Test CEDIA® Benzodiazépines
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1. de 200 ng mL Compos ng mL Compos ng mL 11 nor A THC CO0H 10 000 Ibuprof ne 500 000 Ac taminoph ne 500 000 L vothyroxine 50 000 Acide ac tylsalicylique 500 000 M thadone 100 000 Acide salicylurique 100 000 M thamphetamine 500 000 Amoxicilline 100 000 Morphine 100 000 Amph tamine 500 000 Nif dipine 500 000 Benzoylecgonine 500 000 Phencyclidine 250 000 Captopril 500 000 Ph nobarbital 500 000 Cimetidine 500 000 Propoxyph ne 500 000 Cod ine 500 000 Ranitidine 500 000 Digoxine 100 000 S cobarbital 500 000 EDDP 500 000 Sertraline 250 000 EMDP 100 000 Tolm tin 500 000 Enalapril 500 000 V rapamil 500 000 Fluox tine 500 000 Aucune interf rence n a t observ e lorsque les substances suivantes ont t ajout es aux concentrations endog nes normales trouv es dans les urines soumises au test CEDIA Benzodiaz pines Compos Concentration Compos Concentration Ac tone lt 1 0 g dL y globuline lt 0 5 g dL Acide ascorbique lt 0 15 g dL Glucose lt 3 0 g dL Acide oxalique lt 0 1 g dL H moglobine lt 0 3 g dL Chlorure de sodium lt 6 0 g dL Riboflavine lt 7 5 mg dL Cr atinine lt 0 5 g dL Seralbumine humaine lt 0 5 g dL thanol lt 1 0 g dL Ur e lt 6 0 g dL Galactose lt 10 mg dL Sensibilit Application Standard Pour l analyse qualitative la limite de d tection LOD d finie 3 s de 21 exemplaires du calibrateur n gatif se situait 10 8 ng mL et2. analyseur Hitachi 717 en observant les directives d une exp rience de r plication modifi e NCCLS 6 exemplaires deux fois par jour pendant 10 jours Pr cision dans la s rie Pr cision totale ng mL 200 225 300 375 200 225 300 375 n 120 120 120 120 120 120 120 120 x 324 3 340 6 366 1 402 0 324 3 340 6 366 1 402 0 SD 24 27 2 8 3 7 11 4 12 5 13 2 14 6 cV 0 8 0 8 0 8 0 9 3 5 3 7 3 6 3 6 Exactitude 648 chantillons d urine ont t test s avec le test CEDIA Benzodiaz pines sur l analyseur Hitachi 717 par la m thode EIA titre de r f rence A et B Deux cents chantillons suppl mentaires et dix chantillons de contenu artificiellement lev avec du nitraz pam jusqu une gamme dans les 25 du seuil de 200 dans de l urine n gative ont t test s avec et sans l addition de l enzyme b glucuronidase sur l analyseur Hitachi 717 C Les r sultats suivants ont t obtenus C 200 ng mL Seuil A 200 ng mL Seuil B 300 ng mL Seuil with Enzyme CEDIA CEDIA CEDIA 111 2 93 2 CEDIA 87 0 EIA EIA without 5 530 14 539 enzyme 6 117 Sp cificit Les compos s parents et les m tabolites suivants ont t test s avec e test CEDIA Benzodiaz pines sans Glucuronidase etavec le test haute sensibilit avecB Glucuronidase Les pourcentages de r actions crois es suivants ont t obtenu
3. d coule sont proportionnelles la quantit de drogue pr sente dans l chantillon Afin d am liorer la sensibilit du test une enzyme facultative est ajout e pour hydrolyser les m tabolites glycuroconjugu s des benzodiaz pines favorisant ainsi le d pistage des chantillons contenant des m tabolites des benzodiaz pines R actifs 1 Tampon de reconstitution de VEA Contient pip razine N N bis 2 acide thanesulfonique 13 6 pg L anti corps polyclonaux de mouton anti benzodiaz pines sels tampons stabilisant conservateur a R actif EA Contient 0 171 g L Enzyme Accepteur sels tampons d tergent conservateur 2 Tampondereconstitutiondel ED Contient pip razine N N bis 2 acide thanesulfoniquel sels tampons conservateur 2a R actif ED Contient 9 7 pg L ED marqu un d riv de la benzodiaz pine 1 67g L rouge de chloroph nol galactopyranoside stabilisant conservateur Mat riel suppl mentaire tiquettes code barres de remplacement pour n de r f 100085 et 100094 Se r f rer la fiche technique sp cifique de l analyseur pour le mode d emploi Flacons vides d analyseur pour le transvasement des solutions EA ED n de r f 100094 Flacons vides d analyseur pour le transvasement des solutions ED n de r f 1775561 Mat riel suppl mentaire requis vendu individuellement talon n gatif CEDIA talon multi drogues CEDIA Seuils primaires ou Seuils cliniques primaires 300 ng
