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L`exploration de l`érythropoïèse via le taux sérique des récepteurs

1.
2. 2 65 4 39 2 03 3 69
3. 132 50 82 60 42 82 d
4. 132 50 82 60 dale dus 42 82 dus
5. 20 IL 1 Prot ines de liaison du fer transferrine lactoferrine lipocaline neutrophile 20 IELTS DRESS SORES 20 Elz BOOLIAN Sa 21 11 1 3 Lipocaline neutrophile NGAL sul etait 21 OSES den RS es N 22 11 3 Les transporteurs membranaires de fer DMT1 Nrampl ferroportine 24 Des D 1 L es oe a a 24 LOT 25 LEY oil ane olsen O e 26 11 4 Les ferrireductases Deytb et St aps 27 ELO SG OD SKS SR tie li icone 27 E E UC AO o 27 11 5 Les ferroxydases la c ruloplasmine et l h phaestine 28 IES 1 Cermloplasimine CE se na usant EE eae pene do neo 28 52 FAC DN ACS UNS ie ALSACE eds red ciao eee 29 11 6 Transport de l h me l haptoglobine l h mopexine HCP1 et FLVCR 29 nao onde a e SOSA Se 29 OD AC E a en et en na ee a ie ne en 30 DO Gi 8 Pen rer ere NT eet ee LR ere re E nd ree 30 OSEO ee ee ee ese 31 11 7 L h me oxyg nase HO enzyme de d gradation de I h me 31 ILS Me Saline CUBHINE 2 enre chocs 01
6. Liste des abr viations ALA d aminolevulinate AF an mie ferriprive AMC an mie des maladies chroniques B2m 62 microglobuline BFU E Burst Forming Unit Erythroid CFU GEMM Colony Forming Unit Granulocyte Erythrocyte Megacaryocyte Macrophage CFU E Colony Forming Unit Erythroid CMH Complexe Majeur d4Hitosompatibilit CO monoxyde de carbone CP c ruloplasmine CSH Cellule Souche H matopoi tique Dcytb Duodenal cytochrome b reductase DMT1 Divalent Metal Transporter 1 EP rythrophagocytose EPO rythropoi tine ETU erythron transferrin uptake FLVCR Feline Leukemia Virus subgroup C Receptor GM CSF Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor GR Globule Rouge HCP1 Heme Carrier Protein 1 HFE Human hemochromatosis ou HFE protein ou HFE for High Fe hemochromatosis sa mutation provoque l h mochromatose HIF Hypoxia Inducible Factor HO H me Oxyg nase Hp Haptoglobine Hpx hypotransferrin mique HRE Hypoxia Responsive Element IL interleukine IRE Iron Regulated Element IRP Iron Regulatory Protein KO knock out LCR Locus Control Region LPS Lipopolysaccharide mk microcytic anemia an mie microcytaire MTP1 Metal Transporter Protein 1 Ferroportine MCV Mean Cellular Volume NGAL Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin NO monoxyde d azote Nramp Natural resistance associated macrophage protein NT
7. 64 65 Farnaud S and Evans R W Lactoferrin a multifunctional protein with antimicrobial properties Mol Immunol 2003 40 7 395 405 Ward P P Mendoza Meneses M Cunningham G A and Conneely O M Iron status in mice carrying a targeted disruption of lactoferrin Mol Cell Biol 2003 23 1 178 85 Yang J Mori K Li J Y and Barasch J Iron lipocalin and kidney epithelia Am J Physiol Renal Physiol 2003 285 1 F9 18 Goetz D H Holmes M A Borregaard N Bluhm M E Raymond K N and Strong R K The neutrophil lipocalin NGAL is a bacteriostatic agent that interferes with siderophoremediated iron acquisition Mol Cell 2002 10 5 1033 43 Devireddy L R Gazin C Zhu X and Green M R A cell surface receptor for lipocalin 24p3 selectively mediates apoptosis and iron uptake Cell 2005 123 7 1293 305 Ghosh S Hevi S and Chuck S L Regulated secretion of glycosylated human ferritin from hepatocytes Blood 2004 103 6 2369 76 Levi S Corsi B Bosisio M Invernizzi R Volz A Sanford D Arosio P and Drysdale J A human mitochondrial ferritin encoded by an intronless gene J Biol Chem 2001 276 27 24437 40 Levi S and Arosio P Mitochondrial ferritin Int J Biochem Cell Biol 2004 36 10 1887 9 White K and Munro H N Induction of ferritin subunit synthesis by iron is regulated at both the transcriptional and translational levels J Biol Chem 1988
8. 80 mg de Rs TF L 941 nmol L Linfuence de 18 m dicaments fr quemment administr s a t test e in vitro aucune interf rence n a t observ e Dans de tr s rares cas la gammapathie en particulier de type IgM macroglobulin mie de Waldenstr m peut conduire des r sultats erron s Comme dans tous les tests contenant des anticorps monoclonaux de souris les chantillons de patients ayant re u des pr parations d anticorps monoclonaux de souris des fins th rapeutiques ou diagnostiques peuvent donner des r sultats erron s Pour le diagnostic les r sultats doivent toujours tre confront s aux donn es de l anamn se du patient au tableau clinique et aux r sultats d autres examens Domaine de mesure Domaine de mesure 0 5 40 mg L 5 88 470 nmol L Domaine de mesure plus tendu en cas de r analyse 0 5 80 mg L 5 88 941 nmol L c c La limite sup rieure du domaine de mesure d pend de la concentration la plus lev e de la gamme de standards Valeurs de r f rence Hommes 18 60 ans Femmes 18 45 ans 2 2 5 0 mg L 25 9 58 8 nmol L n 208 1 9 4 4 mg L 22 4 51 8 nmol L n 211 Chaque laboratoire devra v rifier la validit de ces valeurs et tablir au besoin ses propres domaines de r f rence selon la population examin e Roche Hitachi cobas Performances analytiques Les performances analytiques indiqu es ci dessous sont repr sentatives Les r sultats
9. tablies en g L a Passing Bablok 2 R gression lin aire y 0 97 x 0 01 y 0 92 x 0 11 T 0 937 r 0 990 n 5 b Passing Bablok12 R gression lin aire y 1 00 x 0 02 y 0 97 x 0 05 T 0 942 r 0 994 n 75 c Passing Bablok R gression lin aire y 1 05 x 0 01 y 1 03 x 0 05 T 0 855 r 0 964 n 54 Les concentrations des chantillons taient situ es entre 4 54 et 56 2 umol L 0 36 et 4 46 g L ou 36 et 446 mg dL 2 4 2006 07 V 7 Fran ais 119359840011 11 Ferritin Tina quant amp Ferritine R f Flacon Contenu 1 REAGENT 4 x 16 mL 11661400 216 2 REAGENT 4 x 16 mL i P cobas R actifs utilisables sur les analyseurs Roche Hitachi suivants 917 MODULAR D Certains analyseurs ou coffrets peuvent ne pas tre disponibles dans tous les pays Pour l utilisation sur d autres analyseurs veuillez contacter la soci t Roche Diagnostics de votre pays Fran ais Codes d application Pour les analyseurs Roche Hitachi 902 912 917 MODULAR ACN 164 Domaine d utilisation Test immunoturbidim trique pour la d termination quantitative in vitro de la ferritine dans le s rum et le plasma humains sur les automates de chimie clinique de Roche Caract ristiques 2 3 45 6 7 8 9 10 La ferritine est la prot ine de stockage du fer Son poids mol culaire est gt 440000 daltons d pend de la teneur en fer Elle est constitu
10. 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 Canonne Hergaux F Fleming M D Levy J E Gauthier S Ralph T Picard V Andrews N C and Gros P The Nramp2 DMTTI iron transporter is induced in the duodenum of microcytic anemia mk mice but is not properly targeted to the intestinal brush border Blood 2000 96 12 3964 70 Garrick M Scott D Walpole S Finkelstein E Whitbred J Chopra S Trivikram L Mayes D Rhodes D Cabbagestalk K Oklu R Sadiq A Mascia B Hoke J and Garrick L Iron supplementation moderates but does not cure the Belgrade anemia Biometals 1997 10 2 65 76 Gunshin H Fujiwara Y Custodio A O Direnzo C Robine S and Andrews N C Slc11a2 is required for intestinal iron absorption and erythropoiesis but dispensable in placenta and liver J Clin Invest 2005 115 5 1258 66 Iolascon A d Apolito M Servedio V Cimmino F Piga A and Camaschella C Microcytic anemia and hepatic iron overload in a child with compound heterozygous mutations in DMTI SCLIIA2 Blood 2006 107 1 349 54 Mims M P Guan Y Pospisilova D Priwitzerova M Indrak K Ponka P Divoky V and Prchal J T Identification of a human mutation of DMTI in a patient with microcytic anemia and iron overload Blood 2005 105 3 1337 42 Mukhopadhyay C K Mazumder B and Fox P L Role of hypoxia inducible f
11. Autosomal dominant reticuloendothelial iron overload associated with a 3 base pair deletion in the ferroportin I gene SLCIIA3 Blood 2002 100 2 695 7 Liu X B Yang F and Haile D J Functional consequences of ferroportin 1 mutations Blood Cells Mol Dis 2005 35 1 33 46 De Domenico I Ward D M Nemeth E Vaughn M B Musci G Ganz T and Kaplan J The molecular basis of ferroportin linked hemochromatosis Proc Natl Acad Sci U S A 2005 102 25 8955 60 Pignatti E Mascheroni L Sabelli M Barelli S Biffo S and Pietrangelo A Ferroportin is a monomer in vivo in mice Blood Cells Mol Dis 2006 36 1 26 32 95 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 Yang F Liu X B Quinones M Melby P C Ghio A and Haile D J Regulation of reticuloendothelial iron transporter MTPI Slc11a3 by inflammation J Biol Chem 2002 277 42 39786 91 Burdo J R Menzies S L Simpson I A Garrick L M Garrick M D Dolan K G Haile D J Beard J L and Connor J R Distribution of divalent metal transporter I and metal transport protein I in the normal and Belgrade rat J Neurosci Res 2001 66 6 1198 207 Lymboussaki A Pignatti E Montosi G Garuti C Haile D J and Pietrangelo A The role of the iron responsive element in the control of ferroportinI IREGI MTP1 gene expression J Hepatol 2003 39 5 710 5 Knutson
12. du Rs Tf dans la mise en vidence d une carence en fer sous jacente une maladie inflammatoire ce qui le rend tr s avantageux par rapport aux anciens examens du bilan martial Enfin cette tude nous a permis de pr coniser le dosage du Rs Tf comme examen biochimique tr s prometteur pour l exploration de l rythropo se et le diagnostic diff rentiel des an mies chez l adulte avec un intervalle de valeurs normales de 2 65 4 39 mg L chez l homme et la femme m nopaus e et de 2 03 3 69 mg L chez la femme non m nopaus e dans l espoir d tablir un intervalle international de valeurs de r f rences Mots cl s fer s rique transferrine Rs Tf ferritine rythropoi se an mie ferriprive an mie inflammatoire bilan martial The exploration of erythropoiesis via the serum transferrin receptor sTfR level in the anemic patients Abstract The aim of the present study is to evaluate in a hospitalized population of anemic adults the diagnostic efficiency of the serum transferrin receptor STIR The objective is to distinguish iron deficiency anemia IDA from anemia of chronic disease ACD and the combined forms COMBI anemia Serum iron and serum ferritin are the most commonly used tests for the detection of iron deficiency however these values may not be reliable Serum transferrin receptor sTfR has been introduced as a new tool and its values are not affected by an increase in cytokine pro
13. lev entre 2500 et 3000 DA d pendant de la m thode Le laboratoire Mayo aux Etats Unis Mayo Medical Laboratories offre ce test un co t exorbitant 145 US La faible connaissance de ce nouveau test la grande variation des valeurs obtenues d une trousse l autre et le fait qu il existe le perls m dullaire comme technique de r f rence pour confirmer une d ficience en fer concomitante a une maladie chronique font que ce test est encore peu prescrit 42 III 3 2 Variations biologiques Chez les individus adultes normaux la concentration du Rs Tf suit une distribution normale gaussienne et n est pas influenc e par l ge mais influenc e par le sexe et la m nopause 168 Chez le vieillard la concentration observ e est plus faible 169 La race est un facteur de variation puisque les noirs ont une concentration plus lev e d environ 10 par rapport aux blancs Une variation similaire est observ e chez les sujets vivant en altitude 168 La variabilit biologique intra individuelle a t tudi e soit sur une p riode d un mois avec des pr l vements hebdomadaires 166 soit durant un an avec des pr l vements mensuels 170 La variation intra individuelle se situe entre 12 et 15 ce qui est inf rieure celle de la ferritine du fer s rique et du coefficient de saturation de la transferrine 166 Chez le nouveau n la concentration de Rs Tf est environ le double de celle observ e chez l adulte
14. 1997 94 20 10919 24 Beaumont C and Canonne Hergaux F Erythrophagocytosis and recycling of heme iron in normal and pathological conditions regulation by hepcidin Transfus Clin Biol 2005 12 2 123 30 Knutson M and Wessling Resnick M Iron metabolism in the reticuloendothelial system Crit Rev Biochem Mol Biol 2003 38 1 61 88 Fillet G Beguin Y and Baldelli L Model of reticuloendothelial iron metabolism in humans abnormal behavior in idiopathic hemochromatosis and in inflammation Blood 1989 74 2 p 844 51 Delaby C Pilard N Hetet G Driss F Grandchamp B Beaumont C and Canonne Hergaux F A physiological model to study iron recycling in macrophages Exp Cell Res 2005 310 1 43 53 92 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 Athens J W The reticuloendothelial mononuclear phagocyte system and the spleen Wintrobe s Clinical Hematology ed G R Lee Ed 1993 Philadelphia PA Lea amp Febiger Fagoonee S Gburek J Hirsch E Marro S Moestrup S K Laurberg J M Christensen E I Silengo L Altruda F and Tolosano E Plasma protein haptoglobin modulates renal iron loading Am J Pathol 2005 166 4 973 83 Le Lan C Loreal O Cohen T Ropert M Glickstein H Laine F Pouchard M Deugnier Y Le Treut A Breuer W Cabantchik Z I and Brissot P Redox active plasma iro
15. 263 18 8938 42 Rogers J Lacroix L Durmowitz G Kasschau K Andriotakis J and Bridges K R The role of cytokines in the regulation of ferritin expression Adv Exp Med Biol 1994 356 127 32 Torti S V Kwak E L Miller S C Miller L L Ringold G M Myambo K B Young A P and Torti F M The molecular cloning and characterization of murine ferritin heavy chain a tumor necrosis factor inducible gene J Biol Chem 1988 263 25 12638 44 Wu K J Polack A and Dalla Favera R Coordinated regulation of iron controlling genes H ferritin and IRP2 by c MYC Science 1999 283 5402 676 9 Gunshin H Mackenzie B Berger U V Gunshin Y Romero M F Boron W F Nussberger S Gollan J L and Hediger M A Cloning and characterization of a mammalian proton coupled metal ion transporter Nature 1997 388 6641 482 8 Gruenheid S Cellier M Vidal S and Gros P Identification and characterization of a second mouse Nramp gene Genomics 1995 25 2 514 25 Hubert N and Hentze M W Previously uncharacterized isoforms of divalent metal transporter DMT 1 implications for regulation and cellular function Proc Natl Acad Sci U S A 2002 99 19 12345 50 Fleming M D Trenor C C 3rd Su M A Foernzler D Beier D R Dietrich W F and Andrews N C Microcytic anaemia mice have a mutation in Nramp2 a candidate iron transporter gene Nat Genet 1997 16 4 383 6 94
16. 5 ee 5 Hommes 8 1 28 6 umol L 45 160 ug dL Facteurs de conversion mol L x 5 59 ug dL eo OU Femmes 5 4 28 6 mol L 30 160 g dL Chaque laboratoire devra verifier la validit de ces valeurs et tablir au besoin ug dL x 0 179 umol L ee ve ug dL x 0 010 mg L ses propres domaines de r f rence selon la population examin e Performances analytiques Les performances analytiques indiqu es ci dessous sont repr sentatives Les r sultats obtenus au laboratoire peuvent diff rer de ceux ci Limites dQ utilisation interf rences Crit re d acceptabilit recouvrement 10 par rapport la valeur initiale Ictere pas d interf rence significative jusqu un indice de 60 concentrations approximatives de bilirubine conjugu e et non Pr cision conjugu e 1026 pmol L ou 60 mg dl La pr cision a t d termin e l aide d chantillons humains et de H molyse pas d interference significative jusqu un indice H de 80 contr les selon un protocole interne R p tabilit n 21 pr cision concentration approximative d h moglobine 0 pmol L ou 80 mg dL interm diaire 5 aliquotes par s rie 1 s rie par jour sur 21 jours Des concentrations en hemoglobine plus lev es conduisent l obtention Les r sultats suivants ont t obtenus de r sultats faussement positifs en raison de la contamination de l chantillon par le fer li l h moglobine R p tabilit Lip mie I
17. 55 mmol L pH 7 2 NaCl 25 mmol L poly thyleneglycol 5 conservateur dans la cuvette r actionnelle le m lange est incub pendant 5 min a 37 C voir l exemple de la ferritine figure 15 Puis l addition de 100 ul du r actif R2 Anticorps de lapin anti transferrine humaine d pend du titre de l antis rum chlorure de sodium 100 mmol L conservateur et l incubation du m lange pendant 5 min 37 C conduit au d clenchement de la r action Les anticorps anti transferrine fix s sur des particules de latex r agissent avec la transferrine de l chantillon avec formation de complexes antig nes anticorps L absorbance de l agglutination qui en r sulte est mesur e par turbidim trie 505 nm contre une courbe d talonnage saisie et m moris e lors de la calibration de l appareil 58 1 2 2 3 Calcul de la capacit totale de fixation de la transferrine La possibilit maximale de transport du fer par la transferrine repr sente la capacit totale de saturation en fer de la transferrine valeurs usuelles 50 90 umol de Fe 1 Elle est d termin e par calcul partir du dosage de la transferrin mie selon la formule suivante CTF umol Fe l 10 80 000 x transferrine g l x 2 80 000 masse mol culaire de la transferrine en g mol 10 facteur de conversion des micromoles en moles 2 nombre d atomes de fer par mol cule de transferrine Soit 2x10 80000 25 Donc CT
18. C O ee YS SS HSC BFU E CFU E Pro EG Baso EB Poly EB ORTHO EB RBC 7 9 jours 3 jours forte prolif ration _ a d pendance EPO synth se d h moglobine Colonies form es partir de BFU E CFU E Figure 3 Erythropoi se 21 A Les stades de l rythropo se sont figur s par des cellules uniques avec leur morphologie pr sum e HSC Cellule souche h matopo tique BFU E Burst Forming Unit Erythroid CFU E Colony Forming Unit Erythroid Pro EB Pro rythroblaste Baso EB rythroblaste basophile Poly EB rythroblaste polychromatophile ORTHO EB rythroblaste orthochromatophile RBC Red Blood Cell erythrocyte ou globule rouge B Photos des colonies form es a partir de prog niteurs BFU E Burst Forming Unit Erythroid ou CFU E Colony Forming Unit Erythroid en culture semi solide L rythropoi se est finement r gul e de fa on a ce que le nombre de GR produits soit en ad quation avec les besoins en oxyg ne des tissus p riph riques En effet une production insuffisante de GR conduit l an mie et une production trop importante de GR appel e polyglobulie entra ne une augmentation de la viscosit du sang pouvant conduire des thromboses 22 Cette r gulation est essentiellement bas e sur un quilibre entre prolif ration survie et apoptose Les deux r gulateurs positifs majeurs de l rythropo se sont le Stem Cell Factor SCF et l rythropo t
19. R1 Tampon 1 8153 s rumalbumine bovine conservateurs R2 Particules de latex recouvertes d anticorps de souris anti CRP dans un tampon glycine immunoglobulines de souris conservateur a TRIS Tris hydroxym thyl aminom thane 2009 05 V 2 Francais Pr cautions d emploi et mises en garde Pour diagnostic in vitro Observer les pr cautions habituelles de manipulation en laboratoire Fiche de s curit disponible sur demande pour les professionnels L limination de tous les d chets doit tre effectu e conform ment aux dispositions l gales Pr paration des r actifs R1 Pr t l emploi 82 Pr t l emploi Avant l emploi retourner le flacon plusieurs fois en vitant la formation de mousse Conservation et stabilit Avant ouverture des flacons entre 2 et 8 C jusqu la date de p remption indiqu e 81 84 jours apres ouverture et r frig r sur l analyseur 82 84 jours apres ouverture et r frig r sur l analyseur Pr l vement et pr paration des chantillons Pour le pr l vement et la pr paration des chantillons utiliser uniquement des tubes ou r cipients de recueil appropri s Seuls les types d chantillons suivants ont t test s et peuvent tre utilis s S rum Plasma recueilli sur h parinate de lithium EDTA dipotassique tripotassique Les diff rents types d chantillons indiqu s ci dessus ont t test s l aide d une s lection de tubes de pr l vement di
20. S Simpson R J and McKie A T Physiology and molecular biology of dietary iron absorption Annu Rev Nutr 2003 23 283 301 Johnson D C Dean D R Smith A D and Johnson M K Structure function and formation of biological iron sulfur clusters Annu Rev Biochem 2005 74 247 81 Cheng Y Zak O Aisen P Harrison S C and Walz T Structure of the human transferrin receptor transferrin complex Cell 2004 116 4 565 76 Fleming M D Romano M A Su M A Garrick L M Garrick M D and Andrews N C Nramp2 is mutated in the anemic Belgrade b rat evidence of a role for Nramp2 in endosomal iron transport Proc Natl Acad Sci U S A 1998 95 3 1148 53 Ohgami R S Campagna D R Greer E L Antiochos B McDonald A Chen J Sharp J J Fujiwara Y Barker J E and Fleming M D Identification of a ferrireductase required for efficient transferrin dependent iron uptake in erythroid cells Nat Genet 2005 37 11 1264 1269 Lim J E Jin O Bennett C Morgan K Wang F Trenor C C 3rd Fleming M D and Andrews N C A mutation in SecI5l1 causes anemia in hemoglobin deficit hbd mice Nat Genet 2005 37 11 1270 3 Wilkins S J Frazer D M Millard K N McLaren G D and Anderson G J Iron metabolism in the hemoglobin deficit mouse correlation of diferric transferrin with hepcidin expression Blood 2005 White R A Boydston L A Brookshier T R McNulty S G Nsu
21. Testa U Apoptotic mechanisms in the control of erythropoiesis Leukemia 2004 18 7 1176 99 Zermati Y Fakhouri F Delarue R Ribeil J A Knebelmann B and Hermine O Actualit s N phrologiques FLAMMARION MEDECINE SCIENCES 2003 Wenger R H Cellular adaptation to hypoxia O2 sensing protein hydroxylases hypoxia inducible transcription factors and O2 regulated gene expression Faseb J 2002 16 10 1151 62 D apr s http www people virgima edu dp5m phys_304 figures hemoglobin jpg consult le 07 12 2010 Stamatoyannopoulos G Control of globin gene expression during development and erythroid differentiation Exp Hematol 2005 33 3 259 71 Quigley J G Yang Z Worthington M T Phillips J D Sabo K M Sabath D E Berg C L Sassa S Wood B L and Abkowitz J L Identification of a human heme exporter that is essential for erythropoiesis Cell 2004 118 6 757 66 Cianetti L Segnalini P Calzolari A Morsilli O Felicetti F Ramoni C Gabbianelli M Testa U and Sposi N M Expression of alternative transcripts of ferroportin I during human erythroid differentiation Haematologica 2005 90 12 1595 606 Ponka P Tissue specific regulation of iron metabolism and heme synthesis distinct control mechanisms in erythroid cells Blood 1997 89 1 1 25 Poss K D and Tonegawa S Heme oxygenase I is required for mammalian iron reutilization Proc Natl Acad Sci U S A
22. apparent absence d ant c dents pathologiques particuliers un bilan h matologique h patique r nal et inflammatoire normal Une fiche de renseignements cliniques a t remplie pour deux groupes de malades an miques adultes hospitalis s au niveau du CHU de S tif voir annexe 1 selon POMS l an mie a pour d finition un taux d h moglobine Hb lt 130 g L chez l homme et Hb lt 120 g L chez la femme Selon l tiologie de l an mie chez ces malades on a s lectionn Tableau 2 Un groupe de 50 patients 27 hommes ge moyen 42 92 11 48 ans 23 femmes ge moyen 48 43 12 05 ans hospitalis au niveau du service d h matologie qui repr sente le groupe de sujets souffrant d an mie purement ferriprive d origine carentielle sans aucune maladie associ e AF Groupe 2 ayant des taux de la C r active prot ine CRP lt 10 mg L Un autre groupe de 82 patients 44 hommes ge moyen 51 36 12 12 ans 38 femmes ge moyen 51 68 10 31 ans hospitalis au niveau du service de m decine interne qui pr sente le troisi me groupe de sujets an miques souffrant de maladies inflammatoires chroniques AMC Groupe 3 L installation d une r action inflammatoire chronique est d finie comme un taux de C r active prot ine sup rieur 10 mg L CRP gt 10 mg l selon Roche diagnostic Tableau 2 La composition de la population tudi e et sa distribution selon l ge et le sexe Group
23. cipit doivent tre centrifuges avant analyse Stabilit 7 jours entre 15 et 25 C 7 jours entre 2 et 8 C 1 an entre 15 et 25 C Materiel fourni Voir paragraphe R actifs composition et concentrations Mat riel auxiliaire n cessaire e Calibrateur C f a s Calibrator for automated systems Proteins R f 11355279 216 11355279 160 pour les USA e Contr les Precinorm Protein R f 10557897 122 10557897 160 pour les USA Precipath Protein R f 11333127 122 11333127 160 pour les USA e Solution de NaCl 0 9 e _ Equipement habituel de laboratoire Mode op ratoire Pour garantir le bon fonctionnement du test se conformer aux instructions relatives l analyseur utilis indiqu es dans la pr sente notice Pour les instructions sp cifiques de l analyseur se r f rer au manuel d utilisation appropri En cas d utilisation de tests non valid s par Roche les performances analytiques ne sont pas garanties et doivent tre d finies par l utilisateur 1 4 Roche Hitachi Ferritin cobas Tina quant al Ferritine Calibration On a observe un effet crochet a des concentrations de ferritine sup rieures Tra abilit la m thode a t standardis e par rapport a une proc dure 1750 ng mL 3932 pmol L sur l anaylseur Roche Hitachi 902 ou 20000 ng mL s lectionn e par un fabricant m thode immunologique 44940 pmol L sur les analyseurs Roche Hitachi 912 917 MODULAR P Analyseur R
24. dans le rapport 1 1 Multiplier le r sultat par le facteur de dilution appropri 2 dans l exemple Analyseur Roche Hitachi 912 Mode op ratoire Pour garantir le bon fonctionnement du test se conformer aux instructions relatives l analyseur utilis indiqu es dans la pr sente notice Pour les instructions sp cifiques de l analyseur se r f rer au manuel d utilisation appropri En cas d utilisation de tests non valid s par Roche les performances analytiques ne sont pas garanties et doivent tre d finies par l utilisateur Calibration 0 00 Les chantillons ayant des concentrations plus lev es sont automatiquement Tra abilit la m thode a t standardis e par rapport un r analys s par l appareil Le rapport de dilution des chantillons lors de standard de r f rence primaire r analyse automatique est 1 2 Les r sultats des chantillons dilu s pour 51 Solution de NaCl 0 9 la r analyse sont automatiquement multipli s par le facteur 2 See ee ale T07 yo Analyseurs Roche Hitachi 917 MODULAR P MODULAR D Frequence des calibrations Les chantillons ayant des concentrations plus lev es sont automatiquement Une calibration en deux points est recommand e r analys s par l appareil Le rapport de dilution des chantillons lors de e en cas de changement de lot de r actif r analyse automatique est 1 2 14 Les r sultats des chantillons dilu s pour e Si le contr le de qualit
25. de r cup ration diminu s Les diff rents types d chantillons indiqu s ci dessus ont t test s l aide d une s lection de tubes de pr l vement disponibles dans le commerce au moment du test les tubes de pr l vement des diff rents fabricants n ont pas tous t test s Les syst mes de pr l vement du sang de divers fabricants peuvent contenir diff rents mat riaux pouvant dans certains cas influencer le r sultat du test En cas d utilisation de tubes primaires syst mes de pr l vement du sang suivre les instructions donn es par le fabricant Stabilit 8 7 jours entre 15 et 25 C 3 semaines entre 2 et 8 C plusieurs ann es entre 15 et 25 C S parer imm diatement le s rum ou le plasma du caillot ou des cellules dans l heure qui suit le pr l vement Roche Hitachi Fe cobas Fer Les chantillons qui contiennent un pr cipit doivent tre Dans de tr s rares cas la gammapathie en particulier de type IgM centrifuges avant analyse macroglobulin mie de Waldenstr m peut conduire des r sultats erron s Pour le diagnostic les r sultats doivent toujours tre confront s aux donn es de l anamn se du patient au tableau clinique et aux r sultats d autres examens ACTION N CESSAIRE Mat riel fourni Voir paragraphe R actifs composition et concentrations Mat riel auxiliaire n cessaire Programmation de s quences de lavages sp ciaux sur les analyseurs Cali
26. dure que 10 min 150 On estime que le tiers des R Tf se trouve a la surface des cellules les deux tiers restants sont impliqu s dans le ph nom ne d endocytose 149 L affinit du R Tf est maximale pour la transferrine diferrique 2 7 x10 M soit de 30 a 500 fois plus lev e que celle pour la transferrine monoferrique et l apotransferrine respectivement 151 Il en r sulte que l apport en fer aux cellules s effectue principalement par la transferrine diferrique dont la concentration circulante 30 40 uM satur 30 chez les individus normaux est suffisante pour saturer tous les R Tf La r gulation du R Tf est cruciale pour optimiser la quantit de fer acquise par les cellules en r ponse aux besoins m taboliques et pour pr venir l accumulation excessive qui pourrait mener a la formation de radicaux libres toxiques Dans les cellules cryptales de l intestin le R Tf se lie la prot ine HFE Hemochromatosis gene product HFE Cette liaison agit comme m canisme de contr le du fer internalis puisqu elle diminue l affinit du r cepteur pour la transferrine 152 126 La mutation ponctuelle C282Y de l HFE entra ne la production d une prot ine non fonctionnelle qui ne peut participer ce m canisme de r gulation Il en r sulte une captation incontr l e du fer et son accumulation excessive dans les tissus 37 IHI 1 3 R gulation de 101 L hom ostasie intracellulaire du fer est assur
27. e d une enveloppe prot ique apoferritine de 24 sous unit s et d un noyau renfermant du fer en moyenne env 2500 ions Fe dans les isoformes basiques Les diff rentes isoformes sont toutes form es par l assemblage de deux types de sous unit s la sous unit H Heavy acide et la sous unit L Light basique Les isoferritines basiques ont une fonction de stockage long terme du fer et pr dominent dans le foie la rate et la moelle osseuse Les isoferritines acides se rencontrent principalement dans le myocarde le placenta les cellules tumorales et en plus petites quantit s dans les organes de stockage Le dosage de la ferritine est avant tout indiqu dans exploration du m tabolisme martial le suivi d un traitement base de fer la d termination des r serves de fer dans les groupes risque ainsi que pour le diagnostic diff rentiel des anemies Il permet de d celer les tats pr latents et latents de carence martiale ainsi que les tats de surcharge martiale ll est utile pour le diagnostic diff rentiel entre an mie ferriprive et an mie hypochrome an mies chroniques li es une infection ou une tumeur an mies sid roblastiques ou thalass mie Le dosage de la ferritine convient particuli rement pour le contr le des anemies des insuffisants r naux trait s par l rythropo tine en cas de troubles de l utilisation et de la r partition du fer La ferritine s rique se trouve en quilibre av
28. e pour effectuer le pr l vement et le d lai maximal entre la collecte et la centrifugation de l chantillon Une comparaison des r sultats obtenus entre le s rum et le plasma EDTA a d montr qu il n y avait pas de diff rence significative qu il s agisse de sang veineux ou de sang capillaire 166 Cependant une autre tude mentionne que la dur e du contact entre le sang et EDTA avant la centrifugation influence a la hausse la concentration du Rs Tf 146 Actuellement la plupart des trousses recommandent l utilisation de sp cimens frais de s rum ou de plasma EDTA ou h parin Cependant dans certaines trousses l utilisation du plasma EDTA n est pas recommand e Plusieurs trousses bas es sur des essais immunologiques sont disponibles pour d terminer la concentration s rique ou plasmatique de Rs Tf 167 Quatre trousses commerciales de type ELISA sont disponibles Quantikine IVD sTfR R amp D Systems Cytokine sTfR Eurogenetics IdeA IEMA Orion Diagnostica et une trousse de Ramco Laboratories Ces m thodes n cessitent cependant un long temps d analyse et leurs variations inter essais sont plus lev es que celles des m thodes totalement automatis es Aujourd hui plusieurs m thodes automatis es sont disponibles Le N Latex sTfR de Dade Behring est un essai n ph lom trique avec applications sur les analyseurs BN 100 et BN proSpec Le Nichols Advantage sTfR assay de Nichols Institute est un essai par chimilumine
29. miques Groupe 2 an mie ferriprive pure AF n 50 27H 23F Groupe 3 an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F subdivis en deux sous groupes le sous G1 n 40 22H 18F an mie des maladies chronique pure AMC et le sous G2 n 42 22H 20F an mie des maladies chroniques combin e une carence en fer dite an mie mixte A mixte r sultats exprim s en moyennes Les hommes sont repr sent s par la colonne gauche en bleu fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en bleu clair les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne La concentration s rique en fer chez les deux sous groupes H 9 19 4 59 umol L F 6 29 2 86 umol L chez les sujets AMC pure et H 4 90 2 83 umol L F 3 30 3 12 umol L chez les sujets a A mixte figure 24 reste sans apport informatif a ajouter au diagnostic dans le but de diff renciation entre les origines des an mies P gt 0 05 Elle ne peut pas nous permettre d obtenir une approche fiable ni sur les r serves ni sur les besoins ferriques d un individu en effet compte tenu de sa concentration s rique qui subit une grande variation nycht m rale de 20 a 30 d pend de l alimentation variation rapide diminue dans les tats inflammatoires activit de l hepcidine bloquant le fer r ticulo endoth lial et augmente dans les situations d h molyse 195 Le dosage et l interpr tation du fer s
30. sss ona sosie 32 11 9 IRP Iron Regulatory Protein 1 eCIRP2 2 006000000 sss 32 O arate EE on ee enaucaee 00 0 E 33 III Le r cepteur de la transferrine et a forme soluble 35 111 1 Les r cepteurs de la transferrine R Tf1 et R Tf2 2 35 EEL ioc ME RSR Se 35 EU he TOMO OR a E stacceeeusie soamenes 37 HLS Resulavionde lex pressiOf ea SAAS aS 38 RER visas 39 111 2 La forme soluble circulante Rs Tf ou ST R 0 40 111 3 Aspects analytiques mesure du Rs Tf 41 LES IL MOO de OS dO Sin a a a a ct ia 41 111 3 2 Variations DlologIqUES sss 43 111 3 3 Applications CUMGU CS een ee ee de 43 IIL 3 3 1 valuation de l rythropoi se ieeeeeeeereeeeere 44 IIL 3 3 2 valuation de la d ficience en fer an mie ferriprive AF pure 45 IIL 3 3 3 valuation de l An mie des maladies chroniques pure AMC et mixte AMC AF 46 IY Re Uno du m tabolisme MR de i 47 OR RE e 47 117 2 R gulation syst mique mod le de la crypte she semer ons 50 PACE CS emma RARE ERAGE MON SEEMS PODS ORS si 52 1 Pate E aa E E E ETE E E E E 53 E PANG TAG E E E E EE A EEE E E E E meas 53 LLI Eifcotiiseteriteres de SCO nA EEE RRR
31. tre stock dans la ferritine soit transport par la ferroportine vers le plasma Il est ensuite oxyd par l h phaestine avant d tre pris en charge par la transferrine Tf circulante 5 Une fois dans la cellule le fer peut tre stock dans la ferritine ou transport de nouveau au p le basolat ral vers la circulation sanguine par le transporteur transmembranaire ferroportine Dans le sang la transferrine Tf qui peut lier deux atomes de fer permet de v hiculer le fer dans tout l organisme Pour cela le fer doit tre pr alablement oxyd par la ferroxydase h phaestine situ e sur la membrane basolat rale de l ent rocyte Figure 1 6 7 1 1 2 Transport sanguin et captation du fer par la cellule Le fer li a la transferrine holotransferrine holoTf ou Tf Fe2 est capt par les cellules via le r cepteur a la transferrine RTf1 Les cellules utilisent ce fer pour synth tiser de nombreuses prot ines contenant un ou plusieurs atomes de fer Ces prot ines sont impliqu es dans divers m canismes cellulaires mais les propri t s li es au cycle d oxydor duction du fer en font un m tal de choix pour permettre le transfert d lectrons dans la chaine respiratoire la catalyse le transport et le stockage de l oxyg ne ou bien le transport du NO 8 1 1 2 1 Captation du fer par le r cepteur de la transferrine Le complexe TI RTTI 9 p n tre dans la cellule par endocytose le fer est lib r du comp
32. v re et contrairement aux mod les mk et Belgrade une surcharge tissulaire en fer Il semble que chez ces patients le d ficit de DMT1 au niveau duod nal soit compens par d autres voies d entr e du fer augmentation de l absorption du fer heminique par exemple et que l an mie s explique par une rythropo se inefficace La surcharge en fer associ e est probablement li e au stockage du fer non utilis par les pr curseurs rythroides Cette hypoth se est renforc e par l exp rience de transplantation de cellules souches h matopo tiques KO S c11a2 dans une souris irradi e portant le g ne sauvage un d faut uniquement au niveau h matopo tique suffit reproduire la fois l rythropo se inefficace et la surcharge en fer h patique 68 IL 3 2 Nramp1 Nrampl Natural resistant associated macrophage protein 1 tient son nom du fait que des souris mut es pour ce g ne pr sentent une susceptibilit accrue aux infections par des pathog nes intracellulaires 71 Nrampl r cemment renomm e Slcllal de la m me famille que Nramp2 alias DMTI est une prot ine tr s hydrophobe de 56 kDa formant 12 domaines transmembranaires pr sente exclusivement dans les monocytes et macrophages 71 Nrampl est localis e dans les lysosomes et les endosomes tardifs et recrut e rapidement a la membrane des phagosomes matures La transfection d une lign e de macrophages d pourvue de Nrampl endogene lign e RAW2
