Home

manuel de sécurité biologique pour les laboratoires de la tuberculose

1. D lt MANUEL DE S CURIT 3 K0 C 0 0 x0 V LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE A bx 1 Organisation Jy mondiale de la Sant MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE M h Organisation 2 Y r NES mondiale de la Sant Catalogage la source Biblioth que de l OMS Manuel de s curit biologique pour les laboratoires de la tuberculose 1 Laboratoires normes 2 Infection de laboratoire pr vention et contr le 3 Tuberculose diag nostic 4 Confinement de risques biologiques 5 Manuels de laboratoire 6 Directive Organisation mondiale de la Sant ISBN 978 92 4 250463 7 classification NUM WF 220 Organisation mondiale de la Sant 2013 Tous droits r serv s Les publications de l Organisation mondiale de la Sant sont disponibles sur e site Web de l OMS www who int ou peuvent tre achet es aupr s des ditions de l OMS Organisation mondiale de la Sant 20 avenue Appia 1211 Gen ve 27 Suisse t l phone 41 22 791 3264 t l copie 41 22 791 4857 courriel bookorders who int Les demandes elatives la permission de reproduire ou de traduire des publications de l OMS que ce soit pour a vente ou une diffusion non commerciale doivent tre envoy es aux Editions de l OMS via le site Web de l OMS l adresse hito www who int about licensing copvriaht form en index htm
2. D clarations d int r ts Les membres du groupe d experts ont rempli des d clarations d int r ts Leurs r ponses figurent l annexe Il Ces d clarations ont t examin es par le Service juridique de l OMS pr alable ment la r union et elles ont t rappel es suc cintement par le pr sident du groupe au d but de celle ci a t constat que les repr sent ants de deux entreprises Peter van t Erve et Scott Kreitlein avaient des conflits d int r ts ers partenaires et il en a t tenu compte dans la r daction du manuel La liste des personnes qui ont particip cet examen externe par des pairs figure l annexe Ill Justification et processus la d cision de s carter des recommandations pr c dentes est justifi e dans la section suiv ante Par ailleurs des encadr s portant le titre Recommandations du groupe d experts ont t ajout s au texte pour expliquer sur quels points et pour quelles raisons les pr sentes recomman dations diff rent de celles du Manuel de s curit biologique en laboratoire de l OMS Le processus de synth se des donn es factuelles et d laboration des pr sentes directives a t pass en revue et approuv par le Comit OMS d examen des directives en mai 2012 Le manuel sera revu en 2017 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 3 En quoi le pr sent manuel diff re t il de la troisi me d
3. faut placer des pancartes indiquant que l entr e du laboratoire est interdite pendant les travaux de nettoyage Des v tements protecteurs et des MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 49 masques respiratoires appropri s DOIVENT tre port s Pour nettoyer les substances r pandues on proc dera comme suit 1 Mettre des gants un sarrau de protection boutonnant dans le dos et un masque respi ratoire 2 Regagner la zone de l incident 3 Couvrir la substance r pandue l aide de ingettes ou de serviettes en papier pour vi er qu elle ne s tende 4 Verser un d sinfectant convenable sur les lin gettes ou les serviettes ainsi qu aux abords imm diats de la zone en g n ral une solu ion d hypochlorite 5 fera l affaire 5 Appliquer le d sinfectant de mani re concentrique en commen ant par le bord ext rieur de la souillure et en allant vers le centre 6 Attendre suffisamment longtemps pour que e d sinfectant agisse avant d enlever la souillure pour l liminer En pr sence de verre bris ou d autres fragments pointus ou ranchants utiliser une pelle poussi re ou un morceau de carton rigide pour recueillir a substance r pandue et la d poser dans un conteneur imperforable en vue de son limination 7 Placer tout le restant du mat riel contamin dans un sac ferm en vue de l liminer selon les r gles 8 Nettoyer et d sinfecter
4. risque mod r ou lev Pour tous les laboratoires e lors de la pr paration des frottis il vaut mieux utiliser des b tonnets de bois ou des anses jetables plut t que des anses r utilisables qu il faudra ensuite st riliser la chaleur e Si l on se sert d anses r utilisables il faut les st riliser au moyen d un microincin rateur ferm ou d un bec Bunsen Les anses r utilisables doivent tre nettoy es dans un bocal contenant du sable et de l alcool avant st rilisation e Lorsqu on pr pare un frottis en utilisant un b tonnet ou une anse il faut op rer lentement et avec douceur afin de ne pas produire d a rosol e Ne pas d placer un frottis ni le fixer par la chaleur avant qu il soit compl tement s ch l air MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 17 Pour les laboratoires risque mod r ou haut risque e Ne pas expulser de force un liquide infectieux contenu dans une pipette e Ne pas expulser de force l air d une pipette dans un liquide potentiellement infectieux Pour ajouter la pipette un r actif dans un liquide potentiellement infectieux placer la pi pette contre la paroi interieure du r cipient et expulser doucement le r actif e Ne jamais d truire une bulle ou une pellicule pr sentes dans un tube de culture ouvert Pour viter cela on peut remettre le bouchon tapoter doucement l extr mit sup rieure du tube le mettre de
5. les autoclaves doivent tre install s distance du laboratoire principal cause du bruit et de la chaleur qu ils peuvent g n rer et galement parce qu ils laissent chapper de la vapeur Tout auto clave utilis pour d contaminer du mat riel infec tieux doit comporter une soupape d chappement d air munie d un filtre bact rien Ce filtre st rile autoclavable doit tre constitu d une cartouche filtrante membrane taille des pores 0 2 pm pla c e dans un logement r sistant la pression Le filtre doit tre facile remplacer Lors de chaque uilisation le filtre est st rilis automatiquement Dans tout laboratoir de bacilles tuberculeux il DOIT y avoir un auto o l on effectue des cultures clave et son emplacement id al est l int rieur du laboratoire de confinement 165 instructions donn es par le fabricant pour l utilisation et le nettoyage des autoclaves doivent tre respect es en toutes circonstances 42 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Tableau 4 ind eel de s curit utilis s por pr parer les chantillons dans les laboratoires de la tu erculose dangers potentie s et caract ristiques de s curit correspondantes Equipement Danger potentiel ou risque Caract ristiques de s curit Poste de s curit microbiologique Classe A rosols et projections Flux entrant minimal vitesse frontale au
6. Ces alarmes se d clenchent si l op rateur place le panneau dans une mauvaise position Lorsque cette alarme retentit il fau remettre le panneau correctement en place Un autre type d alarme est destin avertir d une perturbation dans la circulation de l air Son d clenchement est un signal de danger imm diat pour l op rateur ou pour le produit Si cette alarme retentit il faut interrompre imm diatemen la manipulation et pr venir le chef de laboratoire 16 manuel d utilisation fourni par le fabricant doi indiquer quelle est ensuite la marche suivre Lors des s ances de formation l utilisation des PSM on devra indiquer comment r agir au d clenche ment de ce type d alarme 6 2 Centrifugeuses munies de godets de s curit Au cours d une centrifugation il peut y avoir pro duction d a rosols Les r gles de s curit doivent donc tre rigoureusement respect es lorsqu on utilise une centrifugeuse Pendant la centrifugation le couvercle doit tre herm tiquement ferm l utilisation d un joint large MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 41 fait d un mat riau non poreux permet d assurer une fermeture herm tique ne faut pas ouvrir la centrifugeuse avant l arr t complet du rotor Un bon rotor poss de un syst me de fermeture s curis pour chaque nacelle Il faut boucher rectement chaque tube et chaque godet avant de metre en marche la centrifugeuse
7. PSM Lorsque le PSM est allum le ventila teur exterieur vacue l air de l enceinte et l air de la pi ce Lorsque le PSM est teint l air expuls n est extrait que de la pi ce On peut installer un ventilateur ext rieur dont le fonctionnement soit asservi celui du PSM en fonctionnement ou en veille La meil eure solution consiste doter le ventilateur ext rieur de son propre interrupteur distinct de celui du PSM de mani re que le venti ateur continue tourner pendant un certain emps une fois le PSM teint de mani re que la totalit de l air expuls de l enceinte soit vacu e l ext rieur Le grand avan age d un manchon d vacuation surmon ant le PSM c est que sa pose ne n cessite aucune modification de l enceinte et que le sens de circulation du flux d air de l int rieur du laboratoire vers l ext rieur est maintenu l autre solution consiste vacuer dans le laboratoire l air qui est pass par les filtres HEPA dont le PSM est quip Toutefois en pareil cas il faut que le b timent doit dot d un syst me distinct d extraction de l air qui assure au laboratoire au moins 6 12CAH Le syst me de ventilation du b timent doit tre con u de mani re ce que l air provenant du laboratoire risque MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 29 mod r ne soit pas recycl dans les autres locaux Lorsque l air manant du la
8. cial OMS de recherche et de formation concernant les maladies tropicales TDR Andy Ramsay MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 55 Annexe 2 D clarations d int r ts Aucun int r t d clar John Ridderhof Thomas M Shinnick Knut Feldmann CN Paramasivan Daniela Cirillo Sang Jae Kim Christopher Gilpin Moses Joloba Shanna Nesby Jenny Allen Philippe Dubois Int r ts d clar s n gligeables statut d observateur Jean Joly en 2007 Consultant pour la syphilis aupr s du Programme sp cial OMS de recher che et de formation concernant les maladies tropi cales TDR Paul Jensen Fonctionnaire depuis 2007 aux Centers for Disease Control and Prevention des tats Unis La s curit biologique est un aspect essentiel de ses fonctions aux CDC et il est l auteur de publications sur le sujet n a jamais re u d argent ni b n fici d un soutien en nature de la part d tablissements commerciaux travail lant dans le domaine de la s curit biologique Int r ts d clar s non n gligeables statut d observateur Peter van t Erve Employ depuis 1989 par la firme Particle Measurement and Validation Il s agit d une entreprise active dans le domaine de la validation certification des salles blanches des postes de s curit microbiologique et des hottes flux laminaire Scott Kreitlein Employ depuis 2001 par la firme CUH2A Cette firme est sp cia
9. de confiance 95 de 4 5 102 5 pour les techniciens qui pratiquent des aux m dicaments Le groupe d experts en a con clu que l utilisation d un PSM n est pas une obli gation lorsqu on effectue l examen microscopique direct de frottis d expectorations Le groupe estime qu avec une bonne technique microbiologique cet examen ne pr sente qu un faible risque de produc tion d a rosols infectieux et que par cons quent il peut tre pratiqu sur une paillasse ouverte pour autant qu il y ait une ventilation suffisante Cette recommandation est dans la ligne des indications pr c dentes 12 ests de sensibilit 6 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 1 valuation du risque et dassification des laboratoires de la tuberculose 1 1 Evaluation du risque pour les labo ratoires de la tuberculose de quoi s agit il Le syst me de classification des niveaux de s curit biologique 1 4 que d crit le Manuel de s cu rit biologique en laboratoire de l OMS donne une id e g n rale des concepts fondamentaux de la s curit biologique en vue de l laboration de codes de pratique nationaux et internationaux La difficult pour les responsables des programmes de lutte antituberculeuse et le personnel des labo ratoires notamment l o les ressources sont limi t es c est d interpr ter les diff rentes affectations des groupes de risque g n raux et les niveaux de
10. et remplac par de l air propre R sidu de la dessication de gouttelettes de diam tre inf rieur 5 pm Ensemble de mesures et de syst mes consistant en r glements administratifs principes de confinement pratiques et techniques de laboratoire quipements de s curit pr paration aux situ ations d urgence et installations dont le but est de permettre au personnel d un laboratoire de travailler sur des microorganismes infectieux dans de bonnes conditions de s curit Probabilit de voir un danger se concr tiser associ e aux con s quences dommageables d un v nement li ce danger Petite pi ce qui fait communiquer une partie du laboratoire avec une autre par exemple avec le laboratoire de confinement o l on ravaille sur la tuberculose Op ration consistant d truire les microorganismes infectieux Dispositif consistant utiliser un ventilateur pour extraire l air du laboratoire Transmission d une maladie due la diss mination de noyaux de condensation qui restent infectieux lorsqu ils sont en suspension dans l air La ventilation consiste faire entrer l air ext rieur dans un b timent ou un laboratoire et le distribuer l int rieur des locaux Aux fins de la s curit biologique la ventilation a pour but de donner respirer de l air sain l int rieur d un b timent en diluant dans de l air propre tout a rosol g n r dans les locaux et en produisant un flux qui permet
11. la s curit biologique pour la partie correspon dant aux techniques de diagnostic de la tubercu lose au laboratoire avril 2009 et d autre part l avis unanime exprim lors d un examen externe Son contenu refl t r pondre aux exigences minimales auxquelles doivent satisfaire les laboratoires ou r seaux de laboratoires qui effectuent des examens et des analyses en rapport avec le diagnostic de la tuberculose l valuation du risque est un exercice qui con siste cr er les conditions propices sa prise en compte et d finir de bonnes pratiques de s cu rit biologique au laboratoire en s appuyant sur l ensemble des techniques d analyse des comp tences professionnelles et des installations propres chaque laboratoire C est au niveau de chaque laboratoire que cette valuation peut tre faite dans les meilleures conditions mais cela n est pas ind pendant ao t 2011 l ouvrage vise essentiellement r pondre aux besoins particuliers des programmes de lutte antituberculeuse et faciliter la mise en place de mesures efficaces de s curit biologique adap t es aux divers niveaux des laboratoires de la tuberculose Cela tant il faut le consulter en parall le avec le Manuel de s curit biologique en laboratoire de l OMS car ce dernier porte sur les aspects g n raux de la s curit biologique au laboratoire tels que la manipulation de produits chimiques dangereux qui ne sont pas propres aux
12. ments propres au laboratoire comme la s pa ration des diff rentes zones et la pr sence d un syst me de ventilation correspondent au confine ment secondaire Les dispositifs de protection sec ondaires qui sont recommand s d pendent des examens qui sont pratiqu s par le laboratoire et du risque de transmission qui leur est li Dans un laboratoire o le risque de tuberculose est faible ces dispositifs de protection secon daires consistent s parer les zones de travail des locaux o le public est admis assurer une limination correcte des d chets et installer des lavabos pour le lavage des mains Dans un labo ratoire haut risque l installation d un sas entre le laboratoire proprement dit et les locaux d accueil du public constitue une protection secondaire sup pl mentaire ll incombe au chef de laboratoire de mettre la disposition de son personnel des installations qui soient la hauteur des fonctions du laboratoire et en rapport avec son niveau de risque Lors de la conception d un laboratoire de la tuber culose il faut tre particuli rement attentif aux sources habituelles de probl mes utilisation de surfaces perm ables locaux surcharg s facilit pour des personnes non habilit es entrer dans le laboratoire circulation du personnel et des patients proximit ou l int rieur du laboratoire et plan de travail mal con u La liste suivante r pertorie les am nagements de
13. on ne dispose pas des comp tences suffisantes en mati re de s curit biologique pour que les pro grammes nationaux puissent effectuer une valua tion des risques pour tous les laboratoires Dans le souci d aider ces programmes on a adopt une d marche fond e sur la consultation et la recher che d un consensus pour valuer les risques aux quels les laboratoires de la tuberculose travaillant Normes utilis es pour l laboration des direc tives En 2008 le Comit europ en de normalisation a publi la norme intitul e laboratory biorisk man agement standard CWA 15793 3 qui met en lumi re les facteurs essentiels prendre en compte pour metre en place et faire fonctionner avec suc c s un syst me de gestion du risque biologique Cette norme pr conise une d marche fond e sur le risque et ne fait pas appel des classifications des risques que ce soit pour les agents biologiques ou la s curit au laboratoire ni des niveaux de confinement tels qu ils sont d crits dans le Manuel de s curit biologique en laboratoire de l OMS C est partir des principes qui figurent dans le document CWA 15793 qu a t labor le pr sent manuel de s curit biologique et qu ont t formul es les recommandations relatives aux exigences minimales qui doivent tre respect es par les laboratoires de la tuberculose charg s de diagnostiquer cette maladie Usage des classifications par groupes de risque le
14. s curit correspondants pour pouvoir en d duire ensuite quelles seront les pr cautions particuli res qu il faudra prendre compte tenu des activit s exerc es dans le pays De ce fait en rapportant les besoins des laboratoires aux quatre niveaux de s curit biologique on a jet la confusion dans l esprit des utilisateurs quant la nature des pr cau tions n cessaires Pour d cider quelles sont les mesures de s curit biologique les plus appropri es dans un labora toire donn il faut s appuyer sur une valuation des risques li s aux divers types de manipulations qui y sont effectu es Ces valuations demandent beaucoup de discernement d un c t la sous estimation des risques peut tre une source de dangers de nature biologique mais d un autre c t un exc s de rigueur dans la mise en place de garde fous par rapport aux besoins r els risque de constituer un fardeau inutile tant sur le plan financier qu en termes de ressources humaines pour le personnel et la direction du laboratoire Pour proc der l valuation des risques on prend en compte les facteurs suivants e la charge bact rienne du mat riel bio logique par exemple des chantillons d expectorations et des cultures et la vio bilit des bacilles tuberculeux la voie de transmission de la tuberculose e l ventualit d une production d a rosols infectieux par le mat riel biologique manip ul et les manipul
15. s en solution 70 65 alcools sont volatils et inflammables et il ne faut pas les utiliser proximit d une flamme nue Ces solutions doivent tre con serv es dans des r cipients appropri s pour viter toute vaporation Les flacons contenant des solu tions alcooliques doivent tre clairement tiquet s atin qu on ne les passe pas l autoclave Une solution alcoolique 70 peut tre utilis e sur une paillasse de laboratoire ou dans un PSM pour la d contamination ordinaire Le grand avantage des solutions hydroalcooliques c est de ne pas lais ser le moindre r sidu sur les objets trait s En cas de contamination des mains un rin age avec une solution 70 d thanol ou d isopropanol suivi d un lavage nergique avec de l eau et du savon se r v le efficace Acide perac tique l acide perac tique se caract rise par une action rapide sur les microorganismes Il a des avan tages particuliers il ne donne pas de produits de d composition dangereux il facilite l limination des mati res organiques et ne laisse aucun r sidu Les solutions de travail 2 sont stables durant les 48 h suivant leur pr paration 2 6 Modes op ratoires pour l limination du mat riel et objets contamin s faut se doter d un syst me pour identifier et trier le mat riel biologique infectieux et ses r cipi ents On peut distinguer plusieurs cat gories par exemple e les d chets non contamin
16. trer dans les locaux du labo ratoire e La pr sence d enfants n est pas autoris e dans les locaux du laboratoire et il ne faut pas les y laisser entrer 2 1 2 Les devoirs du chef de laboratoire e incombe au chef de laboratoire de pren dre les dispositions n cessaires pour que soient labor s et adopt s un syst me de gestion de la s curit biologique ainsi qu un manuel de s curit appel aussi manuel qualit manuel de pr l vements etc selon les tablissements ble de modes op ratoires normalis s ensem e Le chef de laboratoire doit galement veiller ce que les membres de son person nel soient form s et ce que leur aptitude echnique pratiquer les divers examens soit valu e 16 personnel doit tre averti des dangers particuliers auxquels il peut tre expos il est galement tenu de lire le manuel de s curit ou tout autre manuel remplissant a m me fonction et de se conformer aux pratiques et modes op ratoires r glemen aires Le chef de laboratoire s assurera que ous les membres du personnel ont lu lesdits manuels et veillera ce qu ils signent une d claration attestant qu ils en ont assimil 6 contenu Le laboratoire devra d tenir un exemplaire du tout dernier manuel de s cu rit ou autre manuel de ce genre dont la date de publication devra tre indiqu e ll est n cessaire qu il y ait un plan perma nent d entretien maintenance
