES LITERATURE 12 1 EINLEITUNG neuen 13 2 TESTPRINZIP urinen sa ae 13 3 VORSICHTSMARNAHMEN ee eee eens 13 4 BESTANDTEILE DES KITS eee 14 5 PROBENVORBEREITUNG oe eee eee 15 6 TESTDURCHF HRUNG eneneennnn 16 7 ERWARTETE WERTE reeanvvnrnrrennvrnrrrrvnnvenrvrenrsrennnrer 17 8 QUALIT TS KONTROLLE ennn 17 9 ASSAY CHARACTERISTIKA 18 10 GRENZEN DES TESTS eee 18 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN rnvrvrurvvnnvvnrrrrennvvnrrrr 19 12 REFERENZEN LITERATUR ee 19 1 INTRODUCTION 20 2 PRINCIPE DU TEST eee etre aiei 20 3 PRECAUTIONS D UTILISATION ee 20
16. Kit ist nur zum in vitro diagnostischen Gebrauch geeignet e Informationen zu im Kit enthaltenen gefahrlichen Substanzen entnehmen Sie bitte dem Materialsicherheitsdatenblatt e Alle Bestandteile dieses Testkits die humanes Serum oder Plasma enthalten wurden mit FDA gepr ften Methoden auf HIV I II HbsAg und HCV getestet und als negativ best tigt Jedoch sollten alle Bestandteile im Umgang und bei der Entsorgung wie m gliche Gefahrenstoffe betrachtet werden e Der Kontakt mit der Stop Solution sollte vermieden werden da sie 0 5 M H2SO enth lt Schwefels ure kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen e Nicht mit dem Mund pipettieren und den Kontakt von Kitbestandteilen und Proben mit Haut und Schleimhauten vermeiden e In den Bereichen in denen Proben oder Kitbestandteile verwendet werden nicht rauchen essen oder Kosmetika verwenden e Beim Umgang mit Proben oder Reagenzien Einweg Latexhandschuhe tragen Die Verunreinigung von Reagenzien oder Proben mit Mikroben kann zu falschen Ergebnissen f hren e Der Gebrauch sollte gem der Vorschriften einer entsprechenden nationalen Gefahrenstoff Sicherheitsrichtlinie erfolgen e Reagenzien nicht nach dem auf dem Kit Etikett angegebenen Verfallsdatum verwenden e Alle im Kit Protokoll angegebenen Mengen m ssen genau eingehalten werden Optimale Ergebnisse k nnen nur durch Verwendung kalibrierter Pipetten und Mikrotiterplatten Leseger te erreicht werden e Komponenten von Kits mit un
17. Spezifikationen f r diesen Assay erf llen Wenn Sie bez glich eines Ergebnisses Zweifel oder Bedenken haben setzen Sie sich bitte mit der Firma DRG in Verbindung 11 2 Therapeutische Konsequenzen Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen selbst dann nicht wenn alle Testergebnisse mit den in 11 1 genannten Voraussetzungen bereinstimmen Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten Nur in F llen in denen die Laborergebnisse in akzeptabler bereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage f r die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen 11 3 Haftung Jegliche Ver nderungen des Testkits und oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen k nnen die gew nschten Ergebnisse und die G ltigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen Solche Ver nderungen und oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzanspr che zur Folge Reklamationen die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gem Punkt 11 2 erfolgen sind ebenfalls abzuweisen Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschr nkt Jegliche Sch den die w hrend des Transports am Kit entstanden
18. Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 25 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 11 ASPECTS LEGAUX 11 1 Fiabilit des r sultats Ce test doit tre exactement utilis selon les instructions d utilisation du fabricant De plus les utilisateurs doivent strictement respecter les r gles de la bonne pratique de laboratoire ou autres lois nationales Cela est sp cialement le cas pour l utilisation des r actifs contr les Pour chaque test il est important d inclure un nombre suffisant de contr les afin de pouvoir valider l exactitude et la pr cision du test Les r sultats du test sont valides si et seulement si tous les contr les sont compris dans les gammes de mesure mentionn es et si tous les autres param tres du test sont galement compris dans les instructions de ce test En cas de doute ou d inqui tude contacter la DRG 11 2 Cons quences th rapeutiques Les suites th rapeutiques ne devront jamais tre bas es sur les r sultats de laboratoire seuls m me si les tous les r sultats du test sont en accord avec les points mentionn s dans le paragraphe 11 1 Tout r sultat n est qu une partie du tableau clinique complet d un patient Les suites th rapeutiques peuvent d couler des r sultats de laboratoire si et seulement si ceux ci sont en accord avec l ensemble du tableau clinique du patient Le r sultat du test en lui m me ne doit en aucun cas tre le seul d terminant des suites th rapeutiques a suivre 11 3 Responsa
19. ated form 4 5 Estrogenic activity is effected via estradiol receptor complexes which trigger the appropriate response at the nuclear level in the target sites These sites include the follicles uterus breast vagine urethra hypothalamus pituitary and to a lesser extent the liver and skin In non pregnant women with normal menstrual cycles estradiol secretion follows a cyclic biphasic pattern with the highest concentration found immediately prior to ovulation 6 7 The rising estradiol concentration is understood to exert a positive feedback influence at the level of the pituitary where it influences the secretion of the gonadotropins follicle stimulating hormone FSH and luteinizing hormone LH which are essential for follicular maturation and ovulation respectively 8 Following ovulation estradiol levels fall rapidly until the luteal cells become active resulting in a secondary gentle rise and plateau of estradiol in the luteal phase During pregnancy maternal serum Estradiol levels increase considerably to well above the pre ovulatory peak levels and high levels are sustained throughout pregnancy 9 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DRG Salivary Estradiol ELISA kit is based on the competition principle and the microplate separation An unknown amount of Estradiol present in the sample and a fixed amount of Estradiol conjugated with horse radish peroxidase compete for the binding sites of a polyclonal Estradiol antiserum coated onto the
