vWF Ag* - Medcorp
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1. Valores esperados De acuerdo al m todo de determinaci n utilizado los valores de referencia var an de laboratorio a laboratorio Por esta raz n cada laboratorio deber determinar su propio rango de referencia Mayor informaci n para la determinaci n del propio intervalo de referencia se puede tomar de los documentos C 28 A del NCCLS How to define and determinate Reference intervals in the Clinical Laboratory Approved Guideline El nivel en el plasma de vWF Ag aumenta con la edad despu s de la menopausia as como con al hacer ejercicios y bajo stress El nivel normal del vWF en el plasma se encuentra normalmente entre 50 y 160 89 Caracter sticas del test Rango de medida Con relaci n ha esto por favor observar el manual de operaciones de su aparato de medida de la coagulaci n de Dade Behring o la informaci n del producto para vWF Ag Especificidad El test vWF Ag sirve para la determinaci n espec fica del nivel del ant geno vWF en muestras de plasma Presici n Estudios de precisi n fueron realizados con los aparatos de medida de la coagulaci n de Dade Behring En este caso se evaluaron los plasmas de control N y P El coeficiente de variaci n CV dentro de una marcha precisi n intra assay se encontr entre 1 4 y 4 2 El coeficiente de variaci n d a a d a precisi n inter assay estuvo entre 0 9 y 4 2 Literatura Ver p gina 1 Dade es una marca de f brica registrada de Dade Behring2. Der von Willebrand Faktor vWF ist ein Glykoprotein das von Endothelzellen und Megakaryozyten in das Plasma sezerniert wird Es handelt sich um eine Multimerstruktur mit einem Molekulargewicht von bis zu 15 000 kDa Nach der Sezernierung kann sie durch Plasmin abgebaut werden es sei denn es erfolgt eine endozytotische Aufnahme in die a Granulen der Thrombozyten Aufgrund seiner Funktion bei der Adhasion und Aggregation der Blutplattchen spielt der vWF sowohl in der primaren Hamostase bei der Bildung eines hamostatischen Pfropfes als auch im Gerinnungsprozess durch die Stabilisierung des Faktors VIII eine wichtige Rolle Der qualitative und oder quantitative Mangel an vWF verursacht das von Willebrand Syn drom vWS das eine der haufigsten erblichen Blutgerinnungsst rungen darstellt mit einer gesch tzten H ufigkeit von einer Person unter Hundert Sie wird autosomal dominant ver erbt Drei Grundtypen des vWS sind bekannt W hrend man mit dem BC von Willebrand Reagenz Dade Behring die Aktivit t des von Willebrand Ristocetin Kofaktors vWF Rco bestimmen kann wird der vWF Ag Test zur Be stimmung des Gehaltes des spezifischen Antigens verwendet Fur die Differentialdiagnose der verschiedenen vWS Subtypen sind beide Tests notwendig Der vWS Typ 1 ist mit 70 bis 80 der am haufigsten vorkommende Subtyp Bei dieser Form ist das vWF Ag vermindert Der vWS Typ 2 ist durch einen qualitativen Mangel der vWF Aktivitat gekennzeichnet
3. o do teste mas n o por um per odo de tempo superior a 8 horas Em caso de conserva o entre 2 e 8 C as amostras de plasma podem ser conservadas at 24 horas Se forem congeladas 20 a 30 C a conserva o de um m s Descongelar o plasma congelado a 37 C durante 15 minutos no m nimo antes da realiza o do teste e misturar Execu o do teste Consultar em qualquer caso os cap tulos respectivos do manual de utiliza o sobretudo as sec es sobre a calibra o a carga e o controlo de qualidade Outros materiais necess rios Tamp o Dade Owren s Veronal Buffer N de ref B 4234 25 Para a calibra o Standard Human Plasma N de ref ORKL Para o controlo de qualidade Plasma de controlo N N de ref ORKE e P N de ref OUPZ Aparelho de medi o da coagula o Dade Behring com a utiliza o prevista para vWF Ag OPAB G03 C0540 893 H 6 Edi o Junho 2002 amp _ E 2 7 Aparelho de medi o de coagula o O teste vWF Ag pode se executado com diversos aparelhos de medi o de coagula o Informa es mais pormenorizadas a esse respeito no manual de instru es Calibra o A calibra o do teste executada com o Standard Human Plasma da Dade Behring calibra o de acordo com o Standard da OMS 97 586 As dilui es de padr o s o preparadas automaticamente pelos aparelhos de medi o da coagula o da Dade Behring de acordo com os par metros Dade Owren
4. s Veronal Buffer j introduzidos nos aparelhos para este teste O tamp o representa o ponto 0 A curva de calibra o pode ser verificada no pr prio analisador ou no ecr do PC no menu Calibra o vide o respectivo manual de instru es Amostras do paciente Utilizar plasma de paciente n o dilu do As dilui es com Dade Owren s Veronal Buffer s o preparadas automaticamente pelos aparelhos de medi o da coagula o Dade Behring Os plasmas do paciente s o identificados pelos aparelhos de medi o da coagula o da Dade Behring atrav s de scanning do c digo de barras com um leitor de c digo de barras ou manualmente introduzindo os dados com o teclado Controlo de qualidade interno Para garantir a exactid o e a reprodutibilidade dos resultados s o necess rios controlos Depois de cada calibra o e de um m nimo de 8 horas por dia de teste os controlos dever o ser executados com dois valores diferentes Utilizar para esse efeito o Plasma de controlo NeP Preparar os plasmas de controlo e introduzir a informa o contida nos kits do plasma de controlo nos aparelhos de medi o da coagula o da Dade Behring Os controlos dever o ser utilizados n o dilu dos Os aparelhos de medi o da coagula o da Dade Behring preparam as dilui es automaticamente Se o resultado dos controlos se situar fora do intervalo de confian a a determina o dever ser repetida Se o desvio for confirmado pela nova deter
5. un marchio registrato della Dade Behring Inc negli USA in Germania e negli altri Paesi vWF Ag un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH in Germania e negli altri Paesi vWF Ag non disponibile negli USA Dade Behring Marburg GmbH Emil von Behring Str 76 D 35041 Marburg l PEER vWF Ag Reactivos para la determinaci n inmunoturbidim trica del ant geno del factor von Willebrand vWF Ag Campos de aplicaci n Eltestkit vWF Ag de Dade Behring se usa junto con los aparatos de medida de la coagulaci n de Dade Behring en el diagn stico in vitro y sirve para la determinaci n cuantitativa del vWF Ag en plasmas humanos mediante inmunoturbidimetria Significado diagn stico El factor von Willebrand vWF es una glicoproteina la cual va a ser secretada en el plasma por las c lulas endoteliales y por los megacariocitos Se trata de una estructura mult mera con un peso molecular de hasta 15 000 kDa Despu s de ser secretada puede ser descompuesta por medio de plasmina a no ser que ocurra una toma endocit tica en los gr nulos a de los trombocitos Debido a su funci n en la adhesi n y agregaci n de plaquetas sangu neas el vWF juega un papel importante tanto en la hemostasia primaria en la formaci n de un tap n hemost tico como tambi n en el proceso de coagulaci n mediante la estabilizaci n del factor VIII Una deficiencia cualitativa y o cuantitativa del vWF ocasiona el s ndrome de von Will
6. Il diluente pronto per l uso Conservazione e stabilit reagenti nei flaconi originali sigillati conservati a 2 8 C sono stabili fino alla data di scadenza indicata in etichetta Stabilit dopo ricostituzione dopo apertura nei flaconi chiusi a 2 8 C 15 giorni a 15 25 C 7 giorni diversi analizzatori hanno dati di stabilit individuali Campioni in esame Per separare il plasma miscelare 1 parte di soluzione di citrato di sodio 0 109 mol L opp 3 2 con 9 parti di sangue venoso evitando la formazione di schiuma Centrifugare a 2500 x g per almeno 10 minuti rimuovere il plasma sovranatante e conservarlo a 15 25 C fino al momento del test ma non pi di 8 ore campioni di plasma possono essere conservati a 2 8 C per 24 ore oppure congelati a 20 30 C per 1 mese plasmi congelati devono essere scongelati a 37 C per almeno 15 minuti e miscelati prima dell esecuzione del test Esecuzione del test Fare sempre riferimento ai manuali d uso soprattutto quelli relativi alla calibrazione al caricamento e al controllo qualit Materiale necessario ma non fornito Tampone Dade Tampone Veronal di Owren codice B4234 25 Per la calibrazione Plasma umano standard codice ORKL Per il controllo qualit Plasma di controllo N codice ORKE o P codice OUPZ Analizzatori per coagulazione Dade Behring con applicazione per vWF Ag OPAB G03 C0540 893 H 4 Edizione Giugno 2002 E ESE An
