Détection des virus du VPH à haut risque
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1. HPV HR test Dans une tude utilisant cette strat gie sur 4 219 participantes le risque de NIC2 3 et de cancer chez des femmes dont le test VPH 16 ou 18 est positif tait de 11 4 95 96 Cl 8 4 96 14 8 96 comparativement 6 1 95 96 Cl 4 9 7 2 96 pour les femmes dont le test VPH HR est positif et 0 8 95 Cl 0 3 96 1 5 96 pour les femmes dont le test VPH HR est n gatif 6 Le Linear array amp de Roche Diagnostics permet la d tection individuelle de 36 g notypes g nitaux Son utilisation est restreinte pour l instant la recherche et la surveillance pid miologique 4 8 Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 9 de 33 5 2 Principes d utilisation clinique des tests voir annexes 3 et 4 Une patiente avec une cytologie de type ACSI et avec un test VPH HR positif sera orient e pour un examen colposcopique niveau d vidence All alors qu une femme avec un test VPH HR n gatif sera suivie l aide d une cytologie douze mois niveau d vidence BII ou d un test de d tection des VPH HR douze mois niveau d vidence BII La patiente sera orient e en colposcopie si la cytologie est anormale ou si le test VPH HR est positif 31 Lors du suivi post traitement d une NIC2 3 une colposcopie est indiqu e en pr sence d un test VPH HR de contr le positif ou d une cytologie de contr le avec des2. Un culot de cellules devrait tre visible apr s centrifugation d un sp cimen recueilli dans du PreservCyt amp L absence de culot pourrait entra ner un sp cimen faussement n gatif Ceci devrait tre mentionn dans le rapport 10 1 1 2 Pour le test Cervista HPV HR test 2mlde sp cimen sont utilis s pour cette technique L ADN du sp cimen contenu dans le milieu de cytologie liquide devrait tre extrait avec la trousse Genfind DNA Extraction kit selon les proc dures du manufacturier Hologic 10 1 1 3 Pour le test Amplicor HPV test L extraction des acides nucl iques du sp cimen est effectu e avec la trousse AmpliLute Liquid Media Extraction Kit Roche Diagnostics sur la plateforme Qiagen MDx platform Qiagen en suivant les recommandations du manufacturier 250 ul du sp cimen sont trait s par cette proc dure Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 15 de 33 10 1 1 4 10 1 1 5 Un culot de cellules devrait tre visible apr s centrifugation d un sp cimen recueilli dans du PreservCyt amp L absence de culot pourrait entra ner un sp cimen faussement n gatif Ceci devrait tre mentionn dans le rapport Pour le test Cobas 4800 HPV test Le sp cimen est trait et analys selon les proc dures d crites par le manufacturier Roche Diagnostics sur l appareil aut
3. chantillon soit transf r dans l appareil selon les recommandations du manufacturier 10 1 3 Sp cimens soumis dans le STM e Les sp cimens soumis dans le STM sont trait s selon les recommandations du manufacturier Qiagen Pr parer le contr le n gatif NC et le contr le positif PC concomitamment qui seront valu s en triple pour chaque technique e Lors de la proc dure tous les tubes doivent virer au violet apr s la d naturation initiale e Les chantillons trait s et d natur s peuvent tre analys s imm diatement gard s 4 C pour une nuit ou conserv s 20 C pendant 3 mois Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 16 de 33 10 1 4 Traitement du sp cimen soumis dans le Specimen Transport Buffer de la trousse Abbott Cervi Collect Specimen Collection Kit e Pour le test Abbott RealTime High Risk HPV test le sp cimen est trait et analys selon les proc dures d crites par le manufacturier Abbott Molecular sur l appareil automatis m2000 10 1 5 Traitement du sp cimen soumis dans le Cobas PCR Cell Collection media e Le sp cimen est trait et analys selon les proc dures d crites par le manufacturier Roche Diagnostics sur l appareil Cobas 4800 e Un volume minimal de 1 ml 400 ul seront utilis s par l appareil et maximal de 4 ml seront extraits pour cette technique en utili
4. 11 CALCULS 11 1 Interpr tation du test HC2 La valeur seuil correspondant la moyenne des contr les positifs sera d termin e par le programme informatique du test La r activit des chantillons est exprim e sous forme de ratio entre l mission de lumi re par l chantillon comparativement au contr le positif de 1 pg ml qui correspond au seuil de positivit Tout sp cimen avec un ratio sup rieur 1 est consid r positif Ratio RLU Valeur seuil Interpr tation chantillons contenus dans le 1 positis n gatifs 22 positifs chantillons contenus dans le ps n gatifs PreservCyt amp ou SurePath Entre 1 2 5 doivent tre confirm s L interpr tation des r sultats pour les sp cimens confirmer utilise le ratio du second test gt Sice ratio est gal ou sup rieur 1 le sp cimen est positif gt Si ce ratio est inf rieur 1 le sp cimen doit tre analys une troisi me fois Le r sultat du troisi me test est d finitif 1 est positif 1 est n gatif Conserver les sp cimens trait s confirmer 20 C entre les proc dures Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS D tection du virus du papillome humain haut risque 5 ao t 2013 Page 18 de 33 11 2 Interpr tation du test Cobas 4800 HPV test L appareil effectue les validations d analyses et fournit les r sultats d embl e pou
5. 2 5 un commentaire peut tre mis en attendant les r sultats finaux R sultat confirmer D tection d ADN du virus du papillome humain haut risque types num rer selon la proc dure utilis e par la technique utilis e Analyse en cours Ce commentaire sera effac lorsque les r sultats du sp cimen auront t confirm s apr s une nouvelle analyse 13 3 Pour Cobas 4800 HPV test Cervista HPV HR test Abbott RealTime High Risk HPV test et Amplicor amp HPV test Lorsque les r sultats sont invalides le rapport devrait mentionner R sultat invalide D tection d ADN du virus du papillome humain haut risque types num rer selon la proc dure utilis e par la technique utilis e Analyse de l chantillon impossible par la technique utilis e Pri re de fournir un second chantillon pour analyse Si avec le test Cobas 4800 HPV test un des r sultats pour VPH16 ou VPH18 ou autres HR VPH est positif rapportez le r sultat de d tection de VPH HR comme positif malgr la pr sence de r sultats invalides pour les autres cat gories de VPH 14 LIENS UTILES Fiche Technique Sant S curit MSDS http www phac aspc gc ca msds ftss index f html Lignes directrices sur le d pistage du cancer du col au Qu bec http www inspq qc ca pdf publications 1279 LignesDirectDepistCancerColUterin pdf Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tectio
6. 32 Elles sont orient es nouveau en colposcopie si la cytologie de contr le est anormale et ou le test VPH HR est positif 31 32 Des l sions NIC2 3 peuvent ne pas tre visualis es lors d une premi re colposcopie Le suivi cytologique combin la d tection de VPH HR permet de d pister ces patientes risque de cancer au suivi 10 31 32 Le suivi post traitement des NIC2 3 par VPH HR La d tection des VPH HR permet galement le suivi des patientes trait es pour une l sion du col de haut grade NIC2 3 11 16 32 niveau d vidence BII Les options de suivi post traitement de NIC2 3 pour d pister une maladie de haut grade r siduelle ou r cidivante incluent la d tection de VPH HR combin avec la cytologie douze et vingt quatre mois niveau d vidence BII 32 Ces tests sont r p t s trente six mois s ils sont n gatifs lors des 2 premi res visites de contr le R p ter un traitement ou effectuer une hyst rectomie sur la base d un test VPH HR sans examen colposcopique n est pas acceptable niveau d vidence Ell Une tude clinique multicentrique randomis e est actuellement en cours en 2013 au Canada qui permettra de mieux cibler le r le des tests VPH HR dans ce contexte clinique Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 30 de 33 Annexe 3 Principes analytiques des tests VPH HR Trois st
7. C Le milieu SurePath sans sp cimen peut tre conserv a la temp rature de la pi ce 6 2 3 Le milieu Sample Transport Medium STM de la compagnie Qiagen Ce milieu est fourni dans un tube viss dans la trousse de pr l vement avec une cytobrosse HC2 DNA Collection Device Le STM est utilis pour HC2 La cytobrosse utilis e pour obtenir l chantillon doit tre envoy e au laboratoire dans le tube de STM en cassant le manche au niveau de la ligne sur la cytobrosse Le sp cimen peut tre achemin au laboratoire la temp rature de la pi ce La trousse de pr l vement et le STM peuvent tre conserv s la temp rature de la pi ce 6 2 4 La trousse Abbott Cervi Collect Specimen Collection Kit de la compagnie Abbott Molecular Cette trousse peut tre utilis e avec le test Abbott RealTime High Risk HPV test Elle contient une cytobrosse ainsi qu un vial viss contenant 2 5 ml de Specimen Transport Buffer La cytobrosse n est pas conserv e dans le vial du tampon de transport apr s le pr l vement Le sp cimen peut tre transport au laboratoire une temp rature entre 2 C et 30 C L ensemble de pr l vement peut tre conserv la temp rature de la pi ce 6 2 5 Le milieu de pr l vement Cobas PCR Cell Collection Media de la compagnie Roche Diagnostics Ce milieu est utilis avec la trousse Cobas 4800 HPV test Les chantillons peuvent tre t
