COLORANTS TRICHROMES (GOMORI) - Protocole - Sigma
Contents
1. matoxyline Gill N 3 contenue dans une jarre de Coplin en plastique 6 Passer au four micro ondes 800 W pendant 5 secondes 7 Bien rincer l eau du robinet pendant 30 secondes 1 minute 8 Bleuir dans de la solution de Scott en remplacement de l eau du robinet temp rature ambiante 9 Bien rincer sous l eau du robinet 10 Placer les lames dans 40 mI de solution de colorant trichrome LG ou AB contenue dans une jarre de Coplin en plastique 11 Passer au four micro ondes 800 W pendant 15 secondes Agiter doucement la solution avec une pipette B ral ou un applicateur Incuber les lames pendant 1 minute 12 Rincer rapidement sous l eau du robinet 13 Placer les lames dans de l acide ac tique 1 pendant 30 secondes 1 minute temp rature ambiante 14 Rincer les lames d shydrater avec de l alcool nettoyer dans du xyl ne et monter PERFORMANCE Noyaux Bleu noir Collag ne Vert LG ou bleu AB Cytoplasme muscle Rouge Si les r sultats observ s sont diff rents des r sultats escompt s contacter le service technique Sigma Aldrich pour obtenir de l aide R F RENCES 1 HJConn s Biological Stains Edited by RD Lillie 9th ed Williams and Wilkins Baltimore MD 1977 2 Theory and Practice of Histotechnology Edited by DC Sheehan and BB Hrapchak 2nd ed Mosby St Louis MO 1980 3 Lillie RD Further experiments with the Masson trichrome modification of Mallor2. Toute coupe bien incluse en paraffine et d une paisseur de 5 microns maximum peut tre utilis e MAT RIELS SP CIFIQUES N CESSAIRES MAIS NON FOURNIS Des lames de contr le positif telles les TISSUE TROL trichromes r f rence N T8800 ou TTRO12 doivent tre incluses dans chaque essai Solution d acide ac tique 1N Solution de Bouin r f rence N HT10132 1L ou HT101128 4L acide picrique aqueux satur 71 formald hyde 24 et acide ac tique 5 POUR LA PROC DURE STANDARD UNIQUEMENT Kit d h matoxyline ferrique de Weigert r f rence N HT1079 Solution d h matoxyline ferrique de Weigert partie A r f rence N HT107 500 mi h matoxyline 1 certifi e dans de l thanol Solutiond h matoxylineferriquede Weigert partieB r f renceN HT109 500ml chlorure ferrique 1 2 p v et acide chlorhydrique 1 p v POUR LA PROC DURE AU FOUR MICRO ONDES UNIQUEMENT Solution d h matoxyline Gill N 3 r f rence N GHS3 100 ml Concentr de solution de Scott en remplacement de l eau du robinet r f rence N S5134 6 x 100ml Four micro ondes REMARQUES En cas d utilisation du micro ondes consulter le manuel d utilisation du fabricant Les donn es obtenues par cette proc dure permettent uniquement de faciliter le diagnostic et doivent tre r vis es conjointement d autres tests ou informations sur les diagnostics cliniques PROTOCOLE PROC DURE STANDARD 1 Pr parer la
3. 4 771 5765 Service technique en PCV au 1 314 771 5750 ou adresser un email clintech sial com Pour commander en PCV au 1 314 771 5750 www sigma aldrich com SIGMA ALDRICH INTERNATIONAL GmbH Wassergasse 7 900 St Gallen Switzerland 41 71 242 8000
4. SIGMA ALDRICH COLORANTS TRICHROMES GOMORI Protocole N HT10 INDICATIONS Les colorants trichromes Gomori de Sigma Aldrich sont destin s l tude du tissu conjonctif des fibres musculaires et collag nes Les r actifs colorants trichromes sont usage diagnostique in vitro Les colorants trichromes sont utilis s principalement pour diff rencier le collag ne des tissus musculaires Ils se composent de colorants nucl aires collag niques et cytoplasmiques dans des mordants tels l acide phosphotungstique ou l acide phosphomolybdique D un point de vue historique le premier syst me trichrome a t attribu Mallory D autres modifications ont t introduites par Masson Foot et Gomori La proc dure d crite ici se base sur les travaux de Gomori et constitue un syst me une tape combinant le colorant destin aux cytoplasmes et aux fibres conjonctives dans une solution d acide phosphotungstique acide ac tique Les coupes de tissus sont trait es avec la solution de Bouin pour intensifier la coloration finale Les noyaux sont ensuite color s avec l h matoxyline ferrique de Weigert suivi de chromotrope 2R qui colore le cytoplasme et les fibres musculaires et de vert solide FCF ou de bleu d aniline qui colore les fibres collag nes Le rin age dans de l acide ac tique apr s la coloration rend les nuances plus d licates et plus transparentes La technique de coloration trichrome de Gomori per
