FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin, High
Contents
1. Glande salivaire 3 3 3 Epith lium des canaux excr teurs 100 cytoplasmique C lon 3 3 3 Epith lium de surface 10 cytoplasmique Peau 3 3 3 Epith lium squameux 100 cytoplasmique sophage 3 3 3 Epith lium squameux 100 cytoplasmique 3 3 Epith lium du canal et des glandes sudoripares 80 100 cytoplasmique C ur 3 3 0 3 1 3 Epith lium des glandes s bac es 100 cytoplasmique Rein 3 3 3 Epith lium des tubules r naux Intestin gr le 3 3 3 Epith lium 20 50 10 30 cytoplasmique cytoplasmique Foie 3 3 3 Epith lium du canal biliaire Rate 3 0 3 50 cytoplasmique 307118EFG_002_1S051 2012 07 7 12 115639 002 Poumon 3 3 3 Epith lium bronchique 10 Estomac 3 3 3 Epith lium des glandes des cytoplasmique cryptes gastriques 10 30 i cytoplasmique 3 3 Epith lium alv olaire 50 Testicule 3 0 3 cytoplasmique Cellules 2 2 M soth lium 100 Thymus 3 3 3 Epith lium squameux 100 m soth liales 2 cytoplasmique cytoplasmique Muscle cardiaque 3 0 3 Thyroide 3 1 3 Cellules folliculaires 5 cytoplasmique Muscle squelettique 0 3 Amygdale 3 3 3 Epith lium squameux 100 3 cytoplasmique Nerf p riph rique 3 0 3 Uterus 2 2 2 Epithelium de l endometre 5 80 cytoplasmique Tissus tumoraux une immunor activit positive l anticorps Anti CK HMW 3462. Va KO Intended use Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Quick guide 115639 002 CE FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin High Molecular Weight Clone 34BE12 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code 15051 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin High Molecular Weight HMW Clone 348E12 1 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for the identification of basal cells and squamous epithelium in various tissues Positive results aid in the differentiation of benign prostatic glands from prostate adenocarcinoma and for detecting squamous differentiation in poorly differentiated tumors The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Cytokeratins are intermediate filament cytoskeletal proteins essential to development and differentiation of epithelial cells Approximately twenty different cytokeratins have been identified and are classified and numbered according to molecular weight and isoelectric points 2 In general most low molecular weight cytokeratins 40 54 k
3. r f K8010 Programme utiliser le protocole indiqu ci apr s Les r actifs doivent tre dilu s de la mani re appropri e avant leur utilisation Toutes les tapes doivent tre r alis es temp rature ambiante 20 25 1 Incuber la coupe de tissu avec 200 uL de r actif EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent r f DM821 pendant 5 minutes 1 minute Rincer dans le tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer r f K8007 pendant 1 5 minutes Incuber la coupe de tissu avec 200 uL d anticorps primaire r f IS051 pendant 20 minutes 1 minute Rincer dans le tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer r f K8007 pendant 1 5 minutes Incuber la coupe de tissu avec 200 uL de produit EnVision FLEX HRP r f DM822 pendant 20 minutes 1 minute Rincer dans le tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer r f K8007 pendant 1 5 minutes 7 Incuber la coupe de tissu avec 200 uL de tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer r f K8007 pendant 5 minutes 1 minute tape dite Auxiliary 8 Rincer dans le tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer r f K8007 pendant 1 5 minutes 9 Incuber la coupe de tissu avec 200 uL de solution EnVision FLEX Substrate Working Solution r f DM823 et DM827 pendant 5 minutes 1 minute 10 Incuber la coupe de tissu avec 200 uL de solution EnVision FLEX Substrate Working Solution r f DM823 et DM827 pendant 5 minutes 1
4. Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique respecter les proc dures de manipulation appropri es 4 Porter un quipement de protection individuelle appropri pour viter tout contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur I n existe pas de signe particulier pour indiquer l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patients Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako tape Commentaires Fixation ee O Pr traitement EnVision FLEX High pH r f K8004 Demasquage des pitopes