8. H Mayrand M Roger and E L Franco 2009 Detection and typing of human papillomavirus nucleic acids in biological fluids Public Health Genomics 12 308 318 8 Coutl e F D Rouleau A Ferenczy and E L Franco 2005 Human Papillomavirus Testing Can j Inf Dis 16 83 91 9 Cuzick J L Ambroisine L Cadman J Austin L Ho G Terry S Liddle R Dina J McCarthy H Buckley C Bergeron W P Soutter D Lyons and A Szarewski 2010 Performance of the Abbott RealTime high risk HPV test in women with abnormal cervical cytology smears J Med Virol 82 1186 1191 10 Dufresne S P Sauthier M H Mayrand P Petignat D Provencher P Drouin P Gauthier M J Dupuis R Hadjeres E L Franco and F Coutlee 2011 HPV DNA triage of women with ASCUS living in Montreal demonstration of differences between Amplicor HPV and Hybrid capture 2 J Clin Microbiol 49 48 53 Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 23 de 33 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Groupe de travail sur les lignes directrices pour le d pistage du cancer du col ut rin au Qu bec 2011 Les indications du test VPH p 21 22 In Institut National de Sant Publique du Qu bec ed Lignes directrices sur le d pistage du cancer du col ut rin au Qu bec Montr al Groupe de travail sur les lignes directrices p
9. es de trente ans et plus sans l sion du col ut rin a cependant d montr que les taux de positivit pour VPH HR par Cervista HPV HR test et HC2 taient quivalents 23 Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 8 de 33 5 PRINCIPES 5 1 Principes analytiques des tests VPH HR Alors que la d tection de VPH de bas risque est fr quente et n est pas utile pour le d pistage des maladies pr canc reuses du col ut rin la d tection des VPH HR est cliniquement pertinente Le g notypage pr cis des VPH n est pas utile pour le triage des patientes avec une cytologie ACSI voir ci bas Il est possible que la d tection des types 16 et 18 soit utilis e dans le futur dans des protocoles de triage pour s lectionner les patientes dont le test VPH HR est positif lors du d pistage primaire et qui seraient risque plus lev de maladie de haut grade 6 Trois strat gies analytiques ont t d velopp es pour d tecter la pr sence d une infection par le VPH 7 les tests g n riques qui permettent de d tecter la pr sence de g notypes HR comme groupe sans pr ciser le ou les g notypes impliqu s le g notypage extensif sp cifique de type qui permet un g notypage individuel et complet et le g notypage cibl qui permet le g notypage individuel de quelques g notypes pertinents en g n ral 16 et 18 7 21 25
10. 68 Cervista HPV HR test 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 66 68 Cobas 4800 HPV test 16 18 et 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 66 68 Abbott RealTime High Risk HPV test 16 18 et 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 66 68 Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS D tection du virus du papillome humain haut risque 5 ao t 2013 Page 32 de 33 Annexe 5 Milieux de transport et conservation des chantillons Milieux de transport temps et temp rature de conservation Tests PreservCyt SurePath STM Oui HC2 Oui 2 sem 24 12 sem 2 3 C inconnu ou 3 sem 4 C ou 12 sem 20 C eui Oui Amplicor amp HPV test 3 sem 24 C Non ou 8 sem 2 C 8 C dd Cervista HPV HR Oui Kio Non test 18 sem 2 C 30 C Oui Cobas 4800 HPV test f 2 sem 15 C 30 C Non 6 sem 20 300 2e aem 2 8 C Oui Oui Abbott RealTime High Inconnu Risk HPV test 16 sem 15 C 30 C 8 sem 15 C 30 C dilution 1 30 ou 26 sem 2 C 8 C ou 26 sem 2 C 8 C Le milieu Specimen Transport Buffer de la trousse Abbott Cervi Collect Specimen Collection Kit ne peut tre utilis qu avec la trousse Abbott RealTime High Risk HPV test sp cimen conserv pour 2 semaines 2 C 30 C ou 12 semaines 10 C Le milieu Cobas PCR Cell Collection Media ne peut tre utilis qu avec la trousse Cobas 4800 HP
11. JJ Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 3 de 33 TABLES DES MATI RES 1 CONTEXTE 6 2 BUT 6 3 OBJECTIFS 6 4 UTILISATIONS 6 4 1 GENERALITES SUR LES VPH GENITAUX 6 4 2 CIRCONSTANCES CLINIQUES LE TEST VPH HR N EST PAS INDIQUE 7 4 3 LES TESTS VPH HR APPROUVES AU QUEBEC 8 4 4 PERFORMANCE DES DIFFERENTES TROUSSES VPH HR 8 5 PRINCIPES 9 5 1 PRINCIPES ANALYTIQUES DES TESTS VPH HR 9 5 2 PRINCIPES D UTILISATION CLINIQUE DES TESTS VOIR ANNEXES 3 ET 4 10 6 CHANTILLON S 10 6 1 PRELEVEMENT DE L ECHANTILLON DU COL UTERIN 10 6 1 1 TECHNIQUE 10 6 2 MILIEUX DE TRANSPORT POUR LES SPECIMENS VOIR ANNEXE 5 11 6 2 1 LE MILIEU POUR CYTOLOGIE EN MILIEU LIQUIDE PRESERVCYT DE LA COMPAGNIE HOLOGIC 11 6 2 2 LE MILIEU POUR CYTOLOGIE EN MILIEU LIQUIDE SUREPATH PRESERVATIVE FLUID SUREPATH DE LA COMPAGNIE BECTON DICKINSON 11 6 2 3 LE MILIEU SAMPLE TRANSPORT MEDIUM STM DE LA COMPAGNIE QIAGEN 12 6 2 4 LATROUSSE ABBOTT CERVI COLLECT SPECIMEN COLLECTION KIT DE LA COMPAGNIE ABBOTT MOLECULAR 12 6 2 5 LE MILIEU DE PRELEVEMENT COBAS PCR CELL COLLECTION MEDIA DE LA COMPAGNIE ROCHE DIAGNOSTICS 12 6 3 CONSERVATION DES SPECIMENS AU LABORATOIRE 12 6 3 1 PRESERVCYT 12 6 3 2 SUREPATH 13 6 3 3 STM 13 6 3 4 SPECIMEN TRANSPORT BUFFER DE LA TROUSSE ABBOTT CERVI COLLECT SPECIMEN COLLECTION KI
12. Les tests actuellement utilis s en diagnostic appartiennent aux cat gories des tests g n riques pour les VPH HR Ceux ci peuvent tre combin s avec le g notypage cibl des g notypes 16 et 18 Les tests g n riques d tectent la pr sence d ADN HC2 par amplification de signal Amplicor amp HPV test par amplification g nomique et Cervista HPV HR test par la technique Invader ou d ARNm le test APTIMA HPV de la compagnie Gen Probe n est pas encore approuv au Canada pour usage diagnostique par amplification par transcription de 13 14 VPH HR g notypes 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 68 et parfois 66 existe une r action d hybridation crois e des r actifs de HC2 et Amplicor amp HPV test avec d autres g notypes HR non inclus dans le m lange de sondes et avec certains types non oncog niques ce qui contribue diminuer la sp cificit de ces tests 4 8 10 Certains tests combinent une analyse g n rique avec un g notypage cibl et rapportent la pr sence d ADN de 12 g notypes HR comme groupe et la pr sence de VPH16 et 18 s par ment Ces tests sont le Cobas 4800 HPV test et Abbott RealTime High Risk HPV test qui utilisent l amplification g nomique en temps r el dans une plateforme enti rement automatis e pour le traitement des sp cimens l amplification et la d tection des amplicons Le test Cervista HPV 16 18 utilise la m thode Invader et est combin avec le test Cervista
13. des maladies pr invasives et invasives du col ut rin Le d pistage du cancer du col par les VPH HR Les lignes directrices provinciales sur le d pistage du cancer du col au Qu bec ont t publi es par l INSPQ r cemment http www inspq qc ca pdf publications 1279 LignesDirectDepistCancerColUterin pdf 12 Le premier essai clinique randomis r alis en Am rique du Nord sur le d pistage primaire du cancer du col en utilisant un test VPH HR fut r alis au Qu bec et a d montr une sensibilit pour la d tection de n oplasie intra pith liale du col de haut grade NIC2 3 qui est l quivalent du CIN2 3 en anglais pour les femmes g es de trente ans et plus de 94 6 pour la d tection de VPH HR et de 55 4 pour la cytologie 17 Un deuxi me essai clinique randomis est en cours en Colombie Britannique Les r sultats de 8 tudes cliniques randomis es ont d montr que la sensibilit des tests VPH HR tait sup rieure celle de la cytologie pour la d tection de NIC2 3 et cancer 4 24 pour les femmes de 30 ans et plus niveau d vidence Al Une m ta analyse a d montr que la sensibilit du test VPH HR est sup rieure de 37 celle de la cytologie en utilisant le seuil de positivit pour la cytologie de l sion squameuse intra pith liale de bas grade et plus ou LS L en anglais pour la d tection de l sions de NIC3 et de cancer alors que sa sp cificit tait plus basse de 7 96 24 La sensib