17. vants qui tous sont g n rateurs de risques plus importants le personnel doit ouvrir des flacons conten ant des culiures positives le personnel doit pr parer des frottis partir de cultures positives e l extraction de l ADN doit tre effectu e sur une culture positive e il faut manipuler des cultures pour identifier 6 germe et faire un test indirect de pharma cosensibilit e il faut liminer les r cipients bris s conten ant des cultures les cultures ou les zones o du liquide a t r pandu doivent tre d contamin es 5 2 D tails particuliers et mesures de s curit biologique n cessaires Comme dans le cas d un laboratoire risque mod r il y a deux niveaux de confinement dans un laboratoire haut risque le PSM ou ESB finement primaire et le laboratoire lui m me con finement secondaire 32 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Dans les laboratoires de la tuberculose class s comme laboratoires haut risque toutes les manipulations portant sur des cultures de M tuberculosis viables et des suspensions aqueuses de bacilles tuberculeux destin es l identification du germe des tests indirects de pharmacosensibilit et des tests de biologie mol culaire doivent se faire sous un poste de s curit microbiologique PSM ESB et l int rieur d un laboratoire de confinement Outre les
18. DU GROUPE D EXPERTS le groupe d experts a fait observer que le Manuel de s curit biologique en laboratoire de l OMS recommande l utilisation d une enceinte de s curit biologique poste de s curit microbiologique chaque fois que l on manipule des chantillons infectieux Le groupe d experts consid re que moyennant une bonne technique microbiologique l examen microscopique direct de frottis d expectorations ne risque gu re de produire des a rosols infectieux et que par cons quent cet examen peut tre pratiqu sur une paillasse ouverte pour autant qu une ventilation suffisante puisse tre assur e Cette recommandation est dans la ligne des directives ant rieures 12 14 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 2 Mesures essentielles de s curit biologique pour les laboratoires de la tuberculose Tous les laboratoires de la tuberculose quels que soient les examens pratiqu s doivent prendre un certain nombre de mesures de s curit biologique qui sont indispensables pour r duire les risques au minimum Ces mesures concernent 1 les codes de pratique 2 es quipements 3 la conception et les installations du labo ratoire 4 la surveillance sanitaire 5 la formation 6 la gestion des d chets En fonction des examens qui sont pratiqu s par le laboratoire et les r sultats de l valuation des risques li s aux manipulations qu impliquent ces examens des
19. Une fois les godets bouch s il faut proc der leur charge ment et leur d chargement sous un PSM afin de ne pas laisser chapper d a rosols Lorsqu on travaille sur des cultures de bacilles tuberculeux il est recommand d utiliser une centrifugeuse r fri g r e dot e d un rotor godets oscillants Lorsqu on utilise une microcentrifugeuse pour l extraction de l ADN il est n cessaire qu elle soit quip e d un rotor de s curit muni d un couvercle fermant herm tiquement La microcen tritugeuse doit tre charg e et d charg e sous un PSM Les centrifugeuses doivent tre p riodiquement inspect es la recherche de traces d usure ou de dommages elles doivent tre entretenues confor m ment aux instructions du fabricant 6 3 Autoclaves Dans les laboratoires g n raux de la tuberculose o sont pratiqu s des examens vis e diagnos tique le moyen le plus efficace pour st riliser les instruments la verrerie et les solutions des dif f rents milieux consiste se servir d un autoclave utilisant de la vapeur satur e sous pression On utilise galement cet autoclave pour d contaminer le mat riel biologique des cultures de mycobac t ries par exemple Pour qu un autoclave fonc tionne de mani re optimale il a deux conditions essentielles respecter 1 l air de la chambre doit tre enti rement remplac par de la vapeur 2 la temp rature doit tre de 121 C
20. adjonctions ou des modifications pourront tre apport es aux mesures expos es ci dessous compte tenu des diff rents niveaux de risque 56 reporter aux chapitres 3 4 et 5 pour plus de pr cisions 2 1 Codes de pratique On entend par code de pratique un expos des pratiques et des manipulations qui sont indis pensables l application d une bonne technique microbiologique c est dire une technique s re Ce code doit permettre au chef de laboratoire de mettre par crit la marche suivre et les modes op ratoires observer pour que les travaux du laboratoire s effectuent dans de bonnes condi tions de s curit Ce manuel de s curit appel aussi selon les tablissements manuel de pr l vements manuel qualit etc doit galement mentionner les dangers av r s ou potentiels et pr ciser comment il faut proc der pour r duire au minimum les risques qui leur sont li s Parall lement aux quipements sp ciaux il faut toujours utiliser des modes op ratoires appropri s et de bonnes techniques micro biologiques mais les premiers ne pourront jamais remplacer les seconds Les principes les plus importants qui doivent fig urer dans les codes de pratique sont indiqu s dessous 2 1 1 Acc s au laboratoire e 16 signe international de danger biologique et son symbole doivent tre appos s sur la porte du laboratoire e Seules les personnes habilit es sont auto ris es p n
21. base qui sont recommand s pour un laboratoire de la tuberculose e N cessit d une ventilation et d une circula tion de l air par flux directionnel 165 locaux doivent tre suffisamment spa cieux pour que les examens puissent tre effectu s dans de bonnes conditions de s curit et pour faciliter l entretien et le net toyage e 165 murs les plafonds et les sols doivent tre lisses et faciles nettoyer Les sols doi vent tre antid rapants Le rev tement des paillasses doit tre imper m able l eau et r sister aux produits chi miques et aux d sinfectants habituellement MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 19 utilis s au laboratoire il doit galement tre insensible une chaleur mod r e e Toutes les activit s doivent b n ficier d un clairage suffisant mais en vitant les ref lets ind sirables et les blouissements Les rideaux sont viter e Le mobilier du laboratoire doit tre robuste doit tre fabriqu avec des mat riaux imperm ables et pouvoir tre facilement d contamin Il ne faut pas utiliser de mev bles recouverts de tissu e Les espaces libres situ s entre et sous les paillasses les armoires et les diff rents quipements doivent tre accessibles pour en permettre le nettoyage e doit y avoir un espace de stockage suf fisant pour le rangement des fournitures destin es un usage imm diat et pou
22. concerne l infrastructure du laboratoire que son entretien Lors de l valuation des risques il faut tenir compte des points suivants charge bact ri enne du mat riel biologique comme les chantillons et les cultures viabilit des bacilles possibilit de production d a rosols par le mat riel que l on manipule lors de l activit qui fait l objet de l valuation charge de travail du laboratoire pid miologie de la maladie et tat de sant du personnel Tout autre facteur susceptible d influer sur la probabilit d exposition la tuberculose ou sur ses cons quences doit galement tre pris en consid ration Ces recommandations s adressent aux directeurs et chefs de laboratoire ou responsables de pro grammes antituberculeux ainsi qu aux techniciens qui pratiquent les examens n cessaires au diagnostic de la tuberculose notamment lorsque la charge de travail est lourde et les ressources faibles Dans le pr sent document on appellera laboratoire de la tuberculose le laboratoire ou la partie d un labora toire o l on effectue le diagnostic de la tuberculose Les recommandations concernent sp cifiquement les laboratoires qui examinent selon un mode op ra toire bien d fini des chantillons susceptibles de contenir Mycobacterium tuberculosis Pour tout autre ensemble de germes pathog nes et de techniques d examen on pourra d finir les pr cautions prendre sur le plan de la s curit biologique
23. de ce groupe d experts ont t examin es par le Service juridique de l OMS pr lablement la r union s agissait de parvenir un consen sus au sujet des principes de base respecter dans la conception et les pratiques des laboratoires pour d finir les crit res minimaux garantissant la s curit biologique des op rateurs lors des examens microscopiques des cultures des tests de sensibilit aux m dicaments et des tests mol culaires prati qu s pour le diagnostic de la tuberculose dans diff rents pays et contextes pid miologiques Le pr sent manuel a t labor partir des travaux du groupe d experts Les recommandations qui y figurent reposent sur une valuation des risques li s aux diff rentes techniques d analyse mises en uvre dans divers types de laboratoires de la tuberculose Le manuel indique les exigences de base auxquelles doivent r pondre les installations et les pratiques exigences qui peuvent tre adapt es pour respecter la r glementation locale ou nationale ou la suite d une valuation des risques l valuation des risques n cessite discernement et circonspection d un c t une sous estimation du risque peut exposer le personnel des dangers de nature biologique mais d un autre c t chercher r duire les risques par des mesures plus strictes qu il n est n cessaire peut cr er un surcro t de travail inutile pour le personnel et entra ner des co ts plus lev s tant en ce qui
24. de l air potentiellement contamin ne soi rejet dans le laboratoire en cas de panne de courant est utile de disposer d un g n rateur de secours pour alimenter les PSM et les autres quipements essentiels tels que les incubateurs et les cong lateurs 2 Ventilation Outre les PSM qui constituent la barri re de protection primaire une bar ri re de protection secondaire constitu e par le laboratoire luim me est assur e en maintenant un flux d air unidirectionnel travers le laboratoire et en veillant ce qu il y ait au moins 6 12 CAH Un moyen simple pour cr er un flux d air unidirectionnel consiste placer un vent qui permette l air de circuler en direc tion de la zone propre du laboratoire et faire fonctionner en continu un ou plusieurs PSM munis d un manchon de raccorde ment afin d aspirer l air vers la zone sale de l vacuer du laboratoire et de l expulser l ext rieur du b timent Un syst me de contr le visuel dot ou non d une alarme doit tre install de mani re que le person nel s assure tout moment que l air circule dans la bonne direction l int rieur du laboratoire voir l encadr 5 la pose d un manchon de raccordement du PSM avec un conduit d bouchant l ext rieur facilite la cr ation d un flux d air unidirectionnel et si de l air contamin est pr sent dans l enceinte celui ci est expuls du laboratoire travers les filtres HEPA du
25. des informations incompl tes valuer un risque consiste simplement examiner avec soin ce qui dans la t che que vous accomplissez est susceptible de causer un dommage aux personnes cette valuation vous permet de voir si vous avez pris suffisamment de pr cautions ou si vous devez en prendre encore davantage pour viter tout dommage Le personnel du laboratoire et les autres personnes ont le droit d tre prot g s contre les dommages r sultant de l absence de mesures raisonnables pour ma triser les risques n y a pas de m thode type pour effectuer une valuation du risque mais on pourra s inspirer de la d marche suivante pour proc der cet exercice 1 Identifier les dangers intrins ques Les dangers que repr sentent les bacilles tuberculeux pour les individus ou la communaut varient selon les diff rentes souches Les souches pharmacor sistantes et notamment les souches multir sistantes MDR ou ultrar sistantes XDR font courir un risque plus important car en cas de contamination d une personne les dommages seront plus graves du fait que les traitements peuvent tre limit s ou moins efficaces Les laboratoires qui travaillent sur des souches qui ont plus de chances d tre pharmacor sistantes soit en raison d un tri s lectif des patients soit en raison des conditions pid miologiques locales doivent envisager de se montrer plus exigeants sur le niveau de pr caution 2 D terminer quels sont ceu
26. des instal lations de chauffage et des syst mes de ventilation d a ration et de confinement flux directionnel pour que ces derniers fonctionnent toujours correctement 2 1 3 quipements de protection individuelle destin s au personnel e le personnel qui travaille dans le labora toire doit toujours porter des v tements de protection Ces v tements ne doivent toutefois pas tre port s en dehors des locaux du laboratoire par exemple la cantine la caf t ria dans les bureaux la biblioth que au salon du personnel ou dans les toilettes Les blouses et sarraus de laboratoire ne doivent pas tre rang s avec les v tements personnels Ceux qui sont propres doivent galement tre rang s s par ment de ceux qui ont t port s faut changer de blouse ou de sarrau au moins chaque semaine mais viter de les laver la maison Les sarraus ou blouses de laboratoire doi vent avoir de longues manches avec des manchettes lastiques d au moins 30 mm de longueur ils doivent boutonner dans le dos Le personnel doit disposer de blouses de plusieurs tailles Des blouses ou sarraus de ce mod le doivent tre port es dans ous les laboratoires o il y a un risque important de contamination par le bacille de la tuberculose Les blouses de laboratoire ordinaires sont g n ralement manches longues et bov onnent devant Ce mod le de blouse doit galement exister en plusieurs tailles pour le perso
27. l air qui se d place 0 38 ou 0 50 m s on aura un d bit horaire de 1 5 x O 2 x 0 38 ou 0 50 x 3600 410 540 m3 h Faire ce calcul pour chaque type de PSM utilis Calculer le d bit que devra assurer le ventilateur d extraction ext rieur install la sortie du conduit d vacuation doit tre de 30 50 sup rieur au d bit volum trique de chaque PSM pouvoir tre r gl et contr l et tre branch sur une source d alimentation lectrique ininterrompue l air qui sort d un PSM doit tre vacu par un conduit de plus de 20 cm de diam tre avec un ing nieur a raulicien qualifi MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 31 5 Laboratoires haut risque laboratoires de confinement pour la tuberculose On entend par laboratoire de confinement pour la tuberculose une installation qui pr sente en mati re de construction et d am nagement les caract ristiques n cessaires pour assurer la manipulation de cultures de bacilles tuberculeux dans de bonnes conditions de s curit Ce genre d installation peut satisfaire ou non toutes les exigences auquelles devrait r pondre un labora toire de s curit biologique de niveau 3 selon le Manuel de s curit biologique de l OMS 2 Toutes ces installations doivent tre conformes la r gle mentation locale et nationale les recommandations qui sont donn es dans le pr sent manuel correspondent aux exigences m
28. laboratoires de la tuberculose les risques d incendie et autres types de risque le transport de substances infectieuses et la formation 2 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE La r union du groupe d experts l OMS a r uni un groupe d experts Gen ve Suisse Seuls les participants qui avaient ass sist en personne la r union ont pris part la discussion initiale et aux discussions ult rieures au cours desquelles des recommandations ont t formul es Les personnes invit es partici per aux travaux de ce groupe ont t choisies non n gligeables aussi a til t d cid de les faire si ger en tant qu observateurs ils n ont particip la formulation d aucune des recom mandations qui figurent dans le pr sent manuel Examen externe par des pairs Un examen technique externe du pr sent manuel a t organis au si ge de l OMS On s est efforc de r pondre aux pr occupations des div de mani re repr senter de mani re quilibr e les diff rents points de vue prendre en consi d ration pour formuler des recommandations en mati re de s curit biologique portant sp cifique ment sur la tuberculose Parmi les membres de ce groupe figuraient des experts techniques des utilisateurs finaux des fabricants de postes de s curit microbiologique et des sp cialistes de la s curit biologique la liste de ces personnes figure l annexe
29. mesures de s curit qui doivent tre prises dans un laboratoire risque mod r il a d autres am liorations apporter en mati re de s curit biologique dans un laboratoire haut risque savoir 1 Disposition du laboratoire faut qu il y ait deux syst mes de portes d entr e pou cr er un sas devant le laboratoire de confi nement Cette disposition permet de cr e une barri re physique entre la zone de confinement et les autres zones du labo ratoire Elle permet galement d assure une circulation unidirectionnelle de l air qui entre dans le laboratoire 16 sas doit tre quip de mani re ce que les v tements de laboratoire qui son propres soient rang s s par ment de ceux qui sont sales Les portes du sas doivent tre automatiques et munies d un dispositif d asservissement de mani re ce qu on ne puisse n ouvrir qu une seule porte la fois Une vitre briser peut tre install e pou une vacuation d urgence l air peut p n trer dans un laboratoire de confinement pour la tuberculose en passant par le sas e des grilles munies de pr tiltres peuvent tre dispos es au niveau des panneaux inf ri eurs des portes du sas de mani re que seu de l air propre p n tre dans le laboratoire Un panneau de verre doit tre install afin que l on puisse avoir une vue du laboratoire de confinement depuis les zones qui lui sont ext rieures 2 2 quipement de protect
30. nergie On peut remplacer l incin ration par un autoclavage 2 5 2 Autoclavage faut utiliser des autoclaves distincts pour st ril iser les solutions ou la verrerie mat riel propre et pour d contaminer le mat riel infectieux Le mat riel et substances suivantes peuvent passer l autoclave e instruments verrerie milieux ou solutions utiliser de mani re st rile dans un labora toire pratiquant le diagnostic g n ral de la tuberculose e cultures de mycobact ries liminer com me d chets e l ensemble du mat riel infectieux provenant de laboratoires de confinement o des my cobact ries sont cultiv es Chaque fois que l on proc de un autoclavage il faut noter la dur e la temp rature et la pression pour s assurer que l appareil fonctionne correcte ment On utisera p riodiquement des indicateurs biologiques pour v rifier que l autoclave st rilise correctement MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 21 2 5 3 D sinfection l action destructrice des d sinfectants d pend de la population de microorganismes d truire de la dur e du contact et de la pr sence de d bris organiques Les d sinfectants commercialis s sous un nom de marque qui sont recommand s pour les laboratoires de la tuberculose sont ceux qui contiennent des ph nols du chlore ou des alcools On les choisit habituellement en fonction du mat riel d sinfecter Ph n
31. ou limiter les contacts entre l op rateur et le mat riel infectieux e tre fabriqu l aide de mat riaux imper m ables et r sistants la corrosion e tre fabriqu de mani re offrir des sur faces lisses sans angles vifs et sans pi ces mobiles non prot g es e tre con u fabriqu et install de mani r pouvoir tre utilis sans difficult faci liter l entretien le nettoyage la d contami nation et les contr les de certification dans la mesure du possible on vitera la verrerie et autres mat riaux fragiles Outre l quipement et le mat riel propres aux laboratoires correspondant aux diff rents niveaux de risque d crits dans les chapitres 3 4 et 5 on trouvera au chapitre 6 des informations plus compl tes sur les PSM ESB ainsi que des ren seignements sur d autres quipements de s cu rit au chapitre 7 Dans les laboratoires o le risque d infection est consid r comme mod r ou lev le confinement primaire des a rosols produits lors de certaines manipulations est assur par les postes ou enceintes de s curit microbi ologique ESB PSM 2 3 Conception et installations du labo ratoire Un laboratoire bien con u et bien construit facilite la protection de tout le personnel qui travaille et constitue une barri re qui prot ge la commu naut contre les a rosols infectieux qui peuvent tre produits dans ses locaux Certains am nage
32. que s est fond le groupe d experts pour d terminer les exigences minimales en mati re de s curit MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 7 biologique qui doivent tre respect es lors de l ex cution de divers examens par les laboratoires de la tuberculose incombe au chef de laboratoire de veiller ce que les mesures de s curit minimales indiqu es dans le pr sent manuel soient prises avec des modes op ratoires des quipements et des instal lations convenables en soutien aux activit s qui sont men es Les mesures de s curit biologique qui sont appliqu es au sein du laboratoire doivent faire l objet d un examen p riodique et tre revues si n cessaire en particulier lors de l introduction de nouveaux tests ou modes op ratoires Pour que les travaux du laboratoire puissent tre ex cut s dans les meilleures conditions de s curit possibles il faut que le r sultat de l valuation des risques impose le type de mat riel d quipements de laboratoire et d quipements de protection individuelle ainsi que les particularit s techniques des installations qui devront tre pris en compte dans les modes op ratoires normalis s applica bles chaque examen effectu 1 2 Identification des dangers On entend par danger tout ce qui est suscep tible de causer un dommage quelle qu en soit la probabilit de survenue peut s agir d une situation
