VHE ELISA - MP Biomedicals
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1. 7 En cas d accident ou de contact avec les yeux rincer imm diatement avec une grande quantit d eau et consulter un m decin 8 Consulter imm diatement un m decin en cas d ingestion de substances contamin es ou de mise en contact avec des plaies ouvertes ou autres l sions cutan es 9 Ne jamais ajouter d eau la Solution d arr t 10 11 12 Essuyer imm diatement les claboussures de substances potentiellement infectieuses l aide de papier absorbant et nettoyer la zone contamin e l aide d une solution d hypochlorite de sodium 1 avant de reprendre le travail L hypochlorite de sodium ne doit tre utilis sur les claboussures contaminantes acides moins que la zone n ait t pr alablement essuy e et s ch e l aide de papier absorbant Le mat riel utilis y compris les gants jetables doit tre limin comme s il s agissait de mat riaux susceptibles de pr senter un danger biologique Ne pas mettre l autoclave les mat riaux contenant de lhypochlorite de sodium Mettre tous les mat riaux utilis s et contamin s autoclave 121 C 15 psi pendant 30 minutes avant limination Il est galement possible de d contaminer les mat riaux dans une solution d hypochlorite de sodium 5 pendant 30 60 minutes avant de les liminer dans des sacs poubelle pour produits pr sentant un danger biologique D contaminer tous les produits chimiques et r actifs2. Utiliser avant quipement Synonyme m dical usage Date de p remption diagnostique in vitro Code du lot de fabrication Num ro du Synonymes catalogue Num ro de lot Num ro de lot de Attention fabrication Voir les Instructions p4 Conditions de d utilisation conservation REDESETEAN Ml Fine ECJREF arune europ enne z 7 Contenance suffisante pour lt n gt tests Consulter les CH instructions d utilisation Ne pas r utiliser PRINCIPES CHIMIQUES amp BIOLOGIQUES DU TEST Les puits des bandelettes de la microplaque en polystyr ne sont recouverts de trois antig nes recombinants du VHE correspondant aux r gions structurelles du virus de lh patite E Les chantillons de s rum ou plasma humain dilu s dans un tampon diluant sont mis en incubation dans ces puits recouverts Les anticorps sp cifiques au VHE s ils sont pr sents se fixeront sur les antig nes VHE immobilis s sur la phase solide Les puits sont lav s abondamment afin d liminer les substances non fix es et une anti IgG humaine purifi e par affinit et marqu e la peroxydase de raifort est ajout e aux puits Cet anticorps marqu se fixera sur tout complexe antig ne anticorps pr alablement form et les anticorps marqu s non fix s en exc s seront limin s par lavage Un substrat contenant du 3 3 5 5 tetramethylbenzidine TMB est ensuite ajout chaque puit La couleur bleue apparaissant apr s ajout du substrat indique la
3. 788 1986 Courriel mpbiosuisse mpbio com Brevet tats Unis 5 741 490 5 770 689 5 885 768 5 686 239 Brevet Singapour 39445 49225 Australie 644878 Taiwan 63167 Cor e du sud 178399 180530 Autres brevets en cours Le nom et le logo Genelabs sont conc d s sous licence par Genelabs Technologies Inc
4. Un r sultat N GATIF au test VHE ELISA MPD signale l absence probable d anticorps d tectables dirig s contre le VHE dans le sp cimen Un r sultat N GATIF ne permet pas d exclure la possibilit d une exposition au VHE ou d une infection par le virus La possibilit de r sultats faussement positifs doit tre prise en compte avec les trousses d analyse de ce type La proportion de faux positifs d pend de la sensibilit et de la sp cificit de la trousse d analyse Pour la plupart des tests de d pistage plus la pr valence de l anticorps est lev e dans une population plus la proportion de faux positifs est r duite LIMITES DE GARANTIE Le fabricant ne garantit la trousse d analyse que pour un usage diagnostique in vitro sous r serve que soient respect es les sp cifications et limites d crites dans le Mode d emploi du produit et que celui ci soit utilis conform ment aux pr sentes instructions Le fabricant d cline toute responsabilit explicite ou implicite y compris celle implicite ou explicite li e la qualit marchande l aptitude l emploi ou le fonctionnement implicite une fin particuli re Le fabricant ne peut s engager que sur un remplacement ou un remboursement du produit Le fabricant ne peut tre tenu responsable par l acheteur ou toute autre partie d aucune d t rioration blessure ou perte financi re r sultant de l utilisation du produit Le fabricant n est pas en mesure de s eng