20. bilit Toute modification du kit et ou change ou m lange d un des composants de diff rents lots d un kit a un autre pourrait affecter de facon n gative les r sultats attendus et la validit du test dans son ensemble De telles modifications ou changes invalident toute r clamation pour remplacement Toutes les r clamations soumises relatives au paragraphe 11 2 et dues a une mauvaise interpr tation des r sultats de laboratoire de la part du client sont galement invalides N anmoins en cas de r clamation la responsabilit du fabricant n est pas de d passer les limites de la valeur du kit Tout dommage caus au kit lors de son transport n est pas du ressort de la responsabilit du fabricant 12 REFERENCES BIBLIOGRAPHIE Voir le manuel de Putilisateur en version anglaise Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 26 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 SYMBOLS USED WITH DRG ELISAS Symbol English Deutsch Frangais Espanol Italiano Mm MA European Conformity CE Konformit ts kennzeichnung Conforme aux normes europ ennes Conformidad europea Conformit europea Consult instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Consulter les instructions d utilisation Consulte las Instrucciones Consultare le istruzioni per Puso In vitro diagnostic device In vitro Diagnostikum Usage Diagnostic in vitro Para uso Diagn stico in vitro Per uso Diagnostica in
21. cimen Dilution If in an initial assay a specimen is found to contain more than the highest standard the specimens can be diluted with 0 9 NaCl and re assayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a Dilution 1 10 10 uL saliva 90 uL 0 9 NaCl mix thoroughly b Dilution 1 100 10 uL of dilution a 90 uL 0 9 NaCl mix thoroughly Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 5 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 6 ASSAY PROCEDURE 6 1 General Remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each standard control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption Asa general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature 6 2 Test Procedure Each run must include a standard curve All standards samples and controls should be run in duplicate All standards samples and controls should be run concurrently so
22. co Complex enzymatique Substrate Substrate Solution Substratl sung Solution substrat Soluci n de sustrato Soluzione di substrato Solution Stop Solution Stop Solution Stoppl sung Solution d arr t Soluci n de parada Soluzione d arresto Zero Standard Zero Standard Nullstandard Zero Standard Est ndar cero Standard zero Vers 9 0 Standard Standard Standard Standard Est ndar Standard Control Control Kontrolle Contr le Control Controllo Assay Buffer Assay Buffer Assaypuffer Tampon d essai Tampon de ensayo Tampone del test Wash Solution Wash Solution Waschl sung Solution de lavage Soluci n de lavado Soluzione di lavaggio 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH gt en idrossidodi 1 N HCI 1 N HCI 1 N HCI 1N HCI 1N HCI Sample Diluent Sample Diluent Dee en en diluci n Diluente dei campioni us Conjugate Diluent ed se a dilution Tv dilucion Diluente del tracciante Effective 2015 04 vk 27
23. e 40 fach konzentrierte Waschl sung 30 mL mit 1170 mL destilliertem Wasser auf ein Gesamtvolumen von 1200 mL verd nnen Die verd nnte Waschl sung ist bei Raumtemperatur f r 2 Wochen stabil 4 5 Entsorgung des Kits Die Entsorgung des Kits muss gem den nationalen gesetzlichen Vorschriften erfolgen Spezielle Informationen f r dieses Produkt finden Sie im Materialsicherheitsdatenblatt Kapitel 13 4 6 Beschadigte Testkits Im Falle einer starken Besch digung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma DRG in schriftlicher Form sp testens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden Stark besch digte Einzelkomponenten sollten nicht f r den Testlauf verwendet werden Sie m ssen gelagert werden bis eine endg ltige L sung gefunden wurde Danach sollten Sie gem f den offiziellen Richtlinien entsorgt werden Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 14 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 5 PROBENVORBEREITUNG Speichelproben werden in diesem Test als Probenmaterial eingesetzt Der Patient sollte vor der Probenahme 30 Minuten nicht essen trinken Kaugummi kauen oder Zahne putzen Andernfalls 5 Minuten vor der Probenahme den Mund gr ndlich mit kaltem Wasser sp len Speichelproben sollten nicht bei Krankheiten Entz ndungen oder Verletzungen der Mundh hle entnommen werden Blutkontamination Im Falle einer sichtbaren Kontamination mit Blut sollte die Probe verworfen werden Das Probenbesteck wird mit Wasser gewaschen