5. Berichten zufolge Tumorzellen bei einer Untergruppe azin ser Adenokarzinome 3 15 Uber eine scheinbare Immunf rbung von Astrozytomen wurde bei Klon 346E12 7 16 ebenfalls berichtet 1 Gown AM Vogel AM Monoclonal antibodies to intermediate filament proteins of human cells Unique and cross reacting antibodies J Cell Biol 1982 95 414 24 2 Moll R Franke WW Schiller DL The catalog of human cytokeratins Patterns of expression in normal epithelia tumors and cultured cells Cell 1982 31 11 24 3 Miettinen M Keratin immunohistochemistry update of applications and pitfalls Pathol Ann 1993 28 113 43 4 Gown AM Vogel AM Monoclonal antibodies to human intermediate filament proteins II Distribution of filaments in normal human tissues Amer J Pathol 1984 114 309 21 5 IR0O51 IHC003 D09346 6 Gown AM Vogel AM Monoclonal antibodies to human intermediate filament proteins Ill Analysis of tumors Am J Clin Pathol 1985 Oct 84 4 413 24 7 Diagnostic immunohistochemistry theranostic and genomic applications Dabbs David J 3rd ed Philadelphia PA Saunders Elsevier 2010 8 Hurlimann J Gardiol D Immunohistochemistry in the differential diagnosis of liver carcinomas Amer J Surg Pathol 1991 15 280 8 9 Dairkee SH Puett L Hackett AJ Expression of basal and luminal epithelium specific keratins in normal benign and malignant breast tissue J Nat Can Inst 1988 80 691 5 10 Thike AA Cheok PY Jara Lazaro AR Tan B
6. Tan P Tan PH Triple negative breast cancer clinicopathological characteristics and relationship with basal like breast cancer Mod Pathol 2010 23 1 123 33 11 Gown AM Vogel AM Anti intermediate fillament monoclonal antibodies tissue specific tools in tumor diagnosis Surv Synth Pathol Res 1984 3 369 385 12 Bolen JW Hammar SP McNutt MA Reactive and neoplastic serosal tissue a light microscopic ultrastructural and immunocytochemical study Amer J Surg Pathol 1986 10 34 47 13 Varma M Amin MB Linden MD Zarbo RJ Discriminant staining pattern of small glandular and preneoplastic lesions of the prostate using high molecular weight cytokeratin antibody A study of 301 consecutive needle biopsies Mod Pathol 1997 10 93A 14 O Malley FP Grignon DJ Shum DT Usefulness of immunoperoxidase staining with high molecular weight cytokeratin in the differential diagnosis of small acinar lesions of the prostate gland Virch Arch Pathol Anat 1990 417 191 6 15 Brimo F Epstein Jl Immunohistochemical pitfalls in prostate pathology Hum Pathol 2012 43 313 24 16 Bacchi CA Zarbo Ru Jiang JJ Gown AM Do glioma cells express cytokeratin Appl Immunohistochem 1995 3 45 53 Temperature limitation In vitro diagnostic medical device Limites de temp rature Dispositif m dical de diagnostic in vitro sl Zulassiger Temperaturbereich In vitro Diagnostikum LEC REP 7 Dako North America Inc Dako Denmark A S Batch code Contains suffi
7. hrleistet vergleichbare Waschzeiten Nahere Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Gerat entnehmen Wenn die Farbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Gerat nicht verf gbar sind bitte den technischen Kundendienst von Dako verstandigen Gegenf rbung Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Kontrollen Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Plattenepithelzellen enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Das zellul re F rbemuster ist zytoplasmatisch Gesunde Gewebe 5 Gewebetyp Positive Gewebeelemente Gewebetyp Positive Gewebeelemente Anz getestet Anz getestet Nebenniere 3 0 3 Ovarium 3 3 3 Oberfl chenepithel 80 100 zytoplasmatisch Knochenmark 3 0 3 Pankreas 3 3 3 Pankreasgangepithel 50 80 zytoplasmatisch Mamma 2 2 2 Dr sen und Gangepithel 80 Parathyroida 3 0 3 zytoplasmatisch Zerebellum 3 0 3 Hypophyse 3 0 3 Zerebru
