FIDIS™ Rheuma - RF
Contents
1. M thodes de confirmation en cas de r sultats discordants ELISA CLB pour la sp cificit humaine et POLYARTITRE Fumouze bas e sur une m thode d h magglutination pour la sp cificit animale L tude a port sur 223 chantillons 81 chantillons associ s la pr sence de pathologies rhumatismales 64 chantillons provenant d individus sains 78 chantillons pr sentant des marqueurs biologiques susceptibles de provoquer des interf rences cryoglobulin mie hypergammaglobulin mie immunoglobulines monoclonales IgG et IgM compl ment complexes immuns R sultats Sp cificit humaine Positifs ELISA Positifs N gatifs po 127 Sp cificit animale FIDIS Positifs FIDIS N gatifs ELISA Positifs N gatifs Performances sur la population tudi e N gatifs Sensibilit relative Sp cificit Sp cificit Concordance antig nique relative humaine animale animale Analyse des r sultats discordants 3 223 ELISA CLB ou H magl R sultat ELISA FIDIS s Theradac sang Sp cificit antig nique Sp cificit s associ es positif Fra post imite rumaine Les 3 r sultats concernent des chantillons en limite de positivit ce qui tend a engendrer des discordances qui restent n gligeables n gatif Mode de d termination du seuil de positivit Estim partir des 142 chantillons issus des popul2. BOOSTER software and can be printed for each assay LIMITATION Hemolytic lipemic icteric samples or samples with abnormal concentration of IgG and or complement levels or samples with rheumatoid factor may confound the results of this assay The serums from Immunodeficient patients will give a no valid result QUALITY CONTROL It is recommended to use internally or externally sourced control material for the different specificities Peradi Cat n HM050 contains human and animal antibodies directed against human specific IgM isotype Rheumatoid Factor RF This material is to be assayed in the same manner as the unknown samples Product Insert FIDIS Rheuma RF MX103 Page 10 12 CHARACTERISTICS AND PERFORMANCES OF THE TEST CORRELATION The performances of FIDIS Rheuma RF lyophilized form were assessed on a population of 265 samples and compared to the performances of FIDIS Rheuma RF liquid form A linear regression analysis of the two products showed that both are equivalent FIDIS RHEUMA Correlation between lyophilized and liquid forms human RF Parameter Results IU mL for lyophilized form y 0 8964x 0 5321 R 0 9565 Results IU mL for liquid form ADIS RHEUMA Correlation between lyophilized and liquid forms animal RF Parameter Results IU mL for lyophilized form 100 200 300 400 500 600 700 Results IU mL for liquid form REPRODUCIBILITY PRECIS
3. International Reference 64 2 1 British Standard for Rheumatoid Arthritis ADDITIONAL MATERIAL NOT SUPPLIED Precision pipettes capable of accurately delivering SuL to 1000uL Multichannel Pipettes or dispensers capable of accurately delivering 40uL to 300uL or 5uL to 2mL Vortex mixer Laboratory timer to monitor incubation steps Ultrasonic bath Absorbent towel Serological pipettes Microplate sealing films STABILITY AND STORAGE Store reagents in their original packaging at 2 C to 8 C Do not freeze reagents Do not use kits beyond the expiration date After use store all components immediately back at 2 C to 8 C CAUTION Reagents in solution contain less of 0 1 w v sodium azide and 0 02 w v of Proclin 300 Do not eat and avoid contact with skin and eyes Azide can form explosive mixtures in copper or lead piping Rinse thoroughly after flushing Avoid to use reagents if signs of contamination or other visible changes occur The FIDIS Rheuma RF e has been developed according to CE Directives 67 548 EEC and 1999 45 EC regarding classification packaging and labelling of dangerous preparations The FIDIS Rheuma RF has been optimized for use as described in this procedure Do not substitute other manufacturer reagents Dilution or alteration of these reagents may also alter the performance of the test Follow thoroughly the test
4. des sp cificit s antig niques Le coffret FIDIS Rheuma RF e peut tre utilis avec l automate de dilution r partition CARIST Notice technique FIDIS Rheuma RF MX103 Page 1 12 CHANTILLONS Utiliser du s rum Eviter d utiliser des s rums lip miques ou h molys s ainsi que des pr l vements congel s et d congel s plus d une fois Si le dosage n est pas effectu imm diatement les chantillons devront tre conserv s r frig r s entre 2C et 8 C pendant 5 jours maximum Au del ils devront tre congel s 20 C Afin de limiter toute fixation non sp cifique il est conseill de centrifuger et de filtrer les chantillons congel s depuis plus de 6 mois et troubles COMPOSITION DU COFFRET Plaque de 96 micropuits membrane filtrante munie d un couvercle 1 plaque Flacon A de microsph res color es sensibilis es par les antig nes fragments Fc d immunoglobulines humaines ou animales Qsp 6 ml MICROSPHERES K Lyophilis es reconstituer avec le tampon D Flacon B2 tampon de dilution des chantillons flacon blanc 2x115ml Pr t l emploi Flacon de calibrateur titr en unit internationale pour les sp cificit s mesur es CAL Pr t l emploi 1x1 5 ml Les titres sont indiqu s sur l tiquette du flacon Flacon de contr le positif donnant une r activit standardis e et constituant un contr le de r action destin v rifier l