4. de t moins multi drogues ou le groupe de t moins cliniques multi drogues seuil de 300 ng le groupe de t moins sp ciaux ou le groupe de t moins optionnels seuil de 200 ng CEDIA pour le contr le qualit L appareil doit tre recalibr chaque changement de r actifs et en cas d cart dans les valeurs de contr le La fr quence des contr les doit tre d termin e par le laboratoire L valuation du contr le qualit doit se baser sur les valeurs obtenues par les t moins elles doivent se situer dans les limites sp cifi es En cas de d tection d une tendance la hausse ou la baisse ou de d calages soudains v rifier tous les param tres de fonctionnement Pour plus de renseignements s adresser au service technique Microgenics une division de Thermo Fisher Scientific Toutes les exigences de contr le qualit doivent tre appliqu es conform ment aux r glements locaux r gionaux et nationaux ou aux conditions d agr ment R sultats et valeurs th oriques R sultats qualitatifs Les talons multi drogues Seuils primaires Seuils cliniques primaires Seuils secondaires ou Seuils optionnels CEDIA servent de r f rence pour diff rencier les chantillons positifs des chantillons n gatifs Les chantillons g n rant une r ponse dont la valeur est gale ou sup rieure celle de l talon sont consid r s comme positifs Les chantillons dont le r sultat est inf rieur celui de l talon sont consid r s c
5. 12 8 ng mL pour les protocoles de seuil de 200 ng ml et 300 ng mL respectivement Pour l analyse semi quantitative la limite de d tection LOD d finie 3 s de 21 exemplaires du calibrateur n gatif se situait 6 4 ng mL et 8 3 ng mL pour les protocoles de seuil de 200 ng mL et 300 ng mL respectivement Application de Haute sensibilit Pour l analyse qualitative la limite de d tection LOD d finie 3 s de 21 exemplaires du calibrateur n gatif se situait 12 3 ng mL pour le protocole de seuil de 200 ng mL Pour l analyse semi quantitative la limite de d tection LOD d finie 3 s de 21 exemplaires du calibrateur n gatif se situait 7 3 ng mL pour le protocole de seuil de 200 ng mL Bibliographie 1 Hawks RL Analytical methodology In Hawks RL Chiang CN eds Urine testing for drugs of abuse NIDA Research Monograph 1986 73 30 41 2 Katzung BG ed Basic and clinical pharmacology 5th ed Norwalk Conn Appleton amp Lange 1992 3 Julien RM A primer of drug action 6th ed New York NY W H Freeman amp Co 1992 4 Goodman and Gilman s The Pharmacological basis of therapeutics 8th ed New York NY Pergamon Press 1990 5 Adams EH Prevalence of prescription drug abuse Data from the National Institute on Drug Abuse NY State J Med 199 91 suppl 11 32s 36s 6 Henderson DR Friedman SB Harris JD et al CEDIA a new homogeneous immunoassay system Clin Chem 1986 32 1637 1641 7 Bec
6. Test CEDIA Benzodiaz pines Thermo SCIENTIFIC IVD Pour Usage Diagnostique In Vitro REF 10016409 3 x 17 mL Indiko Kit 100085 Coffret de 3 x 17 mL 100094 Coffret de 65 mL 1775561 Coffret de 495 mL Application Le test CEDIA Benzodiaz pines est un dispositif m dical de diagnostic in vitro permettant le dosage qualitatif et semi quantitatif des benzodiaz pines dans l urine humaine Ce test ne fournit qu un r sultat pr liminaire Il est n cessaire de confirmer les r sultats analytiques obtenus l aide d une m thode chimique alternative de diagnostic plus sp cifique Utiliser alors de pr f rence la chromatographie en phase gazeuse spectrom trie de masse CG SM Les r sultats de ce test doivent tre interpr t s en tenant compte du tableau clinique et de l avis d un professionnel avant de conclure l utilisation d une drogue toxicomanog ne en particulier si des r sultats positifs pr liminaires sont utilis s R sum et description du test Les benzodiaz pines appartiennent une large classe de d presseurs du SNC connue sous le nom de s datifs hypnotiques Elles sont prescrits en tant qu anxiolytiques somnif res anticonvulsivants myorelaxants ells sont galement souvent utilis es en tant que pr anesth siques ainsi que pour compl ter provoquer et maintenir l anesth sie 24 Bien qu elles soient tr s souvent prescrites en tant que m dicaments les benzodiaz pines sont galement p
