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Unités d`électrophorèse horizontale

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1. voir les pages 13 17 pour plus d informations sur ces bior actifs Fisher www eu fishersci com fisherbrand Guide de r solution des probl mes La plupart des problemes peuvent tre evites en lisant et en suivant les instructions figurant dans ce manuel d utilisation Nous indiquons ci dessous la liste des problemes les plus couramment rencontres avec des suggestions pour les resoudre Toutefois si le probl me persiste ou si vous avez d autres questions veuillez contacter Fisher Scientific Probleme Suggestions Aucune bulle n appara t sur les lectrodes lorsque la tension de fonctionnement est appliqu e S assurer que l alimentation C C est correctement raccord e L agarose fondu fuit pendant le moulage Lorsque des obturateurs de moulage sont utilis s faire en sorte que les surfaces assurant l tanch it du plateau de migration et des obturateurs de moulage du gel soient propres V rifier que les extr mit s du plateau de migration sont plates et exemptes de dommages superficiels Puits chantillon d form Laisser le gel durcir pendant au moins 30 minutes Laisser le peigne en place jusqu ce que le gel revienne temp rature ambiante puis le retirer Le peigne doit tre retir lentement et avec un angle d inclinaison faible afin d viter de casser le gel Prendre soin d viter d endommager le puits avec la pipette Viser le centre du puits tout en vitant d endommag
2. 0 1 n de cat 10245203 voir page 15 Les risques Le DEPC est un canc rog ne pr sum Toujours prendre les pr cautions n cessaires pendant l utilisation www eu fishersci com fisherbrand Utilisation des unit s d lectrophor se horizontale Installation des cuves pour gels horizontaux Instructions pour l installation des cables d electrode Noter la position du couvercle sur l unit Ceci indique la polarit et l orientation correctes des c bles le noir correspondant au n gatif et le rouge au positif Retirer le couvercle de l unit Notez que si le couvercle n est pas retir l installation des c bles est susceptible de desserrer le connecteur dor et d endommager l lectrode Visser les c bles dans les trous taraud s aussi loin que possible afin de ne pas laisser d interstice entre le couvercle et l extr mit de la garniture de c ble e Remettre le couvercle en place Instructions pour l installation des guides de chargement facultatif Ces elements peuvent tre install s pour am liorer la visibilit des puits si n cessaire lls peuvent tre install s sur la plate forme blanche en vinyle ou sur l unit elle m me e Mettre le plateau en place dans l unit et noter la position des rainures des peignes Les chantillons migrent du noir vers le rouge mais les plateaux peuvent tre utilis s dans les deux sens donc il est n cessaire de s assurer que les rainures de peigne les plus proch
3. 20 59 985 11523402 15 25 mo 2 0 45 15 11533402 1 5 28 6 0 21 38 11543402 1 5 40 oe 1 8 2155 11553402 1 5 50 39 1 0 22 575 11563402 2 12 116 7 22 143 62 11573402 2 16 12 1 2 0 104 06 11583402 2 20 Oe 2 0 79 98 11593402 2 25 7 0 2 0 60 2 11503412 2 28 6 0 21 51e 11513412 2 40 3 9 1 8 33 54 11523412 2 50 39 1 0 30 1 indique que ces peignes sont compatibles avec des pipettes multicanaux 12 www eu fishersci com fisherbrand f Fisher BioReagents Fisher BioReagents Votre fournisseur de produits de haute puret pour l lectrophor se d acides nucl iques Emballages con us pour la s curit le confort et la qualit des produits Les bior actifs Fisher sont livr s dans un vaste ventail d emballages innovants con us pour la s curit la protection de l environnement le confort de manipulation et de stockage et la conservation de l int grit des produits Le r cipient primaire est indiqu dans la description du produit pour la plupart des esp ces chimiques de ce catalogue Liste non exhaustive de r cipients primaires e Bouteilles et flacons en plastique et en verre e Recipients acide sp ciaux e Bouteilles carr es en polym re e Sachets garantissant la st rilit e Seaux en polymere e Recipients en Polypac e Bo tes laminees compactes Fisher BioReagents des des puret s pour chaque application Grade du materiau Definition Certifi R actifs chimiques don
4. 7 Bioreactits g n riques 16 Instructions pour l installation des guides de chargement Marqueurs de taille d ADN exaACTGene et de routine 17 FACE Solutions m res 18 Coulage du gel 7 TAE 50X 18 Migration du gel 8 TAE 1X 18 Conditions de fonctionnement 6 TBE 10X 18 En fin de la migration 8 TBE 1X 18 Pr paration de gels d agarose 9 Tampon de charge d ADN 6X 18 a a a soe Solution de bromure d thidium 18 Performance de s paration 5 S lection de la concentration du gel g ISIS TEEDE 2 S lection du tampon d lectrophor se 10 R f rences 20 Temp rature 10 Garantie 21 Visualisation d ADN 10 NOTES 29 ANNEXE 11 Sp cifications des peignes 11 Utilisation de plusieurs peignes 11 11553352 Unit gel horizontale format large Mini Plus 11 11563382 Unit gel horizontale format large Midi Plus 12 www eu fishersci com fisherbrand I Instructions de securite Lorsque ces unites sont utilisees correctement elles ne presentent aucun risque pour la sante Toutefois ces unites sont susceptibles de d livrer des niveaux dangereux d lectricit et doivent tre utilis es uniquement par du personnel qualifi en suivant les recommandations de ce manuel Toute personne ayant l intention d utiliser cet quipement doit lire la totalit du manuel L unit ne doit jamais tre utilis e sans que le couvercle de s curit ne soit en position correcte L unit ne doit pas tre utilis e si des traces de do
