Phytohaemagglutinin (Reagent Grade) [FR]
Contents
1. Voir le paragraphe Interpr tation des r sultats 12 BIBLIOGRAPHIE 1 International Enterobacteriaceae Subcommittee Reports 1958 Int Bull bact Nomencl Taxon 8 25 2 Edwards P R and Ewing W H 1972 Identification of Enterobacteriaceae 3rd Ed Minneapolis Burgess Publishing Co 13 CONDITIONNEMENT ZA01 R30954901 2 ml ZA17 R30955801 2 ml ZAO2 R30955001 2 ml ZA03 R30955101 2 ml ZA11 R30955201 2 ml ZA12 R30955301 2 ml ZA13 R30955401 2 ml ZA14 R30955501 2 ml ZA15 R30955601 2 ml ZA18 R30955901 2 ml ZA19 R30956001 2 ml ZA20 R30956101 2 ml ZA21 R30956201 2 ml ZA22 R30956301 2 ml ZA23 R30956401 2 ml ZA24 R30956501 2 ml ZA16 R30955701 2 ml ZA25 R30956601 2 ml L gende des symboles R f rence de catalogue Dispositif m dical de diagnostic in vitro Consulter le mode d emploi Limite de temp rature Code de lot CE auiseramm O Cas SS IFU X7814A R vis Octobre 2013 Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT Royaume Uni Pour tout support technique contacter le distributeur local2. recommand e soit la st rilisation par autoclave pendant au moins 15 minutes 121 C Le mat riel usage unique doit tre st rilis par autoclave ou incin r 3 Les claboussures de mat riaux potentiellement infectieux doivent tre limin es imm diatement l aide d un papier absorbant et les surfaces contamin es doivent tre nettoy es avec un d sinfectant antibact rien standard ou de l alcool 70 Le mat riel utilis pour l limination des claboussures y compris les gants doit tre limin comme s il s agissait de d chets biologiquement dangereux 4 Ne pas effectuer de pipetages la bouche Pour manipuler les chantillons et effectuer le test porter des gants usage unique et des lunettes de protection Une fois le test termin se laver soigneusement les mains 5 Ces r actifs contiennent du ph nol Bien que sa concentration soit faible le ph nol est connu comme tant toxique par ingestion et par contact avec la peau Ne pas avaler les r actifs Si l un d entre eux entre en contact avec la peau ou les yeux laver la surface en rin ant imm diatement et abondamment l eau 6 Conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire il est fortement recommand de traiter les chantillons et r actifs comme s ils taient potentiellement infectieux et de les manipuler avec toutes les pr cautions n cessaires PRECAUTIONS D ANALYSE 1 Ne pas utiliser les antis rums au del de
3. Introduire 0 5 ml de la suspension d antig ne dans chaque tube Ceci a pour effet de doubler la dilution d antis rum Pr voir un tube t moin le tube 8 contenant uniquement de la suspension et du diluant Homog n iser en retournant Laisser incuber pendant la nuit 16 20 heures 50 C Observer s il se produit une agglutination en utilisant une lumi re indirecte 8 RESULTATS Agglutination sur lame L agglutination doit tre forte et clairement visible au bout d 1 minute Il ne doit se produire aucune agglutination visible dans la suspension t moin si ce n est pas le cas la suspension n est pas appropri e pour une analyse par cette m thode Agglutination en tube Dans une r action positive une agglutination granulaire manifeste doit appara tre I peut se produire un claircissement du liquide et un s diment qui monte sous forme de masse granulaire puis se red pose au fond du tube en tapotant le tube Dans le cas d une r action n gative ainsi que pour le s rum physiologique t moin l aspect de la suspension doit rester inchang et le s diment doit se remettre en suspension en tapotant le tube Une agglutination dans le tube t moin indique une suspension peu homog ne qui n est pas appropri e pour le test CONTROLE QUALITE Il est recommand de tester le produit tout au long de son utilisation avec des cultures positives et n gatives connues Les cultures cellulaires homologues doive