8. induit par la chaleur HIER de 20 minutes proc dure 3 en 1 l aide de l appareil PT Link et de la station de rin age du PT Link dilution dilution Contr le n gatif FLEX Negative Control Mouse r f IS750 Incubation de 20 minutes Visualisation EnVision FLEX High pH r f K8010 Incubation de 20 minutes 2 incubations de 5 minutes avec le DAB Contre coloration EnVision FLEX Hematoxylin r f K8018 Incubation de 5 minutes Ta de ee Tr Coloration Ba a Lames Montage FLEX nn Microscope Slides ref K8020 DZ pour une meilleure adherence Milieu de montage permanent requis 307118EFG_002_1S051 2012 07 5 12 Pr paration des chantillons Proc dure de coloration 115639 002 Appareillage Dako Autostainer Autostainer Plus Utiliser les flacons sp cifiques l appareil r f S3425 L utilisateur doit toujours lire la notice pour obtenir des instructions d taill es sur la proc dure de coloration et sur la manipulation du produit Coupes en paraffine l anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissu fix es au formol et incluses en paraffine L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Pr traitement le pr traitement des coupes de tissu fix es au formol et incluses en paraffine par d masquage des pitopes induit par la chaleur HIER est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus par la m thode HI
9. label tumor cells in a subset acinar adenocarcinomas 3 15 Spurious immunostaining of astrocytomas has also been reported with clone 34BE12 7 16 307118EFG_002_1S051 2012 07 4 12 Francais Int r t R sum et explication R actif fourni Immunog ne Sp cificit Pr cautions d emploi Conservation Guide rapide 115639 002 R f IS051 Pour diagnostic in vitro L anticorps FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin High Molecular Weight HMW Clone 34BE12 1 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin a tre utilis en immunohistochimie avec les appareils Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps facilite l identification des cellules basales et de epithelium squameux dans diff rents tissus Des r sultats positifs facilitent la diff renciation entre les glandes prostatiques b nignes et l ad nocarcinome de la prostate et facilitent la d tection d une diff renciation squameuse dans les tumeurs peu diff renci es L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi Les cytok ratines sont des prot ines de filament interm diaire du cytosquelette essentielles au d veloppement et la diff renciation des cellules pith liales Env
10. minute 11 Rincer dans le tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer r f K8007 pendant 1 5 minutes 12 Proc der une contre coloration de la lame avec le produit EnVision FLEX Hematoxylin r f K8018 pendant 5 minutes 1 minute 13 Rincer dans de l eau d ionis e pendant 1 5 minutes 14 Incuber la coupe de tissu avec 200 uL de tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer r f K8007 pendant 5 minutes 1 minute 15 Rincer dans de l eau d ionis e pendant 1 5 minutes 16 Monter les lames avec un milieu de montage permanent CE 22 INS Grille de programmation pour le dosage recommande 307118EFG_002_1S051 2012 07 6 12 Interpretation de la coloration Caract ristiques de performance 115639 002 Programming Grid zi Program Slide Info Protocol Template 4 41 IHC 6 08 12 3 20PM al Dako Help DC3400 7355 03 L tape dite Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration de 10 lames ou moins Pour les cycles de coloration de plus de 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Pour plus de d tails se reporter au Manuel d utilisation sp cifique a l appareil Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l appareil Dako Autostainer contacter l assistance technique de Dako Contre coloration il est recommand d effectuer une contre col
11. performed at room temperature 20 25 1 Incubate tissue section with 200 uL EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent Code DM821 for 5 1 minutes Rinse in EnVision FLEX Wash Buffer Code K8007 for 1 5 minutes Incubate tissue section with 200 uL Primary Antibody Code IS051 for 20 1 minutes Rinse in EnVision FLEX Wash Buffer Code K8007 for 1 5 minutes Incubate tissue section with 200 uL EnVision FLEX HRP Code DM822 for 20 1 minutes Rinse in EnVision FLEX Wash Buffer Code K8007 for 1 5 minutes Incubate tissue section with 200 uL EnVision FLEX Wash Buffer Code K8007 for 5 1 minutes Auxiliary step Rinse in EnVision FLEX Wash Buffer Code K8007 for 1 5 minutes Incubate tissue section with 200 uL EnVision FLEX Substrate Working Solution Codes DM823 and DM827 for 5 1 minutes 10 Incubate tissue section with 200 uL EnVision FLEX Substrate Working Solution Codes DM823 and DM827 for 5 1 minutes 11 Rinse in EnVision FLEX Wash Buffer Code K8007 for 1 5 minutes 12 Counterstain slide with EnVision FLEX Hematoxylin Code K8018 for 5 1 minutes 13 Rinse in deionized water for 1 5 minutes 14 Incubate tissue section with 200 uL EnVision FLEX Wash Buffer Code K8007 for 5 1 minutes 15 Rinse in deionized water for 1 5 minutes 16 Mount slides with permanent mounting medium Bey Gls a ID oo Programming grid for recommended assay 307118EFG_002_1S051 20