5. films pour microplaque Un m me puits ne peut tre r utilis plusieurs fois Afin d viter toute erreur dans ce sens il est conseill d identifier les puits d j usag s voir exemple 2 ci apr s c Programmation du protocole d analyses au niveau du FIDIS Se reporter au manuel d utilisation FIDIS Programmation d un batch Exemple 1 la plaque est totalement vierge l attribution des puits d bute en o n q m I Exemple 2 16 puits ont d j t utilis s l attribution des puits d bute en MODE OPERATOIRE 1 Distribution des microsph res Prot ger les puits non utilis s avec des films plastiques si n cessaire D poser 50ul de microspheres dans chaque puits apr s avoir pr alablement agit le flacon vigoureusement au vortex pendant 20s REMARQUE Dans le cadre de l utilisation de l automate CARIS une sonication des microsph res de 5 minutes est pr conis e Dans le cadre de l utilisation d un automate de dilution r partition les tapes 1 et 2 doivent tre invers es gt distribuer le s rum dilu puis les microsph res 2 Incubation des chantillons D poser 100ul de tampon de dilution B2 pour le blanc r actif D poser 100u de contr les dilu s de calibrateur pr t l emploi et d chantillons dilu s Laisser incuber 30 minutes a temp rature ambiante sans agitation en recouvrant la plaque et en vitant de la
6. is not run immediately the samples should be stored at 2 C 8 C for a maximum of 5 days for longer storage frozen undiluted samples at 20 C To avoid non specific binding it is recommended to centrifuge and filter the cloudy samples or samples frozen for more than 6 months REAGENTS SUPPLIED 96 wells microplate with filtering membrane and lid 1 plate Vial A of color coded microsphere set sensitized by the Fc fragment of Human or Animal Immunoglobulins antigen s Sq 6 mL Lyophilized to be reconstituted with the buffer named D MICROSPHERES Vial B2 of sample dilution buffer white vial Vial of calibrator tittered in international unit for the specificities to be measured cat ee CaL a smi Each titer is printed on the vial label Vial of positive control concentrated This control has a standard reactivity which provides evidence of the proper reagents activity and proper assay performance eq A 1 x 250 uL To be diluted Expected values are printed on the vial label Vial of negative control concentrate To be diluted CONTROL g 1 x 250 uL Vial of anti human IgM coupled to phycoerythrin Ready to use CONJ Vial C2 of washing buffer black vial Ready to use BUF WASH 1 x 100 mL Vial D of reconstitution buffer for the microsphere Ready to use Calibrator titers are printed on the vial label and are expressed in international units per ml lU ml and standardized against the
7. procedure to insure optimal performance Calibrators and controls are from human origin The human sera used in the preparation of these products were tested and found non reactive for antibodies to HIV 1 HIV 2 anti HCV and Hepatitis B antigen Because no test method can offer complete assurance that infectious agents are absent handle as if capable of transmitting infectious diseases A FIDIS Rheuma RF cannot be used in multi batch with the other FIDIS kits TEST SET UP FIDIS Washer Check the tubing connecting the pump to the stand and the manometer setting wheel completely closed Using FIDIS Analyzer and MLX BOOSTER Software See the Users Manual provided with the FIDIS Instrument for detailed instructions on running the equipment and for calculation For additional information and or trouble shooting problems please contact subsidiaries or distributors 1 Start the run as described in the User s Manual NOTE The FIDIS takes 30 minutes to warm up after being turned on A new warm up Is necessary after 4 hours of system inactivity 2 Calibration and controls are described in the User s Manual Calibration and controls should be routinely performed once per month and each time a new lot of Sheath fluid reagent is used in order to insure optimal instrument performance Calibration should also be performed when the temperature is out of Product Insert FIDIS Rheuma RF MX103 Pa
8. rapidement le vide en ouvrant le robinet casse vide Refermer le robinet casse vide e Retirer la microplaque du laveur et liminer le tampon r siduel en tapant fortement sa base sur un papier absorbant f Distribuer 100ul de tampon de dilution B2 et proc der l analyse de la microplaque En cas de lecture diff r e la plaque devra tre analys e dans l heure qui suit l ajout de la solution B2 Durant cette p riode la plaque doit tre conserv e temp rature ambiante et prot g e de la lumi re directe 6 Analyse L effectuer conform ment au manuel d utilisation FIDIS et MLX BOOSTER CRITERES DE VALIDATION DES RESULTATS Le calibrateur les contr les positif et n gatif doivent tre testes dans chaque s rie d essai pour s assurer que tous les r actifs et proc dures ont t ex cut s correctement Afin de valider les r sultats tous les crit res num r s ci dessous doivent tre rencontr s En cas de non conformit d un de ces crit res le test devra tre consid r comme non valide et l analyse devra tre refaite a La valeur du contr le positif doit tre comprise dans les limites de celles indiqu es sur les tiquettes des flacons correspondants b La valeur du contr le n gatif doit tre inf rieure a 25 Ul ml La solution de microspheres contient des billes t moins permettant de v rifier la pr sence de s rum dans les puits ainsi que le bon d