14. papillome humain haut risque 5 ao t 2013 Page 27 de 33 Annexe 2 Informations pertinentes G n ralit s sur les VPH g nitaux Les VPH infectent les muqueuses et la peau Pr s de 42 g notypes de VPH infectent le tractus ano g nital chez l homme et la femme Cependant 12 g notypes sont officiellement reconnus comme tant oncog nes et sont d sign s VPH HR g notypes 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 alors que 13 autres g notypes sont possiblement oncog niques dont les g notypes 66 et 68 3 Les VPH HR causent plusieurs cancers ano g nitaux dont le cancer du col ut rin et certains cancers oropharyng s L infection g nitale par les VPH affecte plus de 80 96 des individus sexuellement actifs au cours de leur vie L infection g nitale par les VPH est fr quente plus particuli rement chez les femmes sexuellement actives de moins de trente ans La majorit des infections par VPH sont transitoires Seules les infections persistantes par un VPH HR peuvent causer un cancer Le VPH ne peut pas tre isol en culture cellulaire De plus les m thodes s rologiques sont complexes et ne sont disponibles que dans un contexte de recherche La d tection de l infection par VPH s effectue donc sur des chantillons cellulaires g nitaux par des m thodes mol culaires de d tection des acides nucl iques viraux L utilit clinique des tests de d tection des VPH HR a t d montr e pour la d tection
15. pour un VPH HR N gatif pour un VPH HR Ind termin ou Invalide L appareil calcule pour chaque sp cimen une valeur de r activit avec chacun des 3 m langes r actionnels pour VPH HR en fonction du bruit de fond d un contr le n gatif sans cible Le ratio entre le r sultat le plus lev et le r sultat le plus faible des 3 m langes r actionnels corrig s pour le bruit de fond est alors calcul Si ce ratio est sup rieur 1 525 le sp cimen est Positif pour un VPH HR Un autre algorithme de calcul est appliqu si ce ratio n est pas atteint mais que les 3 m langes r actionnels sont r actifs et ont tous un ratio individuel sup rieur 1 93 Le test est alors Positif pour un VPH HR L appareil calcule un coefficient de variation partir des 3 r actions du contr le cellulaire des 3 m langes r actionnels Si celui ci est sup rieur 25 95 le r sultat est Invalide L appareil calcule le ratio entre le signal de chacune des r actions du contr le cellulaire des 3 m langes r actionnels et le bruit de fonds Si ce ratio est inf rieur 0 7 pour chacune des r actions le r sultat est Ind termin L appareil calcule la moyenne des ratios entre le signal des contr les cellulaires et le bruit de fonds Si cette moyenne est inf rieure 1 5 pour un sp cimen n gatif pour VPH HR le test est Ind termin Un sp cimen est Ind termin parce que le sp cimen conti
16. AM MI de sant publiqu de sant publique dud Association des M decins Qu bec EJ EJ Microbiologistes Infectiologues du Qu bec GUIDE DE PRATIQUE POUR LES ANALYSES DE LABORATOIRE EN LIEN AVEC LES ITSS Titre D TECTION DU VIRUS DU PAPILLOME HUMAIN HAUT RISQUE 5 AOUT 2013 AUTEUR S Dr Frangois Coutl e m decin microbiologiste infectiologue Avec la collaboration du groupe de travail Protocoles de l AMMIQ du Comit sur les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS CALI groupe de travail pr sid par Dr Pierre Lebel m decin microbiologiste infectiologue Dre Annie Claude Labb m decin microbiologiste infectiologue et pr sidente du CALI Dre Isabelle T trault m decin microbiologiste infectiologue Dr Claude Fortin m decin microbiologiste infectiologue Dre Marie Gourdeau m decin microbiologiste infectiologue Dre Julie Bestman Smith m decin microbiologiste infectiologue Madame Annick Trudelle conseill re scientifique et coordonnatrice du CALI Avec la collaboration des membres du Comit sur les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS CALI de l Institut national de sant publique du Qu bec voir annexe 1 Approuv par le comit du D veloppement professionnel continu DPC de l AMMIQ HISTO RIQUE DU DOCUMENT Version No 1 Date 5 ao t 2013 Description des modifications R viseur Date si applicable signature AAAA MM
17. AMPLICOR HPV TEST 22 14 LIENS UTILES 22 Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain a haut risque Page 5 de 33 1 CONTEXTE Ce document est une nouvelle dition d un document de l AMMIQ intitul Protocole des ITSS D pistage des papillomavirus haut risque duquel s est inspir l auteur Le comit sur les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS CALI de l INSPQ a form un groupe de travail compos des auteurs de cette s rie de documents Ceux ci seront dor navant intitul s Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS Ce document pourra servir de guide de pratique pour aider la r daction de la proc dure op rationnelle normalis e par les responsables du laboratoire Nous esp rons aussi que certaines informations qui y sont pr sent es pourront tre utiles aux cliniciens et professionnels de sant publique qui le consulteront 2 BUT Cette proc dure d crit les proc dures pour la d tection des types de virus du papillome humain haut risque VPH HR aussi appel s VPH oncog nes dans des sp cimens de brossage du col ut rin 3 OBJECTIFS e D crire les milieux de transport des chantillons du col de l ut rus acceptables pour la d tection de VPH HR e D crire les m thodes de laboratoire pour d tecter la pr sence de VPH HR e Fournir une grille d interpr tation d
18. PH HR est positif 31 32 Les patientes qui ont t trait es pour une n oplasie intra pith liale cervicale de grade 2 et 3 NIC2 3 peuvent tre suivies avec l aide d une cytologie de contr le combin e un test VPH HR douze mois et vingt quatre mois niveau d vidence BII 32 Elles sont orient es a nouveau en colposcopie si la cytologie de contr le est anormale ou si le second test VPH HR est positif 31 32 Si les tests sont n gatifs pour les deux visites ils sont r p t s trente six mois avant d orienter la patiente vers un d pistage cytologique usuel 32 Le d pistage d une maladie de haut grade r siduelle ou r cidivante incluent la d tection de VPH HR 6 et douze mois niveau d vidence BII ou une cytologie et ou une colposcopie 6 mois niveau d vidence BII 32 Dans certaines circonstances particuli res les colposcopistes pourront utiliser le test du VPH pour d terminer le risque clinique de maladies pr canc reuses R p ter un traitement ou effectuer une hyst rectomie sur la base d un test VPH HR sans examen colposcopique n est pas acceptable niveau d vidence Ell 4 2 Circonstances cliniques o le test VPH HR n est pas indiqu Le test de d tection des VPH HR n est pas utile pour e Les patientes qui ont une cytologie d montrant des anomalies de type ASC H ou suggestives de l sions squameuses intra pith liales de bas grade ou de haut grade e Prendre une d cision sur la vac
19. SC US cytology results from the ATHENA HPV study Am J Clin Pathol 135 468 475 Szarewski A D Mesher L Cadman J Austin L Ashdown Barr L Ho G Terry S Liddle M Young M Stoler J McCarthy C Wright C Bergeron W P Soutter D Lyons and J Cuzick 2012 Comparison of seven tests for high grade cervical intraepithelial neoplasia in women with abnormal smears the Predictors 2 study J Clin Microbiol 50 1867 1873 The Atypical Squamous Cells of Undetermined significance Low Grade Squamous Lesions Triage Study ALTS Group 2003 Results of a randomized trial on the management of cytology interpretations of atypical squamous cells of undetermined significance Am J Obstet Gynecol 188 1383 1392 Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 25 de 33 30 Wahlstrom C T Iftner J Dillner and L Dillner 2007 Population based study of screening test performance indices of three human papillomavirus DNA tests J Med Virol 79 1169 1175 31 Wright T C J L S Massad C J Dunton M Spitzer E J Wilkinson and D Solomon 2007 2006 consensus guidelines for the management of women with abnormal cervical screening tests J Low Genit Tract Dis 11 201 222 32 Massad LS Einstein MH Huh WK Katki HA Kinney WK Schiffman M et al 2012 updated consensus guidelines for the management of abnormal cervical cancer sc
20. T 13 6 3 5 COBAS PCR CELL COLLECTION MEDIA 13 7 S CURIT 13 8 QUIPEMENT ET MAT RIEL 14 9 CONTR LE DE QUALIT 14 9 1 CONTROLES DU TEST HC2 14 10 PROCEDURE 15 10 1 TRAITEMENT DES SPECIMENS 15 10 1 1 SPECIMEN SOUMIS DANS LE PRESERVCYT 15 10 1 2 TRAITEMENT DU SPECIMEN SOUMIS DANS SUREPATH 16 10 1 3 SP CIMENS SOUMIS DANS LE STM 16 10 1 4 TRAITEMENT DU SP CIMEN SOUMIS DANS LE SPECIMEN TRANSPORT BUFFER DE LA TROUSSE ABBOTT CERVI COLLECT SPECIMEN COLLECTION KIT 17 10 1 5 TRAITEMENT DU SP CIMEN SOUMIS DANS LE COBAS PCR CELL COLLECTION MEDIA 17 10 2 PROC DURES ANALYTIQUES 17 10 2 1 PR CAUTIONS LORS DES PROC DURES 17 10 2 2 PROC DURES ANALYTIQUES 17 11 CALCULS 18 11 1 INTERPRETATION DU TEST HC2 18 11 2 INTERPRETATION DU TEST COBAS 4800 HPV TEST 19 11 2 1 ENUTILISANT LE HPV HIGH RISK PANEL 19 11 2 2 ENUTILISANT LE HPV HIGH RISK PLUS GENOTYPING PANEL 19 11 3 INTERPR TATION DU TEST ABBOTT REAL TIME HIGH RISK HPV TEST 19 11 4 INTERPRETATION DU TEST AMPLICOR HPV TEST 20 11 5 INTERPRETATION DU TEST CERVISTA HPV HR TEST 20 12 INTERF RENCES 20 12 1 CELLULARIT DU SPECIMEN 20 12 2 INHIBITEURS DU PROCESSUS D AMPLIFICATION GENOMIQUE 21 12 3 POUR LE TEST HC2 21 12 4 POUR LE TEST COBAS 4800 HPV TEST 21 13 RAPPORT 21 13 1 MISSION DU RAPPORT POUR TOUS LES TESTS 21 13 2 POUR HC2 22 13 3 Pour COBAS 4800 HPV TEST CERVISTA me HPV HR TEST ABBOTT REALTIME HIGH RISK HPV TEST ET