5. General purpose extra large DNA fragments Size Range 50 2000bp 50 10 000bp 300 to 24 000bp www eu fishersci com fisherbrand 10489883 ng 10 uL 18 13 23 14 Number of Bands 14 12 8 10 1 14 10 16 E 19 Number of Bands m 16 15 Fisher BioReagents Number of Loadings 100 10pL 100 10pL 100 10pL 100 10pL 100 10pL 100 10pL 100 10pL 100 10pL 100 10pL 100 10pL Number of Loadings 200 5uL 200 5uL 100 10uL 17 Fisherbrand QUALITY RELIABILITY VALUE MANUEL D INSTRUCTIONS Unit s d electrophorese horizontale format large Solutions m res TAE 50X Pour pr parer 1 L e Peser 242 g de base tris Mr 121 et dissoudre dans 750 mL d eau distillee Fisher BioReagents n de cat 10376743 e Ajouter 57 1 mL d acide acetique glacial n de cat 10021123 et 100 mL d EDTA 0 5 M pH 8 0 n de cat 10618973 e Compl ter jusqu un litre avec de l eau distillee La solution mere peut tre stock e a temperature ambiante Le pH du tampon n est pas ajust et doit tre d environ 8 5 TBE 10X Pour pr parer 1 L e Peser 108 g de base tris Mr 121 et dissoudre dans 750 mL Fisher BioReagents n de cat 10376743 d eau distill e e Ajouter 55 g d acide borique FW 61 8 n de cat 10011083 et 40 mL d EDTA 0 5 M pH 8 0 n de cat 10618973 e Compl ter jusqu un litre avec de l eau distill
6. agarose durcir en s assurant de ne pas perturber le gel Fig 3 Retirer doucement les obturateurs de moulage du gel et le s peigne s Placer le plateau de moulage du gel en position de fonctionnement de mani re ce que les puits soient plus proches de l lectrode noire cathode Remplir la cuve avec le tampon de migration de facon a ce que la solution tampon submerge legerement le gel voir page 14 pour plus d informations sur l emploi de solutions tampons dans les applications d lectrophor se Fig 1 Fig 2 www eu fishersci com fisherbrand MANUEL D INSTRUCTIONS Fisherbrand QUALITY RELIABILITY VALUE SER Unit s d electrophorese horizontale format large Migration du gel Les chantillons doivent tre m lang s avec un colorant marqueur o un tampon de charge ad quat avant d effectuer le chargement afin de permettre l chantillon de couler dans le puits et de faciliter la visualisation de la distance de migration des chantillons pendant l lectrophor se Consultez votre manuel de laboratoire pour plus d informations sur les tampons de charge ainsi que la page 16 pour une liste des agents de charge du gel Charger les chantillons dans les puits en prenant soin de ne pas endommager les bords ni le fond des puits Remettre le couvercle en place correctement AVANT de raccorder les c bles l alimentation Les alimentations de n de cat 12643546 double sortie et 12613546 quadruple sortie so
7. de l lectrophor se 11553352 Unit gel horizontale format large Mini Plus N de cat 11523362 11533362 11543362 11553362 11563362 11573362 11503372 19513372 11523372 11533372 11543372 11553372 11583372 11593372 11503382 11513382 11523382 11533382 paisseur mm 15 15 45 15 15 15 Nombre d chantillons Largeur de l outil mm ch Bloke 12 indique que ces peignes sont compatibles avec des pipettes multicanaux www eu fishersci com fisherbrand Espacement des dents mm Volume d chantillon max par puits pour un gel de 5 mm de profondeur IL 49 66 65 SLE 40 42 29 24 21 5 212 85 99 975 77 4 60 63 43 86 32 25 283 8 133 3 103 2 80 84 58 48 11563382 Unite a gel horizontale format large Midi Plus N de cat Fisherbrand QUALITY RELIABILITY VALUE paisseur mm MANUEL D INSTRUCTIONS Unit s d electrophorese horizontale format large Nombre d chantillons Largeur de l outil mm Espacement des dents Volume d chantillon max par puits pour un gel mm de 5 mm de profondeur pL 11523392 1 12 16 7 PA ESI 11533392 1 16 12 1 2 0 52 03 11543392 1 20 OS 20 99790 11553392 1 25 7 0 2 0 30 1 11563392 1 28 6 0 2 1 25 8 11573392 1 40 3 9 1 8 16 77 11583392 1 50 35 1 0 15 05 11593392 1 5 12 16 7 2 2 107 715 11503402 1 5 16 12 1 2 0 78 045 11513402 1 5 20 93
8. unit s utilisant des accessoires ou des pi ces r par es ne provenant pas de votre fournisseur ou de ses distributeurs associ s voient leur garantie annul e Votre fournisseur ne peut r parer ou remplacer gratuitement des unit s dans lesquelles des solutions ou produits chimiques incorrects ont t utilis s Pour une liste des produits compatibles voir la partie Entretien et maintenance Si un probl me se produit malgr tout veuillez contacter Fisher Scientific A Avertissement NE PAS tenter de retirer le bo tier ext rieur ou d effectuer des r parations sur nos produits lectriques en cas de d faillance d une unit Contacter imm diatement Fisher Scientific en cas de besoin de r paration ou de maintenance 21 www eu fishersci com fisherbrand MANUEL D INSTRUCTIONS Fisherbrand QUALITY RELIABILITY VALUE Unit s d electrophorese horizontale format large NOTES 22 www eu fishersci com fisherbrand 23 www eu fishersci com fisherbrand S UALITY RELIABILITY LUE x p Nous vous aidons obtenir les meilleurs r sultats chaque jour