24. ent d chantillons multiples de pr f rence avant un repas Les aliments pouvant contenir des quantit s importantes d hormones st roides il est pr f rable de pr lever les chantillons jeun Si le jeune est un probl me la p riode de pr l vement des chantillons doit tre pr vue juste avant le d jeuner ou avant le diner 5 2 Conservation et pr paration des chantillons Les chantillons de salive peuvent tre conserv s a une temp rature entre 2 C et 8 C pendant une p riode maximale d une semaine et devraient tre congel s a une temp rature de 20 C pour des p riodes plus longues des cycles de cong lation d cong lation successifs ne posent pas de probl me Chaque chantillon doit tre congel d congel et centrifug au moins une fois afin de s parer les mucines par centrifugation Lors de l arriv e des chantillons au laboratoire ceux ci doivent demeurer au cong lateur pendant au moins une nuit Le lendemain les chantillons congel s sont ramen s a la temp rature ambiante et m lang s soigneusement Ensuite les chantillons doivent tre centrifug s pendant 5 a 10 minutes avec une acc l ration de 3000 2000 x g Le surnageant clair et incolore est alors facile a pipeter Si une s rie d chantillons multiples doit tre test e le laboratoire apr s au moins un cycle de cong lation decongelation et centrifugation doit m langer les 5 chantillons individuels dans un dispo
25. erent amounts of endogenous analyte Each sample non spiked and spiked was assayed and analyte concentrations of the samples were calculated from the standard curve The percentage recoveries were DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 determined by comparing expected and measured values of the samples Endogenous Added Estradiol 9 6 Linearity Four samples saliva containing different amounts of analyte were serially diluted up to 1 128 with 0 9 NaCl and assayed with the DRG ELISA The percentage recovery was calculated by comparing the expected and measured values for SLV estradiol An assay linearity of 0 8 93 pg mL has been identified as the usable range Samples above this range must be diluted and re run Measured OD Estradiol Mean of duplicate Measured Conc Expected Conc Sample 4 Sample 3 Sample 2 Sample 1 Concentration pg mL 8 5 26 6 95 0 400 0 Average recovery 107 7 103 8 97 0 99 1 Range of 102 8 94 6 91 3 93 1 Recovery 113 6 108 7 102 8 106 9 Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 10 Recovery DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 9 7 Comparison Studies A study was performed to compare the DRG Salivary Estradiol test to a commercially available test using saliva samples from 230 men and women 20 to 70 years The samples were run in duplicate on the DRG test and another commercially available LIA method to determine the concentration of Estradiol in the sa
26. erminer la plage normale de DRG SLV Estradiol ELISA des chantillons de salive de 152 hommes et de 186 femmes adultes apparemment en bonne sant g s de 21 75 ans ont t pr lev s le matin et analys s au moyen du kit DRG SLV Estradiol ELISA Les an suivantes ont t calcul es a partir de cette tude ria d age aoe Phase folliculaire n 48 n 48 1 29 7 76 21 Mi cycle n 3 79 16 05 Se ere n 1 22 8 43 0 56 4 39 Pra SETA 31 2 ea TEE Salivary Estradiol pg mL n 1 00 4 63 RS 088 409 oe 7 1 33 4 39 Le traitement ne doit pas tre d cid uniquement sur la base des r sultats Les r sultats doivent tre mis en corr lation avec d autres observations cliniques et tests diagnostiques Les valeurs de l cstradiol salivaire suivent un rythme circadien net Nous recommandons donc de pr lever les chantillons de salive la m me heure chaque jour En outre nous recommandons chaque laboratoire d tablir sa propre plage pour la population test e car les valeurs diff rent en fonction de l ge chez les nouveau n s les enfants les adolescents et les adultes 8 CONTROLE DE QUALITE Il est recommand d utiliser les chantillons contr les selon les r glementations nationales en vigueur L utilisation des chantillons contr les est recommand afin de s assurer jour apr s jour de la validit des r sultats Utiliser les contr les de valeurs normales et patholog
27. ferences Due to the episodic secretion pattern of steroid hormones it is important to care for a proper timing of the sampling In order to avoid arbitrary results we recommend that always 5 samples be taken within a period of 2 3 hours multiple sampling preferably before a meal As food might contain significant amounts of steroid hormones samples preferably should be taken while fasting If fasting should be a problem the collection period should be timed just before lunch or before dinner 5 2 Specimen Storage and Preparation Specimens should be capped and may be stored for up to one week at 4 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen 20 C prior to assay Even repeated thawing and freezing is no problem Each sample has to be frozen thawed and centrifuged at least once anyhow in order to separate the mucins by centrifugation Upon arrival of the samples in the lab the samples have to stay in the deep freeze at least overnight Next morning the frozen samples are warmed up to room temperature and mixed carefully Then the samples have to be centrifuged for 5 to 10 minutes at 3000 2000 x g Now the clear colorless supernatant is easy to pipette If a set of multiple samples have to be tested the lab after at least one freezing thawing and centrifugation cycle has to mix the aliquots of the 5 single samples in a separate sampling device and perform the testing from this mixture 5 3 Spe