7. bleiben die Reagenzien bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar Haltbarkeit nach Verd nnung nach ffnung in geschlossenem Gef bei 2 bis 8 C 15 Tage bei 15 bis 25 C 7 Tage Die verschiedenen Gerinnungsmessger te haben individuelle Stabilit tsdaten Untersuchungsmaterial Zur Abtrennung des Plasmas einen Teil Natriumcitratl sung 0 109mol l oder 3 2 mit neun Teilen ven sem Blut mischen wobei Schaumbildung zu vermeiden ist Bei 2500 x g minde stens 10 Minuten zentrifugieren den Plasma berstand entfernen und bei 15 bis 25 C bis zum Testeinsatz jedoch nicht l nger als 8 Stunden aufbewahren Bei Lagerung zwischen 2 und 8 C k nnen Plasmaproben bis zu 24 Stunden aufbewahrt werden In tiefgefrorenem Zustand 20 bis 30 C betr gt die Haltbarkeit bis zu einem Monat Tiefgefrorenes Plasma bei 37 C mindestens 15 Minuten vor dem Test auftauen und mischen Testdurchf hrung In jedem Falle sind die entsprechenden Kapitel des Benutzerhandbuches zu beachten vor allem die Abschnitte zu Kalibrierung Beladung und Qualit tskontrolle OPAB G03 C0540 893 H 2 Ausgabe Juni 2002 HE ao Zus tzlich ben tigte Materialien Puffer Dade Owren s Veronal Buffer Bestell Nr B 4234 25 F r die Kalibrierung Standard Human Plasma Bestell Nr ORKL F r die Qualit tskontrolle Kontrol Plasma N Bestell Nr ORKE und P Bestell Nr OUPZ Dade Behring Gerinnungsmessger t mit vorgesehener Anwendu
8. cons quence des l sions de l endoth lium vasculaire le vWF Ag peut tre augment dans toutes les formes des processus inflammatoires Une augmentation de la concentration de vWF peu galement tre observ e chez les patients souffrant d un infarctus du myocarde Principe de la m thode L addition de r actif l chantillon qui contient l antigene de von Willebrand entra ne l agglutination des petites particules de polystyr ne recouvertes d anticorps sp cifiques fix s par liaison covalente Cette agglutination est mesur e turbidim triquement par augmentation de la turbidit La turbidit est directement proportionnelle au taux d antig ne dans l chantillon R actifs Conditionnement Code OPAB 4 x 6 ml 2 ml de R actif Latex 4 ml de Diluant VWF Ag R actif Composition Le coffret vWF Ag contient les r actifs suivants 4 x 5 ml de Tampon tampon glycine 4 x 2 ml de R actif Latex bouchon vis vert suspension de petites particules de polystyr ne recouvertes d anticorps de lapin anti vWF humain 4 x 4 ml de Diluant pour R actif Latex bouchon vis vert solution contenant de la glycine pour la dilution du R actif Latex Mises en garde et pr cautions d emploi 1 R serv un usage in vitro 2 Les r actifs contenant de l azide de sodium doivent tre manipul s avec pr caution ne pas avaler et viter tout contact avec la peau et les muqueuses En cas d vacuation da
9. mL Diluent of vWF Ag reagent Composition The vWF Ag kit contains the following reagents Buffer 4 x 5 mL Glycine buffer Latex Reagent 4 x 2 mL green screw cap suspension of small polystyrene particles coated with rabbit anti human vWF antibodies Diluent for Latex Reagent 4 x 4 mL green screw cap solution containing glycine intended for dilution of the Latex Reagent Warnings and Precautions 1 For in vitro diagnostic use 2 Reagents containing sodium azide must be handled with due caution Do not ingest or allow to contact skin or mucous membranes If discarded into drain flush with a large volume of water to prevent azide build up Sodium azide can form explosive azides when contacting heavy metals such as copper or lead Preparation of the Reagents Buffer Before opening allow the buffer vial to stand at room temperature 15 to 25 C for 15 minutes Swirl the vial gently Latex Reagent Pour the whole volume of a vial Diluent for Latex Reagent green screw cap into a vial of Latex Reagent also green screw cap of the same kit Ensure that the dilution liquid is completely transferred into the Latex Reagent vial Then swirl the mixture in the Reagent vial without creating any bubbles Allow the final solution to stand at room temperature 15 to 25 C for 15 minutes and swirl gently afterwards Diluent for Latex Reagent This diluent is ready for use Storage and Stability When stored at 2 to 8 C
10. plasma level increases with age postmenopausal physical exercises and stress The normal plasma vWF level in the adult population is usually in the range of 50 160 89 Specific Performance Characteristics Measuring Range Please refer to the Operator s Manual of your Dade Behring Coagulation Analyzer or to the application sheet of vWF Ag Specificity The vWF Ag determines specifically the vWF antigen level in the test plasma sample Precision Precision studies were performed with Dade Behring coagulation analyzers by evaluation of Control Plasma P and Control Plasma N The coefficient of variation CV within run intra assay precision ranged from 1 4 to 4 2 while the coefficient of variation from day to day inter assay precision ranged from 0 9 to 4 2 Bibliography 1 Verweij CL Biosynthesis of human von Willebrand factor Haemostasis 1988 18 224 245 2 Ruggeri ZM Ware J The structure and function of von Willebrand factor Thromb Haemostasis 1992 67 594 599 3 Werner EJ Broxson EH Tucker EL et al Prevalence of von Willebrand disease in children a multiethnic study J Pediatr 1993 123 893 898 4 Blann A Von Willebrand factor and the endothelium in vascular disease Br J Biomed Sci 1993 50 125 134 5 Lip GYH Blann AD Von Willebrand factor and its relevance to cardiovascular disorders Br Heart J 1995 74 580 583 6 Favaloro EJ Aboud M Arthur C Possibility of potential VW
11. rio dever definir o seu intervalo de refer ncia pr prio Consultar informa es mais pormenorizadas sobre a defini o dos intervalos de refer ncia pr prios no documento C28 A do NCCLS How to define and determine Reference intervals in the Clinical Laboratory Approved Guideline O n vel de vWF Ag no plasma aumenta com a idade ap s a menopausa e com os exerc cios desportivos sob stress Normalmente o nivel normal de vWF no plasma movimenta se entre os 50 e os 160 89 Caracter sticas de performance do teste Intervalo de medi o A este respeito favor tomar em considera o o respectivo manual do utilizador do seu aparelho de medi o da coagula o Dade Behring ou a informa o de produto sobre o vWF Ag Especificidade O teste de vWF Ag serve para a determina o espec fica do n vel de antigene vWF nas amostras de plasma Precis o Foram executados estudos de precis o com os aparelhos de medi o da coagula o da Dade Behring Nesse caso foram avaliados o Plasma de controlo N e o Plasma de controlo P O coeficiente de varia o CV na s rie precis o intra ensaio situou se entre 1 4 e 4 2 O coeficiente de varia o de dia para dia precis o inter ensaio situou se entre 0 9 e 4 2 Bibliografia Vide a p gina 1 Dade uma marca registada da Dade Behring Inc nos EUA Alemanha e noutros pa ses vWF Ag uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH na Alemanha e noutros
12. tipo 1 il tipo pi comune pari al 70 80 di tutti i casi di vWD E caratterizzato da una diminuzione di vWF Ag e dell attivit del vWF La vWD di tipo 2 caratterizzata da una carenza qualitativa dell attivit di vWF dove pero il livello di antigene pu risultare ancora normale La vWD di tipo 3 caratterizzata da una totale mancanza di vWF sia nel plasma che nei comparti cellulari Test Tipo 1 Tipo 2 A Tipo 2B Tipo 2N Tipo 3 vWF Ag y y Normale Assente vWF RCo y yy Joll Normale Assente Fattore VIII Normale o Normale o 1 Normale o W W Inoltre da notare che le carenze di vWF possono essere associate a diverse altre malattie come il Lupus eritemasosus sistemico LES il mieloma il linfoma ecc In questi casi si parla di una malattia di von Willebrand acquisita Il vWF Ag e l attivit del vWF possono risultare aumentati in tutti i processi infiammatori come conseguenza delle lesioni dell endotelio vascolare pazienti con infarto del miocardio possono inoltre presentare elevate concentrazioni di vWF Principio del metodo Le piccole particelle di polistirene a cui gli anticorpi specifici sono legati con un legame covalente vengono agglutinate quando sono miscelate con campioni contenenti l antigene von Willebrand Tale agglutinazione viene quindi determinata turbidimetricamente attraverso l aumento della torbidit la quale proporzionale alla concentrazione di antig