9. 0 100 160 M 1 000 200 En fin de la migration Mettre z ro les consignes de l alimentation mettre l alimentation secteur hors tension et d connecter les fils d alimentation Visualiser la progression de la migration ou la separation finale sur un transilluminateur UV la fin de la migration rincer l appareil avec de l EAU DISTILL E UNIQUEMENT IMPORTANT Le plastique acrylique n est PAS r sistant aux hydrocarbures aromatiques ou halog n s aux c tones aux esters aux alcools plus de 25 et aux acides plus de 25 Ces produits causent une fissuration en particulier du plastique transparent aux UV et ils ne doivent donc PAS tre utilis s pour le nettoyage NE PAS utiliser de cr mes abrasives ou de tampons a r curer S cher les composants avec des tissus propres avant l utilisation S assurer que les connecteurs sont propres et secs avant l utilisation ou le stockage www eu fishersci com fisherbrand Preparation de gels d agarose La quantit d agarose n cessaire pour un gel avec un pourcentage donn doit tre calcul e Par exemple un gel 0 8 est obtenu en dissolvant 0 8 g de poudre d agarose dans 100 mL de tampon de migration La composition du tampon de migration du gel doit tre identique celle utilis e dans la cuve de tampon L agarose doit tre enti rement dissoute avant que le gel puisse se former correctement Ceci peut tre r alis par chauffage dans un bain d eau tourbillonnant
10. 100g N de cat 10657633 bp ng 10 uL 1000 90 900 66 800 58 700 48 600 41 500 69 400 28 300 21 200 28 100 20 50 14 25 15 N de cat bp 10000 9000 4000 3000 2500 2000 1500 1000 700 900 300 Marqueurs de taille d ADN exaACTGene et de routine Des chelles d ADN pr tes a l emploi pre melang es avec le colorant de charge et stables a temp rature ambiante sont disponibles pour toutes les applications d lectrophor se exACTGene DNA ladders are ideal for qualitative analysis quantitative estimation and size assessment N de cat Description 10214973 10657633 10224973 10061413 10021463 10306943 10031463 10122823 10489883 10499883 PCR fragment analysis PCR fragment analysis small DNA digests Quick check of PCR or enzyme digestion results General purpose small DNA fragments Fast run times small DNA fragments Clone identification Large size PCR or cloning Small and large cloning application General purpose large digested DNA General purpose wide separation range Size Range 25 to 650bp 25 to 1 000bp 50 to 2 000bp 100 to 1 000bp 100 to 2 000bp 100 to 2 686bp 300 to 5 000bp 100 to 5 000bp 300 to 10 000bp 100 to 10 000bp Routine DNA ladders are designed for qualitative analysis and size assessment Kat Nr 10284633 10450464 10699163 Anwendung Small fragments quick size assessment Quick size assessment of broad size range
11. Fisherbrand Manuel d instructions QUALITY RELIABILITY VALUE Unit s d lectrophor se horizontale format large 11553352 format large Mini Plus 11563382 format large Midi Plus Unit s d lectrophorese horizontale MANUEL D INSTRUCTIONS Fisherbrand QUALITY RELIABILITY VALUE Unit s d electrophorese horizontale format large TABLE DES MATIERES Instructions de securite 3 Fisher BioReagents 13 Contenu de l emballage 4 Emballages con us pour la s curit le confort et la qualit des Unit gel horizontal format large Mini Plus 11553352 4 pea E Fisher BioReagents des des puret s pour chaque application Unit gel horizontal format large Midi Plus 11563382 4 13 Caracteristiques du systeme 5 Agaroses pour l lectrophor se d ADN 14 Structure 5 Guide de s lection de agarose 14 Consignes et limites d utilisation 5 Tampons pour les applications d lectrophor se d ADN 14 Entretien et maintenance 6 TAE Exempt de DNase RNase et protease 14 Nettoyage des unit s horizontales e TBE Exempt d ADNase et d ARNase 14 D contamination de l RNase 6 Tampons pour lectrophorese d ADN 15 Les risques 6 Tampons l lectrophor se d ARN 15 Nallsstondesunfssdi liseirepheise MOPS Exempt d ADNase d ARNase et de prot ase 15 horizontale 7 Agents de charge du gel 16 Installation des cuves pour gels horizontaux Visualisation d ADN 16 Instructions pour l installation des c bles d lectrode