21. V test sp cimen conserv pour 26 semaines de 2 C 30 C Le milieu SurePath amp est en valuation par Sant Canada pour le test Abbott RealTime High Risk HPV test Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS D tection du virus du papillome humain haut risque 5 ao t 2013 Page 33 de 33
22. anomalies de type ACSI ou plus niveau d vidence BII Si deux tests VPH HR ou deux cytologies cons cutives sont n gatifs la patiente est orient e en d pistage de routine pour au moins vingt ans 32 niveau d vidence Al Les patientes qui ont un test VPH HR positif et qui ont une cytologie avec ACSI pour qui une premi re colposcopie n a pas identifi de l sion du col peuvent tre suivies avec l aide d une cytologie de contr le 6 et douze mois niveau d vidence BII ou par un test VPH HR douze mois niveau d vidence BIl Elles sont orient es nouveau en colposcopie si la cytologie de contr le est anormale ou si le test VPH HR est positif 31 6 CHANTILLON S 6 1 Pr l vement de l chantillon du col ut rin L chantillon appropri pour la d tection de VPH HR est obtenu par un brossage de l endocol et de l exocol l aide d une cytobrosse du type balai broom type device qui recueille des cellules de l endocol et de l exocol L utilisation d une cytobrosse augmente la sensibilit de la d tection des VPH HR comparativement l utilisation d un couvillon 8 Le clinicien peut galement combiner le pr l vement obtenu avec une cytobrosse et une spatule si la cytobrosse utilis e ne recueille que les cellules de l endocol L utilisation d un auto pr l vement avec un couvillon pour la d tection de VPH HR est prometteuse pour le d pistage des femmes qui ne fr quentent pas le syst me de s
23. ant mais n est pas encore appliqu e au Qu bec 33 6 1 1 Technique e Ne jamais utiliser de cytobrosse pour effectuer un pr l vement du col ut rin chez une femme enceinte e Pr lever les cellules du col ut rin avec la cytobrosse avant d appliquer de l iode ou de l acide ac tique e Eliminer l exc s de glaire au niveau du col ut rin avec un couvillon de dacron avant de proc der au pr l vement pour les VPH HR e Ins rer la cytobrosse de 1 1 5 cm dans l orifice du col ut rin jusqu ce que les plus grands poils de la cytobrosse appuient sur le col ut rin e Effectuer trois rotations compl tes dans le sens des aiguilles d une montre e Ne pas enfoncer compl tement la cytobrosse dans l endocol e Retirer la cytobrosse et l agiter dans le tube avec milieu de transport Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 10 de 33 Des concentrations lev es de cr me antifungique de cr me de cortisone de gel e contraceptive de cr me contre la d mangeaison ou de liquide d une douche vaginale r cente peuvent interf rer avec la d tection de VPH HR et g n rer des r sultats faussement n gatifs Seul le test HC2 ne mesure pas la cellularit du sp cimen Les chantillons hypocellulaires peuvent tre faussement n gatifs pour VPH HR Certains sp cimens peuvent contenir du sang ou d autres substances qui pe
24. bl et rapportent la pr sence d ADN de 12 g notypes HR comme groupe et la pr sence de VPH16 et 18 s par ment Ces tests sont le Cobas 4800 HPV test et Abbott RealTime High Risk HPV test qui utilisent l amplification g nomique en temps r el dans une plateforme enti rement automatis e pour traitement des sp cimens l amplification et la d tection des amplicons Le test Cervista HPV 16 18 utilise la m thode Invader et est combin avec le test Cervista HPV HR test Dans une tude utilisant cette strat gie sur 4 219 participantes le risque de NIC2 3 et cancer des femmes dont le test VPH16 ou VPH18 est positif tait de 11 4 95 Cl 8 4 96 14 8 96 comparativement 6 1 95 Cl 4 9 96 7 2 96 pour les femmes dont le test VPH HR est positif et 0 8 96 95 96 Cl 0 3 1 5 96 pour les femmes dont le test VPH HR est n gatif 6 Analyses de g notypage complet Le Linear array amp de Roche Diagnostics permet la d tection individuelle de 36 g notypes g nitaux Son utilisation est restreinte pour l instant la recherche et la surveillance pid miologique 4 8 Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 31 de 33 Annexe 4 Types d tect s par chaque test VPH HR Test G notypes HC2 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 68 Amplicor HPV test 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59
25. cination contre les VPH e Le diagnostic des condylomes g nitaux e Le d pistage des infections transmissibles sexuellement 11 31 32 e Le suivi des femmes enceintes e Lesfemmes g es de moins de trente ans e L valuation d abus sexuel Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 7 de 33 4 3 Les tests VPH HR approuv s au Qu bec Les tests approuv s par Sant Canada pour le triage des patientes avec une cytologie ACSI sont actuellement e Hybrid Capture 2 High risk HPV DNA test HC2 de la compagnie Qiagen Amplicor amp HPV test de la compagnie Roche Diagnostics e Cobas amp 4800 HPV test de la compagnie Roche Diagnostics e Cervista HPV HR test de la compagnie Hologic e Abbott RealTime High Risk HPV test de la compagnie Abbott Molecular Le test Cervista HPV 16 18 de la compagnie Hologic et le test Linear array de la compagnie Roche Diagnostics sont galement accept s pour usage diagnostique au Canada 4 4 Performance des diff rentes trousses VPH HR Le test HC2 sert d talon pour valuer les nouveaux tests de d tection des VPH HR en clinique 18 Un groupe d experts international a d termin que pour tre acceptable cliniquement en d pistage primaire du cancer du col ut rin un nouveau test de d tection des VPH HR doit atteindre un niveau de sensibilit clinique pour d tecter le
26. ent une faible quantit d ADN parce que le m lange r actionnel et le sp cimen ont t mal m lang s ou par une erreur de pipetage 12 INTERF RENCES Des concentrations lev es de cr me antifungique de cr me d oestrog ne de gel e contraceptive de cr me d antibiotique lubrifiant hydratants vaginaux ou de liquide d une douche vaginale r cente peuvent interf rer avec la d tection de VPH HR et g n rer des r sultats faussement n gatifs 12 1 Cellularit du sp cimen Seul le test HC2 ne mesure pas la cellularit du sp cimen Les autres tests d tectent la pr sence de l ADN d un g ne humain pour d tecter la pr sence de cellules dans l chantillon Les chantillons hypocellulaires peuvent tre faussement n gatifs pour VPH HR Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 20 de 33 12 2 Inhibiteurs du processus d amplification g nomique Certains sp cimens peuvent contenir des inhibiteurs des polym rases de l ADN Les tests de d tection de VPH HR qui utilisent une m thode d amplification g nomique ont incorpor un contr le cellulaire permettant l amplification d un g ne humain Un r sultat positif pour la d tection de s quences humaines d montre que la pr sence d inhibiteurs n interf re pas avec la d tection de VPH HR gt Un r sultat n gatif pour la d tection de s quences hu
27. erenczy S Ratnam F Coutlee and E L Franco 2007 Human papillomavirus DNA versus Papanicolaou screening tests for cervical cancer N Engl J Med 357 1579 1588 Meijer C J J Berkhof P E Castle A T Hesselink E L Franco G Ronco M Arbyn F X Bosch J Cuzick J Dillner D A Heideman and P J Snijders 2009 Guidelines for human papillomavirus DNA test requirements for primary cervical cancer screening in women 30 years and older Int J Cancer 124 516 520 Murphy J E B Kennedy S Dunn M McLachlin M Fung Kee Fung D Gzik M Shier and L Paszat 2012 Cervical Screening A Guideline for Clinical Practice in Ontario J Obstet Gynaecol Can 34 453 458 Park Y E Lee J Choi S Jeong and H S Kim 2012 Comparison of the Abbott RealTime High Risk Human Papillomavirus HPV Roche Cobas HPV and Hybrid Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 24 de 33 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Capture 2 assays to direct sequencing and genotyping of HPV DNA J Clin Microbiol 50 2359 2365 Poljak M and B J Kocjan 2010 Commercially available assays for multiplex detection of alpha human papillomaviruses Expert Rev Anti Infect Ther 8 1139 1162 Poljak M A Ostrbenk K Seme V Ucakar P Hillemanns E V Bokal N Jancar and I Klavs 2011 Comparison of clinical and ana