9. roulement du test Un puits pr sentant un signal r ponse non conforme sera invalid par le logiciel MLX BOOSTER INTERPRETATION DES RESULTATS Unit s Internationales Ul ml pour les 2 lt 25 Ul ml 25 30 Ul ml gt 30 Ul ml sp cificit s Interpr tation N gatif Positif Les r sultats limites doivent tre contr l s sur un second pr l vement et interpr t s en fonction d examens compl mentaires et du contexte clinique Chaque laboratoire doit tablir et conserver ses propres valeurs de plage normale de r f rence en fonction de la population de patients et d autres facteurs locaux CALCUL DES RESULTATS Les r sultats sont automatiquement calcul s par le logiciel MLX BOOSTER et peuvent tre imprim s pour chaque analyse LIMITES Les s rums h molys s lip miques ict riques pr sentant des taux lev s en IgG monoclonal des complexes immuns ou des facteurs rhumatoides peuvent entrainer des r sultats faussement positifs Les s rums de patients immunod prim s donneront un r sultat non valide CONTROLE DE QUALITE ll est conseill d utiliser des contr les internes ou externes pour les diff rentes sp cificit s Le contr le multiparam trique Immuno Trol III tes r f HM050 renferme des anticorps humains dirig s contre les Facteurs Rhumatoides RF d isotype IgM de sp cificit humaine et animale Il est a tester de fa on identique a celle des chantillons
10. the plate and incubate 30 minutes at room temperature away from direct sunlight and without shaking 3 Wash step 1 Wash the plate 2 times with washing buffer C2 using filtration unit a Remove the microplate lid verify if the vacuum break valve is closed and place it on the washer b Start the pump Stop it when the whole incubation liquid has been removed in totality and open the vacuum break valve Close the vacuum break valve c Dispense 300UL of washing buffer C2 in all the used wells Product Insert FIDIS Rheuma RF MX103 Page 9 12 d Start the pump Stop it when the whole buffer has been removed and open the vacuum break valve Close the vacuum break valve e Dispense 300uL of washing buffer C2 in all the used wells f Start the pump Stop it after 5 additional seconds when all the buffer has been removed and open the vacuum break valve Close the vacuum break valve g Remove the microplate from the washer and remove the residual buffer by tapping vigorously the plate 10 times on an absorbent towel h Place again the microplate on the washer and start the pump for 5 seconds Stop it and quickly open the vacuum break valve i Remove the microplate from the washer and remove the residual buffer by blotting vigorously the plate on an absorbent towel j Place the plate on a totally dry surface before starting the conjugate incubation 4 Incubation of the conjugate Dispense 100u
11. CLB or H magl Associated specificities Antigenic specificity UFR bordering postive WEY human positive ree Fin The 3 results concern samples in limit of positivity which can lead to no significant discrepancies Method for determining threshold values Calculated on the 142 samples from blood donors and biological interferences populations and according standard 64 2 The positive threshold 30IU ml corresponds to the 99 5 percentile of the values distribution for the 2 specificities The negative threshold 25IU ml corresponds to the 96 5 percentile for the two specificities Between these thresholds results are considered borderline Product Insert FIDIS Rheuma RF MX103 Page 11 12 BIBLIOGRAPHY WILLIAMS DG ARNETT FC et al Rheumatoid arthritis autoimmunity in rheumatoid arthritis The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for In Klippel JH Dieppe PA eds Rheumatology 1 edition St louis classification of rheumatoid arthritis 1994 91 9 11 Arthritis Rheum 1988 31 315 324 SHMERLING RH DELBANCO TL MOORE TT et al The rheumatoid factor an analysis of clinical utility Rheumatoid Factors Am J Med 1991 91 528 534 Clin Biochem 1993 26 75 84 BORRETZEN M et al CORPER AL et al Rheumatoid Factors Structure of human IgM rheumatoid factor Fab bound to its In Autoantibodies JB Peter and Y Schoenfeld Eds Elsevier Uan JAN EC ENEAS lt a Mo
12. ION LYOPHILIZED FORM 10 tests in the same run 5 tests in 5 different runs oan e em 6 08 o Fah a 28 201 99 Fah 407 20 Fra a 56 Fra 145 FRa 443 4 Antigenic specificity N N L O1 O 143 E 154 50 INDICATION OF THE DIAGNOSTIC VALUE IN COMPARISON WITH OTHER METHODS O IN O1 O FIDIS Rheuma RF has been compared to FR LISA kit based on ELISA method for the detection of rheumatoid factors from human and animal origin Confirmation methods for discrepant results ELISA CLB for human specificity and POLYARTITRE Fumouze based on haemagglutination method for animal specificity The study was performed on 81 samples related to rheumatoid diseases 64 samples from blood donors gt 78 samples selected for their potential biological interferences cryoglobulinemia hypergammaglobulinemia IgG and IgM monoclonal immunoglobulins complement immune complexes Results a ELISA Hyman SPecinely Positive Negative Positive 95 1 a ELISA animal SPECIICIEY Positive Negative FIDIS gt Negative Performances for the selected population Relative Relative Relative sensitivity specificity accuracy e e oe specificity Anma 98 2 99 4 99 1 specificity Discrepant results analysis 3 223 FIDIS ELISA result q PF Theradag positive Blood ES limit ELISA