33. 22H 20F an mie des maladies chroniques combin e une carence en fer dite an mie mixte A mixte r sultats exprim s en moyennes Les hommes sont repr sent s par la colonne gauche en rouge fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en rouge clair les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne La diff rence du taux d h moglobine entre les deux sous groupes constituant le troisi me groupe H 102 04 6 14 g L F 93 64 4 45 g L chez le sous groupe 1 an mie des maladies chroniques pure AMC et H 96 87 2 75 g L F 88 21 5 58 g L chez le sous groupe 2 an mie mixte A mixte n est pas significative P gt 0 05 Il n apporte au diagnostic que la confirmation d une an mie install e chez ces patients figure 22 Sans aucune information sp cifique sur son origine L h moglobine reste toujours un marqueur h matologique non sp cifique dans le diagnostic diff rentiel des an mies 76 111 4 2 l apport du volume globulaire moyen Les valeurs du VGM dans les trois groupes 120 E Hommes E Femmes 100 80 60 40 Volume globulaire moyen fl 20 Groupel t moin Groupe2 AF Sous G1 AMC Sous G2 A mixte Groupe 3 Figure 23 Les valeurs du volume globulaire moyen VGM en fL dans le groupel t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an miques Groupe 2 a an mie ferriprive AF n 50 27H 23F Group
34. 3 a _Segradation BPA IRP2 _ 2 2 2 IRP2 mime Stockage EHESS 1 du fer SL mm z LFerritine A s Synthese de 00 as gt 5 l h me rythro de eALAS M E a 00 X Cycle TCA mAconitase A Vv Export du fer St Ferroportine 4M SLE 22 Sa RTf1 O S Captage 5 du fer mA no Figure 13 R gulation de l hom ostasie du fer intra cellulaire par Syst me IRP IRE localis s sur l ARNm de la H et L ferritine l eALAS erythroid 5 aminolevulinate synthase mAconitase aconitase mitochondriale TCA acides tricarboxyliques et RTf1 119 Le r le des IRP a largement t tudi in vitro mais ce n est que tr s r cemment que l implication des IRP in vivo est tudi e via la g n ration de souris KO rpl et ou Irp2 Les premiers r sultats montrent que si les IRP sont essentiels au d veloppement de l organisme l absence totale d Irpl et Irp2 conduit une l talit embryonnaire 120 chaque Irp est capable de compenser en partie absence de l autre Irp En effet les souris KO rp1 ne pr sentent pas d anomalies videntes 125 et les souris KO 2 77 pr sentent seulement une an mie microcytaire associ e a une distribution anormale du fer entre les tissus 121 122 Il a galement t d crit la pr sence d une surcharge en fer c r brale associ e une neurod g n rescence importante dans les souris KO Jrp2 123 mais celle ci n est pas retrouv e dans
35. 627 62 119 Hentze M W Muckenthaler M U and Andrews N C Balancing acts molecular control of mammalian iron metabolism Cell 2004 117 3 285 97 120 Smith S R Cooperman S Lavaute T Tresser N Ghosh M Meyron Holtz E Land W Ollivierre H Jortner B Switzer R 3rd Messing A and Rouault T A Severity of neurodegeneration correlates with compromise of iron metabolism in mice with iron regulatory protein deficiencies Ann N Y Acad Sci 2004 1012 65 83 121 Cooperman S S Meyron Holtz E G Olivierre Wilson H Ghosh M C McConnell J P and Rouault T A Microcytic anemia erythropoietic protoporphyria and neurodegeneration in mice with targeted deletion of iron regulatory protein 2 Blood 2005 106 3 1084 91 122 Galy B Ferring D Minana B Bell O Janser H G Muckenthaler M Schumann K and Hentze M W Altered body iron distribution and microcytosis in mice deficient in iron regulatory protein 2 IRP2 Blood 2005 106 7 2580 9 123 LaVaute T Smith S Cooperman S Iwai K Land W Meyron Holtz E Drake S K Miller G Abu Asab M Tsokos M Switzer R 3rd Grinberg A Love P Tresser N and Rouault T A Targeted deletion of the gene encoding iron regulatory protein 2 causes misregulation of iron metabolism and neurodegenerative disease in mice Nat Genet 2001 27 2 209 14 124 Galy B Ferring D and Hentze M W Generation of condit
36. F 320 09 39 32 ug L et le sous groupe 2 H 345 45 53 49 ug L F 270 91 62 87 ug L n est pas tr s importante P gt 0 05 elle indique toujours un faux bon tat de r serve en fer qui est totalement en contradiction avec un bilan d un sujet an mique elle reste aussi sans apport informatif a ajouter au diagnostic diff rentiel figure 25 La ferritin mie reste un marqueur inutile dans le diagnostic diff rentiel entre les deux sous groupes a maladies inflammatoires chroniques La ferritine peut augmenter dans ces situations ind pendamment des r serves de fer Elle est en effet une prot ine de phase aigu et augmente dans les tats inflammatoires ce qui peut masquer une carence martiale 195 Donc le doute reste toujours et le diagnostic reste incomplet Le clinicien dans ces cas 13 a besoin d un marqueur plus sp cifique et d cisif 79 111 2 5 l apport du Rs Tf s rique Les taux du Rs Tf dans les trois groupes 10 E Hommes E Femmes Rs Tf mg L Groupel t moin Groupe2 AF Sous G1 AMC Sous G2 A mixte Groupe 3 Figure 26 Les concentrations s rique du r cepteur soluble de la transferrine Rs Tf en mg L dans le groupel t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an miques Groupe 2 an mie ferriprive pure AF n 50 27H 23F Groupe 3 an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F subdivis en deux sous groupes le sous G1 n 40 22H 18F an mie des m
37. Ferritin mie ug L N N O UT UT O 100 50 78 06 28 04 21 87 Groupe 1 t moin Groupe 2 AF Groupe 3 AMC Figure 19 Les concentrations de la ferritine en ug L dans le groupel t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an miques Groupe 2 an mie ferriprive AF n 50 27H 23F Groupe 3 a an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F Les hommes sont repr sent s par la colonne gauche en bleu fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en bleu clair les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne La ferritin mie donne une diff rence significative entre les deux groupes de sujets an miques H 28 04 6 40 ug L F 21 87 5 34 ug L chez les patients a AF P lt 0 0 et H 369 25 71 33 ug L F 294 21 57 96 ug L chez les patients AMC P lt 0 01 en comparaison au groupe t moin H 208 16 46 40 ug L F 78 06 17 39 ug L figure 19 La diff rence est aussi tr s significative entre les deux groupes de sujets an miques eux m mes P lt 0 01 La ferritin mie basse dans le group 2 nous aide a affirmer que ce groupe est compos de sujets ayant une an mie strictement d origine carentielle AF pure puisqu elle est en forte concordance avec le taux d h moglobine et le fer s rique Mais dans le troisi me groupe la ferritin mie lev e est en contradiction avec les param tres pr c dents H moglobine b
38. H3C Vi COPRO GEN IX OXIDASE H3C CH 2002 202 Pr Pr PROTOPORPHYRINOGEN IX Fett Fe SYNTHASE H20 Ac Pr Ac Pr Ac Ac Pr Pr UROPORPHYRINOGEN III URO GEN Ill DECARBOXYLASE 4CO Pr CH3 H3C Pr H3C CH3 Pr Pr COPROPORPHYRINOGEN Ill 5 0 00 2 020 2 0 2 gt 0 gt Figure 6 Biosynth se de l h me 28 ALA 6 aminolevulinate ALAS 6 aminolevulinate synthase PBG porphobilinogen UPG uroporphyrinogen CPG coproporphyrinogen PPG protoporphyrinogen A ac tyl M m thyl P propionyl V vinyl 15 1 1 4 R utilisation du fer des GR recyclage rythrophagocytose Nous l avons vu les rythrocytes circulants contiennent une grande quantit de fer presque 2 g sur les 4 g totaux de l organisme Afin que ce fer puisse tre r utilis par l organisme les macrophages phagocytent les globules rouges s nescents dont la dur e de vie est de 120 jours chez l homme et exportent ensuite le fer c est l rythrophagocytose EP Figure 7 HFE p2m RTf1 haptoglobine gt hemoglobine H H E T1 Nramp1 ferroportine macrophage e ee Fe v Ci Figure 7 Erythrophagocytose et recyclage du fer 5 Les globules rouges GR s nescents sont phagocyt s par le macrophage Ils sont d grad s et l aide de I h me oxyg nase HO le fer est lib r de l h moglobine D autres voi
39. Pr paration des r actifs R1 Pr t a l emploi 82 Pr t l emploi Bien m langer le r actif de d clenchement de la r action avant de le placer sur l analyseur et ainsi de suite tous les 3 jours Conservation et stabilit Avant ouverture des flacons entre 2 et 8 C jusqu la date de p remption indiqu e R1 90 jours apres ouverture et r frig r sur l analyseur 82 90 jours apres ouverture et r frig r sur l analyseur Pr l vement et pr paration des chantillons Pour le pr l vement et la pr paration des chantillons utiliser uniquement des tubes ou r cipients de recueil appropri s Seuls les types d chantillons suivants ont t test s et peuvent tre utilis s S rum Plasma recueilli sur h parinate de lithium citrate ou EDTA Les diff rents types d chantillons indiqu s ci dessus ont t test s l aide d une s lection de tubes de pr l vement disponibles dans le commerce au moment du test les tubes de pr l vement des diff rents fabricants n ont pas tous t test s Les syst mes de pr l vement du sang de divers fabricants peuvent contenir diff rents mat riaux pouvant dans certains cas influencer le r sultat du test En cas d utilisation de tubes primaires syst mes de pr l vement du sang suivre les instructions donn es par le fabricant Ne pas utiliser de sang recueilli dans des tubes capillaires pour le dosage Les chantillons qui contiennent un pr
40. Rs TF Dans le plasma le r cepteur soluble de la transferrine se trouve sous forme de complexe avec la transferrine le poids mol culaire de ce complexe est d env 320 kDa La concentration s rique de Rs TF est directement proportionnelle la concentration du r cepteur sur la membrane Lacquisition du fer par les cellules de l organisme est contr l e par la quantit de r cepteurs de la transferrine R TF existant la surface des cellules Si les r serves intracellulaires sont puis es ce qui correspond une concentration en ferritine inf rieure 12 ug L il y a davantage de 8 1 Laffinite du r cepteur de la transferrine pour la transferrine d pend du degr de saturation de ce dernier Comme 80 95 des r cepteurs de la transferrine sont localis s sur les pr curseurs de la lign e rythrocytaire la concentration en R TF et par cons quent galement la concentration en Rs TF refl te les besoins en fer de ces cellules S il existe un d ficit en fer la concentration en Rs TF dans le s rum augmente avant m me que la concentration en h moglobine soit significativement abaiss e La concentration en Rs TF d crit par cons quent le statut en fer fonctionnel alors que la ferritine refl te les reserves en fer de l organisme Une valuation pr cise du statut martial peut tre obtenue par d termination du rapport Rs TF Log de la ferritine Comme le taux de Rs TF n est contrairement celui de la ferritine pa
41. albumine dans le rein et le sac vitellin Elle a galement pour ligand la transferrine et l h moglobine dans le rein L affinit de la cubiline est la m me pour l apo et l holo Tf La cubiline interagit avec la m galine qui peut elle aussi se lier d autres mol cules La m galine par son domaine transmembranaire permet l ancrage la membrane du complexe m galine cubiline ligand puis son internalisation Alors que la pr sence de la m galine est d tect e dans plusieurs cellules pith liales la cubiline est retrouv e dans un nombre plus restreint d organes intestin gr le sac vitellin cytotrophoblaste tubule proximal du rein Ce complexe serait responsable de la clairance de l h moglobine libre du sang vers le rein lors d une h molyse Le complexe m galine cubiline est retrouv a la surface apicale du tubule proximal dans le rein Des souris KO m galine pr sentent une accumulation de la Tf li e la cubiline a la surface apicale des tubules r naux 117 Une fois prise en charge par la m galine cubiline la Tf n est pas recycl e comme apres liaison a R Tf mais d grad e dans les lysosomes II 9 IRP Iron Regulatory Protein 1 et IRP2 Chez les mammif res deux prot ines IRP ont t identifi es IRPI aussi appel e aconitase cytosolique 1 ACO1 poss de un complexe fer soufre Fe S IRP2 ou IREB2 pour IRE Binding protein 2 est homologue 79 IRPI mais ne poss de pas d act
42. analytiques ne sont pas garanties et doivent tre d finies par l utilisateur Calibration Tra abilit la m thode a t standardis e par rapport la pr paration de r f rence CRM 470 RPPHS 10 Analyseurs Roche Hitachi 902 MODULAR P ACN 231 MODULAR D 51 Solution de NaCl 0 9 S2 6 Preciset Serum proteins Analyseurs Roche Hitachi 904 911 912 917 MODULAR P ACN 187 51 Solution de NaCl 0 9 S2 6 C f a s Proteins Facteurs multiplicateurs de la valeur th orique du C f a s Proteins pour le calcul des concentrations des standards de la courbe de calibration calibration en 6 points S2 0 125 S5 1 000 S3 0 250 S6 2 000 S4 0 500 Fr quence des calibrations Une calibration compl te est recommand e e en cas de changement de lot de r actif e Si le contr le de qualit le rend n cessaire Contr le de qualit Pour le contr le de qualit utiliser les mat riaux de contr le indiqu s dans le paragraphe Mat riel auxiliaire n cessaire D autres contr les appropri s peuvent galement tre utilis s La fr quence des contr les et les limites de confiance doivent tre adapt es aux exigences du laboratoire Les r sultats doivent se situer dans les limites de confiance d finies Chaque laboratoire devra tablir la proc dure suivre si les r sultats se situent en dehors de ces limites Calcul des r sultats Lanalyseur calcule automatiquement la concentration en analyte de cha
43. atteindre un maximum au stade rythroblaste interm diaire 800 000 R Tf cellule pour ensuite diminuer 100 000 R Tf cellule chez les r ticulocytes circulants puis aller jusqu dispara tre chez les rythrocytes matures 148 36 III 1 2 Fonction du R Tf Le R Tf membranaire est indispensable l internalisation du fer li a la transferrine Le mod le d internalisation du fer li la transferrine par le R Tf recycle le complexe Tf R Tf et s appelle le transferrin to cell cycle Ce mod le d bute par la liaison de la transferrine diferrique son r cepteur sp cifique la surface cellulaire Figure 2 Les complexes Tf R Tf sont internalis s par endocytose suite a la formation de puits tapiss s de clathrines qui s invaginent pour former des endosomes Les endosomes form s subissent une acidification progressive ATPase d pendante La lib ration du fer li la transferrine s effectue un pH d environ 5 5 Le fer ainsi lib r est alors soit utilis par la cellule soit emmagasin par la ferritine 149 Au pH acide de l endosome l apotransferrine a une forte affinit pour le r cepteur Les complexes Tf R Tf ne fusionnent pas avec les lysosomes et sont retourn s la surface cellulaire Au pH physiologique la surface cellulaire l affinit de l apotransferrine pour le r cepteur est perdue Elle se s pare donc de son r cepteur et retourne dans le plasma Le transit du complexe 11 15 11 ne
44. de 125 ul du r actif R2 particules de latex mobilis es par des anticorps polyclonaux de type IgG de lapin anti ferritine humaine et l incubation du m lange pendant 5 min 37 C conduit au d clenchement de la r action Les anticorps anti ferritine fix s sur des particules de latex r agissent avec la ferritine de l chantillon avec formation de complexes antig nes anticorps figure 15 L absorbance de l agglutination qui en r sulte est mesur e par turbidim trie 700 nm contre une courbe d talonnage saisie et m moris e lors de la calibration de l appareil Extinction incubation 37 C b 5 min Ferritine 52000 Conc Anticorps anti ferritine fix s sur des Complexe antig ne anticorps Mesure turbidim trique Tampon R1 particules de latex R2 700 nm Figure 15 illustration du principe immunoturbidim tique pour le dosage de la ferritine titre d exemple I 2 2 6 Dosage du r cepteur soluble de la transferrine Le Rs Tf valeurs usuelles 2 2 5 0 mg l chez l homme et 1 9 4 4 mg l chez la femme a t valu par immunoturbidim trie Roche Diagnostic Systems voir annexe 5 Une prise d essai de 3 ul de l chantillon plasma frais recueilli sur h parinate de lithium est ajout e 150 ul de r actif R1 Tampon TES HCI 20 mmol l pH 7 7 NaCl 500 mmol l conservateur dans la cuvette r actionnelle le m lange est incub pendant 5 m
45. de l holotransferrine au niveau de la crypte est diminu e 191 Les cellules se retrouvent alors en situation de privation artificielle en fer malgr les r serves abondantes de l organisme entra nant une augmentation des acteurs de l absorption intestinale du fer et donc l hyperabsorption de fer qui caract rise cette maladie DMT1 ferroportine aysorotior villosit diff renciation eguiateur am des reserves r gulateur HFE erythroide R Tf Figure 14 Modele de la crypte La prot ine HFE produite par les cellules de la crypte sert de senseur aux deux signaux r gulateurs le r gulateur des r serves et le r gulateur rythro de Les cellules de la crypte se diff rencient alors en ent rocytes programm s absorber plus ou moins de fer en fonction des besoins en r gulant les taux de Dcytb DMT1 ferroportine et h phaestine 5 50 Ce mod le bien que s duisant s est vite trouv confront aux premi res donn es exp rimentales de la litt rature tudiant le r le de HFE dans des cellules en culture et montrant que HFE surexprim diminuait en fait l entr e de fer par comp tition avec l holotransferrine pour la fixation RTf1 129 138 et que par cons quent HFE mut entrainait une surcharge en fer de la cellule et non un tat de d ficit comme dans le mod le de la crypte De plus plusieurs auteurs ont montr que les ent rocytes de patients h mochromatosiques ou
46. et augmente en cas de carence en fer La concentration du Rs Tf n est pas modifi e par l existence d un syndrome inflammatoire en revanche elle est corr l e l intensit de l rythropo se 196 En l absence de standardisation des dosages les valeurs usuelles diff rent d un r actif l autre ce qui impose d utiliser le m me r actif pour le suivi d un patient Le dosage du Rs Tf n est pas cumulable avec celui de la ferritine Cependant l index Rs Tf Log 87 ferritine qui implique deux variables influenc es antiparall lement par les stocks de fer permet une estimation fiable du fer corporel et son calcul peut se r v ler utile pour le diagnostic de carence en fer associ e un syndrome inflammatoire 200 201 Un quotient inferieur sugg re une an mie de maladie chronique alors qu un quotient sup rieur 2 sugg re une carence en fer associ e l an mie de maladie chronique 195 Les param tres biologiques d appr ciation de l tat du fer mentionn s ci avant sont envisager en fonction du contexte clinique dans le tableau 7 d cisionnel ci dessous Tableau 7 Marqueurs h matologiques et ferriques selon les situations cliniques an mie ferriprive AF an mie des maladies chroniques AMC ou an mie mixte AF AMC 202 Param tre Modifications H moglobine Activit de l Erythropoi se VGM Activit de l Erythropoi se Fer s rique statut martial pool
47. et refl te probablement l activit des cellules rythrocytaires mais galement la prolif ration d autres types cellulaires 171 IHI 3 3 Applications cliniques Il a t mentionn pr c demment que la concentration s rique de Rs Tf est proportionnelle a la concentration tissulaire de R Tf Ainsi la concentration de Rs Tf circulants est principalement d termin e par celle des pr curseurs rythro des dans la moelle osseuse puisque ces cellules contiennent 75 des R Tf de l organisme En effet la relation entre les r cepteurs membranaires et circulants est illustr e par la mesure du erythron transferrin uptake ETU quantit de transferrine capt e par le tissu par unit de temps Le Rs Tf en est un de ferrocin tique qui est reli la prolif ration des cellules rythro des Une bonne corr lation a t trouv e entre le taux de Rs Tf et le ETU chez les individus sains et chez les patients pr sentant des d sordres h matologiques Par cons quent le nombre de R Tf membranaires est d termin par le taux de prolif ration des cellules rythro des sous l action de facteurs de croissance comme l rythropo tine et les besoins intra cellulaires en fer La carence martiale s accompagne d une augmentation des Rs Tf par mise en jeu du m canisme posttranscriptionnel cons cutif la diminution du contenu intracellulaire en fer et l augmentation du nombre de R Tf membranaire sur toutes les cellules de
48. groupe de sujets an miques d une combinaison entre une maladie chronique et un d ficit martial dite an mie mixte A mixte ayant un bilan martial sauf la ferritin mie comparable au bilan de sujets an mies purement ferriprives ce qui affirme l existence d une carence en fer masqu e par la maladie manifeste Dans cette tude la variation du taux Rs Tf s rique nous a permis de s lectionner 42 patients parmi les 82 du troisi me groupe 42 82 soit 51 des patients ayant une carence martiale sous jacente et il nous a confirm l hypoth se propos e sur l h t rog n it de ce groupe On remarque que l apport d information ajout par le Rs Tf est tr s important il peut orienter le diagnostic dans le bon sens donc c est un bon marqueur pour la sp cification des an mies Maintenant la question qui se pose quelle est sa position dans la hi rarchie de prescription des examens biologiques 82 IV La position du Rs Tf dans la Hi rarchie de prescription des examens Le diagnostic biologique d une an mie repose classiquement sur un h mogramme qui prend la premi re position dans la hi rarchie de prescription des examens pour explorer le degr de s v rit de l an mie par le biais de l Hb et le VGM puis les autres param tres du bilan martial Figure 28 dans 70 des cas le bilan martial est interpr table sans aller plus loin que l exploration des r serves en fer par la ferritin mie Mais
49. hypochromique s v re et peu d animaux survivent jusqu au sevrage Il a t montr que dans ces deux mod les rongeurs existe une mutation du g ne codant pour DMTI convertissant la glycine situ e en position 185 en prenant la num rotation de l isoforme 1B en arginine G185R 65 10 La substitution GI8SR entra ne une mauvaise localisation de DMTI dans l ent rocyte DMT1 se retrouvant l int rieur de la cellule au lieu d tre a la surface apicale 66 La mutation n affecte pas seulement la fonction de DMTI au niveau du duod num puisque l administration de fer parent rale ne restaure pas la d ficience en fer des globules rouges montrant ainsi le r le primordial de DMT1 dans l acquisition du fer par les pr curseurs rythroides voir le cycle TI RTT 67 La cr ation de souris KO Slc a2 conditionnel tissu sp cifique utilisant la technique Cre LoxP a permis de confirmer le r le primordial de DMT1 dans l absorption intestinale de fer et dans le cycle Tf RTf1 des pr curseurs rythroides 68 En revanche la presence d une surcharge en fer dans ces souris indique que DMTI n est pas essentiel pour l entr e du fer dans l h patocyte 68 et remet en cause le r le de DMT1 dans l acquisition du NTBI par les h patocytes sugg r par l quipe de D Trinder 37 38 24 R cemment ont t d crits des patients pr sentant des mutations dans le g ne SLC A2 69 70 Ces patients ont une an mie s
50. identifi s La biosynth se du R TT suit les voies m taboliques des autres glycoprot ines de surface Trois modifications post traductionnelles se produisent soient la glycosylation l acylation et la phosphorylation La demi vie du R TT varie de 14 heures a 3 jours selon le type cellulaire 35 Tanskernine diferngue Figure 11 Structure du r cepteur de la transferrine 146 L extr mit N terminale est dans le cytoplasme Le domaine extracellulaire comporte deux ponts bisulfure unissant les deux monom res trois sites de N glycosylation et un site d O glycosylation Le r cepteur s rique circulant est une forme tronqu e par prot olyse entre les acides amin s 100 et 101 Le g ne codant pour R Tfl est exprim e par tous les types cellulaires l exception des rythrocytes matures Toutefois son expression est la plus lev e dans les pr curseurs rythro des cellules synth tisant l h moglobine les h patocytes les monocytes les cellules formant la barri re h matoenc phalique et les cellules normales en phase de division rapide ainsi que dans les cellules malignes Les pr curseurs des rythrocytes contiennent plus des deux tiers des R Tf de l organisme 147 Le r cepteur est exprim d s le stade BFU E Burst forming unit E qui est constitu des prog niteurs sp cialis s les plus primitifs de la lign e rythrocytaire 147 Son expression augmente au fur et mesure de la maturation cellulaire pour
51. l organisme a l exception des rythrocytes matures qui n expriment plus le R TT 43 IIL 3 3 1 Evaluation de l rythropo se Par sa localisation privil gi e sur les cellules immatures rythro des de la moelle osseuse le R Tf joue un r le vital dans l rythropo se L tude de Kohgo ef al 172 a apport la preuve qu il existe une relation troite entre la concentration du Rs Tf et le niveau de l rythropo se concentration diminu e dans les an mies aplasiques augment e dans les an mies h molytiques La tr s bonne corr lation entre Rs Tf et mesures de ferrocin tique 165 justifie la mesure des Rs TT pour une valuation quantitative de l rythropo se La concentration du Rs Tf est donc augment e dans les tats d hyper rythropo se Il a t d montr que la concentration s rique du Rs Tf est fortement augment e de 3 10 fois lors des maladies h molytiques an mie h molytique auto immune dr panocytose sph rocytose h r ditaire et b thalass mie 173 174 Dans les syndromes my loprolif ratifs le taux de Rs TT est variable selon les pathologies 174 il est normal dans la leuc mie my lo de chronique et augment dans la polyglobulie vraie et dans la my lofibrose mais a un niveau moindre que dans les maladies h molytiques 174 L an mie m galobastique par carence en vitamine B12 ou en acide folique s accompagne d une masse rythrocytaire accrue avec une rythropo
52. labile Transferrine Statut martial transport Saturation de la TF Statut martial disponibilit TIBC Rs TF statut martial trans beusoi Ferritine r serves de fer e gt e gt gt Rs TF Fonctionnel beusoi V N Index Rs Tf F Fonctionnel r serve VGM volume globulaire moyen CST Coefficient de Saturation de la transferrine TIBC Capacit Totale de Fixation de la transferrine Rs Tf R cepteur soluble de la transferrine N normale diminution 1 augmentation 88 Conclusion Le r cepteur de la transferrine est une prot ine importante dans le m tabolisme du fer et de l rythropo se Le dosage du Rs Tf qui est une forme tronqu e et soluble du r cepteur membranaire est maintenant accessible par des techniques immunoenzymatiques automatis avec une bonne pr cision intra et inter essai Le Rs Tf refl te le contenu tissulaire en RTT qui est augment par la d ficience en fer et proportionnel l intensit de l rythropo se La mesure du Rs Tf est particuli rement recommand e pour l valuation de l efficacit de l rythropo se et ses besoins en fer pour le diagnostic d une carence en fer isol de tout syndrome inflammatoire pour le diagnostic d une carence en fer associ e une maladie inflammatoire chronique ou une infection o la ferritine est inutile pour explorer les r serves faussement normale ou lev e par l influence
53. me ayant diffus travers la membrane plasmique de l rythrophagolysosome le fer serait lib r directement dans le cytosol Le fer est ensuite stock dans la ferritine et ou export dans la circulation par la ferroportine o il peut de nouveau se fixer la Tf apr s oxydation par la c ruloplasmine CP 30 31 Figure 7 Il semble y avoir deux phases de sortie du fer des macrophages apr s EP une phase rapide dans les quelques heures qui suivent l EP et qui fait sortir deux tiers du fer et une phase plus lente qui impliquerait le d stockage du fer de la ferritine 32 LEP permet ainsi de recycler le fer principalement pour r alimenter en fer l erythropoiese Afin d tudier les m canismes encore peu connus intervenant dans l EP l quipe de F Canonne Hergaux a r cemment mis au point un mod le d tude de l EP en utilisant des macrophages diff renci s a partir de moelle osseuse de souris incub s avec des GR murins dont la concentration intracellulaire de calcium a t augment e 33 L rythrophagocytose a lieu essentiellement dans la pulpe rouge de la rate mais pas seulement En effet des souris ayant subi une spl nectomie ne voient pas la dur e de vie de leur GR augmenter laissant sugg rer que les macrophages de la moelle osseuse et les cellules de Kupffer sont capables de compenser la perte des macrophages spl niques pour EP 34 Ce sont ainsi 80 a 90 des GR qui sont limin s par voie extrav
54. microglobuline Les parties hydrophobes membranaires ne sont pas repr sent es 33 L ARNm du g ne HFE est pr sent en grande quantit dans l intestin gr le et dans le foie 130 11 est faiblement d tect dans les tissus lymphoides 131 La prot ine est retrouv e dans les cryptes des villosit s duod nales colocalisant avec RTTI 132 Dans le foie on pensait pendant un certain temps que la pr sence de la prot ine HFE tait restreinte aux cellules de Kupffer et aux cellules pith liales biliaires 133 134 puis probablement suite a la production de meilleurs anticorps il est maintenant admis que HFE est galement pr sente dans les h patocytes 130 Enfin dans le placenta HFE colocalise avec RTTI a la membrane apicale des syncitiotrophoblastes mais le r le de HFE dans le placenta reste a d terminer 135 Aujourd hui m me si le r le de la prot ine HFE n est pas encore compl tement tabli on pourra retenir que l activit de la prot ine est complexe et d pendante du type cellulaire Dans les cellules qui n exportent pas le fer HeLa HEK293 la surexpression de HFE entra ne une diminution du fer intracellulaire par diminution de l entr e du fer comp tition avec l holoTf pour la fixation avec le RTf1 136 128 l inverse dans les cellules qui exportent naturellement le fer via l exporteur ferroportine lign e HT29 de type duod nale 137 macrophages ou lign e THP 1 de type macrophagiqu
55. moin Groupe2 AF Groupe3 AMC Figure 16 Les taux d h moglobine Hb en g L dans le groupe1 t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an miques Groupe 2 an mie ferriprive AF n 50 27H 23F Groupe 3 an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F R sultats exprim s en moyennes Les hommes sont repr sent s par la colonne gauche en rouge fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en rouge clair Les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne A partir de l h moglobin mie figure 16 on observe une diff rence significative du taux d h moglobine p lt 0 001 entre le groupe t moin H 145 05 5 91 g L F 135 13 6 26 g L et les deux groupes de sujets an miques H 100 05 6 24 g L F 90 04 6 82 g L chez les sujets AF et H 99 46 5 38 g L F 90 78 5 71 g L chez les sujets AMC ce qui confirme installation d une an mie chez les patients de ces deux groupes mais sans aucune information sur leur physiopathologie Cette diff rence est n gligeable P gt 0 05 entre les deux groupes an miques eux m mes ce qui prouve l absence de la sp cificit du dosage d h moglobine dans le diagnostic diff rentiel des an mies Donc l h moglobin mie ne peut pas nous aider diff rencier les origines des an mies Son int r t se limite la confirmation d une rythropo se inefficace 66 111 2 2 l apport du
56. ostasie du fer intra cellulaire par Syst me IRP IRE 49 Figure 14 Mod le de la crypte La prot ine HFE produite par les cellules de la crypte 50 Figure 15 illustration du principe immunoturbidim tique pour le dosage de la ferritine titre E TE e AE E E E E E E EE A E E E E ES E E E EES 60 Figure 16 Les taux d h moglobine dans les trois groupes 2 66 Figure 17 Les valeurs du volume globulaire moyen dans les trois groupes 67 Figure 18 Les concentrations du fer s rique dans les trois groupes 68 Figure 19 Les concentrations de la ferritine dans les trois groupes 69 Figure 20 Les concentrations du r cepteur soluble de la transferrine dans les trois groupes 71 Figure 21 Les valeurs de l index Rs Tf F dans les trois groupes 12 Figure22 Les taux d h moglobine dans les trois groupes apr s la subdivision du troisi me groupe Figure 23 Les valeurs du volume globulaire moyen dans les trois groupes apr s la subdivision du LOIS ICE ne E Figure 24 Les concentrations du fer s rique dans les trois groupes apr s la subdivision du FOIS ME ST OUP Cys Se ot tensa Soa oe meat da dial io Figure 25 Les co
57. par cette maladie la probl matique devient comme suit est ce que l an mie est due la maladie inflammatoire ou une carence martiale sous jacente Dans ces cas complexes o le bilan initial n est pas concluant il ne reste qu se r f rer a l examen primordial qui est la ponction de la moelle osseuse le Perls m dullaire la seule 84 technique utilis e pour l exploration des r serves m dullaires en fer Mais elle est rarement praticable vu son caract re co teux et douloureux raisons pour lesquelles on essaie toujours de trouver une autre technique tout aussi sensible et sp cifique sans ses inconv nients Ici vient l int r t du dosage du Rs Tf comme un marqueur diff rentiel entre les causes possibles de cette an mie e Une concentration inferieure 4 39 mg L chez l homme et 3 69 mg L chez la femme nous oriente vers une an mie provoqu e par la perturbation de l rythropoi se sous V influence des cytokines d origine inflammatoire e Une concentration sup rieure 4 39 mg L chez l homme et 3 69 mg L chez la femme nous oriente vers une an mie d une combinaison entre le processus inflammatoire et une carence martiale coexistente Remarque dans cette hi rarchie le Rs Tf occupe la position du Perls m dullaire 85 V Les marqueurs biologiques tenir en compte et leurs apports informatifs au diagnostic d une rythropo se d ficiente en fer Les param tr
58. par le prot asome apr s ubiquitination en hypoxie HIF a est stabilis e et peut alors se lier a la sous unit B et d autres prot ines comme p300 pour se fixer sur les HRE Hypoxia Responsive Element pr sents dans le promoteur de ses g nes cibles L rythropo se est aussi r gul e positivement syst me r nine angiotensine IL 3 IL 6 ou n gativement Tumour Growth Factor TGF B caspases par d autres facteurs 11 1 1 3 2 Synth se de l h moglobine Le fer consomm par la moelle osseuse sert essentiellement la synth se d h me groupement prosth tique de l h moglobine responsable de la fixation de l oxyg ne Figures L h moglobine des GR circulant repr sente environ 60 70 du fer total pr sent dans l organisme La synth se de l h moglobine n cessite en effet la production coordonn e de l h me et des globines qui la constituent Figure 4 Les rythroblastes acqui rent le fer partir de la Tf voir ci dessus ils poss dent pour cela une grande quantit de R TT leur surface H2C CH CH3 Polypeptide chain a Hemoglobin b iron containing heme group Copynght 2004 Pearson Education Ino publishing as Benjamin Cummings Figure 4 Structure de l h moglobine humaine adulte a2B2 L hemoglobine a est constitu e de 4 cha nes de globine 2 cha nes a et 2 cha nes B portant chacune un groupement prosth tique heme b contenant un atome de fer 24 Les g nes co
59. positive en situation d hypoxie 46 L absence de Tf circulante chez des patients est tr s rare seulement 8 patients recens s dans 6 familles diff rentes c est l atransferrin mie 47 caract ris e par une an mie microcytaire associ e une surcharge en fer tissulaire Les patients sont trait s par des transfusions sanguines En absence de Tf les pr curseurs rythroides ne sont pas approvisionn s en fer ce qui entra ne l anemie La surcharge en fer associ e est due d une part a l accumulation du fer non li a la transferrine NTBI dans les organes et d autre part une augmentation de l absorption intestinale de fer pour compenser l an mie 48 20 11 1 2 Lactoferrine La lactoferrine fait partie de la famille des transferrines 49 Elle est capable de lier le fer avec plus d affinit que la Tf Elle est retrouv e dans le lait les s cr tions muqueuses la sueur et les granules des neutrophiles Le gene du r cepteur de la lactoferrine est exprim par les lymphocytes et cette expression est associ e l activation des lymphocytes Ainsi la lactoferrine joue un r le important dans la r ponse immunitaire en r gulant la prolif ration et l activation des lymphocytes mais aussi des cellules Natural Killer et des monocytes 50 La lactoferrine a de plus une activit antibact rienne Mais elle ne semble pas avoir de r le essentiel dans le m tabolisme du fer car en absence de lactofer