28. gleich der Ergebnisse verwendet werden Es wird ebenfalls empfohlen an nationalen oder internationalen Qualit tssicherungs Programmen teilzunehmen um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll Werten und Trends angewendet werden Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials bereinstimmen sollten die Patientenergebnisse als ung ltig eingestuft werden In diesem Fall berpr fen Sie bitte die folgenden Bereiche Pipetten und Zeitnehmer Photometer Verfallsdatum der Reagenzien Lagerungs und Inkubationsbedingungen Absaug und Waschmethode Sollten Sie nach berpr fung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma DRG in Verbindung Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 17 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 9 ASSAY CHARACTERISTIKA 9 1 Messbereich Der Messbereich des Testes liegt zwischen 0 8 93 pg mL 9 2 Spezifit t der Antik rper Kreuzreaktivit t Die Daten entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 9 3 Sensitivit t Die analytische Sensitivit t definiert als Mittelwert minus der zweifachen Standardabweichung des Standards 0 n 20 betr gt 0 4 pg mL Die Daten zu 9 4 Pr zision 9 5 Wiederfindung 9 6 Linearit t entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung
29. iques Les contr les et les r sultats correspondants issus du laboratoire QC sont mentionn s dans le certificat QC fourni avec le kit Les valeurs et les limites mentionn es sur la fiche QC font toujours r f rence au lot de kit courant et doivent tre utilis es pour une comparaison directe avec les r sultats Il est galement recommand d utiliser les programmes d valuation de qualit nationaux ou internationaux afin de s assurer de l exactitude des r sultats Utiliser les m thodes d analyses statistiques appropri es pour l analyse des valeurs contr les et des tendances Si les r sultats ne correspondent pas aux limites tablies des contr les les r sultats concernant ces patients doivent tre consid r es comme non valides Dans ce cas tester les zones techniques suivantes m canisme de pipettage et temps spectrophotom tre dates d expiration des r actifs conditions de stockage et d incubation m thodes d aspiration et de lavage Apres avoir tester les points mentionn s si aucune erreur n est d tect e contacter votre distributeur ou directement la DRG Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 24 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 9 CARACTERISTIQUES DU TEST 9 1 Zone de mesure Les limites du dosage sont comprises entre 0 8 93 pg mL 9 2 Sp cificit des anticorps R action crois e Voir le manuel d utilisateur en version anglaise 9 3 Sensibilit de analyse Le plus bas niveau d tectab
30. le d oestradiol qui puisse tre distingu du z ro standard est de 0 4 pg mL la limite de confiance 95 9 4 Precision Voir le manuel de Putilisateur en version anglaise 9 5 Recouvrement Voir le manuel de Putilisateur en version anglaise 9 6 Linearite Voir le manuel de Putilisateur en version anglaise 10 LIMITES D UTILISATION On obtient des r sultats fiables et reproductibles lorsque la proc dure de test est r alis e avec une compr hension approfondie du mode d emploi et en observant des bonnes pratiques de laboratoire Une manipulation inad quate des chantillons ou une modification de ce test pourrait influencer les r sultats Le patient ne doit pas manger boire macher du chewing gum ni se brosser les dents pendant 30 minutes avant le pr l vement de l Echantillon Sinon il doit se rincer soigneusement la bouche avec de l eau froide 5 minutes avant le pr l vement de l chantillon Ne pas pr lever d chantillons en pr sence de maladies d inflammation ou de l sions au niveau de la bouche contamination par du sang 10 1 Substances parasites Une contamination par le sang de plus de 0 16 dans les chantillons de salive influe sur les r sultats et peut g n ralement tre observ e l il Les concentrations d azoture de sodium 2 0 02 interf rent avec le test et peuvent donner lieu de faux r sultats 10 2 Effet de surdosage Aucun effet de surdose n a t observ avec ce test
31. lution containing 0 5 M H2SO It may cause skin irritation and burns Some reagents contain Proclin BND and MIT as preservatives In case of contact with eyes or skin flush immediately with water TMB substrate has an irritant effect on skin and mucosa In case of possible contact wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water Wash contaminated objects before reusing them If inhaled take the person to open air Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline or regulation For information on hazardous substances included in the kit please refer to Safety Data Sheets Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DRG REAGENTS Reagents provided Microtiterwells 12x8 break apart strips 96 wells Wells coated with a anti Estradiol antibody polyclonal Standard Standard 0 5 6 vials 1 mL each ready to use Concentration 0 0 1 5 10 50 100 pg mL Contain non mercury preservative Control Low amp High 2 vials 1 0 mL each ready to use Control values and ranges please refer to vial label or QC Datasheet Contain non mercury preservative Enzyme Conjugate 1 vial 26 mL ready to use Estradiol conjugated to horseradish peroxidase Contain non mercury preservative Substrate Solution 1 vial 25 mL ready to use Tetramethylbenzidine TMB Stop Solution 1 vial 14 mL ready to u