13. 00 x g por lo menos durante 10 minutos retirar el plasma sobrante y conservarlo entre 15 y 25 C hasta empezar el test pero nunca m s de 8 horas Las muestras de plasma almacenadas entre 2 y 8 C pueden mantenerse hasta 24 horas En estado de ultra congelaci n de 20 a 30 C la estabilidad es de 1 mes El plasma ultra congelado debe descongelarse a 37 C por lo menos durante 15 minutos antes de empezar el test y mezclarse Procedimiento En todos los casos se deben observar los correspondientes cap tulos de los manuales de operaci n sobre todo los p rrafos sobre calibraci n carga y control de calidad OPAB G03 C0540 893 H 5 Edici n Junio 2002 NIH Materiales adicionales necesarios Tamp n Dade Tampon Veronal de Owren N de pedido B 4234 25 Para la calibraci n Plasma humano est ndar N de pedido ORKL Para el control de calidad Plasma control N N de pedido ORKE y P N de pedido OUPZ Aparatos de medida de la coagulaci n de Dade Behring de uso previsto para el vWF Ag Aparatos de medida de la coagulaci n El test vWF Ag puede ser realizado en diferentes aparatos de medida de la coagulaci n Para mayor informaci n al respecto ver los manuales de operaciones correspondientes Calibraci n La calibraci n del test va a ser realizada por Dade Behring con plasma humano est ndar Calibraci n contra el est ndar de la OMS 97 586 Las diluciones del est ndar van a ser preparadas autom t
14. D misdiagnosis or misclassification using LIA technology and due to presence of rheumatoid factor Am J Hematol 2001 66 53 56 7 Wamala S Murray MA Horsten M et al Socioeconomic status and determinants of hemostatic function in healthy women Arterioscler Thromb Vasc Biol 1999 19 485 492 8 Holmberg L Berntorp E Donner M Nilsson IM von Willebrand s disease characterized by increased ristocetin sensitivity and the presence of all von Willebrand factor multimers in plasma Blood 1986 68 3 668 672 9 Nishino M Girma JP Rothschild C Fressinaud E Meyer D New variant of von Willebrand disease with defective binding to factor VIII Blood 1989 74 5 1591 1599 Dade is a registered trademark of Dade Behring Behring Inc in the USA Germany and other countries vWF Ag is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in Germany and other countries vWF Ag is not available in the USA Dade Behring Marburg GmbH Emil von Behring Str 76 D 35041 Marburg USA Distributor Dade Behring Inc Newark DE 19714 U S A aii CU vWF Ag Reagenzien zur immunoturbidimetrischen Bestimmung des von Willebrand Faktor Antigens vWF Ag Anwendungsbereich Der vWF Ag Test Kit von Dade Behring wird zusammen mit den Gerinnungsmessgeraten von Dade Behring in der in vitro Diagnostik eingesetzt und dient der quantitativen Bestim mung des vWF Ag in Humanplasma mittels Immunturbidimetrie Diagnostische Bedeutung
15. I DADE BEHRING vWF Ag Reagents for the immunoturbidimetric determination of von Willebrand factor antigen vWF Ag Intended Use The Dade Behring vWF Ag test kit is intended for in vitro diagnostic use with Dade Behring coagulation analyzers for the quantitative determination of vWF Ag in human plasma by immuno turbidimetry Summary and Explanation von Willebrand factor vWF is a glycoprotein secreted into plasma from endothelial cells and megacaryocytes It has a multimeric form and can have a molecular weight up to 15 000 kDa After secretion it is vulnerable to digestion by plasmin unless it is not stored in the a granules of thrombocytes after endocytotic uptake The vWF plays an important role both in primary hemostasis by the formation of the hemostatic plug due to its function in platelet adhesion and aggregation and in the coagulation process by the stabilization of factor VIII Qualitative and or quantitative deficiency in vWF is the cause for the von Willebrand disease vWD which is the most common hereditary bleeding disorder having a frequency estimated to be as high as one person in every hundred It has an autosomal dominant mode of inheritance Three principal types of vWD were defined Whereas the BC von Willebrand reagent Dade Behring can be used for determination of von Willebrand ristocetin cofactor activity VWF RCo the vWF Ag assay is determining the level of specific antigen Both are
16. Inc en USA Alemania y otros pa ses vWF Ag es una marca de fabrica registrada de Dade Behring Marburg GmbH en Alemania y otros paises vWF Ag no se vende en USA Dade Behring Marburg GmbH Emil von Behring Str 76 D 35041 Marburg IL aii CU vWF Ag Reagentes para a determina o imunoturbidim trica do antigene do factor von Wille brand vWF Ag Campo de aplica o O kit de teste vWF Ag da Dade Behring utilizado em conjunto com os aparelhos de medi o da coagula o da Dade Behring para o diagn stico in vitro e serve para a determina o quantitativa do vWF Ag no plasma humano atrav s da imunoturbitimetria Significado diagn stico O factor de von Willebrand vWF uma glicoprote na segregada no plasma pelas c lulas endoteliais e pelos megacari citos Trata se de uma estrutura multim rica com um peso molecular at 15 000 kDa Ap s a segrega o pode ser decomposta pela plasmina a menos que se verifique uma assimila o endocit tica nos gr nulos a dos tromb citos Gra as sua fun o na ades o e agrega o das plaquetas sangu neas o vWF desempenha um papel importante tanto na hemostase prim ria com a forma o de um tamp o hemost tico como no processo de coagula o atrav s da estabiliza o do factor VIII A defici ncia qualitativa e ou quantitativa de vWF provoca a s ndrome de von Willebrand vWS um dos dist rbios heredit rios mais comuns da coagula o do sangu
17. WF Ag Kit enth lt die folgenden Reagenzien 4 x 5 ml Puffer Glyzinpuffer 4 x 2 ml Latex Reagenz gr ner Schraubverschluss Suspension kleiner Polystyrol Partikel die mit Anti Human vWF Antik rpern Kaninchen beschichtet sind 4 x 4 ml Diluent f r Latex Reagenz gr ner Schraubverschluss L sung enth lt Glyzin wird zur Verd nnung des Latex Reagenz verwendet Warnungen und Vorsichtsma nahmen 1 Nur zur in vitro diagnostischen Anwendung 2 Beim Umgang mit Natriumazid haltigen In vitro Diagnostika ist zu beachten Verschlucken und Kontakt mit Haut oder Schleimh uten vermeiden Bei Entsorgung ins Abwasser mit viel Wasser nachsp len Natriumazid kann mit Schwermetallen wie Kupfer oder Blei explosive Azide bilden Vorbereitung der Reagenzien Puffer Das Pufferfl schchen vor dem ffnen 15 Minuten bei Raumtemperatur 15 bis 25 C ste hen lassen Fl schchen leicht sch tteln Latex Reagenz Den gesamten Inhalt des Diluent Fl schchens gr ner Schraubverschluss in das Fl sch chen mit dem Latex Reagenz ebenfalls gr ner Schraubverschluss desselben Kits geben Die Mischung anschlie end im Reagenz Fl schchen sch tteln wobei Blasenbildung zu ver meiden ist Die fertige L sung bei Raumtemperatur 15 bis 25 C 15 Minuten offen stehen lassen Danach leicht sch tteln Diluent f r Latex Reagenz Diluent wird gebrauchsfertig geliefert Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen Bei Lagerung zwischen 2 und 8 C
18. alizzatori per coagulazione Il VWF Ag della Dade Behring pu essere utilizzato su vari analizzatori per coagulazione Consultare i relativi manuali d uso Calibrazione La calibrazione del test viene eseguita con il Plasma umano standard della Dade Behring calibrato contro lo standard dell OMS 97 586 Le diluizioni dello standard vengono preparate automaticamente dall analizzatore per coagulazione Dade Behring con il Dade Tampone Veronal di Owren secondo i parametri inseriti nell analizzatore per questo lotto Il tampone da solo rappresenta il punto 0 La curva di calibrazione pu essere visualizzata sull analizzatore stesso oppure sullo schermo del PC nel menu Calibrazione v manuale d uso relativo Campioni dei pazienti plasmi dei pazienti vengono impiegati non diluiti Le diluizioni con Dade Tampone Veronal di Owren vengono eseguite automaticamente dagli analizzatori per coagulazione Dade Behring plasmi dei pazienti vengono identificati dall analizzatore per coagulazione Dade Behring o con la scansione del codice a barre oppure inserendo manualmente tramite tastiera i loro dati identificativi Controllo di qualit interno E necessario utilizzare i controlli per garantire l accuratezza e la riproducibilit dei risultati Impiegare due controlli con concentrazioni diverse dopo ogni calibrazione e almeno ogni 8 ore di lavoro Utilizzare il Plasma di controllo N e P Preparare i controlli ed inserire le informazio