12. 12 07 2 12 Staining interpretation Performance characteristics 115639 002 Programming Grid z Slide Info Protocol Template 4 4 1 IHC 6 08 12 3 20PM al Dako Next Print Exit Help DC3400 7355 03 The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Counterstaining The recommended counterstain is EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Controls Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include squamous epithelial cells and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 The cellular staining pattern is cytoplasmic Normal tissues 5 Tissue Type Positive Tissue Elements Tissue Type Positive Tissue Elements tested t
13. Da are distributed in non squamous epithelium Moll s catalog numbers 7 8 and or 17 20 3 High molecular weight cytokeratins 48 67 kDa are found in the squamous epithelium Moll s catalog numbers 1 6 and or 9 16 3 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone 348E12 1 Isotype IgG kappa Solubilized immunogen keratin extracted from human stratum corneum 1 Anti Cytokeratin High Molecular Weight Anti CK HMW Clone 348E12 has been shown to react with the 66 57 51 and 49 kDa proteins in Western blotting corresponding to cytokeratins 1 5 10 and 14 of the Moll catalog 1 2 4 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Fe
14. E12 a t signal e pour les carcinomes pidermo des canalaires et transitionnels notamment le carcinome pidermo de de la peau du poumon et du nasopharynx le carcinome intracanalaire du sein du pancr as du canal biliaire et de la glande salivaire le carcinome transitionnel de la vessie et du nasopharynx et les thymomes 6 11 Il a galement t montr que l anticorps Anti CK HMW 348E12 identifie de fa on positive les m soth liomes pith liaux mais il ne r agissait pas avec les m soth liomes sarcomatoides ou desmoplastiques 12 Une positivit variable a l anticorps Anti CK HMW 34BE12 a t observ e pour les ad nocarcinomes de l ovaire et du tractus gastro intestinal ainsi que de la thyro de Les tumeurs observ es comme largement non r actives au clone 34BE12 comprennent les ad nomes d organes endocriniens les carcinomes du foie carcinome h patocellulaire les tumeurs de l endometre du rein et neuroendocrines 6 7 11 Dans la prostate le clone 34BE12 marque positivement les cellules basales de l sions b nignes telles que l atrophie hyperplasie ad nomateuse atypique et hyperplasie post scl rotique L absence de coloration de la couche basale avec l anticorps Anti CK HMW 346E12 sugg re un diagnostic de cancer de la prostate mais non un diagnostic de malignit et n cessite d autres donn es morphologiques 3 7 13 15 Il a t observ que l anticorps Anti CK HMW clone 346E12 marq
15. ER l aide de la solution dilu e EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x r f K8004 Le d paraffinage la r hydratation et le demasquage des pitopes peuvent tre r alis s dans l appareil PT Link de Dako r f PT100 PT101 Pour plus de d tails se reporter au Manuel d utilisation du PT Link Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Link temp rature de pr chauffage 65 temp rature et dur e du d masquage des pitopes 97 pendant 20 minutes 1 minute laisser refroidir jusqu 65 Retirer le portoir de lames de la cuve du PT Link et plonger imm diatement les lames dans une jarre cuve par ex station de rin age du PT Link r f PT 109 contenant du tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer 20x r f K8007 dilu a temp rature ambiante Laisser les lames dans le tampon de lavage pendant 1 a 5 minutes Les coupes de tissu ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique qui suit Pour une meilleure adh rence des coupes de tissu sur les lames de verre il est recommand d utiliser les lames FLEX IHC Microscope Slides r f K8020 Une fois la proc dure de coloration termin e les coupes doivent tre d shydrat es claircies et mont es l aide d un milieu de montage permanent Visualisation le syst me de visualisation recommand est le syst me EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus
16. Vision FLEX Hematoxylin Code Nr K8018 5 Min Inkubation Kontrollgewebe Zytoplasmatische Farbung Fixierung Permanente Fixierung erforderlich verwenden Code Nr S3425 Der Anwender muss stets die Packungsbeilage lesen um sich ber die detaillierten Anweisungen f r das F rbeverfahren und die Handhabung des Produkts zu informieren 307118EFG_002_1S051 2012 07 9 12 Probenvorbereitung Farbeverfahren 115639 002 Paraffinschnitte Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Vorbehandlung Es ist eine Vorbehandlung der formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitte durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit HIER unter Verwendung von verd nnter EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8004 erzielt werden Entparaffinierung Rehydrierung und Epitopdemaskierung k nnen im Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 vorgenommen werden Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch F r PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorw rmtemperatur 65 Temperatur und Zeit f r Epitopdemaskierung 97 f r 20 1 Minuten auf 65 abk hlen Das Objekttr gergestell mit den Objekttr gern aus dem PT Beh lter herausnehmen und die Objekttr ger sofor
17. cient for lt N gt tests 6392 Via Real Produktionsvej 42 Code du lot Contenu suffisant pour si gt tests Carpinteria California 93013 USA DK 2600 Glostrup Denmark Chargenbezeichnung Inhalt ausreichend f r n Ans tze Consult instructions for use Authorized representative in the European Community 7 a ee 2 z a BA Consulter les instructions d utilisation EC REP Repr sentant Autoris dans la Communaut Europ enne en n 424 0021 ax 45 4485 9595 Gebrauchsanweisung beachten Autorisierter Repr sentant in der EU echnical Support 800 424 00 Customer Service 800 235 5763 www dako com 307118EFG_002_1S051 2012 07 12 12
18. deral regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support een Comments Pre treatment EnVision FLEX High pH Code K8004 20 min HIER 3 in 1 using PT Link NE a PT Link Rinse Station Dilution Range 20 min incubation Dilution buffer Pre diluted Negative Control FLEX Negative Control Mouse Code IS750 20 min incubation incubation Code K8018 Control Tissue Cytoplasmic staining 307118EFG_002_1S051 2012 07 1 12 Specimen preparation Staining procedure 115639 002 Slides Mounting FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 Recommended for greater adherence Permanent mounting required Instrumentation Dako Autostainer Autostainer Plus Use instrument specific vials S3425 The user must always read the package insert for detailed instructions of the staining procedure and handling of the product Paraffin sections The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut int
19. ested Adrenal 3 0 3 Ovary 3 3 3 Surface epithelium 80 100 cytoplasmic Bone marrow 3 0 3 Pancreas 3 3 3 Pancreatic duct epithelium 50 80 cytoplasmic Breast 2 2 2 Gland and duct epithelium 80 Parathyroid 3 0 3 cytoplasmic Cerebellum 3 0 3 Pituitary 3 0 3 Cerebrum 3 0 3 Prostate 3 3 3 Basal and ductal epithelium 90 cytoplasmic Cervix 2 2 2 Surface squamous epithelium Salivary gland 3 3 3 Excretory duct epithelium 100 cytoplasmic 100 cytoplasmic Colon 3 3 3 Surface epithelium 10 Skin 3 3 3 Squamous epithelium 100 cytoplasmic cytoplasmic Esophagus 3 3 3 Squamous epithelium 100 cytoplasmic 3 3 Sweat duct and gland epithelium 80 100 cytoplasmic Heart 3 3 0 3 1 3 Sebaceous gland epithelium 100 cytoplasmic Kidney 3 3 3 Renal tubule epithelium Small intestine 3 3 3 Epithelium 20 50 10 30 cytoplasmic cytoplasmic Liver 3 3 3 Bile duct epithelium 50 Spleen 3 0 3 cytoplasmic Lung 3 3 3 Bronchial epithelium 10 Stomach 3 3 3 Gastric crypt gland epithelium cytoplasmic 10 30 cytoplasmic 3 3 Alveolar epithelium 50 cytoplasmic Testis 3 0 3 307118EFG_002_1S051 2012 07 3 12 115639 002 Mesothelial cells 2 2 2 Mesothelium 100 cytoplasmic Thymus 3 3 3 Squamous epithelium 100 cytoplasmic Muscle cardiac 3 0 3 Thyroid 3 1 3 Follic