32. mples A correlation of r 0 9951 was obtained versus this method with a regression formula shown below DRG Estradiol correlation y 0 8512x 0 0774 DRG ELISA 10 LIMITATIONS OF USE Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a complete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results The patient should not eat drink chew gum or brush teeth for 30 minutes before sampling Otherwise rinse mouth thoroughly with cold water 5 min prior to sample collection Do not collect samples when oral diseases inflammation or lesions exist blood contamination 10 1 Interfering Substances Blood contamination of more than 0 16 in saliva samples will affect results and usually can be seen by eye Therefore samples containing any visible blood should not be used Concentrations of Sodium Azide gt 0 02 interferes in this assay and may lead to false results 10 2 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 11 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 11 LEGAL ASPECTS Only for countries where the declaration of European Conformity CE mark is applicable 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user
33. nds If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DRG directly Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 7 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 0 8 93 pg mL 9 2 Specificity The following materials have been evaluated for cross reactivity The percentage indicates cross reactivity at 50 displacement compared to Estradiol Cross reaction Estradiol 100 Estron Estro Androstenedione 00m Androsterone 000 Corticosterone 000 Epiandrosterone 000 16 Epiestriol oo Estadior suf te 00 Estradiol 3 glucoronide 0 00 Estradiol 17a o 00 Esto t6 gucoronde 00 Estrone 3 suifate oo Dehydroepiandrosterone 00 11 Desoxycortisol 0 00 1i Desoxycorticosterone om 21 Desoxycortisal 00 Dihydrotestosterone 00 Dihydroepiandrosterone 000 20 Dihydroprogesterone om 11 Hydroxyprogesterone om 17 alpha Hydroxyprogesterone 00 717 alpha Pregnenolone 000 17 alpha Progesterone om Pregnanegiol
34. ns interruption En r gle g n rale la r action enzymatique est lin airement proportionnelle au temps et a la temp rature R alisation du dosage Chaque test doit inclure une courbe talon 1 2 oa rw Disposer le nombre de puits de micro titration d sir dans le support D poser 100 uL de chaque Standard Control et les chantillons avec de nouveaux c nes de pipette dans les puits appropri s Incuber pendant 30 minutes a temp rature ambiante D poser 200 uL d Enzyme Conjugate dans chaque puits Incuber pendant 120 minutes a temp rature ambiante D canter le contenu des puits et rincer les puits 3 fois avec de la Wash Solution dilu e 400 uL par puits Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d liminer les gouttelettes r siduelles Remarque importante La sensibilit et la pr cision de ce test sont fortement d pendantes de la bonne r alisation des tapes de lavage Ajouter 200 uL de Substrate Solution a chaque puits Incuber pendant 30 minutes a temperature ambiante Stopper la r action enzymatique en ajoutant 100 uL de Stop Solution a chaque puits Lire la densit optique 450 10 nm l aide d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques dans les 10 minutes apr s avoir ajout la Stop Solution Calcul des r sultats Calculer les valeurs moyennes des densit s optiques pour chaque s rie de standards contr les et chantillons Etablir la courbe talon en reportant la densi
35. nus dans des flacons ouverts doivent tre stock s 2 C 8 C Les micro plaques doivent tre stock es 2 C 8 C Une fois la capsule d aluminium ouverte attention bien refermer le flacon Les kits ouverts conservent leur activit durant deux mois s ils sont stock s comme pr c demment mentionn 4 4 Pr paration des r actifs Amener tous les r actifs et le nombre de barrettes n cessaires au test temp rature ambiante avant utilisation Wash Solution Diluer 30 mL de Wash Solution concentr e avec 1170 mL d eau d sionis e pour un volume final de 1200 mL Remarque La solution de lavage dilu e est stable deux semaines temp rature ambiante 4 5 Elimination des d chets relatifs au kit L limination des d chets relatifs au kit doit tre r alis e selon les r gles nationales en vigueur Les informations sp cifiques au kit sont pr sent es dans la fiche de s curit voir chapitre 13 4 6 Kits endommag s Dans le cas de dommages importants survenus au kit ou ses composants informer la DRG au plus tard une semaine apr s r ception du kit Les composants endommag s ne doivent pas tre utilis s pour le test Ils doivent tre stock s jusqu ce qu une solution adapt e ait t trouv e Apr s cela ils doivent tre limin s selon les directives officielles en vigueur Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 21 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 5 CONSERVATION ET PREPARATION DES EC
36. olution in jedes Well abstoppen 10 Die Optische Dichte bei 450 10 nm mit einem Mikrotiterplatten Leseger t innerhalb von 10 Minuten nach Zugabe der Stop Solution bestimmen NN 6 3 Ergebnisermittlung 1 Die durchschnittlichen Werte der Optischen Dichte OD f r jedes Set von Standards Controls und Patientenproben bestimmen 2 Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragen der mittleren Optischen Dichte jedes Standards gegen die Konzentration wobei der OD Wert auf der vertikalen Y Achse und die Konzentration auf der horizontalen X Achse eingetragen wird 3 Unter Verwendung der mittleren OD wird f r jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve ermittelt 4 Automatische Methode Die in der Arbeitsanleitung ermittelten Werte wurden automatisch mit Hilfe der 4 Parameter Gleichung 4PL 4 Parameter Logistics 4 Parameter Rodbard bestimmt Andere Auswertungsfunktionen k nnen leicht abweichende Werte ergeben 5 Die Konzentration der Proben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden Proben die eine h here Konzentration als die des h chsten Standards enthalten m ssen verd nnt werden Dieser Verd nnungsfaktor muss bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 16 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 6 3 1 Beispiel fur eine Standardkurve Nachfolgend wird ein typisches Beispiel f r eine Standardkurve mit dem DRG ELISA gezeigt Diese Werte sollten nich
