FideliO® DNA Polymerase
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1. Max DNA Polymerase Pr mix PrimeSTAR GXL DNA Polymerase PCR lt 30 kb s quence GC riches ExactLadder Ladder DNA PreMix 100 bp Plus ExactLadder Ladder DNA PreMix 2 Log ExactLadder DNA PCR PreMix dNTP PreMix 4 x 10 mM dNTP PreMix 4 x 25 mM 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr www ozyme fr POUR COMMANDER Www ozyme fr OZYME Parc d Activit s du Pas du lac 10 Avenue Amp re 78180 Montigny Le Bretonneux France Email commande ozyme fr T l 33 0 1 34 60 15 16 Fax 33 0 1 34 60 92 12 NUMERO DE FICHE TECHNIQUE OZYA005 100 0514 PRODUIT A USAGE DE RECHERCHE UNIQUEMENT2. rassembler l chan tillon au fond du tube A OZYME j NX Des femmes et des hommes au service de vos recherches 3 Programmation du thermocycleur Temp rature Temps Cycles Etape D naturation 25 35 Hybridation 10 30 sec Elongation 15 30 secs Extension jean oe sm pionne ou Tm le plus bas des deux amorces si les amorces sont inf rieures 20 nt Tm 3 C sur le Tm le plus bas des deux amorces si les amorces sont sup rieures 20 nt Si les Tm des amorces sont 2 72 C utiliser le programme de PCR en 2 tapes cf section Optimisations du manuel d utilisation 30 sec Kb pour les amplicons gt 1 Kb 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr www ozyme fr PR CAUTIONS Pr parer et conserver le m lange r actionnel sur la glace jusqu au d marrage des cycles de PCR Ajouter toujours en dernier l enzyme COMPOSANTS 1 x 50 pl Fideli0O DNA Polymerase 1 x 1 5 ml tampon de r action HF 5X 1 x 1 5 ml tampon de r action GC 5X 1 x 1 5 ml Solution MgCl 50 mM 1 x 500 ul DMSO 100 TAMPON DE STOCKAGE FideliO DNA Polymerase Tris HCI 20 mM KCI 100 mM DTT 1 mM EDTA 0 1 mM Stabilisateur glyc rol 50 pH 7 4 25 C TAMPON DE REACTION HF ou GC 5X chaque tampon 5X contient 7 5 mM de MgCl www ozyme fr MANUEL D UTILISATION www ozyme fr proto fidelio PRODUITS ASSOCI S Taq Ozyme Taq Ozyme HS Taq Ozyme Purple Mix PrimeSTAR
3. Ts i LI Ya s Ra A jOZYME i cn y i cr tt Des femmes et des hommes au service de vos recherches FideliO DNA Polymerase 100 unit s R F RENCE OZYAO05 100 CONCENTRATION 2 unit s ul VOLUME Fideli0 DNA Polymerase 50 ul Tampon de r action HF 5X 1 x 1 5 ml Tampon de r action GC 5X 1 x 1 5 ml MgCl 50 mM 1 x 1 5 ml DMSO 100 500 ul STOCKAGE 20 C DUR E DE VIE r ception un an 20 C DESCRIPTIF La FideliO DNA Polymerase est une ADN polym rase modifi e ultra thermostable rapide fid le et ro buste Cette enzymes est 50X plus fid le qu une Taq polym rase et amplifie avec une vitesse de 15 secondes kb Deux tampons de r action sont in clus Nous conseillons d utiliser le tampon de r action HF en premi re intention pour une fid lit maximale et le tampon de r action GC pour l amplification des s quences riches en GC 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr WWw ozyme fr D FINITION DE L UNIT Une unit est d finie comme la quantit d enzyme qui incorpore 10 nmoles de dNTP dans un fragment d ADN en 30 min 74 C PROTOCOLE STANDARD Ce protocole est adapt pour une r action de 50 ul partir de matrices purifi es Les amorces doivent avoir pr f rentiellement une temp rature de fusion Tm proche de 60 C Le tampon de r action HF est le tampon utiliser par d faut Le tampon de r ac tion GC est d di aux cibles riches en GC C
4. est un point de d part pour les optimisations cf tape 3 ci dessous section Optimisations du manuel d uti lisation Apr s d cong lation compl te de chaque r actif bien homog n iser l aide d un vortex puis centrifuger bri vement tous les r actifs avant leur utilisation 1 Les r actifs sont m lang s dans un micro tube st rile dans l ordre suivant 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr WWW ozyme fr R actif Volume Eau st rile 10 yl 1X Tampon de r action HF 5X ou Tampon de r action GC 5X dNTP m lange 10 mM de chaque Amorce sens ex 20 UM 0 5 ul 0 2 pM 0 5 ul Amorce anti sens ex 20 HM Matrice d ADN Fideli0 DNA Polymerase 2 u hl 0 2 uM lt 250 ng 50 ul 1 2 unit s 50 ul Plasmide 1 ng ADNg 200 ng ADNc non dilu s lt 5 yl 0 5 1u l 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr www ozyme fr q s px quantit suffisante pour Le volume total de r action peut tre ajuste si necessaire la concentration recommand e de chaque amorce est de 0 2 uM finale et peut tre optimis e entre 0 2 et 1 uM aliquot d un m lange r actionnel de transcription inverse la quantit d enzyme d pend de la matrice d ADN utilis e De plus amples informations sont pr sent es dans la section optimisations du manuel d utilisation 2 Le m lange r actionnel est vortex doucement puis centrifug bri vement pour
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