12. Par exemple e Des fragments d ARN qui ont t denatures par du glyoxal et du dim thylsulfoxyde peuvent tre s par s sur des gels d agarose neutres e Autrement l ARN peut tre fractionn sur des gels d agarose contenant de l hydroxyde de methylmercure ou du formaldehyde Les chantillons d ARN exigent g n ralement des migrations plus longues ou des tampons qui s puisent rapidement ce qui rend n cessaire de faire circuler le tampon Les analyses de transfert d ARN northern blot ne doivent normalement pas tre effectu es sur une cuve de gel de type mini Performance de s paration La concentration du gel le tampon de migration la tension la temp rature la conformation et la pr sence de bromure d thidium peuvent tous avoir une incidence sur les r sultats de la s paration S lection de la concentration du gel La distribution des tailles des fragments s parer d termine le choix de la concentration en agarose pour un gel La concentration typique en agarose est de 0 5 3 0 Pour de gros fragments d ADN des gels avec un pourcentage faible sont n cessaires tandis qu un pourcentage lev est recommand pour de petits fragments d ADN Les gels faibles lt 0 5 d agarose doivent subir une electrophorese a basse temp rature par exemple 4 C Avec les lectrophor ses de routine des gels d agarose de 0 75 1 0 sont recommand s pour s parer des mol cules de tailles tr s vari es entre 0 15
13. e La solution m re peut tre stock e temp rature ambiante Fisher BioReagents Tampon de charge d ADN 6X Pour pr parer 100 mL e 60 mL de glyc rol e 6 mL de Tris HCI 1 M pH 8 0 e 1 2 mL d EDTA 0 5 M pH 8 0 e 32 8 mL d eau distill e e To the solution add either 60mg of Bromophenol Blue Cat No 10679733 or 60mg xylene cyanole FF Cat No 10532965 In a 1 agarose gel the tracking dyes are expected to run at approximately 300bp for bromophenol blue and 40 000bp for xylene cyanole n de cat 10376743 n de cat 10618973 TAE 1X Diluer 50X la solution m re dans de l eau distill e Les concentrations finales sont e tris 40 mM pH 7 6 e Acide acetique glacial 20 mM e EDTA 1mM Fisher BioReagents n de cat 10376743 a de cat 10021123 n de cat 10618973 TBE 1X Diluer 10X la solution m re dans de l eau distill e Les concentrations finales sont e Tris 89 mM pH 7 6 e Acide borique 89 mM e EDTA 2 mM Fisher BioReagents n de cat 10376743 n de cat 10011083 n de cat 10618973 Fisher BioReagents Solution de bromure d thidium e Ajouter 10 mg de bromure d thydium 10678973 1 mL d eau distillee A CAUTION Le bromure d thidium est un mutagene av r Des gants doivent toujours tre port s pour le manipuler n de cat Porter des lunettes de s curit UV et prot ger la peau avant d utiliser toute source de lumi re UV
14. el fond ou se ramollit proximit des puits chantillons Caus par une combinaison de d rive de pH et de temp rature lev e Faire circuler ou m langer le tampon p riodiquement ou r duire la tension R f rences e Maniatis T Fritsch E F and Sambrook J 1982 Molecular Cloning A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Cold Spring Harbor New York e Rickwood D and Hames B D eds 1982 Gel Electrophoresis of Nucleic Acids A Practical Approach IRL Press Oxford England e Longo M C and Hartley J L 1986 Focus 8 3 3 e Ausubel et al eds 1993 Current Protocols in Molecular Biology Greene Publishing and Wiley Interscience New York 20 www eu fishersci com fisherbrand Garantie Les unit s d lectrophor se horizontale de Fisher Scientific sont garanties contre les d fauts de fabrication et de mat riel pendant douze mois a compter de la date de reception par le client Si des d fauts sont observes au cours de cette p riode de garantie votre fournisseur effectuera une r paration ou un remplacement des pieces d fectueuses a titre gratuit Cette garantie ne couvre pas les defauts causes par les accidents et les utilisations incorrectes ou inadaptees Les unit s r par es ou modifi es par toute partie autre que votre fournisseur ou un distributeur ou repr sentant agr cessent d tre Sous garantie compter de la date de modification de l unit Les
15. er le fond du puits avec le bout de la pipette Les chantillons fuient sous le gel lors du chargement Les fonds des puits ont t d chir s lorsque le peigne a t retir Pour viter ceci secouer doucement le peigne pour d gager ses dents du gel Les chantillons ne migrent pas droit Le peigne est peut tre d form et doit tre remplac Le plateau de migration est peut tre d form et doit tre remplac R duire la tension pour r duire l accumulation de chaleur dans le gel Choisir un tampon avec une force ionique et une capacit tampon convenables Incurvation vers l un des c t s du gel Le gel n tait pas niveau pendant le moulage ou la migration Utiliser une table de mise niveau du gel pour mettre l appareil a niveau avant le moulage du gel et l lectrophor se Le colorant bleu de bromoph nol devient jaune V rifier le pH du tampon pendant l lectrophor se variation de pH S assurer que qu une base tris a t utilis e et non du tris HCl Melanger periodiquement le tampon pendant l lectrophor se Raccorder une pompe pour faire circuler le tampon 19 www eu fishersci com fisherbrand Fisherbrand QUALITY RELIABILITY VALUE MANUEL D INSTRUCTIONS Unit s d electrophorese horizontale format large Probleme Suggestions Motif a deux bandes Bandes a queue fluorescence excessive apparaissant au dessus de la bande S a