37. posal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheet 4 6 Damaged Test Kits In case of any severe damage to the test kit or components DRG has to be informed in writing at the latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 4 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Eating drinking chewing gums or brushing teeth should be avoided for 30 minutes before sampling Otherwise it is recommended to rinse mouth thoroughly with cold water 5 minutes prior to sampling Do not collect samples when oral diseases inflammation or lesions exist blood contamination In case of visible blood contamination the patient should discard the sample rinse the sampling device with water wait for 10 minutes and take a new sample Note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection It is recommended to collect saliva samples with commercially available equipment e g SALI TUBES 100 SLV 4158 available from DRG Do not use any cotton swab for sampling such as Salivettes this in most cases will result in significant inter
38. se contains 0 5 M H2S04 Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns Wash Solution 1 vial 30 mL Concentrate for 1200 mL Note Additional Standard 0 for sample dilution is available upon request Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 3 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 4 2 Material required but not provided Calibrated EIA reader adjusted to read at 450 nm Calibrated variable precision micropipettes 100 uL and 200 uL Distilled or Deionized water 0 9 NaCl solution Timer 60 min range Reservoirs disposable Test tube or microtube rack in a microplate configuration Semi logarithmic graph paper or software for data reduction 4 3 Storage Conditions When stored at 2 C to 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 C to 8 C Microtiter wells must be stored at 2 C to 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again Opened kits retain activity for two months if stored as described above 4 4 Reagent Preparation Bring all reagents to room temperature before use Wash Solution Add deionized water to the 40X concentrated Wash Solution Dilute 30 mL of concentrated Wash Solution with 1170 mL deionized water to a final volume of 1200 mL The diluted Wash Solution is stable for 2 weeks at room temperature 4 5 Dis
39. sitif de pr l vement d chantillon distinct et r aliser le test partir de ce m lange 5 3 Dilution de l chantillon Si lors d un test pr liminaire la concentration de l Echantillon se r v le tre sup rieure celle du standard le plus concentr alors l chantillon doit tre dilu avec le 0 9 NaCl et test de nouveau comme d crit dans Realisation du test Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration Exemple a dilution 1 10 10 uL de saliva 90 uL 0 9 NaCl bien m langer b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL 0 9 NaCl bien m langer Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 22 6 6 1 6 2 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 REALISATION DU TEST Remarques g n rales Tous les r actifs et chantillons doivent tre amen s a temp rature ambiante avant utilisation Tous les r actifs doivent tre m lang s sans formation de mousse Une fois la proc dure engag e toutes les tapes doivent tre r alis es sans interruption Utiliser un nouveau c ne de pipette pour chaque standard contr le ou chantillon ceci afin d viter toute contamination L absorbance est fonction du temps d incubation et de la temp rature Avant de commencer le test il est recommand de pr parer tous les r actifs bouchons ouverts de pr parer les puits des microplaques etc Cela garantira un intervalle de temps quivalent entre chaque tape sa
40. t optique moyenne de chaque valeur standard en fonction de sa concentration en posant la densit optique en axe des ordonn es et la concentration en axe des abscisses L utilisation de la densit optique moyenne pour chaque chantillon d termine la concentration correspondante a partir de la courbe talon M thode automatique Les r sultats dans les instructions d utilisation ont t calcul s de facon automatique en utilisant une courbe de r gression 4 Param tres 4 param tres Rodbard ou 4 param tres Marquardt sont les m thodes favorites D autres fonctions logistiques peuvent donner des r sultats l g rement diff rents La concentration des chantillons peut tre lue directement partir de cette courbe talon Les chantillons avec une concentration sup rieure celle du plus haut standard doivent tre dilu s de nouveau Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 23 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 6 3 1 Exemple d une courbe standard typique Les r sultats suivants sont ici pr sent s a titre d exemple et ne peuvent tre utilis s au moment de l essai Standard Unit s optiques 450 nm Standard 2 E pg mL Standard 3 10 pg mL Standard 4 50 pg mL Standard 5 100 pg mL 7 VALEURS NORMALES ATTENDUES Il est fortement recommand chaque laboratoire de d terminer ses propres valeurs normales ou anormales Pour d t