33. r pan dus accidentellement et veiller ce chacun lise et assimile ces instructions Si un produit est r pandu accidentellement dans un PSM il faut nettoyer imm diatement le volume de travail pendant que l enceinte continue fonctionner On utilisera cet effet un d sinfectant efficace que l on devra appliquer en s effor ant de produire le moins d a rosols possible Tout ce qui entre en contact avec le produit r pandu doit tre d sinfect et limin convenablement Figure 4 Mod le d agencement du mat riel pour travailler sous un poste de s curit microbiologique de classe en allant des zones propres vers les zones contamin es Le mat riel propre est plac dans la partie gauche de l enceinte les chantillons sont inocul s au centre de l enceinte quant au pipettes et autre mat riel contamin s ils sont plac s dans des conteneurs d chets dans la partie droite de l enceinte Cet agencement peut tre invers pour les op rateurs gauchers Zone de travail Zone contamin e Zone propre Tubes centrifugation coniques type Falcon Conteneur a d chets Pipettes Tubes pour cultures liquides Godet de centrifugeuse Grille Linge absorbant plac sur le plan de travail 40 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Certification La proc dure de certification stipule qu un contr le doit tre effectu sur chaque PSM pour v rifier qu il fonctio
34. recyclage de l air dans la pi ce a l avantage de r duire la facture nerg tique de l tablissement car l air chauff ou refroidi ne s chappe pas l ext rieur MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 37 Figure 2 Coupe sch matique d un poste de s curit microbiologique de classe type A2 A Ouverture frontale B Panneau vitr guillo tine C Filtre HEPA d vacuation D Filtre HEPA d admission d air E Chambre de distribution en surpression F Chambre de distribution en d pression Air filtr sur filtre HEPA 6 1 4 Raccordements par manchon Il existe des manchons de raccordement ou des hottes voir la figure 3 que l on peut utiliser avec les PSM de classe Il type A2 dot s de conduits d vacuation vers l ext rieur Le manchon de rac cordement s adapte sur le bo tier d vacuation de l enceinte et permet d en aspirer l air pour l amener jusqu aux conduits d vacuation vers l ext rieur Un petit orifice g n ralement de 5 cm de largeur est m nag entre le bo tier d vacuation de l enceinte et le raccord ce qui permet d aspirer l air de la pi ce pour l amener galement dans les conduits d vacuation vers l ext rieur Le syst me d vacuation doit avoir une capacit suffisante pour capter la fois l air de la pi ce et celui qui est rejet de l enceinte Le manchon doit tre amovible ou tout au moins tre con u pour permettre
35. s non infec tieux susceptibles d tre r utilis s recycl s ou limin s de la m me mani re que les d chets m nagers en g n ral les objets pointus ou tranchants contamin s infectieux par exemple la verrerie les seringues et les lames porte objet qui sont bris es e 16 mat riel contamin infectieux liminer par enfouissement incin ration ou autocla vage 22 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 2 6 1 Verrerie et lames porte objet bris es Pour l limination des lames bris es ou ayant servi il faut utiliser des conteneurs pour objets pointus ou tranchants Ces conteneurs doivent tre imperfo rables tre munis d un couvercle ajust et ne doi vent pas tre remplis ras bord Une fois qu ils sont remplis aux trois quarts il faut les placer dans les conteneurs destin s recevoir les d chets infectieux et les incin rer ne faut pas les enfouir dans une d charge sauf s ils ont t incin r s ou pass s l autoclave ne faut pas r utiliser des lames ayant d j servi 2 6 2 Mat riel contamin ou potentielle ment infectieux liminer Toutes les cultures qui sont positives pour le bac ille tuberculeux doivent passer l autoclave avant d tre limin es doit y avoir un autoclave l int rieur ou proximit du laboratoire o l on effectue des cultures de bacilles tuberculeux Tout le mat riel contamin c est dire
36. une fumigation mat riel r utiliser doit tre d contamin l aide d un d sinfectant convenable ou pass l autoclave avant d tre sorti du laboratoire 34 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 6 65 quipements de s curit Ces quipements de s curit peuvent tre utilis s pour liminer ou r duire certains des risques qui sont pr sents dans les laboratoires de la tuberculose vitesse de l air la position du fitre HEPA dispos l int rieur de l enceinte le d bit des ventilateurs et les techniques d extraction Tableau 4 n offrent toutefois aucune garantie de protection si l op rateur n est pas comp tent et n utilise pas les techniques qui conviennent 5 doi vent galement tre r guli rement contr l s pour s assurer qu ils continuent fonctionner dans de bonnes conditions de s curit 6 1 Postes de s curit microbiologique appel s aussi enceintes de s cu rit biologique En raison de leur faible granulom trie les a ro sols constitu s de noyaux de condensation qui sont susceptibles d tre produits lors de certaines manipulations peuvent ne pas a tirer l attention de l op rateur il y a donc un risque d inhalation d agents infectieux ou de contamination crois e des plans de travail ou du mat riel Ces PSM ou ESB sont con us pour prot ger le personnel et l environnement contre les agents infectieux et sel
37. BORATION DE CES DIRECTIVES ABR VIATIONS ET SIGLES INTRODUCTION 1 VALUATION DU RISQUE ET CLASSIFICATION DES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 1 EVALUATION DU RISQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE DE QUOI S AGIT IL 2 2 IDENTIFICATION DES DANGERS 3 D TERMINATION DES RISQUES SUM DES RISQUES ET DES MESURES D ATT NUATION 5 PROGRAMME DE SANT AU TRAVAIL DESTIN AUX EMPLOY S CLASSIFICATION DES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 2 MESURES ESSENTIELLES DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 2 1 CODES DE PRATIQUE 2 2 QUPEMENTS 2 3 CONCEPTION ET INSTALLATIONS DES LABORATOIRES 2 4 FORMATION 2 5 GESTION DES DECHETS 2 6 MODES OP RATOIRES POUR L ELIMINATION DU MATERIEL ET DES OBJETS CONTAMINES 3 LABORATOIRES FAIBLE RISQUE 3 1 FACTEURS QUI ACCROISSENT LE RISQUE D INFECTION 3 2 D TAILS PARTICULIERS ET MESURES DE S CURIT ESSENTIELLES MINIMALES 4 LABORATOIRES RISQUE MOD R 1 FACTEURS QUI ACCROISSENT LE RISQUE D INFECTION 1 2 D TAILS PARTICULIERS ET MESURES DE S CURIT ESSENTIELLES MINIMALES VI VII 23 23 23 27 27 27 9 10 LABORATOIRES HAUT RISQUE LABORATOIRES DE CONFINEMENT POUR LA TUBERCULOSE 5 1 FACTEURS QUI ACCROISSENT LE RISQUE D INFECTION 5 2 D TAILS PARTICULIERS ET MESURES DE S CURIT N CESSAIRES LES EQUIPEMENTS DE SECURITE 6 1 POSTES DE S CURIT MICROBIOLOGIQUE APPEL S AUSSI ENCEINTE
38. Manuel de s curit biologique en laboratoire recommande aux pays d tablir des classifications nationales ou r gionales des microorganismes par groupes de risque l affectation d un germe patho g ne un groupe de risque donn peut varier selon la localisation g ographique ou la souche laquelle appartient le germe du fait de diff rences dans les caract ristiques pid miologiques de l agent pathog ne au sein d une communaut ou dans le risque de contracter une infection au labo ratoire importe de bien se rendre compte que les mem bres du personnel d un laboratoire peuvent tre plus ou moins pr dispos s d velopper la malo dans ces conditions sont habituellement expos s et tablir les crit res minimaux respecter pour que les tests de diagnostic de la tuberculose soient effectu s dans de bonnes conditions de s curit die une fois contamin s par le bacille et que seule une petite fraction des sujets infect s va effective ment tomber malade au cours de leur existence Les personnes dont l immunit est r duite par exemple 4 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE du fait d une infection par le VIH ou d une gros sesse peuvent courir un risque plus lev de faire une tuberculose et l on peut tre amen dans ce cas prendre des pr cautions suppl mentaires r sulte de toutes ces consid rations que le pr sent manuel conform ment aux prescrip
39. OIRES DE LA TUBERCULOSE Comprim s de chloramine 10 comprim s e Serviettes en papier e Savon e Conteneur pour objets pointus ou tranchants e Sacs pour mati res infectieuses e Lunettes de protection 2 paires a les solutions d hypochlorite se p riment rap idement Si une grande quantit de mati re a t r pandue il vaut mieux pr parer la solution extemporan ment MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 51 Bibliographie Manuel OMS d laboration des directives Gen ve Organisation mondiale de la Sant 2012 Manuel de s curit biologique en laboratoire 3 dition Gen ve Organisation mondiale de la Sant 2005 galement disponible sur le site suivant htto www who int csr resources publications biosafety LabBiosMan 3rdFrenchweb pdf Laboratory biorisk management standard CEN workshop agreement Bruxelles Comit euro p en de normalisation 2008 CWA 15793 2008 galement disponible sur le site suivant tto fip cenorm be public CWAs wokrshop3 1 CWA15793 pdf Styblo K Epidemiology of tuberculosis la Haye Royal Netherland Tuberculosis Association 1991 Olsen AM et al Infectiousness of tuberculosis American Review of Respiratory Disease 1967 96 836 870 Qian Y et al Performance of N95 respirators reaerosolization of bacteria and solid particles AIHA Journal 1997 58 876 880 SegalMaurer S Kalkut GE Environmental control o
40. S DE S CURIT BIOLOGIQUE 6 2 CENTRIFUGEUSES 6 3 AUTOCIAVES QUIPEMENTS ET V TEMENTS DE PROTECTION INDIVIDUELLE 7 1 BLOUSES O SARRAUS DE LABORATOIRE BOUTONNANT DANS LE DOS 7 2 APPAREILS MASQUES RESPIRATOIRES 7 3 GANTS PLANS DE PR PARATION ET DE R ACTION AUX SITUATIONS D URGENCE 8 PLAN DE PR PARATION AUX SITUATIONS D URGENCE 8 2 MARCHE SUIVRE FACE UNE SITUATION D URGENCE DANS UN LABORATOIRE DE LA TUBERCULOSE 8 3 N CESSAIRE POUR LE NETTOYAGE DES SUBSTANCES R PANDUES BIBLIOGRAPHIE ANNEXE ANNEXE PARTICIPANTS LA R UNION ANNEXE 2 D CLARATION D INT R TS ANNEXE 3 GROUPE D EXAMEN PAR DES PAIRS 51 53 53 54 55 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE R sum d orientation A la suite d une consultation technique qui s est tenue en septembre 2008 Atlanta GA entre l Organisation mondiale de la Sant OMS et les Centers for Disease Prevention and Control des tats Unis d Am rique au sujet des strat gies approches et partenariats susceptibles d tre mis en uvre pour am liorer la s curit biologique au laboratoire partout dans le monde un groupe d experts a t r uni en avril 2009 au Si ge de l OMS Gen ve Suisse afin d laborer des lignes directrices concernant la s curit biologique des techniques de laboratoire utilis es pour le diagnostic de la tuber culose Les d clarations d int r ts produites par les membres
41. abukri Guseongup Yonginsi 449 560 Kyeonggido R publique de Cor e Moses Joloba National TB Reference Laboratory Ministry of Health 16041 Plot 2 Lourdel Road 7062 Wandegeya Ouganda Paul Jensen Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Road MS G35 NE Atlanta GA 30333 tats Unis d Am rique Shana Nesby Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Road MS G35 NE Atlanta GA 30333 Etats Unis d Am rique CN Paramasivan Foundation for Innovative New Diagnostics 16 Avenue de Bud 1202 Gen ve Suisse 54 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE John Ridderhof Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Road MS G35 NE Atlanta GA 30333 Etats Unis d Am rique Thomas M Shinnick Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Road MS G35 NE Atlanta GA 30333 Etats Unis d Am rique Peter van t Erve Particle Measurement and Validation PMY Kuipersweg 37 3446 JA Woerden Pays Bas Membres du personnel de l OMS May Chu R glement sanitaire international S bastien Cognat R glement sanitaire interna tional Nicoletta Previsani R glement sanitaire interna tional Jean lragena Halte la tuberculose Renforce ment des laboratoires Veronique Vincent Halte latuberculose Renforce ment des laboratoires Karin Weyer Halte la tuberculose Renforce ment des laboratoires Programme sp
42. acent proximit du PSM les fen tres ouvertes les registres d admission de l air ou encore l ouverture ou la fermeture des portes Comme le recommandent les fabricants faut donc installer les PSM dans des emplace ments qui soient loign s des points de passage et des courants d air qui pourraient perturber leur fonctionnement Dans la mesure du possible il faudrait pr voir un d gagement d une trentaine de centim tres derri re le poste et sur chacun de ses c t s pour faciliter l acc s en cas d op rations d entretien peut galement s av rer n cessaire 38 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Figure 3 Coupe sch matique montrant le raccordement direct d un PSM de classe type A2 l ext rieur du laboratoire au moyen d un manchon et d une hotte Fad Fo Pt Pad Ventilateur d extraction Entr e de l air de la pi ce par l orifice de pr voir un d gagement d environ 30 35 cm au dessus du PSM afin que l on puiss faut d placer les bras lentement en avant ou en arri re perpendiculairement l ouverture frontale mesurer exactement la vitesse de l air travers le filtre d vacuation et le cas ch ant changer le filtre Op rateurs Si les postes de s curit microbiologique ne sont pas utilis s correctement la protection conf r e ris que d tre consid rablement r duite Dans certains cas une mauvaise utilisation p
43. aire ces frottis il est pr f rable d utiliser des b tonnets applicateurs en bois ou des anses de transfert Manipulation des bo tes pr l vements qui fuient faut v rifier l int grit des bof tes pr l vements d s leur arriv e au labo ratoire Il faudra peut tre liminer celles qui fuient et demander un nouveau pr l ve ment S il reste un bon chantillon dans une bo te qui fuit on pourra d contaminer la bo te avec un d sinfectant appropri avant 26 la pr paration Les chantillons doivent tre transport s en position verticale pour qu il y ait le moins de fuites possibles MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE impliquent un contact direct ou qui pour raient entra ner un contact accidentel avec des expectorations du sang des liquides organiques ou tout autre mat riel potenti ellement infectieux Les gants doivent tre chang s r guli rement et ne pas tre r utili s s Le personnel doit toujours se laver les mains avant de quitter le laboratoire 5 quipements de protection individuelle Chaque pays et chaque laboratoire doit valuer les risques encourus et d cider du niveau de protection qui convient pour les diff rents examens qui sont pratiqu s Des 7 7 a 5 Il n est pas n cessaire d utiliser un appareil ou masque respiratoire pendant la pr paration des frottis d expectorations blouses de protection doivent toujours t
44. ann Christopher Gilpin Jean lragena Paul Jensen Moses Joloba Jean Joly Sang Jae Kim Scott Kreitlein Shanna Nesby CN Paramasivan Nicoletta Previsani John Ridderhof Thomas M Shinnick Andrew Ramsay Peter van t Erve V ronique Vincent Karin Weyer Les personnes suivantes ont particip au Groupe d examen technique qui s est r uni au si ge de l OMS Gen ve Suisse les 22 et 23 ao t 2011 Heather Alexander Pawan Angra Daniela Cirillo Gerrit Coetzee Edward Desmond Maria Alice da Silva Telles Sara Ir ne Eyangoh Knut Feldmann Christopher Gilpin Rumina Hasan Jean lragena Moses Joloba Fuad Mirzayev Satoshi Mitarai Richard O Brien Daniel Orozco CN Paramasivan icoletta Previsani Leen Rigouts Thomas M Shinnick Akos Somoskovi Magdi Samaan Wayne van Gemert Elsie Van Schalkwyck Les auteurs souhaitent galement faire tat des contributions originales d un grand nombre de profes sionnels qui ont travaill la troisi me dition du Manuel de s curit biologique en laboratoire de OMS ouvrage dont certaines parties du pr sent document sont des adaptations La pr paration et la publication du pr sent document ont t rendues possibles gr ce au soutien inancier apport par l Agence des tats Unis pour le D veloppement international USAID et par les Centers for Disease Control and Prevention des Etats Unis MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Ab
45. ant http standards nsf org apps group public download php 3604 NSF 49 08e rep watermarked pdf BS EN 12469 2000 Biotechnology Performance criteria for microbiological safety cabinets Londres British Standards Institution 2000 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 53 Annexe 1 Participants la r union Groupe d experts Jenny Allen Medical Research Council 49 Ridge Road Durban 4000 Afrique du Sud Heather Alexander Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Road MS G35 NE Atlanta GA 30333 Etats Unis d Am rique Daniela Cirillo Service des bact ries pathog nes mergentes San Raffaele del Monte Tabor Foundation 158 Via Olgettina 60 20132 Milan ltalie Philippe Dubois Cellule d intervention Biologique d Urgence Institut Pasteur 25 rue du Docteur Roux 75015 Paris France Jean Joly Centre de Sant et de Services Sociaux de la Haute Yamaska 250 boulevard Leclerc Oeust Granby QC J2G 1T7 Canada Scott Kreitlein CUH2A 120 Peachtree Street NE Atlanta GA 30303 Etats Unis d Am rique Knut Feldmann Foundation for Innovative New Diagnostics 16 Avenue de Bud 1202 Geneva Suisse Christopher Gilpin Organisation internationale pour les migrations Route de Morillons Gen ve 1211 Suisse Sang Jae Kim Union internationale contre la tuberculose et les maladies respiratoire UICTMR 101 703 Unjeongmaul 621 M
46. ant de retirer le masque respiratoire Il ne faut toucher que les san gles et viter tout contact avec le devant du masque lui m me 7 3 Gants faut porter des gants pour toute manipulation impliquant un contact direct ou comportant un risque de contact accidentel avec des expectorar tions du sang des liquides organiques ou tout autre type de mat riel potentiellement infectieux Apr s usage l op rateur doit ter ses gants de mani re aseptique et se laver les mains Manipuler ou utiliser un appareil ou un quipe ment quelconque du laboratoire comme une centrifugeuse ou un t l phone avec des gants con tamin s ou des mains non lav es peut constituer une source d infection pour les autres membres du personnel Un lavage r gulier des mains est essentiel pour pr venir nombre d infections contract es au laboratoire et notamment celles qui sont dues des germes pathog nes transmissibles par le sang Des gants jetables en latex en PVC sans latex transparents ou en polyacrylonitrile de tailles appropri es petite taille taille moyenne grande aille doivent tre mis la disposition de tout le personnel Ces gants doivent couvrir les poignets et pouvoir tre port s aussi confortablement que possible ll ne faut jamais r utiliser des gants jetables une fois utilis s ils doivent tre limin s avec les d chets infectieux du laboratoire Il faut que le laboratoire puisse tre approvi
47. ations que n cessite chaque type d examen e le nombre de man uvres effectu es pour chaque type d examen et qui sont suscep tibles de produire des a rosols e la charge de travail du laboratoire et de chaque membre du personnel la localisation du laboratoire e _l pid miologie de la maladie et la popu ation de patients desservie par le labora toire le niveau d exp rience et de comp tence des techniciens du laboratoire l tat de sant des membres du personnel notamment les techniciens s ropositifs pour 6 VIH En outre il faut prendre en consid ration l aptitude du personnel du laboratoire ma triser les dan gers Cette aptitude va d pendre de la comp tence et de la qualification technique de tous les techniciens du laboratoire ainsi que de leurs pratiques sur le plan microbiologique du bon fonctionnement des quipements de confinement des dispositifs de s curit du laboratoire et enfin de l existence de modes op ratoires normalis s et de leur utilisation bon escient l encadr 1 donne des d tails sur la mani re de proc der une valuation des risques li s certaines manipulations Les tableaux et 2 r capitulent les diverses consid rations qui interviennent dans l valuation des risques pr sents dans les labora toires de la tuberculose en g n ral ainsi que les risques li s l ex cution de divers examens par ces laboratoires C est sur ces consid rations
48. atoire doit tre s par des espaces du b timent o l on peut circuler librement Un lavabo pour le lavage des mains doit tre install pr s de la sortie du laboratoire 30 D contamination et limination des d chets Tous les d chets infectieux doivent tre vacu s du laboratoire risque mod r en vue d tre limin s selon les r gles Ils doivent tre transport s dans des sacs ou autres conteneurs ferm s en plastique con form ment la r glementation locale en la mati re Tout mat riel r utiliser doit tre d contamin au moyen d un d sinfectant appropri ou pass l autoclave avant de sortir du laboratoire R duire au minimum la production d a rosols la formation du personnel doit toujours comporter des informations sur les techniques de culture qui sont les plus s res le but tant d viter l inhalation des a rosols qui sont produits lors de l utilisation d anses de transfert du pipettage de l ouverture MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE des bo tes pr l vements de la manipula tion de r cipients qui sont endommag s ou qui fuient de la centrifugation ou du vortex age Pour viter que du mat riel infectieux ne se disperse lorsqu on utilise la flamme nue d un bec Bunsen on utilisera un micro incin rateur lectrique ferm pour st riliser es anses r utilisables est recommand d utiliser des anses et des pipet
49. au moins un antituberculeux injectable amikacine kanamycine ou capr omycine 10 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Tableau 1 Facteurs entrant en ligne de compte lors de l valuation du risque li une manipulation afin de d finir les pr cautions prendre par les laboratoires qui re oivent des chantil lons en vue du diagnostic de la tuberculose Facteurs valables pour tous les laboratoires de la tuberculose Observations Pathog nicit Voie de transmission primaire Voies de transmission secondaires rares au laboratoire Stabilit Dose infectieuse Sensibilit des sujets immunocomp tents la tuberculose maladie Sensibilit des sujets immunod prim s la tuberculose maladie Risque de contracter la tuberculose dans la communaut en situation de forte charge de travail Vaccin efficace Traitement efficace contre la tuberculose multir sistante Traitement efficace contre la tuberculose multi r sistante Traitement efficace contre la tuberculose ultra r sistante Une tuberculose non trait e a un taux de mortalit de 30 50 environ 30 des personnes expos es pendant une longue p riode un cas infectieux de uberculose contractent l infection 5 10 des personnes infect es tombent malades nhalation de noyaux de condensation infectieux ngestion inoculation directe Les bacilles tuberculeux restent v