7. her Scientific Des tiquettes code barres suppl mentaires sont fournies pour une d termination semi quantitative avec les kits de 17 et de 65 ml seulement Pour les utiliser recouvrir l tiquette de chaque flacon de celle qui convient Contr le de qualit et calibration Analyse qualitative Pour r aliser une analyse d chantillons qualitative utiliser l talon multi drogues Seuils primaires Seuils cliniques primaires Seuils optionnels ou Seuils secondaires CEDIA en fonction des seuils choisis pour analyser les r sultats Pour obtenir des r sultats haute sensibilit utiliser seulement le Seuil secondaire Se r f rer la fiche technique sp cifique de chaque appareil Analyse semi quantitative Pour r aliser une analyse d chantillons semi quantitative utiliser l talon multi drogues Seuils primaires Seuils cliniques primaires Seuils secondaires ou Seuils optionnels CEDIA en fonction des seuils choisis en conjonction avec l talon n gatif et les talons multi drogues moyen et haut pour analyser les r sultats Se r f rer la fiche technique sp cifique de chaque appareil Il est important de pr voir la v rification quotidienne des chantillons de patients et de l talonnage effectu l aide d chantillons de contr le Il est recommand d effectuer deux contr les de qualit l un de 25 sup rieur au seuil s lectionn l autre de 25 inf rieur au seuil s lectionn Utiliser le groupe
8. k O Lafolle P Hjemdahl P et al Detection of Benzodiazepine Intake in Therapeutic Doses by Immunoanalysis of Urine Two Techniques Evaluated and Modified for Improved Performance Clin Chem 1992 38 271 275 8 Simonsson P Liden A Lindberg S Effect of a Glucuronidase on Urinary Benzodiazepine Concentrations Determined by Flourescence Polarization Immunossay Clin Chem 1995 41 920 923 9 Notice of Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Program Final guidelines Federal Register 1994 110 June 9 11983 Revised Guidelines expected in 2002 10 Data on traceability are on file at Microgenics Corporation une division de Thermo Fisher Scientific 11 Donn es depos es aupr s de Microgenics Corporation une division de Thermo Fisher Scientific al EC REP Microgenics Corporation 46360 Fremont Blvd Fremont CA 94538 6406 tats Unis Soutien client et technique aux tats Unis Thermo Fisher Scientific Oy Ratastie 2 PO Box 100 01621 Vantaa Finland Tel 358 9 329100 Fax 358 9 32910300 1 800 232 3342 Pour des mises jour de la notice consulter www thermoscientific com diagnostics Autres pays Contacter le repr sentant local Thermo Fisher Scientific CEDIA Marque d pos e de la Soci t Roche Diagnotics Thermo SCIENTIFIC 10006458 2_FR 2012 07
9. ml talon multi drogues CEDIA Seuils secondaires ou Seuils optionnels 200 ng ml talon multi drogues CEDIA moyen talon multi drogues CEDIA haut Groupe de t moins sp ciaux ou groupe de t moins optionnels pour seuil de 200 ng ml Groupe de t moins multi drogues ou groupe de t moins cliniques pour seuil de 300 ng ml R actif f Glucuronidase pour test haute sensibilit Code barres alternatif pour utilisation haute sensibilit Utiliser avec les analyseurs Hitachi 911 912 et 917 A Avertissements et mises en garde Les r actifs contiennent de l azide de sodium viter tout contact avec la peau etles muqueuses En cas de contact rincer grande eau En cas de projection dans l il ou d ingestion consulter imm diatement un m decin L azide de sodium peut r agir dans les conduites de plomb ou de cuivre et former des azides m talliques explosifs Pour liminer les r actifs il est donc n cessaire de rincer abondamment l eau afin d viter toute accumulation d azides Nettoyer les surfaces m talliques expos es avec de la soude caustique 10 Pr paration et conservation des r actifs Voir les instructions donn es ci dessous pour la pr paration des solutions pour les analyseurs Hitachi Pour tous les autres analyseurs se r f rer la fiche technique sp cifique l analyseur Sortir le kit du r frig rateur imm diatement avant la pr paration des solutions Pr parer les solutions dans l ordre suivant p