13. L of ready to use conjugate in each well used Cover the plate and incubate 30 minutes at room temperature away from direct sunlight and without shaking The incubation time starts after the conjugate has been added to all wells If this timing is not followed the results might be erroneous Note the conjugate is photosensitive gt After using close the vial carefully 5 Wash step 2 Wash the plate using the filtration unit on 1 cycle with dilution buffer B2 Use two different reagent reservoirs for the 2 washing steps Either clean and dry correctly the reservoir between both wash steps avoid to mix both B2 and C2 buffers a Remove the microplate lid verify that the vacuum break valve is closed and place it on the washer b Start the pump Stop it when the whole incubation liquid has been removed and open the vacuum break valve Close the vacuum break valve c Dispense 100uL of dilution buffer B2 in all the used wells d Start the pump Stop it when the whole buffer has been removed and open the vacuum break valve Close the vacuum break valve e Remove the microplate from the washer and remove the residual buffer by blotting the plate on an absorbent towel f Dispense 100uL of dilution buffer B2 in all the used wells Place the plate on a totally dry surface at room temperature The reading must be doing in the hour following adding the solution B2 During this time kee
14. N DU TEST Pr paration de l unit de filtration FIDIS Verifier les tuyaux reliant la pompe au support et le r glage du manometre molette totalement ferm e Utilisation du syst me d analyse FIDIS et du logiciel MLX BOOSTER Se reporter au Manuel d utilisation fourni avec le syst me FIDIS pour effectuer les tapes de mise en route et de calcul Pour toutes informations compl mentaires et ou r solution de probl mes veuillez prendre contact aupr s de resi ou de votre distributeur 1 Commencer la s rie comme indiqu e dans le Manuel d utilisation N B L appareil met 30 minutes pour chauffer apr s lavoir allum Un nouveau pr chauffage est n cessaire apr s 4 heures d inactivit du syst me 2 Les tapes de calibration et de contr les sont d crites dans le Manuel d utilisation Ces 2 tapes devront tre ex cut es r guli rement 1 fois mois et chaque nouveau lot de Sheath fluid afin d assurer une performance optimale de lappareil L tape de Notice technique FIDIS Rheuma RF MX103 Page 2 12 calibration doit galement tre effectu e si la temp rature indiqu e sur l cran de la s rie du lot est en dehors de celle param tr e 3 Programmer un lot ou une s rie de lots multiples sur FIDIS comme indiqu dans le Manuel d utilisation 4 Placer la microplaque dans le support de plaques du syst me FIDIS comme indiqu dans le Manuel d utilisation 5 Effec
15. Notice technique FIDIS Rheuma RF MX103 Page 4 12 CARACTERISTIQUES ET PERFORMANCES DU TEST CORRELATION Les performances du coffret FIDIS Rheuma 23 sous sa nouvelle forme lyophilis e ont t compar es celles de l ancien coffret FIDIS Rheuma format liquide sur une population de 265 chantillons L analyse de la courbe de regression lin aire montre que les deux produits sont equivalents ADIS RHEUMA Corr lation entre le format liquide et le format lyophilis Param tre FR humain y 0 8964x 0 5321 R 0 9565 R sultats Ul ml en format lyophilis 400 500 R sultat Ul ml en format liquide FIDIS RHEUMA Corr lation entre le format liquide et le format lyophilis Param tre FR animal R sultats Ul ml en format lyophilis RES y 1 3439x 3 2424 Le R 0 939 m 100 200 300 400 500 600 700 R sultat Ul mI en format liquide Inter essais 5 tests dans 5 essais diff rents Intra essai 10 tests dans le m me essai Sp cificit Valeur Valeur ue nique moyenne CV moyenne CV ii Ul ml Ul ml 65 08 201 99 492 127 154 504 SENSIBILITE SPECIFICITE CONCORDANCE PAR RAPPORT AUX AUTRES METHODES iN O N N O FIDIS Rheuma RF a t compar au coffret FR LISA Treroday bas sur une m thode ELISA pour la d tection des facteurs rhumatoides d origine humaine et animale
16. Te Theradiag FIDIS Rheuma RF MX 103 DEFINITION Le coffret FIDIS Rheuma RF constitue une m thode d identification quantitative d autoanticorps sur supports particulaires utilisant un syst me de d tection par cytom trie de flux Il permet la recherche simultan e des facteurs rhumato des des classes IgM dirig s contre les d terminants Fc d Immunoglobulines G humaines ou animales VALEUR DIAGNOSTIQUE Les facteurs rhumato des constituent une population d autoanticorps r agissant avec diff rents sites antig niques situ s sur le fragment Fc des immunoglobulines de classe G Ces d terminants antig niques peuvent tre sp cifiques des IgG humaines ou communs aux IgG de diverses esp ces animales Les facteurs rhumatoides peuvent appartenir a toutes les classes d immunoglobulines cependant les FR de classe IgM sont majoritaires Les facteurs rhumatoides sont essentiellement associ s des pathologies rhumatismales inflammatoires Ils sont pr sents avec une fr quence lev e dans le s rum de patients atteints de polyarthrite rhumato de La sp cificit des FR pour la polyarthrite rhumato de est augment e par la constatation d une positivit associ e pour les immunoglobulines G d origine humaine et pour les immunoglobulines G de lapin Les m thodes de diagnostic commun ment utilis es sont les tests d agglutination au latex qui identifient les FR de classe IgM dirig s contre les d ter