50. berculose savoir un flux d air directionnel assurant 6 12 changements d air par heure Il a fait observer que rien ne prouve qu un plus grand nombre de changements d air par heure r duirait le risque d infections contract es au laboratoire et admis par ailleurs que le surco t d un syst me de ventilation de plus grande capacit est tr s important Encadr 3 Comment d terminer la ventilation n cessaire La ventilation fait p n trer l air ext rieur dans les locaux du laboratoire et le distribue das ces locaux Elle a pour but par un apport d air propre de diluer l air qui pourrait tre contamin et de l liminer du laboratoire La ventilation comporte trois caract ristiques de base le d bit qui repr sente la quantit d air ext rieur qui p n tre dans le laboratoire par unit de temps la direction du flux d air l int rieur du laboratoire l air doit tre dirig de mani re circuler des zones fonctionnellement propres vers les zones sales la configuration de l coulement d air l air ext rieur doit tre amen dans chaque zone du laboratoire et tre ensuite limin avec efficacit MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 25 existe trois modes de ventilation d un laboratoire la ventilation naturelle la ventilation m canique et la ventilation hybride ventilation mixte Ventilation naturelle Sous l action des forces
51. boratoire D contamination et limination des d chets un autoclave doit tre disponible proximit du laboratoire de confinement pour que les tubes et les flacons contenant des cultures de bacilles tuberculeux puissent tre st rilis s avant d tre emport s pour tre limin s Tous les autres d chets infec tieux doivent tre emport s hors du labo MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 33 ratoire de confinement afin d tre limin s selon les r gles Ces d chets doivent tr transport s dans des sacs ou autres conte neurs ferm s en plastique conform ment la r glementation locale en la mati re Tout EXPERT GROUP RECOMMENDATION Dans le Manuel de s curit biologique en laboratoire de l OMS il est recommand de faire en sorte que les laboratoires de confinement puissent tre herm tiquement ferm s de mani re permettre une d contamination par fumigation le groupe d experts n a pas jug indispensable qu il en soit de m me dans le cas des laboratoires de confinement pour la tuberculose tant donn que les particules infectieuses form es partir de bact ries qui ont s ch sur les diff rentes surfaces ont peu de chances de s a rosoliser Le groupe d experts en a donc conclu que les proc d s de d contamination des surfaces recommand s pour ces laboratoires sont suffisants et qu il n est pas n cessaire que ces laboratoires soit am nag s en vue d
52. boratoire est vacu l ext rieur du b timent il doit tre dispers distance des b timents occup s et des prises d air Dans tout laboratoire de la tuberculose class risque mod r ou haut risque les fen tres doivent tre constamment ferm es quipement de protection individuelle Chaque laboratoire doit valuer ses risques par exemple en r pertoriant ses activit s en valuant sa charge de travail et en d terminant la pr valence de la tuberculose et celle des souches pharmacor sistantes et d cider quel est le niveau de protection qu il convient d assurer au personnel Des sarraus de protection boutonnant dans le dos et des gants doivent tre port s en per manence dans les laboratoires o existe un risque mod r d infection Pendant la pr paration des chantillons ceuxci sont liqu fi s ce qui accro t le ris que d a rosolisation est donc essentiel de prendre des mesures pour r duire au minimum la production d a rosols les gants doivent tre r guli rement rem plac s Avant de quitter le laboratoire le personnel doit toujours se laver les mains Les appareils ou masques respiratoires ne sont pas n cessaires pour autant que les chantillons soient manipul s sous un PSM correctement entretenu et dans le respect des bonnes pratiques microbiologiques Il ne faut pas consid rer que ces appareils peuvent se substituer aux PSM Disposition du laboratoire Le labor
53. c t et attendre que les a rosols qui auraient pu se produire se soient d pos s avant de red boucher le tube e Lorsqu on centrifuge un chantillon ou une culture il faut les placer l int rieur d un pot de s curit ferm ou utiliser un rotor ferm pour viter qu un a rosol ne se r pande dans la centrifugeuse et dans le laboratoire Les pots de s curit et les rotors ferm s doivent toujours tre ouverts dans un PSM e Lorsqu on proc de au vortexage la centrifugation ou l agitation d chantillons ou de cultures il faut placer les r cipients l int rieur d un PSM et ne plus y toucher pendant 10 minutes avant de les ouvrir afin de laisser les a rosols se d poser e Ne jamais proc der au vortexage d un tube ouvert toujours s assurer que les bouchons sont solidement viss s avant tout vortexage ou agitation Ne jamais soumettre un vortexage des tubes ferm s au moyen d un tampon de coton ou d un bouchon de caoutchouc e Ne pas m langer ou mettre en suspension du mat riel biologique infectieux en remplissant et en vidant plusieurs fois une pipette e Apr s vortexage laisser reposer les tubes pendant 10 15 minutes pour viter que des a rosols ne se r pandent en particulier s il s agit de tubes contenant des bacilles tubercu leux forte concentration e Pour viter les projections d canter les liquides en maintenant le tube inclin de mani re que le liquide s coule le long
54. cale doit tre nvisag au travail des employ s du laboratoire doit bien conna tre la nature des risques qui peuvent exister dans un laboratoire de la tuberculose et pouvoir obtenir l avis de sp cialistes Les services m di caux doivent tre facilement accessibles afin qu un bilan clinique puisse tre rapidement tabli et un traitement appropri institu sans retard 1 6 Classification des laboratoires de la tuberculose On peut classer les laboratoires de la tuberculose selon trois niveaux principaux de risque li s aux exa mens qui sont pratiqu s faible risque de tuberculose e risque mod r de tuberculose e risque lev de tuberculose par exemple dans le cas d un laboratoire de confine meni La probabilit d une production d a rosols est un facteur crucial dont il faut tenir compte pour d ter miner le niveau de risque et les mesures prendr pour att nuer ou ma triser ces risques l examen microscopique direct des frottis d expectorations 5 1 est pratiqu en respectant de bonnes techniques microbiologiques ne risque gu re de produire d a rosols infectieux et cet examen peut s effectuer sur une paillasse ouverte condition toutefois qu il y ait une ventilation suffisante Les directives de l OMS relatives aux services de laboratoire pour la lutte antituberculeuse 12 contiennent des indico tions et des recommandations sur la marche suivre lors d un
55. de bonnes conditions de s curit un certain nombre d examens qui comportent un ris que mod r de production d a rosols teneur relativement faible en particules infectieuses Les laboratoires risque mod r peuvent e manipuler des chantillons en vue de les in oculer un milieu de culture primaire solide e effectuer des tests directs de pharmacosen 515116 par ex des tests line probe directs des tests de pharmacosensibilit par obser vation microscopique MODS ou des tests la nitrate r ductase sur expectorations pr par es NRA 4 1 Facteurs qui accroissent le risque d infection Outre les risques g n raux justiciables des mesures de s curit biologique expos es au chapitre 2 par ex pr sence de personnes non habilit es dans le laboratoire pipettage la bouche poste de travail encombr limination des d chets qui laisse d sirer les laboratoires de la tuberculose class s risque mod r peu vent galement rencontrer les probl mes suivants qui tous sont susceptibles d augmenter les risques le personnel peut travailler dans des locaux mal ventil s e il peut travailler dans de mauvaises condi tions d clairage les PSM peuvent tre mal entretenus et non certifi s e les PSM peuvent ne pas tre dot s d une bonne vacuation vers l ext rieur le lieu de travail peut tre poussi reux et il peut y avoir colmatage des filtres parti cul
56. de contr ler le fonc tionnement de l enceinte En r gle g n rale les fluctuations du d bit de l air dans le circuit de ventilation du b timent n ont gu re d influence sur le fonctionnement d un PSM raccord au circuit par un manchon de ce genre l un des avantages de ce type de raccordement tient au fait qu il n y a aucune modification apporter au PSM et que la pression va rester peu pr s constante dans la pi ce Pour maintenir une pression plus faible contr l e et constante dans le local de confinement il faut habituel lement installer un r gulateur clapet dans le syst me d vacuation afin que le flux d air qui tra verse le manchon soit compatible avec la capac it d vacuation du ventilateur d extraction plac l extr mit du conduit Il y a galement un autre avantage savoir qu en cas de panne de cou rant l air qui revient vers la pi ce o la pression est plus faible va passer presqu exclusivement par la prise d air du manchon et ne va pas entra ner des bact ries hors du filtre HEPA En montant un clapet antiretour dans le conduit on oblige le flux d air entrant passer par la bouche d admission d air propre 6 1 5 Utilisation des postes de s curit microbiologique au laboratoire Emplacement Il est difficile de maintenir un flux d air entrant direc tionnel qui soit satisfaisant car il peut tre facilement perturb par les courants d air que produisent les personnes qui se d pl
57. de la paroi du tube ou jeter le r cipient e N introduire que le c ne jetable d une micropipette dans un tube ou autre r cipient ne JAMAIS introduire l embout porte c ne d une micropipette 2 1 5 Zones de travail qui ne sont pas utilis s pour les travaux habituels Les quipements et produits qui e le laboratoire doit tre divis en zones ne sont pas utilis s ou qui ne fonctionnent fonctionnellement propres et zones pas doivent tre vacu s des zones de tra potentiellement contamin es les zones vail propres tant r serv es aux t ches admin istratives et pr paratoires C est le chef e Les plans de travail et paillasses doivent de laboratoire qui doit fixer les conditions d acc s aux zones propres et aux zones contamin es et les faire respecter Le laboratoire doit tre bien tenu en bon tat de propret et on ne doit pas y entreposer des quipements et des produits tre d contamin s chaque fois qu ils ont t souill s par du mat riel biologique potentiellement infectieux ainsi qu la fin de chaque s ance de travail pour plus de pr cisions voir au chapitre 8 la section consacr e aux substances r pandues 18 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 2 2 quipement le choix de l quipement et du mat riel doit tenir compte d un certain nombre de principes g n raux savoir qu il doit e tre con u de mani re viter
58. de la verrerie des instruments et des v tements de laboratoire sera r utilis e ou recycl e 20 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Les principales questions se poser avant de sortir du laboratoire des objets ou du mat riel sont les suivantes e Ces objets ou ce mat riel ontils t effi cacement d contamin s ou d sinfect s par des moyens appropri s 5 e Si ce n est pas le cas ontils t emball s dans un conteneur ou dans un sac ferm s pour incin ration ou autoclavage imm di ats sur place e l limination du mat riel d contamin teurs soient bien con us correctement exploit s et bien entretenus Les d chets destin s tre incin r s m me s ils ont t d contamin s doivent tre trans port s jusqu l incin rateur dans des sacs de pr f rence en plastique Le personnel qui va effectuer cette op ration doit avoir re u les consignes voulues pour charger l incin rateur et r gler la temp rature Pour qu un incin rateur fonctionne correctement il faut que le charge ment traiter contienne le bon dosage des dif comportetelle d autres dangers ou risques potentiels de nature biologique ou autre pour ceux qui effectuent cette op ration ou qui pourraient entrer en contact avec ce mat riel l ext rieur du laboratoire 2 Uincin ration est un moyen utile pour se d barrasser des d chets de laboratoire qu ils aien
59. de nature physique par exemple un incendie ou une explosion d une activit par exemple un pipettage ou d une substance par exemple un a rosol contenant des bacilles infec tieux Tant qu il n y a pas d identification effective des dangers il n est pas possible d valuer avec exactitude les risques li s une structure et ses activit s 1 3 D termination des risques le risque se d finit comme la probabilit de voir un danger se concr tiser associ e aux con s quences dommageables d un v nement li ce danger Les risques doivent tre identifi s et class s par cat gories et il faut galement d terminer quels sont ceux qui doivent tre 1665 ou r duits au minimum l analyse des ris ques d a rosolisation qui est expos e dans pr sent manuel a conduit d finir les exigences minimales en mati re de s curit biologique qui doivent tre respect es dans les laboratoires de la tuberculose lors de l ex cution des divers exo mens MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Encadr 1 Comment effectuer une valuation du risque li une manipulation dans un laboratoire de la tuberculose l valuation du risque est un exercice subjectif qui n cessite de prendre en consid ration les aspects caract ristiques du danger que repr sentent les microorganismes et les manipulations dent il font l objet parfois l appr ciation que l on en a repose sur
60. des cultures iquides voir la figure 1 Classe Un PSM de classe assure la protection du personnel de l environnement et du produit et dans les mod les de type A2 tous les conduits biologiquement contamin s sont en d pression ou entour s de conduits en d pression voir la figure 2 ce type de PSM constitue LE MEILLEUR CHOIX e 165 PSM de classe Il type ne sont pas un bon choix car les conduits peuvent tre contamin s et la chambre de distribution es en surpression par la pi ce e 165 PSM de classe types B1 et B2 doiven tre reli s l ext rieur par un conduit rigide Cela signifie que le syst me de ventilation du b timent doit r pondre exactement aux caract ristiques a rauliques tant en ce qui concerne le volume que la pression star tique Il est donc plus difficile de certifier de faire fonctionner et d entretenir ces types de PSM de sorte qu il ne sont pas recom mand s pour les nouveaux laboratoires de la tuberculose MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 35 Les PSM doivent tre quip s de filtres HEPA qui r pondent aux normes internationales cor respondantes par exemple la norme europ e nne EN12469 ou la norme am ricaine NSF ANSI49 2008 222 En cas de nouvelle acquisition d un PSM c est le mod le de classe type A2 avec panneau d observation guillotine qui est recommand Il faut choisir un PSM en premier
61. e d con amination en surface et tre retir du volume de ravail une fois la manipulation achev e nceinte doivent tre d contamin es avant et apr s chaque utilisation Les plans de travail et les parois int rieures doi vent tre pass s au d sinfectant de mani re tuer ous les micro organismes pr sents la fin de la journ e de travail on proc dera une d con amination finale consistant passer au d sin ectant le plan de travail les parois lat rales e fond ainsi que la face arri re du panneau d observation Il faudra encore rincer les surfaces Les surfaces int rieures de avec de l eau st rile si on a utilis un d sinfectant corrosif comme l hypochlorite Une fois la manipulation achev e on laissera encore fonctionner le PSM pendant 15 minutes pour le purger de l air qu il contient avant de le d brancher d finitivement D contamination Les PSM doivent tre d contamin s fond avant de changer les filtres ou avant de les d placer la d contamination doit galement porter sur les chambres de distribution et sur les filtres Pour la marche suivre et plus de pr cisions sur la d contamination se reporter la norme NSF ANSI 49 2008 La d contamination doit tre effectu e par un professionnel qualifi Alarmes Les PSM peuvent tre quip s d un ou deux types d alarme sonore Certaines alarmes n quipen que les PSM dot s d un panneau d observation guillotine
62. e de ce qui est pratiqu dans le laboratoire des quipements de s curit et des mesures de protection existants Si l valuation des risques indique qu il y a lieu de modifier les mesures de protection prescrites pour le niveau de risque consid r il faudra qu un sp cialiste de la protection contre les risques biologiques agissant titre d expert ind pendant confirme cette appr ciation et donne au chef de laboratoire les informations et conseils n cessaires avant de proc der au renforcement des barri res de protection secondaires MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE b valuer la capacit du personnel adopter des pratiques s curis es La protection du personnel du laboratoire et des autres personnes qui travaillent dans la structure d pend en fin de compte du personnel luim me Lors de son valuation des risques le chef de laboratoire doit s assurer que son personnel a bien acquis les comp tences requises pour de bonnes pratiques microbiologiques et l utilisation de l quipement n cessaire la manipulation d un mat riel biologique potentiellement infectieux dans de bonnes conditions de s curit faut en outre que le personnel ait pris l habitude de maintenir un niveau constant d excellence dans l exercice de ces pratiques En s assurant qu un technicien de laboratoire est comp tent qu il a l exp rience de la manipulation d agents infectieux qu il sait recour
63. e mani re ce que la moiti environ du vol ume d air passe par la grille d extraction avant et l autre moiti par la grille d extraction arri re Toutes les particules d a rosol qui se forment au niveau du plan de travail sont imm diatement pi g es par ce courant descendant et entra n es travers les grilles avant ou arri re ce qui assure une protection maximale du produit manipul l air s chappe ensuite par la chambre de dis tribution situ e l arri re pour aboutir dans l espace qui se trouve au sommet de l enceinte entre le filtre d admission et le filtre d vacuation Compte tenu des dimensions relatives de ces deux filtres environ 60 70 de l air est recycl travers le filtre d admission pour revenir sur le plan de travail les 30 40 restants sont rejet s dans la pi ce ou l ext rieur apr s avoir travers le filtre d vacuation l air rejet par un PSM de classe Il type A2 peut tre recycl dans la pi ce ou vacu l ext rieur du b timent en raccordant l enceinte une con duite d vacuation sp ciale l aide d un man chon IL NE DOIT PAS passer par le syst me d vacuation du b timent Dans le cas d un laboratoire de confinement o l air rejet par un PSM de classe est recycl dans la pi ce il est n cessaire d installer un sys t me de ventilation sp cial pour assurer un flux d air unidirectionnel dans le laboratoire avec 6 12 changements d air par heure Le
64. ecevoir des visiteurs e modifications apport es aux modes op ra toires normalis s ou certaines pratiques par exemple des changements dans les protocoles de d sinfection ou de gestion des d chets dans les quipements de protection individuelle fournis et leur utilisa tion ou encore modification des formalit s d entr e et de sortie des locaux e incident survenu dans le laboratoire grande quantit de substances r pandues e preuve ou suspicion d une infection contrac t e au laboratoire examen des r actions situations d urgence et des prescriptions relatives aux plans d urgence aux e contr le en cours du syst me de gestion par exemple une fois par an ou selon toute autre p riodicit appropri e et fix e l avance 3 Programme de sant au travail destin aux employ s Les programmes de sant au travail destin s aux employ s doivent promouvoir la s curit et la salu brit du lieu de travail Pour cela il faut qu il y ait le moins d expositions possible et s il s en produit les d tecter et les traiter sans d lai il importe galement de tirer les enseignements des incidents et accidents qui sont survenus afin de renforcer les mesures de s curit Une premi re visite m di pour tous les employ s avant leur entr e en fonction au laboratoire et il faut pr voir un suivi m dical r gulier par la suite Le personnel m dical charg de veiller la sant
65. ectement bien les utiliser et en conna tre les limites une for mation leur sera dispens e cet effet Le mieux serait de leur faire faire un essai d ajustage pour v rifier qu il n y a aucun d faut d tanch it Ces appareils sont d conseill s aux personnes portant la barbe Ils doivent tre rang s dans un local propre sec et hygi nique et ne pas tre port s hors du laboratoire Une fois que l appareil est en place sur le visage de l op rateur celui ci ne doit en aucun cas en toucher le devant 51 l op rateur doit r pondre au t l phone ou s adresser quelqu un il ne doit pas faire glisser le masque sous son menton ou le relever sur sa t te Les appareils respiratoires doivent tre inspect s avant toute utilisation afin de v rifier qu ils ne com portent pas de trous autres que les perforations des agrates si ces trous sont largis du fait que le mat riau filtrant s est fendu ou d chir autour des perforations des agrafes on consid rera que le masque respiratoire est endommag faut galement v rifier les sangles et les soupapes Tout appareil respiratoire endommag doit tre limin et imm diatement remplac Les masques chirurgicaux ne sont pas des appa reils respiratoires ils ne sont pas agr s en tant que tels et n offrent aucune v ritable protection aux op rateurs qui effectuent des tests de diag nostic de la tuberculose susceptibles de produire des a rosols 5 ne s