16. es de l lectrode noire sont marqu es e Retirer le plateau e Enlever l arri re du guide de chargement et appliquer avec precaution le guide de chargement la plate forme a gel L unit est d sormais pr te tre utilis e Coulage du gel S assurer que le joint en caoutchouc de silicone est en position c est dire enfonc de fa on gale dans la rainure le long des bords des obturateurs de moulage du gel Placer les obturateurs de moulage dans les fentes du plateau de moulage du gel les faces avec les joints en caoutchouc de silicone tant tourn es vers l ext rieur Fig 1 Placer l unit gel sur une surface horizontale ou sur une table de mise a niveau du gel Positionner les peignes choisis dans les fentes du plateau de moulage du gel Fig 2 Pr parer 75 ou 160 mL de l agarose de souhait pour les unit s 11553352 ou 11563382 respectivement Ceci permet d obtenir une profondeur de gel de 5 mm Pour obtenir une profondeur de gel de 10 mm preparer le double de ce volume voir le Guide de selection de l agarose la page 14 Verser doucement l agarose pour viter la formation de bulles Si des bulles se forment tout de m me elles peuvent tre amen es vers le bord du gel et dispers es la main avec un gant propre IMPORTANT s assurer que l agarose a refroidi jusqu une temp rature comprise entre 50 et 60 C avant de le verser afin d viter de causer une d formation de l appareil Laisser l
17. et 15 kb Les gels d agarose entre 2 et 4 sont g n ralement s lectionn s pour la r solution de fragments de PCR Si le gel doit tre photographi des gels fins 2 mm 3 mm avec un faible pourcentage d agarose conviennent mieux que des gels pais ou avec un pourcentage lev Ces derniers sont susceptibles de pr senter une opacit plus lev e et davantage d auto fluorescence Le tableau ci dessous sugg re des concentrations d agarose pour s parer diverses tailles de fragments D autre part les plages de r solution peuvent tre tendues en utilisant des agaroses sp ciaux Agarose R solution effective des fragments d ADN lin aires kb 08 30 gt 10 0 7 123 0 8 10 10 gt 05 1 2 7 gt 0 4 15 39 0 3 20 35 02 3 0 35 0 1 www eu fishersci com fisherbrand MANUEL D INSTRUCTIONS Fisherbrand QUALITY RELIABILITY VALUE Unit s d electrophorese horizontale format large S lection du tampon d lectrophor se Le tampon TAE offre une r solution optimale des fragments de plus de 4 kb de longueur tandis que le tampon TBE doit tre s lectionn pour les fragments de 0 1 3 kb Le TBE a une plus grande capacit tampon et une conductivit plus faible que le TAE et doit donc tre utilis pour l lectrophor se haute tension D autre part le tampon TBE produit moins de chaleur que le TAE une tension quivalente et emp che les d rives importantes de pH Voir la page 14 pou
18. ion Poudre Poudre Solution tampon 10X Solution tampon 10X Eau Exempt de nucl amp ase Exempt de nucl amp ase Grade ADN Grade ARN Quantite 100g 500g 500 mL Al 50 ml 100 mL al Ni www eu fishersci com fisherbrand MANUEL D INSTRUCTIONS Fisherbrand QUALITY RELIABILITY VALUE SER Unit s d electrophorese horizontale format large www eu fishersci com fisherbrand Fisher BioReagents Agents de charge du gel N de cat Description Quantit 10205023 Colorant de charge de gel d agarose 6X 6 mL 10205263 Colorant de charge de gel au glyc rol 5X exempt d ADNase et d ARNase 1 mL 10400084 Colorant de charge de gel au glyc rol 5X exempt d ADNase et d ARNase 5 mL 10679733 Bleu de bromoph nol 259 10532965 Xyl ne cyanol FF 10g Visualisation d ADN N de cat Description Quantit 10132863 Solution de bromure d thidium 1 10 mL 10726074 Bromure d ethidium 1g 10678973 Bromure d thidium 5g Bioreactifs g n riques _ N de cat Description Quantite 10021123 Eau grade ARN st rile exempt d ADNase d ARNase et de prot ase trait aux DEPC pour travailler IE avec de l ARN 10021123 Acide ac tique glacial 500 mL 10011083 Acide borique test pour l lectrophor se exempt d ADNase 1 kg 10021083 Glyc rol exempt d ADNase d ARNase et de prot ase 1L 10468343 Ficoll 400 m m 400 000 exempt d ADNase d ARNase et de prot ase grade Biologie mol culaire
19. mmage sont pr sentes sur la cuve ext rieure ou sur le couvercle Ces unit s sont conformes aux directives statutaires CE relatives la s curit 73 23 CEE Directive Basse tension CEI 1010 1 1990 plus Amendement 1 1992 EN 61010 1 1993 BS EN 61010 1 1993 www eu fishersci com fisherbrand Fisherbrand QUALITY RELIABILITY VALUE MANUEL D INSTRUCTIONS Unit s d lectrophor se horizontale format large Contenu de l emballage N de cat Obturateurs de moulage Peigne paisseur nombre de Ports de recirculation AINES ENEE EENE l du gel en plastique dents et quantit du tampon J I 11573362 11553352 11573352 11563352 FHU10W2C120 x2 NON FHU10WMK2 FHU10W2CG i tira 20 amp ch ntillons FHU10W2UT 11563382 11503392 IFHUN a C x2 11593382 11583382 FHU13WMK2 FHU13W2CG 1 mm 25 chantillons FHUBRP FHU13W2UT14 Les listes de contenu de l emballage doivent tre consultees des la reception des unit s afin de s assurer que tous les composants ont t livr s L absence de dommages sur l unit doit tre v rifi e la r ception En cas de probl me ou si un l ment est manquant veuillez contacter Fisher Scientific www eu fishersci com fisherbrand Caracteristiques du systeme Structure Structure solide en acrylique Tous les raccords en acrylique sont lies chimiquement C bles a double isolation avec une tension maximale nominale de 1 000 V Connecteurs lec