60. rique isol ment ne permet ainsi pas de juger du statut martial dans l organisme il doit tre compl ter par d autres marqueurs du bilan martial plus informatifs Son dosage est utilis pour le calcul de la saturation de la transferrine et pour le test d absorption intestinale 78 111 2 4 l apport de la ferritin mie Les taux de la ferritine dans les trois groupes 500 E Hommes 450 E Femmes 400 350 300 Ferritin mie ug L 250 200 150 100 28 04 21 87 50 Groupel t moin Groupe2 AF Sous G1 AMC Sous G2 A mixte Groupe 3 Figure 25 Les concentrations de la ferritine s rique en ug L dans le groupe 1 t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an miques Groupe 2 an mie ferriprive pure AF n 50 27H 23F Groupe 3 an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F subdivis en deux sous groupes le sous G1 n 40 22H 18F an mie des maladies chronique pure AMC et le sous G2 n 42 22H 20F an mie des maladies chroniques combin e une carence en fer dite an mie mixte A mixte r sultats exprim s en moyennes Les hommes sont repr sent s par la colonne a gauche en bleu fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en bleu clair les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne La diff rence de concentration s rique de la ferritine entre le sous groupe 1 H 393 05 79 81 ug L
61. s ainsi pour leur capacit a g n rer de petites colonies rythro des in vitro voir Figure 3B Les prog niteurs rythroides subissent ensuite une forte prolif ration associ e a la diff renciation en rythroblastes jusqu au stade rythroblaste polychromatophile La maturation des rythroblastes polychromatophiles vers le stade r ticulocyte n est pas accompagn e d une forte prolif ration La phase finale de maturation consiste expulser le noyau et d grader les organelles intracellulaires Au cours de la maturation les pr curseurs rythro des voient leur taille diminuer leur contenu en h moglobine augmenter et leur chromatine se densifier La diminution de la taille se poursuit lors de la s nescence des globules rouges GR appel s aussi h maties ou rythrocytes Figure 3A Ainsi un GR jeune un r ticulocyte a une taille plus grande qu un GR s nescent ce qui se manifeste par une augmentation de la taille globulaire moyenne MCV pour Mean Cellular Volume lorsque l rythropo se est accrue 21 A l inverse en cas d rythropoi se inefficace la taille des GR est plus petite car peu de r ticulocytes sont form s on parle d an mie microcytaire La forme d un reticulocyte puis d un rythrocyte normal est celle d un disque biconcave ils ont peu d organelles internes et sont essentiellement compos s d h moglobine L a a X Pa N 7 tf EN fy f C
62. se inefficace Le tiers des patients carenc s ont une augmentation du Rs Tf et cela constitue un indice de s v rit de la maladie 175 Les patients avec des tumeurs h matologiques ou des tumeurs solides ont g n ralement des niveaux circulants de Rs Tf normaux malgr que l expression du Rs Tf soit augment e dans les cellules tumorales 176 A Voppos la concentration du Rs Tf est diminu e dans les tats d hypo rythropoi se comme dans l insuffisance r nale chronique l an mie non r g n ratrice ou suite une transplantation de moelle osseuse Dans ces pathologies le niveau du Rs Tf est environ de 50 a 60 celui des contr les ce qui indique que les tissus non rythroides contribuent significativement la production des Rs Tf circulants La correction de l an mie des insuffisants r naux se fait par un traitement a l rythropo tine Epo qui est une hormone normalement produite par le rein Ce traitement donne des r sultats variables d un individu l autre 177 En raison du co t lev de Epo recombinante il est important de s assurer que le sujet est un bon r pondeur La concentration initiale de Rs Tf et son pourcentage d augmentation apr s une ou deux semaines de traitement permettent de classer les patients en r pondeurs ou non r pondeurs au traitement avec une sensibilit de 92 147 Si la concentration du Rs Tf est lev e et la ferritine basse il faut d abord instituer un traitement
63. similarit dans le domaine extracellulaire mais lie l holoTf avec une affinit 25 fois plus faible 158 42 Enfin R Tf2 n est pas capable de lier la prot ine HFE L implication de R Tf2 dans l h mochromatose h r ditaire 160 sugg re que R Tf2 aurait un r le de r gulation de l hom ostasie du fer via la r gulation de l expression du g ne hepcidine 161 39 111 2 La forme soluble circulante Rs Tf ou STfR Le r cepteur soluble de la transferrine Rs Tf a t isol du s rum humain par chromatographie d immunoaffinit avec un anticorps monoclonal 162 Le Rs Tf est une forme tronqu e du r cepteur membranaire qui a perdu ses domaines cytoplasmique et transmembranaire ainsi que les ponts disulfures qui retenaient ensemble les deux monom res Le clivage s effectue dans le domaine extracellulaire entre l arginine position 100 et la leucine position 101 Figure 11 Il s agit donc d une forme monom rique circulante de masse mol culaire d environ 85 kDa ayant toujours la capacit de lier une mol cule de transferrine Dans le plasma le Rs Tf se trouve sous forme de complexe avec la transferrine mono ou diferrique le poids mol culaire de ce complexe est d environ 320 kDa 162 Chez les sujets normaux moins de de r cepteurs intacts provenant probablement de la lyse cellulaire La majorit est sous forme tronqu e monom rique Dans certaines pathologies telles que la dr panocytose l
64. sorb sous forme de Fe dans le duod num et le j junum proximal Le fer trivalent et le fer h minique Fe d origine alimentaire qui doit tre r duit l tat ferreux par la vitamine C Env 1 mg de fer est absorb quotidiennement Les ions Fe qui p n trent dans les cellules muqueuses sont pris en charge par des substances de transport Avant de passer dans le plasma ils sont oxyd s en Fe par la c rul oplasmine c est sous cette forme que le fer est li la transferrine Le transport du fer dans le plasma se fait sous forme de complexe transferrine fer Une mol cule de transferrine peut transporter au maximum deux ions Fe La quasi totalit du fer s rique est li la transferrine Les dosages de fer non h minique sont utiles pour le diagnostic et le suivi des an mies ferriprives des h mochromatoses maladies dues au d p t dans les tissus de deux pigments ferrugineux l h mosid rine et lh mofuchsine et caract ris es par une pigmentation de la peau ainsi que des maladies r nales chroniques On effectue des dosages de fer pour le diagnostic et le suivi d an mies microcytaires an mies dues un trouble du m tabolisme du fer ou une hemogobinopathie par ex d anemies macrocytaires an mies par deficit en vitamine B12 ou en acide folique anemies dues a un trouble du m tabolisme induit par des m dicaments ou d tiologie inconnue par ex et d an mies normocytaires an mie due a une insuffis
65. substitutif par le fer avant de commencer la th rapie avec la rHu EPO l Epo recombinante 44 IIL 3 3 2 valuation de la d ficience en fer an mie ferriprive AF pure La d ficience en fer est la principale cause d an mie dans les pays en voie de d veloppement mais galement dans les pays industrialis s Le degr de d ficience en fer n cessaire pour induire une augmentation du Rs Tf a t tabli en soumettant des personnes saines et volontaires des saign es r p t es 178 Il a t observ que la ferritine chute rapidement durant la phase de diminution des r serves et pendant ce temps la concentration de Rs Tf demeure stable Lorsque la ferritine atteint des valeurs subnormales la concentration de Rs Tf augmente de fa on consistante progressive et inversement proportionnelle au d ficit en fer Cette augmentation refl te l expression cellulaire augment e du R Tf et dans les cas de d ficience s v re l augmentation du R Tf caus e par l rythropoiese inefficace L augmentation du Rs Tf se poursuit au cours des saign es alors que la ferritine reste constante et effondr e 179 Cette augmentation signe la carence tissulaire en fer fonctionnel et c est le stade de l rythropo se carenc e en fer Elle intervient plus pr cocement que les modifications du volume globulaire moyen de l indice de distribution des rythrocytes et de la protoporphyrine rythrocytaire 169 La carence en fer vo
66. une diminution de l h moglobine inf rieure a un seuil limite qui varie en fonction de l ge et du sexe Ainsi d apr s POMS ce seuil est fix a 120 g L pour les femmes non enceintes et 130 g L pour les hommes Une an mie par carence martiale est due a une d pl tion des r serves en fer de organisme il y a environ 4 g de fer dans l organisme dont 70 contenus dans l h moglobine qui entra ne un d faut d hemoglobinisation des globules rouges se traduisant par une microcytose A c te de la ferritine et vu sa sensibilit lev e aux besoins cellulaires en fer le Rs TT pr sent ici un grand int r t dans le diagnostic tr s pr coce d une d ficience martiale juste apr s l puisement des r serves en fer avant l aggravation de l tat et l anemie s installe Au cours des maladies chroniques telles que les tats inflammatoires infections ou tumeurs l an mie est fr quente Les param tres habituels d exploration martiale sont inop rants pour mettre en vidence une carence en fer associ e soustraient En effet chacun d entre eux subit des modifications de sens oppos qui emp chent l interpr tation clinique C est ainsi que la ferritine se comporte la fois comme un indicateur de carence et comme une prot ine de la phase aigu sa concentration est anormalement normale ou lev e m me si une carence en fer est associ e l inflammation Le Rs Tf trouve ici l une de ses principales applicati
67. volume de 20 ul de l chantillon plasma est ajout 250 ul de r actif R1 Acide citrique 200 mmol L thiour e 115 mmol L d tergent dans la cuvette r actionnelle le m lange est incub pendant 5 min 37 C A un pH acide citrate pH lt 2 0 le fer est d tach de la transferrine Les chantillons lip miques sont clarifi s par le d tergent citrate pH gt 2 0 34 Transferrine Fe complexe apotransferrine Fe 57 Puis l addition de 50 ul du r actif R2 Ascorbate de sodium 150 mmol L FerroZine 6 mmol L conservateur et incubation du m lange pendant 5 min a 37 C conduit au d clenchement de la r action L ascorbate r duit les ions Fe en ions Fe qui forment ensuite un complexe color avec la FerroZine L intensit de la coloration d velopp e est directement proportionnelle a la concentration en fer et est mesur e par photom trie 570 nm contre une courbe d talonnage saisie et m moris e lors de la calibration de l appareil 34 acide ascorbique 2 re noue 7 Fe 5 2 5 FerroZine Fe complexe color 1 2 2 2 Dosage de la transferrine La transferrin mie valeurs usuelles 2 0 3 6 g L chez l homme et la femme a t dos e par immunoturbidim trie Roche Diagnostic Systems voir annexe 3 Une prise d essai de 3 ul de l chantillon plasma frais recueilli sur h parinate de lithium est ajout e a 270 ul de r actif R1 Tampon phosphate
68. volume globulaire moyen Valeurs du volume globulaire moyen dans les trois groupes 120 m Hommes E Femmes 100 80 60 40 volume globulaire moyen fl 20 0 Groupe 1 t moin Groupe 2 AF Groupe 3 AMC Figure 17 Les valeurs du volume globulaire moyen VGM en fl dans le groupe1 t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an miques Groupe 2 a an mie ferriprive AF n 50 27H 23F Groupe 3 a an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F R sultats exprim s en moyennes Les hommes sont repr sent s par la colonne a gauche en rouge fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en rouge clair Les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne La diff rence du volume globulaire moyen entre le groupe t moin H 92 25 4 15 fl F 86 38 3 15 fl et les deux groupes de sujets an miques H 76 05 4 29 fl F 70 33 3 45 fl chez les sujets AF et H 75 98 4 01 fl F 70 65 2 82 fl chez les sujets AMC peut seulement indiquer que l an mie est microcytaire sans aucune autre information figure 17 Un VGM lt 80 fl est l un des signes d une an mie ferriprive et ou inflammatoire 194 67 IIL 2 3 apport du fer s rique Les taux du Fer s rique dans les trois groupes 30 E Hommes 25 E Femmes 20 Fe umol L 15 10 4 71 Groupe 1 t moin Groupe 2 AF Groupe 3 AMC Figure 18 Les conc
69. 1 Cette diminution de la transcription par un m canisme encore inconnu pourrait expliquer en partie la r tention de fer dans les macrophages des patients ayant une inflammation 26 11 4 Les ferrir ductases Dcytb et Steap3 11 4 1 Deytb La r ductase Dcytb Duodenal Cytochrome b ou Cybrd1 a t clon e en 2001 92 Dcytb est une prot ine membranaire pr sente a la surface apicale des ent rocytes Elle est galement pr sente dans le foie et la rate 93 Elle contient deux sites potentiels de fixation de l h me Elle est homologue au cytochrome b561 La quantit de Dcytb est augment e dans le duod num de souris an miques mod le hpx voir paragraphe transferrine et en situation d hypoxie 92 ou de souris en r gime pauvre en fer 92 Le r le de Dcytb dans l absorption intestinale a t r cemment remis en cause par la cr ation de souris KO pour ce g ne 4 Ces souris ne pr sentent en effet pas d an mie ou de diminution des r serves en fer comme on pouvait s y attendre et tel que l on peut l observer chez les animaux mut s pour le transporteur DMTI 10 68 voir ci dessus 11 4 2 Steap3 Steap 3 pour Six Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate 3 aussi appel e pHyde TSAP6 et Dudulin2 a t identifi e par l tude des souris mutantes nm1504 comme la ferrir ductase endosomale impliqu e dans la capture du fer apr s endocytose de l holoTf Les souris nm 504 ont un ph
70. 2 Sous groupe 1 AMC pure n 40 Sous groupe 2 AF AMC n 42 Age ans H moglobine g dl H matocrite VGM fl Fer s rique umol l Ferritine ug l Transferrine mg l CST CTF u mol Fe I Rs Tf mg l Rs Tf Log Ferritine CRP mg l Hommes n 22 51 45 12 65 102 04 6 14 32 08 2 17 77 81 4 05 9 19 4 59 393 05 79 81 3 59 0 45 10 97 6 34 89 84 11 23 3 16 0 83 1 23 0 36 gt gt 10 Femmes n 18 52 50 9 55 93 64 4 45 28 62 1 66 72 01 2 6 29 2 86 320 09 39 32 3 46 0 33 7 59 3 80 86 69 8 42 2 38 0 58 0 95 0 25 gt gt 10 Hommes n 22 51 27 11 86 96 87 2 75 30 08 1 75 74 15 3 10 4 90 2 83 345 45 53 49 3 99 0 28 12 7 7 44 99 87 7 16 7 52 0 48 2 97 0 26 gt gt 10 Femmes n 20 50 95 11 14 88 21 5 58 26 45 2 26 69 43 2 55 3 30 3 12 270 91 62 87 3 91 0 48 3 80 16 9 97 89 12 16 6 85 0 78 2 85 0 45 gt gt 10 Les r sultats sont exprim s en moyenne SD La CRP C R active protein est compar e la valeur seuil qui indique l installation d une r action inflammatoire 10 mg L sous groupe 1 AMC pure sujets an miques d origine des maladies chroniques pure sous groupe 2 AF AMC sujets an miques d origine ferriprive combin e a des maladies chroniques VGM volume globulaire moyen CST Coefficient de Saturation de la Tf CTF Capacit Totale de Fixation de la Tf Rs Tf R cept
71. 64 7 avec des constructions portant la s quence codante de Nrampl a permis de d montrer son r le de transporteur de fer au niveau du phagosome 72 73 Ce transport pourrait se faire dans les deux sens vers l int rieur du phagosome ou vers le cytosol en fonction du pH 25 IL 3 3 Ferroportine D couverte ind pendamment par trois groupes diff rents elle a h rit de trois noms diff rents Ferroportinl ou ferroportin 74 Iregl Iron regulated protein 1 75 MTP1 Metal Transporter Protein 1 76 pour s appeler par la suite Sici1a3 solute carrier family 11 member 3 et Sic40al solute carrier family 40 member 1 C est ce jour le seul exporteur cellulaire de fer connu Sa topographie de 9 12 domaines transmembranaires 77 78 et sa pr sence sous forme de dimere 79 ou monomere 80 sont encore sujettes controverse La ferroportine est retrouv e dans le duod num la membrane basolat rale des ent rocytes 75 faiblement dans les h patocytes 76 74 dans les macrophages de la rate des poumons 81 et du foie 76 74 dans le placenta 75 dans le cerveau 76 82 dans le rein et dans le c ur 76 La ferroportine comme la ferritine porte un IRE dans la partie S UTR de son ARNm voir Systeme IRP IRE Il a t montr qu in vitro cet IRE est fonctionnel dans trois lign es cellulaires HepG2 lign es h patomateuse CaCo2 lign e de carcinome intestinal et U937 lign e lympho monocyt
72. 97 111 Kristiansen M Graversen J H Jacobsen C Sonne O Hoffman H J Law S K and Moestrup S K Identification of the haemoglobin scavenger receptor Nature 2001 409 6817 198 201 112 Graversen J H Madsen M and Moestrup S K CD 63 a signal receptor scavenging haptoglobin hemoglobin complexes from plasma Int J Biochem Cell Biol 2002 34 4 309 14 113 Tolosano E and Altruda F Hemopexin structure function and regulation DNA Cell Biol 2002 21 4 297 306 114 Zakhary R Poss K D Jaffrey S R Ferris C D Tonegawa S and Snyder S H Targeted gene deletion of heme oxygenase 2freveals neural role for carbon monoxide PNAS 1997 94 26 14848 14853 115 Elbirt K K and Bonkovsky H L Heme oxygenase recent advances in understanding its regulation and role Proc Assoc Am Physicians 1999 111 5 438 47 116 Yachie A Nida Y Wada T Igarashi N Kaneda H Toma T Ohta K Kasahara Y and Koizumi S Oxidative stress causes enhanced endothelial cell injury in human heme oxygenase 1 deficiency J Clin Invest 1999 103 1 129 35 117 Willnow T E Hilpert J Armstrong S A Rohlmann A Hammer R E Burns D K and Herz J Defective forebrain development in mice lacking gp330 megalin Proc Natl Acad Sci U S A 1996 93 16 8460 4 118 Eisenstein R S Iron regulatory proteins and the molecular control of mammalian iron metabolism Annu Rev Nutr 2000 20
73. BI Non Transferrin Bound Iron fer non li a la transferrine R Tf1 r cepteur transferrine 1 R Tf2 r cepteur transferrine 2 Rs Tf r cepteur transferrine soluble ou s rique SCF Stem Cell Factor sla sex linked anemia STEAP Six Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate Tf transferrine TGE Tumour Growth Factor B TIBC Total iron Binding Capacity TNF Tumour Necrosis Factor VHL Von Hippel Lindau Intitul des figures Figure 1 L absorption intestinale du fer cece EA 6 Figure 2 Endocytose du fer li la Tf par R Tf sss 7 Figure 3 ErythropOi se sss 10 Figure 4 Structure de l h moglobine humaine adulte 0202 11 Pisure 5 Synthese des Chaines usine sn ane med aie 13 igure 6 Biosynthese Ge 1 6 asia en 15 Figure 7 Erythrophagocytose et recyclage du fer 16 Figure 8 Entr e et sortie du fer de l h patocyte e cece eee eeeeneeaenes 19 Figure 9 Proportion des sous unit s H et L composant la ferritine dans diff rents tissus 22 Figure 10 Diagramme en ruban repr sentant le complexe HFE 6Z2m RTf1 Tf 33 Figure 11 Structure du r cepteur de la transferrine 36 Fioure 12 Exemples d uses boucl s IRE sr NA eee 48 Figure 13 R gulation de l hom
74. Etude de la corr lation du Rs Tf avec les autres param tres 65 111 2 Etude des apports informatifs de chaque param tre dans le diagnostic biologique SD CIHIQUE eS AE CUIGICCS os RE Nono ii n on 66 IIL 2 1 Papport du taux d h moglobine seen eee eens 66 111422 1 apport au volume Clobulaire MO yen si ii de tasses 67 2 apport OUT SEN UG gts ead ES REE temoin gle da 68 1112 4 rappor de Tac tere male ios tn as Ole SES SEA naar ed ete tete 69 ULAS rappor dR TE S TIQUE 8 See CAS AALS ae 71 12 6 apport indexe Rs Tie P NSS as E ane aan 72 111 3 L valuation de la corr lation du Rs Tf avec les autres param tres du bilan martial dans les deux sous groupes composants le groupe 3 75 111 4 Etude des apports informatifs de chaque param tre dans le diagnostic sp cifique des an mies tudi es apr s la subdivision du troisi me groupe 76 IIT 4 1 Papport du taux d hemoglobine cence eee eee KSSE 76 111 4 2 apport du volume globulaire moyen 77 1 00101 Sek 78 HL44 Papport dela Te UMA esse ae en ane een ON a 79 M 4 5 apport du Rs Tf 56110136 asset esta ethnies eee 80 IAG V
75. F sujets an miques d origine ferriprive groupe 3 AMC sujets an miques d origine des maladies chroniques VGM volume globulaire moyen CST Coefficient de Saturation de la Tf CTF Capacit Totale de Fixation de la Tf Rs Tf R cepteur soluble de la transferrine On remarque une excellente corr lation entre les principaux param tres du bilan martial avec le Rs Tf chez les deux sexes tableau 4 pour le groupe t moin et le groupe de sujets an mie ferriprive AF les valeurs absolues r sont sup rieures 0 94 avec une valeur P lt 0 001 ce qui indique la sensibilit lev e de ce param tre au statut martial dans le groupe de sujet an mie des maladies chroniques AMC la corr lation est relativement moindre pour la totalit des param tres P 0 2 ce qu on peut expliquer par l h t rog n it de ce groupe variabilit inter individuelle du taux de Rs Tf tr s lev e On remarque aussi l absence de corr lation entre le Rs Tf et l ge ce qui exclut l ge comme un facteur influen ant les taux s rique de Rs Tf dans cette population adulte 65 111 2 Etude des apports informatifs de chaque param tre dans le diagnostic biologique sp cifique des an mies tudi es HI 2 1 l apport du taux d h moglobine Les taux d h moglobine dans les trois groupes 160 E Hommes 140 145 05 135 13 E Femmes 120 100 H moglobine g L 80 60 40 20 Groupel t
76. F umol Fe 1 transferrine g l x 25 Ce param tre est connu sous le nom de la TIBC total iron binding capacity qui appr cie la capacit maximale de fixation du fer par la transferrine Les valeurs usuelles de ce param tre sont celles de la Tf multipli es par 25 soit 50 90 u mol l La diff rence entre la capacit totale et la sid r mie d finit la capacit latente de fixation ou de saturation en fer de la transferrine UIBC unbound iron binding capacity La CST varie de fa on identique la transferrine 1 2 2 4 Calcul du coefficient de saturation en fer de la transferrine Le coefficient de saturation de la transferrine CST valeurs usuelles 20 a 40 homme et femme a t d termin par le calcul du rapport entre le taux du fer s rique FS en pmol l et la Capacit Totale de Fixation de la transferrine CTF en umol de Fe l CST Fs umol I x 100 CTF umol de Fe I 59 1 2 2 5 Dosage de la ferritine La ferritin mie valeurs usuelles 30 400 ug l chez l homme et 15 150 ug l chez la femme a t valu e par immunoturbidim trie Roche Diagnostics Systems voir annexe 4 Une prise d essai de 8 ul de l chantillon plasma frais recueilli sur h parinate de lithium est ajout 125 ul de r actif R1 Tampon TRIS Tris hydroxym thyl aminom thane 0 18 mol l pH 8 2 NaCl 100 mmol l conservateur le m lange est incub pendant 5 min 37 C Puis l addition
77. Frongillo E A Khalfan S S and Pollitt E Iron deficiency and physical growth predict attainment of walking but not crawling in poorly nourished Zanzibari infants J Nutr 2005 135 814 819 200 Cook J D Flowers C H and Skikne B S The quantitative assessment of body iron Blood 2003 101 3359 3364 201 Lee E J Oh E J Park Y J Lee H K and Kim B K Soluble transferrin receptor sTfR ferritin and sTfR Log ferritin index in anemic patients with nonhematologic malignancy and chronic infl ammation Clin Chem 2002 48 1118 221 202 Weiss G and Goodnough L T Anemia of chronic disease N Engl J Med 2005 352 1011 23 103 Annexes 104 Annexe 1 fiche de renseignements clinique et interrogatoire du malade Fiche de renseignements cliniques Informations personnelles ll Enqu te tiologique PIOLESSION ASS Sea Prise de m dicaments Medication suivie Dur e du traitement TRANS USION S ESS aE ea a a Nombre de fO S sss Date de la derni re transfusion 2010 M NOPAUSE anse IV Clinique 1 Signes g n raux p leur cutan o muqueuse asthenie 2 Cons quences de l hypox mie 3 Signes neurologiques par hypox mie C phal es vertiges _ Acouphenes _ Dyspn e Tachycardie angor d effort
78. G2 A mixte Groupe3 Figure 27 Les valeurs de l index Rs Tf F dans le groupe1 t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an miques Groupe 2 an mie ferriprive pure AF n 50 27H 23F Groupe 3 an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F subdivis en deux sous groupes le sous G1 n 40 22H 18F an mie des maladies chroniques pures AMC et le sous G2 n 42 22H 20F an mie des maladies chroniques combin e une carence en fer dite an mie mixte A mixte r sultats exprim s en moyennes Les hommes sont repr sent s par la colonne gauche en bleu fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en bleu clair les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne L index Rs Tf F dans le sous groupe 2 H 2 97 0 26 F 2 83 0 45 est plus lev que dans le sous groupel H 1 23 0 36 F 0 95 0 25 et de celui dans le groupe t moin P lt 0 001 et P lt 0 00 respectivement figure 27 Ce qui r affirme les faibles besoins en fer chez les sujets an mie purement d origine inflammatoire par rapport aux sujets an mie mixte Le rapport RsTf Log ferritine apporte au diagnostic une importante quantit d informations parce qu il prend en compte simultan ment la variabilit des deux marqueurs biologiques du bilan martial les plus importants le Rs Tf qui explore les besoins tissulaires en fer principalement la moelle osseuse et la
79. L ou 10 500 mg dL En cas de concentrations plus lev es diluer les chantillons manuellement dans le rapport 1 1 l aide de solution physiologique de chlorure de sodium Multiplier le r sultat par le facteur de dilution appropri 2 dans exemple Analyseurs Roche Hitachi MODULAR D MODULAR P ACN 231 Domaine de mesure 1 26 63 0 umol L 0 1 5 0 g L ou 10 500 mg dL Domaine de mesure plus tendu en cas de r analyse Analyseur Roche Hitachi MODULAR D 1 26 94 5 pmol L 0 1 7 50 g L ou 10 750 mg dL Roche Hitachi cobas Analyseur MODULAR P ACN 231 1 26 126 pmol L 0 1 10 0 g L ou 10 1000 mg dL Analyseurs Roche Hitachi 904 911 912 917 MODULAR P ACN 187 Domaine de mesure 1 26 65 5 mol L 0 1 5 2 g L ou 10 520 mg dL Domaine de mesure plus tendu en cas de r analyse 1 26 131 mol L 0 1 10 4 g L ou 10 1040 mg dL La limite sup rieure du domaine de mesure d pend de la concentration la plus lev e de la gamme de standards La limite sup rieure du domaine de mesure est une valeur approximative et d pend de la valeur obtenue par le calcul de la concentration la plus lev e de la gamme de standards Valeurs de r f rence 25 2 45 4 umol L 2 0 3 6 g L ou 200 360 mg dL Chaque laboratoire devra v rifier la validit de ces valeurs et tablir au besoin ses propres domaines de r f rence selon la population examin e Performances analytiques Les performances analytiques indiqu es ci
80. M D Vafa M R Haile D J and Wessling Resnick M Iron loading and erythrophagocytosis increase ferroportin I FPN1 expression in J774 macrophages Blood 2003 102 12 4191 7 Yang F Wang X Haile D J Piantadosi C A and Ghio A J Iron increases expression of iron export protein MTP1 in lung cells Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2002 283 5 L932 9 Canonne Hergaux F Donovan A Delaby C Wang H J and Gros P Comparative studies of duodenal and macrophage ferroportin proteins Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2006 290 1 G156 63 Chen H Su T Attieh Z K Fox T C McKie A T Anderson G J and Vulpe C D Systemic regulation of Hephaestin and Iregl revealed in studies of genetic and nutritional iron deficiency Blood 2003 102 5 1893 9 Nemeth E Tuttle M S Powelson J Vaughn M B Donovan A Ward D M Ganz T and Kaplan J Hepcidin regulates cellular iron efflux by binding to ferroportin and inducing its internalization Science 2004 306 5704 2090 3 Drakesmith H Schimanski L M Ormerod E Merryweather Clarke A T Viprakasit V Edwards J P Sweetland E Bastin J M Cowley D Chinthammitr Y Robson K J and Townsend A R Resistance to hepcidin is conferred by hemochromatosis associated mutations of ferroportin Blood 2005 106 3 1092 7 Delaby C Pilard N Goncalves A S Beaumont C and Canonne Hergaux F Presence of the iro
81. Preciset sTfR Fr quence des calibrations Une calibration compl te est recommand e e en cas de changement de lot de r actif e Si le contr le de qualit l exige Contr le de qualit Pour le contr le de qualit utiliser les mat riaux de contr le indiqu s dans le paragraphe Mat riel auxiliaire n cessaire D autres contr les appropri s peuvent galement tre utilis s La fr quence des contr les et les limites de confiance doivent tre adapt es aux exigences du laboratoire Les r sultats doivent se situer dans les limites de confiance d finies Chaque laboratoire devra tablir la proc dure suivre si les r sultats se situent en dehors de ces limites Calcul des r sultats Lanalyseur calcule automatiquement la concentration en analyte de chaque chantillon Facteurs de conversion mg L x 0 1 mg dL mg dL x 10 mg L mg L x 11 8 nmol L nmol L x 0 085 mg L Limites d utilisation interferences Crit re d acceptabilit recouvrement 10 par rapport la valeur initiale Ict re pas d interf rence significative par la bilirubine conjugu e et non conjugu e jusqu env 60 mg dL 1026 umol L H molyse pas d interf rence significative par l h moglobine jusqu 1000 mg dL 621 mol L Lip mie Intralipid pas d interf rence significative jusqu 1000 mg dL Le facteur rhumato de ne g ne pas jusqu 750 Ul mL ll n y a pas d effet crochet jusqu
82. REPUBLIQUE ALG RIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE MINISTERE DE L ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE UNIVERSITE FARHAT ABBAS SETIF MEMOIRE Pr sent la Facult des sciences de la nature et de la vie D partement de Biochimie Pour l obtention du Dipl me de MAGISTER EN BIOCHIMIE Option Biochimie appliqu e Par SIDANI Said THEME L exploration de l rythropoi se via le taux s rique des r cepteurs solubles de la transferrine Rs Tf chez les sujets an miques Sous la direction de Pr DJABI Farida Soutenue publiquement le 06 10 2011 devant la Commission d examen Pr sident BENBOUBETRA Mustapha Pr Universit de s tif Rapporteur DJABI Farida Pr Universit de s tif Examinateurs HOUCHER Bakhouche Pr Universit de s tif BOUZIDI Abdelouahab MC Universit de s tif Ann e universitaire 2010 2011 Remerciements Je tiens remercier toute personne qui a contribu de pr s ou de loin la r alisation de ce m moire Professeur Djabi F du CHU de S tif d avoir propos ce sujet et pour sa disponibilit diriger ce travail travers ses critiques et ses propositions d am lioration Professeur Benboubetra M de l universit de S tif par sa g n rosit son aide et de m avoir fait honneur de pr sider le jury de soutenance Je remercie vivement Professeur Houcher B et Docteur Bouzidi A de l universit de S tif d avoir accept de juger mon travail
83. Receptor qui pourrait jouer un r le important dans le contr le du contenu en h me des pr curseurs rythroides 26 Son r le exact reste n anmoins d finir De plus des transcrits de la ferroportine exporteur du Fe ont t retrouv s tr s r cemment dans des lign es rythro des 27 La pr sence d exporteurs de diff rentes formes de fer dans les pr curseurs rythro des sugg rent que ces cellules sont capables de faire sortir du fer en exc s et d viter ainsi la formation de radicaux libres l int rieur de la cellule Cette capacit des pr curseurs rythro des faire sortir du fer est assez inattendue car on consid re habituellement que ces cellules consomment tout le fer qu elles contiennent pour la synth se d h moglobine 14 En cas de d ficience en fer la synth se d h moglobine est perturb e les GR produits contiennent alors moins d h moglobine qui leur donne leur couleur on parle alors d an mie hypochrome SUCCINYL CoA 600 H 3 CH COO s 0 CH COO CH c gor CH2 CH Cons o LALASYNTHASE CH ALA DEHYDRATASE y 2 a 3 SE OS ES H Bs CH2 0 NH CH N H CoASH CO emits H2O H eee ne oe PORPHOBILINOGEN 6 PBG DEAMINASE GLYCINE 5 AMINOLEVULINIC 9 CHe ACID CH3 Vi CH3 CH3 Pr Pr HEME HYDROXYMETHYLBILANE 2H FERRO CHELATASE Vi CH3 CH3 Vi H3C CH3 Pr Pr PROTOPORPHYRIN IX PROTO GEN IX OXIDASE vi CH3
84. Tf R cepteur soluble de la transferrine Les coefficients de corr lation du Rs Tf avec les autres parametres du bilan martial sont significativement am lior s 23 apr s cette division dans les deux sous groupes tableau 6 ce qui confirme l hypoth se de l h t rog n it du troisi me groupe d une part et affirme l efficacit du param tre sur lequel est bas e cette division Donc le dosage du Rs Tf est tr s efficace pour la diff renciation entre une an mie purement d origine inflammatoire d une anemie d origine carentielle associ e la maladie inflammatoire chronique 75 111 4 Etude des apports informatifs de chaque param tre dans le diagnostic sp cifique des an mies tudi es apr s la subdivision du troisi me groupe HI 4 1 l apport du taux d h moglobine Les taux d H moglobine dans les trois groupes 160 E Hommes 140 145 05 135 13 E Femmes 120 100 102 05 93 64 80 60 H moglobine g L 40 20 Groupe1 t moin Groupe2 AF Sous G1 AMC Sous G2 A mixte Groupe 3 Figure 22 Les taux d h moglobine Hb en g L dans le groupe1 t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an miques Groupe 2 an mie ferriprive AF n 50 27H 23F Groupe 3 an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F subdivis en deux sous groupes le sous G1 n 40 22H 18F an mie des maladies chronique pure AMC et le sous G2 n 42
85. UTR IRE stabilise ARNm Chez les mammif res deux prot ines IRP ont t identifi es IRP1 aussi appel e aconitase cytosolique 1 ACO1 poss de un complexe fer soufre Fe S Quand le fer est abondant dans la cellule le complexe Fe S peut se former et IRPI a alors une activit aconitase 185 Lorsque le fer vient manquer le complexe Fe S est d stabilis et la prot ine acquiert alors une activit de liaison aux IRE IRP2 ou IREB2 pour IRE Binding protein 2 est homologue 79 IRP1 mais ne poss de pas d activit aconitase ni de complexe Fe S En pr sence de fer ou d h me IRP2 est d grad e par le prot asome 186 Figure 13 Ainsi la cellule pr vient l accumulation du fer soluble toxique gr ce aux IRP senseurs du fer en augmentant le stockage du fer insoluble dans la ferritine IRE en 5 et en diminuant l entr e du fer dans la cellule m di e par R Tf1 IRE en 3 l inverse quand la cellule manque de fer la ferritine est diminu e et avec elle les stocks de fer lib r s et le captage du fer est augment Outre le fer des exp riences in vitro ont montr que les IRP sont sensibles l hypoxie 187 et au stress oxydant 188 sugg rant un r le plus large que celui de r gulateurs du m tabolisme du fer Figure 13 48 IRP1 2 active Perte activite IRP Fev Few 2 inactivation RPT o assemblage cluster Fe a Bae css Le NON Y 1 2 IRP1 RE a Fe H2024 1
86. Vulpe C D Kuo Y M Murphy T L Cowley L Askwith C Libina N Gitschier J and Anderson G J Hephaestin a ceruloplasmin homologue implicated in intestinal iron transport is defective in the sla mouse Nat Genet 1999 21 2 195 9 106 Frazer D M Vulpe C D McKie A T Wilkins S J Trinder D Cleghorn G J and Anderson G J Cloning and gastrointestinal expression of rat hephaestin relationship to other iron transport proteins Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2001 281 4 G931 9 107 Kuo Y M Su T Chen H Attieh Z Syed B A McKie A T Anderson G J Gitschier J and Vulpe C D Mislocalisation of hephaestin a multicopper ferroxidase involved in basolateral intestinal iron transport in the sex linked anaemia mouse Gut 2004 53 2 201 6 108 Chen H Attieh Z K Su T Syed B A Gao H Alaeddine R M Fox T C Usta J Naylor C E Evans R W McKie A T Anderson G J and Vulpe C D Hephaestin is a ferroxidase that maintains partial activity in sex linked anemia mice Blood 2004 103 10 3933 9 109 Van Vlierberghe H Langlois M and Delanghe J Haptoglobin polymorphisms and iron homeostasis in health and in disease Clin Chim Acta 2004 345 1 2 35 42 110 Lim S K Kim H bin Ali A Lim Y K Wang Y Chong S M Costantini F and Baumman H Increased susceptibility in Hp knockout mice during acute hemolysis Blood 1998 92 6 1870 7
87. a qui lui conf re des propri t s anti tumorales et ce m tal est capable de se lier a la Tf qui le transporte jusqu aux cellules cibles D autres formes d acquisition du fer par les cellules ont t d crites acquisition du fer non li la Tf Non Transferrin Bound Iron NTBI 16 17 acquisition de l holoTf par une voie ind pendante de RTf1 18 acquisition de la ferritine m di e par un r cepteur 19 enfin la d couverte de la capacit de la mol cule NGAL transporter du fer pourrait galement tre une nouvelle forme d acquisition du fer essentiellement en situation d inflammation 20 1 1 3 rythropo se et synth se de l h moglobine utilisation du fer L organe consommant la plus grande quantit de fer 80 du fer transport par la Tf est la moelle osseuse o se d roule l rythropo se Elle a ainsi besoin de 20 mg de fer par jour pour pouvoir produire les 200 milliards de nouveaux globules rouges n cessaires au transport et au stockage de l oxyg ne 1 1 3 1 Erythropoi se A partir des quelques cellules souches h matopoi tiques CSH de la moelle osseuse sont form s plusieurs lignages cellulaires en fonction des signaux et facteurs de croissance re us par les CSH conduisant a la formation de lymphocytes macrophages cellules dendritiques neutrophiles polynucl aires plaquettes globules rouges On ne discutera ici que de la diff renciation rythroide l ryth