66. en proc dant comme indiqu dans le pr sent manuel Le pr sent manuel a t approuv en mai 2012 par le Comit d examen des directives de l OMS et des explications sont donn es dans le texte partout o celui ci diff re du Manuel de s curit biologique en laboratoire troisi me dition Il vise inspirer les prescriptions et les normes nationales en mati re de s curit biologique plut t qu s y substituer Les recommandations ne prennent pas la place de la r glementation ou des prescriptions locales ou nationales en la mati re Date de r vision 2017 vi MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Participants au processus d laboration de ces directives Ont concouru la r daction du pr sent manuel Christopher Gilpin responsable Jean lragena Fuad Mirzayev Wayne van Gemert Karin Weyer Les personnes suivantes ont particip la Consultation technique conjointe CDC OMS sur la s cu rit biologique au laboratoire qui a eu lieu du 2 au 4 septembre 2008 Atlanta GA Etats Unis May Chu Daniela Cirillo Philippe Dubois Christopher Gilpin Paul Jensen Shanna Nesby Nicoletta Previsani John Ridderhof Thomas M Shinnick V ronique Vincent Karin Weyer Les membres du Groupe d experts qui s est r uni au si ge de l OMS Gen ve Suisse les 8 et 9 avril 2009 taient les suivants Jenny Allen May Chu Daniela Cirillo S bastien Cognat Philippe Dubois Knut Feldm
67. ent aux exigences minimales qu il faut respecter pour limiter ou r duire les risques d infection dans les labora toires qui effectuent des examens consid r s comme comportant peu de risque de propaga tion de la tuberculose Des mesures suppl men taires pourront tre jug es n cessaires apr s une valuation des risques propres au site Les laboratoires faible risque qui respectent les mesures minimales de s curit biologique expos es dans le pr sent chapitre peuvent pra tiquer dans de bonnes conditions de s curit un certain nombre d examens sur des chantillons d expectorations compte tenu de ce qu en raison de leur viscosit ces expectorations n ont gu re tendance produire des a rosols lorsqu elles sont manipul es dans le respect des bonnes tech niques microbiologiques Les laboratoires faible risque peuvent manipuler des chantillons d expectorations en vue d un examen microscopique direct manipuler des chantillons d expectorations n vue du test XpertVMTB RIF Cepheid USA Sunnyvale Ca Lorsqu on ouvre un r cipient contenant des expec torations et que l on fait directement un frottis avec ces expectorations il peut avoir production d a rosols mais le risque de transmission li ces manipulations est n gligeable comparativement celui que repr sentent les a rosols produits par une seule quinte de toux non prot g e Selon les donn es pid miologiques
68. ersonnels ne tra vaillant pas en laboratoire Charge bacillaire du mat riel biologique Variable Variable Variable manipul Viabilit des bacilles tuberculeux Incertaine mais Cette lev e jug e lev e pr paration peut tuer 90 des bacilles Probabilit pour que chaque manipula Faible Mod r e Forte tion n cessit e par les divers examens ait tendance produire des a rosols infec tieux 10 IC intervalle de confiance En se basant sur leur valuation des risques li s aux divers examens pratiqu s dans les labora toires de la tuberculose les membres du groupe d experts ont d fini les exigences minimales respecter pour assurer la s curit du personnel charg d effectuer les divers tests de diagnostic de la tuberculose Dans la mesure du possible chaque laboratoire doit proc der sa propre valuation des risques afin de d terminer quelles mesures de pr caution suppl mentaires sont prendre pour que les techniciens de laboratoire soient convenablement prot g s Les recommandations qui figurent dans le pr sent document sont destin es inspirer les politiques nationales et visent nullement remplacer la r glementation nationale existante Les exigences minimales respecter pour r duire les risques dans les laboratoires de la tuberculose sont expo s es aux chapitres 3 4 et 5 1 4 Suivi des risques et des mesures d att nuation Le chef de laboratoire devra proc der de
69. es bouches d extraction du local 6 mesurer le volume du local Vol longueur m x largeur m x hauteur m 7 calculer le CAH CAH Q Vol Dans le cas d une ventilation naturelle le calcul du CAH donne des chiffres trop variables pour p p permettre d valuer l efficacit de la ventilation de mani re fiable vaut mieux s en tenir au flux d air directionnel pour assurer un travail dans de bonnes conditions de s curit En faisant en sorte p que le courant d air qui traverse la zone de travail o du mat riel infectieux peut tre pr sent passe devant l op rateur pour quitter ensuite les locaux occup s par le personnel on prot gera celui ci contre les a rosols produits dans la zone de travail MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 27 4 Laboratoires risque mod r Les recommandations qui sont donn es dans le pr sent chapitri minimales qu il faut respecter pour limiter ou correspondent aux exigences r duire les risques d infection dans les labora toires qui effectuent des examens consid r s comme comportant un risque mod r de propa gation de la tuberculose Des mesures suppl men taires pourront tre jug es n cessaires apr s une valuation des risques propres au site Les laboratoires risque mod r qui respectent les mesures minimales de s curit biologique expos es dans le pr sent chapitre peuvent pra tiquer dans
70. es de haute efficacit HEPA des PSM e une manipulation n gligente des chantil lons peut entra ner une a rosolisation le vortex peut tre manipul sans les pr cautions d usage par ex il peut tre utilis en dehors du PSM e les conteneurs o sont plac s les chantil ons peuvent fuir ou se briser pendant la centrifugation e l ouverture des godets de centrifugation hors du PSM peut causer des probl mes e les pictogrammes indiquant la pr sence d un danger de nature biologiques peuvent tre absents et le personnel peut ne pas tre suffisamment inform au sujet des per sonnes pr venir en cas d urgence e le syst me de refroidissement ou de chauffage peut ne pas fonctionner correcte ment De bonnes techniques microbiologiques sont essentielles pour r duire au minimum le risque d a rosolisation 4 2 D tails particuliers et mesures de s curit essentielles minimales Dans un laboratoire o existe un risque mod r d infection le confinement est assur deux niveaux au niveau du PSM confinement pri maire et au niveau du laboratoire lui m me confinement secondaire Pour faire face aux ris 28 ques qui sont propres un laboratoire risque mod r il faut prendre les mesures suivantes en vue de les att nuer et de les ma triser 1 Postes de s curit microbiologique appel s aussi enceintes de s curit biolo gique Toutes les op ration
71. eur Tableau 3 Niveaux de risque activit s correspondantes du laboratoire et valuation du risque dans les laboratoires de la tuberculose Niveau de risque du laboratoire Activit s du laboratoire valuation du risque Risque faible Examen microscopique direct des frottis d expectorations pr paration des chantillons pour l utilisation un test automatique d amplification de l acide nucl ique par ex le test Xpert MTB RIF Peu de risque que les chantillons produisent des a rosols infectieux aible teneur en particules infectieuses Risque mod r Pr paration et concentration des chantillons Risque mod r d une pour l ensemencement des milieux de culture primaire tests directs de pharmacosensibilit par ex un test LPA sur des expectorations pr alablement pr par es production d a rosols infectieux par les chantillons aible teneur en particules infectieuses Risque lev Laboratoire de confinement isolements mis en culture Manipulation des cultures en vue de l identification du germe tests de pharmacosensibilit ou test LPA sur des Risque lev d une production d a rosols infectieux par les chantillons forte teneur en particules infectieuses Ce niveau de risque traduit la probabilit de contamination d un membre du personnel par le bacille tuberculeux la suite d examens pratiqu s dans le laboratoire RECOMMANDATION
72. eut m me comporter un risque accru pour l op rateur Des protocoles crits ainsi qu un manuel de s curit biologique doivent tre mis la disposition des membres du personnel lesquels devront signer un formulaire pour confirmer qu ils ont bien lu et assimil les pro tocoles en question Avant de pouvoir utiliser r gu li rement un poste de s curit microbiologique un op rateur doit d abord travailler sous surveillanc Avant de manipuler du mat riel dans le volume de travail d un PSM il faut attendre environ 2 minutes une fois que l on a pass les bras l int rieur pour que le flux d air s adapte et vienne balayer la sur face des mains et des bras faut galement veiller ne faire qu un minimum de mouvements travers l ouverture frontale en pla ant tous les instruments et objets n cessaires sur le plan de travail avant de commencer la manipulation Disposition du mat riel La grille de reprise frontale des PSM de class ne doit pas tre obstru e par du papier des appareils ou d autres objets Il est recommand de toujours travailler sur un linge absorbant impr gn de d sinfectant pour retenir les pro pour que l on puisse s assurer qu il applique un mode op ratoire correct l op rateur doit veiller ne pas perturber le flux d air entrant lorsqu il passe les bras dans le volume de travail ou les en retire jections et les claboussures Tout le mat riel doit tre dispos aussi loi
73. examen microscopique direct des frottis d expectorations Les manipulations qui entra nent la liqu faction des chantillons comme celles que l on effectue lors MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 13 de la digestion et de la pr paration en vue de l ensemencement des cultures lors d un test direct de pharmacosensibilit ou d un test line probe LPA direct comportent un risque accru de pro l utilisation d un PSM dans un laboratoire de con finement Les activit s pertinentes l valuation des risques li s aux manipulations et les pr cautions minimales indispensables dans les laboratoires des duction d a rosols comparativement d autres types d examen m me en respectant une bonne technique microbiologique il faut donc un poste de s curit microbiologique PSM pour pratiquer ce genre d examen La manipulation des cultures vue d un test indirect de pharmacosensibilit ou d un LPA oblige travailler sur de fortes concentra tions bacillaires et il a un risque lev de pro duction d a rosols ces manipulations n cessitent diff rents niveaux figurent au tableau 3 Le pr l vement d chantillons d expectorations sur des patients peut pr senter un danger et ne doit pas s effectuer au laboratoire On devra pr voir une zone bien ventil e s par e du laboratoire pour le pr l vement des chantillons Cette zone sera situ e de pr f rence l ext ri
74. f tuberculosis continuing controversy Clinical Infectious Diseases 1994 19 299 308 Miller JM et al Guidelines for safe work practices in human and animal medical diagnos tic laboratories recommendations of a CDC convened biosafety blue ribbon panel MMWR Surveillance Summaries 2012 61 Suppl 1 102 Rieder L et al Priorities for tuberculosis bacteriology services in low income countries Deuxi me dition Paris Union internationale contre la tuberculose et les maladies respiratoires 2007 Kim SJ et al Risk of occupational tuberculosis in national tuberculosis programme laboratories in Korea International Journal of Tuberculosis and Lung Diseases 2007 11 138 142 Laboratory services in tuberculosis control Part Il microscopy Gen ve Organisation mondiale de la Sant 2008 WHO TB 98 258 Acid fast direct smear microscopy training package Atlanta GA Centers for Disease Control and Prevention 2006 htto wwwn cde gov dls ila acidfasttraining consult le 12 October 2012 Five steps to risk assessment Londres Health and Satety Executive 2011 galement disponible sur le site suivant htto 7www hse gov uk risk expert htm Collins HC Laboratory acquired infections Deuxi me dition Londres Butterworth 1988 Rieder HL et al The public health service national tuberculosis reference laboratory and the national laboratory network minimum requirements role and operation in a low income cou
75. iables pendant de ongues p riodes dans l environnement On estime que la dose infectieuse par inhalation est de 10 bacilles chez un sujet humains l exp rimentation animale montre qu elle peut aller de 1 1000 germes en fonction de la sensibilit de l esp ce au bacille 5 10 des sujets immunocomp tents qui contractent l infection tombent effectivement malades au cours de leur vie 5 10 des sujets immunod prim s qui contractent l infection tombent malades annuellement Risque lev Non pas de vaccin efficace Oui Oui mais plus difficile traiter qu une infection par des souches sensibles Few treatment options a Ce chiffre est tir de l exp rimentation animale MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 11 Tableau 2 Facteurs entrant en ligne de compte lors de l valuation du risque li une manipula tion afin de d finir les pr cautions prendre lors de l ex cution de certains examens de laboratoire diff rents niveaux Facteurs qui diff rent selon le type Type d examen ou de laboratoire d examen Examen mi croscopique Manipulation des cultures tests de Pr paration des chantil direct de frottis lons pour une pharmaco d expectorations culture sensibilit Risque relatif IC 95 de contracter la 1 4 7 8 22 tuberculose au laboratoire par rapport au 0 2 10 0 1 7 34 9 4 5 102 5 risque encouru par des p
76. il n est gu re prouv que la pr paration directe d un frottis comporte un exc s de risque mesurable de contracter la tuberculose 415 N B Le pr l vement d chantillons d expecto rations sur les patients ne doit pas avoir lieu au laboratoire 23 3 1 Facteurs qui accroissent le risque d infection Outre les risques g n mesures de s curit b chapitre 2 les laborato raux justiciables des iologique expos es au 65 faible risque peu vent galement rencontr qui tous peuvent augmen r les probl mes suivants ter les risques e mauvaise utilisation de l espace de travail au niveau des pai asses e possibilit de fuites au niveau des r cipients contenant les chantillons e manipulation n gligente des chantillons pouvant entra ner une a rosolisation ult ri eure e agitation nergique des chantillons ventilation ou clairage insuffisants 3 2 D tails particuliers et mesures de s curit essentielles minimales Pour faire face un certain nombre de risques potentiels tout laboratoire faible risque travail lant sur la tuberculose doit satisfaire aux exigences suivantes en mati re de s curit biologique 4 1 Espace de travail la paillasse o sont manipul s les chantillons destin s un examen microscopique direct des frottis d expectorations ou un test Xpert MTB RIF doit tre s par e des locaux o arrivent les chantill
77. ilisation de t l phones portables n est pas admise au laboratoire 2 1 4 Examens de laboratoire e Tous les examens doivent tre pratiqu s de mani re viter ou r duire au minimum a production d a rosols ou de gouttelettes voir l encadr 2 le pipettage la bouche doit tre stricte ment interdit Rien ne doit tre port la bouche Toutes es tiquettes utilis es dans le laboratoire doivent tre autoadh sives ll faut limiter l usage d aiguilles et de seringues et en tout cas ne jamais s en ser vir en guise de pipette Tout document crit susceptible de sortir du laboratoire doit tre prot g contre la con tamination Tout le mat riel contamin tous les chantil lons et toutes les cultures doivent tre con venablement d contamin s avant d tre limin s ou nettoy s en vue d une r utilisa tion Si un d accident se produit que des sub stances sont r pandues ou qu il y a pos sibilit d exposition il faut pr venir le chef de laboratoire Tout incident de ce genre ainsi que les mesures prises pour rem dier doivent tre consign s aux fins d une action pr ventive ult rieure faut que les modes op ratoires normali s s du laboratoire indiquent la conduite MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE tenir en cas d incident de ce genre et une formation pratique doit tre donn e pour s assurer que le personnel respecte ces d
78. inimales respecter pour limiter ou r duire les risques d infection dans les laboratoires qui pratiquent des examens consid r s comme com portant un risque lev de propagation de la tuberculose Des mesures suppl mentaires pour ront tre jug es n cessaires apr s une valuation des risques propres au site Les laboratoires haut risque galement con nus sous la d nomination de laboratoires de confinement pour la tuberculose qui respectent les exigences minimales en mati re de s curit biologique expos es dans le pr sent chapitre sont con us pour travailler sur des concentrations et des volumes importants de M tuberculosis et pour effectuer des examens qui comportent un risque accru de production d a rosols Les labo ratoires haut risque peuvent e manipuler des cultures pour l identification de M tuberculosis e manipuler des cultures ou des suspensions de bacilles tuberculeux en vue de leur appliquer l ensemble des tests indirects d pharmacosensibilit et des tests de biologie mol culaire 5 1 Facteurs qui accroissent le risque d infection Outre les dangers dont il a t question dans le chapitre 4 consacr aux laboratoires risque mod r et les risques g n raux justiciables des mesures de s curit biologique expos es dans le chapitre 2 les laboratoires class s comme labo ratoires haut risque ou comme laboratoires de confinement ont faire face aux probl mes sui
79. ion individuelle Chaque laboratoire doit valuer ses risques et d cider quel est le niveau de protection qu il convient d assurer au personnel Le personnel doit porter des blouses ou sar raus de protection boutonnant dans le dos qui soient imperm ables et dont le devant soit d une seule pi ce Elles doivent tre manches longues avec des manchettes lastiques manchettes d au moins 30 de longueur le personnel doit galement porter des gants et toujours se laver les mains avant de quitter le laboratoire Le port de coiffes de couvre chaussures ou de chaussures sp ciales est facultatif on peut les utiliser titre de mesures de pro tection compl mentaires Cela tant aucun v tement de protection utilis dans le labo ratoire de confinement pour la tuberculose ne doit tre port dans les autres locaux du laboratoire Les appareils ou masques respiratoires constituent une protection suppl mentaire utilisable lors de manipulations haut risque comme la manipulation de cultures liquides en vue de l identification du germe ou de tests de pharmacosensibilit qui produisent des a rosols forte teneur en particules infectieuses Ces appareils ou masques respiratoires ne sauraient rempla cer un PSM d fectueux ou qui n a pas t certifi En toutes circonstances de bonnes techniques microbiologiques sont indispen sables pour r duire au minimum le risque de contracter une infection au la
80. ir aux techniques d asepsie et utiliser un poste de s curit microbiologique PSM et qu il est en mesure de faire face une situation d urgence tout en tant en outre d sireux d assurer sa propre protection et celle de ses coll gues on pourra tre s r que celui ci sera capable de travailler dans de bonnes conditions de s curit c S assurer du bon tat des quipements de s curit Le chef de laboratoire doit veiller la disponibilit des quipements de s curit n cessaires s assurer que le bon fonctionnement de ces quipements a t certifi par un professionnel qualifi et que leur bon tat est contr l p riodiquement Si par exemple un PSM n a pas t soumis une telle certification il peut repr senter un risque s rieux pour le personnel qui l utilise et les autres techniciens du laboratoire De plus il faut former le personnel effectuer de contr les quotidiens simplifi s pour s assurer que les quipements du laboratoire fonctionnent correctement faut par exemple qu il v rifie que les bouchons des godets des centrifugeuses ne sont pas fendilll s et que les joints toriques sont bien en place et intacts Des contr les simplifi s doivent tre effectu s quotidiennement sur les PSM afin de v rifier que l air s coule correctement dans chaque enceinte A Notez vos r sultats et tirez en les cons quences pratiques Tous les modes op ratoires normalis s doi
81. irectives et qu il a acquis les automatismes n cessaires l emballage et le transport des chantillons doivent respecter la r glementation natio nale ou internationale en la mati re faut laborer des modes op ratoires nor malis s et former le personnel afin qu il soit m me de les suivre Des manuels expli quant comment pratiquer les examens doi vent mis disposition dans les divers locaux du laboratoire Les modes op ratoires doi vent tre r examin s chaque ann e Les modes op ratoires normalis s doivent pr ciser comment proc der l valuation des risques et les mesures destin es les att nuer ou les ma triser doivent tre d finies et appliqu es Encadr 2 Comment r duire au minimum la production d a rosols Le recours des moyens techniques par exemple utilisation de postes de s curit microbiologique PSM et ventilation des locaux ou des dispositifs individuels de protection respiratoire peuvent tre utiles pour viter de contracter une tuberculose au laboratoire par suite de l inhalation d a rosols infectieux Cela dit ce qui est le plus important pour diminuer le risque de contamination au laboratoire c est de r duire au minimum la production d a rosols Certaines des dispositions pratiques prendre pour r duire la production d a rosols valent pour tous les laboratoires de la tuberculose alors que d autres ne sont applicables qu aux laboratoires jug s
