Cellbind Screen K7000
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1. des groupes sanguins traduisent la pr sence des antig nes correspondants sur les rythrocytes Les r actions n gatives avec les r actifs de d termination des groupes sanguins indiquent que la pr sence d antig nes correspondants sur les rythrocytes est ind tectable Test de Coombs direct TDA modifi Les r actions positives indiquent la sensibilisation in vivo des rythrocytes avec des anticorps et ou des compos s du compl ment Test de compatibilit Les r actions positives indiquent l incompatibilit du donneur de sang avec le receveur Les r actions n gatives indiquent la compatibilit du donneur de sang avec le receveur Limites du test R sultats positifs inattendus pseudo agglutination auto agglutination r action de double population certains m dicaments concentration d rythrocytes trop lev e rythrocytes sensibilis s in vivo avec des anticorps et ou des compos s du compl ment R sultats n gatifs ou faibles inattendus faibles r ponses des antig nes r action de double population ou activit r duite des r actifs Il existe un risque d obtenir de faux r sultats positifs ou n gatifs suite une la pr sence de bulles d air dans la matrice de gel contamination du mat riel du test ou une d viation quelconque par rapport aux techniques recommand es En cas d utilisation d chantillons dont le taux d h molyse est lev des r actions non sp cifiques peuvent se produire Si l chanti2. Sanquin Reagents Phone 31 20 512 3599 Plesmanlaan 125 Fax 31 20 512 3570 1066 CX Amsterdam reagents sanquin nl Sanquin The Netherlands WWwWWw sanquinreagents com R serv l usage professionnel No 060 010112 Cellbind Screen K7000 CE Test sur micro colonne pour la d tection ou l identification d anticorps anti rythrocytaires et pour les groupages sanquins Informations g n rales Cellbind Screen est un test sur micro colonne dans lequel les rythrocytes sensibilis s d une suspension sont captur s par une matrice de gel contenant des anti IgG des anti IgM et des anti C3d dans un milieu optimis haute densit Chaque carte test est compos e de six micro colonnes contenant le gel dans le milieu haute densit Cellbind Screen est destin la d tection ou l identification des anticorps rythrocytaires ainsi que les groupages sanguins pour les tests de compatibilit et le test de Coombs direct modifi TDA pour la d tection des antig nes in vivo des rythrocytes par des anticorps et des composants du compl ment Cellbind Screen peut tre utilis manuellement ou avec des syst mes semi automatis s ou automatis s Le test Cellbind Screen est conforme aux normes et directives en vigueur Les sp cifications des performances du test sont indiqu es dans les publications fournies avec le produit sur demande Le test repose sur l immunofixation d rythrocytes sensibilis s dans une micro colonne contenant du gel co
3. bateur Cellbind Ins rer les cartes dans la centrifugeuse Cellbind 10 minutes Les param tres de centrifugation sont d j programm s 6 Effectuer la lecture des r actions CP a Interpr tation En cas de r action positive les rythrocytes sont captur s dans la partie sup rieure du gel de la matrice En cas de r action n gative seul un petit culot d rythrocytes appara t au fond de la micro colonne Les profils r actionnels sont d crits ci dessous 4 3 2 1 NEG BYVUUV Le nombre d rythrocytes captur s dans la partie sup rieure du gel de la matrice d pend de param tres tels que la densit antig nique des rythrocytes ainsi que du titre et de l affinit de l anticorps Il d pend galement de la dur e de la seconde phase de centrifugation ainsi que de la force centrifugation de la troisi me phase En cons quence si une r action est inf rieure 4 des cellules apparaissent galement au fond de la micro colonne Les r actions de double population pr sentent le m me profil r actionnel D tection ou identification des anticorps Les r actions positives indiquent la pr sence d anticorps rythrocytaires dans le plasma ou le s rum Les r actions n gatives indiquent l absence d anticorps rythrocytaires Un auto contr le positif peut traduire la pr sence d auto anticorps Typage des antig nes de groupe sanguin Les r actions positives avec les r actifs de d termination