88. actor I in transcriptional activation of ceruloplasmin by iron deficiency J Biol Chem 2000 275 28 21048 54 Kuhn D E Baker B D Lafuse W P and Zwilling B S Differential iron transport into phagosomes isolated from the RAW264 7 macrophage cell lines transfected with Nramp1Gly169 or NramplAsp169 J Leukoc Biol 1999 66 1 113 9 Zwilling B S Kuhn D E Wikoff L Brown D and Lafuse W Role of iron in Nrampl mediated inhibition of mycobacterial growth Infect Immun 1999 67 3 1386 92 Donovan A Brownlie A Zhou Y Shepard J Pratt S J Moynihan J Paw B H Drejer A Barut B Zapata A Law T C Brugnara C Lux S E Pinkus G S Pinkus J L Kingsley P D Palis J Fleming M D Andrews N C and Zon L I Positional cloning of zebrafish ferroportin1 identifies a conserved vertebrate iron exporter Nature 2000 403 6771 776 81 McKie A T Marciani P Rolfs A Brennan K Wehr K Barrow D Miret S Bomford A Peters T J Farzaneh F Hediger M A Hentze M W and Simpson R J A novel duodenal iron regulated transporter IREG1 implicated in the basolateral transfer of iron to the circulation Mol Cell 2000 5 2 299 309 Abboud S and Haile D J A novel mammalian iron regulated protein involved in intracellular iron metabolism J Biol Chem 2000 275 26 19906 12 Devalia V Carter K Walker A P Perkins S J Worwood M May A and Dooley J S
89. aines f tus de 24 semaines b b de 18 semaines 3 2 50 0 i 40 A i 2 z 30 2 20 E 2 y CD 0 ay 10 pS lt 0 8 6 12 18 24 30 36 6 12 18 24 30 36 42 48 Nombre de semaines Niacin Nombre de semaines apres la conception apres la naissance 6 Foie Le Moelle osseuse Sac v foetale LIFE THE SCIENCE OF BIOLOGY Seventh Edition Figure 14 8 Differential Expression in the Globin Gene Family D 2004 Sinauver Associates inc and W H Freeman 4 C Figure 5 Synthese des cha nes de globine 25 A Les deux clusters de g nes codant pour les globines sont situ s sur les chromosomes 16 et 11 La composition des hemoglobines embryonnaires foetales et adultes est donn e dans le cadre entre les clusters B Graphique repr sentant les quantit s des diff rentes cha nes de globines au cours du d veloppement Le lieu de synth se des globines est indiqu en dessous 13 1 1 3 3 La synth se de l h me La synth se de l h me est partag e dans deux compartiments de la cellule le cytosol et la mitochondrie Figure 6 La premi re tape a lieu dans la mitochondrie partir de glycine et de succinyl CoA ALA 6 aminolevulinate synthase forme ALA Cette enzyme est pr sente sous deux formes une forme rythro de eALAS ou ALAS2 qui pr sente la particularit d tre sensible au fer via le syst me IRE IRP voir Syst me IRP IRE et une forme ubiq
90. aire 83 Tr s r cemment il a t d crit dans les cellules rythro des l existence de transcrits alternatifs de la ferroportine avec des formes ne poss dant pas d IRE Selon les auteurs la pr sence de ces formes d pourvues d IRE pourrait expliquer l absence de r gulation de la ferroportine par le fer dans ces cellules 27 Il semble admis que la ferroportine est produite en plus grande quantit dans un macrophage trait au fer via une augmentation des taux d ARNm et une augmentation de la traduction comme attendue par le syst me IRP IRE 84 85 En revanche dans le duod num la ferroportine semble r pondre essentiellement une r gulation syst mique plus qu un stimulus local 86 87 En effet dans le duod num la ferroportine est augment e et non diminu e en situation de d ficience en fer 75 Cette r gulation syst mique de la ferroportine a t lucid e r cemment par la d couverte du r le de l hepcidine l hepcidine est capable de lier la ferroportine et conduit son internalisation et sa d gradation ex vivo 88 Ces r sultats ont par la suite t reproduits par une autre quipe 89 et la diminution des taux prot iques de ferroportine par l hepcidine a t retrouv e in vitro dans les macrophages 90 91 Le traitement de macrophages au lipopolysaccharide LPS entra nant une r action inflammatoire conduit la diminution du taux d ARNm codant pour la ferroportine 8
91. ais Fiche de s curit disponible sur demande pour les professionnels L limination de tous les d chets doit tre effectu e conform ment aux dispositions l gales Pr paration des r actifs R1 Pr t l emploi 82 Pr t a l emploi Conservation et stabilit Avant ouverture des flacons entre 2 et 8 C jusqu la date de p remption indiqu e 81 84 jours apr s ouverture et r frig r s sur l analyseur 82 84 jours apr s ouverture et r frig r s sur l analyseur Pr l vement et pr paration des chantillons Pour le pr l vement et la pr paration des chantillons utiliser uniquement des tubes ou r cipients de recueil appropri s Seuls les types d chantillons suivants ont t test s et peuvent tre utilis s S rum Plasma recueilli sur h parinate de lithium de sodium et d ammonium Ne pas utiliser de plasma recueilli sur EDTA ou citrate Les diff rents types d chantillons indiqu s ci dessus ont t test s l aide d une s lection de tubes de pr l vement disponibles dans le commerce au moment du test les tubes de pr l vement des diff rents fabricants n ont pas tous t test s Les syst mes de pr l vement du sang de divers fabricants peuvent contenir diff rents mat riaux pouvant dans certains cas influencer le r sultat du test En cas d utilisation de tubes primaires syst mes de pr l vement du sang suivre les instructions donn es par le fabricant Les c
92. aladies chronique pure AMC et le sous G2 n 42 22H 20F an mie des maladies chroniques combin e une carence en fer dite an mie mixte A mixte r sultats exprim s en moyennes Les hommes sont repr sent s par la colonne gauche en bleu fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en bleu clair les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne La diff rence de concentrations du Rs Tf est tr s significative P lt 0 00 entre les deux sous groupes sujets AMC pure H 3 16 0 83 mg L F 2 38 0 58 mg L et sujets an mie mixte H 7 52 0 48 mg L F 6 85 0 78 mg L En effet on remarque que la concentration du Rs Tf dans le sous groupe 1 est comparable a celle du groupe t moin P gt 0 05 ce qui exclu le d ficit martial chez ces sujets figure 26 celle du sous groupe 2 est comparable au groupe 2 sujets a an mie ferriprive P gt 0 05 ce qui nous affirme un d ficit martial sous jacent malgr la ferritin mie lev e qui indique un faux bon tat de r serves en fer chez ce sous groupe figure 25 Donc le Rs Tf est un tr s bon marqueur biochimique dans le diagnostic diff rentiel des an mies 80 111 2 6 l apport de Pindex Rs Tf F Les valeurs de l index Rs Tf Log Ferritine dans les trois groupes 8 v E Hommes 7 Z E Femmes i F 5 Y res O 4 o Q oc 3 2 1 0 Groupe1 t moin Groupe2 AF Sous G1 AMC Sous
93. an mie h molytique auto immune et le purpura thrombocytop nique le pourcentage de r cepteurs intacts peut notablement augmenter 162 Dans le mod le d endocytose transferrin to cell cycle d crit pr c demment figure 2 une fraction mineure du complexe transferrine r cepteur participe une voie diff rente secondaire d endocytose 150 Dans cette voie la membrane de la v sicule d endocytose contenant le complexe transferrine r cepteur forme de multiples invaginations conduisant une structure nomm e endosome multiv siculaire Chaque microv sicule portant sa surface un R apoTi s appelle un exosome La prot olyse est effectu e par une s rine prot ase associ e la membrane et se produit l int rieur de l endosome multiv siculaire entre les positions 100 et 101 du r cepteur donc avant l exocytose Le Rs Tf serait ensuite rel ch par exocytose et pourrait lier la transferrine dans la circulation Les facteurs cellulaires qui d terminent quelle voie d endocytose utilise un complexe transferrine r cepteur restent tre d termin s Tout ce qu est confirm c est que cette perte du r cepteur est un ph nom ne de maturation rythro de La prot olyse du r cepteur membranaire est fortement influenc e par la pr sence d une O glycosylation en position 104 qui exerce un r le protecteur contre le clivage enzymatique 163 La taille et la charge de la cha ne glycanique conditionnent la susc
94. ance r nale d ficit en erythropoietine an mie hemolytique an mie due a une hemoglobinopathie une insuffisance m dullaire ou des l sions m dullaires d origine toxique par ex De nombreuses m thodes photom triques ont t d crites pour le dosage du fer Toutes ont en commun les tapes suivantes dissociation des ions Fe du complexe transferrine fer l aide d acides ou de detergents r duction des ions Fe en ions Fe r action des ions Fe conduisant un complexe color La m thode d crite ci apr s est une m thode de dosage sans d prot inisation qui fait appel la FerroZine Principe Test colorim trique e Le r actif R1 est ajout l chantillon Addition de R2 et d clenchement de la r action pH lt 2 0 Transferrine Fe complexe gt apotransferrine Fe ascorbate Fes Fe2 FerroZine Fe gt complexe color 2010 01 V 14 Fran ais 1 4 A un pH acide le fer est d tach de la transferrine Les chantillons lip miques sont clarifi s par un d tergent Lascorbate r duit les ions Fe en ions Fe qui forment ensuite un complexe color avec la FerroZine L intensit de la coloration d velopp e est directement proportionnelle la concentration en fer et est mesur e par photom trie R actifs composition et concentrations R1 Acide citrique 200 mmol L thiour e 115 mmol L d tergent R2 Ascorbate de sodium 150 mmol L FerroZine 6 mmol L conserv
95. ant pour la c ruloplasmine et sont ensuite traduits pour former la prot ine de 1046 acides amin s s cr t e dans le sang Les sources extrah patiques de CP sont moins abondantes 1l s agit de la rate et des poumons De plus dans le cerveau et les testicules la CP est produite sous une forme ancr e a la membrane par un groupement GPI 98 99 Cette forme de CP pourrait jouer un r le dans le transport du fer a travers les barrieres s parant le compartiment sanguin du cerveau et des cellules germinales La CP est galement d tectable dans le sac vitellin et le foie foetal Le taux s rique de CP est augment lors d une inflammation suite a l augmentation de la transcription du g ne dans les h patocytes la CP est ce titre une prot ine de la phase aigu de inflammation 100 La synth se de CP est galement augment e par les oestrog nes La pr sence d un l ment de r ponse a HIF dans le promoteur du g ne indique que la CP est induite en situation d hypoxie 71 L absence de c ruloplasmine par d l tion g n tique chez la souris entra ne l accumulation du fer dans les h patocytes et les macrophages confirmant le r le essentiel de la CP pour I export du fer de ces cellules 101 102 Dans les souris KO Cp l accumulation de fer dans le cerveau caract ristique de l ac ruloplasmin mie est pr sente 101 ou non 103 selon le fond g n tique des souris R cemment l hypoth se d un r le de
96. antitative in vitro de la CRP dans le s rum et le plasma humains sur les analyseurs de chimie clinique de Roche Caract ristiques 2 3 4 5 6 7 8 La prot ine C r active CRP est la prot ine classique de la phase aigu d une inflammation Elle est synth tis e dans le foie et est constitu e de cinq cha nes polypeptidiques identiques formant un anneau de cing l ments son poids mol culaire est de 105000 Da La CRP est la prot ine la plus sensible de la phase aigu de l inflammation sa concentration augmente tr s rapidement dans les processus inflammatoires La CRP complex e active la voie classique du compl ment La r ponse de la CRP pr c de g n ralement les sympt mes cliniques y compris la fi vre Chez les sujets sains la concentration de CRP est inf rieure 5 mg L Apr s amorce d une r action de phase aigu de l inflammation les concentrations s riques de CRP augmentent rapidement et de fa on importante L augmentation peut tre d tect e dans les 6 12 heures et le pic est atteint dans les 24 48 heures Les taux sup rieurs 100 mg L sont associ s des stimuli graves tels qu un traumatisme majeur ou une infection grave sepsis La r ponse de la CRP est diminu e chez les patients pr sentant une affection h patique Le dosage de la CRP sert d tecter les processus inflammatoires syst miques valuer l efficacit du traitement d infections bact riennes par des antibiotiques d tec
97. apporede r mde xe 1 1 E io iii 81 IV La position du Rs Tf dans la Hi rarchie de prescription des examens 83 V Les marqueurs biologiques tenir en compte et leurs apportes informatifs au diagnostic JUNE EMATODOIES OCCO TET erica speed in Tunes 86 Valed Lemo lOD DEMI C ereraa tena SE ie NN tr 86 V2 VOIE CIOU MOV NE ESO ED ASSES AREAS SSE 86 NIT LE Le oe et en eee ee ee rors 86 Na MANS LC EUS SESERRA SSCA ESE Medal ea outre 86 V 5 Le coefficient de saturation de la transferrine CST 87 Or ELUNE DD de ad wean aes 87 V 7 Le r cepteur soluble de la transferrine Rs Tf 87 ROTA 1 Hic O sep a a tn as se ee 89 PROSDECUV ES Sears tnt da an ten too to SDS 90 BDO STAD 1 OSCE SSE EEE ESS di don ee ci 91 MMI ORS Se AC A A ne D NA nee 104 Introduction Actuellement l approche diagnostique des an mies par d ficit rythropoi tique en fer passe par la mesure de la concentration s rique en fer de la transferrine son coefficient de saturation ou sa capacit totale de fixation TIBC et de la ferritin mie Si la carence persiste les effets de l hyposid r mie apparaissent sur les globules rouges circulants augmentation de la protoporphyrine rythrocytaire la diminution de la quantit d h moglo
98. artial et la CRP chez le groupe t moin et les deux groupes de sujets an miques les r sultats sont exprim s s par ment entre les deux sexes Groupe 1 t moin n 60 Groupe 2 AF n 50 Groupe 3 AMC n 82 Hommes n 32 Femmes n 28 Hommes n 27 Femmes n 23 Hommes n 44 Femmes n 38 Age ans 44 78 15 08 46 50 7 42 92 11 48 48 43 12 05 51 36 12 12 51 68 10 31 H moglobine g l 145 05 5 91 135 13 06 100 05 6 24 90 04 6 82 99 46 5 38 90 78 5 71 H matocrite 45 21 2 25 41 21 2 49 31 10 2 34 27 1122 3 31 08 2 19 27 48 2 25 VGM fl 92 25 5 86 38 3 15 76 05 4 29 70 33 3 45 75 98 4 01 70 65 2 82 Fer s rique umol l 20 46 4 64 17 02 5 67 7 34 58 4 52 3 65 7 05 4 35 4 71 3 32 Ferritine ug l 208 16 46 40 78 06 17 39 28 04 6 40 21 87 5 34 369 25 71 33 294 21 57 96 Transferrine mg l 2 75 0 44 2 76 0 51 3 76 0 46 3 78 0 55 3 79 0 42 3 70 0 47 CST 31 42 12 78 26 90 12 98 8 54 6 48 5 41 4 69 8 05 5 83 5 59 4 28 CTF umol Fe I 68 81 11 19 69 13 12 71 94 18 11 59 94 57 13 76 94 85 10 60 92 58 11 86 Rs Tf mg l 3 52 0 87 2 86 0 83 8 53 0 92 7 87 0 89 5 34 2 30 4 73 2 36 Rs Tf Log Ferritine 1 54 0 43 1 55 0 54 6 00 1 02 6 05 1 27 2 10 0 93 1 95 1 02 CRP mg l lt 10 lt 10 lt 10 lt 10 gt gt 10 gt gt 10 Les r sultats sont exprim s en moyenne SD La CRP C R active protein est compar e la valeur seuil qu
99. asculaire par les macrophages tissulaires Les 10 a 20 restant subissent une h molyse intravasculaire qui entraine la lib ration d h moglobine dans le sang Cette h moglobine se lie a l haptoglobine circulante Le complexe haptoglobine h moglobine est ensuite capt par les macrophages qui possedent un r cepteur sp cifique de l haptoglobine le CD163 Figure 7 et par les h patocytes par un m canisme encore inconnu 35 Ainsi tr s peu d h moglobine libre est retrouv e dans le sang Il peut arriver n anmoins que dans des situations de forte h molyse par exemple dans les thalass mies4 l h moglobine ne puisse tre enti rement titr e par l haptoglobine L gt h moglobine se dissocie alors dans le sang et peut tre filtr e par le glom rule via le r cepteur m galine cubiline ou d grad e apr s liaison avec des proteines de transport de l h me par le foie voir ci dessous 17 1 1 5 Stockage du fer Le site majeur de stockage du fer est le foie 1 g Le foie est un organe qui assure de multiples fonctions vitales synth se et s cr tion de la bile m tabolisme des sucres des lipides et des prot ines de d toxification stockage de la vitamine B12 Le foie re oit deux syst mes vasculaires aff rents le sang arrive au foie par la veine porte h patique qui contient les l ments dig r s au niveau du duod num et par l art re h patique riche en oxyg ne O2 Le foie est capable d acc
100. asse et le fer s rique bas qui indiquent une d ficience en fer Par contre le taux de la ferritine indique un tr s bon tat de r serve en fer r serves pleines Ce qu on peut expliquer par l influence du processus inflammatoire sur la ferritine qui est une prot ine de la 69 phase aigu de l inflammation ce qui n exclut pas que l an mie soit d origine carentielle concomitante la maladie chronique donc la ferritine dans ces cas est inutile Elle ne refl te pas l tat r el des r serves en fer au contraire elle peut nous induire en erreur Jusqu ici le diagnostic dans le troisi me groupe est tres difficile et incomplet il ne permet pas de distinguer entre les causes possibles de cette an mie le seul examen qui peut trancher dans cette situation est l exploration des r serves m dullaires par le Perls m dullaire un examen rarement praticable vu son caract re invasif et co teux 70 111 2 5 Papport du Rs Tf s rique Les taux du Rs Tf dans les trois groupes 10 E Hommes Femmes Rs Tf mg L O Groupe 1 t moin Groupe 2 AF Groupe 3 AMC Figure 20 Les concentrations du r cepteur soluble de la transferrine Rs Tf en mg L dans le groupel t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an miques Groupe 2 an mie ferriprive AF n 50 27H 23F Groupe 3 an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F Les hommes sont repr sent s par la colonne gauche
101. ateur Pr cautions d emploi et mises en garde Pour diagnostic in vitro Observer les pr cautions habituelles de manipulation en laboratoire Fiche de s curit disponible sur demande pour les professionnels L limination de tous les d chets doit tre effectu e conform ment aux dispositions l gales Pour les USA Mise en garde ce r actif contient de la thiour e substance connue des autorit s californiennes comme pouvant provoquer le cancer ou des l sions affectant la reproduction Elle peut aussi provoquer une irritation de la peau En cas de contact rincer abondamment avec de l eau En cas de contact avec les yeux ou d ingestion consulter imm diatement un m decin Pr paration des r actifs R1 Pr t l emploi 82 Pr t l emploi Conservation et stabilit Avant ouverture des flacons entre 2 et 8 C jusqu la date de p remption indiqu e R1 28 jours apres ouverture et r frig r sur l analyseur 82 28 jours apres ouverture et r frig r sur l analyseur Prot ger de la lumi re Pr l vement et pr paration des chantillons Pour le pr l vement et la pr paration des chantillons utiliser uniquement des tubes ou r cipients de recueil appropri s Seuls les types d chantillons suivants ont t test s et peuvent tre utilis s S rum Plasma recueilli sur h parinate de lithium de sodium ou d ammonium Le plasma recueilli sur oxalate ou EDTA conduit des taux
102. ations R1 Tampon TES HCI 20 mmol L pH 7 7 NaCl 500 mmol L conservateur R2 Particules de latex charg es d anticorps monoclonaux de souris anti Rs TF humain tampon TRISP HCI 20 mmol L pH 8 0 conservateur a TES acide tris hydroxym thyl m thyl amino 2 thanesulfonique b TRIS tris hydroxym thyl aminom thane Pr cautions d emploi et mises en garde Pour diagnostic in vitro Observer les pr cautions habituelles de manipulation en laboratoire Fiche de s curit disponible sur demande pour les professionnels L limination de tous les d chets doit tre effectu e conform ment aux dispositions l gales Pr paration des r actifs R1 Pr t l emploi 82 Pr t a l emploi Conservation et stabilit Avant ouverture des flacons entre 2 et 8 C jusqu la date de p remption indiqu e R1 90 jours apr s ouverture et r frig r s sur l analyseur R2 90 jours apres ouverture et r frig r s sur l analyseur Pr l vement et pr paration des chantillons Seuls les types d chantillons suivants ont t test s et peuvent tre utilis s S rum Plasma recueilli sur h parinate de lithium de sodium et d ammonium Les diff rents types d chantillons indiqu s ci dessus ont t test s l aide d une s lection de tubes de pr l vement disponibles dans le commerce au moment du test les tubes de pr l vement des diff rents fabricants n ont pas tous t test s Les
103. atocytes Blood 2004 103 4 1509 14 131 Hashimoto K Hirai M and Kurosawa Y Identification of a mouse homolog for the human hereditary haemochromatosis candidate gene Biochem Biophys Res Commun 1997 230 1 35 9 132 Waheed A Parkkila S Saarnio J Fleming R E Zhou X Y Tomatsu S Britton R S Bacon B R and Sly W S Association of HFE protein with transferrin receptor in crypt enterocytes of human duodenum Proc Natl Acad Sci U S A 1999 96 4 1579 84 133 Griffiths W J Kelly A L Smith S J and Cox T M Localization of iron transport and regulatory proteins in human cells Qjm 2000 93 9 575 87 134 Parkkila S Waheed A Britton R S Feder J N Tsuchihashi Z Schatzman R C Bacon B R and Sly W S Immunohistochemistry of HLA H the protein defective in patients with hereditary hemochromatosis reveals unique pattern of expression in gastrointestinal tract Proc Natl Acad Sci U S A 1997 94 6 2534 9 135 Parkkila S Waheed A Britton R S Bacon B R Zhou X Y Tomatsu S Fleming R E and Sly W S Association of the transferrin receptor in human placenta with HFE the protein defective in hereditary hemochromatosis Proc Natl Acad Sci U S A 1997 94 24 13198 202 136 Riedel H D Muckenthaler M U Gehrke S G Mohr I Brennan K Herrmann T Fitscher B A Hentze M W and Stremmel W HFE downregulates iron uptake from transferrin and induc
104. ax 4 4 Log 150 2 02 2 chez la femme O Rs Tf max Set Rs Tf max 4 4 repr sente la limite sup rieure de l intervalle des valeurs normales du Rs Tf Ferritine max 400 et Ferritine max 150 repr sente la limite sup rieure de l intervalle des valeurs normales de la ferritine 61 1 2 2 5 Dosage de la prot ine C r active La CRP a t valu e par immunoturbidim trie La valeur normale qui a permis d exclure un processus inflammatoire chronique est de CRP gt 10 mg l chez l homme et la femme Roche Diagnostic Systems voir annexe 6 e Une prise d essai de 3 ul de l chantillon plasma frais recueilli sur h parinate de lithium est ajout e a 250 ul de r actif R1 Tampon TRIS 50 mmol pH 7 4 conservateur stabilisateur dans la cuvette r actionnelle le m lange est incub pendant 5 min a 37 C voir l exemple de la ferritine figure 15 e Puis l addition de 120 ul du r actif R2 Particules de latex charg es d anticorps monoclonaux de type IgG de souris anti CRP humain 0 1 Tampon glycine 50 mmol L pH 8 0 conservateur stabilisateur et l incubation du m lange pendant 5 min a 37 C conduit au d clenchement de la r action Les anticorps anti CRP fix s sur les microparticules de latex r agissent avec la CRP de l chantillon avec formation de complexes antigenes anticorps L absorbance de l agglutination qui en r sulte est mesur e par turbidim tr
105. bilan martial avec le Rs Tf dans les deux sous groupes composants du groupe 3 de sujets Aa CHL EEA IE Mts ee cena hee Aen cach cen S Mec cod Kee E Aa ay eae A Antec 75 Tableau 7 Marqueurs h matologiques et ferriques selon les situations cliniques an mie ferriprive AF an mie des maladies chroniques AMC ou an mie mixte AF AMC 88 Sommaire rodic UE aba eas estoy eta ea ean he ooo aan 01 Revue bibliographique sur le m tabolisme du fer 03 TIT TA OHS HG CMTC a ne td en ion na load los 04 I 1 Le Cycle du fer absorption transport utilisation recyclage et stockage 04 Ll BSO DUO ANTES Uae US LCE esasen den nn Win dees a dah bers ee ine tease 04 1 2 Transport sanguin et captation du fer par la cellule 06 1 2 1 Captation du fer par le r cepteur de la transferrine 07 1 1 3 Erythropoi se et synth se de l h moglobine utilisation du fer 08 L131 Erythiopo i E exe 08 L15 2 SyntheSE de 1 A RE RES A ES N 12 LEY TE SVN SE de SR AEA RA a 14 1 4 R utilisation du fer des GR recyclage rythrophagocytose 16 LESSIOC RASE CU Te 2 nantes nier on ire ten 18 IT Mol cules impliqu es dans le m tabolisme du fer
106. bine hypochromie et microcytose Deux grandes cat gories de maladies s accompagnent d un d ficit rythropo tique en fer les an mies par carence martiale dite ferriprive AF et les an mies des maladies chroniques AMC Depuis quelques derni res ann es un nouveau marqueur biologique d une grande importance dans le bilan d une an mie a t mis en jeux Il vient compl ter significativement les informations apport es par les param tres classiques du bilan martial C est le r cepteur soluble de la transferrine Rs Tf une forme circulante produite par un clivage prot olytique de r cepteur de la transferrine membranaire R Tf la prot ine cl pour l acquisition cellulaire du fer transport par la transferrine et qui est pr sent la surface de toutes les cellules de l organisme Le nombre de Rs Tf s rique est directement proportionnel aux r cepteurs exprim s par une cellule et a ses besoins en fer Ce nombre diminue au fur et mesure de la maturation cellulaire l exception de deux tissus qui ont d importants besoins en fer en permanence la moelle rythropoi tique et le placenta En dehors de la grossesse la concentration de Rs Tf circulant est principalement d termin e par celle des pr curseurs rythroides dans la moelle osseuse puisque ces cellules contiennent 70 a 80 des R Tf de l organisme La carence martiale est la premi re cause d anemie chez l adulte L an mie est d finie par
107. bine soit anormalement distribu e dans les tissus 112 IL 6 2 H mopexine L h mopexine comme l haptoglobine est une prot ine inflammatoire de phase aigu C est une glycoprot ine prot ine plasmatique de 60kDa synth tis e par le foie compos e d une seule cha ne polypeptidique de 439 acides amin s Son affinit pour l h me est tr s forte la plus forte des prot ines plasmatiques Le complexe h mopexine h me est reconnu par un r cepteur sp cifique produit principalement par les h patocytes Apr s endocytose et catabolisme de l h me l h mopexine et son r cepteur sont recycl s 113 11 6 3 HCP1 HCPI Heme Carrier Protein 1 a t identifi tr s r cemment l quipe d A McKie par hybridation soustractive faite partir d ARN de duod num et d il on de souris hpx voir paragraphe sur la Tf comme un r cepteur de l h me sp cifique situ la membrane apicale de l ent rocyte 3 En effet le g ne Hcp est exprim dans les ent rocytes de l intestin gr le mais il n est pas exprim dans l il on ce qui a permis son identification HCPI qui est d tect e la membrane apicale des ent rocytes aurait 9 domaines transmembranaires La prot ine HCPI est homologue aux transporteurs bact riens des t tracyclines m talliques a 12 domaines 30 transmembranaires Cette homologie est probablement li e la similarit de structure entre l h me et la t tracycline La surexp
108. brane par le transporteur DMT1 37 38 Le fer li la Tf serait capt lui par le r cepteur transferrine 2 RTf2 Ce dernier a une affinit beaucoup moins forte pour l holoTf que son homologue RTfI mais il est pr sent en grande quantit dans les h patocytes Il a galement t montr que bien que l ARNm RTf2 soit insensible au fer les taux de prot ine RTf2 sont augment s par le fer 39 40 41 contrairement RTf1 r gul lui n gativement par le fer via le syst me IRE IRP voir Systeme IRP IRE Une autre diff rence est que RTf2 contrairement RTf1 ne semble pas interagir avec HFE 42 18 A NTBI 2 rra H Erres canalicule biliai 7 sicule bilia e Caral biliare commun Teme pore Recepteur n mopexine h patocyte 5 2 hemoglobine h mopexine Hp Figure 8 Entr e et sortie du fer de l h patocyte 5 Le fer non h minique li la transferrine Tf est capt par RTf1 qui interagit avec HFE ou RTf2 puis lib r apr s endocytose Le fer non li la transferrine NTBI pourrait tre pris en charge directement par DMT1 via un m canisme inconnu Le fer h minique est transport soit par l haptoglobine soit par l h mopexine jusqu l h patocyte L hemopexine est reconnue par son r cepteur Dans l h patocyte le fer h minique est lib r apr s d gradation de l h me par l h meoxyg nase HO Le fer est stock sous forme de ferritine La sort
109. brateur C f a s Calibrator for automated systems Roche Hitachi certaines combinaisons de tests exigent la programmation R f 10759350 190 10759350 360 pour les USA d tapes de lavage sp ciales Pour de plus amples informations se r f rer a Contr les Precinorm U par ex R f 10171743 122 ou la derni re version des listes de pr vention des contaminations Carry over Precinorm U plus R f 12149435 122 12149435 160 pour les USA evasion list ainsi qu au manuel de l utilisateur Pour les USA pour les tapes Precipath U par ex R f 10171778 122 ou de lavage particuli res se r f rer a la fiche de programmation Special Wash Precipath U plus R f 12149443 122 12149443 160 pour les USA site web MyLabOnline et au manuel de l utilisateur Le cas ch ant la Solution de NaCl 0 9 programmation des lavages sp ciaux de prevention des contaminations SMS Acid Wash ou 0 2 N HCI pour analyseurs Roche Hitachi doit tre impl ment e avant d effectuer le rapport de ce test except MODULAR D Limites et intervalles e _ Equipement habituel de laboratoire Domaine de mesure 0 90 179 mol L 5 1000 g dL Les chantillons dont les concentrations sont sup rieures a 1000 ug dL sont r analys s par l analyseur via la fonction R analyse Si l analyseur ne permet pas de faire des r analyses diluer manuellement ces chantillons l aide d une solution de NaCl 0 9 d eau distill e ou d sionis e par ex
110. cience en fer 184 La sensibilit et la sp cificit de la ferritine 30 ug L etait de 92 et 98 respectivement comparativement 92 et 84 pour une augmentation du Rs Tf De plus la ferritine est le premier param tre diminuer lors d une carence en fer N anmoins le Rs Tf peut tre utile comme nous l avons mentionn pr c demment en combinaison avec les autres tests de laboratoire pour l valuation des carences fonctionnelles en fer et pour le diagnostic de la d ficience en fer associ e aux an mies des maladies chroniques Le Rs Tf ne remplace pas les param tres habituels pour valuer la d ficience en fer mais ajoute une information suppl mentaire permettant de mesurer la carence fonctionnelle en fer avant la diminution significative de l h moglobine IV R gulation du m tabolisme du fer Deux syst mes de r gulation du fer coexistent dans l organisme Un syst me qui permet l int rieur m me d une cellule d adapter l entr e le stockage et la sortie du fer selon les quantit s pr sentes dans la cellule le syst me IRP IRE Un syst me de r gulation syst mique qui permet aux diff rents organes consommateurs et ou de stockage du fer de dialoguer pour maintenir l hom ostasie La nature de ce syst me de r gulation a t r valu e de nombreuses fois en fonction des nouvelles d couvertes de l identification des genes du m tabolisme du fer et de leurs propri t s IV 1 Syst m
111. crit re d inclusion qui tait la m nopause plus que 75 des femmes sont en activit g nitale pour donner une cr dibilit a notre tude 54 1 1 2 Pr l vement et pr paration des chantillons Les trois groupes ont t pr lev s jeun entre 8h et 10h du matin le sang veineux est r cup r sur deux types d anticoagulants selon les exigences des fiches techniques des examens biochimiques et h matologiques r aliser voir annexel Un tube EDTA comme anticoagulant contient en moyenne 4ml du sang total pour l h mogramme FNS complete et un tube H parinate de lithium contient en moyenne 3 8 ml du sang total pour le dosage des autres param tres bilan martial CRP et le Rs Tf Les plasmas h parin s ont t s par s imm diatement du culot cellulaire par centrifugation 3000 t min pendant 5 minutes et recueillis soigneusement dans des aliquotes Les s rums h molys s ont t exclus du dosage et les patients ont t pr lev s un autre jour Chaque individu a b n fici d un h mogramme Formule Num ration Sanguine compl te d un bilan martial complet plus le Rs Tf et d un bilan inflammatoire CRP Tous ces examens ont t effectu s imm diatement sur des plasmas et s rums frais Une heure au maximum apr s le pr l vement les dosages ont t r alis s au niveau du laboratoire polyvalent Mere et Enfant CHU de s tif Pour augmenter les performances de notre tude
112. ction en cas de r analyse 3 ng mL 6 7 pmol L Lanalyseur calcule automatiquement la concentration en La limite inf rieure de d tection correspond au plus faible taux d analyte analyte de chaque chantillon mesurable pouvant tre distingu de z ro Elle est obtenue par le calcul et Facteurs de conversion 1 ng mL ug L correspond au plus faible taux de la gamme de standards 3 carts type ng mL x 2 247 pmol L standard 1 3SD r p tabilit n 21 mmol L x 445000 ng mL Valeurs de r f rence Limites d utilisation interf rences Crit re d acceptabilit recouvrement 10 par rapport la valeur initiale Adultes les valeurs normales pour les concentrations de ferritine de sujets cliniquement sains d pendent fortement de l ge et du sexe 101616 pas d interf rence significative jusqu un indice de 60 Hommes 30 400 ng mL 67 899 pmol L concentrations approximatives de bilirubine conjugu e et non Femmes en dessous de 50 ans 15 150 ng mL 34 337 pmol L connues 20 MOCE OU Ue NOU Femmes au dessus de 50 ans Proches des valeurs de r f rence pour les H molyse pas d interference significative jusqu un indice H de 500 hommes concentration approximative d h moglobine 500 mg dL ou 310 pmol L Enfants Lip mie Intralipid pas d interf rence significative jusqu un 3 mois 16 ans 20 200 ng mL 45 449 pmol L indice L de 750 Il n y a pas de concordance satisfaisante entre
113. cytose 29 Outre sa fonction de liaison l h moglobine l haptoglobine est galement capable d agir en tant qu agent bact riostatique d inhiber la synth se de prostaglandines et l angiog n se 109 Les souris d ficientes en haptoglobine 110 pr sentent une accumulation de fer dans le rein probablement li e au captage de l h moglobine libre par le r cepteur m galine cubiline avec l ge Lorsque les souris KO haptoglobine sont trait es par un agent h molytique la survie des souris est diminu e et le stress oxydant augment par l absence d haptoglobine Ainsi ces exp riences montrent le r le essentiel de l haptoglobine pour complexer l h moglobine et viter les dommages li s cette h moglobine libre Le r cepteur de l haptoglobine a r cemment t clon 111 il s agit d un r cepteur de la famille SRCR Scavengor Receptor Cystein Rich appel CD163 Le g ne codant pour le r cepteur de l haptoglobine est exprim uniquement par les monocytes et les macrophages tissulaires Il ne semble pas tre exprim par les h patocytes posant la question du mode d acquisition du complexe haptoglobine h moglobine par ces cellules Le CD163 est induit comme l haptoglobine par l IL 6 mais galement par l IL 10 et les glucocortico des Ce r cepteur n est pas capable de lier l haptoglobine ou l h moglobine libre ce qui explique qu en absence d haptoglobine l h moglo
114. dans le cas o le bilan est ininterpr table on fait appel des marqueurs biologiques plus sp cifiques comme les an mies associ es aux maladies inflammatoires chroniques les cas les plus fr quents o la diff renciation entre les causes possibles de l an mie est tr s difficile An mie H moglobine g l H lt 13 F lt 12 VGM fl lt 80 Ferritine ug l H 30 244 F 30 105 Ferritine ug l lt 30 CRP mg l gt 10 CRP mg l lt 10 D ficit en fer Rs Tf mg l Rs Tf mg l H lt 4 39 Rs Tf mg l H gt 4 39 F lt 3 69 lt 09 Rs Tf Log ferritine lt 1 Rs Tf Log ferritine gt 2 Perturbation de la distribution Utilisation du fer perturbation de l rythropo se D ficit en fer Figure 28 Algorithme pour le diagnostic diff rentiel entre an mie ferriprive an mie de maladie chronique et an mie de maladie chronique associ e une carence en fer 83 Les marqueurs h matologiques taux d h moglobine le volume globulaire moyen et la teneur corpusculaire moyenne en h moglobine donnent juste une appr ciation sur le degr de s v rit de l an mie Dans les cas des an mies ferriprives pures le diagnostic biologique ne va pas plus loin que la f rritin mie il suffit dQ explorer l tat des r serves en fer Une ferrit