82. ition du Manuel de s curit biologique en laboratoire de l OMS valuation des risques li s certaines manipu lations dans les r seaux de laboratoires de la tuberculose Le Manuel de s curit biologique en laboratoire de l OMS recommande que chaque laboratoire effectue ses propres valuations des risques afin de d terminer quelles sont les modes op ratoires les m thodologies et les pr cautions qui convien nent Le pr sent manuel consid re la question d un autre point de vue en ce sens qu il formule des recommandations pratiques bas es sur les tech niques de laboratoire propres au diagnostic de la tuberculose et qui sont habituellement utilis es aux diff rents niveaux des services qui s occupent de cette maladie Ces recommandations doivent servir de guide aux laboratoires de r f rence pour la tuberculose qui g rent des r seaux nationaux ou r gionaux de laboratoires de la tuberculose afin de les amener mieux comprendre les risques li s certaines manipulations sur la base de ces recommandations les laboratoires nationaux de r f rence devraient tre m me de mettre en pra tique des mesures de s curit biologique appro pri es dans les installations voulues et veiller ce que les divers tests habituels de diagnostic de la tuberculose soient effectu s par un personnel con venablement form Dans nombre de situations o faiblesse des res sources et forte charge de travail vont de pair
83. l Les appellations employ es dans la pr sente publication et la pr sentation des donn es qui y figurent n impliquent de la part de l Organisation mondiale de la Sant aucune prise de position quant au statut juridique des pays territoires villes ou zones ou de leurs autorit s ni quant au trac de leurs fronti res ou limites Les lignes en pointill sur les cartes repr sentent des fronti res approximatives dont le trac peut ne pas avoir fait l objet d un accord d finitif La mention de firmes et de produits commerciaux ne signifie pas que ces firmes et ces produits com merciaux sont agr s ou recommand s par l Organisation mondiale de la Sant de pr f rence d autres de nature analogue Sauf erreur ou omission une majuscule initiale indique qu il s agit d un nom d pos l Organisation mondiale de la Sant a pris toutes les pr cautions raisonnables pour v rifier les informa tions contenues dans la pr sente publication Toutefois le mat riel publi est diffus sans aucune garan tie expresse ou implicite La responsabilit de l interpr tation et de l utilisation dudit mat riel incombe au lecteur En aucun cas l Organisation mondiale de la Sant ne saurait tre tenue responsable des pr judices subis du fait de son utilisation Designed by GPS Publishing Printed in Luxembourg WHO HTM TB 2012 11 Table des mati res R SUM D ORIENTATION PARTICIPANTS AU PROCESSUS D ELA
84. la zone souill e Toute personne expos e cette souillure doit tre dirig e sur un service m dical pour la suite donner et un proc s verbal de l incident doit tre tabli et conserv 8 2 2 Substances infectieuses r pandues confin es dans l enceinte d un PSM Lorsque des substances infectieuses sont r pan dues dans un PSM il faut proc der imm diate ment au nettoyage et poursuivre le travail sous le PSM Marche suivre 1 Disposer un tissu absorbant sur la zone souill e et verser dessus une bonne quantit de solution d sinfectante 2 Si les parois du PSM ont t clabouss es es nettoyer avec une couche de serviettes absorbantes en papier tr s largement imbi b es de solution d sinfectante 3 Laisser agir pendant 30 minutes 1 le d sinfectant qui couvre les zones souill es 4 Recueillir soigneusement les objets ou ragments pointus ou tranchants qui sont contamin s et les placer dans un conteneur imperforable en vue de leur limination 5 Tout appareil o pi ce de mat riel r utili sable par ex des godets de centrifugeuse qui a t contamin doit tre nettoy avec e m me d sinfectant 6 le mat riel lectrique doit tre scrupuleuse ment v rifi avant utilisation bien s assurer que les coupe circuit et les disjoncteurs sont intacts 7 Recueillir dans un sac ferm tout le mat riel contamin restant en vue de son limination selon les
85. lasse prot ge l op rateur mais ne prot ge pas d une contamination les produits sur lesquels il travaille par exemple des chantillons ou des cultures car de l air non st rilis provenant de la pi ce est aspir au dessus du plan de tra vail la figure 1 est une coupe sch matique d un PSM de classe l air de la pi ce est aspir par une ouverture frontale une vitesse minimum de 0 38 m s INSF ANSI 2 ou de 0 4 m s EN12469 Il passe ensuite au dessus du plan de travail puis est expuls de l enceinte par un conduit d vacuation Le flux d air direction nel transporte les particules a rosolis es qui ont pu tre produites sur le plan de travail en les loignant de l op rateur et les entra ne dans le conduit d vacuation Gr ce l ouverture fron tale l op rateur peut passer ses bras l int rieur de l enceinte pour atteindre le plan de travail tout en observant ce plan travers un panneau vitr Ce panneau vitr peut aussi tre compl tement relev ce qui permet d avoir acc s au plan de travail pour le nettoyer ou pour toute autre raison l air qui sort de l enceinte est expuls travers un filtre HEPA a dans le laboratoire puis l ext rieur du b timent par le syst me d vacuation de ce dernier ou bien 5 vers l ext rieur par le syst me d vacuation du b timent ou encore directe ment l ext rieur Le filtre HEPA peut tre plac dans la chambre de distribution du PSM
86. les pour viter que le laboratoire ne soit contamin par les agents qui y sont manipul s ou que des agents pr sents dans l environnement ne viennent leur tour contaminer la zone de travail Chambre de distribution Espace situ au sommet d une enceinte de s curit biologique partir duquel une fraction de l air est extraite de l enceinte le reste tant dirig sur la zone de travail Danger D signe tout ce qui peut causer un dommage quelle qu en soit la probabilit de survenue viii MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE valuation du risque Processus d appr ciation du ou des risques d tre confront des dangers compte tenu de la pertinence des mesures prises pour les pr venir cet exercice consiste galement d cider si l on peut consid rer le risque comme acceptable Manipulation productrice d a rosol Manipulation haut risque susceptible de produire des noyaux de Nombre de changements d air par heure Noyaux de condensation Plan de gestion de la s curit biologique Risque Sas St rilisation Syst me de ventilation m canique Transmission par voie a rienne Ventilation Ventilation hybride Ventilation naturelle condensation par suite des forces m caniques mises en jeu par ce genre d op ration par exemple pipettage vortexage centrifuga tion ou m lange Nombre de fois par heure o l air du laboratoire est expuls
87. lieu en fonc tion du type de protection n cessaire protection du produit ou protection du personnel contre le risque d infection Choisir le bon type de PSM l installer l utiliser correctement et le faire certifier chaque ann e ne sont pas choses faciles est vivement recommand de confier ces t ches des professionnels bien form s et exp riment s qui soient familiaris s avec tous les aspects de ces quipements II faut que les PSM soient branch s sur une source d nergie ininterrompue de mani re que si une panne de courant se produit au niveau du secteur alors qu un examen est en cours le personnel ait temps de l achever Les postes de s curit microbiologique doivent tre soumis un contr le de certification au moment de l installation chaque fois qu ils sont d plac s ou apr s une r paration ou un changement de filtre ils doivent galement tre r guli rement entretenus tous les ans afin d en assurer le bon fonctionnement Retarder cet entretien ou le confier du personnel insuffisamment qualifi peut comporter des risques pour le personnel du laboratoire voir la section 6 1 5 6 1 2 Postes de s curit microbiologique de classe Les PSM de classe fonctionnent de la mani re suivante l air de la pi ce aspir sans filtrage travers une ouverture frontale passe au dessus du plan de travail puis est expuls l ext rieur par un conduit d vacuation Un PSM de c
88. lis l architecture et les installations techniques des dans laboratoires M Kreitlein a d clar avoir particip l tablissement de lignes directrices en mati re de s curit biologique 56 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Annexe 3 Groupe d examen par des pairs Heather Alexander Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Road MS G35 NE Atlanta GA 30333 Etats Unis d Am rique Pawan Angra Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Road MS G35 NE Atlanta GA 30333 tats Unis d Am rique Daniela Cirillo Emerging Bacterial Pathogens Unit San Raffaele del Monte Tabor Foundation HSR Via Olgettina 60 20132 Milan talie Gerrit Coetzee National Tuberculosis Reference Laboratory National Health Laboratory Service P O Box 1038 Cnr Hospital De Karte Street Braamfontein 2000 Johannesburg Afrique du Sud Edward Desmond Mycobacteriology and Mycology Section Microbial Diseases Laboratory California Dept of Public Health 850 Marina Bay Parkway Richmond CA 94804 tats Unis d Am rique Sara Ir ne Eyangoh Charg de recherche Chef de service de Mycobact riologie LNR du PNIT Centre Pasteur du Cameroun BP 1274 Yaound Cameroun Knut Feldmann Foundation for Innovative New Diagnostics 16 Avenue de Bud 1202 Geneva Suisse Rumina Hasan Department of Pathology and Microbiology Aga Khan Univer
89. ls respiratoires Notamment les mod les N95 norme des Etats Unis et FFP2 norme europ enne avec masqu complet ou demi masque et cartouche de purification de l air Contact direct avec les microorganismes Gants Jetables certifi s de qualit microbiologique en latex PVC ou polyacrylonitrile 7 1 Blouses ou sarraus de laboratoire boutonnant dans le dos Ces blouses ou sarraus doivent tre man ches longues et boutonner dans le dos Lorsque l op rateur est debout le bas de la blouse doit descendre sous le niveau de la paillasse et lui cou vrir les genoux en position assise Les blouses ou sarraus r utilisables doivent passer l autoclave avant d tre lav s Ils ne doivent pas tre empor t s la maison pour les laver il doit y avoir une blanchisserie dans les locaux du laboratoire ou proximit faut changer de v tement de labora toire au moins une fois par semaine et imm diate ment en cas de contamination manifeste Ces blouses ou sarraus ne doivent pas tre port s en dehors des locaux du laboratoire Il doit y avoir un vestiaire o le personnel puisse se changer et ranger ses v tements de labora toire Tout membre du personnel ou toute autr personne qui p n tre dans le laboratoire doit porter une blouse ou un sarrau Les v tements de protection ne doivent pas tre rang s dans les MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 45 m
90. m 2131 Johannesburg Afrique du Sud Membres du personel de l OMS Nicoletta Previsani R glement sanitaire international Magdi Samaan R glement sanitaire international Jean lragena Halte la tuberculose Renforcement des laboratoires Fuad Mirzayev Halte la tuberculose Renforcement des laboratoires Wayne van Gemert Halte la tuberculose Renforcement des laboratoires Christopher Gilpin Halte la tuberculose Renforcement des laboratoires
91. mes casiers ou armoires que les v tements de ville Dans l ventualit d une contamination le personnel doit disposer de v tements protecteurs de rechange 7 2 Appareils masques respiratoires En principe les appareils respiratoires ne sont pas n cessaires dans les laboratoires de la tuber culose Toutefois il se peut qu on en recommande l usage la suite d une valuation des risques dans le cas d un laboratoire de confinement o l on manipule des cultures de bacilles tubercu leux Lorsque des cultures sont manipul es dans un laboratoire de la tuberculose il faut disposer d appareils respiratoires m me si ceux ci ne sont pas port s syst matiquement au cas o un acci dent biologique produit r pandu par exemple se produirait hors d un PSM Les appareils res piratoires doivent figurer dans le n cessaire de nettoyage des produits r pandus Un appareil respiratoire ne peut en aucun cas remplacer un PSM bien entretenu qui fonctionne correctement Si l valuation du risque r v le que l usage d appareils respiratoires est indiqu on devra utiliser les mod les N95 norme des tats Unis NIOSH N95 ou FFP2 norme europ enne EN 149 2001 Ces appareils sont des dis positifs l gers qui couvrent le nez et la bouche et filtrent 94 95 des particules 0 3 0 4 pm Dans un laboratoire o l on utilise des appareils respiratoires tous les membres du personnel doi vent apprendre les mettre corr
92. n laboratoire pr cise que la d termination du niveau de s curit biologique exig par une manipulation donn e consiste appr cier le risque en professionnel plut t que d adopter automatiquement le niveau de s curit biologique correspondant au groupe de risque auquel appartient l agent pathog ne en cause La d marche adopt e dans le pr sent man vel se fonde sur les recommandations du Manuel de s curit biologique en laboratoire et pr conise d valuer le risque en fonction de la manipulation Cela signifie que M tuberculosis est g n ralement transmis uniquement par voie a rienne et non par contact avec des surfaces 1 y a deux facteurs importants prendre en consi d ration lorsqu on value le risque d a rosolisation savoir la charge bacillaire du mat riel biologique que l on manipule et la production d a rosols par tir de ce mat riel Dans le cas des expectorations qui sont les chantillons les plus couramment utili s s pour le diagnostic de la tuberculose la charge bacillaire va de O jusqu 90 des chantillons 10 104 ml pour un chantillon donnant un frot tis faiblement positif et 106 ml pour un degr de positivit gal 3 Dans une culture obtenue MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 5 partir d chantillons d expectorations la charge bacillaire peut d passer 10 ml En raison de tion en particulier effectu e dan
93. n que possible dans le volume de travail en se rapprochant au maximum du bord distal du plan de travail MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 39 mais en vitant d obstruer la grille arri re Les appareils qui produisent des a rosols par ex vortex centrifugeuses etc doivent tre plac s vers le fond de l enceinte Le mat riel encom brant comme les sacs de s curit biologique et les conteneurs d chets doit tre plac sur un des c t s du volume de travail Sur le plan de travail il faut travailler en allant des zones propres vers les zones contamin es ne faut jamais introduire de documents dans un PSM l enceinte ne doit pas tre surcharg e car toute surcharge peut r duire l efficacit du flux d air voir la figure 4 Lampes 4 ultraviolets 1 n est pas recommand d utiliser des lampes ultraviolets dans les PSM des laboratoires de la tuberculose Flammes nues faut viter la pr sence de toute flamme nue l int rieur d un PSM En effet la chaleur des flammes perturbe la circulation de l air dans l enceinte Pour st riliser les anses bact ri ologiques il existe des microincin rateurs et des fours lectriques qui sont pr f rables aux flammes nues vaut mieux d utiliser des anses jetables et des pipettes de transfert Produits r pandus accidentellement faut afficher dans le laboratoire un exemplaire de la conduite tenir si des produits sont
94. nales en mati re de s curit biologique lorsqu une r glementation particuli re existe d j pour les laboratoires de la tuberculose et les techniques d examen correspondantes Ce manuel s adresse plut t aux directeurs et chefs de laboratoire aux responsables de programmes de s curit biologique et aux sp cialistes de cette discipline en vue de les informer et de les aider toujours possible notamment pour les milliers de laboratoires p riph riques qui pratiquent des exa mens risque relativement faible dans des pays o la charge de la tuberculose est lev e et dont les possibilit s d assistance et de supervision au plan local sont limit es Le pr sent manuel mule des recommandations pratiques l intention des r seaux de laboratoires de la tuberculose et se concentre sur certains types de tests examen microscopique cultures test de pharmacosensi bilit et analyses mol culaires Processus d laboration du manuel de s curit biologique Ce manuel de s curit biologique pour les labo ratoires de la tuberculose est une adaptation de la troisi me dition du Manuel de s curit biologique en laboratoire publi par l OMS d une part les conclusions d une consultation technique qui s est tenue entre l Organisation mondiale de la Sant OMS et les Centers for Disease Control and Prevention des tats Unis CDC septembre 2008 compl t es par celles de la r union d un groupe d experts sur
95. naturelles l air ext rieur p n tre dans le laboratoire en passant par les fen tres et les portes ouvertes l action des forces naturelles permet g n ralement d obtenir un d bit lev de mani re plus conomique et alli e des grandes ouvertures elle est susceptible d assurer un change rapide de l air La question de savoir si la ventilation naturelle convient tel ou tel laboratoire d pend des conditions climatiques de la conception du laboratoire et de la fa on de travailler du personnel Ventilation m canique est possible d installer des ventilateurs sur les fen tres ou les murs ou encore dans des conduits d o l air est expuls du laboratoire Le type de ventilation m canique utilis est fonction du climat En principe un syst me de ventilation m canique permet d assurer le d bit d air souhait en toute fiabilit quelle que soit l action des vents variables et la temp rature ambiante La ventilation m canique peut tre utilis e avec un syst me de climatisation pour r guler la temp rature et le degr d humidit Une ventilation m canique peut galement tre assur e par un poste de travail ventil Ventilation hybride ventilation mixte La ventilation hybride ou mixte fait galement appel aux forces naturelles pour assurer le d bit d air souhait mais en recourant un syst me m canique lorsque ce d bit est trop faible Lorsqu i n est pas souhaitable de se contenter de la ven
96. ne extr mit en verre ou en c ramique chauff au gaz ou l lectricit 165 anses jetables rendent les inutiles les microincin rateurs MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 43 quipement Danger potentiel ou risque Caract ristiques de s curit R cipients tanches pour recueillir et transporter le mat riel infectieux st riliser dans une installation appropri e de l tablissement A rosols produits r pan dus par suite de renverse ments ou de fuites Construction tanche avec couvercle ou autre syst me de fermeture Durables Peuvent passer l autoclave Conteneurs pour objets Piq res ou coupures Peuvent passer l autoclave Robustes imperforables Conteneurs pour le transport d un laboratoire ou d un tablissement l autre lib ration de microorganismes Robustes Conteneurs primaires et secondaires tanches antifuites Mat riau absorbant retenant les liquides Autoclaves manuels ou automatiques Cultures positives st rilis es avant leur sortie du laboratoire Mod les agr s Efficacit de la st rilisation par la chaleur HEPA filtre air tr s haute efficacit PSM Poste de s curit microbiologique 44 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 7 quipements et v tements de protection individuelle Les quipements et v tements de
97. niveau de l entr e de l enceinte selon es recommandations du fabricant air expuls passe par un filtre HEPA Bonne protection du personnel et de environnement Classe A rosols et projections Flux entrant minimal vitesse frontale au niveau de l entr e de l enceinte selon es recommandations du fabricant air expuls passe par un filtre HEPA Bonne protection du personnel et de environnement Poste de travail ventil A rosols et projections Ne peut pas remplacer un PSM Flux entrant minimal vitesse frontale au niveau de l entr e de l enceinte selon es sp cifications Pas de filtre HEPA Protection limit e du personnel Centrifugeuses avec godets de s curit ou rotors ferm s A rosols et projections Confinement des a rosols Pipetteurs Risques dus au pipet tage la bouche par ex ingestion de germes pathog nes ou inhalation d a rosols produits par la succion exerc e sur la pipette expulsion de liqui de ou chute de gouttes contamination du bout de la pipette servant aspirer Facile utiliser Pr vient la contamination de l extr mit de la pipette servant aspirer prot ge e pipetteur l utilisateur et le circuit de vide Peuvent tre st rilis s Pas de fuite par la pointe Microincin rateurs pour anses anses jetables Projections provenant des anses de transfert Protection des anses par un tube vert u
98. nne conform ment aux sp cifications nation ales et internationales et ne pr sente pas de d faut Ce contr le doit tre pratiqu lors de l installation et lors de tout changement d emplacement dans e laboratoire puis p riodiquement au moins une ois par an par des techniciens qualifi s confor m ment aux sp cifications du fabricant Pour val ver l efficacit du confinement assur par un PSM il faut proc der aux contr les suivants int grit de a structure pr sence ventuelle de fuites au niveau des filtres HEPA param tres v locim triques du lux d air descendant vitesse frontale du courant d air contr le manom trique de la d pression d bit des ventilateurs essai au fumig ne pour contr ler le flux d air alarmes et asservissement du verrouillage La vitesse de l air qui entre dans l ouverture fron ale d un PSM doit r pondre aux sp cifications du abricant On peut galement effectuer d autres contr les facultatifs d fauts d isolation lec rique intensit de l clairage intensit du ray onnement UV niveau de bruit et vibrations Une ormation des comp tences et des quipements sp cialis s sont indispensables pour effectuer tous ces contr les et ils doivent tre ex cut s par un professionnel qualifi et familiaris tous gards avec les PSM Nettoyage et d sinfection Tout ce qui se trouve l int rieur du PSM com pris l appareillage doit faire l objet d un