20. nt deux mod les recommand s N de cat 12643546 N de cat 12613546 R gler la tension et l intensit qui conviennent l application d lectrophor se titre indicatif pour obtenir la r solution optimale sur les fragments d ADN les gels d agarose ne doivent pas tre soumis a des champs sup rieurs a 5 V cm Voir le tableau Conditions de fonctionnement ci dessous pour les r glages de tension et d intensit recommand s IMPORTANT La tension et l intensit recommand es ne doivent pas tre d pass es sous peine de d grader la r solution de bande et d endommager l unit Pour les migrations de longue dur e il peut tre n cessaire d effectuer une recirculation du tampon afin d viter les surchauffes ou l puisement du tampon Des ports de recirculation sont pr sents sur l unit 11563382 IMPORTANT Lorsque la recirculation du tampon est utilis e ne pas oublier que la solution tampon qui circule dans les tuyaux est sous tension Prendre toutes les pr cautions n cessaires Les autres personnes travaillant proximit doivent tre averties du danger potentiel Solliciter les conseils du responsable de la s curit Conditions de fonctionnement N de cat Tension de fonctionne Intensit de fonctionne Volume de gel pour Volume de tampon Distance de s paration i ment normale V ment normale mA un gel de 5 mm mL approximatif mL des lectrodes mm 11553352 150 100 75 400 160 11563382 15
21. ou un incubateur r gl sur 70 C ou sur un bloc de chauffage magn tique contenant un agitateur magn tique Le flacon doit toujours tre couvert pour viter l vaporation du tampon ce qui produirait un gel de concentration sup rieure La dissolution de l agarose peut prendre plus d une heure avec ces m thodes L agarose peut aussi tre dissoute en cinq dix minutes au four micro ondes La solution d agarose doit tre couverte et le four micro ondes r gl sur une puissance faible L agarose se dissout mieux si le four est p riodiquement arr t pour agiter la solution Avant de verser il convient de v rifier dans la solution d agarose l absence de cristaux d agarose non dissous qui sont susceptibles de modifier les caract ristiques de mobilit des gels Si de tels cristaux sont presents la dissolution de l agarose doit tre poursuivie La solution d agarose doit tre refroidie jusqu une temp rature comprise entre 50 et 60 C avant de verser Si le gel est vers a une temp rature trop lev e il sera davantage susceptible de fuir et le peigne pourrait se d former lectrophor se en gel d agarose Mobilit de l ADN Des fragments d ADN d une taille de 1 kb ou inf rieure peuvent tre s par s par lectrophor se en gel d agarose Pour des fragments d une taille inf rieure 0 1 kb les gels de polyacrylamide sont mieux adapt s Mobilit de l ARN L ARN doit tre denature avant ou pendant l lectrophor se
22. r consulter la liste des tampons pour les applications d lectrophor se d ADN Remarque En raison de sa capacit tampon inf rieure le TA peut n cessiter une circulation ou un m lange de temps autre pour r aliser des lectrophor ses sur toute la longueur en particulier des tensions lev es Temp rature L lectrophor se haute tension produit de la chaleur D autre part les tampons haute conductivit tels que le TAE produisent davantage de chaleur que les tampons faible conductivit Pour les lectrophor ses en gel d agarose avec des tensions sup rieures 175 V des pr cautions doivent tre prises car l accumulation de chaleur est susceptible de produire des artefacts dans le gel notamment des fronts de migration en S et les lectrophor ses longues peuvent m me faire fondre le gel d agarose Les gels d agarose avec un point de fusion faible ne doivent pas tre utilis s pour les migrations haute tension Visualisation d ADN Pour tablir la progression d ADN double brin du bromure d thidium 0 5 ug mL est souvent ajout au tampon de migration voir la page 18 pour une liste des produits de bromure d thidium Les propri t s de fluorescence du colorant permettent de visualiser la bande sous une lampe UV Cependant le bromure d thidium peut r duire la vitesse de migration de l ADN d environ 15 Autrement apr s l lectrophor se le gel peut tre marque dans une solution de bromure d
23. ration Quantit AL 20L 500 mL FE AL 20L tl 500 mL Mi Al 20L TBE Exempt d ADNase et d ARNase N de cat 10754914 10715684 10755104 11898562 10727224 10031223 10563155 10448543 Concentration Quantite on AL 20L 1 L iL 4L 20 L 1 1 Poudre pr pes e dans une bouteille en polym re Dissoudre dans de l eau Poudre pr pes e dans un emballage en feuille d aluminium Dissoudre dans de l eau www eu fishersci com fisherbrand Tampons pour l lectrophor se d ADN Fisher BioReagents Article N de cat Quantite Base Tris 10103203 500 g 10376743 1 kg 10724344 5 kg 10667243 10 kg 10336793 25 kg Acide acetique glacial 10021123 500 mL Acide borique 10522595 500 g 10011083 1 kg Sel disodique d EDTA 10618973 500 g 10522965 1 kg Tampons l lectrophor se d ARN Le MOPS est un systeme tampon couramment utilis pour l lectrophor se d ARN avec de l ARN d natur au formaldehyde ou au formamide Il est important d utiliser des produits chimiques de l eau et des recipients exempts d ARNase pendant la preparation de la solution tampon La formulation typique d un tampon de migration MOPS 10X est du MOPS 0 4 M pH 7 0 de l ac tate de sodium a 0 1 M et de l EDTA 0 01 M MOPS Exempt d ADNase d ARNase et de prot ase N de cat 10234673 10234723 10655025 11889191 10295243 10336503 11448023 10245203 Descript