115. dant pour les cha nes de globines sont organis s chez l homme en deux clusters le locus a qui contient le g ne embryonnaire et les deux g nes adultes a et le locus B qui contient les g nes Gy Ay 6 et B Figure 5A L h moglobine change en effet de composition au cours du d veloppement la suite des changements d expression switch des g nes codant pour les cha nes de globines pendant les trois stades d rythropo se Figure 5B Un premier switch a lieu lors de la transition de l rythropo se embryonnaire sacvitellin a l rythropoi se d finitive foie foetal le g ne de l h moglobine f tale est exprim au d triment de celui de l h moglobine embryonnaire Le deuxi me switch entre l h moglobine f tale et adulte a lieu pendant la p riode p rinatale Ces r gulations d expression de g nes sont d pendantes du LCR Locus Control Region pr sent en amont du cluster B globine et d HS40 zone d hypersensibilit la DNAse I en amont du cluster aglobine Figure 5A Au cours du d veloppement et de la diff renciation 12 rythropo tique les g nes sont exprim s s quentiellement les g nes exprim s pr cocement sont ceux situ s pr s du LCR et les g nes adultes se trouvent en 3 25 A f d 5 Chromosome 16 HS 40 S OZ cl Iclomere Adulte 0202 0252 A we J Gy Ay B Chromosome 11 On of s f tus de 6 sem
116. de la mol cule il contient 61 acides amin s La s rine en position 24 est un site de phosphorylation par la prot ine kinase C Une s quence peptidique particuli re tyrosine thr onine arginine ph nylalanine dans cette r gion est consid r e comme signal indispensable l endocytose 144 L acylation par l acide palmitique en position 52 r sulte d une modification post traductionnelle qui favorise l endocytose 145 les r cepteurs non acyl s subissent une endocytose plus rapide Le domaine transmembranaire contient 28 acides amin s pr dominance hydrophobique Il fonctionne durant la phase de synth se comme signal de translocation travers le r ticulum endoplasmique Le domaine C terminale extracellulaire contient 671 acides amin s Les deux monom res sont unis par deux ponts disulfures en position 89 et 98 Il existe trois sites de N glycosylation en position 251 317 et 727 et un seul site de O glycosylation sur un r sidu thr onine en position 104 Chaque mol cule de r cepteur peut fixer deux mol cules de transferrine mais le site de liaison est actuellement inconnu Plusieurs sites de glycosylation sont pr sents sur cette prot ine et semblent jouer un r le dans la liaison a la transferrine dans la localisation cellulaire et dans la protection contre le clivage Chaque monomere de R Tf peut se lier une mol cule de transferrine mais les acides amin s impliqu s dans cette liaison n ont pas encore t
117. de magister Je remercie galement Mme Hassaine F la cheffe de service du laboratoire m re et enfant du CHU de S tif par sa prise en charge au laboratoire au cours de notre cycle d tude Je remercie tous mes enseignants et les membres du comit p dagogique du magist r Pr Benboubatra M Dr Belaatar N Dr Bouzidi A Dr Belhattab R Dr Agoun Dj Dr Adjiri A Ainsi que Dr Benabid M et Dr Guessoum du CHU de S tif qui ont t toujours notre disposition Sans oublier tout le personnel du laboratoire de biochimie mere et enfant du CHU de S tif sans exception D dicace Je d die ce m moire mes tr s chers parents Ainsi qu tous mes amis tous les scientifiques du monde entier R sum Par sa localisation privil gi e sur les cellules immatures rythroides de la moelle osseuse le r cepteur de la transferrine R TF joue un r le vital dans leur acquisition du fer qui sert la synth se de l h moglobine La concentration intracellulaire en fer r gule de mani re inverse la synth se du R TF Le r cepteur soluble Rs TF est une forme tronqu e monom rique du r cepteur membranaire provenant majoritairement des cellules rouges immatures rythroblastes Sa concentration est le reflet direct du statut martial et de l rythropo se Une an mie par d ficit martial concomitante un syndrome inflammatoire est un cas fr quent chez les malades souffrants des maladies chroniques Dans ce genre d an mie
118. de souris Hfe ne pr sentaient pas les caract ristiques de cellules carenc es en fer 192 Enfin notons que le mod le de la crypte n envisage qu une r gulation a long terme de l absorption intestinale de fer compte tenu qu il faut plusieurs jours un enterocyte de la crypte pour devenir mature et que dans certaines situations physiopathologiques la r gulation de l absorption se met en place tr s rapidement 193 Les macrophages rate moelle foie jouent galement un r le important dans la r gulation de l hom ostasie du fer par leur fonction de relargage du fer li l h me Suite observation de la pr sence de macrophages d ficients en fer chez les patients h mochromatosiques et compte tenu de la pr sence de la prot ine HFE dans ces cellules 133 130 certains auteurs ont mis l hypoth se que l absence de HFE la membrane de ces cellules perturberait la captation de fer RTTI d pendante provoquant le d ficit en fer de ces cellules La encore une autre hypoth se peut tre avanc e faisant intervenir comme nous le verrons l hepcidine 51 Patients et M thodes I Patients et m thodes I 1 Patients 1 1 1 Effectifs et crit res de s lection Un effectif de 60 de sujets sains adultes 32 hommes ge moyen 44 78 15 08 ans 28 femmes ge moyen 46 50 12 67 ans a constitu le groupe t moin Groupe 1 s lectionn en fonction de plusieurs crit res un bon tat de sant
119. des cytokines de l inflammation contrairement la variation du Rs Tf qui est ind pendante de tout tat inflammatoire La prise en compte des deux variables essentielles influenc es par les stocks de fer dans l index Rs Tf Log ferritine optimise la valeur du test Cet index aussi permet d orienter le diagnostic pour distinguer entre ces deux types d an mie Cette tude nous a permis de proposer le dosage des r cepteurs de transferrine s rique comme un examen prometteur pour l exploration de l intensit de l rythropo se et le diagnostic diff rentiel des an mies avec un intervalle de r f rence de 2 65 4 39 mg L chez les hommes et les femmes m nopaus es et de 2 03 3 69 mg L chez les femmes en activit g nitale Toutefois le d veloppement d un standard international pour le dosage du Rs Tf accompagn de normes pour les valeurs de r f rence et les seuils pathologiques aiderait l introduction du Rs Tf comme nouveau param tre dans l valuation du m tabolisme du fer et de l rythropo se 89 Perspectives Dans le but de la continuit de ce travail le spectre de prescription de ce marqueur peut tre largi d autres int r ts qui sont le diagnostic d une carence fonctionnelle en fer chez les enfants les adolescents les athl tes r serves en fer faibles donc ferritine peu informative le diagnostic pr coce d une rythropo se d ficiente en fer chez les fem
120. dessous sont repr sentatives Les r sultats obtenus au laboratoire peuvent diff rer de ceux ci Pr cision La reproductibilit a t d termin e l aide d chantillons humains et de contr les selon un protocole interne pr cision intra s rie n 21 inter s rie n 30 Les r sultats suivants ont t obtenus Pr cision intra s rie Pr cision inter s rie Echantillon Moyenne CV Moyenne CV g L umol L g L umol L Pool de s rum humain 1 _1 36 171 1 0 160 202 00 Contr le taux 1 Sensibilit analytique limite inf rieure de d tection gt 0 1 g L 10 mg dL ou 1 26 pmol L La limite de d tection correspond au plus faible taux d analyte mesurable pouvant tre distingu de z ro Elle est obtenue par le calcul et correspond au plus faible taux de la gamme de standards 3 carts type standard 1 3DS pr cision intra s rie n 21 Comparaison de m thodes Les taux de transferrine d termin s sur du s rum humain avec le test Roche Tina quant Transferrine version 2 sur un analyseur Roche Hitachi 917 y ont t compar s a avec les taux obtenus x avec le test Tina quant 1 version sur le m me analyseur b avec les taux obtenus x avec le test Tina quant Transferrine version 2 sur l analyseur Roche Hitachi 911 c avec les taux obtenus x avec les r actifs d un autre fabricant d termination n ph lom trique Les corr lations suivantes ont t
121. duction in ACD patient 132 patients hospitalized at the CHU Setif were enrolled in this study 50 were affected with IDA and 82 were affected with ACD The control group included 60 healthy adults Iron status was evaluated in these patients including serum transferrin receptor Results showed that values of iron MCV and hemoglobin in IDA ACD and COMBI groups were not significantly different Serum ferritin values distinguished IDA from ACD reliably but the diagnostic usefulness of ferritin measurements in ACD and COMBI patients 15 limited for their wide range of variation Serum TfR levels were gt 4 39 mg L in men and gt 3 69 mg L in women in all IDA patient tested This helped us to select 51 patients with COMBI anemia among the 82 patients with ACD Serum TfR was the best test to differentiate IDA and COMBI anemia from ACD patients Calculation of the ratio sTfR log ferritin sTfR F Index is a way of combining sTfR and ferritin results This ratio provided an important parameter for the identification of patients with depleted iron pools We conclude that sTfR measurement is a sensitive and a valuable noninvasive tool for the diagnosis of iron depletion It proves an attractive additional method to the conventional laboratory tests in the prediction of depleted iron pools in anemic adult population Key words serum iron transferrin serum transferrin receptor ferritin iron deficiency anemia anemia of chronic disease serum iron level
122. e 138 139 la surexpression de HFE augmente le pool intracellulaire de fer en inhibant l export du fer Ce r le de HFE serait ind pendant de sa liaison avec RTf1 Des mutations de ce g ne emp chant la liaison de HFE avec la B2 microglobuline et la pr sence de HFE la surface cellulaire sont l origine de l h mochromatose h r ditaire maladie de surcharge martiale multivisc rale Ce r le dans l h mochromatose h r ditaire a t confirm par la g n ration de souris KO Hfe et de souris KI knock in portant la mutation C282Y impliqu e dans 80 des cas d h mochromatose h r ditaire Ces souris reproduisent en effet toutes les caract ristiques de la maladie humaine except es les complications h patiques fibrose cirrhose h patocarcinome 140 Il est en effet connu que la souris est une esp ce r sistante la carcinogen se du foie 141 34 III Le r cepteur de la transferrine et sa forme soluble 111 1 Les r cepteurs de la transferrine R Tf1 et R Tf2 II 1 1 Structure du R Tf1 Comme pour la transferrine le g ne TfR humain est situ sur le chromosome 3 3q26 il s tend sur plus de 31 Kb et est constitu de 19 exons 142 Le RTT est une glycoprot ine transmembranaire de structure homodim rique de masse mol culaire gale a 190 kDa 143 Chaque monomere contient 760 acides amin s r partis en trois domaines Figure 11 Le domaine cytoplasmique comporte l extr mit N terminale
123. e l effet de certaines cytokines sur l rythropo se dans ces pathologies en absence d une carence martiale associ e Dans une tude r cente 182 r alis e sur 129 patients an miques dont le statut martial a t appr ci par le Perls m dullaire 64 pr sentaient une AMC 48 d une AF et 17 d une AMC accompagn e d une d ficience en fer Les r sultats de la ferritine et du Rs Tf ont t confront s dans les trois groupes Le Rs Tf tait normale et la ferritine lev e chez les patients avec une AMC pure 1 8 mg L mais significativement lev e chez les patients ayant une AF 6 2 mg L et chez les patients ayant une an mie mixte 5 1 mg L 176 Toutefois l augmentation du Rs Tf tait significative chez seulement 13 17 patients ayant une an mie mixte La performance diagnostique du test tait am lior e par le calcul du rapport Rs Tf Log ferritine puisque la ferritine normale ou l g rement lev e avec un Rs Tf augment m me l g rement dans les an mies des maladies chroniques indique probablement une d ficience en fer associ e L int r t de ce rapport a t galement rapport pour le diagnostic d un tat carentiel au cours des maladies rhumatismales 183 46 Une autre tude qui a compar le potentiel diagnostique de la ferritine et du Rs Tf pour la d ficience en fer dans diff rentes populations conclut que la ferritine est encore la mesure de choix en routine pour valuer la d fi
124. e 1 t moin n 60 Groupe 2 AF n 50 Groupe 3 AMC n 82 Hommes 32 24 72 ans 27 26 66 ans 44 24 73 ans Femmes 28 26 70 ans 23 28 71 ans 38 24 72 ans Age moyen SD H 44 78 15 08 42 92 11 48 51 36 12 12 Age moyen SD F 46 50 12 67 48 43 12 05 51 68 10 31 Valeurs d ge exprim es en moyennes Ecart type SD et valeurs extr mes entre parenth ses 53 Au cours de notre collecte des chantillons sanguins qui a dur 12 mois une enqu te tiologique a t effectu e pour chaque patient bas e sur un interrogatoire profond incluant toutes les informations n cessaires notre tude r alis avec le patient lui m me et par la consultation de son dossier m dical voire annexe 1 A la base de cet interrogatoire et pour garantir l homog n it intra s rielle des groupes tudi s tous les patients qui ne correspondaient pas aux crit res d inclusion des an mies recherch es ont t exclus de notre population d tude e Les malades souffrant d an mie d origine h molytique valeurs BLB libre lev e Les malades souffrant d insuffisance r nale cr atinine gt 12 mg L chez la femme et gt 14 mg L chez l homme ou d un d ficit en vitamine B12 ou d acide folique e ceux recevant une suppl mentation m dicamenteuse en fer e Les malades transfus s r cemment lt 120 jours e la population f minine de chaque groupe sur t choisie la base d un
125. e 3 an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F subdivis en deux sous groupes le sous G1 n 40 22H 18F a an mie des maladies chronique pure AMC et le sous G2 n 42 22H 20F a an mie des maladies chroniques combin e a une carence en fer dite an mie mixte A mixte r sultats exprim s en moyennes Les hommes sont repr sent s par la colonne a gauche en mauve fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en mauve clair les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne Le volume globulaire moyen n indique aucune diff rence significative P 0 15 entre les deux sous groupes H 77 81 4 05 fl F 72 01 2 52 fl chez les sujets AMC pure et H 74 15 3 10 11 F 69 43 2 55 fl chez les sujets A mixte figure 23 Donc le VGM reste sans apport informatif a ajouter au diagnostic dans le but de la diff rentiation entre les causes possibles d une an mie sauf qu il peut nous aider a avoir une id e sur le degr de s v rit d une an mie sans aucune sp cificit 77 HI 4 3 l apport du fer s rique Les taux du fer S rique dans les trois groupes 30 E Hommes E Femmes 25 20 O i 15 NT Y 10 5 4 91 sy 0 Groupe1 t moin Groupe2 AF Sous G1 AMC Sous G2 A mixte Groupe3 Figure 24 Les concentrations du fer s rique Fe en g L dans le groupe1 t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an
126. e IRP IRE Au niveau de la cellule un syst me permet de r guler de fa on coordonn e l expression post transcriptionnelle de g nes en fonction du contenu en fer cellulaire Cette r gulation repose sur l interaction de deux IRP Iron Regulatory Protein avec des motifs situ s dans les r gions 5 ou 3 non traduites 5 ou 3 UTR des ARNm codant pour des prot ines de transport RTf1 DMT1 ferroportine de m tabolisme aconitase mitochondriale 5 aminolevulinate synthase ou de stockage ferritine du fer Ces motifs sont appel s IRE pour Iron Responsive Elements 118 119 Les IRE sont constitu es d une tige stable d environ 10 nucl otides interrompue par une base C non appari e situ e a cinq nucl otides de la boucle La boucle est form e de la s quence conserv e CAGUGN Figure 12 47 Fer IRE TfR IREc eALAS IRE m Aconitase IRE G U G U G U A G A G A G A G C U C U C 86 A U 20 G C U A U A A U A U C G G C C G G U C G U A 10 U A G C U G U A U A cx G C U A C C C C G C U A U A U A U A U U A A U U G U A G C C G C G U A C A U G U A A U U U U A G C G E 6 1 G C 30 a b C d Figure 12 Exemples de tiges boucles IRE a IRE de la ferritine b IRE de R Tf1 c IRE de ALA synthase rythroide d IRE de l aconitase mitochondriale 119 Lorsque les IRE sont situ es en 5 UTR leur liaison avec les IRP inhibe la traduction du messager l inverse la liaison des IRP avec un 3
127. e d finies par l utilisateur 1 4 Roche Hitachi CRPL3 Tina quant amp Prot ine C r active latex 3 g n ration Calibration Tra abilit la m thode a t standardis e selon une m thode interne tra able par rapport au CRM 470 RPPHS Reference Preparation for Proteins in Human Serum Apr s la saisie de nouvelles valeurs de calibrateur une calibration doit tre effectu e avant de proc der au dosage d chantillons de patients ou de contr les Analyseurs Roche Hitachi 902 MODULAR D S1 Solution de NaCl 0 9 S2 5 Preciset Serum proteins Analyseurs Roche Hitachi 912 917 MODULAR P S1 Solution de NaCl 0 9 S2 C f a s Proteins Pour calculer les concentrations des standards de la courbe de calibration calibration en six points multiplier les valeurs th oriques du C f a s Proteins par les facteurs multiplicateurs indiqu s ci dessous S2 0 10 S4 1 00 S6 4 00 S3 0 40 S5 2 00 Fr quence des calibrations Une calibration compl te est recommand e e en cas de changement de lot de r actif e Si le contr le de qualit l exige Contr le de qualit Pour le contr le de qualit utiliser les mat riaux de contr le indiqu s dans le paragraphe Mat riel auxiliaire n cessaire D autres contr les appropri s peuvent galement tre utilis s La fr quence des contr les et les limites de confiance doivent tre adapt es aux exigences du laboratoire Les r sultats doivent
128. e de mesure Analyseurs Roche Hitachi 902 912 917 MODULAR P MODULAR D Domaine de mesure 0 3 350 mg L 2 9 3333 nmol L Les chantillons dont les concentrations sont sup rieures la limite sup rieure du domaine de mesure sont r analys s par l analyseur via la fonction R analyse Le rapport de dilution des chantillons dans la fonction R analyse est 1 2 Les r sultats des chantillons dilu s lors de la fonction R analyse sont automatiquement multipli s par le facteur 2 Limite du Blanc LdB et limite de D tection LdD LdB 0 2 mg L 1 9 nmol L LD 0 3 mg L 2 9 nmol L La limite du blanc et la limite de d tection ont t d termin es conform ment aux exigences EP 17 A du CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute anciennement NCCLS La limite du blanc correspond au 95 percentile de n gt 60 determinations d un ou plusieurs chantillons exempts d analyte dans plusieurs s ries ind pendantes La limite du blanc correspond la concentration au dessous de laquelle on obtient des chantillons exempts d analyte avec une probabilit de 95 La limite de d tection a t d termin e sur la base de la limite du blanc et la d viation standard des chantillons de faible concentration La limite de d tection correspond la concentration de l chantillon conduisant avec une probabilit de 95 a l obtention d un r sultat situ au dessus de la limite du blanc Limite de Quantification se
129. e groupe pour v rifier l effet du sexe sur le statut martial afin de prendre d cision si on a tudi les deux sexes s par ment ou bien en les fusionnant o Entre les groupes de sujets an miques et le groupe t moin au sein du m me sexe Une P value P lt 0 05 est consid r e comme statistiquement significative toutes les valeurs P sont calcul es par la fonction t test utilisant la distribution bilat rale Les figures histogrammes ont t r alis es par le logiciel Excel for Windows software 2007 63 III R sultats et discussion Les r sultats du bilan martial hemogramme fer s rique ferritin mie la transferrin mie et ses indices le Rs Tf et son index des trois groupes sont r capitul s dans le tableau 3 Du fait qu il y ait effet du sexe sur les param tres essentiels de notre etude l h moglobine la ferritin mie et le Rs Tf sont h t rog nes entre les deux sexes P lt 0 001 les r sultats obtenus ont t analys s s par ment entre les males et femelles Figure 16 25 Les analyses des r sultats ont t r alis es en deux tapes o Dans un premier temps on a discut les points suivants e Le degr de sensibilit du Rs Tf au statut martial e L apport informatif de chaque param tre au diagnostic sp cifique des an mies tudi es e La concordance entre les param tres au sein de chaque groupe l an mie tudi e Tableau 3 les valeurs des param tres du bilan m
130. e par une r gulation post transcriptionnelle des genes codant pour le R Tf et pour la ferritine troitement li e la concentration intracellulaire en fer La r gulation de la synth se des deux prot ines s effectue en sens inverse Les ARNm de la ferritine et du R TT poss dent respectivement dans leurs extr mit s 5 et 3 non traduites une s quence oligonucl otidique particuli re de structure tige boucle d nomm e iron responsive element IRE Figure 12 et 13 153 Les IRE ont une affinit lev e pour des prot ines cytosoliques les iron regulatory proteins IRP1 et IRP2 L activit de liaison l ARNm des IRP est coordonn e avec la concentration en fer par la modulation de la conformation des prot ines Lorsque la concentration cellulaire est faible en fer l IRP1I se fixe sur l IRE cela bloque la traduction et la synth se de ferritine et favorise l expression du g ne de R TT en prot geant l ARNm du r cepteur de la d gradation par les ribonucl ases 154 Il s en suit une augmentation de la densit des R Tf la surface des prog niteurs rythropo tiques Inversement si la cellule est riche en fer l IRPI poss de une forme plus compacte avec un centre fer soufre cluster 4Fe 4S elle perd son affinit pour IRE ce qui permet la traduction de l ARNm de la ferritine et favorise l entreposage du fer Par ailleurs la d gradation de l ARNm du R Tf est acc l r e limitant la synth se du R Tf et par la m
131. eaucoup plus am lior es Les valeurs de l index Rs Tf Log Ferritine dans les trois groupes 8 E Hommes a 7 u Femmes 6 u 5 LL 5 x 4 Lun 8 o 3 ae ac 2 1 0 Groupe 1 t moin Groupe 2 AF Groupe 3 AMC Figure 21 Les valeurs de l index Rs Tf F dans le groupe1 t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an miques Groupe2 an mie ferriprive AF n 50 27H 23F Groupe3 an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F Les hommes sont repr sent s par la colonne a gauche en bleu fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en bleu clair les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne La valeur de l index Rs Tf f est significativement lev e P lt 0 001 chez les sujets an mie ferriprive H 6 00 et F 6 05 par rapport au sujets sains H 1 54 et F 1 55 ce qui exprime les forts besoins et les r serves puis es en fer chez ces malades figure 21 Mais chez les sujets avec des maladies chroniques sa valeur H 2 10 et F 1 95 est comme le Rs Tf relativement proche P lt 0 05 de celle du groupe t moin H 1 54 et F 1 55 il n indique pas tellement des forts besoins en fer ce qui est due aux valeurs lev es de la ferritin mie et probablement la fluctuation intra s rielle du Rs Tf comme on l avait propos ci dessus 72 On remarque aussi que les valeurs de cet inde
132. ec les reserves martiales de l organisme et est de ce fait un indicateur des r serves en fer dans les organes de stockage ll existe diff rentes m thodes de dosage de la ferritine radio immunologie RIA immuno enzymologie de type ELISA enzyme linked immunosorbent assay immunofluorimetrie FIA immunoluminometrie LIA immunon ph lom trie Le test de d termination de la ferritine de Roche repose sur l agglutination de particules de latex sensibilis es par les anticorps sp cifiques Principe Test immunoturbidimetrique e Le r actif R1 est ajout a l chantillon Addition de R2 et d clenchement de la r action Les anticorps anti ferritine li s au latex r agissent avec l antigene de echantillon avec formation de complexes antig nes anticorps Lagglutination qui en r sulte est mesur e par turbidim trie R actifs composition et concentrations R1 Tampon TRIS 0 18 mol L pH 8 2 NaCl 100 mmol L conservateur R2 Particules de latex charg es d anticorps polyclonaux de lapin anti ferritine humaine conservateur a TRIS Tris hydroxym thyl aminom thane Pr cautions d emploi et mises en garde Pour diagnostic in vitro Observer les pr cautions habituelles de manipulation en laboratoire Fiche de s curit disponible sur demande pour les professionnels L limination de tous les d chets doit tre effectu e conform ment aux dispositions l gales 2010 01 V 11 Fran ais
133. ecouverte de clathrine Dans l endosome la faveur d un pH acide le fer se dissocie de la transferrine Le fer serait r duit ensuite par une ferrir ductase probablement STEAP3 dans les pr curseurs rythroides puis transport e vers le cytoplasme par DMT1 Le r cepteur et l apo transferrine Apo Tf sont finalement recycl s par fusion de la v sicule la membrane plasmique de la surface cellulaire 9 Le recyclage est un ph nom ne complexe faisant intervenir un grand nombre de mol cules L une d entre elles vient d tre clairement identifi e grace au clonage positionnel du g ne responsable du ph notype de souris mutantes dites d ficientes en h moglobine les souris hbd Le g ne en question code pour une prot ine impliqu e dans l exocytose des v sicules Sec1511 12 Sa mutation chez la souris entra ne un ph notype particulier de d ficit relatif en fer dans le pro rythroblaste sans d ficit en fer syst mique 13 Le r le exact jou par la prot ine mutante Sec1511 dans l acquisition de ce ph notype reste d terminer 12 14 L interaction de la Tf avec son r cepteur est utilis e dans un grand nombre de cellules en particulier les cellules tumorales qui prolif rent beaucoup Elle ouvre des perspectives th rapeutiques int ressantes et est maintenant utilis e pour la d livrance de drogues m dicaments l int rieur des cellules 15 Par exemple le gallium 67Ga3 met un rayonnement gamm
134. ecting iron deficiency in anaemic patients with chronic inflammatory diseases 7 Br J Rheumatol 1994 33 740 4 184 Mast A E Blinder M A Gronowski A M Chumley C and Scott M G Clinical utility of the soluble transferrin receptor and comparison with serum ferritin in several populations Clin Chem 1998 44 1 45 51 185 Hirling H Henderson B R and Kuhn L C Mutational analysis of the 4Fe 4S cluster converting iron regulatory factor from its RNA binding form to cytoplasmic aconitase Embo J 1994 13 2 453 61 186 Iwai K Drake S K Wehr N B Weissman A M LaVaute T Minato N Klausner R D Levine R L and Rouault T A ron dependent oxidation ubiquitination and degradation of iron regulatory protein 2 implications for degradation of oxidized proteins Proc Natl Acad Sci U S A 1998 95 9 4924 8 187 Hanson E S and Leibold E A Regulation of iron regulatory protein I during hypoxia and hypoxia reoxygenation J Biol Chem 1998 273 13 7588 93 188 Wang J Chen G and Pantopoulos K Nitric oxide inhibits the degradation of IRP2 Mol Cell Biol 2005 25 4 1347 53 189 Finch C Regulators of iron balance in humans Blood 1994 84 6 1697 702 102 190 Roy C N and Enns C A 17011 homeostasis new tales from the crypt Blood 2000 96 13 4020 7 191 Trinder D Olynyk J K Sly W S and Morgan E H Iron uptake from plasma transferrin by the duodenum is im
135. en bleu fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en bleu clair les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne Le taux du Rs Tf est tr s lev dans le groupe 2 H 8 53 0 92 mg L F 7 87 0 89 mg L par rapport au groupe t moin H 3 52 0 87 mg L F 2 86 0 83 mg L a P lt 0 001 ce qui confirme les forts besoins en fer dans ce groupe une rythropoiese d ficiente en fer figure 20 En effet dans le troisi me groupe le Rs Tf est relativement lev H 5 34 2 30 mg L F 4 73 2 36 mg L par rapport au groupe t moin P lt 0 05 ce qui nous am ne penser que soit les besoins en fer dans ce groupe sont moindres ou sont fluctu s d un patient un autre fluctuation inter individuelle Si on remarque le taux du Rs TT il est tr s h t rog ne dans ce groupe avec des Ecart types tr s lev s SD gt 2 30 mg L donc il y a une diff rence de besoin en fer entre les individus constituants ce groupe 71 IIL 2 6 l apport de Pindex Rs Tf F Les performances du diagnostic sont am lior es par le calcul de l index Rs Tf Log Ferritine Ce rapport entre la concentration du Rs Tf et le logarithme d cimale de la concentration de la ferritine implique ces deux param tres en m me temps qui refl tent le pool fonctionnel les besoins et le pool de r serve les stocks en fer respectivement Par cons quent les performances du diagnostic sont b
136. entrations du fer s rique Fe en umol L dans le groupe1 t moin n 60 32H 28F et les deux groupes de sujets an miques Groupe 2 an mie ferriprive AF n 50 27H 23F Groupe 3 an mie des maladies chroniques AMC n 82 44H 38F Les hommes sont repr sent s par la colonne gauche en bleu fonc Les femmes sont repr sent es par la colonne droite en bleu clair Les concentrations moyennes sont repr sent es au dessus de chaque colonne Le taux du fer s rique ne peut tre d aucun apport suppl mentaire au diagnostic sauf qu il est comme l h moglobine il confirme une diminution significative P lt 0 00 du pool circulant du fer chez les deux groupes de sujets an miques H 7 34 4 78 umol L F 4 52 3 65 umol L chez les sujets AF et H 7 05 4 35 umol L F 4 714 3 32 umol L chez les sujets AMC par rapport au groupe de sujets sains H 20 46 4 64 umol L F 17 02 5 67 umol L figure 18 Il n apporte aucune information en ce qui concerne la diff rentiation entre les origines des an mies Donc le fer s rique est aussi un marqueur sans sp cificit dans le diagnostic diff rentiel des an mies Il donne uniquement une appr ciation sur le fer mobilis qui est disponible tre utilis par l rythropo se 68 111 2 4 l apport de la ferritin mie Les taux de la ferritine dans les trois groupes 500 E Hommes 450 E Femmes 400 eu UT O O
137. eptibilit du R TT la prot olyse particuli rement les r sidus sialyl s si la cha ne est longue et charg e le R TT est r sistant L int grit du domaine cytoplasmique est un facteur de protection contre la prot olyse La production de r cepteurs mutants avec perte des amino acides cytoplasmiques s accompagne d un clivage en position 91 164 De plus le type cellulaire et la concentration intracellulaire de prot ase peuvent influencer la formation de Rs Tf 164 40 Chez l humain les pr curseurs m dullaires rythro des constituent la source principale des Rs Tf 150 On estime que la moelle osseuse exprime plus de 80 a 95 de la totalit des r cepteurs contenus dans l organisme 165 cela explique la bonne corr lation existant entre la concentration s rique des Rs Tf et l activit prolif rative de la moelle Par cons quent des changements dans les taux de Rs TT ont t observ s dans certaines conditions cliniques associ es une alt ration de l rythropo se et ou une d ficience en fer D autres tissus que les cellules rythro des principalement le foie et le placenta contribuent pour une faible part la production des Rs Tf 165 111 3 Aspects analytiques mesure du Rs Tf IIL 3 1 M thodes de dosage En ce qui concerne le dosage du Rs Tf il n existe pas de normes quant l utilisation d anticoagulant la dur e de conservation des chantillons le moment propice de la journ
138. erum iron transferrin serum transferrin receptor ferritin iron deficiency anemia anemia of chronic disease serum iron level
139. es biologiques s riques actuels et praticables dans l exploration du statut martial retenir sont les suivants V 1 H moglobin mie La baisse de l h moglobin mie pr sente pour le diagnostic de carence martiale une faible sensibilit du fait d une apparition tardive apr s une baisse de 20 30 des r serves en fer de l organisme et une faible sp cificit V 2 Volume globulaire moyen Couramment diminu VGM inferieur a 80fl dans la carence martiale moins souvent diminu vers la normale dans les an mies des maladies chroniques Le VGM est galement un param tre non sp cifique peu sensible et surtout tardif 194 V 3 Fer s rique L exploration du fer s rique isol ment ne resume pas la physiopathologie d une an mie Il est sujet de nombreuses variations au cours du nycth m re en fonction des apports alimentaires des traitements ou de l existence d une h molyse Il n est jamais utilis seule pour la d finition d une carence martiale 196 Comme il est impossible d interpr ter un r sultat de fer s rique 15016 on ajoute ce dosage celui de la transferrine ou de sa mesure indirecte UIBC Unsaturated Iron Binding Capacity repr sentant la capacit latente de fixation du fer ou TIBC fer UIBC repr sentant la capacit totale de fixation du fer Donc son dosage est n cessaire la mesure de la capacit totale de fixation de la transferrine et son coefficient de saturati
140. es iron regulatory protein activity in stably transfected cells Blood 1999 94 11 3915 21 137 Davies P S and Enns C A Expression of the hereditary hemochromatosis protein HFE increases ferritin levels by inhibiting iron export in HT29 cells J Biol Chem 2004 279 24 25085 92 138 Drakesmith H Sweetland E Schimanski L Edwards J Cowley D Ashraf M Bastin J and Townsend A R The hemochromatosis protein HFE inhibits iron export from macrophages Proc Natl Acad Sci U S A 2002 99 24 15602 7 139 Montosi G Paglia P Garuti C Guzman C A Bastin J M Colombo M P and Pietrangelo A Wild type HFE protein normalizes transferrin iron accumulation in macrophages from subjects with hereditary hemochromatosis Blood 2000 96 3 1125 9 140 Bahram S Gilfillan S Kuhn L C Moret R Schulze J B Lebeau A and Schumann K Experimental hemochromatosis due to MHC class I HFE deficiency immune status and iron metabolism Proc Natl Acad Sci U S A 1999 96 23 13312 7 99 141 Feo F De Miglio M R Simile M M Muroni M R Calvisi D F Frau M and Pascale R M Hepatocellular carcinoma as a complex polygenic disease Interpretive analysis of recent developments on genetic predisposition Biochim Biophys Acta 2006 1765 2 126 47 142 Testa U Pelosi E and Peschle C The transferrin receptor Crit Rev Oncol 1993 4 241 76 143 Trowbridge I S Newman R A Domin
141. es maladies chroniques pure AMC Le dosage du Rs TF est particuli rement int ressant dans le diagnostic de la carence en fer des an mies des maladies chroniques inflammation infection cancer Les an mies des maladies chroniques sont caus es par la maladie sous jacente qui produit des cytokines qui font croire a une d ficience en fer principalement par une redistribution des sites de r serve du fer vers le foie et les monocytes ainsi qu une augmentation de la ferritine circulante Typiquement le bilan de ces patients est caract ris par une diminution de la concentration plasmatique du fer Hyposid r mie en pr sence d un niveau normal ou augment des r serves en fer Ainsi ce type d an mie ne r pondra pas une suppl mentation en fer Le diagnostic d une d ficience en fer concomitante une maladie chronique est difficile car les marqueurs habituels d exploration martiale sont inop rants En effet la ferritine et la transferrine sont des prot ines de phase aigu la ferritine augmente et la transferrine diminue lors des maladies chroniques La coloration au bleu de Prusse sur un aspirat de moelle osseuse est pr sentement la technique de r f rence pour confirmer une d ficience v ritable en fer lors d une maladie chronique Cet examen est invasif et co teux Le taux de Rs Tf s rique n est pas influenc par l inflammation ou l infection 180 181 et demeure normal ou est l g rement diminu cause d
142. es possibles d entr e du fer dans le macrophage impliquent le complexe HFE B2m RTf1 et le complexe haptoglobine h moglobine circulant qui se lie au r cepteur CD163 et subit l endocytose L h moglobine est d grad e par HO pour lib rer le fer Le fer est alors soit stock dans la ferritine soit recycl Il est ainsi export par la ferroportine puis oxyd par la c ruloplasmine CP circulante avant d tre pris en charge par la transferrine Tf circulante Les GR s nescents sont reconnus par les macrophages gr ce l externalisation de la phosphatidyls rine la surface des GR la peroxydation des lipoprot ines membranaires suite au stress oxydatif la perte de r sidus sialiques la formation de n oantigenes de s nescence Le GR s nescent phagocyt par le macrophage se retrouve dans l rythrophagolysosome Le complexe enzymatique form par la NADPH cytochrome c r ductase l h me oxyg nase 1 HO 1 et la biliverdine r ductase d grade l h me en CO monoxyde de carbone fer et bilirubine Les souris KO HO ne sont pas capables de recycler le fer des GR sugg rant un r le essentiel d HO 1 dans EP Toutefois on remarque que dans ces souris l h me est quand m me d grad en fer peut tre par compensation par HO 2 29 16 Deux hypoth ses sont mises quant la destin e du fer suite la d gradation de l h me 1l serait soit transf r au cytosol via le DMT1 soit h