20. iron vingt cytok ratines diff rentes ont t identifi es Elles sont class es et num rot es en fonction de leur poids mol culaire et de leur point iso lectrique 2 En general la plupart des cytok ratines de faible poids mol culaire entre 40 et 54 KDa sont r parties dans l pith lium non squameux et correspondent aux num ros 7 8 et ou 17 20 de la classification de Moll 3 Les cytok ratines de haut poids mol culaire entre 48 et 67 kDa se situent dans l epithelium squameux et correspondent aux num ros 1 6 et ou 9 16 de la classification de Moll 3 Se reporter aux nstructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone 348E12 1 Isotype IgG kappa K ratine immunog ne soluble extraite de la couche corn e de piderme humain 1 Lors d un Western blot on a montr que l anticorps Anti Cytokeratin High Molecular Weight Anti CK HMW Clone 348E12 r agissait avec les prot ines de 66 57 51 et 49 kDa correspondant aux cytok ratines 1 5 10 et 14 de la classification de Moll 1 2 4 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaNs produit chimique hautement toxique dans sa forme pure
21. m 3 0 3 Prostata 3 3 3 Basal und Gangepithel 90 zytoplasmatisch Zervix 2 2 2 Oberfl chen Plattenepithel Speicheldr se 3 3 3 Exkretionsgangepithel 100 100 zytoplasmatisch zytoplasmatisch Kolon 3 3 3 Oberfl chenepithel 10 Haut 3 3 3 Plattenepithel 100 zytoplasmatisch zytoplasmatisch Osophagus 3 3 3 Plattenepithel 100 zytoplasmatisch 3 3 Schwei dr sengang und Dr senepithel 80 100 zytoplasmatisch Herz 3 3 0 3 1 3 Talgdr senepithel 100 zytoplasmatisch Niere 3 3 3 Nierentubulusepithel 10 30 D nndarm 3 3 3 Epithel 20 50 zytoplasmatisch zytoplasmatisch Leber 3 3 3 Gallengangepithel 50 Milz 3 0 3 zytoplasmatisch 307118EFG_002_1S051 2012 07 11 12 References Bibliographie Literaturangaben Catalogue number R f rence du catalogue Bestellnummer Manufacturer al Fabricant Hersteller Use by Utiliser jusque Verwendbar bis PT0020 Rev C Edition 07 12 115639 002 Lunge 3 3 3 Bronchialepithel 10 Magen 3 3 3 Gastrische Einbuchtungsepithel zytoplasmatisch 10 30 zytoplasmatisch 3 3 Alveolarepithel 50 Testes 3 0 3 zytoplasmatisch Mesothelzellen 2 2 2 Mesothel 100 Thymus 3 3 3 Plattenepithel 100 zytoplasmatisch zytoplasmatisch Herzmuskel 3 0 3 Thyroida 3 1 3 Follikelzellen 5 zytoplasmatisch Skelettmuskulatur 3 0 3 Mandel 3 3 3 Plattenepi
22. nitte 5 1 Minuten Zusatz Schritt mit 200 uL EnVision FLEX Wash Buffer Code Nr K8007 inkubieren 1 5 Minuten in EnVision FLEX Wash Buffer Code Nr K8007 sp len 9 Gewebeschnitte 5 1 Minuten mit 200 uL EnVision FLEX Substrate Working Solution Code Nr DM823 und DM827 inkubieren 10 Gewebeschnitte 5 1 Minuten mit 200 uL EnVision FLEX Substrate Working Solution Code Nr DM823 und DM827 inkubieren 11 1 5 Minuten in EnVision FLEX Wash Buffer Code Nr K8007 sp len 12 Objekttr ger 5 1 Minuten mit EnVision FLEX Hematoxylin Code Nr K8018 gegenf rben 13 1 5 Minuten mit entionisiertem Wasser sp len 14 Gewebeschnitte 5 1 Minuten mit 200 uL EnVision FLEX Wash Buffer Code Nr K8007 inkubieren 15 1 5 Minuten mit entionisiertem Wasser sp len 16 Objekttr ger mit einem permanenten Fixiermittel fixieren pee any ee I Programmierraster f r empfohlenes Assay 307118EFG_002_1S051 2012 07 10 12 Auswertung der Farbung Leistungseigenschaften 115639 002 Programming Grid a ae SI II IN ee Program zi Slide Info Protocol Template Next V441 IHC 6 08 12 3 20PM al Dako Print Exit Help DC3400 7355 03 Bei Farbedurchlaufen mit lt 10 Objekttragern sollte der Zusatz Schritt auf rinse buffer eingestellt werden Fur F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttragern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dies gew
23. o sections of approximately 4 um Pre treatment Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections with heat induced epitope retrieval HIER is required Optimal results are obtained by pretreating tissues with HIER using diluted EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8004 Deparaffinization rehydration and epitope retrieval can be performed in Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to PT Link User Guide The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 epitope retrieval temperature and time 97 for 20 1 minutes cool down to 65 Remove slide rack from PT tank and immediately dip slides in jar tank e g PT Link Rinse Station Code PT109 containing diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 20x Code K8007 Leave slides in Wash Buffer for 1 5 minutes The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Visualization The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 Program Use the protocol given below Reagents must be appropriately diluted before use All steps should be