4. S rums d agglutination d Escherichia coli FR R30954901 R30955001 R30955101 R30955201 R30955301 R30955401 R30955501 R30955601 R30955701 R30955801 R30955901 R30956001 R30956101 R30956201 R30956301 R30956401 R30956501 R30956601 1 DOMAINE D APPLICATION Les s rums d agglutination d Escherichia coli sont destin s tre utilis s dans des tests d agglutination pour l identification pr somptive des s rotypes d E coli traditionnellement associ s une gastro ent rite infantile Il est toutefois important de confirmer l appartenance d un organisme l esp ce E coli par un test biochimique pour tablir l identification s rologique tant donn que les diff rentes esp ces d ent robact ries pr sentent de nombreux composants antig niques communs 2 RESUME ET EXPLICATION DU TEST La plupart des souches pathog nes d Escherichia coli responsables de gastro ent rites infantiles pr sentent les r actions biochimiques classiques du type f cal comme le montre le tableau 1 2 Il se peut que certaines souches d E coli ne fermentent pas le lactose qu elles soient ana rog nes ou indole n gatives Ces souches ne doivent pas tre exclues de l analyse s rologique Tableau 1 Glucose Lactose Mannitol Inositol Inuline Adonitol Cellobiose Citrate de Rouge de Voges idole Ha Unease Simmons Methyl Proskauer Les esp ces sont diff renci es s rologi
5. la date de p remption indiqu e Eviter la contamination microbienne des antis rums ceci pouvant provoquer des r sultats erron s et r duire la dur e de vie du produit 2 Ne pas modifier la proc dure du test ni le temps d incubation ou les temp ratures 3 Apr s emploi replacer les s rums la temp rature de conservation recommand e 2 8 C 4 Les antis rums polyvalents ne peuvent tre utilis s qu avec les tests d agglutination sur lame 6 PRELEVEMENT TRANSPORT ET CONSERVATION DES ECHANTILLONS Pour de plus amples informations sur le pr l vement et la pr paration des chantillons se r f rer un manuel de r f rence Il est recommand d utiliser des cultures r centes sur milieux non s lectifs par exemple sur g lose nutritive 7 PROCEDURE MATERIEL FOURNI Voir le paragraphe Composition du coffret MATERIEL N CESSAIRE MAIS NON FOURNI S rum physiologique 0 85 Lames de verre Anse microbiologique et bec bunsen Source de lumi re sur fond sombre Tubes essai et portoir Bain marie temp rature r glable avec thermom tre Chronom tre Pipettes NM au w N l S rum physiologique additionn de formol 0 5 PROCEDURE DU TEST Test d agglutination sur lame Etape 1 D poser 2 gouttes diff rentes 40 ul chacune de s rum physiologique sur une lame de verre Emulsionner les parties de la culture tester avec une anse dans chaque goutte de s rum ph
6. nt tre utilis es pour les organismes de contr le positif Pour les cultures de contr le n gatif utiliser Hafnia alvei Les cultures cellulaires peuvent tre obtenues partir des collections de culture de micro organismes telles que celles du NCTC ou de l ATCC INTERPRETATION DES RESULTATS Agglutination sur lame Une agglutination non sp cifique qui diff re en apparence de l agglutination sp cifique peut survenir avec la technique d agglutination sur lame surtout lorsque les bact ries utilis es sont issues de milieux s lectifs Cette agglutination est g n ralement fine et lente appara tre Agglutination en tube Le titre du s rum est la derni re dilution montrant une agglutination positive Un titre galant o approchant le titre inscrit sur le flacon doit indiquer une homologie Un titre d agglutination de 1 20 n est pas significatif un titre galant ou approchant celui inscrit sur le flacon indique que l antig ne est du m me groupe O que l antis rum 9 LIMITES DE LA METHODE Les s rums sont sp cifiques pour d autres s rotypes tr s r pandus d E coli Il est toutefois important de confirmer tout isolat par des tests biochimiques et s rologiques tant donn que les diff rentes esp ces d ent robact ries pr sentent de nombreux composants antig niques communs 10 RESULTATS ATTENDUS Agglutination visible en pr sence de cultures homologues 11 CARACTERISTIQUES SPECIFIQUES
7. phe Pr cautions et restrictions d emploi 8C 2 C Les s rums doivent tre conserv s entre 2 et 8 C pour garder leur activit au moins jusqu la date inscrite sur le flacon AGGLUTINATING SERUM S rums d agglutination d E Coli Produits par des lapins et conserv s avec du ph nol 0 5 Les s rums sont fournis dans des flacons avec t tine et compte gouttes Chaque flacon contient 2 ml de liquide et est pr t l emploi Lors de leur conservation il arrive que certains s rums se troublent l g rement Ceci n indique pas n cessairement leur d t rioration et ne provoque normalement pas d interf rences avec les r sultats les s rums peuvent cependant tre clarifi s par centrifugation ou par filtration travers une membrane 0 45 um avant l emploi Des s rums fortement troubles indiquent qu ils sont contamin s et doivent tre jet s 5 PRECAUTIONS ET RESTRICTIONS D EMPLOI Destin exclusivement au diagnostic in vitro R serv exclusivement un usage professionnel Pour obtenir des informations sur les composants potentiellement dangereux se r f rer la fiche de s curit fournie par le fabricant et l tiquetage du produit INFORMATIONS DE SECURITE 1 Manipuler toutes les bact ries conform ment aux directives appropri es en vigueur 2 L quipement non jetable doit tre st rilis en utilisant une proc dure appropri e apr s l emploi bien que la m thode la plus