4. ctions SP DR R Typage des antig nes de groupe sanguin 1 Retirer la bande de protection des colonnes utiliser 2 D poser 40 50 uL de la suspension d h maties test 0 5 dans la chambre d incubation 3 D poser 20 uL de r actif Sanquin pour la d termination des groupes sanguins dans la chambre d incubation Remarque Une liste de r actifs valid s de Sanquin pour la d termination des groupes sanguins est disponible sur demande L utilisation de tout autre r actif de typage peut produire des r sultats aberrants et doit donc tre valid e par l utilisateur 4 Ins rer les cartes dans la centrifugeuse Cellbind 10 minutes Les param tres de centrifugation sont d j programm s 5 Effectuer la lecture des r actions Test de Coombs direct TDA modifi 1 Retirer la bande de protection des colonnes utiliser 2 D poser une goutte 40 50 uL de la suspension 0 5 d rythrocytes du patient dans la chambre d incubation 3 Ins rer les cartes dans la centrifugeuse Cellbind 10 minutes Les param tres de centrifugation sont d j programm s 4 Effectuer la lecture des r actions Test de compatibilit Retirer la bande de protection des colonnes utiliser D poser 40 50 uL de la suspension d rythrocytes 0 5 du donneur dans la chambre d incubation D poser le m me volume 40 50 uL de plasma ou de s rum du patient dans la chambre d incubation Incuber 37 C pendant 15 minutes dans l incu
5. geuse Cellbind avant utilisation Les cartes Cellbind Screen ne doivent pas tre utilis es au del de la date de p remption imprim e sur leur tiquette Une fois les r sultats lus les cartes peuvent tre recouvertes et conserv es en position verticale entre 2 8 C pendant une semaine Une solution de chloramph nicol lt 0 1 est utilis comme conservateur Les r actifs ne peuvent tre garantis exempts d agents infectieux Il convient d agir avec pr caution lors de la manipulation et de l limination des conteneurs et de leur contenu Au terme du test l limination des d chets doit tre effectu e conform ment aux directives du laboratoire Recueil et pr paration des chantillons Echantillon Les chantillons de sang doivent tre obtenus aseptiquement avec ou sans ajout d anticoagulants Il est fortement conseill de centrifuger les tubes de sang pendant 5 minutes 3000g avant tout pr l vement d chantillons de s rum ou de plasma Le pr l vement d chantillons de s rum ou de plasma doit tre effectu la pipette et non pas en versant le plasma ou le s rum Les chantillons de plasma ou de s rum doivent rester exempts de leucocytes de fragments de gel et ou de r sidus de fibrine afin d viter le blocage du gel de la matrice Pour la d tection ou l identification des anticorps rythrocytaires il est conseill d utiliser du plasma ou du s rum frais 48 heures maximum apr s le pr l vement Les chanti
6. llon contient des r sidus de fibrine cela peut entra ner la capture de cellules non sensibilis es au cours de la centrifugation se traduisant par la formation d une ligne fine et rouge dans la partie sup rieure du gel de la matrice R f rences 1 Race R R and Sanger R Blood Groups in Man 6 ed Oxford Blackwell Scientific Publishers 1975 2 Issit P D Applied Blood Group Serology 3 ed Montgomery Scientific Publications Miami Florida USA 1985 3 Daniels G Human Blood Groups Blackwell Science Ltd 1995 4 Mollison P L et al Blood Transfusion In Clinical Medicine 9 ed Blackwell Oxford 1993
7. llons de s rum ou de plasma non test s imm diatement peuvent tre conserv s pendant 48 heures entre 2 8 C ou lt 18 C au del Il est conseill de centrifuger les chantillons de s rum ou de plasma d congel s pendant 5 minutes 3000g avant tout test afin d liminer tout pr cipit Utiliser du sang frais pour le test de Coombs direct modifi Le sang frais doit tre de pr f rence plong dans de l EDTA afin d viter la sensibilisation in vitro des rythrocytes par les compos s du compl ment Le plasma ne convient pas pour la d tection d anticorps fixant le compl ment car les anticoagulants inhibent l activation du compl ment R actifs Cellbind Screen IREF K7000 Bo te contenant 48 cartes de 6 micro colonnes Cellbind LISS 250 mi REF K7100 100 mI REF K7110 milieu d incubation pour la pr paration les suspensions d rythrocytes 0 5 Cellbind P2 2 x 10 mI REF K7200 suspension d h maties test 0 5 pour la d tection d anticorps rythrocytaires Cellbind P3 3 x 10 mi REFIK7210 suspension d h maties test 0 5 pour la d tection d anticorps des rythrocytaires Cellbind P3 P papa n 3 x 10 ml REFIK7211 suspension d h maties test 0 5 papa n es pour la d tection d anticorps des rythrocytaires Cellbind 1D16 16 x 3 ml REFIK7230 suspension d h maties test 0 5 pour l identification des anticorps rythrocytaires Cellbind ID16 P papa n 16 x 3 mI REFIK7231 sus