24. s r actifs convenant l utilisation avec de l instrumentation de synth se de prot ines Grade lectrophor se de prot ines Mat riau utilis sp cifiquement pour les applications d lectrophor se de prot ines Sequencage Mat riau con u pour l utilisation avec de l quipement automatis de sequencage d ADN ou de prot ines Super pur Mat riau avec un niveau de puret d passant les diff rents grades des monographies Grade Culture de tissus Mat riaux de qualit sup rieure pour lesquels il n existe pas de normes publi es et qui conviennent l utilisation dans les applications de culture de tissus www eu fishersci com fisherbrand Fisherbrand QUALITY RELIABILITY VALUE MANUEL D INSTRUCTIONS Unit s d electrophorese horizontale format large Agaroses pour l lectrophor se d ADN Tous les agaroses Fisher BioReagents sont exempts d ADNase et d ARNase afin de garantir des r sultats optimaux vos applications d acides nucl iques a Fisher BioReagents Les trois grades d agarose disponibles ont t fonctionnellement test s et pre qualifies pour les applications sp cifiques suivantes e Grade Analyse g n tique Agarose qui produit de l ADN ou de l ARN biologiquement actif Les tests incluent des mesures de performance enzymatique e Grade de biologie mol culaire Agarose qui convient a la s paration analytique de l ADN ou de l ARN e Grade PCR Agarose q
25. ssurer que le peigne est vertical pendant le moulage afin que les puits ne soient pas d form s R duire le niveau du tampon 1 mm au dessus du gel Ceci r duira le gradient de temp rature dans le gel Augmenter la concentration de l chantillon et utiliser un gel fin 2 mm 3 mm avec un peigne fin 1 mm R duire la quantit d acides nucl iques dans l chantillon Mauvaise r solution de bande Ajouter du Ficoll n de cat 10468343 voir page 16 du glyc rol n de cat 10021083 voir page 16 ou du sucrose au tampon de charge de l chantillon pour s assurer que l chantillon forme une couche au fond du puits S assurer que l chantillon est enti rement dissous R duire la tension la concentration de l chantillon ou le volume de l chantillon S assurer qu il ya au moins 1 mm de gel en dessous du peigne pour viter que les chantillons ne fuient par le dessous du puits R duire la concentration en sel de l chantillon Des concentrations en sel lev es sont susceptibles de produire des lignes pinc es des lignes brouill es et des fronts de colorant incurv s et de ralentir la migration V rifier l activit des enzymes l utilisation d une dur e de digestion plus longue ou d un autre tampon de restriction pourrait tre n cessaire Pr parer un nouvel chantillon si une contamination de nucl ase est soupconnee Choisir un agarose avec une valeur d endosmose faible Le g
26. t la norme de puret est tablie par Fisher Chemical Le respect des limites maximales de concentration d impuret s est garanti Grade ADN D signe les r actifs convenant l utilisation dans les applications de biologie mol culaire impliquant la manipulation d ADN Test pour des contaminants sp cifiques tels que l ADNase et la prot ase Synth se d ADN D signe des r actifs convenant l utilisation avec de l instrumentation automatis e de synth se d ADN lectrophor se Mat riau utilis sp cifiquement pour les applications d lectrophor se Grade Analyse Mat riau sp cifiquement pr par pour diverses applications de clonage mol culaire Test pour des g n tique contaminants sp cifiques tels que l ADNase et l ARNase Grade IEF Mat riau convenant l utilisation avec la focalisation isoelectrique de prot ines Grade Isolement d ilots Mat riau convenant l isolement d ilots pancreatiques Grade Biologie D signe les r actifs convenant l utilisation dans les applications de biologie mol culaire Test pour mol culaire des contaminants sp cifiques tels que les nucl ases et les bact ries selon les besoins G n tique mol culaire Mol cules r actives sp cifiquement purifi es et test es pour des applications de g n tique mol culaire Grade PCR Mat riau convenant a l utilisation avec la r action en cha ne par polymerase PCR Synth se de peptides D signe de