24. oration l aide du produit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus r f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Contr les des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps et en suivant le m me protocole que les chantillons de patients Le tissu de contr le positif doit comprendre des cellules pith liales squameuses et les cellules structures doivent pr senter les sch mas de r action d crits pour ces tissus dans la section Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le r actif de contr le n gatif recommand est le produit FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus r f 15750 Le sch ma de coloration cellulaire est cytoplasmique Tissus sains 5 Type de tissu Elements tissulaires positifs Type de tissu Elements tissulaires positifs nb test s nb test s Surr nale 3 0 3 Ovaire 3 3 3 Epith lium de surface 80 100 cytoplasmique Moelle osseuse 3 0 3 Pancreas 3 3 3 Epithelium du canal pancr atique 50 80 cytoplasmique Sein 2 2 2 pith lium glandulaire et Parathyroide 3 0 3 canalaire 80 cytoplasmique Cervelet 3 0 3 Pituitaire 3 0 3 Cerveau 3 0 3 Prostate 3 3 3 Epith lium basal et canalaire 90 cytoplasmique Col de l uterus 2 2 2 Epith lium squameux de surface 100 cytoplasmique
25. rschiedene Zytokeratine identifiziert und nach ihrem Molekulargewicht und ihrem isoelektrischen Punkt klassifiziert und nummeriert worden 2 Generell gilt dass die meisten Zytokeratine mit niedrigem Molekulargewicht 40 54 kDa im Nicht Plattenepithel verteilt sind Sie tragen die Katalognummern 7 8 und oder 17 20 nach Moll 3 Hochmolekulare Zytokeratine 48 67 kDa kommen im Plattenepithel vor und haben die Katalognummern 1 6 und oder 9 16 nach Moll 3 Siehe Allgemeine Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder die Anweisungen des Detektionssystems von IHC Verfahren Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon 34 E12 1 Isotyp IgG Kappa Aus der humanen Hornschicht extrahiertes gel stes immunogenes Keratin 1 Anti Cytokeratin High Molecular Weight Anti CK HMW Klon 34 E12 reagiert nachweislich mit den Proteinen mit Molekulargewichten von 66 57 51 und 49 kDa beim Western Blotting die den Zytokeratinen 1 5 10 und 14 des Moll schen Katalogs entsprechen 1 2 4 1 F r Fachpersonal 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Bei den in diesem Produkt verwendeten Konzentrationen kann Natriumazid obwohl nicht als gef hrlich klassifiziert mit Blei und Kupferabflussrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung s
26. t in einen Beh lter z B PT Link Rinse Station Code Nr PT109 mit verd nntem auf Zimmertemperatur gebrachtem EnVision FLEX Wash Buffer 20X Code Nr K8007 eintauchen Die Objekttrager f r 1 5 Minuten im Wash Buffer belassen Die Gewebeschnitte d rfen wahrend der Behandlung oder des anschlieBenden immunhistochemischen Farbeverfahrens nicht austrocknen Fur eine bessere Haftung der Gewebeschnitte an den Glas Objekttragern werden FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen Nach dem Farben m ssen die Schnitte dehydriert geklart und unter Verwendung eines permanenten Fixiermittels fixiert werden Visualisierung Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 Programm Das unten aufgef hrte Protokoll verwenden Reagenzien m ssen vor dem Einsatz entsprechend verd nnt werden Alle Schritte bei Raumtemperatur 20 25 durchf hren 1 _Gewebeschnitte mit 200 uL EnVision FLEX Peroxidase Blocking Reagent Code Nr DM821 f r 5 1 Minuten inkubieren 1 5 Minuten in EnVision FLEX Wash Buffer Code Nr K8007 sp len Gewebeschnitt 20 1 Minuten mit 200 uL Prim rantik rper Code Nr 15051 inkubieren 1 5 Minuten in EnVision FLEX Wash Buffer Code Nr K8007 sp len Gewebeschnitte 20 1 Minuten mit 200 uL EnVision FLEX HRP Code Nr DM822 inkubieren 1 5 Minuten in EnVision FLEX Wash Buffer Code Nr K8007 sp len Gewebesch
27. tets mit viel Wasser nachsp len um Ansammlungen von Metallazid in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien nicht entsprechend den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen die Bedingungen vom Anwender gepr ft werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben durchgef hrt werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Schritt Anmerkungen U Vorbehandlung EnVision FLEX High pH Code Nr K8004 20 He Trug HIER 3 in 1 mit PT Link und PT Link Rinse Station Verd nnungsbereich Gebrauchsfertio 20 Min Inkubation Verd nnungspuffer Vorverd nnt Negativkontrolle FLEX Negative Control Mouse Code Nr IS750 20 Min Inkubation EnVision FLEX High pH Code Nr K8010 20 Min Inkubation 2 x 5 Min DAB Inkubation En