19. are sovrastima del vWF Ag Anche la presenza di fattori reumatoidi pu comportare una sovrastima del vWF Ag Valori attesi valori di riferimento variano da laboratorio a laboratorio a seconda della tecnica utilizzata pertanto ogni laboratorio dovrebbe determinare i propri intervalli di riferimento per maggiori informazioni sulla determinazioni di propri intervalli di riferimento vedere il documento NCCLS C28 A How to define and determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory Approved Guideline Il livello di vWF Ag nel plasma aumenta con l et la menopausa l esercizio fisico e lo stress Il livello normale di vWF Ag nella popolazione adulta normalmente compreso nell intervallo 50 160 89 Caratteristiche specifiche del test Intervallo di misura Fare riferimento al manuale d uso del vostro analizzatore per coagulazione Dade Behring e al foglio applicativo del vWF Ag Specificit Il test VWF Ag determina in maniera specifica il livello di vWF antigene nei campioni di plasma Precisione Studi di precisione sono stati eseguiti con analizzatori per coagulazione Dade Behring analizzando Plasma di controllo P e Plasma di controllo N Il coefficiente di variazione CV nella serie precisione intra assay risultato nell intervallo 1 4 4 2 Il coefficiente di variazione tra serie precisione inter assay risultato compreso nell intervallo 0 9 4 2 Bibliografia Vedi pagina 1 Dade
20. calibration is performed with Dade Behring s Standard Human Plasma calibrated against WHO Standard 97 586 The standard dilutions are automatically prepared by the Dade Behring coagulation analyzers by dilution with Dade Owren s Veronal Buffer according to the parameters entered in the analyzers for this assay The buffer alone represents the 0 point The calibration curve can be examined on the analyzers respectively the PC screen in the Calibration menu see appropriate Operator s Manual Patient samples Patient plasmas are used undiluted Dilutions with Dade Owren s Veronal Buffer are automatically prepared by the Dade Behring coagulation analyzers Patients plasmas are identified by the Dade Behring coagulation analyzers either by scanning their bar codes across the bar code reader or by manually entering their identifications on the keyboard Internal Quality Control It is necessary to run controls to ensure accuracy and reproducibility of the results Two diffe rent levels of controls should be included in each work shift Use Control Plasma N and P Prepare the controls and transfer to the Dade Behring coagulation analyzers the information contained in the control plasma kits These controls are used undiluted Dilutions are being prepared automatically by the Dade Behring coagulation analyzers If the result of the controls is outside the confidence interval the determination must be repeated If the repeated determination confirms th
21. die in den Kontrollplasma Kits enthaltenen In formationen in die Dade Behring Gerinnungsmessger ten eingeben Die Kontrollen sind un verd nnt anzuwenden Die Dade Behring Gerinnungsmessger te stellen die Verd nnungen automatisch her Liegt das Ergebnis der Kontrollen au erhalb des Vertrauensbereichs ist die Bestimmung zu wiederholen Wird die Abweichung durch erneute Bestimmung best tigt sollte eine neue Referenzkurve erstellt werden Die Ergebnisse der Patientenproben niemals freigeben be vor der Grund der Abweichung eruiert und korrigiert wurde Ergebnisse Der vWF Ag Test wird nach der Beladung mit den Proben von den Dade Behring Gerinnungs messger ten automatisch durchgef hrt und die Ergebnisse angezeigt Einschr nkungen der Testdurchf hrung und High Dose Hook Effekt F r diese Bestimmungen geeignet sind Gerinnungsmessger te f r die Dade Behring Test protokolle zur Verf gung stellt Die Bestimmung des vWF Ag auf anderen Gerinnungs messger ten ist vom Testlabor zu validieren In diesen F llen weichen die Leistungsmerkma le m glicherweise von den angegebenen ab Hinsichtlich einer m glichen Beeintr chtigung durch den High Dose Hook Effekt H moglo bin Bilirubin Lip mie oder Heparin bitte das Benutzerhandbuch des jeweiligen Dade Behring Gerinnungsmessger tes oder das Application Sheet beachten Das in Patientenproben h chst seltene Vorkommen von Anti Rinder Albumin und oder Anti Kaninchen Antik rpern kann
22. e com uma frequ ncia estimada de uma pessoa em cada 100 Possui um modo dominante de hereditariedade autoss mico S o conhecidos tr s tipos principais de vWS Enquanto que o BC do reagente de von Willebrand Dade Behring pode ser usado para determinar a actividade do cofactor da ristocetina de von Willebrand vWF RCo o teste vWF Ag utilizado para determinar o teor do antigene espec fico Os dois testes s o necess rios para o diagn stico diferencial dos subtipos de vWS O tipo 1 de vWS o subtipo mais frequente ocorrendo em 70 a 80 dos casos Esta forma caracterizada por uma diminui o do vWF Ag O tipo 2 de vWS caracterizado por uma defici ncia qualitativa da actividade de vWF sendo perfeitamente poss vel que o teor de antigene ainda possa situar se no intervalo normal O tipo 3 de vWS caracterizado pela aus ncia total de vWF no plasma e compartimentos celulares Teste Tipo 1 Tipo 2 A Tipo 2B Tipo 2N Tipo 3 vWF Ag y y Normal Ausente vWF RCo y W d ou LL Normal Ausente Factor VIII Normal ou Normal ou 1 Normal ou W W Al m disso devera notar se que uma defici ncia de vWF tamb m pode estar associada com outras doen as v rias tais como por exemplo o l pus eritematoso sist mico SLE o mieloma o linfoma etc Nestes casos fala se de um s ndroma adquirido de von Willebrand Como consequ ncia de danifica es do endot lio vascular o VWF Ag e a actividade de vWF p
23. e Reference intervals in the Clinical Laboratory Approved Guideline Le taux plasmatique de vWF Ag augmente avec l ge apr s la m nopause pendant les exercices physiques et en cas de stress Le taux plasmatique normal de vWF varie g n ralement de 50 160 Caract ristiques du test Domaine de mesure Se reporter au manuel d utilisation de l automate de coagulation Dade Behring utilis ou la iche technique du test vWF Ag Sp cificit Le test vWF Ag permet de mesurer sp cifiquement le taux d antigene vWF dans les chantillons plasmatiques Pr cision Des tudes de pr cision ont t effectu es avec les automates de coagulation Dade Behring et ont port sur l valuation des Plasmas de contr le N et P Le coefficient de variation CV dans la s rie r p tabilit a t trouv entre 1 4 et 4 2 Le coefficient de variation de jour a jour reproductibilit a t trouv entre 0 9 et 4 2 Litt rature Cf page 1 Dade est une marque d pos e de Dade Behring Inc Aux USA en Allemagne et dans d autres pays vWF Ag est une marque d pos e de Dade Behring Marburg GmbH en Allemagne et dans d autres pays vWF Ag n est pas disponible aux USA Dade Behring Marburg GmbH Emil von Behring Str 76 D 35041 Marburg Ol PEER vWF Ag Reagenti per la determinazione immunoturbidimetrica dell antigene del fattore von Wille brand vWF Ag Uso previsto Il kit per il tes