41. t zur Berechnung von Patientendaten verwendet werden Optische Dichte 450nm Standard 1 1 pg mL Standard 5 100 pg mL 7 ERWARTETE WERTE Es wird empfohlen dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt Zur Ermittlung der Normwerte wurden Speichelproben von 152 erwachsenen M nner und 186 Frauen scheinbar gesunden Individuen im Alter von 21 bis 75 Jahren untersucht Die Proben wurden morgens gesammelt und mit dem DRG Salivary Estradiol ELISA gemessen In der Studie ergaben sich folgende Werte Tater aire Saivan Esradoilpomi Frauen 21 50 Estradiol Werte im Speichel zeigen einen klaren zirkadianen Rhythmus Aus diesem Grund sollten Proben immer zur selben Zeit gewonnen werden Jedes Labor sollte seinen eigenen Normbereich ermitteln da die Werte altersabh ngig sind und sich unterscheiden bei Neugeborenen Kindern Jugendlichen und Erwachsenen 8 QUALITATS KONTROLLE Es wird empfohlen die Kontrollproben gem den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag zu Tag berpr fung der Ergebnisse erzielt Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC Labors sind im QC Zertifikat das dem Kit beiliegt aufgef hrt Die im QC Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten zum direkten Ver
42. terschiedlichen Lotnummern nicht untereinander vertauschen Es wird empfohlen keine Wells von verschiedenen Platten zu verwenden auch nicht wenn es sich um das gleiche Lot handelt Die Kits k nnen unter anderen Bedingungen gelagert oder versendet worden sein so dass die Bindungscharakteristik der Platten leicht unterschiedlich ausf llt e Chemikalien und zubereitete oder bereits benutzte Reagenzien m ssen gem den nationalen Gefahrenstoffvorschriften wie gef hrlicher Abfall behandelt werden e Sicherheitsdatenbl tter f r dieses Produkt sind auf Anfrage direkt von der Firma DRG Instruments GmbH erh ltlich Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 13 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 4 BESTANDTEILE DES KITS 4 1 Kitinhalt 1 Microtiterwells 96 Wells 12x8 Wells einzeln brechbar mit anti Estradiol Antik rper polyklonal beschichtet 2 Standard Standard 0 5 6 Fl schchen je 1 mL gebrauchsfertig Konzentrationen 0 0 1 5 10 50 100 pg mL Enthalt quecksilberfreies Konservierungsmittel 3 Control Low amp High Kontrollen 2 Fl schchen je 1 0 mL gebrauchsfertig Enthalt quecksilberfreies Konservierungsmittel Kontrollwerte und bereiche entnehmen Sie bitte dem Fl schchenetikett oder dem QC Datenblatt 4 Enzyme Conjugate Enzymkonjugat 1 Fl schchen 26 mL gebrauchsfertig Estradiol mit Meerrettichperoxidase konjugiert Enthalt quecksilberfreies Konservierungsmittel 5 Substrate Solution Substratl sung
43. that all conditions of testing are the same Secure the desired number of Microtiter wells in the holder Dispense 100 uL of each Standard Control and samples with new disposable tips into appropriate wells Incubate for 30 minutes at room temperature Dispense 200 uL of Enzyme Conjugate into each sample and standard well Mix the plate thoroughly for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step Incubate for 120 minutes at room temperature 6 Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 3 times with diluted Wash Solution 400 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure 7 Add 200 uL of Substrate Solution to each well 8 Incubate for 30 minutes at room temperature 9 Stop the enzymatic reaction by adding 100 uL of Stop Solution to each well 10 Determine the absorbance OD of each well at 450410 nm with a microtiter plate reader It is recommended that the wells be read within 10 minutes after adding the Stop Solution P OGN S a 6 3 Calculation of Results 1 Calculate the average absorbance values for each set of standards controls and patient samples Using semi logarithmic graph paper construct a standard curve by plotting the mean absorbance obtained from each standard against its concentration with absorbance
44. tient agent de conservation sans mercure 3 Control Low amp High Contr le 2 flacons 1 mL pr t a l emploi Les valeurs contr les et limites sont indiqu es sur l tiquette du flacon ou sur la fiche QC Contient agent de conservation sans mercure 4 Enzyme Conjugate Conjugu enzymatique 1 flacon 26 mL pr t a l emploi Estradiol conjugu a la HRP Contient agent de conservation sans mercure 5 Substrate Solution Solution substrat 1 flacon 25 mL pr t a l emploi T tram thylbenzidine TMB 6 Stop Solution Solution d arr t 1 flacon 14 mL pr t l emploi contient 0 5 M de H SO Eviter les contacts avec la solution stop Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau 7 Wash Solution Solution de lavage 1 flacon concentr 40X voir Pr paration des r actifs Remarque Un Standard 0 suppl mentaire peut tre fourni sur demande 4 2 Equipement et mat riel requis mais non fournis Un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr 450 10 nm ex le lecteur de microplaques de DRG Instruments GmbH Des micro pipettes de pr cision variables et calibr es Du papier absorbant De l eau distill e 4 3 Stockage et stabilit du kit Les r actifs contenus dans des flacons non ouverts stock s 2 C 8 C seront stables jusqu la date d expiration inscrite sur l tiquette Ne pas utiliser les r actifs au dela de cette date Les r actifs conte