28. thel 100 zytoplasmatisch Nerv peripher 3 0 3 Uterus 2 2 2 Endometriumepithel 5 80 zytoplasmatisch Pathologische Gewebe Positive Immunreaktivitat mit Anti CK HMW 34BE12 Antik rper wird f r Plattenepithel und Duktal und Ubergangsepithelkarzinome beschrieben wie beispielsweise Plattenepithelkarzinom von Haut Lunge und Nasopharynx Duktuskarzinom von Brust Pankreas Gallengang und Speicheldr sen Ubergangsepithelkarzinom von Blase und Nasopharynx sowie Thymome 6 11 Anti CK HMW 348E12 identifiziert auch positiv epitheliale Mesotheliome reagiert aber nicht mit sarkomatoiden oder desmoplastischen Mesotheliomen 12 Variable Positivit tsgrade mit Anti CK HMW 34 BE12 wurden in Adenokarzinomen von Eierstock Gastrointestinaltrakt und Schilddr se nachgewiesen Berichte ber gr tenteils nicht reaktive Tumore mit Klon 34 BE12 beinhalten Adenome der endokrinen Organe Karzinome der Leber hepatozellul re Karzinome Endometrium Niere und neuroendokrine Tumore 6 7 11 Bei Prostata markiert Klon 348E12 die Basalzellen von gutartigen L sionen einschlie lich Atrophie atypischer adenomat ser Hyperplasie und post sklerotischer Hyperplasie positiv Das Fehlen einer F rbung der Basalschicht mit Anti CK HMW 34 E12 gilt als deutliches Anzeichen f r die Diagnose von Prostatakrebs jedoch nicht f r die Diagnose einer Malignit t und erfordert weitere morphologische Daten 3 7 13 15 Anti CK HMW Klon 34BE12 markiert
29. ue les cellules tumorales dans un sous ensemble d ad nocarcinomes acinaires 3 15 Une coloration immunologique fausse des astrocytomes a galement t signal e avec le clone 346E12 7 16 307118EFG_002_1S051 2012 07 8 12 Deutsch Verwendungszweck Zusammenfassung und Erklarung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifitat VorsichtsmaBnahmen Lagerung Kurzanleitung 115639 002 Code Nr 15051 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin High Molecular Weight HMW Klon 34 E12 1 gebrauchsfertig Dako Autostainer Autostainer Plus ist f r die Verwendung in der Immunhistochemie zusammen mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper dient zum Nachweis von Basalzellen und Plattenepithelzellen in verschiedenen Geweben Positive Ergebnisse helfen bei der Unterscheidung gutartigen Prostatagewebes von Prostata Adenokarzinomen und beim Nachweis von Plattenepithelzellen bei schlecht differenzierten Tumoren Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden Zytokeratine sind Zellger stproteine des intermedi ren Filaments die wesentlich f r die Entwicklung und Differenzierung von Epithelzellen sind Bisher sind etwa zwanzig ve
30. ular cells 5 cytoplasmic Muscle skeletal 3 0 3 Tonsil 3 3 3 Squamous epithelium 100 cytoplasmic Nerve peripheral 3 0 3 Uterus 2 2 2 Endometrial epithelium 5 80 cytoplasmic Abnormal tissues Positive immunoreactivity with anti CK HMW 348E12 antibody has been reported in squamous cell ductal and transitional cell carcinomas including squamous cell carcinoma of the skin lung and nasopharynx ductal carcinoma of the breast pancreas bile duct and salivary gland transitional cell carcinomas of the bladder and nasopharynx and thymomas 6 11 Anti CK HMW 348E12 has also been shown to positively identify epithelial mesotheliomas but was unreactive with sarcomatoid or desmoplastic mesotheliomas 12 Variable positivity with anti CK HMW 34BE12 has been found in adenocarcinomas of ovary gastrointestinal tract and thyroid Tumors reported to be largely unreactive with clone 348E12 include adenomas of endocrine organs carcinomas of liver hepatocellular carcinoma endometrium kidney and neuroendocrine tumors 6 7 11 In prostate clone 346E12 positively labels the basal cells of benign lesions including atrophy atypical adenomatous hyperplasia and post sclerotic hyperplasia The absence of staining of the basal layer with anti CK HMW 348E12 is suggestive of the diagnosis of prostate cancer but not diagnostic of malignancy and requires other morphologic data 3 7 13 15 Anti CK HMW clone 348E12 has been reported to
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