27. thidium H20 0 5 ug mL pendant 15 a 60 minutes puis visualis ou photographie avec un transilluminateur a UV Remarque La dur e de marquage doit tre minimisee pour viter que de petits fragments d acide nucl ique ne diffusent hors du gel La fluorescence de fond du bromure d thidium non li peut tre minimis e en liminant le marquage par un trempage du gel pendant 5 minutes dans du MgCl 0 01 M ou pendant 30 minutes dans de l eau d ionis e ES eee Le bromure d thidium est un mutagene av r Des gants doivent toujours tre port s pour le manipuler Porter des lunettes de s curit UV et prot ger la peau avant d utiliser toute source de lumi re UV www eu fishersci com fisherbrand ANNEXE Sp cifications des peignes Les tableaux suivants indiquent la gamme complete des peignes disponibles a utiliser avec les unit s 11553352 et 11563382 Utilisation de plusieurs peignes Tous les syst mes Fisher Scientific permettent d utiliser plusieurs peignes Cette fonctionnalit augmente consid rablement le nombre d chantillons d ADN plasmidiques mini prep qui peuvent tre cribl s En utilisant la rang e de puits inf rieure sur le gel des fragments de r f rence peuvent tre ajout s pour l hybridation par transfert d ADN southern blot Remarque les fragments de r f rence doivent tre ajout s a la rang e inf rieure et laiss s migrer dans le gel pendant quelques minutes avant la fin
28. triques plaqu s or anti corrosion et avec une tension maximale nominale de 1 000 V Connecteurs d alimentation en retrait int gr s au couvercle de s curit lectrodes de platine de 0 2 mm de diam tre d une puret de 99 99 Plateaux de moulage de gel amovibles transparents aux UV Unit Midi Plus format large fournie avec un plateau de moulage des obturateurs de moulage et des joints int graux en silicone Peignes avec un code de couleurs indiquant l paisseur 1 0 mm blanc 1 5 mm rouge 2 0 mm bleu e Peignes hauteur r glable Consignes et limites d utilisation e Altitude maximale 2 000 m e Plage de temp rature entre 4 C et 65 C e Humidit relative maximale de 80 pour des temp ratures allant jusqu 31 C et d croissant lin airement jusqu a 50 d humidit relative a 40 C e Ne convient pas l utilisation en ext rieur Cet appareil est class DEGR DE POLLUTION 2 en conformit avec la norme CEI 664 Le DEGR DE POLLUTION 2 indique que seule une pollution non conductrice est occasionnellement produite cependant une conductivit temporaire caus e par la condensation doit tre attendue www eu fishersci com fisherbrand MANUEL D INSTRUCTIONS Unit s d electrophorese horizontale format large Fisherbrand QUALITY RELIABILITY VALUE Entretien et maintenance Nettoyage des unites horizontales Les unites doivent tre nettoyees avec de l eau chaude et un d tergent doux L eau a
29. ui convient la s paration analytique d amplicons de PCR lt 1 kb Guide de s lection de l agarose Type d agarose EEO faible Point de Point de Large Grade PCR fusion lev fusion faible intervalle de gt 200 bp lt 1 kb s paration N de cat 10766834 10377033 10583355 10688973 10522775 100 9 25 9 100 g 100 9 100 g 10366603 10776644 500g 900 9 R cup ration d ADN ou d ARN 8 e 9 Transfert d ADN southern blot et d ARN northern blot e S paration dADN ARN de 50 bp a 1 kb e S paration d ADN ARN gt 1 kb e 8 Analyse de fragments de PCR e a e o R actions de ligature intra gel transformations PCR Prelevements de colonies Grade Agarose Biologie mol culaire Biologie mol culaire Analyse g n tique Analyse g n tique Grade PCR Tampons pour les applications d lectrophor se d ADN Le tris ac tate avec EDTA et le tris borate avec EDTA sont deux tampons couramment utilis s pour l lectrophor se d ADN Le pH de ces tampons tant neutre le squelette phosphate de l ADN a une charge nette negative et migre vers l anode Le TAE et le TBE ont des propri t s diff rentes qui les rendent plus adapt s des finalit s sp cifiques TAE Exempt de DNase RNase et pro t ase N de cat 10542785 10123293 10628403 10041223 10775494 10775494 10490074 10457583 10490264 10542985 10326463 10255303 Concent
30. une temp rature sup rieure a 60 C est susceptible d endommager l unit et les composants La cuve doit tre rinc e abondamment avec de l eau chaude ou de l eau distillee pour emp cher l accumulation de sels mais il est n cessaire de veiller a ne pas endommager l lectrode int gr e Un nettoyage vigoureux n est ni n cessaire ni recommand ll est pr f rable d effectuer un s chage l air avant l utilisation Les unit s doivent uniquement tre nettoy es de la mani re indiqu e ci dessous e Eau chaude avec une faible concentration de savon ou autre d tergent doux Les unit s ne doivent pas tre laiss es plong es dans du d tergent pendant plus de 30 minutes e Elles doivent ensuite tre rinc es imm diatement avec de l eau distillee e Exemples de detergents compatibles liquide vaisselle hexane et hydrocarbures aliphatiques Les unit s ne doivent jamais entrer en contact avec les agents de nettoyage suivants sous peine de causer des dommages irr versibles et cumul s e L acetone le ph nol le chloroforme le t trachlorure de carbone le m thanol l thanol l alcool isopropylique et les alcalins D contamination de l RNase Cette op ration peut tre effectu e avec le protocole suivant e Nettoyer les unites avec un d tergent doux comme indiqu ci dessus e Laver avec du peroxyde d hydrog ne 3 H202 pendant 10 minutes e Rincer avec de l eau distill e trait e au DEPC diethyl pyrocarbonate

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