28. erpr tation des r sultats en fonction de la pr sence de r action pour VPH HR et de l amplification du contr le cellulaire L intensit du signal g n r pour le VPH16 le VPH18 et les autres VPH HR est indiqu e dans le rapport entre parenth se dans la colonne R sultats L interpr tation HR HPV detected signifie qu un VPH HR est d tect Un message affich dans la colonne R sultats indique s il s agit du VPH16 VPH18 ou d un autre g notype de VPH HR other HR HPV L interpr tation Not detected signifie qu aucun VPH HR n a t d tect Si le contr le cellulaire ne g n re pas une r action dans les limites pr vues par le test et que le test est n gatif pour un VPH HR un code d erreur sera g n r L chantillon pour lequel un code d erreur a t g n r doit tre r valu Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 19 de 33 11 4 Interpr tation du test Amplicor amp HPV test Les chantillons avec un r sultat gt 20 2 sont positifs gt lt 0 2 sont n gatifs si le r sultat de p globine est 2 0 2 gt lt 0 2 sont invalides si le r sultat de B globine est 0 2 11 5 Interpr tation du test Cervista HPV HR test Selon les ratios mesur s par l appareil pour chaque sp cimen tel que d taill au prochain paragraphe un sp cimen pourra tre Positif
29. es r sultats pour le suivi clinique des patientes dont le test VPH HR est positif ou n gatif 4 UTILISATIONS 4 1 G n ralit s sur les VPH g nitaux Les g n ralit s sur les tests de d tection des VPH sont fournies en d tail l annexe 2 Douze g notypes sont officiellement reconnus comme tant oncog nes et sont d sign s VPH HR g notypes 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 et 13 autres g notypes dont les types 66 et 68 sont consid r s comme possiblement oncog ne 3 Les VPH HR causent plusieurs cancers ano g nitaux dont le cancer du col ut rin et certains cancers oropharyng s Le comit sur les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS CALI est un comit permanent d experts form avec l accord du Minist re de la Sant et des Services sociaux MSSS et de l Association des m decins microbiologistes infectiologues du Qu bec AMMIQ rel ve de l Institut national de sant publique du Qu bec INSPQ et est rattach au directeur du Laboratoire de sant publique du Qu bec LSPQ pour les aspects de laboratoire ainsi qu au directeur de la Direction des risques biologiques et de la sant au travail DRBST pour les aspects de sant publique Le CALI a le mandat de fournir une expertise scientifique et de formuler des recommandations et avis visant les activit s de laboratoire des fins de d pistage de diagnostic de suivi et de contr le des ITSS Guide de pratique pour les ana
30. ilieu de transport ce qui peut diminuer la sensibilit du test pour d tecter les VPH R sultat positif D tection d ADN du virus du papillome humain haut risque types num rer selon la proc dure utilis e par la technique choisie Pr sence de virus du papillome humain haut risque Commentaire Une colposcopie doit tre consid r e pour les femmes avec ACSI la cytologie et infect e par un virus du papillome humain haut risque Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 21 de 33 Certains tests permettent la d tection s lective des VPH HR de types 16 et 18 Ces r sultats permettent d orienter la patiente dont le r sultat d un de ces types est positif dans la situation clinique d une cytologie normale en d pistage primaire directement en colposcopie 24 Par contre ils n ont pas d utilit pour le triage des patientes avec une cytologie ACSI et ne devraient pas tre individualis s sur le rapport 11 13 2 Pour HC2 Si le sp cimen a t recueilli dans du PreservCyt ou SurePath et qu un culot de cellules n tait pas visible apr s centrifugation il faut mentionner que la mauvaise qualit de l chantillon pourrait entrainer un r sultat faussement n gatif et qu un nouvel chantillon devrait tre soumis Si le r sultat du sp cimen contenu dans du PreservCyt amp donne un RLU de 1
31. ilit des tests VPH HR taient de 28 sup rieure celle de la cytologie en utilisant comme seuil la pr sence d alt rations cellulaires de signification ind termin e ACSI alors que les deux tests avaient une sp cificit similaire 24 Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 28 de 33 Les tats Unis acceptent l utilisation des tests VPH HR en co d tection avec la cytologie pour le d pistage primaire du cancer du col pour les femmes g es de trente ans et plus Certains pays Europ ens organisent leur programme de d pistage primaire autour des tests VPH HR Le d pistage du cancer du col par d tection de VPH HR n est actuellement pas en vigueur au Qu bec 11 Pour les milieux au Qu bec qui utilisent le test de d tection des VPH HR pour le d pistage primaire du cancer du col en association avec la cytologie il est important de ne l utiliser que pour les femmes de trente ans et plus une fr quence qui ne doit pas tre inf rieure trois ans 1 11 Avant d impl menter large chelle l utilisation des tests VPH HR en d pistage primaire il faudra d finir l algorithme de suivi des patientes ayant un test VPH HR positif et une cytologie normale ainsi que d finir la fr quence et l intervalle du d pistage par VPH HR 11 19 24 L utilisation des tests de d tection des VPH HR pour cette finalit devrait s organi
32. ional de sant publique du Qu bec Docteure Louise Charest Omnipraticienne Clinique m dicale l Actuel Docteur Claude Fortin M decin microbiologiste infectiologue CHUM H pital Notre Dame Docteur Marc Dionne membre d office Directeur scientifique Institut national de sant publique du Qu bec Docteure Diane Lambert M decin conseil Direction de sant publique des Laurentides Docteur Marc Steben M decin conseil Institut national de sant publique du Qu bec Monsieur Donald Murphy Ph D Microbiologiste LSPQ Institut national de sant publique du Qu bec Docteur Patrick Dolc M decin microbiologiste infectiologue H pital r gional de Rimouski Monsieur ric Frost Ph D Microbiologiste Universit de Sherbrooke Docteur Pierre Lebel M decin microbiologiste infectiologue H pital G n ral de Montr al Docteure France Morin Omnipraticienne CLSC la Pommeraie Docteure Sylvie Venne M decin conseil Service de lutte contre les ITSS Minist re de la Sant et des Services sociaux Docteur Gilles Lambert M decin conseil Institut national de sant publique du Qu bec Monsieur Raymond Parent membre d office Chef d unit scientifique Institut national de sant publique du Qu bec Docteure Isabelle Alarie M decin microbiologiste infectiologue CHUS H pital Fleurimont Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS D tection du virus du
33. lage fourni ou vendu par la compagnie sp cifiquement pour le test varient selon le test utilis Se r f rer au manuel d instruction du manufacturier pour s assurer de la disponibilit des instruments et du mat riel n cessaires pour r aliser la technique plus particulierement du mat riel non inclus dans les trousses et des instruments non fournis par la compagnie 9 CONTR LE DE QUALIT V rifier les dates d expiration des r actifs et ne pas utiliser les r actifs si cette date est d pass e Chaque trousse comporte des contr les positifs et n gatifs qui doivent tre trait s et analys s selon les recommandations du manufacturier L inclusion de contr les n gatifs pour les techniques d amplification g nomique permet galement de d pister un probl me de contamination par amplicons contaminants 9 1 Contr les du test HC2 Le test HC2 a une s rie de contr les et de calculs plus labor s que les autres techniques Pour tre acceptable une technique avec HC2 doit obtenir e Des contr les positifs PC en triplicata avec un coefficient de variation CV 15 96 Si le CV est entre 15 96 et 25 96 recalculer le CV en liminant la valeur la plus d viante Si le CV reste gt 15 le test n est pas valide Si le CV est 15 96 le test est valide faut alors recalculer le seuil de d tection cut off avec les deux contr les positifs restants et recalculer les ratios pour chaque sp cimen e Des con
34. lyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 6 de 33 Selon les modalit s propres chaque milieu les tests de d tection des VPH pour usage clinique b n ficient d un travail collaboratif entre les laboratoires de microbiologie m dicale et de pathologie m dicale et le d partement d obst trique gyn cologie Le d pistage du cancer du col par d tection de VPH HR n est actuellement pas en vigueur au Qu bec 11 L utilisation des tests de d tection des VPH HR pour cette finalit devrait s organiser sur la base d un programme provincial La d tection des VPH HR dans des sp cimens du col ut rin est indiqu e au Qu bec pour le triage des patientes de trente ans et plus ayant un frottis cytologique du col ut rin d montrant des alt rations cellulaires de signification ind termin e ACSI niveau d vidence Al mieux connu sous l acronyme anglais ASC US atypical squamous cells of undetermined significance 11 Cette indication des tests VPH HR s applique galement aux femmes immunod prim es 31 Les patientes dont le test VPH HR est positif avec ACSI et pour qui la colposcopie n a pas identifi e de l sion du col peuvent tre suivies avec l aide d une cytologie de contr le combin e un test VPH HR douze mois niveau d vidence BII 32 Elles sont orient es nouveau en colposcopie si la cytologie de contr le est anormale ou si le second test V