143. essous Limites et intervalles Domaine de mesure S2 0 01998 S5 0 30770 Analyseur Roche Hitachi 902 53 0 10000 S6 0 50000 Domaine de mesure 5 400 ng mL 11 2 899 pmol L S4 0 19980 Diluer les chantillons dont les concentrations en ferritine sont gt 400 ng mL Analyseurs Roche Hitachi 912 917 MODULAR P 899 pmol L manuellement dans le rapport 1 1 l aide d une solution S1 Solution de NaCl 0 9 de NaCl 0 9 Multiplier le r sultat par 2 9 6 C fas Proteins Si Pon doit s attendre a des concentrations de ferritine lev es en cas de Pour calculer les concentrations des standards de la courbe de calibration surcharge martiale par ex diluer l chantillon manuellement dans le rapport calibration en six points multiplier les valeurs th oriques du C f a s Proteins 1 3 l aide de solution de NaCl 0 9 Multiplier le r sultat par 4 par les facteurs multiplicateurs indiqu s ci dessous Analyseurs Roche Hitachi 912 917 MODULAR P Domaine de mesure 15 800 ng mL 33 7 1798 pmol L 52 0 0125 55 0 25 Analyseurs Roche Hitachi 912 917 S3 0 025 S6 1 00 50 Les chantillons ayant des concentrations plus lev es sont automatiquement S4 0 050 rie r analys s par l analyseur Le rapport de dilution des chantillons lors de Fr quence des calibrations r analyse automatique est 1 8 Les r sultats des chantillons dilu s pour Une calibration complete est recommand e la r analyse sont a
144. eur soluble de la Tf 74 111 3 L valuation de la corr lation du Rs Tf avec les autres param tres du bilan martial dans les deux sous groupes composant le groupe 3 Pour appr cier l importance de cette division et l utilit du param tre sur lequel elle est bas e on a valu de nouveau la corr lation du taux de Rs Tf avec les autres marqueurs du bilan martial au sein de chaque sous groupe tableau 6 Tableau 6 les valeurs des coefficients de corr lations r des principaux param tres du bilan martial avec le Rs Tf dans les deux sous groupes composants du groupe 3 de sujets an miques les r sultats sont exprim s s par ment entre les deux sexes Groupe 3 AMC n 82 Sous groupe 1 AMC pure n 40 Sous groupe 2 AF AMC n 42 Hommes n 22 Femmes n 18 Hommes n 22 Femmes n 20 Age ans H moglobine g dl H matocrite VGM fl Fer s rique umol l Ferritine ug l Transferrine mg l CST CTF u mol Fe l Rs Tf mg l Rs Tf Log Ferritine Les valeurs n gatives du r indiquent une corr lation inverse les valeurs positives du r indiquent une variation dans le m me sens sous groupe 1 AMC pure sujets an miques d origine des maladies chroniques pure sous groupe 2 AF AMC sujets an miques d origine ferriprive combin e a des maladies chroniques VGM volume globulaire moyen CST Coefficient de Saturation de la transferrine CTF Capacit Totale de Fixation de la Tf Rs
145. ferritine qui exprime les r serves en fer Donc c est un rapport besoins r serves 81 Ce marqueur pr sente un excellent int r t dans le diagnostic diff rentiel des an mies surtout dans les situations les plus difficiles des d ficits martiaux combin s aux syndromes inflammatoires il permet de trancher entre ces deux types d anemie 194 e une valeur basse inf rieure 1 sugg re une an mie secondaire des maladies chroniques alors que e une valeur lev e sup rieure 2 sugg re une an mie d une carence martiale ou de l association des deux causes 194 Il peut d tecter tr s pr cocement un d ficit avant m me que l an mie ne s installe puisque une valeur sup rieure 2 valeur pr dictive signale l puisement des r serves en fer et le risque d installation d une an mie En r sum les r sultats du troisi me groupe sont comme suit Apr s sa subdivision en deux sous groupes le bilan du troisi me groupe est devenu tr s interpr table sans aucun paradoxe Cette division nous a permis de diff rencier entre deux types d an mies difficiles distinguer e Un sous groupe de sujets an miques des maladies inflammatoires chroniques AMC ayant un bilan martial caract ris par h moglobin mie basse VGM bas vers normal hyposid r mie ferritin mie normale ou lev e et un Rs Tf normal ce qui exclu toute possibilit d existence d un deficit martial e Un sous
146. ficit martial concomitante un syndrome inflammatoire est un cas fr quent chez les malades souffrants des maladies chroniques Dans ce genre d an mies les param tres courants d exploration martiale sont inefficaces pour mettre en vidence cette carence En effet 1ls subissent des variations contradictoires ce qui rend le bilan martial ininterpr table c est le cas o la ferritine se comporte simultan ment comme un marqueur de carence et une prot ine de la phase aigu de l inflammation la ferritin mie est normale ou lev e Le dosage du Rs TF trouve ici l une de ses principales applications cliniques car sa concentration n est pas influenc e par l inflammation Pour mettre en vidence l int r t de ce nouveau marqueur cette tude a t r alis e sur 60 sujets sains groupelou t moin et 132 malades adultes hospitalis s au niveau du CHU de S tif 50 patients souffrant d an mie ferriprive groupe 2 82 patients souffrant de maladies chroniques associ e une an mie groupe 3 Tous ont b n fici d un bilan martial plus le dosage du Rs Tf Les r sultats obtenus taient concluants la bonne corr lation du Rs Tf avec les autres param tres du bilan montre sa sensibilit au statut martial Le taux du Rs Tf est revenu lev chez la totalit des malades du groupe 2 attestant une augmentation des besoins de l organisme en fer La diff rence interindividuelle du taux de Rs Tf dans le groupe 3 nous a permis de s lection
147. g L 13 2 et 197 nmol L Une comparaison du test Tina quant a sTfR sur les analyseurs Roche Hitachi 917 y et COBAS INTEGRA 400 x a conduit a l obtention des corr lations suivantes mg L Passing Bablok 2 R gression lin aire y 0 99 x 0 31 y 0 96 x 0 43 r 0 999 Nombre d chantillons analys s 68 Les concentrations des chantillons taient situ es entre 0 31 et 19 86 mg L 3 65 et 234 nmol L Sp cificit analytique r actions crois es Les anticorps utilis s sont sp cifiques du Rs TF Il n y a pas de r actions crois es avec la transferrine diferrique l apotransferrine et la ferritine 2 4 2007 05 V 7 Francais 05112761001V2 CRPL3 Tina quant amp Prot ine C reactive latex 3 g n ration R f Flacon Contenu REAGENT 6 x 20 mL REAGENT 6 x 10 mL REAGENT 6 x 63 mL 04956885 190 1 2 6 x 33 mL 1 2 04956923 0 REAGENT 4 x 235 mL 04995554 190 4 x 116 mL cobas e R actifs utilisables sur les analyseurs Roche Hitachi suivants 917 MODULAR Les analyseurs et les coffrets ne sont pas tous disponibles dans tous les pays Pour l utilisation sur d autres analyseurs veuillez contacter la soci t Roche Diagnostics de votre pays Fran ais Codes d application Pour les analyseurs Roche Hitachi 912 917 MODULAR P ACN 210 Pour l analyseur Roche Hitachi MODULAR D ACN 200 Domaine d utilisation Test immunoturbidim trique pour la d termination qu
148. go D L and Sauvage C Transferrin receptors structure and function Biochem Pharmacol 1984 33 925 32 144 Baynes E D Skikne B S and Cook J D Circulating transferrin receptor and assessment of iron status J Nutr Biochem 1994 5 322 30 145 May W S and Cuatrecasas P Transferrin receptor its biological significance J Membrane Biol 1985 88 205 15 146 Vernet M Le r cepteur de la transferrine r le dans le m tabolisme du fer et int r t en biologie clinique Ann Biol Clin 1999 57 9 17 147 Lok C N and Loh T T Regulation of transferrin function and expression review and update Biol Signals Recept 1998 7 157 78 148 Lacopetta B J Morgan E H and Yeah G C T Transferrin receptors and iron uptake during erythroid cell development Bioch Biophys Acta 1982 687 204 10 149 Huebers H A and Finch C A The physiology of transferrin and transferrin receptors Physiol Rev 1987 67 520 82 150 Thorstensen K and Romslo I The role of transferrin in the mechanism of cellular iron uptake Biochem J 1990 271 1 10 151 Ponka P Beaumont C and Richardson D R Function and regulation of transferrin and ferritin Sem Hematol 1998 35 35 54 152 Feder J N Penny D M Irrinki A et al The hemochromatosis gene product complexes with the transferrin receptor and lowers its affinity for ligand binding Proc Natl Acad Sci USA 1998 95 1472 7 153 Hentze M W and K
149. h me L h me oxyg nase est une enzyme membranaire qui permet de d grader l h me en monoxyde de carbone CO en fer Fe et biliverdine Il existe trois isoformes d heme oxygenase L h me oxyg nase 2 HO 2 est constitutivement active et pr sente de fa on majoritaire dans tous les organes sauf dans la rate Produite en grande quantit dans le cerveau elle semble jouer un r le important de protection des neurones contre le stress oxydant et le CO produit par la d gradation de l h me sert de neurotransmetteur Ainsi une d ficience en HO 2 chez la souris entra ne d importantes anomalies du syst me nerveux central et p riph rique 114 L h me oxyg nase 3 HO 3 ne semble pas avoir d activit catalytique C est donc l h me oxyg nase HO 1 pr sente en grande quantit dans le macrophage qui participe a l rythrophagocytose voir plus haut 115 Elle est induite au cours de PEP par heme et galement par le stress cellulaire Des souris KO HO pr sentent ainsi une accumulation de fer dans le macrophage 29 Yachie ef al rapportent qu une d ficience en HO 1 chez un gar on de 6 ans est associ e un retard de croissance et une an mie h molytique s v res Le rein et le foie de ce patient est surcharg en fer 116 31 II 8 M galine cubiline La cubiline est une prot ine de 460 kDa sans domaine transmembranaire capable de se lier la vitamine B12 dans l intestin l ApoA1 HDL et l
150. hantillons qui contiennent un pr cipit doivent tre centrifuges avant l analyse Stabilit 3 8 jours entre 15 et 25 C 8 jours entre 2 et 8 C 6 mois entre 15 et 25 C Mat riel fourni Voir paragraphe R actifs composition et concentrations Mat riel auxiliaire n cessaire e Calibrateurs C f a s Calibrator for automated systems Proteins Ref 11355279 USA 1355279 Preciset Serum proteins Ref 11876406 USA 1876406 e Contrdles Precinorm Protein R f 10557897 USA 557897 Precipath Protein R f 11333127 USA 1333127 e Solution de NaCl 0 9 e Equipement habituel de laboratoire Mode op ratoire Pour garantir le bon fonctionnement du test se conformer aux instructions relatives a l analyseur utilis indiqu es dans la pr sente notice Pour les instructions sp cifiques de l analyseur se r f rer au manuel d utilisation appropri Veuillez noter que deux applications sont disponibles pour l analyseur MODULAR P lune utilisant le calibrateur C f a s Proteins ACN 187 et l autre utilisant le calibrateur Preciset Serum proteins ACN 231 Pour les configurations MODULAR PD il est recommand d utiliser l application ACN 231 sur l analyseur MODULAR P L application ACN 231 pour l analyseur MODULAR P n est pas disponible aux USA 174 Roche Hitachi Transferrin ver 2 Tina quant a Transferrine version 2 En cas d utilisation de tests non valid s par Roche les performances
151. i P The gene TFR2 is mutated in a new type of haemochromatosis mapping to 7q22 Nat Genet 2000 25 1 14 5 161 Kawabata H Fleming R E Gui D Moon S Y Saitoh T O Kelly J Umehara Y Wano Y Said J W and Koeffler H P Expression of hepcidin is down regulated in TfR2 mutant mice manifesting a phenotype of hereditary hemochromatosis Blood 2005 105 1 376 81 162 Shih Y J Baynes R D Hudson B G and Cook J D Characterization and quantitation of the circulating forms of serum transferrin receptor using domain specific antibodies Blood 1993 81 1 234 8 163 Rutledge E A and Enns C A Cleavage of the transferrin receptor is influenced by the composition of the O linked carbohydrate at position 104 J Cell Biol 1996 168 284 93 164 Rutledge E A Gaston I Root B J McGraw T E and Enns C A The transferrin receptor cytoplasmic domain determines its rate of transport through the biosynthetic pathway and its susceptibility to cleavage early in the pathway J Biol Chem 1998 273 20 11269 75 165 Beguin Y Loo M and Fillet G Le dosage du r cepteur circulant de la transferrine une nouveaut pour quantifier l rythropoi se Med Hyg 1991 49 2041 5 166 Cooper M J and Zlotkin S H Day to day variation of transferrin receptor and ferritin in healthy men and women Am J Clin Nutr 1996 64 738 42 167 Suominen P Punnonen K Rajam ki A and Irjala K Evalua
152. i indique l installation d un processus inflammatoire 10 mg L groupe 1 t moin ou r f rence sujets sains groupe 2 AF sujets an miques d origine ferriprive groupe 3 AMC sujets an miques d origine des maladies chroniques VGM volume globulaire moyen CST Coefficient de Saturation de la Tf CTF Capacit Totale de Fixation de la Tf Rs Tf R cepteur soluble de la transferrine 64 111 1 Etude de la corr lation du Rs Tf avec les autres param tres Pour estimer le degr de sensibilit du taux du Rs Tf au statut martial la corr lation entre les param tres du bilan martial et le Rs Tf a t valu e et r capitul e dans le tableau 4 Tableau 4 les valeurs des coefficients de corr lations r des principaux param tres du bilan martial avec le Rs Tf chez le groupe t moin et les deux groupes de sujets an miques les r sultats sont exprim s s par ment entre les deux sexes Groupe 1 t moin n 60 Groupe 2 AF n 50 Groupe 3 AMC n 82 Hommes n 32 Femmes n 28 Hommes n 27 Femmes n 23 Hommes n 44 Femmes n 38 Age ans H moglobine g l H matocrite VGM fl Fer s rique umol l Ferritine ug l Transferrine mg l CST CTF umol Fe l Rs Tf mg l Rs Tf Log Ferritine Les valeurs n gatives du r indiquent une corr lation inverse les valeurs positives du r indiquent une variation dans le m me sens groupe 1 t moin ou r f rence sujets sains groupe 2 A
153. ie 546 nm Les r sultats sont obtenus l aide d une courbe d talonnage saisie et m moris e lors de la calibration de l appareil Celle ci est g n r e par une calibration en 6 points 62 II Calculs et statistiques Avant de commencer les calculs des moyennes et les coefficients de corr lation Les dosages ont t r alis s en triplicata et les valeurs a tenir en compte de chaque parametre sont des moyennes d un triplicata Les valeurs de la ferritin mie sont normalis es par transformations logarithmiques calculs du Logarithme d cimal des concentrations de la ferritine Les analyses statistiques des donn es moyennes et Ecart types coefficients de corr lations les tests de la normalit et la comparaison de moyennes ont t effectu es l aide du logiciel Excel for Windows software 2007 Selon les tapes suivantes e limination des valeurs pertinentes apr s la cr ation d une Box plot e v rification de la normalit la conformit la loi normale de chaque param tre utilisant le test de Khi deux 4 e Calcul de moyennes et les Ecart types des param tres de chaque groupe r sum s sous formes de tableaux voir annexes e Calcul des coefficients de corr lation r de ces parametres avec le marqueur principal dans notre tude Rs Tf et cr ation de la matrice des valeurs r e Comparaison des moyennes utilisant le test de STUDENT t test o Entre les deux sexes au sein de chaqu
154. ie du fer de l h patocyte en situation de demande accrue ex rythropo se augment e est encore mal connue elle pourrait impliquer la ferroportine et ou un autre transporteur Le fer export est oxyd par la c ruloplasmine circulante CP et se lie du nouveau la transferrine En cas de carence en fer ou lorsque des patients atteints d h mochromatose sont phl botomis s voir plus loin le foie est capable de mobiliser ses r serves afin de satisfaire les besoins accrus en fer pour l rythropo se La ferroportine est le seul exporteur de fer cellulaire connu ce jour et repr sente donc un candidat potentiel pour l export de fer des h patocytes Figure 8 Ainsi l absence de ferroportine dans des souris KO ferroportine conduit une accumulation de fer dans l h patocyte 43 Outre les h patocytes les cellules de Kupffer constituent comme les autres macrophages tissulaires des r servoirs potentiels de fer du fait de leur capacit d EP voir ci dessus Figure 7 19 II Mol cules impliqu es dans le m tabolisme du fer 11 1 Prot ines de liaison du fer la transferrine Tf la lactoferrine et la lipocaline neutrophile II 1 1 Transferrine Tf La transferrine a t d couverte en 1946 dans le plasma et a d abord t appel e sid rophiline pour son affinit pour le fer C est une glycoprot ine s rique de masse relative environ 80 kDa Elle est compos e de 679 acides amin s qui f
155. iellement dans les XN v g taux plus difficile absorber 2 20 absorb s Le r gime normal chez l homme est constitu majoritairement de fer non h minique le fer h minique provenant surtout de la myoglobine et de l h moglobine trouv e dans les viandes Dans les deux cas le fer est oxyd Fe 1 May Contenu en aon ris ein E de Fer 100g me de Fer 100g Foie de porc Abricots secs Levure de bi re s che Huitres Cacao Amand noisettes Caviar i Sardines Foie de mouton Noix Lentilles Epinards Soja Cot de b uf Jaune d uf i Jambon Persil Vin Haricot blancs Lait de vache Moules Tableau 1 Exemples de teneur d aliments riches en fer h minique et non h minique 2 Le fer d origine h minique L absorption du fer h minique se fait probablement via un r cepteur sp cifique situ la membrane apicale de l ent rocyte HCP1 Heme Carrier Protein 1 qui a t identifi tr s r cemment par une quipe anglaise 3 L h me fix son r cepteur serait transloque l int rieur de la cellule puis d grad par l enzyme h me oxyg nase HO Le fer ainsi lib r rejoindrait le pool de fer internalis via DMT1 Divalent Metal Transporter 1 Figure 1 Le fer non h minique L absorption du fer non h minique peut tre facilit e par la pr sence dans le bol alimentaire d acide ascorbique ou inhib e par les tannins dans le th le caf le vin ou l acide phyti
156. in 37 C voir l exemple de la ferritine figure 15 60 e Puis l addition de 150 ul du r actif R2 Particules de latex charg es d anticorps monoclonaux de type IgG de souris anti Rs TF humain Tampon TRIS HCI 20 mmol L pH 8 0 conservateur et l incubation du m lange pendant 5 min 37 C conduit au d clenchement de la r action Les anticorps anti Rs TF fix s sur des particules de latex r agissent avec l antig ne de l chantillon avec formation de complexes antig nes anticorps L absorbance de l agglutination qui en r sulte est mesur e par turbidim trie 570 nm contre une courbe d talonnage saisie et m moris e lors de la calibration de l appareil a TES acide tris hydroxym thyl m thyl amino 2 thanesulfonique b TRIS tris hydroxym thyl aminom thane 1 2 2 7 Calcul de l index Rs Tf F L index Rs Tf F repr sente le rapport entre la concentration du r cepteur soluble de la transferrine en mg L et le logarithme d cimale de la concentration de la ferritine en ug L Rs Tf F Rs Tf mg L Log Ferritine ug L L intervalle des valeurs normales de cet index est de Rs Tf F lt 2 chez les deux sexes o la valeur maximale Rs Tf Fnax 2 repr sente le rapport entre les limites sup rieures des intervalles normaux de ces deux param tres Rs Tf Fimax RS Tfmax Log Ferritinemax 5 Log 400 1 92 2 chez l homme Rs Tf Fimax Rs Tfmax Log Ferritinem
157. in mie inferieure 30 ug l est consid r e comme la preuve de r serves en fer insuffisantes valeur pr dictive d an mie ferriprive de 92 98 195 Elle peut nous confirmer que l an mie est strictement d origine carentielle Donc la ferritin mie reste le marqueur biologique de choix dans l exploration des r serves en fer en dehors de maladie inflammatoire chronique Mais si la ferritin mie est normale ou lev e le diagnostic n cessite plus d investigations Le dosage de la CRP est n cessaire pour mettre en question la possibilit d installation d un processus inflammatoire e Une CRP n gative inferieure 10 mg l nous permet l exclusion d une cause inflammatoire et rechercher d autres causes d an mies comme An mies par exc s de perte h morragies aigu s an mie h molytique raccourcissement de la dur e de vie des globules rouges GR lt 120 Jours An mies par d faut de production par insuffisance qualitative d faut d rythropo tine en cas d insuffisance r nale insuffisance endocrinienne par insuffisance quantitative anomalies de synth se d ADN anomalies de synth se de l Hb d faut de synth se de la globine thalass mies e Une CRP positive sup rieure 10 mg l nous confirme une r action inflammatoire donc 11 y a une forte possibilit que l an mie soit d origine inflammatoire mais a n exclue pas la possibilit d un d ficit martial masqu
158. ine EPO 22 Le SCF fabriqu de fa on constitutive par les cellules stromales de la moelle osseuse se lie a son r cepteur C kit et induit la survie et la prolif ration des prog niteurs rythroides en synergie avec notamment le GM CSF et l interleukine IL 3 L EPO est le r gulateur principal de l rythropo se qui permet lui aussi de prot ger les prog niteurs rythroides de la mort par apoptose 10 L EPO est produite par les cellules interstitielles du cortex renal et sa production est finement contr l e par la tension en oxyg ne qui d pend elle m me du nombre de GR produits Il existe une v ritable r gulation endocrine de l rythropo se via EPO entre les reins et la moelle osseuse 22 Ainsi une forte corr lation est retrouv e entre le taux d h moglobine et le taux d EPO Le rein est la principale source dQ EPO c est pourquoi un sujet ayant subi une n phrectomie est incapable d augmenter son rythropo se face une situation d an mie L EPO peut galement tre produite dans le foie par les h patocytes et cellules de Ito L tude de la r gulation de 1 EPO par la teneur en oxyg ne a conduit l identification des facteurs de transcription HIF Hypoxia Inducible Factor L HIF est un dim re constitu de deux sous unit s a et B La sousunit a est r gul e par l hypoxie 23 en normoxie HIF a se lie a la prot ine VHL von Hippel Lindau et est rapidement d grad e
159. ional alleles of the murine iron regulatory protein IRP 1 and 2 genes Genesis 2005 43 4 181 188 125 Meyron Holtz E G Ghosh M C Iwai K LaVaute T Brazzolotto X Berger U V Land W Ollivierre Wilson H Grinberg A Love P and Rouault T A Genetic ablations of iron regulatory proteins I and 2 reveal why iron regulatory protein 2 dominates iron homeostasis Embo J 2004 23 2 386 95 98 126 Lebron J A Bennett M J Vaughn D E Chirino A J Snow P M Mintier G A Feder J N and Bjorkman P J Crystal structure of the hemochromatosis protein HFE and characterization of its interaction with transferrin receptor Cell 1998 93 1 111 23 127 Giannetti A M Snow P M Zak O and Bjorkman P J Mechanism for multiple ligand recognition by the human transferrin receptor PLoS Biol 2003 1 3 E51 128 Roy C N Penny D M Feder J N and Enns C A The hereditary hemochromatosis protein HFE specifically regulates transferrin mediated iron uptake in HeLa cells J Biol Chem 1999 274 13 9022 8 129 Carlson H Zhang A S Fleming W H and Enns C A The hereditary hemochromatosis protein HFE lowers intracellular iron levels independently of transferrin receptor I in TRVD cells Blood 2005 105 6 2564 70 130 Zhang A S Xiong S Tsukamoto H and Enns C A Localization of iron metabolism related mRNAs in rat liver indicate that HFE is expressed predominantly in hep
160. istait un r cepteur pour NGAL au niveau des cellules pith liales du rein 20 Le g ne de ce r cepteur semble tre exprim dans un grand nombre de tissus et sa surexpression dans des cellules confirment le r le de Ngal dans le transport de fer et l apoptose 54 Ces deux r les seraient exclusifs en fonction de la liaison ou non de Ngal avec un complexe contenant du fer 54 21 11 2 Ferritine la prot ine de stockage La ferritine a t cristallis e en 1937 a partir de rate de cheval c tait la deuxi me prot ine cristallis e apr s la peroxydase de raifort La ferritine est form e de 24 sous unit s de types H heavy cha ne lourde et ou L light cha ne l g re Figure 9 Chaque mol cule de ferritine de 450 kDa peut s questrer jusqu 4500 atomes de fer H4Lo Muscle Thymus Globules rouges Cerveau C ur Lymphocytes Foie Rate Serum HoL 2 4 Figure 9 Proportion des sous unit s lourdes H et l g res L composant la ferritine dans diff rents tissus Les homopolym res de sous unit s H Holo et L Holx sont repr sent s respectivement en haut et en bas de la figure et les h t ropolym res de contenu d croissant en sous unit H sont plac s entre les homopolym res Les tissus sont plac s en fonction de leur quantit relative de sous unit s H et L a droite de la figure Ex ferritine musculaire ferritine h patique H2 3L22 21 9 Seules les sous unit s H s
161. ivit aconitase ni de complexe Fe S 118 Ces prot ines reconnaissent des l ments de r gulation pr sents en 5 ou 3 UTR de l ARNm de leurs genes cibles TIRI DMTI ferritines H et L ferroportine eALAS aconitase mitochondriale L interaction des IRP avec un IRE en S UTR emp che la traduction de l ARNm alors que l interaction des IRP avec un IRE situ en 3 UTR stabilise 1 ARNm Quand le fer est abondant dans la cellule le complexe Fe S d IRP1 peut se former et IRPI a alors une activit aconitase Lorsque le fer vient a manquer le complexe est d stabilis et la prot ine acquiert une activit de liaison aux IRE En pr sence de fer ou d h me IRP2 est d grad e par le prot asome voir Syst me IRP IRE Figure 13 32 Outre le fer des exp riences in vitro ont montr que les IRP sont sensibles l hypoxie au stress oxydant et des stimuli inflammatoires sugg rant un r le plus large que celui de r gulateurs du m tabolisme du fer 118 119 L absence totale d IRP chez la souris souris rp1 Irp2 provoque une l talit embryonnaire montrant le r le essentiel des IRP dans le d veloppement embryonnaire 120 Les souris rp2 exprimant seulement le g ne rp pr sentent une an mie microcytaire mod r e et une distribution alt r e du fer dans les organes probablement due une diminution des taux de RTTI et une augmentation de la ferritine par perte de r gulation postt
162. l exige la r analyse sont automatiquement multipli s par le facteur 2 14 Limites inf rieures de mesure Limite inf rieure de d tection du test 0 90 mol L 5 g dL La limite inf rieure de d tection correspond au plus faible taux d analyte mesurable pouvant tre distingu de z ro Elle est obtenue par le calcul et correspond au plus faible taux de la gamme de standards 3 carts type standard 1 3SD r p tabilit n 21 Contr le de qualit Pour le contr le de qualit utiliser les mat riaux de contr le indiqu s dans le paragraphe Mat riel auxiliaire n cessaire D autres contr les appropri s peuvent galement tre utilis s La fr quence des contr les et les limites de confiance doivent tre adapt es aux exigences du laboratoire Les r sultats doivent se situer dans les limites de confiance d finies Chaque laboratoire devra tablir la proc dure suivre si les r sultats Valeurs de r f rence se situent en dehors de ces limites S rum plasma Se conformer la r glementation gouvernementale et aux directives Hommes 10 6 28 3 umol L 59 158 ug dL locales en vigueur relatives au contr le de qualit Femmes 6 6 26 0 umol L 37 145 ug dL Calcul des r sultats La concentration en fer dans le s rum et le plasma d pend de l alimentation L analyseur calcule automatiquement la concentration en et est SURUHE 8 des variations nycth m rales analyte de chaque chantillon Domaines de
163. la 2 3 mois 80 500 ng mL 180 1123 pmol L turbidit et la concentration en triglyc rides 1e mois 150 450 ng mL 337 1011 pmol L Roche Hitachi 2 4 2010 01 V 11 Fran ais 12148404001V7 STfR Tina quant a R cepteur soluble de la transferrine Rs TF R f Flacon Contenu 1 REAGENT 2 x 13 mL 12148315 122 2 REAGENT 2 x 13 mL cobas R actifs utilisables sur les analyseurs Roche Hitachi suivants 917 MODULAR A le P D Les analyseurs et les coffrets ne sont pas tous disponibles dans tous les pays Pour l utilisation sur d autres analyseurs veuillez contacter la soci t Roche Diagnostics de votre pays Fran ais Codes d application Pour les analyseurs Roche Hitachi 904 911 912 917 MODULAR P ACN 665 Domaine dQ utilisation Test immunoturbidim trique pour la d termination quantitative in vitro du r cepteur soluble de la transferrine dans le s rum et le plasma humains sur les analyseurs de chimie clinique de Roche Caract ristiques 2 3 45 6 7 8 Le r cepteur de la transferrine est une glycoprot ine faisant partie int grante de la membrane Son poids mol culaire est de 190 kDa Il est constitu de deux sous unit s identiques reli es par des ponts disulfures Chacun de ces monom res comprend un domaine C terminal de 85 kDa qui peut fixer une mol cule de transferrine transportant du fer La prot olyse conduit la forme soluble du r cepteur de la transferrine
164. la c ruloplasmine dans l absorption intestinale de fer en situation d an mie a t propos e par l tude de souris KO Cp ayant subi des saign es 104 28 11 5 2 H phaestine L h phaestine est une prot ine homologue la c ruloplasmine mais elle n est pas s cr t e elle est int gr e la membrane plasmique elle poss de un passage membranaire en position C terminale 105 Le g ne codant pour l h phaestine est fortement exprim dans l intestin gr le et faiblement dans le colon le cerveau la rate les poumons et le placenta 106 L h phaestine n est pas pr sente dans les cellules de la crypte et dans l ent rocyte la prot ine h phaestine est localis e dans un compartiment supranucl aire qui pourrait servir de r serve 106 et la membrane basolat rale 107 la membrane basolat rale elle permettrait l oxydation du fer export par la ferroportine et ainsi la fixation du fer oxyd la TT La d couverte de l h phaestine s est faite par l tude de souris sla pour sex linked anemia mutation apparue apres irradiation 105 Ces souris pr sentent une an mie ferriprive associ e a une surcharge en fer des ent rocytes L tude g n tique de ces souris a montr que le g ne Heph est d l t de 582 bases conduisant la production d une prot ine tronqu e 105 Cette prot ine tronqu e n est plus pr sente la membrane basolat rale de l ent rocyte mais
165. lexe dans l endosome tardif la faveur d un pH acide puis est transf r de l endosome vers le cytosol probablement gr ce au transporteur DMT1 10 Figure 2 Tr s r cemment par l tude de souris an miques nm1504 a t identifi e une ferrir ductase endosomale qui serait responsable de la r duction du fer li la Tf avant le transport transmembranaire de ce fer par DMTI dans les pr curseurs rythro des STEAP3 pour Six Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate 11 La Tf lib r e de son fer l apo transferrine apoTf et son r cepteur sont ensuite tous deux recycl s a la surface cellulaire Figure 2 3 O Espace gt gt Fe Tf DMT1 Om Avett extracellulaire pH 7 4 RTf pr 4 1 er nants oe 1 A 1 mad a ru e membrane cellulaire puits recouvert 1 FL de clathrine 2E 1 Endosome 9 Fe Pompe protons OLE Mitochondrie H a ae gt z H 27 DMT1 SEE Ferritine Cellules QE non rythro des Lake Hemosiderine L a A dd STEAP3 Cytoplasme 9 ren Endosome acidifi pH Figure 2 Endocytose du fer li a la Tf par RTf L holotransferrine Fe2 Tf est reconnue par le r cepteur de la transferrine RTf en vert la surface de la cellule Le complexe RTf Fe2 Tf subit une endocytose dans une v sicule r
166. liable Serum transferrin receptor STfR has been introduced as a new tool and its values are not affected by an increase in cytokine production in ACD patient 132 patients hospitalized at the CHU Setif were enrolled in this study 50 were affected with IDA and 82 were affected with ACD The control group included 60 healthy adults Iron status was evaluated in these patients including serum transferrin receptor Results showed that values of iron MCV and hemoglobin in IDA ACD and COMBI groups were not significantly different Serum ferritin values distinguished IDA from ACD reliably but the diagnostic usefulness of ferritin measurements in ACD and COMBI patients is limited for their wide range of variation Serum TfR levels were gt 4 39 mg L in men and gt 3 69 mg L in women in all IDA patient tested This helped us to select 51 patients with COMBI anemia among the 82 patients with ACD Serum TfR was the best test to differentiate IDA and COMBI anemia from ACD patients Calculation of the ratio sTfR log ferritin STfR F Index is a way of combining sTfR and ferritin results This ratio provided an important parameter for the identification of patients with depleted iron pools We conclude that sTfR measurement is a sensitive and a valuable noninvasive tool for the diagnosis of iron depletion It proves an attractive additional method to the conventional laboratory tests in the prediction of depleted iron pools in anemic adult population Key words s
167. lue donc selon trois tapes successives premi rement une d pl tion des r serves en fer diminution de la ferritine deuxi mement une carence tissulaire en fer augmentation du Rs Tf et finalement l an mie diminution de l h moglobine Chez les patients ayant une AF plusieurs tudes ont d montr une augmentation du Rs Tf de l ordre de 3 5 fois selon la s v rit de la d ficience Alors que dans les cas d exc s en fer comme dans l h mochromatose les taux s riques de Rs Tf sont diminu s ou normaux 51 0 traite des personnes carenc es avec des suppl ments de fer la concentration du Rs Tf diminue au cours de 8 semaines de traitement malgr la normalisation de la ferritine apr s 4 semaines Le Rs TT semble tre un indicateur sensible de la carence en fer m me apr s la reconstitution des r serves La mesure du Rs Tf est particuli rement int ressante chez les sujets ayant des r serves physiologiques faibles en fer pour lesquels l int r t du dosage de la ferritine est limit C est le cas des jeunes enfants des adolescents des athl tes et des femmes enceintes Ainsi durant la grossesse l anemie est difficile d interpr tation parce que l augmentation du volume sanguin cause une h modilution et que les r serves de fer sont mobilis es pour le f tus hypoferritin mie Mais si la carence en fer est v ritable le taux du Rs Tf s rique sera augment 45 II1 3 3 3 valuation de I An mie d
168. me occasion l acquisition du fer Figure 13 Ce m canisme permet aux cellules de coordonner l acquisition et l entreposage du fer selon sa disponibilit et leurs besoins martiaux Dans le cas des cellules rythro des l expression du R Tf est plut t r gul e au niveau transcriptionnel par des facteurs de croissance ou de diff rentiation cellulaire et serait plus ind pendante du contenu intracellulaire en fer 155 156 Le contr le transcriptionnel de expression du g ne du R Tf est aussi possible dans d autres types cellulaires en stade de prolif ration 157 Par ailleurs la surexpression de R Tf par les cellules malignes pourrait tre exploit e pour d velopper une th rapie s lective En effet les anticorps contre le R Tf qui inhibent la liaison de la transferrine exercent un effet cytostatique sur les cellules malignes 147 De plus des conjugu s entre une drogue ex daunorubicine et la transferrine ou des conjugu s entre une drogue et un anti R Tf ont galement t synth tis s afin de permettre de cibler les cellules en tat de prolif ration Ils ont d montr des effets cytotoxiques sur des cellules canc reuses 147 mais cette toxicit n tait pas sp cifique aux cellules malignes d autres cellules riches en R Tf taient galement affect es 38 IIL 1 4 Le R Tf2 Le g ne codant pour R Tf2 TFR2 clon en 1999 par Kawabata et al 158 est l origine de deux transcrits une fo
169. me solution et au m me temps lors du comptage de globules rouges les amplitudes des pulsations enregistr es sont proportionnelles aux volumes cellulaires le VGM est calcul partir du rapport entre la somme des aires des pulsations et le nombre des pulsations enregistr s 1 2 1 4 H matocrite HCT Les valeurs normales de l HCT sont du 40 52 chez l homme et du 37 47 chez la femme L h matocrite est d fini comme tant le volume total de la masse des globules rouges il est calcul partir de la formule suivante HCT en VGM X Nombre de GR 100 1 2 2 M thodes de dosage des param tres biochimiques du bilan martial et inflammatoire Tous les param tres du bilan martial du bilan inflammatoire et le Rs Tf ont t mesur s par des m thodes de dosage immunoturbidim triques automatis es sur l analyseur Roche Hitachi 902 Roche Diagnostics Systems l exception du fer s rique ci dessous Les instructions relatives l analyseur indiqu es dans la notice de chaque test et les instructions sp cifiques de l analyseur indiqu es dans le manuel d utilisateur ont t strictement respect es pour garantir le bon fonctionnement du test 1 2 2 1 Dosage du fer s rique Le fer s rique valeurs usuelles 10 6 28 3 umol L pour l homme 6 6 26 0 umol L pour la femme a t mesur par colorim trie a la FerroZine Roche Diagnostic Systems voir annexe 2 e Dans le premier temps un