10. nts non ouverts se r f rer la date de p remption figurant sur l tiquetage de la bo te ou des flacons Solution R1 60 jours r frig r e dans l analyseur ou entre 2 et 8 C Solution R2 60 jours r frig r e dans l analyseur ou entre 2 et 8 C Pr l vement et manipulation des chantillons Recueillir les chantillons d urine dans des r cipients propres en verre ou en plastique Centrifuger les chantillons pr sentant une forte turbidit avant de les analyser Tout chantillon d urine humaine doit tre manipul comme tant potentiellement infectieux Recueillir et tester un nouvel chantillon si on soup onne une adult ration de l chantillon d origine L adult ration des chantillons d urine peut affecter les r sultats du test Tout chantillon qui n est pas initialement test dans les 7 jours suivant son arriv e au laboratoire doit tre conserv dans un r frig rateur en milieu ferm conform ment aux The Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs Final Guidelines Notice Proc dure du test Pour r aliser ce test on peut utiliser un analyseur chimique capable de maintenir une temp rature constante de pr lever des chantillons la pipette de m langer des r actifs de mesurer des taux enzymatiques et d assurer le minutage de la r action Les fiches techniques avec les param tres sp cifiques des instruments sont disponibles aupr s de Microgenics une division de Thermo Fis
11. omme n gatifs Se r f rer la fiche technique sp cifique de l analyseur pour toute information compl mentaire R sultats semi quantitatifs L talon multi drogues Seuils primaires Seuils cliniques primaires Seuils secondaires ou Seuils optionnels CEDIA utilis en conjonction avec l talon n gatif et les talons multi drogues moyen et haut peut tre utilis pour estimer la concentration relative de benzodiaz pines Les r sultats de concentration doivent tre rapport s avec prudence car de nombreux autres facteurs sont susceptibles de fausser les r sultats d un test urinaire tels que l apport hydrique et autres facteurs biologiques Limitations 1 Un r sultat positif indique la pr sence de benzodiaz pines mais ne peut reconna tre ni mesurer une intoxication 2 La pr sence dans l chantillon d autres substances non num r es de m me que les erreurs techniques ou de manipulations peuvent conduire des r sultats erron s Performances sp cifiques Les donn es de performances typiques obtenues sur l appareil Hitachi 717 sont indiqu es ci dessous 11 Les donn es obtenues peuvent varier d un laboratoire un autre Pr cision L tude suivante a t men e sans ajouter le r actif B glucuronidase Les donn es sont repr sentatives des deux applications Des tudes mesurant la pr cision l aide de r actifs et de calibrateurs fournis dans le coffret ont donn les r sultats suivants en mA min avec un
12. our minimiser le risque de contamination possible R2 Solution Enzyme Donneur Relier un flacon 2a R actif ED un flacon 2 tampon ED l aide d un des raccords contenus dans le coffret Dissoudre le contenu du flacon 2a par retournements successifs et verser cette solution dans le flacon 2 sans perte de lyophilisat Eviter la formation de mousse D tacher le flacon 2a et le raccord du flacon 2 et les jeter Fermer le flacon 2 et le laisser reposer temp rature ambiante entre 15 et 25 C env 5 min M langer de nouveau et noter la date de reconstitution sur l tiquette R1 Solution Enzyme Accepteur Relier un flacon 1a R actif EA un flacon 1 tampon EA l aide d un des raccords contenus dans le coffret Dissoudre le contenu du flacon 1a par retournements successifs et verser cette solution dans le flacon 1 sans perte de lyophilisat Eviter la formation de mousse D tacher le flacon 1a etle raccord du flacon 1 et les jeter Fermer le flacon 1 et le laisser reposer temp rature ambiante entre 15 et 25 C env 5 min M langer de nouveau et noter la date de reconstitution sur l tiquette N de r f 100094 Analyseur Hitachi 717 911 912 ou 914 transvaser les r actifs reconstitu s dans les flacons vides correspondants de 100 mI R1 et R2 fournis avec le kit Hitachi 917 Modular Analytics P utiliser les r actifs reconstitu s sans transvaser les flacons Jeter les flacons de 100 ml vides N de r f 1775561 Analy