35. lytical performance of the Abbott Realtime High Risk HPV test to the performance of hybrid capture 2 in population based cervical cancer screening J Clin Microbiol 49 1721 1729 Quigley N B N T Potter M Chivukula M Z Knight J R Welch and M C Olson 2011 Rate of detection of high risk HPV with two assays in women over 30 years of age J Clin Virol 52 23 27 Saslow D D Solomon H W Lawson M Killackey S L Kulasingam J Cain F A Garcia A T Moriarty A G Waxman D C Wilbur N Wentzensen L S J Downs M Spitzer A B Moscicki E L Franco M H Stoler M Schiffman P E Castle and E R Myers 2012 American Cancer Society American Society for Colposcopy and Cervical Pathology and American Society for Clinical Pathology screening guidelines for the prevention and early detection of cervical cancer CA Cancer J Clin 62 147 172 Schiffman M N Wentzensen S Wacholder W Kinney J C Gage and P E Castle 2011 Human papillomavirus testing in the prevention of cervical cancer J Natl Cancer Inst 103 368 383 Solomon D M Schiffman R Tarone and S g ALTS 2001 Comparison of three management strategies for patients with atypical squamous cells of undetermined significance baseline results from a randomized trial J Natl Cancer Inst 93 293 299 Stoler M H T C J Wright A Sharma R Apple K Gutekunst and T L Wright 2011 High risk human papillomavirus testing in women with A
36. maines sugg re la pr sence d inhibiteurs ou une faible quantit de cellules 12 3 Pour le test HC2 Certains sp cimens peuvent contenir du sang ou d autres substances qui peuvent masquer le changement de couleur lors de l addition du r actif de d naturation et des sondes Ce ph nom ne n interf rera pas avec les valeurs finales obtenues pour la r action et lues sur le luminom tre 12 4 Pour le test Cobas 4800 HPV test Une quantit de sang sup rieur 1 5 dans la solution PreservCyt amp peut g n rer des r sultats faussement n gatifs avec le Cobas 4800 HPV test De par ce fait il est sugg rer de ne pas traiter les chantillons pr sentant une couleur marron fonc ou contenant grossi rement du sang lorsque contenu dans du PreservCyt 13 RAPPORT 13 1 mission du rapport pour tous les tests R sultat n gatif D tection d ADN du virus du papillome humain haut risque types num rer selon la proc dure utilis e par la technique choisie Absence de virus du virus du papillome humain haut risque Commentaire Un suivi cytologique habituel peut tre effectu pour les femmes avec ACSI en l absence de virus du papillome humain Si la trousse de pr l vement SurePath ou la trousse de pr l vement STM HC2 DNA Collection Device est utilis e Il est pr f rable d crire un commentaire si la cytobrosse n est pas envoy e dans le milieu de transport la cytobrosse tait absente du m
37. n du virus du papillome humain haut risque Page 22 de 33 R f rences 1 ACOG Practice Bulletin 2009 Cervical cytology screening Obs Gyn 114 1409 1420 2 Belinson J L R Wu S E Belinson X Qu B Yang H Du R Wu C Wang L Zhang Y Zhou Y Liu and R G Pretorius 2011 A population based clinical trial comparing endocervical high risk HPV testing using hybrid capture 2 and Cervista from the SHENCCAST II Study Am J Clin Pathol 135 790 795 3 Bouvard V R Baan K Straif Y Grosse B Secretan F El Ghissassi L Benbrahim Tallaa N Guha C Freeman L Galichet and V Cogliano 2009 A review of human carcinogens Part B biological agents Lancet Oncol 10 321 322 4 Canadian Partnership Against Cancer CPACC 2012 HPV Testing for Cervical Cancer Screening Expert Panel Summary or Evidence 5 Carozzi F M E Burroni S Bisanzi D Puliti M Confortini P Giorgi Rossi C Sani A Scalisi and F Chini 2011 Comparison of clinical performance of Abbott RealTime High Risk HPV test with that of hybrid capture 2 assay in a screening setting J Clin Microbiol 49 1446 1451 6 Castle P E M H Stoler T C J Wright A Sharma T L Wright and C M Behrens 2011 Performance of carcinogenic human papillomavirus HPV testing and HPV16 or HPV18 genotyping for cervical cancer screening of women aged 25 years and older a subanalysis of the ATHENA study Lancet Oncol 12 880 890 7T Coutlee F M
38. nt automatis es e Les 2 tests produits par Roche Diagnostics et le test Abbott RealTime High Risk HPV test utilisent les r actifs AmpErase et le dUTP dans le m lange r actionnel Ce r actif d truit par digestion enzymatique les amplicons contaminants g n r s par les r actions d amplification ant rieures Ce r actif permet donc de r duire le probl me de contamination 10 2 2 Proc dures analytiques e Les proc dures analytiques des diff rents tests devront tre compl t es en respectant les recommandations du manufacturier Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 17 de 33 e Le test HC2 peut tre effectu avec la plateforme haut d bit Rapid Capture System e Le test Cervista HPV HR test peut tre effectu manuellement ou sur une plate forme automatis e Cervista High Throughput Automation System Le principe du Cervista HPV 16 18 est identique au test Cervista HPV HR test e Le test Abbott RealTime High Risk HPV test peut tre effectu 1 sur une base manuelle et analys sur l appareil m2000rt 2 sur une base semi automatis e en utilisant les appareils m24sp pour le traitement des chantillons et m2000rt pour la d tection ou 3 sur une base enti rement automatis e avec l appareil m2000 e Letest Cobas 4800 HPV test est effectu sur une base enti rement automatis e
39. ntenus dans les milieux de transport ou des milieux cytologiques liquides doivent tre manipul s avec des gants et avec soin car ils peuvent contenir non seulement du VPH mais aussi d autres agents infectieux g nitaux Les consignes de bios curit de confinement de niveau 2 en vigueur dans l tablissement doivent tre respect es Une blouse de laboratoire et des gants doive tre port s lors de la manipulation des chantillons Ne pas pipeter la bouche et minimiser les a rosols liminer les d chets biologiques selon les consignes et protocoles en vigueur dans votre institution Les proc dures d taill es sont pr sent es sur la Fiche Technique Sant S curit MSDS disponible sur le site internet http www phac aspc gc ca msds ftss index_f html h Les consignes de bios curit de confinement de niveau 2 en vigueur dans l tablissement en cas de d versement doivent tre respect es lorsqu un d versement a lieu Certains r actifs de d naturation ou d extraction des acides peuvent tre corrosifs Certaines trousses contiennent des r actifs avec de l isopropanol qui est facilement inflammable Certains tampons de lavage et r actifs peuvent contenir de l azide sodique qui peut tre toxique au contact Les liquides de pr servation cytologique contiennent de l thanol d natur qui peut tre fatal si ing r 8 QUIPEMENT ET MAT RIEL L quipement et le mat riel n cessaire mais non inclus avec l appareil
40. omatis Cobas 4800 Un volume minimal de 1 ml 400 ul seront utilis s par l appareil et maximal de 4 ml seront extraits pour cette technique en utilisant un tube secondaire de 13 ml ou de 3 ml si le vial original de pr l vement est utilis Pour le test Abbott RealTime High Risk HPV test Le sp cimen est trait et analys selon les proc dures d crites par le manufacturier Abbott Molecular sur l appareil automatis m2000 S assurer d utiliser un minimum de 400 700 yl de sp cimen selon le tube de transfert utilis pour que 400 ul d chantillon soit transf r dans l appareil selon les recommandations du manufacturier 10 1 2 Traitement du sp cimen soumis dans SurePath e Un culot de cellules devrait tre visible apr s centrifugation d un sp cimen recueilli dans SurePath L absence de culot pourrait entrainer un sp cimen faussement n gatif Ceci devrait tre mentionn dans le rapport 10 1 2 1 10 1 2 2 Pour le test HC2 La proc dure d crite pour le PreservCyt est utilis e avec 2 4 ml de liquide cytologique SurePath en utilisant le protocole d crit avec le Sample Conversion Buffer en 10 1 1 1 Pour le test Abbott RealTime High Risk HPV test Le sp cimen est trait et analys selon les proc dures d crites par le manufacturier Abbott Molecular sur l appareil automatis m2000 S assurer d utiliser un minimum de 400 700 yl de sp cimen selon le tube de transfert utilis pour que 400 ul d