45. und nach 10 Minuten kann eine neue Probe genommen werden Achtung Proben die Natriumazid enthalten sollten nicht verwendet werden 5 1 Probenentnahme Wir empfehlen Speichelproben mit einem kommerziell verfugbaren Besteck zu sammeln z B SALI TUBES 100 SLV 4158 erh ltlich bei DRG Es sollte kein Besteck mit Baumwolltupfer verwendet werden wie z B Salivetten da dies in den meisten Fallen zu deutlichen Interferenzen f hrt Da die Steroidhormone ein deutliches episodisches Sekretionsmuster zeigen ist es wichtig auf den richtigen Zeitpunkt der Probenentnahme zu achten Um arbitr re willk rliche Ergebnisse zu vermeiden empfehlen wir 5 Proben in einem Zeitraum von 2 bis 3 Stunden zu sammeln mehrfache Probeentnahme Dies sollte vorzugsweise vor einer Mahlzeit durchgef hrt werden Da Lebensmittel eine bedeutende Menge an Steroidhormonen enthalten k nnen sollten die Proben m glichst n chtern entnommen werden Ist dies nicht m glich sollte die Sammelperiode auf jeden Fall vor einer Mahlzeit liegen 5 2 Probenaufbewahrung Proben sollten stets gut verschlossen sein und k nnen vor Testbeginn bis zu einer Woche bei 2 C 8 C gelagert werden F r eine l ngere Aufbewahrung sollten die Proben eingefroren bei 20 C bis zum Testbeginn gelagert werden Mehrfaches Auftauen und erneutes Einfrieren ist m glich Um Muzine aus der Probe zu entfernen muss jede Probe mindestens einmal eingefroren und aufgetaut und anschlie end
46. value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis 3 Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the standard curve 4 Automated method The results in the IFU have been calculated automatically using a 4 PL 4 Parameter Logistics curve fit 4 Parameter Logistics is the preferred method Other data reduction functions may give slightly different results 5 The concentration of the samples can be read directly from this standard curve Samples with concentrations higher than that of the highest standard have to be further diluted or reported as gt 100 pg mL For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 6 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 6 3 1 Example of Typical Standard Curve The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay Standard Absorbance Units Standard O 0 pg mL 2 08 Standard 1 1 pg mL Standard 2 5 pg mL Standard 3 10 pg mL Standard 4 50 pg mL Standard 5 100 pg mL N 7 EXPECTED NORMAL VALUES In order to determine the normal range of SLV Estradiol saliva samples from152 adult male and 186 female apparently healthy subjects ages 21 to 75 years were collected in the morning and analyzed using the DRG SLV Estradiol ELISA kit The following ranges were calculated
47. vitro For research use onl Nur f r Seulement dans Ie S loipara usoen Solo a scopo di ricerca y Forschungszwecke cadre de recherches investigaci n P Catalogue number Katalog Nr R f rence Numero de cat logo No di Cat Lot No Batch code Chargen Nr No de lot N mero de lote Lotto no Contains sufficient for lt n gt tests Ausreichend f r n Ans tze Contenu suffisant pour n tests Contenido suficiente para lt n gt ensayos Contenuto sufficiente per n saggi Storage Temperature Lagerungstemperatur Temp rature de conservation Temperatura de conservacion Temperatura di conservazione Expiration Date Mindesthaltbarkeits datum Date limite d utilisation Fecha de caducidad Data di scadenza seem BEG Legal Manufacturer Hersteller Fabricant Fabricante Fabbricante Distributed by Distributor Vertreiber Distributeur Distribuidor Distributore Content Content Inhalt Contenu Contenido Contenuto Volume No Volume No Volumen Anzahl Volume Num ro Volumen N mero Volume Quantit Microtiterwells Microtiterwells Mikrotiterwells Teen de mere Placas multipocillo Micropozzetti Antiserum Antiserum Antiserum Antis rum Antisuero Antisiero Enzyme Enzyme Conjugate Enzymkonjugat Conjugu enzymatique Conjugado enzimatico Tracciante enzimatico Conjugate Enzyme Enzyme Complex Enzymkomplex Complexe Complex enzimatico Complesso enzimati
48. wells After two hours incubation the microtiter plate is washed to stop the competition reaction Having added the substrate solution the concentration of Estradiol is inversely proportional to the optical density measured 3 WARNINGS AND PRECAUTIONS 1 This kit is for in vitro diagnostic use only For professional use only All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I II HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal 3 Before starting the assay read the instructions completely and carefully Use the valid version of the package insert provided with the kit Be sure that everything is understood 4 The microplate contains snap off strips Unused wells must be stored at 2 C to 8 C in the sealed foil pouch and used in the frame provided 5 Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same sequence for each step 6 Use reservoirs only for single reagents This especially applies to the substrate reservoirs Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution colored Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur Mix the contents of the microplate wells thoroughly to ensure good test results Do not reuse microwells Do not let wells dry during assa
49. y add reagents immediately after completing the rinsing steps Allow the reagents to reach room temperature 21 C to 26 C before starting the test Temperature will affect the absorbance readings of the assay However values for the patient samples will not be affected 10 Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes 11 Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled 12 Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results ooN Vers 9 0 Effective 2015 04 vk 2 13 14 15 16 17 18 19 20 21 4 1 7 DRG Salivary Estradiol ELISA SLV 4188 Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different Avoid contact with Stop So
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