Taq`Ozyme Purple Mix 2 (avec supplément de MgCl2) (remplace
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1. MANUEL D UTILISATION wWww ozyme fr proto taqapurplemix2 m m fy PRODUITS ASSOCI S Taq Ozyme Taq Ozyme HS EmeraldAmp MAX PCR Master Mix PCR gt 5 Kb ExactLadder Ladder DNA PreMix 100 bp Plus ExactLadder Ladder DNA PreMix 2 Log ExactLadder DNA PCR PreMix dNTP PreMix 4x 10 mM dNTP PreMix 4 x 25 mM POUR COMMANDER Www ozyme fr OZYME Parc d Activit s du Pas du lac 10 Avenue Amp re CS 30268 78053 ST QUENTIN EN YVELINES CEDEX Email commande ozyme fr T l 33 0 1 34 60 15 16 Fax 33 0 1 34 60 92 12 NUMERO DE FICHE TECHNIQUE OZYAO0 1000 0914 PRODUIT A USAGE DE RECHERCHE UNIQUEMENT 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr WWW ozyme fr NOT TRE LEl KOYA Mix 2 avec suppl ment de MgCl 1000 rxns de 50 ul ou 2000 rxns de 25 ui R F RENCE OZYA007 1000 RE VOLUME Taq Ozyme Purple Mix 2 5x5ml MgCl 25 mM 1 ml STOCKAGE 20 C ou 4 C DUR E DE VIE r ception un an 20 C ou 3 mois 4 C DESCRIPTIF Taq Ozyme Purple Mix 2 est un m lange 2X pr t l emploi Il facilite l utilisation et diminue les erreurs de pipettage Le d p t des produits de PCR sur gel est direct gr ce la pr sence de colorants Deux colorants inertes un rouge et un bleu sont inclus au m lange permettant un contr le visuel de la distribution et le suivi de la migration en gel Ces colorants n interf rent pas avec les applications en aval2. Taq Ozyme Purple Mix 2 est une nouvelle formulation du Taq Ozyme Purple Mix Il fonc tionne dans toutes les applications valid es avec le Taq Ozyme Purple Mix ex PCR sur co lonies et permet de plus d amplifier jusqu 5 kb partir des matrices d ADN complexes ex ADN g nomique humain et ou riches en GC Ce nouveau mix PCR inclut du MgCl concentra tion optimale et est pr t l emploi Le magnesium demeure n anmoins adjustable au del de 1 7 mM Une solution de MgCl 25 mM est fournie s par ment Migration des colorants en agarose Gel 0 5 1 5 Gel 2 3 Marqueur Bleu 4 10 Kb 200 750 pb Marqueur Rouge 1 2 Kb 125 200 pb D FINITION DE L UNIT Une unit est d finie comme la quantit d enzyme qui incorpore 10 nmoles de dNTP dans un fragment d ADN en 30 min 74 C 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr WWW ozyme fr PROTOCOLE STANDARD Ce protocole est adapt pour une r action de 50 ul partir de matrices purifi es Les amorces ont pr f rentiellement une temp rature de fusion Tm proche de 60 C C est un point de d part pour les optimisations voir Optimisations dans le Manuel d Utilisation en ligne Apr s d cong lation compl te de chaque r actif bien homog n iser l aide d un vortex puis centrifuger bri vement tous les r actifs avant leur utilisation 1 Les r actifs sont m lang s dans un micro tube st rile dans l ordre suivant coren auen Volume EEE x
3. 50 mM pH 9 2 MgCl 1 7 mM Brij58 0 075 dNTP 200 hM ADN polym rase Taq 2 5 unit s dans 25 ul de mix traces de colorants rouge et bleu stabili sateurs d enzymes et amplificateurs de PCR
4. R actif Taq Ozyme Purple Mix 2 25 yl 0 5 ul 0 2 uM 0 5 yl 0 2 uM lt 500 ng 50 pl Amorce sens ex 20 uM Amorce anti sens ex 20 uM Plasmide 10 ng ADNg 200 ng ADNc non dilu lt Sul Matrice d ADN Eau st rile redistill e q s p 50 ul DS 8 aliquot d un m lange r actionnel de transcription inverse q s p quantit suffisante pour 2 Le m lange r actionnel est vortex doucement puis centrifug bri vement pour rassem bler l chantillon au fond du tube 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr WWW ozyme fr 3 Programmation du thermocycleur Nombre de Etape Temps Cycles ou Tm 5 C sur le Tm le plus bas des deux amorces si le Tm des amorces est diff rent de 60 C 8 1 min Kb pour les amplicons gt 1 Kb Temp rature 25 35 TABLEAU D OPTIMISATION DE MgCI OPTIONNEL L optimisation de la concentration en MgCl peut tre n cessaire pour certaines amorces Le volume de MgCI 25 mM ajouter est indiqu ci dessous Concentration finale en MgCl ee P EE a PR CAUTIONS Conserver le m lange r actionnel sur la glace jusqu au d marrage des cycles de PCR Eviter les cong lations d cong lations r p t es Taq Ozyme Purple Mix 2 n est pas adapt pour des amplicons de plus 5 kb Si besoin voir la section produits associ s COMPOSANTS 5 x 5 ml Taq Ozyme Purple Mix 2 2X 1 m MgCl 25 mM COMPOSITION 1X NH SO 16 mM Tris HCI
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