41. our le d pistage du cancer du col ut rin au Qu bec 2011 Lignes directrices sur le d pistage du cancer du col ut rin au Qu bec p 1 40 Montr al Grandjean Lapierre S P Sauthier M H Mayrand S Dufresne P Petignat D Provencher P Drouin P Gauthier M J Dupuis B Michon S Ouellet R Hadjeres A Ferenczy E L Franco and F Coutl e 2012 Human Papillomavirus HPV DNA Triage of Women with Atypical Squamous Cells of Undertermined Significance ASC US with Cobas 4800 HPV and Hybrid Capture 2 Tests for Detection of High Grade Lesions of the Uterine Cervix J Clin Microbiol 50 1240 1244 Heideman D A A T Hesselink J Berkhof F van Kemenade W J Melchers N F Daalmeijer M Verkuijten C J Meijer and P J Snijders 2011 Clinical validation of the cobas 4800 HPV test for cervical screening purposes J Clin Microbiol 49 3983 3985 Kinney W M H Stoler and P E Castle 2010 Special commentary patient safety and the next generation of HPV DNA tests Am J Clin Pathol 134 193 199 Kreimer A R R S Guido D Solomon M Schiffman S Wacholder J Jeronimo C M Wheeler and P E Castle 2006 Human papillomavirus testing following loop electrosurgical excision procedure identifies women at risk for posttreatment cervical intraepithelial neoplasia grade 2 or 3 disease Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 15 908 914 Mayrand M H E Duarte Franco l Rodrigues S D Walter J Hanley A F
42. r le test avec deux options d analyse Un ensemble de tests effectu s en m me temps peuvent comporter des r sultats de sp cimens valides et invalides 11 2 1 En utilisant le HPV High Risk Panel e HR HPV POS signifie que le sp cimen est positif pour un des 14 VPH HR incluant les types 16 et 18 e HR HPV NEG signifie que le sp cimen est n gatif pour un des 14 VPH HR incluant les types 16 et 18 e Le message nvalid signifie que le sp cimen doit tre r analys pour au plus 2 fois Si le message persiste un nouveau sp cimen doit tre obtenu e Le message Failed signifie qu il faut r viser les messages d erreur de la technique qui a chou et recommencer la technique apr s correction 11 2 2 En utilisant le HPV High Risk plus genotyping panel e Les r sultats apparaissent s par ment pour VPH16 VPH18 et les 12 autres g notypes HR other HR HPV e Les r sultats sont positifs POS ou n gatifs NEG e Le message Invalid signifie que le sp cimen doit tre r analys Si le message persiste un nouveau sp cimen doit tre obtenu Les r sultats invalides peuvent ne s appliquer qu un des r sultats VPH16 ou VPH18 ou autres HR VPH e Le message Failed signifie qu il faut r viser les messages d erreur de la technique qui a chou et recommencer la technique apr s correction 11 3 Interpr tation du test Abbott RealTime High Risk HPV test L appareil fournit l int
43. ransport s au laboratoire une temp rature entre 2 C et 30 C 6 3 Conservation des sp cimens au laboratoire 6 3 1 PreservCyt Les sp cimens peuvent tre conserv s jusqu douze semaines HC2 dix huit semaines Cervista HPV HR test ou 6 mois Cobas amp 4800 HPV test une temp rature entre 2 C et 30 C Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain a haut risque Page 12 de 33 e Pour le test Amplicor HPV test les sp cimens peuvent tre conserv s jusqu 3 semaines la temp rature de la pi ce ou jusqu 8 semaines une temp rature entre 2 C et 8 C e Pour le test Abbott RealTime High Risk HPV test les sp cimens peuvent tre conserv s jusqu 4 mois une temp rature entre 15 C et 30 C ou jusqu 6 mois une temp rature entre 2 C et 8 C e Ces sp cimens ne peuvent pas tre congel s 6 3 2 SurePath amp e Pour le test HC2 la dur e de conservation du sp cimen n a pas t tablie est donc prudent d appliquer les normes utilis es pour le test Amplicor HPV test e Pour le test Amplicor HPV test les sp cimens peuvent tre transport s et conserv s jusqu 2 semaines une temp rature entre 2 C et 8 C e Pour le Cobas 4800 HPV test les sp cimens peuvent tre conserv s jusqu 6 mois une temp rature entre 2 C et 8 C ou pendant 14 jours une temp rature ent
44. rat gies analytiques ont t d velopp es pour d tecter la pr sence d une infection par le VPH 7 1 les tests g n riques qui permettent de d tecter la pr sence de g notypes HR comme groupe sans pr ciser le ou les g notypes impliqu s 2 le g notypage extensif sp cifique de type qui permet un g notypage individuel et complet 3 le g notypage cibl qui permet le g notypage individuel de quelques g notypes pertinents en g n ral 16 et 18 7 21 25 Les tests actuellement utilis s en diagnostic appartiennent aux cat gories des tests g n riques pour les VPH HR Ceux ci peuvent tre combin s avec le g notypage cibl des g notypes 16 et 18 Les tests g n riques d tectent la pr sence d ADN HC2 par amplification de signal Amplicor HPV test par amplification g nomique et Cervista HPV HR test par la technique Invader ou d ARNm APTIMAG HPV de la compagnie Gen Probe n est pas encore approuv au Canada pour usage diagnostique par amplification par transcription de 13 14 VPH HR g notypes 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 68 et parfois 66 existe une r action d hybridation crois e des r actifs de HC2 et Amplicor amp HPV test avec d autres g notypes HR non inclus dans le m lange de sondes et avec certains types non oncog niques ce qui contribue diminuer la sp cificit de ces tests 4 8 10 Certains tests combinent une analyse g n rique avec un g notypage ci
45. re 15 C et 30 C e Pour Abbott RealTime High Risk HPV test les sp cimens peuvent tre transport s et conserv s jusqu 8 semaines une temp rature entre 15 C et 30 C et jusqu 6 mois entre 2 C et 8 C 6 3 3 STM e Les sp cimens transport s dans le STM peuvent tre conserv s pour quatorze jours la temp rature de la pi ce e Apr s ce d lai les sp cimens peuvent tre conserv s 1 semaine additionnelle a 4 C e Si ce dernier d lai est d pass conserver les sp cimens 20 C pour 3 mois 6 3 4 Specimen Transport Buffer de la trousse Abbott Cervi Collect Specimen Collection Kit e Les sp cimens peuvent tre conserv s entre 2 C et 30 C pendant 14 jours e Apr s ce d lai les sp cimens peuvent tre conserv s une temp rature inf rieure 10 C pour au plus quatre vingt dix jours e Les sp cimens ne doivent pas subir plus de 4 cycles de cong lation d cong lation 6 3 5 Cobas PCR Cell Collection Media e Les sp cimens peuvent tre conserv s jusqu 6 mois entre 2 C a 30 C 7 S CURIT Le VPH pourrait se transmettre au personnel de laboratoire par exposition des muqueuses ou de l sions de la peau des gouttelettes de sp cimen infect ou par inoculation parent rale accidentelle Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 13 de 33 Les sp cimens g nitaux co
46. reening tests and cancer precursors J Low Genit Tract Dis 2013 Apr 17 5 Suppl 1yS1 S27 33 Zhao F H A K Lewkowitz F Chen M J Lin S Y Hu X Zhang Q J Pan J F Ma M Niyazi C Q Li S M Li J S Smith J Belinson Y Qiao and P Castle 2012 Pooled analysis of a self sampling HPV DNA Test as a cervical cancer primary screening method J Natl Cancer Inst 104 178 188 34 Bentley J Colposcopic management of abnormal cervical cytology and histology J Obstet Gynaecol Can 2012 Dec 34 12 1188 202 Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 26 de 33 Annexe 1 Liste des membres du CALI Docteure Annie Claude Labb M decin microbiologiste infectiologue H pital Maisonneuve Rosemont Docteure Isabelle T trault M decin microbiologiste infectiologue CHA H pital Enfant J sus Madame Annick Trudelle M Sc Conseill re scientifique Institut national de sant publique du Qu bec Docteur Jean Fran ois Paradis membre d office Pr sident de l AMMIQ Madame Brigitte Lefebvre Ph D Microbiologiste LSPQ Institut national de sant publique du Qu bec Madame Lise Gu rard membre d office Chef de service Service de lutte contre les ITSS Minist re de la Sant et des Services sociaux Docteure C cile Tremblay membre d office Directrice scientifique LSPQ Institut nat
47. s l sions NIC2 3 sup rieur 90 du niveau de sensibilit atteint avec le test HC2 pour les femmes de trente ans et plus 18 Cette recommandation se base sur des m ta analyses r centes qui ont d montr une sensibilit de HC2 de 97 9 intervalle de confiance IC de 95 95 9 99 9 en d pistage primaire 18 Le niveau de sp cificit d sir de nouveaux tests pour la d tection de NIC2 3 ne devrait pas tre inf rieur 98 de celle obtenue avec le test HC2 Les tests HC2 Cobas amp 4800 HPV test Cervista HPV HR test et Abbott RealTime High Risk HPV test ont des profils de sensibilit et sp cificit clinique similaires 2 4 9 13 14 20 22 26 28 Le test Amplicor amp HPV test a une sensibilit clinique quivalente au HC2 mais poss de une sp cificit clinique plus basse que le test HC2 La sp cificit du test peut tre am lior e en augmentant le seuil de d tection du test qui n est cependant pas le seuil de d tection officiel 4 10 30 Les valuations soumises la Food and Drug Administration FDA aux tats Unis du test Cervista HPV HR test d montraient un taux de d tection des VPH HR dans une population de femmes sans l sion du col ut rin g es de trente ans et plus qui tait plus lev comparativement aux valuations des autres tests ce qui pouvait sugg rer une moins bonne sp cificit clinique du test 15 Une valuation subs quente r alis e avec des femmes ag