5. mettant une coloration rapide au four micro ondes est pr sent e ci dessous R ACTIFS SOLUTION DE COLORANT TRICHROME LG r f rence N HT10316 500 mI Chromotrope 2R 0 6 p v vert solide FCF certifi 0 1 p v acide phosphotungstique 0 8 p v et acide ac tique 1 0 v v Le r actif colore le collag ne en vert SOLUTION DE COLORANT TRICHROME AB r f rence N HT10516 500 ml Chromotrope 2R 0 6 p v bleu d aniline certifi 0 3 p v acide phosphotungstique 0 8 p v et acide ac tique 1 0 v v Le r actif colore le collag ne en bleu CONSERVATION ET STABILIT Les solutions de colorant trichrome la solution de Bouin l h matoxyline ferrique de Weigert les TISSUE TROL trichromes la solution d acide ac tique ainsi que le concentr et la solution de Scott en remplacement de l eau du robinet doivent tre conserv s temp rature ambiante 18 26 C Les solutions de colorant trichrome la solution de Bouin l h matoxyline ferrique de Weigert parties A et B les TISSUE TROL trichromes la solution d acide ac tique ainsi que le concentr et la solution de Scott en remplacement de l eau du robinet sont stables jusqu la date de p remption Une nouvelle solution d h matoxyline ferrique de Weigert doit tre pr par e pour chaque utilisation PR PARATION Les solutions de colorant trichrome LG de colorant trichrome AB et de Bouin sont pr tes l emploi La soluti
6. on d h matoxyline ferrique de Weigert se pr pare en m langeant un volume gal de solution A et de solution B La solution de Scott en remplacement de l eau du robinet se pr pare en m langeant 1 volume de concentr de Scott en remplacement de l eau du robinet dans 9 volumes d eau d ionis e Pr parer l acide ac tique 0 5 en diluant 4 4 ml d acide ac tique 1N dans 45 6 ml d eau Pr parer l acide ac tique 1 en diluant 8 8 ml d acide ac tique 1N dans 41 2 ml d eau PR CAUTIONS Suivre les pr cautions habituelles observ es lors de la manipulation de r actifs de laboratoire liminer les d chets selon les r glements locaux d partementaux r gionaux ou nationaux en vigueur Pour des informations actualis es sur les risques ou la s curit se reporter la fiche technique du produit Les lames de contr le TISSUE TROL trichromes sont des coupes de tissus humains incluses en paraffine contenant du collag ne et des tissus musculaires et doivent tre consid r es comme potentiellement infectieuses PROTOCOLE PR L VEMENT DES CHANTILLONS Il est recommand de pr lever et de conserver les chantillons conform ment au document M29 A3 du CLSI Aucune m thode d analyse actuelle ne garantit totalement que les chantillons de sang ou de tissus ne transmettent pas d agents infectieux Par cons quent tous les chantillons de sang ou de tissus doivent tre consid r s comme potentiellement infectieux
7. solution d h matoxyline ferrique de Weigert conform ment aux instructions figurant sur l tiquette 1 FR D paraffiner les lames et les hydrater avec de l eau d ionis e Placer les lames dans la solution de Bouin pr chauff e 56 C pendant 15 minutes ou temp rature ambiante pendant toute la nuit Refroidir les lames l eau du robinet 18 26 C contenue dans une jarre de Coplin Laver sous l eau du robinet pour retirer la couleur jaune des coupes Colorer dans la solution d h matoxyline ferrique de Weigert pendant 5 minutes Laver sous l eau du robinet pendant 5 minutes Colorer dans la solution de colorant trichrome LG ou AB pendant 5 minutes Placer dans de l acide ac tique 0 5 pendant 1 minute 10 Rincer les lames d shydrater avec de l alcool nettoyer dans du xyl ne et monter PROC DURE AU FOUR MICRO ONDES 1 D paraffiner les lames et les hydrater l eau d ionis e 2 Placer les lames dans 40 ml de solution de Bouin dans une jarre de Coplin en plastique Couvrir la jarre avec un couvercle non serr ou utiliser des couvercles vents 3 Passer au four micro ondes 600 W pendant 25 secondes Agjiter la solution avec une pipette B ral ou un applicateur puis incuber pendant 5 minutes sous une hotte ou dans une zone bien ventil e on OO SLDS 4 Rincer sous l eau du robinet jusqu ce que la couleur jaune disparaisse 5 Placer les lames dans 40 ml de solution d h
8. y s connective tissue stain Stain Technol 15 17 1940 Gomori G A rapid one step trichrome stain Am J Clin Pathol 20 661 1950 Leong AS Y Milios J Rapid immunoperoxidase staining of lymphocyte antigens using microwave irradiation J Pathol 148 183 1986 Brinn NT Rapid metallic histologic staining using the microwave oven J Histotechnol 6 125 1983 Valle S Special stains in the microwave oven J Histotechnol 9 237 1986 Histotechnology A Self Instructional Text Carson ASCP Press Chicago 1990 Kok and Boon Microwave Cookbook for Microscopists Couloomb Press Leyden Leyden 1992 10 Davis Mary The Joy of Microwaving NSH 1995 Symposium Buffalo NY TISSUE TROL est une marque de Sigma Aldrich Co LLC me wonNo Sigma Aldrich Inc garantit la conformit de ses produits avec les informations contenues dans la pr sente notice et dans les autres notices Sigma Aldrich L utilisateur doit s assurer que le s produit s est sont adapt s l utilisation qu il souhaite en faire D autres conditions g n rales peuvent s appliquer Voir au verso de la facture ou du bordereau de commande les conditions g n rales de vente et autres informations Protocole N HT10 R vision pr c dente 2003 09 R vision 2013 02 AR MED a division of Quintiles Ltd EC REP Runnymede Malthouse Off Hummer Road Egham Surrey TW20 9BD United Kingdom SIGMA ALDRICH INC 3050 Spruce Street St Louis MO 63103 tats Unis 1 31
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