24. e deviation a new reference curve should be established Do not release patient results until the cause of deviation has been identified and corrected Results The vWF Ag assay is automatically carried out by the Dade Behring analyzers as soon as the samples have been loaded and the results are shown on the screen Limitations of the Procedure and High Dose Hook Effect Suitable coagulation analyzers are those for which assay protocols are provided by Dade Behring The use of vWF Ag on other coagulation analyzers must be validated by the test laboratory In such cases the performance characteristics may differ from those stated Please refer to the Operator s Manual of your Dade Behring Coagulation Analyzer or to the application sheet of vWF Ag with respect to the possible influence of the high dose hook effect hemoglobin bilirubin lipaemia or heparin The extremely rare presence of anti bovine albumin and or anti rabbit antibodies in certain subjects may lead to an over estimation of vWF Ag Furthermore the presence of rheumatoid factor may lead to an overestimation of vWF Ag Expected Values Reference values vary from laboratory to laboratory depending on technique used therefore each laboratory should establish its own reference interval For more information on establishing reference intervals see NCCLS document C28 A How to define and determine Reference intervals in the Clinical Laboratory Approved Guideline The VANE Ag
25. e lo siguiente No ingerir y evitar cualquier contacto con la piel y las mucosas Al eliminar en las aguas residuales lavar con bastante agua La azida s dica puede formar azidas explosivas con metales pesados como cobre y plomo Preparaci n de los reactivos Tamp n Dejar el frasco del tamp n 15 min a temperatura ambiente entre 15 y 25 C antes de abrirlo Agitar el frasco suavemente Reactivo l tex A adir contenido total del frasco de diluyente cierre de tornillo verde en el frasco con el reactivo l tex igualmente cierre de tornillo verde del mismo kit A continuaci n agitar la mezcla en el frasco del reactivo evitando la formaci n de burbujas Dejar la soluci n lista en reposo a temperatura ambiente entre 15 y 25 C durante 15 minutos Despu s agitar suavemente Diluyente para el reactivo l tex El diluyente viene listo para ser usado Estabilidad y almacenaje Los reactivos almacenados entre 2 y 8 C se pueden utilizar hasta la fecha de vencimiento dada en la etiqueta Estabilidad despu s de la diluci n despu s de abierto en recipiente cerrado Entre 2 y 8 C 15 d as Entre 15 y 25 C 7 d as Los diferentes aparatos de medida de la coagulaci n tienen datos individuales de estabilidad Material a investigar Para separar el plasma mezclar una parte de soluci n de citrato de sodio 0 109 mol l o 3 2 con nueve partes de sangre venosa evitando la formaci n de espuma Centrifugar a 25
26. ebrand vWS el cual es una de las alteraciones hereditarias de la coagulaci n sangu nea m s frecuente con una frecuencia aproximada de una persona por cada cien Este s ndrome va a ser heredado autosomal dominante Se conocen tres tipos b sicos del vWS Mientras que con el Reactivo BC de von Willebrand Dade Behring se puede determinar la actividad de la ristocetina cofactor del factor von Willebrand vWF Rco el test vWF Ag se va a utilizar para la determinaci n del contenido del ant geno espec fico Para la diagnosis diferencial de los diferentes subtipos del vWS son necesarios los dos test El vWS tipo 1 es con 70 a 80 el subtipo m s frecuente En est forma el vWF Ag esta disminuido El vWS tipo 2 est caracterizado por una deficiencia cualitativa de la actividad del vWF aunque el contenido de ant geno se puede encontrar en el rango normal Para el vWS tipo 3 hace falta el vWF completamente en el plasma y en los gr nulos celulares Test Tipo 1 Tipo 2A Tipo 2B Tipo 2 N Tipo 3 vWF Ag y y tl Normal Falta vWF Rco y y loli Normal Falta Factor VIII Normal o Normalo Normalo W W Adem s se debe tener en cuenta que una deficiencia del vWF tambi n puede estar relacionada con otras enfermedades diferentes como por ejemplo con lupus eritematoso sist mico mielomas infomas etc En este caso se habla de un sindrome de von Willebrand adquirido Como consecuencia de dafos en el endotelio de
27. ene presente nel campione Reagenti Contenuto della confezione Codice OPAB 4 x 6 mL 2 mL Reagente Latex 4 mL Diluente di reagente vWF Ag Composizione Il kit vWF Ag contiene i seguenti reagenti Tampone 4 x 5 mL tampone glicina Reagente Latex 4 x 2 mL tappo verde sospensione di particelle di l tice ricoperte con anticorpi anti vWF umano da coniglio Diluente per Reagente Latex 4 x 4 mL tappo verde soluzione contenente glicina impiegata per la diluizione del reagente Latex Avvertenze e precauzioni 1 Per uso diagnostico in vitro 2 Quando si impiegano reagenti contenenti sodio azide osservare le seguenti precauzioni non ingerire ed evitare il contatto con la cute e le mucose La sodio azide a contatto con metalli pesanti come rame e piombo pu formare azidi esplosive Preparazione dei reagenti Tampone Prima dell apertura lasciare il flacone del tampone a temperatura ambiente 15 25 C per 15 minuti Agitare delicatamente il flacone Reagente Latex Versare il contenuto del flacone del Diluente per Reagente Latex tappo verde nel flacone del Reagente Latex tappo verde dello stesso kit Assicurarsi che tutto il diluente sia stato versato nel flacone del Reagente Latex Agitare la miscela contenuta nel flacone del Reagente Latex evitando la formazione di bolle Lasciar riposare la soluzione a temperatura ambiente 15 25 C per 15 minuti quindi agitare delicatamente Diluente per Reagente Latex
28. icamente por los aparatos de medidas de la coagulaci n de Dade Behring de acuerdo con los par metros ya existentes para el aparato para este test con el Dade Tamp n veronal de Owren El tamp n representa el punto 0 La calibraci n puede ser comprobada directamente en el analizador o en la pantalla de la computadora bajo el men Calibraci n Kalibrierung ver el manual correspondiente Muestra de pacientes Utilizar los plasmas de los pacientes sin diluir Las diluciones con el Dade Tampon veronal de Owren van a ser elaboradas autom ticamente por los aparatos de medida de la coagulaci n Los plasmas de pacientes van a ser identificados por los aparatos de medida de la coagulaci n de Dade Behring por medio de la lectura del c digo de barras con el Barcode Reader o por medio de la entrada manual de los datos por medio del teclado Control de calidad interno Para poder garantizar la exactitud y la reproducibilidad de los resultados se necesitan controles Despu s de cada calibraci n y por lo menos cada 8 horas por d a de ensayo se deben medir dos controles diferentes Para esto se tienen los controles Plasma N y Plasma P Preparar los plasmas de control y dar a los aparatos de medida de la coagulaci n de Dade Behring la informaci n existente en el kit del Plasma control Los controles se deben usar sin diluir Los aparatos de medida de la coagulaci n de Dade Behring preparan las diluciones autom ticamente Silos resultados de
29. ichen der Dade Behring Inc in den USA Deutschland und anderen L ndern vWF Ag ist ein eingetragenes Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in Deutschland und anderen L ndern vWF Ag ist in den USA nicht erh ltlich Dade Behring Marburg GmbH Emil von Behring Str 76 D 35041 Marburg vWF Ag R actifs pour le dosage immuno turbidim trique de l antig ne Facteur de von Wille brand vWF Ag Domaine d utilisation Le test vWF Ag de Dade Behring est un test de diagnostic in vitro utiliser sur les automates de coagulation Dade Behring et permet le dosage du vWF Ag dans le plasma humain par immuno turbidim trie Int r t diagnostique Le Facteur de von Willebrand vWF est une glycoprot ine s cr t e dans le plasma par les cellules endoth liales et les m gacaryocytes Il s agit d une structure multi m rique d un poids mol culaire allant jusqu a 15 000 kDa Une fois s cr t e elle peut tre d grad e par la plasmine moins qu elle ne soit absorb e endocytotiquement dans les a granules des thrombocytes Du fait de sa fonction dans l adh sion et l agr gation des plaquettes sanguines le vWF joue un r le important aussi bien dans I h mostase primaire lors de la formation du bouchon h mostatique que dans le processus de coagulation par la stabilisation du Facteur VIII Un d ficit qualitatif et ou quantitatif en vWF provoque la maladie de von Willebrand qui est un des troubles cong