99. nnel du laboratoire Des gants doivent tre port s pour tous les examens qui impliquent un contact direct ou pourraient entra ner accidentellement un MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 15 contact avec des expectorations du sang des liquides organiques ou tout autre mat riel biologique potentiellement infectieux Apr s usage l op rateur doit se d ganter aseptiquement et se laver les mains faut se laver les mains apr s toute contam ination manifeste apr s toute manipulation de mat riel biologique infectieux et chaque fois que l on quitte la zone de travail du laboratoire faut se savonner soigneuse ment les mains et les frotter nergiquement pendant au moins 15 secondes puis les rincer l eau claire et les essuyer avec une serviette propre en papier Il est pr f rable de disposer de robinets automatiques commande non manuelle mais d faut on utilisera une serviette en papier pour ermer le robinet afin de ne pas se recon aminer les mains une fois celles ci lav es l est interdit de manger de boire de fumer de se maquiller d appliquer des cosm iques ou de manipuler des lentilles de con act l int rieur du laboratoire est galement interdit de conserver de la nourriture ou des boissons dans la zone de ravail du laboratoire le port de chaussures bout ouvert n est pas admis au laboratoire l ut
100. ntry Paris Union internationale contre la tuberculose et les maladies respiratoires 1998 52 20 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Tuberculosis infection control in the era of expanding HIV care and treatment addendum to WHO guidelines for the prevention of tuberculosis in health care facilities in resource limited settings Gen ve Organisation mondiale de la Sant 1999 galement disponible sur le site suivant htto whglibdoc who int hq 1999 WHO_TB_99 269_ADD_eng pdf Ventilated workstation manual for AFB smear microscopy manufacturing validation and user guide Silver Spring MD Association of Public Health Laboratories 201 1 http www aphl org aphlprograms 21 Documents GH_201 uly VentilatedWorkstation Guidance pdf accessed 12 October 2012 Standards Australia International AS NZS2252 1 1994 Biological safety cabinets biologi cal safety cabinets Class for personal and environment protection Sydney Standards Australia International 1994 Standards Australia International AS NZS 2252 2 1994 Biological safety cabinets laminar flow biological safety cabinets Class for personnel environment and product protection Sydney Standards Australia International 1994 NSF ANSI 49 2008 Biosafety cabinetry design construction performance and field cer tification Ann Arbor MI NSF International 2008 galement disponible sur le site suiv
101. ol Le ph nol est utiliser en solution aqueuse 5 L exposition par inhalation ou par contact cutan est cependant extr mement irritante pour la peau les yeux et les muqueuses l ingestion de ph nol peut provoquer une intoxication En raison de son odeur et de sa toxicit le ph nol est g n ralement rem plac par des d riv s ph noliques Les solutions de ph nol sont utilis es pour d con taminer les quipements le mat riel et les objets usage unique avant leur limination Chlore Le chlore est largement disponible Les solutions d hypochlorite de sodium du genre eau de Javel contiennent 50 g l d libre et doivent donc tre dilu es 1 50 ou 1 10 pour obtenir une concentration finale de 1 ou de 5 g litre chlor Qu ils soient sous forme de concentr s ou de solu tions plus dilu es ces produits doivent tre con serv s dans un local bien ventil l abri de la lumi re Dans de bonnes conditions de stockage une solution 50 g l peut durer jusqu 3 mois les solutions dilu es doivent tre pr par es jour nali rement Les solutions d hypochlorite de sodium peuvent tre utilis es comme d sinfectants tout faire et galement pour y tremper des objets contamin s non m talliques en raison de leur forte alcalinit elles peuvent corroder les m taux Alcools Les alcools comme l thanol alcool d natur alcool br ler ou l alcool isopropylique sont utili s
102. on du niveau de risque 4 Identification des personnes responsables et de leurs responsabilit s par exemple d l gu la s curit biologique quipe de s curit autorit s sanitaires locales cli niciens microbiologistes v t rinaires pi d miologistes pompiers et policiers 5 tablissements de soins et de postcure sus ceptibles de recevoir les personnes expo s es ou contamin es 6 Transport des personnes expos es ou contamin es 7 Approvisionnement en quipements d ur gence tels que v tements de protection d sinfectants n cessaires pour le net toyage du mat riel biologique ou des pro duits chimiques r pandus quipements et fournitures pour la d contamination Marche suivre face une situa tion d urgence dans un laboratoire de la tuberculose 8 2 8 2 1 Substances infectieuses r pandues hors d un PSM le d versement de substances infectieuses hors d un PSM constitue un incident majeur Si un liqui de infectieux est r pandu il peut donner nais sance des a rosols infectieux Tout le personnel doit imm diatement vacuer la zone du labora toire o s est produit l incident Le chef de labora toire doit tre pr venu sans d lai et le personnel ne doit pas tre autoris r int grer les locaux pendant au moins 1 heure de mani re que le sys t me de ventilation puisse liminer les a rosols et que les particules les plus lourdes aient le temps de se d poser
103. on leur classification prot gent des degr s divers contre la contamination des chantillons et des cultures Le filtre HEPA qui est mont dans le syst me d vacuation d un PSM constitue un pi ge effi cace contre les microorganismes infectieux de sorte que c est uniquement de l air d barrass de microbes qui sort de l enceinte Un filtre HEPA mont dans l enceinte au dessus du plan de tra vail prot ge la surface de ce plan ainsi que le mat riel qui s y trouve contre toute contamination On parle souvent de protection du produit pour d signer ce syst me lly trois classes de PSM Il et Ill qui correspondent respectivement aux normes AS NZS 2252 1 1994 AS NZS 2252 2 1994 et NSF ANSI 49 2008 181 2 D apr s la norme NSF ANSI 49 2008 les PSM de classe peuvent tre de divers types Al A2 B1 et 82 qui correspondent des diff rences dans mode d coulement et la 6 1 1 Choix d un PSM pour un laboratoire de la tuberculose Les deux types de PSM qui sont d crits ci dessous sont ceux qui conviennent le mieux pour les labo ratoires risque mod r et les laboratoires haut risque laboratoires de confinement pour la tuber culose Classe e 165 PSM de ce type assurent la protection du personnel et de l environnement et non celle du produit Cette absence de ection du produit peut entra ner une con amination accrue notamment lorsqu on pr pare et que l on inocule
104. ons ainsi que des locaux o se fait le travail administratif et o se trouvent les t l phones 2 Ventilation Les frottis obtenus directement sur des chantillons d expectorations et la pr paration des chantillons en vue d un test Xpert MTB RIF peuvent se faire sur une paillasse ouverte dans un local suffisam ment ventil pour autant que de bonnes techniques microbiologiques sont utilis es 24 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Ce que l on entend par ventilation suffisante pour un laboratoire de la tuberculose corre spond habituellement un flux d air directionnel avec 6 12 changements d air par heure voir l encadr 3 La pr sence d un flux directionnel signifie que l air provenant des zones propres est dirig vers les zones o il peut y avoir produc tion d a rosols cet air doit tre vacu en toute s curit du local Le nombre de changements d air par heure d signe le nombre de fois par heure o le volume d air du local est expuls et remplac par de l air propre Lorsqu on fait appel la ventilation m canique il est facile de calculer le nombre de changements d air par heure Dans le cas de manipulations faible risque la ventilation naturelle devrait suffire pour autant que l air s coule le long de l espace de travail en entra nant loin du technicien les substances potentiellement infectieuses puis hors des locaux occup s par le pe
105. ont pas con us pour prot ger contre l inhalation d a rosols infectieux de faible granulom trie et il ne faut donc pas les utiliser 7 2 1 Ajustement d un appareil respiratoire Le personnel qui utilise des appareils respiratoires doit recevoir une formation faut lui apprendre le mode op ratoire suivant pour mettre en place le masque e prendre le masque dans le creux de la main avec la barrette nasale au bout des doigts et en laissant pendre les sangles librement e placer le masque sous le menton avec la barrette nasale vers le haut tirer la sangle sup rieure du harnais par dessus la t te et la mettre sur le haut de l occiput tirer la sangle inf rieure pardessus la t te et la faire descendre jusqu la nuque au des sous des oreilles e poser le bout des doigts des deux mains sur le haut de la barrette nasale m tallique avec les deux mains appuyer vers l int rieur sur la barrette tout en faisant glisser les doigts vers le bas le long des deux c t s de la barrette pour lui faire pouser la forme du nez si l on pince la barrette nasale avec une seule main on risque de ne pas l ajuster parfaitement et l appareil respira 46 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE toire fonctionnera moins bien Il faut donc toujours proc der avec les deux mains 7 2 2 Retrait d un appareil respiratoire e l op rateur doit ter ses gants et se laver les mains avec soin av
106. ou dans le syst me d vacuation du b timent Certains PSM de classe sont dot s d un ventilateur int gr alors que d autres sont tributaires du ventilateur qui quipe le syst me d vacuation du b timent 36 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Figure 1 Coupe sch matique d un poste de s curit microbiologique de classe A Ouverture frontale B Panneau 6 guil otine C Filtre HEPA d vacuation D Chambre de distribution Air filtr sur filtre HEPA Air de la pi ce 6 1 3 Postes de s curit microbiologique de classe Il type A2 La diff rence entre les PSM de classe et les PSM de classe tient au fait que les enceintes de classe ll ne laissent passer au dessus du plan de travail que de l air qui a travers un filtre HEPA air st rile la figure 2 est une repr sentation sch matique d un PSM de classe type A2 l aide d un dis positif interne d aspiration l air de la pi ce est admis par une ouverture frontale dans l enceinte puis dans la grille d aspiration avant La vitesse de l air entrant doit tre d au moins 0 38 m s face l ouverture frontale Apr s avoir travers la grille l air admis dans l enceinte est aspir vers le haut et passe par un filtre HEPA avant de venir s couler au dessus du plan de travail En s coulant vers le bas environ 6 18 cm av dessus du plan de travail le flux d air se divise d
107. paration et de r action aux situations d urgence ll est n cessaire que chaque tablissement qui d tient des isolements de M tuberculosis ou qui travaille sur ces germes dispose d un plan crit de pr paration aux situations d urgence r sultant d incidents ou d accidents de laboratoire 8 1 Plan de pr paration aux situations d urgence Le plan doit indiquer quelle est la marche suivre pour e r agir une catastrophe naturelle telle qu incendie inondation s isme ou explo sions proc der une valuation des risques r sultant de l adoption d un nouveau mode op ratoire ou de la r vision d un mode op ratoire e prendre en charge les cas d exposition et proc der une d contamination e vacuer d urgence le personnel pr sent sur les lieux e assurer le traitement m dical d urgence des personnes expos es ou bless es e assurer la surveillance m dicale des per sonnes expos es lors d un incident e assurer la prise en charge clinique des per sonnes expos es lors d un incident e proc der une enqu te pid miologique e assurer la poursuite des op rations apr s un incident Lors de l laboration de ce plan il faut envisager d y inclure les renseignements suivants 1 Localisation des zones haut risque tels que laboratoires et aires de stockage 2 Identification du personnel et des popula tions expos s au risque 3 D termination de la conduite tenir en foncti
108. potentiel lement infectieux l exception des objets poin tus ou tranchants doit tre plac dans des sacs jetables en plastique avant d tre amen sur le site d incin ration Dans la mesure du pos sible les d chets provenant de laboratoires de la tuberculose ne doivent pas tre enfouis dans une d charge m me 5 15 ont t d contamin s Des conteneurs bassines ou cuvettes d chets incassables en plastique par exemple doivent tre plac s proximit de chaque poste de travail Il faut utiliser des d sinfectants actifs contre M tuber culosis les d chets doivent rester en contact avec le d sinfectant c estd dire qu ils ne doivent pas tre prot g s par la formation de bulles d air pendant la dur e voulue selon la nature du d sinfectant utilis Ces conteneurs d chets doivent tre d contami n s et lav s avant d tre r utilis s Dans les laboratoires o le risque d infection tuber culeuse est faible les r cipients en plastique pour les expectorations les cartouches utilis es pour l analyse mol culaire par ex les cartouches pour le test Xpert MTB RIF ainsi que les applicateurs en bois doivent tre transport s hors du laboratoire dans des sacs poubelle en plastique ferm s puis tre incin r s MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 3 Laboratoires faible risque Les recommandations qui sont donn es dans le pr sent chapitre correspond
109. quelles il faut r pondre pour utiliser ce type d quipement aux diff rents niveaux des laboratoires de la tuberculose Appareils respiratoires En principe ces appareils respiratoires ne sont pas n cessaires aux activit s d un laboratoire de la tuberculose et la question de savoir si l on doit s en servir d pend de l valuation du risque effectu e au niveau local ou national Il est possible qu la suite de cette valuation il soit recommand d en faire usage dans les locaux de confinement de laboratoires o des cultures sont manipul es ou des tests de pharmacosensibilit effectu s Il ne faut en aucun cas consid rer que ces quipements peuvent remplacer un PSM Gants lors de la manipulation de tout chantillon infectieux ou de cultures contenant des bacilles tuberculeux il faut imp rativement porter des gants quipements Laboratoire Laboratoire Laboratoire de protection faible risque haut risque individuelle risque mod r de confinement Appareils Pas n cessaires Pas n cessaires Peuvent tre n cessaires suite respiratoires une valuation du risque Masques Non con us pour prot ger l op rateur contre l inhalation d a rosols in chirurgicaux fectieux et ne doivent donc pas tre utilis s comme protection respiratoire Gants N cessaires N cessaires N cessaires A7 48 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 8 Plans de pr
110. r viter qu elles ne soient entass es sur les paillasses et dans les couloirs ext rieurs au laboratoire Un local suppl mentaire com mod ment situ hors des zones de travail sera pr vu pour le stockage de longue dur e faut disposer d une zone o l on puisse pr parer manipuler et stocker les acides les colorants et les solvants e Des locaux pour le rangement des v te ments d ext rieur et des affaires person nelles doivent tre pr vus en dehors des zones de travail Des locaux o le personnel puisse se restau rer boire et se reposer doivent galement tre pr vus en dehors des zones de travail e Dans chaque salle du laboratoire il faut installer un lavabo avec du savon pour le lavage des mains de pr f rence pr s de la sortie est recommand de munir ces lavabos de robinets automatiques sans commande manuelle Un distributeur de serviettes en papier doit tre dispos pr s de chaque lavabo e 16 laboratoire doit tre dot de portes vitr es man uvre automatique ayant une r sistance au feu suffisante Le laboratoire doit disposer d une alimenta tion lectrique suffisante et fiable 2 4 Formation Des erreurs humaines et une technique m diocre peuvent mettre en chec les meilleurs garde tous mis en place dans le laboratoire pour prot ger le personnel Il est capital pour viter les incidents les accidents et les infections contract es au labo ratoire que cel
111. r gles 8 2 3 Bris de tubes l int rieur de godets ferm s pots de s curit Toujours utiliser des godets de centrifugeuse qui soient ferm s et ne proc der leur chargement ou leur d chargement que sous un PSM Si des tubes se rompent pendant la centrifugation il faut placer les tubes bris s dans un conteneur imper forable et s en d barrasser imm diatement Pour d contaminer les godets de centrifugeuse les plonger dans d sinfectant convenable Pour d sinfecter des pi ces m talliques ne pas utiliser d hypochlorite qui attaquerait le m tal Passer plut t les 06068 l autoclave 8 3 N cessaire pour le nettoyage des substances r pandues Il incombe au chef de laboratoire de veiller la tenue des n cessaires de nettoyage Le labo ratoire doit disposer de deux n cessaires pour traiter tout d versement de substances l un qui sera plac hors du laboratoire de confinement et 50 l autre qu on installera dans le laboratoire Ces n cessaires doivent avoir la composition indiqu e ci dessous N cessaire pour le nettoyage des substances r pandues Solution d hypochlorite dans un flacon opaque ou tout autre d sinfectant conven able Masques respiratoires bo te Gants bo te Sarraus de laboratoire boutonnant dans le dos 4 6 sarraus jetables Pelle poussi re avec brosse jeter si n cessaire MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORAT
112. r viations et sigles CAH Changements d air par heure BAR Bacilles acido r sistants PSM Poste de s curit microbiologique appel aussi enceinte de s curit biologique HEPA filter Filtre air haute efficacit on dit aussi THE tr s haute efficacit MDR TB Tuberculose multir sistante XDR TB Tuberculose ultrar sistante D finitions A rosol infectieux Suspension de particules contenant des agents infectieux pouvant tre inhal s et provoquer une infection Air expuls extraction Air chass du laboratoire sans tre recycl Blouses ou sarraus de laboratoire Blouses ou sarraus boutonnant devant blouses g n ralement manches longues qui doivent tre port es dans les locaux o le risque de tuberculose est mod r Blouses ou sarraus boutonnant dans le dos blouses manches longues dont les manchettes au moins 30 de longueur sont munies d un lastique Le personnel doit disposer de blouses de diff rentes tailles Ce genre de blouse est porter lors de travaux dans des locaux o le risque de tuberculose est lev Lorsque l op rateur est debout le bas de la blouse doit descendre sous le niveau de la paillasse et lui couvrir les genoux en position assise Bonne technique microbiologique Une bonne technique microbiologique implique le respect des conditions d asepsie et d autres pratiques qui sans tre d finies de mani re uniforme n en sont pas moins indispensab
113. re port es au laboratoire faut galement porter des gants pour tous les examens qui Encadr 4 Comment calculer la ventilation qui convient un laboratoire de la tuberculose utilisant la ventilation m canique On consid re g n ralement qu une ventilation convenable pour un laboratoire de la tuberculose doit assurer un flux d air directionnel permettant 6 12 changements d air par heure CAH On parle de flux d air directionnel lorsque l air circule des zones propres du laboratoire vers celles nsuite expuls l ext rieur en toute s curit o il peut y avoir production d a rosols pour tr Le CAH repr sentent le nombre de fois par heure o le volume d air contenu dans le laboratoire est expuls et remplac par de l air propre Lorsqu on utilise une ventilation m canique on peut mesurer le CAH en proc dant comme suit 1 localiser la ou les bouches d extraction 2 appliquer contre chaque bouche une feuille de carton comportant une ouverture de 10 cm x10 cm 3 mesurer la vitesse de sortie de l air l aide d un an mom tre 4 calculer le d bit volum trique 3 au niveau de chaque bouche d extraction en utilisant la formule Q V x x 8600 dans laquelle Q d bit volum trique en m h V vitesse de l air en m s aire de l ouverture en m par ex 10 cm O 1 m x 10 cm 0 01 m 3600 coefficient pour la conversion des secondes en heures 5 faire le calcul pour toutes l
114. rsonnel et jusqu l ext rieur du aboratoire Ce flux d air doit assurer une protec ion contre les a rosols produits dans l espace de travail Pour que le flux d air entra ne effective ment les contaminants il doit se d placer au moins O 5 m s 16 On peut assurer la ventilation en ouvrant les fen tres si du moins le climat local le permet Si les conditions climatiques interdisent de garder les fen tres ouvertes on devra envisager de recourir la ventilation m canique qui permet de cr er un flux d air vers l int rieur sans recyclage dans le local On ne doit installer de climatiseurs qu apr s avoir tudi la direction du flux d air Il est impor tant de veiller ce que l air du laboratoire circule en s loignant des op rateurs Lorsqu en raison des circonstances il est malais d assurer une ventilation naturelle ou m canique on peut opter pour l installation de postes de tra vail ventil s ce qui permet de confiner les a rosols produits lors de l examen microscopique direct des expectorations ou du test Xpert MTB RIF Il existe des guides et des sp cifications pour les postes de travail ventil s 7 RECOMMANDATION DU GROUPE D EXPERTS Il n existe pas de normes internationales qui d finissent ce que l on entend par ventilation suffisante d un laboratoire Le groupe d experts a d fini de mani re pragmatique ce qu on peut consid rer comme une ventilation convenable pour un laboratoire de la tu