8. mme matrice La suspension cellulaire est ajout e dans la chambre d incubation de la micro colonne en m me temps que le plasma le s rum ou le sang tester Au cours de la phase d incubation les antig nes rythrocytaires se lient sp cifiquement aux anticorps anti rythrocytaires pr sents dans le plasma le s rum ou le r actif Ensuite les cartes sont soumises trois phases de centrifugation Au cours de la premi re phase le milieu haute densit s pare les rythrocytes du plasma du s rum ou du r actif Au cours de la seconde phase les rythrocytes sensibilis s s agglutinent et sont captur s dans la partie sup rieure du gel de la matrice de la micro colonne alors qu au cours de la troisi me phase les rythrocytes non sensibilis s ou faiblement sensibilis s migrent vers le bas de la micro colonne L inclusion de contr les positifs et n gatifs dans chaque s rie de test de groupage sanguin est fortement recommand e Pr cautions Usage in vitro uniquement Les cartes Cellbind Screen doivent tre conserv es en position verticale entre 2 8 C Dans le cas contraire les maintenir en position verticale pendant environ 15 minutes avant utilisation afin de permettre au gel de la matrice de se red poser Dans la plupart des cas il est possible d liminer les bulles d air introduites lors du transport dans le milieu haute densit ou le gel de la matrice en centrifugeant les cartes Cellbind Screen non ouvertes dans la centrifu
9. pension d h maties test 0 5 papa n es pour l identification d anticorps rythrocytaires Mat riel Centrifugeuse Cellbind IREFIK7302 Rotor Cellbind IREFIK7303 Incubateur Cellbind IREFK7304 Distributeur Cellbind REF K7300 Station de travail Cellbind IREFIK7301 Suspensions d rythrocytes Pour la d tection ou l identification des anticorps il est conseill d utiliser la suspension pr te l emplo d h maties test Cellbind 0 5 i Si un autre panel de cellules est utilis il est n cessaire de pr parer une suspension 0 5 dans la solution Cellbind LISS selon le mode pr paratoire ci dessous Remarque Ce protocole applicable uniquement aux cellules non trait es par des enzymes S il est n cessaire d effectuer des tests avec des cellules trait es par des enzymes il faut utiliser Cellbind P3 P REFK7211 ou Cellbind ID16 P REF K7231 Pour l autocontr le et pour le test de Coombs direct modifi il est n cessaire de pr parer une suspension 0 5 d rythrocytes du patient dans la solution Cellbind LISS Il en va de m me pour les rythrocytes du donneur ou du patient pour la d termination du groupe sanguin et les tests de compatibilit Pr paration de la suspension d rythrocytes 0 5 11 ul de culot globulaire 2ml de solution Cellbind LISS ou 200 ul d h maties tests 3 1 ml de solution Cellbind LISS Proc dure d utilisation de la centrifugeuse Cellbind Pour utiliser la centrifuge
10. use Hettich avec les cartes Cellbind proc der comme suit 1 Ins rer le rotor Cellbind conform ment aux instructions du manuel d utilisation Hettich 2 La centrifugeuse reconna t le rotor et se programme automatiquement en fonction du protocole Cellbind 3 Pour l tape de centrifugation mentionn e dans la proc dure de test suivante il suffit de presser start D marrage La centrifugeuse effectue les trois tapes suivantes 0 2 minutes 75 fcr 780 tm 2 3 minutes 200 fcr 1280 tm 3 10 minutes 1790 fcr 3840 tm 4 A la fin de la centrifugation il est possible d ouvrir le couvercle et de retirer les cartes Proc dure de test Ramener tous les r actifs temp rature ambiante 18 25 C Ne pas utiliser des cartes Cellbind Screen dont la matrice de gel pr sente des bulles d air dont les fermetures sont rompues ou qui pr sentent des signes de dess chement absence de liquide ou niveau de liquide irr gulier au dessus de la matrice de gel D tection ou identification des anticorps Retirer la bande de protection des colonnes utiliser D poser 40 50 uL desuspension d h maties test 0 5 dans la chambre d incubation D poser le m me volume 40 50 uL de plasma ou de s rum dans la chambre d incubation Incuber 37 C pendant 15 minutes dans l incubateur Cellbind Ins rer les cartes dans la centrifugeuse Cellbind 10 minutes Les param tres de centrifugation sont d j programm s Effectuer la lecture des r a
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