17. activit des r actifs et le bon fonctionnement de l essai CONTROL 1 x 250 ul diluer Les valeurs attendues sont indiqu es sur l tiquette du flacon Flacon de contr le n gatif CONTROL 1 x 250ul Flacon de conjugu anti IgM humaine coupl la phyco rythrine CONJ laM 1x12ml Pr t emplo CONS ig Flacon C2 de tampon de lavage flacon noir Pr t a emploi WASH LEA Flacon D de tampon de reconstitution des microsph res 1 x6ml Pr t l emploi ee Les titres du calibrateur sont indiqu s sur l tiquette du flacon et sont exprim s en unit s internationales Ul ml standardis s par rapport a la r f rence internationale 64 2 1 British Standard for Rheumatoid Arthritis MATERIEL NECESSAIRE NON FOURNI Pipettes de pr cision capables de d livrer pr cis ment de 5ul a 1000 ul Pipette multicanaux ou distributeur r p titif capables de d livrer pr cis ment de 40ul 300u ou Sul 2 ml Agjitateur Chronometre Sonicateur Papier absorbant Pipettes s rologiques Films pour microplaques STABILITE ET CONDITIONS DE CONSERVATION Tous les r actifs doivent tre conserv s entre 2 C et 8 C dans leur conditionnement d origine Ne pas congeler les r actifs Ne pas utiliser un coffret dont les dates de p remption sont d pass es Remettre imm diatement entre 2 C et 8 C les r actifs non utilis s PRECAUTIONS D EMPLOI Les r actifs
18. against human antigen determinants and the Waaler Rose haemagglutination test to identify the IgM class RF directed against rabbit antigen determinants However EIA methods offer increased sensitivity and specificity as well as the advantage of a simultaneous determination of both specificities Apart from rheumatic pathologies RF might appear in specific bacterial and viral infectious diseases or in inflammatory pathologies The prevalence is then ca 2 the titer is low and the reactivity directed against human IgG solely In a normal population the RF prevalence is of 2 to 5 Ag June 2013 ASSAY PRINCIPLE FIDIS Rheuma RF e kits are based on the use of distinct uniform size color coded microspheres and a benchtop flow cytometer interfaced to digital signal processing hardware and software A red diode laser beam in the flow cytometer classifies each set of microspheres on the basis of its unique fluorescence intensity red to orange thus identifying which analyte is being tested At the same time a green laser beam illuminates the external second molecule fluorescence to quantify the reaction related to the specific analyte Each antigen required for the assay is covalently coupled to an individual set of microspheres through its surface functional groups The different antigen coupled microspheres are mixed together constituting the final microsphere reagent FIDIS Rheuma RF lt gt kits a
19. arried out in a column Do not leave empty wells The same microplate can be used for more than one serie of tests if unused wells are protected by microplate sealing film Any single well can only be used once To avoid any error in using a well more than once identify the used wells with a marker See example 2 below c Programming of the test protocol on the FIDIS Refer to the FIDIS users manual Creating a batch Example 1 The microplate is totally blank no well has yet been used Use A1 as the 1 well A B c D E F G H 99999999 000000 90900909 99999999 Example 2 16 wells have already been used Use A3 as the 1st well 1 2 10 11 12 3 4 5 6 7 8 9 ASSAY PROCEDURE 1 Microspheres dispensing Before to start the assay and if it is necessary protect the unused wells with a microplate sealing film Vortex the microspheres reagent vigorously for 20s and dispense 50uL in each well to be used PLEASE NOTE If CARIS is used the microspheres should be sonicated for 5 minutes If a dispensing diluting device is used like CARIS the procedure steps 1 and 2 should be reversed gt dispense diluted sera in first and then dispense microspheres 2 Addition and Incubation of the samples Dispense 100uL of sample dilution buffer B2 for reagent blank Dispense 100uL of prediluted controls of ready to use calibrator and of prediluted samples Cover
20. ations individus sains et interf rences biologiques et par rapport au standard 64 2 Le seuil de positivit 30UI ml correspond au 99 5 percentile de la distribution des valeurs pour les 2 sp cificit s Le seuil de n gativit 25Ul ml correspond au 96 5 percentile pour les 2 sp cificit s Entre ces 2 seuils les r sultats sont consid r s limites me Notice technique FIDIS Rheuma RF MX103 Page 5 12 BIBLIOGRAPHIE WILLIAMS DG Rheumatoid arthritis autoimmunity in rheumatoid arthritis In Klippel JH Dieppe PA eds Rheumatology 1 edition St louis 1994 91 9 11 SHMERLING RH DELBANCO TL The rheumatoid factor an analysis of clinical utility Am J Med 1991 91 528 534 BORRETZEN M etal Rheumatoid Factors ARNETT FC etal The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for classification of rheumatoid arthritis Arthritis Rheum 1988 31 315 324 MOORE TT et al Rheumatoid Factors Clin Biochem 1993 26 75 84 CORPER AL et al Structure of human IgM rheumatoid factor Fab bound to its autoantigen IgG Fc reveals a novel topology of antibody antigen interaction Nat Struct Biol 1997 May 4 5 374 81 In Autoantibodies JB Peter and Y Schoenfeld Eds Elsevier Sciences B V 1996 706 715 SCHEMA RECAPITULATIF DU MODE OPERATOIRE UANTITE A Q REACTIFS CONDITIONS D INCUBATIONS DISTRIBUER D poser 50ul de microspheres dans chaque puits Tampon de