170. mes enceintes le diagnostic diff rentiel des an mies le suivi de l efficacit et le meilleur ajustement du traitement l rythropo tine des insuffisants r naux ou de tout autre traitement visant augmenter l rythropo se la surveillance des transplantations de la moelle osseuse comme examen alternatif au Perls m dullaire dans l valuation du fer m dullaire 90 R f rences bibliographiques 1 10 11 12 13 14 15 16 Omar S Feki M et Kaabachi N Le m tabolisme du fer revue g n rale et r cents d veloppement Ann Biol Clin 2006 64 6 523 34 Lafond J L et Arnaud J M tabolisme du fer Rev Prant 2000 50 945 49 Shayeghi M Latunde Dada G O Oakhill J S Laftah A H Takeuchi K Halliday N Khan Y Warley A McCann F E Hider R C Frazer D M Anderson G J Vulpe C D Simpson R J and McKie A T Identification of an intestinal heme transporter Cell 2005 122 5 789 801 Gunshin H Starr C N Direnzo C Fleming M D Jin J Greer E L Sellers V M Galica S M and Andrews N C Cybrd1 duodenal cytochrome b is not necessary for dietary iron absorption in mice Blood 2005 106 8 2879 83 D apr s Pietrangelo A NEJM 2004 Mackenzie B and Garrick M D Iron Imports II Iron uptake at the apical membrane in the intestine Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2005 289 6 G981 6 Miret
171. mu N N Brewer B P and Blackmore K Iron metabolism mutant hbd mice have a deletion in Sec15l1 which has homology to a yeast gene for vesicle docking Genomics 2005 86 6 668 73 Li H and Qian Z M Transferrin transferrin receptor mediated drug delivery Medicinal Research Reviews 2002 22 3 225 250 Baker E Baker S M and Morgan E H Characterisation of non transferrin bound iron ferric citrate uptake by rat hepatocytes in culture Biochim Biophys Acta 1998 1380 1 21 30 91 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 Inman R S and Wessling Resnick M Characterization of transferrin independent iron transport in K562 cells Unique properties provide evidence for multiple pathways of iron uptake J Biol Chem 1993 268 12 8521 8 Thorstensen K Trinder D Zak O and Aisen P Uptake of iron from N terminal halftransferrin by isolated rat hepatocytes Evidence of transferrin receptor independent iron uptake Eur J Biochem 1995 232 1 129 33 Gelvan D Fibach E Meyron Holtz E G and Konijn A M Ferritin uptake by human erythroid precursors is a regulated iron uptake pathway Blood 1996 88 8 3200 7 Yang J Goetz D Li J Y Wang W Mori K Setlik D Du T Erdjument Bromage H Tempst P Strong R and Barasch J An iron delivery pathway mediated by a lipocalin Mol Cell 2002 10 5 1045 56
172. n exporter ferroportin at the plasma membrane of macrophages is enhanced by iron loading and down regulated by hepcidin Blood 2005 106 12 3979 84 Knutson M D Oukka M Koss L M Aydemir F and Wessling Resnick M Iron release from macrophages after erythrophagocytosis is up regulated by ferroportin I overexpression and down regulated by hepcidin Proc Natl Acad Sci U S A 2005 102 5 1324 8 McKie A T Latunde Dada G O Miret S McGregor J A Anderson G J Vulpe C D Wrigglesworth J M and Simpson R J Molecular evidence for the role of a ferric reductase in iron transport Biochem Soc Trans 2002 30 4 722 4 Latunde Dada G O Van der Westhuizen J Vulpe C D Anderson G J Simpson R J and McKie A T Molecular and functional roles of duodenal cytochrome B Dcytb in iron metabolism Blood Cells Mol Dis 2002 29 3 356 60 Ohgami R S Campagna D R Antiochos B Wood E B Sharp J J Barker J E and Fleming M D nm1054 a spontaneous recessive hypochromic microcytic anemia mutation in the mouse Blood 2005 106 10 3625 31 96 95 Hellman N E and Gitlin J D Ceruloplasmin metabolism and function Annu Rev Nutr 2002 22 439 58 96 Curzon G The effects of some ions and chelating agents on the oxidase activity of caeruloplasmin Biochem J 1960 77 66 73 97 Osaki S Johnson D A and Frieden E The possible significance of the ferrous oxidase activity of cer
173. n in C282Y C282Y hemochromatosis Blood 2005 105 11 4527 31 Chua A C Olynyk J K Leedman P J and Trinder D Nontransferrin bound iron uptake byhepatocytes is increased in the Hfe knockout mouse model of hereditary hemochromatosis Blood 2004 104 5 1519 25 Trinder D Oates P S Thomas C Sadleir J and Morgan E H Localisation of divalent metal transporter 1 DMT1 to the microvillus membrane of rat duodenal enterocytes in iron deficiency but to hepatocytes in iron overload Gut 2000 46 2 270 6 Deaglio S Capobianco A Cali A Bellora F Alberti F Righi L Sapino A Camaschella C and Malavasi F Structural functional and tissue distribution analysis of human transferrin receptor 2 by murine monoclonal antibodies and a polyclonal antiserum Blood 2002 100 10 3782 9 Idzerda R L Huebers H Finch C A and McKnight G S Rat transferrin gene expression tissue specific regulation by iron deficiency Proc Natl Acad Sci U S A 1986 83 11 3723 7 Robb A and Wessling Resnick M Regulation of transferrin receptor 2 protein levels by transferrin Blood 2004 104 13 4294 9 West A P Jr Bennett M J Sellers V M Andrews N C Enns C A and Bjorkman P J Comparison of the interactions of transferrin receptor and transferrin receptor 2 with transferrin and the hereditary hemochromatosis protein HFE J Biol Chem 2000 275 49 38135 8 Donovan A Lima C A Pink
174. ncentrations de la ferritine dans les trois groupes apres la subdivision du LPOISICING OLOUPE ciarn nl Figure 26 Les concentrations du r cepteur soluble de la transferrine dans les trois groupes apr s la subdivision du troisi me groupe Figure 27 Les valeurs de l index Rs Tf F dans les trois groupes apr s la subdivision du troisi me PLOUPC Sr rotin oi it oi cite Se 81 Figure 28 Algorithme pour le diagnostic diff rentiel entre an mie ferriprive an mie de maladie chronique et an mie de maladie chronique associ e une carence en fer 83 Intitul des tableaux Tableau 1 Exemples de teneur d aliments riches en fer h minique et non h minique 5 Tableau 2 La composition de la population tudi e et sa distribution selon l ge et le sexe 109 Tableau 3 les valeurs des param tres du bilan martial et la CRP chez le groupe t moin et les deux orones desuet ANCIEN SES ESSE tot SSDS cho 64 Tableau 4 les valeurs des coefficients de corr lations r des principaux param tres du bilan martial avec le Rs Tf chez le groupe t moin et les deux groupes de sujets an miques 65 Tableau 5 les valeurs des param tres du bilan martial et la CRP dans les deux sous groupes composants leeroupe 3 de Sujets ANENNQUES isolement 74 Tableau 6 les valeurs des coefficients de corr lations r des principaux param tres du
175. ner 42 patients ayant une carence martiale associ e la maladie chronique des 82 patients de d part Ces r sultats montrent la haute sp cificit du Rs Tf dans la mise en vidence d une carence en fer sous jacente une maladie inflammatoire ce qui le rend tr s avantageux par rapport aux anciens examens du bilan martial Enfin cette tude nous a permis de pr coniser le dosage du Rs Tf comme examen biochimique tr s prometteur pour l exploration de l rythropo se et le diagnostic diff rentiel des an mies chez l adulte avec un intervalle de valeurs normales de 2 65 4 39 mg L chez l homme et la femme m nopaus e et de 2 03 3 69 mg L chez la femme non m nopaus e dans l espoir d tablir un intervalle international de valeurs de r f rences Mots cl s fer s rique transferrine Rs Tf ferritine rythropoi se an mie ferriprive an mie inflammatoire bilan martial The exploration of erythropoiesis via the serum transferrin receptor sTfR level in the anemic patients Abstract The aim of the present study is to evaluate in a hospitalized population of anemic adults the diagnostic efficiency of the serum transferrin receptor STfR The objective is to distinguish iron deficiency anemia IDA from anemia of chronic disease ACD and the combined forms COMBI anemia Serum iron and serum ferritin are the most commonly used tests for the detection of iron deficiency however these values may not be re
176. notype pl iotropique alop cie infertilit m le hydroc phalie an mie hypochromique microcytaire due une large d l tion g nomique 41 6 Mb 94 Le g ne responsable de l an mie Steap3 a t identifi par clonage positionnel et son r le direct a t d montr par des exp riences de restauration de l an mie des souris nm1504 par l apport de Steap3 sauvage 11 Cette prot ine est une prot ine transmembranaire contenant deux histidines capables de lier une mol cule d h me et elle poss de une activit ferrir ductase NAD P H d pendante Elle est synth tis e dans les tissus h matopoi tiques et dans le foie adulte Dans le foie des souris nm1504 le d ficit en Steap3 est probablement compens par d autres r ductases 27 II 5 Les ferroxydases la c ruloplasmine et l h phaestine 11 5 1 C ruloplasmine CP La c ruloplasmine est une ferroxydase circulante produite par le foie La CP circulante facilite par sa fonction d oxydation du fer la sortie du fer des cellules Elle pr sentant une activit pphenylenediamine oxydase 95 Sa couleur vient des trois atomes de cuivre qu elle contient essentiels son activit ferroxydase Cette activit n a t reconnue qu en 1960 par l quipe de Curzon 96 puis par celle de Osaki Johnson et Frieden 97 La demi vie de la CP est de 5 5 jours dans le sang Dans l h patocyte deux transcrits de 3 7 et 4 2 kb sont issus du g ne cod
177. nsibilit fonctionnelle 0 6 mg L 5 7 nmol L La limite de quantification a t d termin e l aide des r sultats obtenus pour la sensibilit fonctionnelle La limite de quantification sensibilit fonctionnelle est d finie comme tant la concentration en CRP la plus basse donnant un coefficient de variation inter s rie lt 20 Elle a t d termin e l aide d chantillons a faible concentration en prot ine C r active Valeurs de r f rence Domaine de r f rence pour adultes 16 gt 5 mg L lt 47 6 nmol L Chaque laboratoire devra v rifier la validit de ces valeurs et tablir au besoin ses propres domaines de r f rence selon la population examin e 2 4 2009 05 V 2 Francais L exploration de l rythropo se via le taux s rique des r cepteurs solubles de la transferrine Rs Tf chez les sujets an miques R sum Par sa localisation privil gi e sur les cellules immatures rythro des de la moelle osseuse le r cepteur de la transferrine R TF joue un r le vital dans leur acquisition du fer qui sert la synth se de l h moglobine La concentration intracellulaire en fer r gule de mani re inverse la synth se du R TF Le r cepteur soluble Rs TF est une forme tronqu e monom rique du r cepteur membranaire provenant majoritairement des cellules rouges immatures rythroblastes Sa concentration est le reflet direct du statut martial et de l rythropo se Une an mie par d
178. ntralipid pas d interf rence significative jusqu un Moyenne CV Moyenne CV indice L de 1000 Il ny a pas de concordance satisfaisante entre la Echantillon umol L ug dL umol L ug dL turbidit et la concentration en triglyc rides Chez les patients recevant une suppl mentation en fer ou des m dicaments liant les m taux le fer contenu dans le m dicament peut g ner la r action Precinorm U 161 90 09 166 93 11 et conduire a l obtention de r sultats faussement bas Precipath U 236 132 08 247 138 06 Roche Hitachi 2 4 2010 01 V 14 Francais 12175711001V7 Transferrin ver 2 Tina quant a Transferrine version 2 Ref Flacon Contenu 1 REAGENT 6 x 18 mL 03015084 122 2 REAGENT 6 x 8 mL 1 REAGENT 6 x 50 mL 03015114 122 2 REAGENT 6 x 19 mL 1 REAGENT 4 x 250 mL 04580524 190 2 REAGENT 4 x 102 mL cobas R actifs utilisables sur les analyseurs Roche Hitachi suivants 917 MODULAR Lats P D Les analyseurs et les coffrets ne sont pas tous disponibles dans tous les pays Pour l utilisation sur d autres analyseurs veuillez contacter la soci t Roche Diagnostics de votre pays Fran ais Codes d application Pour les analyseurs Roche Hitachi 904 911 912 917 MODULAR P ACN 187 Pour les analyseurs Roche Hitachi MODULAR P MODULAR D ACN 231 a Sauf aux U S A Domaine dQ utilisation Test immunoturbidim trique pour la d termina
179. nu transferrin mie lev e r serves puis es Ferritin mie gt 30ug L et besoins rythropoi tique en fer tr s lev s Rs Tf tr s lev le doute persiste dans le bilan du troisi me groupe qui est difficile interpr ter cause de la ferritin mie qui est tr s lev e surcharge des r serves en fer elle est en contradiction avec les autres param tres Ce qui nous pousse discuter l homog n it de ce groupe 73 o Dans un deuxi me temps en fonction du taux du Rs Tf concentrations compar es a une valeur critique qui est consid r e comme la limite sup rieure de l intervalle des valeurs normales 5 mg L chez l homme et 4 4mzg L chez la femme Le groupe 3 est subdivis en deux sous groupes Sous groupe 1 n 40 ayant des valeurs du Rs Tf inferieures 5 mg l pour les hommes et inferieures 4 4 mg l pour les femmes Sous groupe 2 n 42 ayant des valeurs du Rs Tf sup rieures 5 mg l pour les hommes et sup rieures 4 4 mg l pour les femmes Les valeurs des param tres de ce groupe sont redistribu es et r capitul es de nouveau suivant cette division tableau 5 puis on a discut les m mes points de la premi re partie selon cette nouvelle division Tableau 5 les valeurs des param tres du bilan martial et la CRP dans les deux sous groupes composants le groupe 3 de sujets an miques les r sultats sont exprim s s par ment entre les deux sexes Groupe 3 AMC n 8
180. obtenus au laboratoire peuvent diff rer de ceux ci Pr cision La reproductibilit a t d termin e l aide d chantillons humains et de contr les selon un protocole interne n 21 Les r sultats suivants ont t obtenus Pr cision intra s rie Pr cision inter s rie 3 06 Echantillon Pool de s rum 0 62 0 017 4 77 humain 1 7 29 0 2 56 1 0 15 1 76 0 023 0 271 Pool de s rum 3 02 humain 2 35 5 19 43 229 0 121 1 42 Pool de s rum humain 3 0 022 0 259 Contr le 2 70 Niveau 1 31 8 6 25 73 5 Sensibilit analytique limite inf rieure de d tection Limite de d tection 0 068 mg L 0 8 nmol L La limite de d tection correspond au plus faible taux d analyte mesurable pouvant tre distingu de z ro Elle est obtenue par le calcul et correspond au plus faible taux de la gamme de standards 3 carts type standard 1 3DS pr cision intra s rie n 21 0 029 0 341 Contr le Niveau 2 Comparaison de m thodes Une comparaison du test Tina quant a sTfR de Roche sur un analyseur Roche Hitachi 917 x avec un test n ph lom trique pour la d termination du Rs TF y a conduit l obtention des corr lations suivantes mg L Passing Bablok R gression lin aire y 0 41 x 0 05 y 0 37 x 0 19 r 0 991 Nombre d chantillons analys s 56 Les concentrations des chantillons taient situ es entre 1 12 et 16 74 m
181. oche Hitachi 902 Dans de tr s rares cas la gammapathie en particulier de type IgM S1 Solution de NaCl 0 9 macroglobulin mie de Waldenstr m peut conduire des r sultats erron s 52 6 C f a s Proteins 02020200 0 Pour le diagnostic les r sultats doivent toujours tre confront s aux donn es de Pour les applications mentionn es ci dessus le calibrateur C f a s Proteins l anamn se du patient au tableau clinique et aux r sultats d autres examens doit tre dilu manuellement comme suit ACTION NECESSAIRE i Solution de Per Programmation de s quences de lavages sp ciaux sur les analyseurs Roche Hitachi certaines combinaisons de tests exigent la programmation St 1000 d tapes de lavage sp ciales Pour de plus amples informations se r f rer 1 50 la derni re version des listes de pr vention des contaminations Carry over evasion list ainsi qu au manuel de l utilisateur Pour les USA pour les tapes de lavage particuli res se r f rer la fiche de programmation Special Wash site web MyLabOnline et au manuel de utilisateur Le cas ch ant la programmation des lavages sp ciaux de pr vention des contaminations doit tre impl ment e avant Pour calculer les concentrations des standards de la courbe de calibration d effectuer le rapport de ce test calibration en six points multiplier les valeurs th oriques du C f a s Proteins par les facteurs multiplicateurs indiqu s ci d
182. on V 4 Transferrine La transferrine est la prot ine plasmatique qui assure le transport du fer dans l organisme Chaque mol cule de transferrine peut lier 2 ions Fe au maximum soit 1 25 mg de fer pour 1 gramme de transferrine Sa synth se est contr l e par le fer tissulaire augment e lorsqu il est bas et diminu e s il est lev Sa concentration subit aussi des variations circadiennes de 17 70 195 La transferrine est normale ou diminu e dans les tats inflammatoires Elle peut aussi diminuer dans la malnutrition 86 V 5 Le coefficient de saturation de la transferrine CST Le CST est galement consid r comme le reflet des stocks du fer de l organisme Il correspond au coefficient de liaison du fer a sa principale prot ine de transport En pratique il est consid r comme l indicateur du fer disponible pour l rythropo se 195 Il est calcul par le rapport du fer s rique avec la capacit totale de fixation de la transferrine La diminution du CST en dessous de 16 est un marqueur de la carence martiale un stade avanc e Il ne s agit toutefois pas d un param tre sensible de la carence en fer car il ne diminue que s il n y a plus de r serves de fer et que l h moglobine a diminu 195 Son principal int r t est d orienter vers une surcharge en fer lorsque sa valeur d passe 45 197 dans les conditions o la quantit de fer disponible est sup rieure la demande h moch
183. ons cliniques dans le diagnostic diff rentiel des an mies car sa concentration n est nullement influenc e par l inflammation ou l infection inversement aux param tres classiques du bilan martial La performance du diagnostic peut en suite s am liorer par le calcul du rapport Rs Tf Log de la ferritine Ce rapport est galement d un grand int r t 11 rapporte au diagnostic une information sur les besoins et les r serves en fer simultan ment Les objectifs de notre tude r alis e chez ces deux cat gories des sujets an miques sont multiples o Confirmer l utilit et la sp cificit de ce param tre et de l int grer dans la liste des param tres de routine du bilan martial pour le diagnostic diff rentiel des an mies qu on r alise quotidiennement au sein de nos laboratoires en Alg rie o Tenter d tablir un intervalle de r f rence pour les valeurs normales de ce marqueur chez l adulte pour les deux sexes Remplacer la coloration au bleu de Prusse sur un aspirat de moelle osseuse le Perls m dullaire qui est pr sentement la seule technique pour confirmer une d ficience v ritable en fer lors d une maladie chronique Un examen qui est tr s invasif traumatisant et co teux par le dosage du Rs TT Revue bibliographique Sur Le m tabolisme du fer I M tabolisme du fer lt 5 Du fait de sa capacit accepter ou donner des lectrons en fonction de son degr d ox
184. ont capables d oxyder le fer produisant chaque oxydation du peroxyde d hydrog ne compos r actif qui pourrait tre a l origme de la formation de l h mosid rine voir ci dessous Les sous unit s L seraient capables de former des centres de nucl ation de fer plus facilement et donc de stocker plus de fer Les cellules contenant de la ferritine riche en sous unit s L sont celles qui sont charg es du stockage du fer h patocytes macrophages Figure 9 Les ferritines riches en sous unit s H se retrouvent dans le c ur et le cerveau Figure 9 22 La ferritine s rique souvent utilis e en clinique pour valuer les stocks en fer ou l tat inflammatoire est compos e essentiellement de sous unit s L dont une partie est glycosyl e Elle est s cr t e par les h patocytes et les macrophages mais son mode de s cr tion est encore mal connu En effet la ferritine ne contient pas de site consensus de type peptide signal guidant la prot ine dans la voie de s cr tion Une tude r cente dans des lign es h patomateuses tend a montrer que la ferritine s rique est issue du m me transcrit que la ferritine cytoplasmique et que c est au moment de la traduction de cet ARNm unique sous la d pendance d un facteur s rique non encore identifi que se constitue un pool de prot ines a destin e cytoplasmique et un pool de prot ines a destin e de s cr tion 55 Enfin il existe une forme mitochondriale de la fer
185. orment deux lobes un lobe N terminale et un lobe C terminale Chaque lobe peut lier un ion ferrique Fe La conformation de la prot ine est sensible au pH a pH acide le site de liaison du fer s ouvre facilitant la lib ration du fer Le g ne pr sente un grand nombre de polymorphismes tol r s dans la population avec 3 isotypes majeurs nomm s B C et D 44 La transferrine est principalement produite l ge adulte par les hepatocytes 6500 mol cules de Tf par cellule 40 Il existe galement d autres sites d expression du g ne Tf le cerveau 83 mol cules cellule et les testicules 114 mol cules cellule 40 Pendant le d veloppement foetal le gene 7f est fortement exprim dans le muscle et les tissus non h patiques et non nerveux puis l expression diminue lors du d veloppement postnatal A l inverse dans le cerveau le g ne 7f est faiblement exprim a la naissance et l expression augmente avec l ge jusqu atteindre un plateau l ge adulte 45 Seule l expression h patique de Tf est modul e par le contenu en fer un r gime pauvre en fer augmente la transcription de Tf dans le foie sans modifier l expression extra h patique 40 De m me la synth se de Tf est induite par traitement aux glucocorticoides ou aux strog nes La Tf est galement une prot ine de la r ponse inflammatoire elle est diminu e par les cytokines Enfin s ajoute ces r gulations une r gulation
186. paired in the Hfe knockout mouse Proc Natl Acad Sci U S A 2002 99 8 5622 6 192 Kelleher T Ryan E Barrett S Sweeney M Byrnes V O Keane C and Crowe J Increased DMTI but not IREGI or HFE mRNA following iron depletion therapy in hereditary haemochromatosis Gut 2004 53 8 1174 9 193 Frazer D M and Anderson G J The orchestration of body iron intake how and where do enterocytes receive their cues Blood Cells Mol Dis 2003 30 3 288 97 194 Beyne Rauzy O An mie inflammatoire physiopathologie et prise en charge La Revue de m decine interne 2009 30 311 314 195 Herklotz R et Huber A Diagnostic de laboratoire des troubles du m tabolisme du fer Forum Med Suisse 2010 10 30 31 500 7 196 R zik S and Beguin Y Serum soluble transferrin receptor concentration is an accurate estimate of the mass tissue receptors Exp Hematol 2001 29 677 685 197 Balan V Baldus W Fairbanks V Michels V Burritt M and Klee G Screening for hemochromatosis a cost eff ectiveness study based on 12 258 patients Gastroenterology 1994 107 453 459 198 Vernet M Corberand J David V Deugnier Y Frey J Giraudet P Renversez J C et Sebahoun G Algorithmes de prescription recommand s pour le diagnostic d un d ficit et d une surcharge en fer Ann Biol Clin 2001 59 149 155 199 Kariger P K Stoltzfus R J Olney D Sazawal S Blanck R Tielsch J M
187. que chantillon mg dL x 0 01 g L g L x 100 mg dL Limites d utilisation interferences Crit re d acceptabilite recouvrement 10 par rapport la valeur initiale Ictere pas d interf rence significative jusqu un indice de 60 concentrations approximatives en bilirubine conjugu e et non conjugu e 60 mg dL ou 1026 mol L H molyse pas d interf rence significative jusqu un indice H de 1000 concentration approximative d hemoglobine 1 000 mg dL ou 621 umol L Lip mie Intralipid pas d interf rence significative jusqu un indice L de 500 Il ny a pas de concordance satisfaisante entre la turbidit et la concentration en triglyc rides Le facteur rhumato de ne g ne pas jusqu 1200 Ul mL Dans de tr s rares cas la gammapathie en particulier de type IgM macroglobulin mie de Waldenstr m peut conduire des r sultats erron s ll ny a pas d effet crochet jusqu 214 umol de transferrine L 17 g L ou 1700 mg dL Linfuence de 18 m dicaments fr quemment administr s a t test e in vitro aucune interf rence n a t observ e Pour le diagnostic les r sultats doivent toujours tre confront s aux donn es de l anamn se du patient au tableau clinique et aux r sultats d autres examens Facteurs de conversion mg dL x 0 126 mol L umol L x 7 96 mg dL Domaine de mesure Analyseur Roche Hitachi 902 Domaine de mesure 1 26 63 0 umol L 0 1 5 0 g
188. que dans les l gumes le riz Le fer non h minique est dans un premier temps r duit par la r ductase Dcytb Duodenal cytochrome b puis transport a travers la membrane apicale de l ent rocyte par le transporteur transmembranaire DMT 1 Figure 1 L implication de Dcytb dans l absorption intestinale de fer a r cemment t remise en cause par la cr ation de souris knock out KO Dcytb qui ne pr sentent pas de d ficience en fer 4 Les r serves en fer non alt r es chez ces souris pourraient s expliquer soit par une compensation de l activit r ductase par la production endog ne d ascorbate cette production est sp cifique de la souris on ne la retrouve pas chez l homme soit par la pr sence de mol cules antioxydantes dans le r gime alimentaire des souris soit enfin par la pr sence d une autre r ductase qui reste identifier aosorotiors lumi re intestinale plasma villosit in enterocyte E S duod num Figure 1 L absorption intestinale du fer Le fer est absorb au niveau du duod num par les enterocytes situ s au sommet des villosit s duod nales Dans la lumi re intestinale le fer non h minique est d abord r duit probablement par Dcytb puis transport par DMT1 Le fer h minique serait pris en charge par le transporteur HCP1 et d grad par l heme oxyg nase HO Dans l ent rocyte le fer peut soit
189. ranscriptionnelle dans les pr curseurs rythroides 121 122 Il a galement t d crit dans un mod le rp2 une atteinte c r brale due une accumulation de fer dans le cerveau chez ces souris 123 mais ce ph notype n est pas reproduit dans un autre mod le d invalidation du g ne rp2 124 Les souris Zrp1 n ont pas de ph notype d tectable laissant supposer qu IRP2 est capable de compenser pour la fonction d IRPI en conditions physiologiques 125 11 10 HFE Le gene HFE est situ sur le chromosome 6 en position 022 2 11 code pour une prot ine membranaire atypique de la famille des prot ines du complexe majeur d histocompatibilit CMH de classe I Comme toutes les prot ines du CMH I HFE a besoin de se lier la 62 microglobuline pour se replier correctement et pour se retrouver la surface des cellules Mais 1l semble d apr s sa structure tridimensionnelle qu elle soit incapable de pr senter un peptide comme les autres mol cules du CMH I 126 La prot ine HFE est galement capable de se lier RTf1 et interfere entre la liaison de RTfl et Tf Fe2 127 128 Figure 10 mais le r le fonctionnel de cette interaction au niveau de la captation du fer reste tr s controvers 129 Figure 10 Diagramme en ruban repr sentant le complexe HFE 82m RTf1 Tf 129 En vert est figur e la Tf et ses deux lobes N terminal et C terminal en jaune rouge orange RTf1 en bleu HFE en bleu clair la B2
190. receptor in the megaloblastic anemia of cobalamin deficiency Eur J Haematol 1992 49 246 50 176 Feelders R A Kuiper Kramer E P and van Eijk H G Structure function and clinical significance of transferrin receptors Clin Chem Lab Med 1999 37 1 10 177 Beguin Y Loo M R Zik S Sautois B Lejeune F Rorive G and Fillet G Early prediction of response to recombinant human erythropoietin in patients with the anemia of renal failure by serum transferrin receptor and fibrinogen Blood 1993 82 7 2010 6 178 Skikne B S Flowers C H and Cook J D Serum transferrin receptor a quantitative measure of tissue iron deficiency Blood 1990 75 9 1870 6 179 Cook J D Skikne B S and Baynes R D Serum transferrin receptor Annu Rev Med 1993 44 63 74 180 Ferguson B J Skikne B S Simpson K M Baynes R D and Cook J D Serum transferrin receptor distinguishes the anemia of chronic disease from iron deficiency anemia J Lab Clin Med 1992 119 385 90 181 Punnonen K Irjala K and Rajamaki A ron deficiency anemia is associated with high concentrations of transferrin receptor in serum Clin Chem 1994 40 5 774 6 182 Punnonen K Irjala K and Rajamaki A Serum transferrin receptor and its ratio to serum ferritin in the diagnosis of iron deficiency Blood 1997 89 3 1052 7 183 Petterson T Kivivuori S M and Siimes M A Is serum transferrin receptor useful for det
191. reh 53 1 1 2 Pr l vement et pr paration des chantillons 22 55 LZ S a E EEE A EE EAE 56 1 2 1 M thodes de dosage des param tres h matologiques 56 1 2 1 1 La num ration des globules rouges OR sss 56 LZl 2 Dosane de F CIO 10 0e 56 1 2 1 3 D termination du volume globulaire moyen VGM sss 57 1214 061 6 HCT ca paw giro cca ese snes anise 8 aca ERS 57 1 2 2 M thodes de dosage des param tres biochimiques du bilan martial et inflammatoire 57 12 21 DOS ASE du Aer SCLICQUC dant ae a os 57 L222 DOSE Ge la tran TONE EEE do EERE e 58 1 2 2 3 Calcul de la capacit totale de fixation de la transferrine 59 1 2 2 4 Calcul du coefficient de saturation en fer de la transferrine 59 2255s Dosage GE Nat TIME Se dss oie as ad mes este eae a ee nie orient 60 2 2 6 Dosage du r cepteur soluble de la transferrine 4 60 L2 Calcul d l 1mdex Ge Rsi ESS a dre ESRAR 61 12 28 Dosage d la prot ine C 1eacny 6 sa ea OAKES 62 I CIC ES RE dde cat tiene Lede banat Dorcel uen 63 III R sultats et discusSiONn 64 111 1
192. ression d HCP augmente l acquisition d h me par les cellules de fa on d pendante de la temp rature et saturable Ce transport d h me est aboli par traitement des cellules avec des siRNA dirig s contre HCPI Enfin les taux d ARNm Hcp seraient augment s chez des souris en hypoxie 3 11 6 4 FLVCR Le r cepteur FLVCR pour Feline Leukemia Virus subgroup C Receptor est utilis par un virus qui provoque une aplasie des GR chez les f lins avec absence de CFU E et de prog niteurs rythro des Cette prot ine est pr sente la surface des prog niteurs rythro des mais l expression de son g ne est r prim e dans la phase terminale de l rythropo se Cette perm ase a t identifi e tr s r cemment comme permettant l export de l heme des prog niteurs rythroides 26 Le traitement d une lign e rythro de cellules K562 par des anticorps bloquants dirig s contre FLVCR a montr que la pr sence de FLVCR est essentielle la diff renciation de cette lign e 26 Le r le de FLVCR dans les prog niteurs rythro des n est pas compl tement connu mais 1l pourrait agir pour pr venir l accumulation toxique d h me La forte expression du g ne codant pour cet exporteur de l h me dans des lign es cellulaires intestinale CaCo2 et h patique HepG2 laisse supposer qu il pourrait jouer un r le dans ces types cellulaires 26 II 7 L h me oxygenase HO enzyme de d gradation de
193. rine souris KO lactoferrine aucune perturbation du m tabolisme du fer n est observ e 51 11 1 3 Lipocaline neutrophile NGAL ou 24p3 La lipocaline neutrophile NGAL Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin est une petite prot ine soluble de 25kDa 52 Elle est pr sente dans les granules de neutrophiles et dans les cellules pith liales en r ponse a des signaux inflammatoires NGAL a t initialement impliqu e dans la diff renciation cellulaire la tumorig n se et l apoptose Son r le dans ces differents m canismes reste a ce jour mal connu En 2002 une quipe am ricaine a permis d tablir que NGAL est capable de se lier a des sid rophores contenant du Fe et charg s n gativement Contrairement la Tf et a la lactoferrine NGAL n est pas capable de se lier aux ions fer directement car ils sont charg s positivement La liaison de NGAL a des sid rophores serait sp cifique aux sid rophores de type catecholate 53 Ainsi NGAL produite dans une situation d inflammation serait capable de d tourner le fer utilis par les bact ries et essentiel a leur survie elle aurait par cette propri t une action compl mentaire a la lactoferrine Chez la souris la prot ine Ngal est retrouv e dans un compartiment intracellulaire de prog niteurs pith liaux du rein diff rent de celui o l on retrouve la Tf 20 Des tudes de transport du complexe lipocaline neutrophile sid rophore ont montr qu il ex
194. ritine impliqu e dans l accumulation de fer retrouv e dans les an mies sid roblastiques voir Erythropo se et synth se de l h moglobine 56 Cette troisi me ferritine cod e par un gene de l ADN nucl aire poss de le m me site ferroxydase que la ferritine H et un site d export vers la mitochondrie 57 L h mosid rine se trouve dans les tissus surcharg s en fer elle est issue de la d gradation de la ferritine dans des lysosomes Les lysosomes contenant de l h mosid rine sont appel s sid rosomes C est l h mosid rine que l on d tecte lorsqu on fait une coloration de Perls au bleu de Prusse L ARNm de la ferritine contient dans sa r gion S UTR un IRE Cet l ment de r gulation est reconnu par les prot ines IRP produites en situation de d ficience en fer qui se fixent sur l IRE emp chant la traduction de la ferritine voir Syst me IRP IRE La ferritine H est galement augment e par le fer par une activation de la transcription de son g ne 58 Les cytokines inflammatoires entra nent une production plus importante de ferritine par augmentation de la transcription du g ne codant pour la ferritine H et de la traduction des ARNm des ferritines H et L 59 60 Ainsi une augmentation de la ferritine s rique n est pas forc ment li e une augmentation des r serves en fer mais peut traduire dans les syndromes inflammatoires une action directe des cytokines sur la synth
195. rme a de 2 9 kb et une forme de 2 5kb Il est probable que la forme qui ne poss de pas les exons 1 2 et 3 repr sente une forme intracellulaire soluble du r cepteur La forme a est majoritairement exprim e dans le foie et galement dans les pr curseurs rythro des et les cellules duod nales cryptes et villosit s 159 alors que la forme B est faiblement exprim e dans tous les tissus 158 R Tf2 est galement exprim par un grand nombre de lign es cellulaires d riv es de tumeurs solides de diff rents tissus 39 Plusieurs quipes ont montr que la quantit de prot ine R Tf2 tait augment e in vitro par traitement de lign es cellulaires l holoTf 39 41 mais pas apr s traitement au fer non 116 la Tf 40 De plus in vivo lors d une surcharge en fer exp rimentale r gime riche en fer ou pathologique souris KO Hfe souris thalass miques les taux de R Tf2 sont galement augment s 41 Cette augmentation de quantit de prot ine R Tf2 n est pas li e une augmentation de PARNm 41 mais serait due une augmentation de la demi vie de la prot ine 40 Cette r gulation de R Tf2 par le fer est diff rente de celle de R Tfl En effet l ARNm R Tf2 contrairement celui de R Tf1 ne poss de pas de s quence IRE D autre part alors que R Tf1 est r gul n gativement par le fer la surcharge en fer augmente la quantit de R TTf2 Le R Tf2 est homologue R Tfl 45 d identit et 66 de
196. romatose rythropo se inefficace syndrome my lodysplasique an mie aplastique Un syndrome inflammatoire se traduit aussi par une baisse du CST Cependant dans ce cas la diminution du fer plasmatique n est pas due une carence en fer V 6 La ferritin mie La ferritin mie est en l absence de maladie inflammatoire directement proportionnelle la quantit de r serves en fer de l organisme Son dosage est consid r comme le meilleur marqueur pour explorer ces r serves L augmentation de 1 ug L de la concentration en ferritine correspond au stockage de 8 mg de fer Cette relation n est plus valable au del de 1000 ug L car la ferritine tissulaire s agr ge alors sous forme d h mosid rine insoluble 198 Donc elle reste un indicateur de choix du stock en fer et le dosage de r f rence pour le diagnostic des d ficits ou des surcharges en l absence de syndrome inflammatoire Le seuil diagnostique g n ralement admis est gt 15 ug L cependant les seuils utilis s varient entre 12 ug L et 30 ug L selon les tudes Dans les situations inflammatoires chroniques les seuils diagnostiques peuvent tre augment s 199 en g n rale autour de 100 ug L V 7 Le r cepteur soluble de la transferrine Rs Tf Le Rs Tf est alors un marqueur tr s utile dans le diagnostic des an mies Sa concentration plasmatique est proportionnelle la quantit de r cepteurs pr sents la surface des cellules h matopo tiques