30. l control se encuentran por fuera del rango de confianza se debe repetir la determinaci n Si despu s de la repetici n se comprueba la desviaci n se debe realizar una nueva curva de referencia No entregar los resultados de las muestras de pacientes hasta que la base de la desviaci n sea conocida y corregida Resultados El test vWF Ag va a ser realizado autom ticamente una vez el aparato de medida de la coagulaci n de Dade Behring sea cargado con las muestras y los resultados van a ser dados directamente Limitaciones del procedimiento y efecto High Dose Hook Para estas determinaciones son apropiados los aparatos de medida de la coagulaci n para los cuales Dade Behring tenga a disposici n los protocolos de ensayo Las determinaciones del vWF Ag con otros aparatos de medida de la coagulaci n deben ser validadas por el laboratorio que realiza el test En estos casos posiblemente las caracter sticas difieren de las aqu dadas Con miras a una posible molestia por medio del efecto High Dose Hook hemoglobina bilirrubina lipemia o heparina se pide observar el manual de operaciones del correspondiente aparato de medida de la coagulaci n de Dade Behring o el folleto de aplicaciones La existencia poco frecuente en los plasmas de pacientes de anti alb mina bovina y o anti anticuerpos de conejo pueden llevar a un valor elevado del vWF Ag Igualmente el factor reumatoideo en la sangre puede llevar a una sobrevaloraci n del vWF Ag
31. los vasos sangu neos pueden estar el vWF Ag y la actividad del vWF elevados en toda la clase de procesos inflamatorios Pacientes con un infarto de miocardio pueden igualmente presentar concentraciones elevadas del vWF Principio del m todo Mediante la mezcla de las muestras que contienen el ant geno de von Willebrand con el reactivo se van a aglomerar las peque as part culas de poliestireno recubiertas con anticuerpo Los anticuerpos espec ficos se van a unir con las part culas mediante uniones covalentes Finalmente se va a medir esta aglutinaci n por turbidimetria determinando el aumento de la turbidez La turbidez se comporta de forma directamente proporcional al nivel de ant geno en la muestra Reactivos Contenido del envase comercial N de pedido OPAB 4 x 6 ml Reactivo vWF Ag 2 ml reactivo l tex 4 ml diluyente Composici n El kit VWF Ag contiene los siguientes reactivos 4 x 5 ml de Tamp n Tamp n de glicina 4 x 2 ml de Reactivo l tex cierre de tornillo verde suspensi n de peque as part culas de poliestireno las cuales est n recubiertas con anticuerpo conejo 4 x 4 ml de Diluyente para el reactivo l tex cierre de tornillo verde soluci n que contiene glicina se utiliza para la diluci n del reactivo l tex Advertencias y medidas de seguridad 1 S lo para ser utilizado en diagn sticos in vitro 2 Al trabajar con reactivos de diagn stico in vitro que contengan azida s dica debe observars
32. mina o dever ser elaborada uma nova curva de refer ncia Jamais aprovar os resultados das amostras do paciente antes da causa do desvio ter sido identificada e corrigida Resultados Depois de os aparelhos de medi o da coagula o da Dade Behring terem sido carregados com as amostras o teste vWF Ag executado automaticamente e os resultados s o visualizados Limita es de execu o do teste e efeito High Dose Hook Os aparelhos de medi o da coagula o para os quais a Dade Behring disponibiliza protocolos de teste s o apropriados para executar as determina es A determina o de vWF Ag noutros aparelhos de medi o da coagula o dever ser validada pelo laborat rio de an lise Ne stes casos as caracter sticas de performance divergem eventualmente das indicadas Em rela o a uma poss vel afecta o pelo efeito High Dose Hook hemoglobina bilirubina lipemia ou heparina favor consultar o manual de instru es do respectivo aparelho de medi o da coagula o da Dade Behring ou a Application Sheet A presen a extremamente rara de albumina antibovina nas amostras do paciente e ou anticorpos de coelho anticoelho pode causar um valor sobrelevado de vWF Ag O factor reumat ide no sangue tamb m pode provocar uma sobrevaloriza o de vWF Ag Valores expect veis Os valores de refer ncia variam de laborat rio para laborat rio consoante o m todo de determina o utilizado Por isso cada laborat
33. mum 15 25 C jusqu au moment du test Conserv s 2 8 C les plasmas peuvent tre utilis s pendant 24 heures Conserv s congel s 20 30 C ils restent stables jusqu a un mois Les plasmas congel s doivent tre d congel s 37 C au moins 15 minutes avant le test puis homog n is s R alisation du test Dans tous les cas respecter les instructions du manuel d utilisation de l automate utilis en particulier les paragraphes concernant l talonnage le chargement et le contr le de qualit Autres r actifs et mat riel n cessaires Tampon Dade Tampon v ronal d Owren code B 4234 25 Pour l talonnage Plasma standard humain code ORKL Pour le contr le de qualit Plasmas de contr le N code ORKE et P code OUPZ Automate de coagulation Dade Behring pouvant effectuer le test wVF Ag OPAB G03 C0540 893 H 3 Edition Juin 2002 HE i Automate de coagulation Le test vWF Ag peut tre effectu avec diff rents automates de coagulation Pour plus d informations se reporter au manuel d utilisation de l automate utilis Etalonnage L talonnage du test est effectu l aide du Plasma standard humain de Dade Behring talonnage par rapport au standard OMS 97 586 Les dilutions du standard sont effectu es automatiquement par les automates de coagulation Dade Behring avec le Dade Tampon v ronal d Owren selon les param tres d j int gr s pour ce test Le tampon repr se
34. necessary for differential diagnosis of vWD subtypes vWD type 1 is the most frequent subtype with 70 to 80 of all vWD It is characterized by a decrease of vWF Ag and vWF activity Type 2 refers to a qualitative deficiency of vWF activity whereby the antigen level still can be normal vWD type 3 is characterized by a total absence of vWF both in plasma and in the cellular compartments Test Type 1 Type 2A Type 2B Type 2 N Type 3 vWF Ag 4 y Normal Absent vWF RCo y W Lory Normal Absent Factor VIII Normal or Normal or Normal or 4 W W Further it should be mentioned that vWF deficiencies may be associated with various other diseases such as Systemic Lupus Erythematosus SLE myeloma lymphoma etc These cases may be referred to as acquired von Willebrand diseases vWF Ag and vWF activity can be increased in all kinds of inflammatory processes as a result of damages of the vascular endothelium Besides this patients with myocardial infarction may also show high vWF levels Principle of the Method Small polystyrene particles to which specific antibodies have been attached by covalent bonding are agglutinated when mixing with samples containing von Willebrand antigen This agglutination is then detected turbidimetrically via the increase in turbidity which is proportio nal to the antigen level present in the test sample Reagents Materials provided Code No OPAB 4 x 6 mL 2 mL Latex Reagent 4
35. ng f r vWF Ag Gerinnungsmessgerat Der vWF Ag Test kann mit verschiedenen Gerinnungsmessger ten durchgef hrt werden Nahere Informationen dazu im Benutzerhandbuch Kalibrierung Die Kalibrierung des Tests wird mit Standard Human Plasma von Dade Behring durchgef hrt Kalibrierung gegen den WHO Standard 97 586 Die Standard Verd nnungen werden von den Gerinnungsmessgeraten von Dade Behring automatisch gemaB den bereits in den Ge r ten eingegebenen Parametern f r diesen Test mit Dade Owren s Veronal Buffer herge stellt Der Puffer stellt den 0 Punkt dar Die Kalibrationskurve kann am Analyzer selbst oder am PC Bildschirm unter dem Ment Ka librierung berpr ft werden siehe entsprechendes Benutzerhandbuch Patientenproben Patientenplasma unverd nnt verwenden Verd nnungen mit Dade Owren s Veronal Buffer werden von den Dade Behring Gerinnungsmessger ten automatisch hergestellt Patienten plasmen werden von den Dade Behring Gerinnungsmessger ten entweder durch Scannen des Barcodes mittels Barcode Reader oder durch manuelle Eingabe der Daten mittels Tasta tur identifiziert Interne Qualit tskontrolle Um die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der Ergebnisse zu gew hrleisten sind Kontrollen notwendig Nach jeder Kalibration und mindestens alle 8 Stunden pro Testtag sind Kontrollen mit zwei verschiedenen Werten durchzuf hren Daf r sind Kontroll Plasma N und P zu ver wenden Die Kontrollplasmen vorbereiten und