21. covalente une cat gorie de microsph res color es Les diff rentes cat gories sont ensuite m lang es pour constituer le r actif final Support des r actions immunologiques sp cifiques avec les differents autoanticorps recherch s Le coffret FIDIS Rheuma RF permet de d tecter les facteurs rhumato des des classes IgM dirig s contre les d terminants Fe d Immunoglobulines G humaines ou animales Le test est r alis dans une microplaque de filtration de 96 puits e Au cours dune premiere etape les echantillons dilu s des patients a tester sont incub s en pr sence des microspheres sensibilis es par des Immunoglobulines G humaines ou animales Les anticorps pr sents dans le s rum des patients se fixent alors sur les antigenes immobilis s a la surface des microspheres e Une tape de lavage par filtration permet d liminer les elements non fix s e Un anticorps secondaire conjugu la phyco rythrine dirig contre les immunoglobulines humaines d isotype IgM permet de r v ler les anticorps pr c demment captur s e Une tape de lavage final stoppe la r action et limine les anticorps non li s e La r action est alors mesur e par le cytometre en flux qui identifie chaque type de microsph res et mesure la fluorescence moyenne des conjugu s fix s e Un syst me de calibration permet par interpolation de d finir la valeur de l chantillon en unit internationale Ul ml sur chacune
22. dilution B2 blanc r actif Contr le n gatif dilu en tampon de dilution B2 30 min Temp rature ambiante Incubation des chantillons Contr le positif dilu en tampon de dilution B2 Calibrateur pr t l emploi en double Echantillons dilu s en tampon de dilution B2 Laver 2 fois au tampon de lavage C2 300ul puits Incubation du Conjugu anti IgM 30 min 100 conjugu Pr t l emploi Temp rature ambiante Laver 1 fois avec du tampon de dilution B2 100ul puits Ajouter 100yl puits de tampon de dilution B2 Lecture et analyser par insertion de la plaque dans le cytom tre de flux En cas de lecture diff r e la plaque devra tre analys e dans l heure qui suit l ajout de la solution B2 Durant cette p riode la plaque doit tre conserv e temp rature ambiante et prot g e de la lumi re directe LEGENDES DES SYMBOLES 8T Risque Biologique Conserver a Num ro de catalogue F9 3 Pour le diagnostic in vitro LOT Num ro de lot uniquement Lire le manuel d utilisation D claration de conformit CE CE Nombre de tests A utiliser avant Lea Microplaque CONTROL Contr le n gatif MICROSPHERES Microspheres DIL SPE Diluant chantillon CONTROL Ea Contr le positif CONJ IgM Conjugu IgM Tampon de reconstitution des Calibrateur BUF WASH Tampon de lavage MICROSPHERES miopie tes 659 Test FIDIS CONT NaN Contient de l azide d
23. e sodiun RCNS A reconstituer Fabricant CE 4 6 bld de Beaubourg CS 90138 CROISSY BEAUBOURG T l 01 64 62 10 12 E mail support theradiag com 77435 MARNE LA VALLEE CX2 Fax 01 64 62 09 66 Internet www theradiag com France Notice technique FIDIS Rheuma RF MX103 Page 6 12 Te Theradiag FIDIS Rheuma RF MX 103 INTENDED USE The FIDIS Rheuma RF esi is a quantitative homogeneous fluorescent based microparticles immunoassay using flow cytometry readings It is designed for the simultaneous detection of IgM class rheumatoid factors directed against Fc determinants from human or animal G Immunoglobulins SUMMARY AND EXPLANATION Rheumatoid factors RF form a population of autoantibodies reacting with the various antigenic sites located on the Fc fragment of the IgG class immunoglobulins These antigen determinants may be specific to human IgG or common to the IgG of various animal species Rheumatoid factors may belong to any immunoglobulin class but the IgM class is dominant Rheumatoid factors are essentially associated to inflammatory rheumatic pathologies The frequency of their presence is increased in the serum of patients suffering from rheumatoid polyarthritis RF specificity is extended due to the fact that there is an associated positivity between human IgG and rabbit IgG Routinely the diagnostic methods used are latex agglutination test to identify IgM class RF directed
24. en solutions contiennent comme agent de conservation de l azide de sodium une concentration lt 0 1 w v ou du ProClin 300 a 0 02 w v Ne pas avaler et viter tout contact avec la peau et les muqueuses L azide de sodium peut former des m langes explosifs lors de son limination dans les canalisations de Cuivre ou de plomb Rincer abondamment lors de telles eliminations Ne pas utiliser les r actifs si des signes de contaminations ou de modifications apparaissent Le coffret FIDIS Rheuma RF 5 a t labor dans le respect des Directives europ ennes 67 548 CEE et 1999 45 CE en ce qui concerne la classification l emballage et l tiquetage des pr parations dangereuses FIDIS Rheuma RF 5 a t optimis pour les conditions op ratoires pr cis es dans cette notice Le non respect des dilutions de la pr paration des r actifs du protocole ou la substitution d un r actif par un autre produit peuvent affecter les performances finales du test Les contr les et le calibrateur sont d origine humaine Pour chacun les recherches d anticorps anti HIV 1 et 2 anti HCV et d antig nes de l h patite B se sont r v l es n gatives S agissant de produits potentiellement infectieux il est toutefois n cessaire de les manipuler avec les pr cautions d usage A Le coffret FIDIS Rheuma RF ne peut pas tre utilis en multi batch avec les autres coffrets de la gamme FIDIS PREPARATIO