8. propri s pour les tests d agglutination sur lame et en tube Une r action sur lame positive avec une colonie peut tre due la pr sence de l antig ne de surface K et le groupe O doit tre confirm par un test d agglutination en tube en utilisant une suspension O pr par e en chauffant une suspension de la colonie pendant 1 heure 100 C 4 REACTIFS COMPOSITION DU COFFRET S rums d agglutination d E Coli 1 flacon compte gouttes 2 ml ZA01 R30954901 E coli Polyvalent 2 026 K60 B6 055 K59 B5 0111 K58 B4 0119 K69 B14 0126 K71 B16 ZA02 R30955001 E coli Polyvalent 3 086 K61 B7 0114 K90 B 0125 K70 B15 0127 K63 B8 0128 K67 B12 ZA03 R30955101 E coli Polyvalent 4 044 K74 L 0112 K66 B11 0124 K72 B17 0142 K86 B ZA11 R30955201 E coli 026 K60 B6 ZA12 R30955301 E coli 044 K74 L ZA13 R30955401 E coli 055 K59 B5 ZA14 R30955501 E coli O86 K61 B7 ZA15 R30955601 E coli 0111 K58 B4 ZA16 R30955701 E coli 0112 K66 B11 ZA17 R30955801 E coli 0114 K90 B ZA18 R30955901 E coli 0119 K69 B14 ZA19 R0956001 E coli 0124 K72 B17 ZA20 R30956101 E coli 0125 K70 B15 ZA21 R30956201 E coli 0126 K71 B16 ZA22 R30956301 E coli 0127 K63 B8 ZA23 R30956401 E coli 0128 K67 B12 ZA24 R30956501 E coli 0142 K86 B ZA25 30956601 E coli 018c K77 B21 DESCRIPTION PREPARATION POUR UTILISATION ET CONDITIONS DE CONSERVATION RECOMMANDEES Se r f rer galement au paragra
9. quement et les souches reconnues pathog nes correspondent un nombre restreint de s rotypes 2 types d antig nes O somatique et K de surface permettent leur distinction Les antig nes K qui caract risent la plupart des souches ent ropathog nes d E coli appartiennent au sous groupe B On les trouve sur les enveloppes ou capsules et ils sont inactiv s par chauffage 100 C pendant 1 heure Les antig nes O thermostables restent intacts apr s ce traitement Les s rums d agglutination d Escherichia coli contiennent des agglutinines pour les antig nes O et K Elles ont t absorb es pour supprimer les r actions crois es apparaissant avec d autres s rotypes tr s r pandus d E coli 3 PRINCIPE DE LA METHODE Les tests s rologiques sont bas s sur le fait que les anticorps contenus dans le s rum produits en r ponse l exposition des antig nes bact riens s agglutinent avec les bact ries portant les antig nes homologues Il est conseill d analyser tout d abord des cultures avec les s rums polyvalents destin s tre utilis s exclusivement avec les tests d agglutination sur lame Il faut examiner la fois les cultures mixtes et les colonies s lectionn es partir de la culture primaire Lorsque la pr sence de types pathog nes a t constat e en utilisant les s rums polyvalents une identification plus sp cifique peut tre obtenue avec les s rums monovalents Ceux ci sont ap
10. ysiologique pour donner une suspension uniforme bien compacte Dans l une des suspensions utilis es ajouter 1 goutte 40 ul de s rum physiologique comme t moin et homog n iser Ajouter dans l autre suspension 1 goutte 40 ul d antis rum non dilu et homog n iser Faire osciller la lame pendant 1 minute et observer s il se produit une agglutination plus facilement visible sur un fond sombre clair par une lumi re indirecte Eliminer la lame utilis e selon les r gles de d sinfection appropri es Test d agglutination en tube Etape 1 L antig ne peut tre pr par en mettant en suspension une colonie provenant d une culture sur g lose inclin e dans du s rum physiologique ou dans du s rum physiologique additionn de formol 0 5 pour donner une suspension de faible concentration environ 7 5 x 108 organismes ml Cette suspension doit tre chauff e pendant 1 heure 100 C pour obtenir une suspension d antig ne O il est galement possible d utiliser un bouillonde culture de ces organismes chauff pendant 4 6 heures Pr parer des dilutions en s rie d antis rum dans des volumes de 0 5 ml de s rum physiologique allant de 1 10 me 1 640 me comme indiqu dans le tableau 2 Retirer 0 5 ml du tube 7 Il convient d utiliser des tubes en verre avec un fond arrondi d environ 9 mm x 85 mm Tableau 2 physiologique ml S rum de _____Dilutions en s rie de 0 5 m patient ml
Download Pdf Manuals
Related Search