115. s PSM de classe ou de classe mais ils doivent de toute fa on avoir t con us par un fab ricant certifi et faire l objet d un entretien MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE r gulier Tous les ans au moins leur bon fonctionnement doit tre contr l et un cer tificat doit tre d livr Les PSM de classe ll type A2 sont pr f rables car ils assurent la fois la protection du personnel et des milieux que l on inocule protection du produit 165 PSM de classe Il type B conviennent galement mais ils ne sont pas recomman d s pour les nouveaux laboratoires de la tuberculose car ils n cessitent des conduits rigides En outre ils sont plus difficiles quilibrer entretenir et faire fonctionner correctement Lorsqu on utilise des conduits rigides il faut que le syst me d extraction de l air du b timent soit parfaitement adapt aux caract ristiques a rauliques ix es par le fabriquant Un PSM doit tre aliment par une source de courant ininterrompue et un ventilo eur d extraction est n cessaire lorsque alimentation lectrique manque de fiabil it cette pr caution donne au personnel du aboratoire le temps d achever les manipu ations dangereuses qui sont en cours e d vacuer vers l ext rieur l air contamin qui reste l int rieur de l enceinte Il fau installer des dispositifs anti retour au niveau des conduits d vacuation afin d viter que
116. s audits r guliers de mani re assurer un suivi des risques et des mesures prises pour les ma triser Cela peut se faire en passant en revue les rapports sur les mesures correctives prises la suite des probl mes constat s ant rieurement en analysant minutieuse ment les incidents ou les accidents en prenant des mesures pr ventives et en veillant metre dis position des ressources suffisantes pour maintenir st essen les pr cautions au niveau n cessaire Il tiel pour assurer une am lioration constante des mesures retenues et appliqu es de rassembler des donn es sur le processus d valuation des risques et d identifier les mesures d att nuation possibles Les v nements suivants doivent susciter soit une nouvelle valuation du risque li telle ou telle 12 MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE manipulation soit un r examen d une valuation ant rieure e de nouvelles t ches sont entreprises ou des modifications sont apport es soit pro gramme de travail soit l ordonnancement des t ches ou bien il a un changement dans le volume de travail e construit de nouveaux laboratoires ou on modifie les laboratoires existants ou bien encore on installe de nouveaux qui pements e de nouvelles dispositions sont prises concer nant le personnel notamment recours un sous traitant ou du personnel temporaire ou bien n cessit de r
117. s effectu es sur des chantillons d expectorations telles que pr paration digestion ou manipulation d chantillons liqu fi s doivent s effectuer dans une enceinte de s curit biologique Cette enceinte constitue la forme primaire de confinement des chantillons que l on pr pare en vue de les inoculer un milieu de culture ou de les soumettre un test direct de pharmacosensibilit C est pourquoi le respect de bonnes techniques microbiologiques et un usage correct de l enceinte sont d une importance cruciale pour que l op rateur travaille dans de bonnes conditions de s curit En cas de mauvaise utilisation de l enceinte des a ro sols peuvent se r pandre dans le labora toire pour plus de pr cisions sur les PSM ESB voir le chapitre 6 Les PSM doivent tre situ s distance des passages l abri des courants d air tra versant le laboratoire depuis l embrasure des portes et des entr es d air l air qui est expuls d une enceinte bien entretenue doit d abord tre pass par un filtre HEPA dis pos au sommet de l enceinte de mani re pouvoir tre rejet dans le local ou vacu vers l ext rieur au moyen d un con duit selon de degr de perfectionnement du syst me de ventilation install dans le laboratoire Un espace suffisant doit tre m nag entre l enceinte et le plafond afin de ne pas faire obstacle la circulation de l air sortant de l enceinte ll est recommand d utiliser de
118. s mini males respecter pour att nuer le risque li une manipulation donn e compte tenu du risque de production d a rosols des installations dont on dispose et de l quipement des pratiques et des techniques n cessaires pour limiter l infection Att nuation des risques Utilisation de postes de s curit microbiologique appel s aussi enceintes de s curit biologique Les infections contract es au laboratoire sont sou vent imputables des a rosols infectieux porteurs de bacilles tuberculeux dont la production est pass e inaper ue Dans le cas des laboratoires qui effectuent des tests de diagnostic de la tuber culose le danger ou le risque le plus important tient la production d a rosols infectieux car c est pr cis ment par inhalation de tels a rosols qu une infection par Mycobacterium tuberculosis peut tre contract e encore que la manipulation de liquides contenant ce bacille puisse galement conduire une infection par inoculation ou ingestion directes La manipulation de liquides contenant des bacilles tuberculeux peut galement produire des a rosols infectieux Les noyaux de condensation qui se sont d pos s sur des surfaces ne sont pas r a rosolis s et ne sont plus consid r s comme infectieux 6 7 plus appropri selon le type de manipulation effec tu et un certain nombre d autres facteurs voir le chapitre 1 du pr sent manuel le Manuel de s curit biologique e
119. s un laboratoire de la tuberculose les donn es factuelles restent limi la viscosit de ces chantillons la probabilit de produire un a rosol infectieux lors de leur manipu lation est beaucoup plus faible que lorsqu on manipule une culture liquide Par cons quent le risque encouru en travaillant directement sur un chantillon d expectorations est sensiblement moin dre qu en manipulant une culture obtenue partir de ce mat riel Le pr sent manuel s carte du Manuel de s cu rit biologique en laboratoire en cela qu il conclut qu il n est pas n cessaire d utiliser une enceinte de s curit biologique un poste de s curit microbiologique pour pratiquer l examen microscopique direct d un frottis d expectoration Le groupe d experts a admis que les infections par M tuberculosis constituent un risque av r pour le personnel de laboratoire ainsi que pour d autres personnes susceptibles d tre expos es des a rosols produits lors de certaines manipulations Quant aux risques li s telle ou telle manipula t es Une tude r trospective men e en Cor e montre que pour les techniciens qui examinent directement au microscope des frottis contenant des bacilles acido r sistants BAR le risque relatif de contracter la tuberculose comparativement la population g n rale est de 1 4 avec un inter valle de confiance de 0 2 10 0 ce risque s est r v l gal 21 5 avec un intervalle
120. sionn en gants de mani re suffisamment s re Les gants ne doivent pas tre port s hors des locaux du laboratoire Apr s avoir manipul du mat riel infectieux avoir travaill sous un PSM et avant de quitter le labora toire le personnel doit retirer ses gants et se laver scrupuleusement les mains l eau et au savon 7 3 1 Retrait des gants 1 faut apprendre au personnel du laboratoire retirer ses gants en proc dant comme suit 1 Tirer sur le gant en le pin ant sous la manch ette et en le faisant rouler le long de la main jusqu voir la face interne se retourner sur la face externe De la sorte presque toute la contamination reste l int rieur 2 Tenir le gant utilis dans la main encore gant e Glisser avec pr caution les doigts d gant s sous la manchette de la main gant e en veillant ne pas toucher la surface du gant contamin Retirer le gant en le retournant jusqu faire appara tre la face interne et le faire rouler sur l autre gant utilis de mani re constituer une sorte de sac dont la contamination se trouve l int rieur 3 Se d barrasser des gants de mani re s re et appropri e MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Encadr 6 Directives pour l utilisation des gants et des appareils masques respiratoires en fonction du niveau de risque du laboratoire de la tuberculose Ces directives r capitulent les exigences minimales aux
121. sity Stadium Road P O Box 3500 Karachi 748000 Pakistan Moses Joloba National TB Reference Laboratory Ministry of Health 16041 Plot 2 Lourdel Road 7062 Wandegeya Ouganda Satoshi Mitarai Institut de recherche sur la tuberculose 3 1 24 Matsuyama Kiyose Shi 204 8533 Tokyo Japon Rick O Brien Foundation for Innovative New Diagnostics 16 Avenue de Bud 1202 Gen ve Suisse Daniel Orozco Foundation for Innovative New Diagnostics 16 Avenue de Bud 1202 Gen ve Suisse CN Paramasivan Foundation for Innovative New Diagnostics 16 Avenue de Bud 1202 Gen ve Suisse MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE Leen Rigouts Institut de M decine tropicale Nationalestraat 155 B 2000 Antwerp Belgique Thomas M Shinnick Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Road MS G35 NE Atlanta GA 30333 Etats Unis d Am rique Akos Somoskovi Foundation for Innovative New Diagnostics 16 Avenue de Bud 1202 Gen ve Suisse Maria Alice da Silva Telles Laboratoire national de r f rence pour la tuberculose Centro de Refer ncia Prof H lio Fraga Estrada de Curicica no 2000 Jacarepagu RJ 22780 192 Rio de Janeiro Br sil Elsie Van Schalkwyk African Centre for Integrated Laboratory Training ACILT National Health Laboratory Service National Institute for Communicable Diseases 1 Modderfontein Rd Private Bag X8 Sandringha
122. stin s la pro tection individuelle peuvent constituer une bar ri re mat rielle qui r duit le risque d exposition aux a rosols aux claboussures o encore le risque d inoculation accidentelle Le choix de ces quipements ou v tements d pend de la nature des manipulations effectuer Chaque fois qu ils ont un travail faire au laboratoire les mem bres du personnel doivent porter des v tements protecteurs voir l encadr 6 Avant de quitter le laboratoire ils doivent les ter puis se laver les mains Le tableau 5 d crit succintement divers types d quipements de protection utilis s au lab oratoire et les risques contre lesquels ils prot gent Tableau 5 quipements et v tements de protection individuelle utilisables dans les laboratoires de la tuberculose quipement Danger potentiel ou risque Caract ristiques de s curit Blouses ou sarraus de laboratoire ouverts devant de ville Contamination des v tements G n ralement manches longues et boutonnant devant pour couvrir les v tements de ville e Pour des travaux comportant peu de risque de contamination Blouses ou sarraus de laboratoire ouverts derri re de ville Contamination des v tements Doivent tre manches longues avec manchettes lastiques d au moins 30 mm de long Doivent s ouvrir dans le dos Doivent couvrir les v tements de ville Appareils masques Inhalation d a roso
123. t t d con famin s ou non Lincin ration du mat riel infectieux ne peut remplacer l autoclavage qu la condition que le chef de laboratoire soit en mesure de garantir que l incin ration sera effectu e dans les r gles FA Incin ration Pour incin rer correctement des d chets dan gereux il faut disposer d un moyen efficace de r guler la temp rature ainsi que d une cham bre de combustion secondaire Beaucoup d incin rateurs notamment ceux qui ne dispo sent que d une seule chambre de combustion ne permettent pas de traiter de fa on satisfaisante le mat riel et les produits infectieux ou les mati res plastiques Si l on utilise ce type d incin rateur ces d chets risquent de ne pas tre totalement d truits et l effluent qui sort de la chemin e peut entra ner une pollution de l atmosph re par des microorganismes des substances chimiques tox iques et de la fum e existe toutefois un grand nombre de mod les de chambre de combustion qui donnent satisfaction l id al est d avoir une temp rature d au moins 800 C dans la cham bre primaire et d au moins 1000 C dans la chambre secondaire Pour permettre l obtention des temp ratures voulues il faut que les incin ra f rents types de d chets les effets n gatifs que l usage d incin rateurs pourrait avoir sur l environnement sont un sujet de pr occupation et l on s efforce de rendre ces dispositifs plus cologiques et plus conomes en
124. te d changer l air un d bit donn Association de la ventilation naturelle et d une ventilation m ca nique on parle aussi de ventilation mixte Utilisation des forces naturelles pour faire entrer l air ext rieur r partir dans le laboratoire et l en faire sortir MANUEL DE S CURIT BIOLOGIQUE POUR LES LABORATOIRES DE LA TUBERCULOSE 1 Introduction On entend par s curit biologique au laboratoire la mise en uvre d un ensemble de mesures et de syst mes consistant en r glements administratifs principes de confinement pratiques et techniques de laboratoire quipements de s curit pr para tion aux situations d urgence et installations dont le but est de permettre au personnel d un laboratoire de travailler sur des microorganismes infectieux dans de bonnes conditions de s curit il s agit galement d viter que le personnel soit involon tairement expos des microorganismes patho g nes ou qu il y ait diss mination accidentelle de tels microorganismes Le pr sent manuel indique quelles sont les mesures de s curit biologique minimum qui doivent tre prises aux diff rents niveaux des laboratoires charg s d effectuer le diagnostic de la tuberculose afin de r duire de risque de contracter l infection sur le lieu de travail Les recommandations et les m thodes qui fig urent dans cet ouvrage ne sont pas destin es remplacer la r glementation ou les prescriptions locales ou natio
125. tes de trans ert st riles qui soient jetables Les centrifugeuses doivent tre munies de godets de s curit ou de rotors scell s le mat riel biologique infectieux peut tre centrifug hors d une enceinte de s curit condition que la centrifugeuse soit dot e d pots de s curit ferm s et que ceux ci soient remplis et vid s l int rieur d un PSM Encadr 5 Comment calculer le nombre de changements d air par heure CAH dans un laboratoire qui utilise un poste de s curit microbiologique PSM dot d un manchon d vacuation Par exemple pour un laboratoire ayant une superficie au sol de 5 m x 10 m et une hauteur de 2 5 m sous plafond il faut pouvoir vacuer entre 750 et 1 500 m d air par heure pour assurer les 6 12 changements d air de la pi ce Avec deux PSM munis de manchons d vacuation il serait possible d vacuer 1 300 1 500 m d air par heure e Calculer le volume du local superficie au sol x hauteur sous plafond e Calculer le volume des CAH n cessaire multiplier le volume du local par 6 pour le nombre minimum de changements d air et par 12 pour le nombre maximum e D terminer le nombre de PSM et le volume d air expuls par chacun d entre eux Un PSM e Le projet d installation d un syst me de ventilation pour le laboratoire doit tre labor de 150 cm de largeur va expulser environ 500 m d air l heure pour une entr e d air ayant une aire de 1 5 m x 0 2 m et de
126. tilation naturelle on peut installer des ventilateurs d extraction dans les laboratoires qui pratiquent l examen microscopique de bacilles acido r sistants afin d accro tre la ventilation Il faut toutefois veiller ce que ces ventilateurs soient install s de mani re ce que l air du local puisse tre expuls directement l ext rieur soit travers un mur soit travers le toit La taille et le nombre des ventilateurs d extraction d pend du d bit que l on veut obtenir et qu il faut calculer avant d opter pour cette m thode voir l encadr 4 3 R duire au minimum la production la flamme nue d un bec Bunsen est d a rosols Lorsqu on pr pare des chan tillons d expectorations en vue d un exo men microscopique direct ou du test Xpert MTB RIF il est th oriquement possible qu il y ait production d a rosols Toutefois comme ces chantillons sont g n ralement visqueux l usage de bonnes techniques microbiologiques permet de r duire au minimum la production d a rosols Les r cipients contenant ces chantillons bo tes pr l vements doivent tre ouverts avec pr caution car ils ont pu tre secou s pen dant leur transport jusqu au laboratoire Il ne faut pas prendre le risque de disperser du mat riel infectieux en s chant les frottis pr f rable de s cher les frottis l air et de n utiliser la flamme que pour fixer les frottis une fois qu ils sont compl tement secs Pour f
127. tions de la norme CWA 15793 ne se base pas sur la clas sification des risques que ce soit pour les agents biologiques ou la s curit au laboratoire et qu il n utilise pas non plus les niveaux de confinement d crits dans le Manuel de s curit biologique en laboratoire D signation d un niveau de s curit biologique 6 Manuel de s curit biologique en laboratoire d crit un syst me de s curit biologique re niveaux Ces niveaux de s curit biologique eposent sur un ensemble de facteurs tenant la conception et la construction des locaux aux installations de confinement aux quipements aux pratiques et aux modes op ratoires n cessit s par 6 travail sur des agents biologiques appartenant aux divers groupes de risque On pense souvent ort que dans le cas d un microorganisme affect un groupe de risque particulier par exemple au groupe de risque 3 il faut obligatoirement op rer dans un laboratoire de niveau de s curit biologique comparable c est dire toire de niveau 3 pour pouvoir travailler dans de bonnes conditions de s curit En fai labora un niveau 7 de s curit sup rieur ou inf rieur peut se r v ler effectu e La tuberculose est une maladie infec tieuse dont la transmission se fait principalement par voie a rienne Plut t que d attribuer tel ou tel niveau de s curit biologique une manipulation donn e ce manuel d finit les exigence
128. ui ci dispose d un personnel bien inform comp tent et soucieux de la s curit Tous les membres du personnel doivent rece voir une formation la s curit en laboratoire il faudra pour cela passer en revue le code de pratique ainsi que les examens techniques et modes op ratoires qui figurent dans le manuel de s curit Le chef de laboratoire doit prendre les dispositions n cessaires pour assurer la formation des membres de son personnel et veiller ce que leur aptitude technique effectuer les divers exa mens soit soumise valuation La formation doit toujours inclure des informations sur les modes op ratoires s curis s qui permettent d viter ou de r duire au minimum les risques d inhalation d ingestion ou d inoculation Elle doit galement indiquer au personnel comment d contaminer et liminer correctement le mat riel infectieux 2 5 Gestion des d chets La fa on de proc der pour liminer les d chets doit tre conforme l ensemble des prescriptions et des r glements locaux et internationaux pertinents Est consid r comme d chet tout ce qui doit tre lim in Ce qui est primordial pour r duire au minimum les risques li s aux d chets c est de d contaminer d incin rer ou de pr parer pour l enfouissement ou l autoclavage l ensemble des objets souill s et du mat riel biologique infectieux faut utiliser des sacs poubelle pour trier les d chets La majeure partie
129. vent pr voir l enregistrement des r sultats de l valuation des risques et des pr cautions qui doivent tre prises l enregistrement des r sultats de l valuation des risques est la preuve que les contr les voulus ont t effectu s et que l on a bien identifi les membres du personnel expos s des risques du fait des examens qu ils effectuent On ne peut pas liminer totalement le danger que constitue la production d a rosols dans un laboratoire de la tuberculose mais il faut prendre n anmoins toutes les pr cautions raisonnables qui permettent de ne laisser subsister qu un faible niveau de risque 5 Revoyez votre valuation et mettez la jour si n cessaire Les manipulations et les pratiques qui pr sentent un risque potentiel doivent tre revues p riodiquement cela doit constituer un protocole habituel destin encourager et garantir l adoption de pratiques de laboratoire qui soient s res Les mesures de s curit biologique qui sont d j prises doivent tre revues au moins une fois par an il faut les r viser si cela est n cessaire la suite de l valuation des risques et chaque fois que l on adopte un nouveau type de manipulation ou une nouvelle technique MDRTB d signe la tuberculose caus e par des souches de Mycobacterium tuberculosis qui r sistent au moins l isoniazide et la rifampicine b XDRTB d signe la tuberculose dont le bacille r siste galement une fluoroquinone et
130. x qui pourraient subir des dommages et de quelle mani re Le principal risque li une manipulation effectu e dans un laboratoire de la tuberculose tient la production d a rosols susceptibles d tre inhal s par le personnel du laboratoire Cette production d a rosols est li e la pratique de certains examens et elle peut d pendre de la fr quence des tests ou de la charge de travail de la consistance du mat riel biologique et q g giq de sa tendance l a rosolisation diff rente par exemple selon qu on a affaire un liquide p p q q visqueux ou un solide sec de la charge bacillaire du mat riel biologique et de la viabilit des bacilles faut galement avoir conscience que parmi le personnel du laboratoire certains peuvent tre plus ou moins sensibles la tuberculose Les sujets dont l immunit est r duite par la prise de certains m dicaments une infection par le VIH ou une grossesse peuvent tre p p g p davantage expos s contracter la tuberculose S il y a des personnes immunod prim es parmi le personnel elles doivent consulter un m decin du travail connaissant bien la tuberculose 3 Evaluer les risques et d cider des pr cautions prendre a D terminer si la structure du laboratoire est adapt e La d termination d finitive du niveau de risque appropri et de toute mesure suppl mentaire de pr caution qui pourrait se r v ler n cessaire n cessite une connaissance exhaustiv

manuel de sécurité biologique pour les laboratoires de la tuberculose

Contents

Download Pdf Manuals

Related Search

Related Contents

manuel de s&eacute;curit&eacute; biologique pour les laboratoires de la tuberculose

Contents

Download Pdf Manuals

Related Search

Related Contents

manuel de sécurité biologique pour les laboratoires de la tuberculose