25. ge 8 12 the determined range shown on the run batch screen 3 Programming a batch or a multibatch of test protocol on the FIDIS as described in the User s Manual 4 Load the microplate into the plate holder of the FIDIS as described in the User s Manual 5 Analyze the results according the User s Manual 6 When finished for the day perform the sanitizing and soak operations prior to turning the Analyzer off according to the shutting down procedure described in the Users Manual Reagents Preparation Remove the individual components from storage allow them to warm up to room temperature 18 C to 25 C and mix them well 1 Preparation of samples and controls Dilute the samples and controls at 1 201 in dilution buffer B2 Ex 10uL sample in 2000uL dilution buffer B2 Vortex vigorously 2 Assay configuration Use the work sheet included in the kit to identify the location of the samples a When setting up the test systematically take into account the following well requirements gt See examples below 1 reagent blank well 1 well for negative control 1 well for positive control 2 calibrator wells b Calculation of the correct number of wells necessary and their location In the following examples 2 different configurations are described according to the number of wells needed and the availability of unused wells The sample dispensing must be systematically c
26. laisser sous la lumi re directe 3 Lavage 1 Laver la plaque en utilisant l unit de filtration par 2 cycles successifs en tampon de lavage C2 a Retirer le couvercle de la microplaque et la positionner sur l unit de filtration v rifier que le robinet casse vide est en position ferm e b D clencher la pompe D s la disparition totale du liquide arr ter la pompe et supprimer rapidement le vide en ouvrant le robinet casse vide Refermer le robinet casse vide c Distribuer 300ul de tampon de lavage C2 Notice technique FIDIS Rheuma RF MX103 Page 3 12 d D clencher la pompe D s la disparition totale du liquide arr ter la pompe et supprimer rapidement le vide en ouvrant le robinet casse vide Refermer le robinet casse vide e Distribuer 300ul de tampon de lavage C2 f D clencher la pompe Apr s aspiration totale du liquide compter 5 secondes suppl mentaires arr ter la pompe et supprimer rapidement le vide en ouvrant le robinet casse vide Refermer le robinet casse vide g Retirer la microplaque du laveur et liminer le tampon r siduel en tapant fortement sa base 10 fois sur du papier absorbant h Repositionner la plaque sur le laveur et filtrer nouveau 5 secondes Arr ter la pompe et supprimer rapidement le vide en ouvrant le robinet casse vide i Retirer la microplaque du laveur et liminer le tampon r siduel en tapant fo
27. llow the detection of IgM class rheumatoid factors directed against Fc determinants from human or animal G Immunoglobulins The test is performed in a 96 well microplate with a filtering membrane at the bottom of the wells e In the first step the sample is distributed in each well containing the microspheres mixture If this sample contains one or more of the Suspected antibodies this ese antibody ies binds to the corresponding antigen s on the various sets of microspheres e After incubation a wash step using a filtration process removes the unbound antibodies e phycoerythrin labeled anti human IgM conjugate is then added that binds to the previously bound antibodies e A final wash step allows to stop the reaction e The reaction is then directly measured by the flow cytometer which differentiates each set of microspheres according to its fluorescence colour while simultaneously measuring the average fluorescence emitted by the conjugate e A calibration system allows the determination of the titer IU mL of each sample by interpolation for each antigenic specificity The FIDIS Rheuma RF gt could be used with CARIS system diluting and dispensing device Product Insert FIDIS Rheuma RF MX103 Page 7 12 SPECIMEN COLLECTION AND HANDLING The test is performed on serum Lipemic sera should be avoided as well as samples which have been frozen and defrosted more than once Ifthe test
28. minants antig niques humains et la r action d h magglutination de Waaler Rose qui identifie les FR de classe IgM dirig s contre les d terminants antig niques du lapin Cependant les techniques immunoenzymatiques plus sensibles et plus sp cifiques pr sentent l avantage de pouvoir effectuer une d termination simultan e des deux types de sp cificit En dehors des pathologies rhumatismales les FR peuvent appara tre au cours de certaines maladies infectieuses d origine bact rienne ou virale ou au cours de pathologies inflammatoires Leur pr valence est alors de 2 environ Leur taux est faible et leur r activit est dirig e uniquement vers les IgG d origine humaine Dans la population normale la pr valence des FR est de 2 5 Fr Juin 2013 N o pm CS on CS en PRINCIPE DU TEST FIDIS Rheuma RF repose sur l utilisation de microspheres de taille uniforme diff remment color es et d un cytometre en flux interface avec un syst me informatique de digitalisation et de traitement du signal Une diode rouge du cytometre en flux en classant chaque cat gorie de microsph res sur la base de sa fluorescence unique du rouge lorange permet l identification du param tre analys Parall lement un laser excite la fluorescence d un compos secondaire pour quantifier la r action sp cifique qui y est associ e Chaque antig ne n cessaire la r alisation du test est coupl de fa on