13. rises en tant que drogues toxicomanog nes La prise chronique de benzodiaz pines peut engendrer la d pendance physique accompagn e des sympt mes de manque suivants insomnie agitation irritabilit tension musculaire et dans les cas les plus graves hallucinations psychose et attaques 2 Le test CEDIA Benzodiaz pines utilise la technologie de l ADN recombinant brevet US n 4708929 et correspond une m thode immuno enzymatique en phase homog ne unique f Ce test utilise l enzyme bact rienne B galactosidase scind e au pr alable en deux fragments inactifs par g nie g n tique Ces fragments se r associent spontan ment pour former une enzyme pleinement active qui lors de la r action fragmente un substrat produisant un changement de coloration que l on peut mesurer par spectrophotom trie La drogue contenue dans l chantillon entre en comp tition avec la drogue conjugu e un des fragments inactifs de la B galactosidase pour se fixer sur les sites de liaison des anticorps Si la drogue est pr sente dans l chantillon elle se fixe sur les anticorps laissant ainsi les fragments inactifs de l enzyme former une enzyme active Si l chantillon ne contient pas de drogue les anticorps se lient la drogue conjugu e du segment inactif entravant la r association des fragments inactifs de B galactosidase ce qui emp che la formation d une enzyme active La quantit d enzyme active form e et la variation d extinction qui en
14. s Sans B Glucuronidase Avec B Glucuronidase Compos s Test es R action Test es R action ng mL crois es ng mL crois es 7 NH Flunitraz pam z 200 99 7 NH Nitraz pam 250 83 a 0H Alprazolam 163 188 115 167 a 0H Triazolam 150 193 125 155 Alprazolam 138 205 100 220 Bromaz pam 300 110 190 104 Chlordiazepoxyde 2083 13 1200 16 Clobazam 400 62 300 59 Clonaz pam 188 140 225 71 Cloraz pate 325 84 300 75 D lorazepam 150 184 100 197 D mox pam 1900 14 1000 19 D salkylfluraz pam 138 210 115 173 Diaz pam 110 241 125 154 Estazolam 125 220 95 239 Flunitrazepam 188 135 175 109 Fluraz pam 150 189 100 195 Glucronide de alprazolam 200 100 Glucronide de loraz pam 10000 1 400 45 Glucronide de oxaz pam 10000 1 800 25 Glucronide de t maz pam 10000 1 750 25 Halaz pam 200 145 200 101 Loraz pam 208 122 175 115 Lormetaz pam 163 165 150 137 M daz pam 200 135 150 118 NH Clonaz pam 200 96 Nitraz pam 300 100 200 100 Nordiaz pam 150 211 120 173 Oxaprozin 10000 2 10000 2 Oxaz pam 275 107 165 125 Praz pam 150 184 160 116 T maz pam 175 144 180 93 Triazolam 138 191 90 217 Des compos s non apparent s par leur structure ont t soumis au test CEDIA Benzodiaz pine en utilisant un protocole de seuil de 300 ng mL et ont donn un r sultat n gatif lorsqu ils ont t soumis aux concentrations ci dessous On observe la m me performance en utilisant le protocole de seuil haute sensibilit
15. seur Hitachi 747 Modular Analytics D l aide de l entonnoir fourni transf rer une partie de la solution R2 dans le flacon de solution R2 vide fourni et portant l tiquette correspondante Protocole Benzodiaz pines haute sensibilit pour utiliser le r actif 6 glucuronidase ajouter la solution reconstitu e de l EA 0 09 ml de B glucuronidase pour le n de r f 100085 0 425 ml pour le n de r f 100094 et 2 5 ml pour le n de r f 1775561 M langer par retournements lents Noter sur l tiquette du flacon l addition du r actif glucuronidase REMARQUE 1 Les composants de ce kit doivent tre utilis s ensemble Ne jamais m langer les r actifs de diff rents coffrets REMARQUE 2 veiller ne pas intervertir les bouchons des flacons de r actifs pour viter toute contamination crois e des r actifs La solution R2 doit tre jaune orang Une coloration rouge sombre ou rouge violac signifie que le r actif est contamin et doit tre limin REMARQUE 3 les solutions R1 et R2 doivent tre amen es la temp rature du compartiment de stockage de l analyseur avant de proc der au test Se r f rer la fiche technique sp cifique de l analyseur pour toute information compl mentaire REMARQUE 4 Pour assurer la stabilit de la solution EA reconstitu e ne pas l exposer de fa on prolong e ou continue une forte lumi re Stocker les r actifs entre 2 et 8 C NE PAS CONGELER Pour la stabilit des composa
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