197. ropoi se qui est la plus grande consommatrice de fer pour son incorporation dans l h moglobine On peut d finir trois stades d rythropo se au cours du d veloppement o l rythropo se primitive qui a lieu dans les lots sanguins du sac vitellin au 7 jour de vie embryonnaire chez la souris Cette rythropo se est ind pendante d un signal rythropo tine EPO et conduit la formation de larges rythroblastes poss dant un noyau appel s m galoblastes o l rythropo se d finitive est marqu e par une forte prolif ration des prog niteurs rythro des dans le foie foetal 10 jour de gestation chez la souris o l rythropo se adulte qui se caract rise par la migration des CSH du foie foetal vers la moelle osseuse Les CSH s engagent dans une voie de diff renciation my lo de pour former un progeniteur multipotent appel CFU GEMM Colony Forming Unit Granulocyte Erythrocyte Megacaryocyte Macrophage L engagement de ce prog niteur multipotent dans la voie rythro de d pend d une combinaison de facteurs de transcription et en particulier du facteur GATA 1 Les CFU GEMM se diff rencient alors en prog niteurs restreints rythroides pr coces BFU E pour Burst Forming Unit Erythroid nomm s ainsi pour leur capacit g n rer de larges colonies rythroides in vitro voir Figure 3B puis en prog niteurs rythroides tardifs CFU E pour Colony Forming Unit Erythroid nomm
198. s les param tres courants d exploration martiale sont inefficaces pour mettre en vidence cette carence En effet ils subissent des variations contradictoires ce qui rend le bilan martial ininterpr table c est le cas ou la ferritine se comporte simultan ment comme un marqueur de carence et une prot ine de la phase aigu de l inflammation la ferritin mie est normale ou lev e Le dosage du Rs TF trouve ici l une de ses principales applications cliniques car sa concentration n est pas influenc e par l inflammation Pour mettre en vidence l int r t de ce nouveau marqueur cette tude a t r alis e sur 60 sujets sains groupelou t moin et 132 malades adultes hospitalis s au niveau du CHU de S tif 50 patients souffrant d an mie ferriprive groupe 2 82 patients souffrant de maladies chroniques associ e une an mie groupe 3 Tous ont b n fici d un bilan martial plus le dosage du Rs Tf Les r sultats obtenus taient concluants la bonne corr lation du Rs Tf avec les autres param tres du bilan montre sa sensibilit au statut martial Le taux du Rs Tf est revenu lev chez la totalit des malades du groupe 2 attestant une augmentation des besoins de l organisme en fer La diff rence interindividuelle du taux de Rs Tf dans le groupe 3 nous a permis de s lectionner 42 patients ayant une carence martiale associ e la maladie chronique des 82 patients de d part Ces r sultats montrent la haute sp cificit
199. s th rapeutiques dans un panel de m dicaments fr quemment administr s 14 15 Dans de tr s rares cas la gammapathie en particulier de type IgM macroglobulin mie de Waldenstr m peut conduire a des r sultats erron s Bien que des mesures aient t prises pour minimiser les interf rences dues aux anticorps humains dirig s contre les anticorps de souris les chantillons de patients ayant re u des pr parations d anticorps monoclonaux de souris des fins th rapeutiques ou diagnostiques peuvent donner des r sultats erron s Pour le diagnostic les r sultats doivent toujours tre confront s aux donn es de l anamn se du patient au tableau clinique et aux r sultats d autres examens ACTION N CESSAIRE Programmation de s quences de lavages sp ciaux sur les analyseurs Roche Hitachi certaines combinaisons de tests exigent la programmation Roche Hitachi cobas d tapes de lavage sp ciales Pour de plus amples informations se r f rer la derni re version de la liste de pr vention des contaminations Carry over evasion list ainsi qu au manuel de l utilisateur Pour les USA pour les tapes de lavage particuli res se r f rer la fiche de programmation Special Wash site web MyLabOnline et au manuel de l utilisateur Le cas ch ant la programmation des lavages sp ciaux de pr vention des contaminations doit tre impl ment e avant d effectuer le rapport de ce test Limites et intervalles Domain
200. s influenc par la pr sence de maladies inflammatoires d affections h patiques aigu s et de tumeurs malignes il permet de diff rencier entre an mie des maladies chroniques AMC et an mie ferriprive AF Des taux lev s de Rs TF se rencontrent galement en cas de polyglobulie d anemie h molytique de thalassemie d ictere h molytique cong nital de Minkowski Chauffard ou sph rocytose h r ditaire de dr panocytose d anemie m galoblastique de my lodysplasie et de d ficit en vitamine B42 Des taux lev s de Rs TF se rencontrent au cours de la grossesse lorsqu il y a une carence en fer fonctionnel Les traitements par l rythropo tine humaine recombinante rhEPO peuvent tre suivis par des dosages de Rs TF Param tre Modifications AF AMC AF AMC Ferritine r serves de fer T OU TIBC Rs TF statut martial t 1 1 ou Fer serique statut martial 4 Rs TF fonctionnel T 1 carence martiale J diminution t augmentation inchang Principe Test immunoturbidim trique sur particules de latex e Addition de R1 tampon l chantillon Addition de R2 anticorps anti Rs TF fixes sur des particules de latex et d clenchement de la r action Les anticorps anti Rs TF r agissent avec l antig ne de l chantillon avec formation de complexes antig nes anticorps Lagglutination qui en r sulte est mesur e par turbidim trie 2007 05 V 7 Fran ais R actifs composition et concentr
201. scence de type sandwich Les trousses de r actifs Tinaquant STTR de Roche Diagnostics et STfR IdeA IT de Orion Diagnostica sont des essais immunoturbidim triques avec applications sur des analyseurs de type Hitachi mais la trousse STfR IdeA IT peut aussi tre utilis e sur le n ph l metre IMMAGE de la compagnie Beckman Coulter 41 L automatisation a permis de r duire le temps d analyse de quelques heures avec les m thodes ELISA environ 10 minutes 167 Les coefficients de variation inter essais sont inf rieurs a 10 pour toutes les techniques automatis es Les m thodes varient entre elles par le type d anticorps polyclonal ou monoclonal par la nature du standard r cepteur intact libre r cepteur complex a la transferrine isol du s rum ou Rs Tf isol de placenta par le type de marquage et par le signal mesur 146 Malgr une bonne corr lation entre les m thodes les r sultats obtenus par les diff rentes trousses sont tres diff rents entre eux conduisant a des valeurs de r f rence et des seuils pathologiques variables Le d veloppement d un standard international pour la mesure du Rs Tf aiderait a la concordance des m thodes et l utilisation en clinique de ce test Actuellement notre connaissance aucun laboratoire clinique en Alg rie n offre ce dosage D apr s un laboratoire qui travaille en collaboration avec un laboratoire en France qui offre ce test Le co t du test est relativement
202. se de ferritine Enfin 1l est noter que l expression du g ne codant pour la ferritine H est diminu e par l oncog ne c myc 61 23 II 3 Les transporteurs membranaires de fer DMT1 Nramp1 ferroportine IL 3 1 DMT1 DMTI pour Divalent Metal Transporter 1 est appel aussi Divalent Cation Transporter 1 DCT1 62 Nramp2 Natural resistance associated macrophage protein 2 63 car il est homologue 78 Nrampl et Slclla2 Solute carrier family 11 de la famille des transporteurs d ions m tal divalents coupl s aux protons DMTI est une prot ine a 12 domaines transmembranaires permettant le transport d un grand nombre de cations divalents au moins in vitro Fe Mn Ni Co Cd Zn gr ce un gradient de protons Cette prot ine ne peut donc transporter le fer qu la faveur d un pH acide lumi re duod nale contenant des sucs gastriques ou endosome acidifi Elle n est pas capable de transporter le fer ferrique Fe ce qui n cessite la pr sence d une ferrir ductase en amont de DMT1 car le Fe soluble est rare car toxique DMTI est un transporteur pr sent de fa on ubiquiste mais dont l ARNm est pr sent en grande quantit dans le duod num de souris d ficientes en fer et dans le rein 64 Le r le de DMTI a pu tre mis en vidence par l tude de mutants naturels chez la souris et le rat la souris mk pour microcytic anemia et le rat Belgrade b pr sentent une an mie microcytaire
203. se situer dans les limites de confiance d finies Chaque laboratoire devra tablir la proc dure suivre si les r sultats se situent en dehors de ces limites Se conformer la r glementation gouvernementale et aux directives locales en vigueur relatives au contr le de qualit Calcul des r sultats Lanalyseur calcule automatiquement la concentration en analyte de chaque chantillon Facteurs de conversion mg L x 9 52 nmol L mg dL x 95 2 nmol L mg L x 0 1 mg dL mg dL x 10 mg L mg dL x 0 01 g L g L x 100 mg dL Limites d utilisation interf rences Crit re d acceptabilite recouvrement 10 de la valeur initiale pour une concentration en CRP de 5 0 mg L 47 6 nmol L Ictere pas d interf rence significative jusqu un indice de 60 concentrations approximatives de bilirubine conjugu e et non conjugu e 60 mg dL ou 1026 mol L H molyse pas d interference significative jusqu un indice H de 1000 concentration approximative d h emoglobine 1000 mg dL ou 622 mol L Lip mie Intralipid pas d interference significative jusqu un indice L de 1000 Il n y a pas de concordance satisfaisante entre la turbidit et la concentration en triglycerides Le facteur rhumato de ne g ne pas jusqu 1200 Ul mL Effet crochet pas d interf rences jusqu des concentrations en CRP de 1200 mg L 11424 nmol L M dicaments aucune interference n a t trouv e aux concentration
204. sponibles dans le commerce au moment du test les tubes de pr l vement des diff rents fabricants n ont pas tous t test s Les syst mes de pr l vement du sang de divers fabricants peuvent contenir diff rents mat riaux pouvant dans certains cas influencer le r sultat du test En cas d utilisation de tubes primaires syst mes de pr l vement du sang suivre les instructions donn es par le fabricant Les chantillons qui contiennent un pr cipit doivent tre centrifuges avant analyse Stabilit 11 jours entre 15 et 25 C 2 mois entre 2 et 8 C 3 ans entre 15 et 25 C Mat riel fourni Voir paragraphe R actifs composition et concentrations Mat riel auxiliaire n cessaire e Calibrateurs Preciset Serum proteins Ref 11876406 216 C f a s Calibrator for automated systems Proteins R f 11355279 160 11355279 216 e Contr les CRP T Control N R f 20766321 322 Precinorm Protein par ex R f 10557897 122 Precipath Protein par ex R f 11333127 122 e Solution de NaCl 0 9 e Equipement habituel de laboratoire Mode op ratoire Pour garantir le bon fonctionnement du test se conformer aux instructions relatives a l analyseur utilis indiqu es dans la pr sente notice Pour les instructions sp cifiques de l analyseur se r f rer au manuel d utilisation appropri En cas d utilisation de tests non valid s par Roche les performances analytiques ne sont pas garanties et doivent tr
205. syst mes de pr l vement du sang de divers fabricants peuvent contenir diff rents mat riaux pouvant dans certains cas influencer le r sultat du test En cas d utilisation de tubes primaires syst mes de pr l vement du sang suivre les instructions donn es par le fabricant Les chantillons qui contiennent un pr cipit doivent tre centrifug s avant analyse Stabilit 3 jours entre 15 et 25 C 7 jours entre 2 et 8 C 4 semaines entre 15 et 25 C une seule cong lation possible Mat riel fourni Voir paragraphe R actifs composition et concentrations Mat riel auxiliaire n cessaire e Calibrateur Preciset sTfR R f 12148331 e Contr les sTfR Control Set R f 12148340 e Solution de NaCl 0 9 e _ Equipement habituel de laboratoire Mode op ratoire Pour garantir le bon fonctionnement du test se conformer aux instructions relatives a l analyseur utilis indiqu es dans la pr sente notice Pour les instructions sp cifiques de l analyseur se r f rer au manuel d utilisation appropri En cas d utilisation de tests non valid s par Roche les performances analytiques ne sont pas garanties et doivent tre d finies par l utilisateur 174 Roche Hitachi STfR Tina quant a R cepteur soluble de la transferrine Rs TF Calibration Tra abilit la m thode a t standardis e par rapport une pr paration de r f rence interne de Roche S1 Solution de NaCl 0 9 S2 6
206. t quasiment en circuit ferm 1 L apport doit strictement compenser les pertes un d s quilibre entra nera plus ou moins long terme une carence ou une surcharge 1 1 1 Absorption intestinale du fer Le fer alimentaire est absorb au niveau de la partie proximale de l intestin gr le le duod num Le duod num est constitu de villosit s et de cryptes Les cellules de la villosit les ent rocytes sont responsables de l absorption intestinale du fer Elles sont issues de la diff renciation de cellules souches situ es au niveau de la crypte et acqui rent leurs propri t s absorptives au cours de leur migration le long de la villosit Les ent rocytes s nescents sont exfoli s dans la lumi re intestinale Figure 1 On estime que l pith lium intestinal se renouvelle ainsi en 3 5 jours 2 Le contenu en fer des aliments est tr s variable Tableau 1 Dans les pays d velopp s le r gime alimentaire contient en moyenne 10 20 mg de fer par jour Sur ces 10 20 mg seuls 10 seront ensuite absorb s au niveau du duod num 2 Cette faible proportion est due d une part une r gulation de l absorption en fonction des besoins voir plus loin et d autre part la biodisponibilit du fer qui est tr s variable suivant les aliments Le fer pr sent dans l alimentation est soit li l h me forme h minique facilement assimilable 15 35 sont absorb s soit sous forme non h minique essent
207. ter les infections intra ut rines en cas de rupture pr matur e de membrane faire la diff renciation entre forme active et forme inactive d une maladie avec infection concomitante par ex chez les patients atteints de lupus ryth mateux diss min ou de rectocolite h morragique appr cier l activit de maladies rhumatismales et l efficacit de traitements anti inflammatoires d tecter un stade pr coce des complications postop ratoires infection de plaie thrombose pneumonie et faire la diff renciation entre infection et r action de rejet apr s une transplantation de moelle osseuse Le suivi postop ratoire des taux de CRP de patients peut permettre de reconnaitre des complications inattendues persistance de taux lev s ou augmentation des taux La mesure des variations de la concentration de CRP apporte des informations diagnostiques utiles quant au caract re aigu et la gravit de la maladie Elle permet galement d tablir la g n se de la maladie La persistance de concentrations de CRP s riques lev es est habituellement un signe de mauvais pronostic et indique g n ralement la pr sence d une infection non contr l e Principe 10 Test immunoturbidim trique sur particules de latex La CRP humaine s agglutine sur les particules de latex recouvertes d anticorps monoclonaux anti CRP Les amas de particules sont d termin s par turbidim trie R actifs composition et concentrations
208. tion L amplitude de cette pulsation est directement proportionnelle au volume cellulaire Le nombre de pulsation correspond au nombre de cellules d tect Sur un dispositif lectronique les r sultats sont multipli s par le facteur de dilution pour obtenir les r sultats finaux 1 2 1 2 Dosage de l H moglobine Hb L h moglobine valeurs normales 13 0 17 8 g dl pour l homme 12 1 16 4 g dl pour la femme a t d termin e a partir d une adaptation de la r action de Drabkin Un volume de 25 ul du sang total aspir est soumis a une s rie de dilution 1 400 avec des articles en verre de classe A avec un agent h molytique solution hypotonique qui clate les h maties et lib re leurs contenus en h moglobine pour obtenir a la fin une suspension de globules blancs et l h mogilobine La m me suspension est utilis e pour la d termination des globules blancs et le dosage de l h moglobine La concentration d hemoglobine est d termin e par la conversion l h moglobine en hemiglobine cyanure HiCN et mesure de l absorbance 535 nm conform ment aux recommandations NCCLS H15 A2 et ICSH La concentration d h moglobine est calcul e l aide d un coefficient d absorption qui a t m moris lors de la calibration de l analyseur 56 1 2 1 3 D termination du volume globulaire moyen VGM Les valeurs normales du VGM sont du 80 100 fl pour l homme et la femme A partir de la m
209. tion of new immunoenzymometric assay for measuring soluble transferrin receptor to detect iron deficiency in anemic patients Clin Chem 1997 43 1641 46 168 Allen J Backstrom K R Cooper J A et al Measurement of soluble transferrin receptor in serum of healthy adults Clin Chem 1998 44 1 35 9 169 Ahluwalia N Diagnostic utility of serum transferrin receptors measurement in assessing iron status Nutr Rev 1998 56 133 41 170 Maes M Bosmans E Scharp S et al Components of biological variation in serum soluble transferrin receptor relationships to serum iron transferrin and ferritin concentrations and immune and haematological variables Scand J Clin Lab Invest 1997 57 31 41 171 Kuiper Kramer E P A Baerts W Bakker R Van Eyck J Van Raan J and Van Eijk H G Evaluation of the iron status of the newborn by soluble transferrin receptors in serum Clin Chem Lab Med 1998 36 17 21 172 Worwood M Serum transferrin receptor assays and their application Ann Clin Biochem 2002 39 221 30 173 Flowers C H Skikne B S Covell A M and Cook J D The clinical measurement of serum transferrin receptor J Lab Clin Med 1989 114 368 77 101 174 Huebers H A Beguin Y Pootrakul P Einspahr D and Finch C A Intact transferrin receptors in human plasma and their relation to erythropoiesis Blood 1990 75 1 102 7 175 Carmel R and Skikne B S Serum transferrin
210. tion quantitative in vitro de la transferrine dans le s rum et le plasma humains sur les automates de chimie clinique de Roche Caract ristiques 2 3 45 La transferrine est une glycoprot ine d un poids mol culaire de 79 570 daltons Elle est constitu e d une cha ne polypeptidique laquelle sont li es par des liaisons N glucosidiques deux cha nes d oligosaccharides Il existe de nombreuses isoformes La vitesse de synth se de la transferrine dans le foie peut tre modifi e en fonction des besoins et des r serves en fer de l organisme La transferrine est la prot ine de transport du fer dans le s rum En cas de d ficit en fer le degr de saturation de la transferrine semble tre un indicateur extr mement sensible d un appauvrissement fonctionnel en fer Le taux de ferritine est diminu en cas de diminution des r serves de fer En cas d hyposideremie un d ficit en fer peut tre exclu si le taux s rique de transferrine est abaiss comme c est le cas dans les inflammations Ou plus rarement lors de d ficit en acide ascorbique Pour le d pistage d une h mochromatose h r ditaire le degr de saturation de la transferrine apporte plus d informations sur le g notype homozygote que la ferritine Le traitement d une an mie par de l rythropo tine chez des patients atteints d insuffisance r nale n est efficace que si les r serves de fer dans l organisme sont suffisantes Le meilleur moyen de con
211. tous les examens biologiques ont t r alis s en triplicata chaque test est r alis en trois exemplaires et les valeurs qu on a utilis es dans les Statistiques sont des moyennes de ces triplicatas moyenne de trois r p tions du m me test 55 1 2 M thodes 1 2 1 M thodes de dosage des param tres h matologiques L h mogramme la num ration formule sanguine a t r alis e par un analyseur d h matologie multiparam tre Medonic CA620 a 20 param tres Son principe de fonctionnement selon le guide d utilisateur User s manual est 1 2 1 1 La num ration des globules rouges GR Les valeurs normales 4 4 6 10 GR mm pour l homme 3 8 5 2 10 GR mm pour la femme leurs num ration s effectue automatiquement en deux tapes Un volume de 25 ul du sang total aspir est soumis une s rie de dilutions 1 40 000 avec des articles en verre de classe A avec un agent de dilution qui est une solution isotonique pour obtenir la suspension finale num rer La num ration s effectue dans une chambre de comptage par imp dance lectronique Les globules rouges en suspension charg s positivement sont num r s lors de leurs migrations travers un micro orifice quip d une part et d autre de deux lectrodes sous l action d un courant lectrique appliqu entre les lectrodes cette migration g n re un potentiel lectrique enregistr sous forme d une pulsa
212. tr le est la d termination du coefficient de saturation de la transferrine au cours du traitement Associ e au dosage de la ferritine la d termination du coefficient de saturation de la transferrine permet d appr cier la surcharge en fer chez les patients atteints d affections h patiques chroniques ll existe diff rentes m thodes de dosage de la transferrine comme la n ph lom trie immunodiffusion radiale et la turbidim trie Le test Transferrine de Roche repose sur le principe d agglutination immunologique Principet 8 Test immunoturbidim trique e Le r actif R1 tampon est ajout l chantillon e Addition de R2 anticorps anti transferrine NaCl et d clenchement de la r action Les anticorps anti transferrine r agissent avec l antig ne de l chantillon avec formation de complexes antig nes anticorps Lagglutination qui en r sulte est mesur e par turbidim trie Laddition de poly thyl neglycol PEG permet d atteindre rapidement le point final et augmente la sensibilit R actifs composition et concentrations R1 Tampon phosphate 55 mmol L pH 7 2 NaCl 25 mmol L poly thyl neglycol 5 conservateur R2 Anticorps de lapin anti transferrine humaine d pend du titre de l antis rum chlorure de sodium 100 mmol L conservateur Pr cautions d emploi et mises en garde Pour diagnostic in vitro Observer les pr cautions habituelles de manipulation en laboratoire 2006 07 V 7 Fran
213. uhn L C Molecular control of vertebrate iron metabolism mRNA based regulatory circuits operated by iron nitric oxide and oxidative stress Proc Natl Acad Sci USA 1996 93 8175 82 154 Addess K J Basilion J P Klausner R D Rouault T A and Pardi A Structure and dynamics of the iron responsive element RNA implications for binding of the RNA by iron regulatory binding proteins J Mol Biol 1997 274 72 83 155 Kohgo Y Nishisato T Kondo H Tsushima N Niitsu Y and Urushizaki I Circulating transferrin receptor in human serum Br J Haematol 1986 64 277 81 156 Boldt D H New perspectives on iron an introduction Am J Med Sci 1999 318 207 12 157 Ouyang Q Bommakanti M and Miskimins W K A mitogen responsive promoter region that is synergistically activated through multiple signalling pathways Mol Cell Biol 1993 13 3 1796 804 100 158 Kawabata H Yang R Hirama T Vuong P T Kawano S Gombart A F and Koeffler H P Molecular cloning of transferrin receptor 2 A new member of the transferrin receptor like family J Biol Chem 1999 274 30 20826 32 159 Kawabata H Nakamaki T Ikonomi P Smith R D Germain R S and Koeffler H P Expression of transferrin receptor 2 in normal and neoplastic hematopoietic cells Blood 2001 98 9 2714 9 160 Camaschella C Roetto A Cali A De Gobbi M Garozzo G Carella M Majorano N Totaro A and Gasparin
214. uiste ALASI dont l expression g nique est r prim e par l h me Cette tape est l tape limitante de la biosynth se de heme Figure 6 Des mutations du g ne eALAS situ en Xp11 21 entra nent chez l homme une an mie sid roblastique li e au chromosome X Chez ces patients le fer ne peut tre incorpor dans l h me et s accumule dans la mitochondrie LALA est ensuite export de la mitochondrie L assemblage du tetrapyrrole et la d carboxylation des cha nes auxiliaires ont lieu dans le cytosol Les tapes finales de synth se de l h me se d roulent dans la mitochondrie avec notamment l incorporation du fer par la ferroch latase Figure 6 Des mutations dans les g nes codant pour les enzymes impliqu es dans les tapes finales de la synth se de l h me conduisent l accumulation de porphyrines Il existe ainsi plusieurs formes de porphyries li es la d ficience de diff rentes enzymes les porphyries les plus fr quentes sont li es des mutations dans le g ne codant pour l uroporphyrinogen d carboxylase c est la porphyrie cutan e et des mutations dans le g ne de la ferroch latase c est la porphyrie rythropo tique Dans les deux cas accumulation de porphyrines dans la peau ou dans les tissus sous jacents entra ne une photosensibilisation accrue Il est noter que r cemment a t identifi un exporteur de l h me appel FLVCR Pour Feline Leukemia Virus subgroup C
215. uloplasmin in normal human serum J Biol Chem 1966 241 12 2746 51 98 Fortna R R Watson H A and Nyquist S E Glycosyl phosphatidylinositol anchored ceruloplasmin is expressed by rat Sertoli cells and is concentrated in detergent insoluble membrane fractions Biol Reprod 1999 61 4 1042 9 99 Patel B N and David S A novel glycosylphosphatidylinositol anchored form of ceruloplasmin is expressed by mammalian astrocytes J Biol Chem 1997 272 32 20185 90 100 Gitlin J D Transcriptional regulation of ceruloplasmin gene expression during inflammation Biol Chem 1988 263 13 6281 7 101 Patel B N Dunn R J Jeong S Y Zhu Q Julien J P and David S Ceruloplasmin regulates iron levels in the CNS and prevents free radical injury J Neurosci 2002 22 15 6578 86 102 Yamamoto K Yoshida K Miyagoe Y Ishikawa A Hanaoka K Nomoto S Kaneko K Ikeda S and Takeda S Quantitative evaluation of expression of iron metabolism genes in ceruloplasmin deficient mice Biochim Biophys Acta 2002 1588 3 195 202 103 Harris Z L Durley A P Man T K and Gitlin J D Targeted gene disruption reveals an essential role for ceruloplasmin in cellular iron efflux Proc Natl Acad Sci U S A 1999 96 19 10812 7 104 Cherukuri S Potla R Sarkar J Nurko S Harris Z L and Fox P L Unexpected role of ceruloplasmin in intestinal iron absorption Cell Metab 2005 2 5 309 19 105
216. umuler le fer li la ferritine pour emp cher la circulation d une trop grande quantit de fer libre Ce fer li la ferritine est facilement mobilisable et les r serves h patiques sont utilis es en cas de carence en fer suite une perte importante de sang ou a un r gime pauvre en fer Le fer parvient jusqu au foie par l espace porte principalement sous la forme d holoTf Mais nous l avons vu les h patocytes sont capables de r cup rer les complexes haptoglobine h moglobine par une voie encore inconnue L h moglobine complex e l haptoglobine et l h me 116 l albumine puis l h mopexine par le r cepteur l h mopexine sont pris en charge par l h patocyte mais les m canismes sont mal connus L h moglobine et l h me sont ensuite d grad s par HO La bilirubine produite sera ensuite s cr t e dans la bile Figure 8 Une autre forme de fer non li a la transferrine et appel NTBI peut galement tre r cup r e par les h patocytes Cette derni re forme de fer est tr s toxique et ne serait pr sente qu en cas de surcharge martiale pathologique une fois la capacit de liaison de la transferrine d pass e comme lors d une h mochromatose 36 Les mol cules impliqu es dans l entr e et la sortie du fer de l h patocyte ne sont pas clairement tablies Figure 8 Pour le captage du fer par l h patocyte on pense que le NTBI serait transport travers la mem
217. un autre mod le souris KO Irp2 B Galy et al r sultats non publi s 49 IV 2 R gulation syst mique mod le de la crypte Il existe deux signaux de r gulation importants pour l absorption intestinale du fer le r gulateur indiquant les besoins en fer pour rythropoi se le r gulateur rythroide et celui indiquant l tat des r serves en fer le r gulateur des r serves 189 C est la pr sence conjointe de HFE et RTf1 au niveau des cellules de la crypte de l intestin 132 qui a permis l laboration il y a plusieurs ann es d un mod le de r gulation de l absorption intestinale de fer dit mod le de la crypte qui repose sur une programmation des cellules de la crypte en fonction des signaux r gulateurs rythro des et r serves 190 Figure 14 C est en migrant le long de l axe crypto villositaire que les cellules de la crypte se diff rencient et acqui rent leur propri t d absorption Les ent rocytes matures en fonction de la quantit de fer capt e par les cellules de la crypte via RTTI sont programm s produire plus ou moins de prot ines responsables de l absorption de fer En r sulte une absorption du fer adapt e aux besoins HFE dans ce mod le aurait un r le de senseur du fer capable via sa fixation RTf1 de moduler la captation du fer dans les cellules de la crypte Lorsque HFE est mute la prot ine n est plus adress e la membrane et la captation
218. uniquement dans le compartiment intracellulaire supranucl aire 107 L h phaestine comme la ferroportine semble tre r gul e au niveau prot ique par un stimulus syst mique plut t que par les quantit s de fer intracellulaires 87 Elle ne poss de pas dIRE dans son ARNm Dans la souris sla qui est an mique et dont les ent rocytes sont surcharg s en fer l h phaestine est augment e 87 105 comme chez les souris en r gime pauvre en fer 108 106 alors que des souris trait es par un r gime riche en fer expriment autant le g ne Heph que des souris contr les 87 Aucune mutation dans le gene HEPH n a t d crite a ce jour chez des patients atteints d anemie ferriprive s v re 11 6 Transport de heme l haptoglobine l h mopexine HCP1 et FLVCR IL 6 1 Haptoglobine L haptoglobine est une prot ine de la r ponse inflammatoire aigu Elle est synth tis e par le foie et induite par des cytokines telles l IL 6 l IL 1 et le TNF C est une a2 sialoglycoprot ine compos e d une cha ne cliv e en deux cha nes la cha ne a N terminale et la cha ne B C terminale L haptoglobine a pour fonction de complexer l h moglobine circulante car l h moglobine libre comme le fer libre est tr s r active et entra ne la formation de radicaux libres et la peroxydation des lipides L haptoglobine contrairement la transferrine ou l h mopexine n est pas recycl e mais d grad e apr s endo
219. us 2 65 4 39 2 03 3 69
220. us J L Pinkus G S Zon L I Robine S and Andrews N C The iron exporter ferroportin Slc4Oal is essential for iron homeostasis Cell Metab 2005 1 3 191 200 Gomme P T McCann K B and Bertolini J Transferrin structure function and potential therapeutic actions Drug Discov Today 2005 10 4 267 73 Levin M J Tuil D Uzan G Dreyfus J C and Kahn A Expression of the transferrin gene during development of non hepatic tissues high level of transferrin mRNA in fetal muscle and adult brain Biochem Biophys Res Commun 1984 122 1 212 7 Rolfs A Kvietikova I Gassmann M and Wenger R H Oxygen regulated transferring expression is mediated by hypoxia inducible factor 1 J Biol Chem 1997 272 32 20055 62 Heilmeyer L Keller W Vivell O Betke K Woehler F and Keiderling W Congenital atransferrinemia Schweiz Med Wochenschr 1961 91 1203 Craven C M Alexander J Eldridge M Kushner J P Bernstein S and Kaplan J Tissue distribution and clearance kinetics of non transferrin bound iron in the hypotransferrinemic mouse a rodent model for hemochromatosis Proc Natl Acad Sci U S A 1987 84 10 3457 61 Lambert L A Perri H and Meehan T J Evolution of duplications in the transferrin family of proteins Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol 2005 140 1 11 25 93 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63
221. utomatiquement multipli s par le facteur 8 cas de changement de lot de r actif Analyseur Roche Hitachi MODULAR P Si le contr le de qualit l exige Les chantillons ayant des concentrations plus lev es sont automatiquement 1 r analys s par l analyseur Le rapport de dilution des chantillons lors de Contr le de qualit 0 01 r analyse automatique est 1 7 3 Les r sultats des chantillons dilu s lors Pour le contr le de qualit utiliser les mat riaux de contr le indiqu s de la r analyse sont automatiquement multipli s par le facteur 7 3 dans le paragraphe Mat riel auxiliaire n cessaire D autres contr les b La limite sup rieure du domaine de mesure d pend de la concentration la plus appropri s peuvent galement tre utilis s La fr quence des contr les lev e de Te gamme de Sand et les limites de confiance doivent tre adapt es aux exigences du laboratoire Les r sultats doivent se situer dans les limites de confiance d finies Chaque laboratoire devra tablir la proc dure suivre si les r sultats se situent en dehors de ces limites Se conformer la r glementation gouvernementale et aux directives Limites inf rieures de mesure Limite inf rieure de d tection du test Analyseur Roche Hitachi 902 5 ng mL 11 2 pmol L locales en vigueur relatives au contr le de qualit Analyseurs Roche Hitachi 912 917 MODULAR P 15 ng mL 33 7 pmol L Calcul des r sultats Limite de d te
222. voire IDM claudication intermittente 4 Autres signes associ s SMG Ganglion OO OUUU Uo Appr ciation du type d an mie recherch e en se basant sur l tat clinique Acceptabilit oui non IV Diagnostic biologique Pr l vement sur sang veineux effectu e jeun le hs 12010 de Leo CPE Eli Quantit en m EDTA HEPARINATE DE LITHIUM NFS formule num ration sanguine bilan martial effectu e ss min apr s le pr l vement 11965239001V14 Fe cobas R actifs utilisables sur les analyseurs Roche Hitachi suivants 917 MODULAR Fer Ref Flacon Contenu 1 REAGENT 6 x 64 mL 6 2 REAGENT 6 x 16 mL 11929658 216 1 REAGENT 6 x 258 mL 11929666 216 2 REAGENT 6 x 68 mL 1 REAGENT 12 x 50 mL E 2 REAGENT 6 x 20 mL 11970747 216 1 REAGENT 6 x 100 mL USA uniquement 2 REAGENT 3 x 46 mL ertains analyseurs ou coffrets peuvent ne pas etre disponibles dans tous les pays Pour l utilisation sur d autres analyseurs veuillez contacter la soci t Roche Diagnostics de votre pays Fran ais Codes d application Pour les analyseurs Roche Hitachi 912 917 MODULAR P MODULAR D ACN 661 Domaine d utilisation Test pour la d termination quantitative in vitro du fer dans le s rum et le plasma humains sur les analyseurs de chimie clinique de Roche Caract ristiques 23 4 Le fer apport par l alimentation est principalement r
223. x sont invariables entre les deux sexes P gt 0 05 puisque c est un rapport entre deux param tres au sein du m me sexe C est noter que la quantit d information apport e au diagnostic par les autres param tres du bilan martial la transferrin mie et ses indices n est pas aussi importante que celles des param tres discut s ci dessus En r sum les r sultats des trois groupes sont comme suit Le groupe t moin correspondant aux sujets sains a un statut martial normal La totalit des param tres ayant des taux dans les intervalles de r f rence chez les deux sexes concernant les 100 des individus Du fait que l effectif de ce groupe est repr sentatif n 60 adultes et qu il repr sente les deux sexes 32 hommes et 28 femmes plus de 75 des femmes sont en activit g nitale Donc on peut l utiliser comme r f rence dans cette tude et ressortir un intervalle de valeurs normales de 2 65 4 39 mg L chez l homme et 2 03 3 69 mg L chez la femme pour le Rs Tf cet intervalle est plus troit que celui propos par le fabricant 2 20 5 00 mg L chez l homme et 1 90 4 40 mg L chez la femme Le bilan du deuxi me groupe est en parfaite concordance avec une an mie ferriprive pour la totalit de ses param tres 1l pr sente un statut martial perturb tr s repr sentatif de cette an mie une an mie Hb gt 120g L une microcytose VGM lt 80i1 pool circulant Fer s rique dimi
224. ydation le fer est un m tal qui bien que pr sent en traces dans l organisme est essentiel la vie 11 est un constituant de l h moglobine de la myoglobine et de plusieurs enzymes peroxydases et cytochromes qui poss dent une liaison avec une mol cule appel e h me Le fer qui se situe au c ur de l h me a la capacit de se lier une mol cule d oxyg ne et d agir ainsi en tant que constituant de l h moglobine comme transporteur sanguin de l oxyg ne Le fer est aussi le cofacteur de nombreux enzymes Ce m tal tant essentiel la vie l organisme dispose de nombreux m canismes pour le stocker et le conserver Le fer en provenance de l alimentation est entrepos dans l organisme au niveau de deux prot ines tissulaires la ferritine et l h mosid rine Il est transport dans le s rum li la transferrine Tr s peu de fer est normalement perdu par l organisme et l apport alimentaire compense les pertes Si la r serve de fer diminue l organisme va synth tiser davantage de transferrine afin d augmenter l absorption intestinale du fer Si la d ficience en fer devient s v re la synth se de l h moglobine en sera affect e et une an mie dite ferriprive va s installer I 1 Le Cycle du fer L absorption le transport l utilisation le recyclage et le stockage du fer L organisme contient de 3 5 g de fer au total mais son m tabolisme l conomise au maximum fonctionnan

L`exploration de l`érythropoïèse via le taux sérique des récepteurs

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