29. p the plate at room temperature away from direct sunlight 6 Reading of the test Follow the MLX BOOSTER and FIDIS user s manual Processing batches VALIDATION CRITERIA OF THE RESULTS Calibrator negative and positive controls have to be run with every batch of samples to ensure that all reagents and procedures performed properly In order to validate the results all the criteria listed below must be met Otherwise the test is invalid and must be repeated a The positive controls should show a value within the limits printed on the corresponding vial labels b The negative controls should be less than 25 IU mL The microsphere set contains Internal standard beads allowing to verify the presence of serum in wells as well as the good respect of the test procedure Wells presenting a not corresponding fluorescent signal will be no valid with MLX BOOSTER software INTERPRETATION OF RESULTS International Units IU ml for the 2 lt 25 IU ml 25 30 IU ml gt 30 IU ml specificities Borderline results should be repeated on a second sample and the interpretation of the results should be treated in the frame of additional testing and taking into account the clinical status of the patient Each laboratory should establish and maintain its own references normal range values based on the patient population and other local factors CALCUL OF RESULTS The results are automatically calculated by MLX
30. rtement sa base sur un papier absorbant j Placer ensuite la microplaque sur une surface totalement s che avant de distribuer le conjugu 4 Incubation du conjugu D poser 100ul de conjugu Laisser incuber 30 minutes a temp rature ambiante sans agitation en recouvrant la plaque et en vitant de la placer sous la lumi re directe Le temps d incubation d bute apr s que le conjugu ait t ajout tous les puits Si ce temps nest pas respect les r sultats pourront tre erron s Remarque le conjugu est sensible la lumi re gt Refermer le flacon apr s utilisation 5 Lavage 2 Laver la plaque en utilisant l unit de filtration par 1 cycle en tampon de dilution B2 Utiliser de pr f rence deux r servoirs r actifs distincts pour les lavages 1 et 2 Ou bien nettoyer et s cher correctement le r servoir entre les deux lavages afin de ne pas m langer les deux tampons B2 et C2 a Retirer le couvercle de la microplaque et la positionner sur l unit de filtration v rifier que le robinet casse vide est en position ferm e b D clencher la pompe D s la disparition totale du liquide arr ter la pompe et supprimer rapidement le vide par ouverture du robinet casse vide Refermer le robinet casse vide c Distribuer 100ul de tampon de dilution B2 d D clencher la pompe D s la disparition totale du liquide arr ter la pompe et supprimer
31. tuer l analyse des r sultats comme indiqu dans le Manuel d utilisation 6 la fin de la derni re utilisation journali re de l appareil ex cuter les op rations de lavage et de d sinfection avant d arr ter le syst me d analyse conform ment aux instructions d arr t d crites dans le Manuel d utilisation Pr paration des r actifs Ramener l ensemble des r actifs temp rature ambiante 18 C 25 C avant de les pr parer extemporan ment 1 Pr paration des chantillons et des contr les Diluer les chantillons et les contr les au 1 201 dans le tampon de dilution B2 Exemple 10ul d chantillon dans 2000ul de tampon de dilution B2 Agiter vigoureusement au vortex 2 Definition de la configuration du test Utiliser la feuille de travail contenue dans le coffret pour noter la localisation des chantillons a Pr voir syst matiquement 1 puits blanc r actif 1 puits pour le contr le n gatif 1 puits pour le contr le positif 2 puits calibrateur b D termination du nombre exact de puits n cessaires et de leur attribution Les sch mas qui suivent donnent 2 exemples de configuration selon le nombre de puits n cessaires et la disponibilit en puits vierges Le sens du d p t doit s effectuer syst matiquement par colonne sans intercaler de puits vides Une m me plaque peut tre utilis e au cours de diff rents essais si les puits non utilis s sont prot g s par des
32. um azide Manufacturer e f herad CE 4 6 bld de Beaubourg Read instructions for use Number of tests A CN ep Reconstitute with CS 90138 CROISSY BEAUBOURG Tel 33 0 1 64 62 10 12 E mail support theradiag com 77435 MARNE LA VALLEE CX2 Fax 33 0 1 64 62 09 66 Internet www theradiag com France Product Insert FIDIS Rheuma RF MX103 Page 12 12
33. ver tapered O aninedy amtgan Sciences B V 1996 706 715 Interaction Nat Struct Biol 1997 May 4 5 374 81 SUMMARY OF THE TEST PROCEDURE Dispense 50uL of microspheres reagent in each well to be used INCUBATION VOLUME TO BE DISTRIBUTED REAGENTS CONDITIONS Dilution buffer B2 reagent blank Diluted negative control in dilution buffer B2 Incubation Diluted positive control 30 min of the samples in dilution butter B2 Room temperature Ready to use Calibrator in duplicate Diluted samples in dilution buffer B2 Washing 1 Wash twice in washing buffer C2 300uL well Incubation Ready to use 30 min of the conjugate Anti IgM conjugate Room temperature Washing 2 Wash 1 time in Dilution buffer B2 100uL well Add 100uL well of Dilution buffer B2 and proceed immediately with the reading in FIDIS Instrument Reading See l R The reading must be doing in the hour following adding the solution B2 During this time keep the plate at room temperature away from direct sunlight SYMBOLS USED H Temperature limitation Catalog Number PON Biological risk Y 8 2 T In Vitro Diagnostic Use LO Lot Number Use b C EC Declaration of i Conformity T Microplate Negative control MICROSPHERES Microspheres DIL SPE Specimen diluent CONTROL Positive control CONJ IgM IgM Conjugate Microsphere reconstitution Calibrator Wash Buffer BUF MICROSPHERES ee FIDIS test CONT NaN Contains sodi
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