36. ni riportate sulla confezione del plasma di controllo nell analizzatore per coagulazione Dade Behring controlli vengono utilizzati non diluiti Le diluizioni vengono preparate automaticamente dall analizzatore per coagulazione Dade Behring Se i risultati dei controlli sono al di fuori dell intervallo di accettabilit la determinazione deve essere ripetuta Se anche questa seconda determinazione conferma la deviazione necessario preparare una nuova curva di calibrazione Rilasciare i risultati dei pazienti solo dopo aver identificato e rimosso le cause della deviazione Risultati Il test vWF Ag viene eseguito automaticamente dagli analizzatori della Dade Behring dopo aver caricato i campioni ed i risultati vengono visualizzati sullo schermo Limitazioni della procedura Gli analizzatori per coagulazione idonei sono quelli per i quali la Dade Behring mette a disposizione i protocolli analitici L utilizzo di VWF Ag su altri analizzatori deve essere validato dal laboratorio analisi In tal caso le caratteristiche del test possono differire da quelle indicate Fare riferimento al manuale d uso dell analizzatore per coagulazione Dade Behring o al foglio applicativo del vWF Ag per quanto riguarda una possibile interferenza dovuta all effetto uncino ed alla presenza di emoglobina bilirubina lipemia o eparina La presenza estremamente rara di anticorpi anti albumina bovina e o anti anticorpi di coniglio in alcuni soggetti pu d
37. nitaux de la coagulation sanguine les plus fr quents avec une fr quence estim e une personne sur cent Sa transmission est h r ditaire autosomale dominante Il existe trois principaux types de la maladie de von Willebrand Alors que le R actif BC von Willebrand Dade Behring permet de mesurer l activit du cofacteur de la ristoc tine du Facteur de von Willebrand vWF Rco le test vWF Ag permet de d terminer le taux de l antigene sp cifique Les deux tests sont n cessaires pour un diagnostic diff rentiel des diff rents sous types de la maladie de von Willebrand La maladie de vW de type 1 qui apparait dans 70 a 80 des cas est le sous type le plus fr quent Dans cette forme le vWF Ag est diminu La maladie de vW de type 2 est caract ris e par un d ficit qualitatif en activit de vWF alors m me que le taux d antig ne peut se trouver dans le domaine normal Dans la maladie de vW de type 3 le vWF es totalement absent aussi bien du plasma que des granules cellulaires Test type 1 type 2A type2B type2N type 3 vWF Ag y y tl normal absent vWF Rco y y Lou ll normal absent Facteur VIII normal ou normal ou normal ou y W Par ailleurs il faut souligner qu un d ficit en vWF peut s accompagner de diff rentes autres maladies comme par ex le lupus ryth mateux syst mique LES un my lome un lymphome etc Dans ces cas la on parle de maladie de von Willebrand acquise Comme
38. ns l vier rincer avec beaucoup d eau L azide de sodium peut devenir explosif au contact de m taux lourds comme le cuivre ou le plomb Pr paration des r actifs Tampon Laisser le flacon de Tampon pendant 15 minutes a la temp rature ambiante 15 25 C puis l agiter avec pr caution avant de l ouvrir R actif Latex Verser la totalit du contenu d un flacon de Diluant bouchon vis vert dans le flacon de R actif Latex galement bouchon vis vert du m me coffret Agiter ensuite le m lange dans le flacon de R actif Latex en vitant le barbotage de l air Laisser reposer la solution dans le flacon ouvert pendant 15 minutes la temp rature ambiante 15 25 C puis agiter l g rement Diluant pour R actif Latex Le Diluant est pr t l emploi Stabilit et conditions de conservation Conserv s 2 8 C tous les r actifs peuvent tre utilis s jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette Stabilit apr s dilution apr s ouverture dans flacon ferm 15 jours 2 8 C 7 jours 15 25 C Les automates de coagulation ont chacun leurs propres donn es de stabilit Echantillons tester Pour l obtention des plasmas m langer un volume de solution de citrate de sodium 0 109 mol l ou 3 2 avec neuf volumes de sang veineux en vitant la formation de mousse Centrifuger pendant au moins 10 minutes 2500 g pr lever le plasma surnageant et le conserver 8 heures maxi
39. nte le point 0 La courbe d talonnage peut tre v rifi e sur l automate lui m me ou l cran du PC dans le menu talonnage se reporter au manuel d utilisation Echantillons de patients Utiliser les plasmas de patients non dilu s Les dilutions sont effectu es automatiquement par les automates Dade Behring avec le Dade Tampon v ronal d Owren Les plasmas de patients sont identifi s par les automates Dade Behring soit en scannant le code barres a l aide du lecteur code barres soit en entrant manuellement les donn es l aide du clavier Contr le de qualit interne Des contr les sont n cessaires pour garantir l exactitude et la reproductibilit des r sultats Apr s chaque talonnage et au moins toutes les 8 heures dans une journ e de travail introduire deux contr les avec des valeurs diff rentes Pour cela utiliser les Plasmas de contr le N et P Les pr parer et saisir les informations indiqu es dans leurs fiches techniques respectives dans l automate de coagulation Dade Behring Les contr les doivent tre utilis s non dilu s car les automates de coagulation Dade Behring tablissent automatiquement les dilutions Si les r sultats des contr les sortent des domaines de confiance refaire le test Si la d viation est confirm e dans le deuxi me test refaire une nouvelle courbe d talonnage Ne jamais rendre un r sultat de patient avant que la cause de la d viation ait t trouv e et co
40. odem sofrer um aumento em todos os tipos de processos inflamat rios Os pacientes com um enfarte do mioc rdio tamb m podem apresentar concentra es de vWF elevadass Princ pio metodol gico Misturando as amostras que cont m o antigene de von Willebrand com o reagente as pequenas part culas de poliestireno dotadas de anticorpos aglomeram se Os anticorpos espec ficos combinam se com as part culas atrav s de liga es covalentes Seguidamente esta aglutina o determinada turbidimetricamente pelo aumento da turbidez A turbidez directamente proporcional ao n vel de antigene da amostra Reagentes Conte do da embalagem comercial N de ref OPAB 4 x 6 ml 2ml de Reagente Latex 4ml de Diluente Reagente vWF Ag Composi o O kit de vWF Ag cont m os seguintes reagentes 4x 5 ml de tamp o tamp o glicina 4 x 2 ml de Reagente Latex tampa roscada verde suspens o de pequenas part culas de poliestireno revestidas de anticorpos de vWF anti humanos coelho 4 x 4 ml de Diluente para Reagente Latex tampa roscada verde a solu o cont m glicina e utilizada para diluir o Reagente Latex Advert ncias e medidas de precau o 1 S para uso diagn stico in vitro 2 Ao manipular diagn sticos in vitro com teor de azida de s dio necess rio tomar em conta Evitar a ingest o e o contacto com a pele ou mucosas Ao eliminar no esgoto lavar abundantemente com gua A azida de s dio em contacto com me
41. pa ses vWF Ag n o est venda nos EUA Dade Behring Marburg GmbH Emil von Behring Str 76 D 35041 Marburg Symbols Key Symbolschlissel Explication des Symboles Interpretazione simboli Clave de los Simbolos Chave dos Simbolos sl Manufactured by Hergestellt von Fabriqu par Prodotto da Fabricado por In Vitro Diagnostic Medical Device n Vitro Diagnosticum Dispositif M dical IVD Diagnostic n Vitro Dispositivo Medico per Diagnostica n Vitro Producto sanitario para Diagn stico In Vitro Lot Number Chargenbezeichnung Num ro de Lot Numero di Lotto N mero LOT de Lote exp 17 Expiration Date Verfalldatum Date de P remtion data di scadenza Fecha de comeca vencimiento termo da validade r Storage Temperature Lagertemperatur Temp rature de Conservation Temperatura di conservazione Temperatura de almacenamiento Temperatura de armazenagem C CE Mark CE Zeichen Marquage CE Marchio CE CE Marca Marca CE Catalogue Number Katalog Nummer R f rence Codice Catalogo N mero de REF Cat logo Consult Instructions for Use Gebrauchsanweisung beachten Consulter la i Notice d Utilisation Istruzioni per l uso Consultar Instucciones para el Uso Consulte as Instru es de Utiliza o