48. sant un tube secondaire de 13 ml ou de 3 ml si le vial original de pr l vement est utilis 10 2 Proc dures analytiques 10 2 1 Pr cautions lors des proc dures e Les acides nucl iques peuvent tre dig r s par des nucl ases qui sont pr sentes sur les surfaces inertes de l environnement ou sur la peau Les surfaces de travail doivent donc tre propres et le port de gant sans poudre est obligatoire e Certains r actifs sont sensibles la lumi re Pri re de consulter les mises en garde du test utilis pour s assurer de prot ger de tels r actifs e Lorsqu une pipette avec multiples canaux est utilis e il est pr f rable d utiliser la m thode de pipetage invers ou reverse pipetting technique Se r f rer au manuel d utilisation de la pipette multi canal pour utiliser cette technique e Les m thodes qui utilisent l amplification g nomique n cessitent des installations qui permettent d viter la contamination pour viter de g n rer des r sultats faussement positifs Le respect des trois zones de travail est important pour ce type de test Amplicor amp HPV test Cervista HPV HR test version manuelle d Abbott RealTime High Risk HPV test alors qu il n est pas requis pour HC2 e Les plateformes enti rement automatis es Cobas 4800 HPV test et Abbott RealTime High Risk HPV test sur m2000 ne n cessitent pas l utilisation des 3 zones de PCR requises pour les m thodes qui ne sont pas enti reme
49. ser sur la base d un programme provincial Les tests VPH HR ne peuvent tre consid r s pour le d pistage primaire du cancer du col que s ils ont subi une valuation pr cise voir section 4 4 dont les param tres ont t labor s par un groupe d expert international r cemment 18 Les tests actuellement approuv s par Sant Canada voir section 4 3 qui r pondent ces crit res pour la finalit du d pistage primaire du cancer du col ut rin sont les tests Hybrid Capture 2 High risk HPV DNA test HC2 4 17 le Cobas 4800 HPV test de la compagnie Roche Diagnostics 6 14 le Cervista HPV HR test de la compagnie Hologic 2 et l Abbott RealTime High Risk HPV test de la compagnie Abbott Molecular 5 Le triage des femmes avec une cytologie ACSI au Qu bec La d tection des VPH HR dans des sp cimens du col ut rin est indiqu e au Qu bec pour le triage des patientes de trente ans et plus ayant un frottis cytologique du col ut rin d montrant des alt rations cellulaires de signification ind termin e ACSI niveau d vidence Al mieux connu sous l acronyme anglais ASC US atypical squamous cells of undetermined significance 11 La sensibilit des tests de d tection des VPH HR par le test HC2 pour le d pistage des l sions de haut grade NIC2 3 et de cancer du col ut rin pour les femmes ayant une cytologie ACSI s l ve 93 96 98 26 29 En comparaison une cytologie de contr le apr s une premi re cy
50. tologie d montrant une ACSI a une sensibilit pour d tecter les l sions de haut grade et de cancer de 67 85 96 Les femmes ayant une cytologie ACSI mais dont le r sultat du test est n gatif ne sont pas porteuses de l sions significatives du col ut rin 29 Le taux de patients orient es en colposcopie et ayant une cytologie ACSI tri e avec un test VPH HR est de 56 ce qui vite une colposcopie pour pr s de la moiti des patientes La valeur pr dictive positive du test de d tection de VPH HR est de 20 et la valeur pr dictive n gative dans ce contexte est de 99 Le triage par VPH HR permet donc d viter pour ces femmes un examen invasif et co teux 29 Cette indication des tests VPH HR s applique galement aux femmes immunod prim es 31 Le suivi post colposcopie des patientes dont le test VPH HR est positif Les patientes pour qui une l sion est identifi e en colposcopie sont valu es et suivies selon les lignes directrices en vigueur pour le traitement des l sions du col peu importe le r sultat du test VPH Les patientes dont le test VPH HR est positif avec ACSI et pour qui la colposcopie n a pas identifi e de l sion du col peuvent tre suivies avec l aide d une cytologie de contr le combin e Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 29 de 33 un test VPH HR douze mois niveau d vidence BII
51. tr les n gatifs NC en triplicata avec un CV lt 25 Si le CV est gt 25 956 recalculer le CV en liminant la valeur la plus d viante Si le CV reste Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 14 de 33 gt 25 96 le test n est pas valide Si le CV est 25 96 le test est valide Sinon il faut recommencer la technique au complet e La moyenne des NC doit tre gt 10 et lt 250 RLUs relative light units sinon le test n est pas valide et doit tre repris e Le ratio de la moyenne des PC NC doit tre gt 2 0 et 15 0 sinon le test n est pas valide et doit tre repris e Un contr le de qualit VPH bas risque QC1 LR dont le ratio doit se situer entre 0 001 et 0 999 e Un contr le de qualit VPH haut risque QC1 HR dont le ratio doit se situer entre 2 0 et 8 0 10 PROC DURE 10 1 Traitement des sp cimens 10 1 1 Sp cimen soumis dans le PreservCyt 10 1 1 1 Pour le test HC2 Le traitement de 4 ml de PreservCyt permet de r aliser 2 tests de HC2 par chantillon Le volume minimal traiter de milieu de cytologie liquide est de 4 ml par chantillon Agiter vigoureusement le vial contenant le liquide de cytologie pour bien resuspendre les cellules Utiliser la proc dure d crite dans la trousse du Sample Conversion Kit de Qiagen pour traiter l chantillon
52. usqu ce que la ligne noire du c t du couvercle soit gauche de la ligne noire du couvercle e chantillon peut tre transport au laboratoire une temp rature de 2 C 30 C e Le PreservCyt sans chantillon peut tre conserv la temp rature de la pi ce 6 2 2 Le milieu pour cytologie en milieu liquide SurePath amp Preservative Fluid SurePath amp de la compagnie Becton Dickinson e Ce milieu est inclus avec une cytobrosse dans le SurePath special collection kit e Ce milieu peut tre utilis pour HC2 amp Amplicor amp HPV test Cobas 4800 HPV test et Abbott RealTime High Risk HPV test en voie d acceptation par Sant Canada e Apr s le pr l vement agiter la cytobrosse dans le milieu briser le manche de la cytobrosse pour d poser la t te de la cytobrosse dans le vial et fermer le vial e Pour le test Amplicor amp HPV test le sp cimen doit tre entrepos une temp rature de 2 C 8 C dans les 8 heures suivant le pr l vement Si ce d lai de 8 heures est Guide de pratique pour les analyses de laboratoire en lien avec les ITSS 5 ao t 2013 D tection du virus du papillome humain haut risque Page 11 de 33 d pass le sp cimen doit tre transport au laboratoire une temp rature de 2 C 8 C Pour les tests HC2 Abbott RealTime High Risk HPV test et Cobas 4800 HPV test le sp cimen peut tre transport au laboratoire une temp rature entre 2 C et 30
53. uvent masquer le changement de couleur lors de l addition du r actif de d naturation et des sondes lors du test HC2 Ce ph nom ne n interf rera pas avec les valeurs finales obtenues pour la r action et lues sur le luminom tre Certains sp cimens peuvent contenir des inhibiteurs des polym rases de l ADN Les tests de d tection de VPH HR qui utilisent une m thode d amplification g nomique ont incorpor un contr le cellulaire permettant l amplification d un g ne humain Un r sultat positif pour la d tection de s quences humaines d montre que la pr sence d inhibiteurs n interf re pas avec la d tection de VPH HR gt Un r sultat n gatif pour la d tection de s quences humaines sugg re la pr sence d inhibiteurs ou une faible quantit de cellules Une quantit de sang sup rieure 1 5 dans la solution PreservCyt amp peut g n rer des r sultats faussement n gatifs avec le Cobas 4800 HPV test De par ce fait il est sugg rer de ne pas traiter les chantillons pr sentant une couleur marron fonc ou contenant grossi rement du sang lorsque contenu dans du PreservCyt 6 2 Milieux de Transport pour les sp cimens voir annexe 5 6 2 1 Le milieu pour cytologie en milieu liquide PreservCyt amp de la compagnie Hologic e Milieu qui peut tre utilis pour tous les tests mentionn s dans ce protocole e Apr s le pr l vement agiter la cytobrosse dans ce milieu jeter la cytobrosse et fermer le vial j
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