42. rrig e R sultats Une fois les chantillons charges dans l automate de coagulation Dade Behring le test vWF Ag est effectu automatiquement et les r sultats sont affich s Limites de r alisation du test et High Dose Hook Effect Les automates de coagulation adapt s pour la r alisation de ce test sont ceux pour lesquels Dade Behring propose un protocole sp cifique L utilisation du test vWF Ag sur d autres automates de coagulation doit tre valid e par le laboratoire utilisateur Dans ce cas les caract ristiques du test peuvent varier par rapport a celles indiqu es Concernant l influence possible du High Dose Hook Effect de l h moglobine de la bilirubine de la lip mie ou de l h parine se reporter au manuel d utilisation de l automate Dade Behring utilis ou a la fiche technique La pr sence ventuelle et extr mement rare dans un chantillon de patient d anticorps anti albumine bovine et ou d anticorps anti lapin peut entrainer une valeur de vWF Ag augment e La pr sence de facteurs rhumatoides dans le sang peut galement entrainer une valeur de vWF Ag augment e Valeurs attendues Selon la m thode de dosage utilis e les valeurs de r f rence varient d un laboratoire l autre Aussi chaque laboratoire doit il d terminer son propre domaine de r f rence Pour plus de pr cisions pour la d termination d un domaine de r f rence se r f rer au document NCCLS C28 A How to define and determin
43. t VWF Ag della Dade Behring viene utilizzato nella diagnostica in vitro insieme agli analizzatori per coagulazione della Dade Behring e serve per la determinazione quantitativa del vWF Ag nel plasma umano mediante immunoturbidimetria Significato diagnostico Il fattore von Willebrand vWF una glicoproteina secreta dalle cellule endoteliali e dai megacariociti Ha una struttura multimerica con un peso molecolare fino a 15 000 kDa Dopo la secrezione pud essere decomposta dalla plasmina a meno che non venga accumulata negli a granuli dei trombociti dopo assorbimento endocitosico Per la sua funzione nell adesione ed aggregazione piastrinica il vWF gioca un ruolo import ante sia nell emostasi primaria per la formazione del tappo emostatico sia nel processo di coagulazione per la stabilizzazione del Fattore VIII Le carenze qualitative e o quantitative di vWF sono la causa della malattia di von Willebrand vWD uno dei pi comuni disordini della coagulazione di tipo ereditario con una frequenza stimata di una persona ogni cento Presenta un carattere ereditario autosomico dominante Sono noti tre tipi principali di vWD Mentre il Reagente BC von Willebrand Dade Behring viene utilizzato per la determinazione dell attivit del von Willebrand cofattore ristocetinico vWF RCo il test VWF Ag serve per determinare il livello di antigene specifico Entrambi i test servono per la diagnosi differenziale dei vari tipi di vWD La vWD di
44. tais pesados como o cobre ou o chumbo pode formar azidas explosivas Prepara o dos reagentes Tamp o Antes de abrir deixar repousar o frasquinho de tamp o durante 15 minutos temperatura ambiente 15 a 25 C Agitar ligeiramente o frasquinho Reagente Latex Misturar o conte do total do frasquinho do diluente tampa roscada verde com o Reagente Latex tampa roscada igualmente verde do mesmo kit no frasquinho Seguidamente agitar a mistura no frasquinho do reagente devendo evitar se a forma o de bolhas Deixar repousar a solu o pronta durante 15 minutos temperatura ambiente 15 a 25 C Depois agitar levemente Diluente para Reagente Latex O diluente fornecido pronto para o uso Estabilidade e condi es de conserva o Conservados temperatura entre 2 e 8 C os reagentes mant m se est veis at data de validade indicada no r tulo Estabilidade ap s a dilui o abertura em recipiente fechado 15 Dias temperatura de 2 a 8 C 7 Dias temperatura de 15 a 25 C Os diversos aparelhos de coagula o possuem caracter sticas de estabiliza o individuais Material de an lise Para separar o plasma misturar uma parte de solu o de citrato de s dio 0 109mol l ou 3 2 com nove partes de sangue venoso devendo evitar se a forma o de espuma Centrifugar com 2500 x g durante 10 minutos no m nimo remover o plasma sobrenadante e conservar entre 15 a 25 C at utiliza
45. the reagents in intact vials are stable until the expiration date indicated on the box label Stability after reconstitution once opened closed vials 2 to 8 C 15 days 15t0 25 C 7 days Various analyzer do have individual stability data Specimens To separate the plasma mix 1 part sodium citrate solution 0 109 mol L i e 3 2 with 9 parts venous blood taking care to avoid the formation of foam Centrifuge at 2500 x g for at least 10 minutes remove the supernatant plasma and keep at 15 to 25 C until required in the assay but not longer than 8 hours Plasma samples can be kept at 2 to 8 C for up to 24 hours or alternatively stored deep frozen up to 1 month at 20 to 30 C Frozen plasmas must be thawed directly at 37 C for at least 15 minutes and mixed before testing Procedure Always refer to the appropriate chapters of the Operator s Manual particularly those for calibration loading and quality control Materials required but not provided Buffer Dade Owren s Veronal Buffer Code No B 4234 25 For calibration Standard Human Plasma Code No ORKL For quality control Control Plasma N Code No ORKE and P Code No OUPZ Dade Behring Coagulation Analyzer having an application for vWF Ag OPAB G03 C0540 893 H 1 Edition June 2002 Coagulation Analyzer Dade Behring s vWF Ag can be used with a variety of coagulation analyzers Please follow the Operator s Manual Calibration Assay
46. wobei der Antigengehalt sich aber durchaus im Normalbereich be finden kann Bei vWS Typ 3 fehlt der vWF sowohl im Plasma als auch in der zellul ren Granula v llig Test Typ 1 Typ2A Typ2B Typ2N Typ 3 vWF Ag y y Normal Fehlt vWF Rco y W J oder LL Normal Fehlt Faktor VIII Normal oder Normal oder 4 Normal oder W W Dar ber hinaus ist anzumerken dass ein Mangel von vWF auch mit verschiedenen anderen Krankheiten in Zusammenhang stehen kann wie beispielsweise mit systemischem Lupus erythematosus SLE Myelom Lymphom etc In diesen Fallen spricht man von einem erwor benem von Willebrand Syndrom Als Folge von Sch digungen des GefaBendothels kann vWF Ag und die vWF Aktivit t bei allen Arten von entz ndlichen Vorg ngen erh ht sein Patien ten mit einem Myokardinfarkt k nnen ebenfalls erh hte vWF Konzentrationen aufweisen Prinzip der Methode Durch Mischen der Probe die das von Willebrand Antigen enth lt mit dem Reagenz ver klumpen kleine mit Antik rpern versehene Polystyrol Partikel Die spezifischen Antik rper sind durch kovalente Bindungen mit den Partikeln verbunden Anschlie end wird diese Ag glutination turbidimetrisch ber die Erh hung der Tr bung bestimmt Die Tr bung verh lt sich direkt proportional zum Antigenspiegel in der Probe Reagenzien Inhalt der Handelspackung Bestell Nr OPAB 4 x 6 ml 2ml Latex Reagenz 4ml Diluent VWF Ag Reagenz Zusammensetzung Der v
47. zu einem berh hten vWF Ag Wert f hren Auch Rheuma faktor im Blut kann zu einer berbewertung von vWF Ag f hrenf Erwartete Werte Je nach angewandter Bestimmungsmethode variieren die Referenzwerte von Labor zu La bor Daher sollte jedes Labor seinen eigenen Referenzbereich bestimmen Weiterf hrende Informationen zur Bestimmung eigener Referenzintervalle sind dem NCCLS Dokument C28 A How to define and determine Reference intervals in the Clinical Laboratory Approved Guideline zu entnehmen Der vWF Ag Plasmaspiegel erh ht sich mit dem Lebensalter nach der Menopause sowie bei sportlichen bungen und unter Stress Der normale vWF Plasmaspiegel bewegt sich blicherweise zwischen 50 und 160 89 Leistungsmerkmale des Tests Messbereich Diesbez glich bitte das entsprechende Benutzerhandbuch Ihres Dade Behring Gerinnungs messger tes oder die Produktinformation zu vWF Ag beachten Spezifit t Der vWF Ag Test dient zur spezifischen Bestimmung des vWF Antigenspiegels in Plasma proben Pr zision Mit Dade Behring Gerinnungsmessger ten wurden Pr zisionsstudien durchgef hrt Dabei wurden Kontroll Plasma N und Kontroll Plasma P evaluiert Der Variationskoeffizient VK innerhalb eines Laufes Intra Assay Pr zision betrug zwischen 1 4 und 4 2 Der Variationskoeffizient von Tag zu Tag Inter Assay Pr zision betrug zwischen 0 9 und 4 2 Literatur siehe Seite 1 Dade ist ein eigentragenes Warenze
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