5. en cause et lanalyse doit tre r p t e Si la diff rence RCX NRCx est syst matiquement faible la possibilit d une d t rioration des r actifs peut tre envisag e R SULTATS Chaque microplaque doit tre prise en compte s par ment lors du calcul et de l interpr tation des r sultats de l analyse ind pendamment du nombre de plaques utilis es au cours d une m me analyse LES VALEURS D ABSORBANCE MOYENNES DU BLANC DOIVENT TRE SOUSTRAITES DES VALEURS D ABSORBANCE DES CONTR LES COMME DE CELLES DES PR L VEMENTS AVANT INTERPR TATION DES R SULTATS La pr sence ou l absence d anticorps IgG sp cifiques dirig s contre le VHE est d termin e par comparaison de l absorbance des sp cimens par rapport la VALEUR SEUIL de la plaque La VALEUR SEUIL du test VHE ELISA MPD est calcul e par addition de 0 500 l absorbance moyenne du contr le n gatif CALCUL DES R SULTATS 1 Calcul de l absorbance moyenne du contr le n gatif NRC x Exemple Puits N Absorbance C1 0 048 D1 0 046 E1 0 047 Total 0 141 Moyenne 0 141 3 0 047 NRCX a Chaque valeur du contr le n gatif doit tre de lt 0 100 Si l une des valeurs du contr le n gatif ne r pond pas aux crit res ci dessus elle doit tre consid r e comme aberrante et tre exclue La moyenne du contr le n gatif RCX doit alors tre recalcul e d apr s les valeurs de contr le n gatif restantes Toutes les
6. pr sence d anticorps sp cifiques La r action est achev e par l ajout d acide chlorhydrique L intensit de la coloration est d termin e par spectrophotom trie 450 nm Elle est proportionnelle la quantit d anticorps pr sente dans le pr l vement L MENTS DE LA TROUSSE Description du mat riel Quantit fournie MICROPLATE MICROPLAQUE VHE 1 plaque Douze bandelettes de 8 puits par 96 puits plaque emball es dans un sachet aluminium contenant un agent de dessiccation Chaque puits de la microplaque contient des prot ines recombinantes adsorb es du VHE Conserver entre 2 et 8 C CONTROLE CONTR LE N GATIF 1 flacon S rum humain normal inactiv 160 ul non r actif vis vis de l anti VHC lanti VHE l AgHBs et l anti VIH 1 Contient du thiomersal et de l azide de sodium comme conservateurs Conserver entre 2 et 8 C gt CONTR LE POSITIF 1 flacon AN S rum humain inactiv contenant 120 ul un titre lev en anticorps IgG sp cifiques du VHE Contient du thiomersal et de l azide de sodium comme conservateurs Conserver entre 2 et 8 C DILUANT 1 flacon Solution saline base de Tris 100 ml contenant du s rum de ch vre normal trait par la chaleur de l albumine s rique bovine et des stabilisants Contient du Bronidox comme conservateur Conserver entre 2 et 8 C wash Pme Jax SOLUTION CONCENTR E DE 1 flacon LAVAGE DE PLAQUE 20X 120 ml Solutio
7. une pipette canaux multiples ajouter 100 ul de SOLUTION D ARR T dans chaque puits M langer d licatement en tapotant la plaque D terminer labsorbance de chaque puits 450 nm Sur un appareil utilisant une longueur d onde double la longueur d onde de r f rence doit tre 620 nm 100 ul 30 minutes 300 ul par puits x 6 100 ul 15 minutes 100 ul REMARQUE La lecture de l absorbance doit tre effectu e dans 10 minutes qui suit l ajout de la SOLUTION D ARR T CONTR LE DE QUALIT 1 Le BLANC etle CONTR LE POSITIF doivent tre analys s en double et le CONTROLE NEGATIF en triple sur chaque plaque pour chaque lot de sp cimens 2 L absorbance du blanc doit tre de lt 0 100 3 L absorbance du contr le n gatif doit tre de lt 0 100 apr s soustraction du blanc 4 Au moins 2 des 3 valeurs du contr le n gatif doivent pr senter une absorbance de lt 0 100 apr s soustraction du blanc 5 L absorbance des 2 contr les positifs doit tre de gt 0 700 apr s soustraction du blanc Lorsqu une ou plusieurs des valeurs du contr le positif s carte de plus de 30 de la moyenne qui leur correspond le dosage est invalide et doit tre renouvel 6 Pour que l analyse soit valide la diff rence entre les absorbances moyennes du contr le positif et du contr le n gatif RCX NRCX doit tre de 0 600 ou plus Dans le cas contraire le d roulement des op rations peut tre mis
8. utilis s en y ajoutant le volume d hypochlorite de sodium n cessaire pour arriver une concentration finale d au moins 1 Laisser reposer pendant 30 minutes pour garantir le succ s de la d contamination PR CAUTIONS ANALYTIQUES 1 Le fonctionnement optimal du test n est possible que dans le RESPECT ABSOLU de la proc dure d crite dans ce Mode d emploi Le non respect de cette proc dure peut conduire l obtention de r sultats aberrants NE PAS MODIFIER OU CHANGER DES R ACTIFS PROVENANT DE TROUSSES DIFF RENTES La correspondance des contr les conjugu et microplaques a t tudi e pour un fonctionnement optimal Utiliser uniquement les r actifs fournis avec la trousse Ne pas utiliser les composants de la trousse au del de la date de p remption figurant sur l emballage de la trousse viter toute contamination microbienne des r actifs lors de louverture des flacons et du pr l vement des aliquotes de produit Ceci r duirait pr matur ment la dur e de conservation des trousses et pourrait conduire l obtention de r sultats erron s Utiliser des techniques aseptiques notamment les pipettes ou les embouts de pipette jetables lors du pr l vement des aliquotes de produit dans les flacons Afin d viter toute contamination crois e utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque chantillon et ne pas toucher le haut ou le bas des bandelettes le bord des puits ou le liquide qu ils contie
9. Ed Diagnostics VHE ELISA CE DATE DE R VISION 05 05 MBK 0011 FRA 0 21150 0967T 96 trousses de test NOM ET APPLICATIONS Le test VHE ELISA de MP Diagnostics MPD est un test par immunoadsorption avec enzyme conjugu destin la d tection des anticorps IgG dirig s contre le virus de l h patite E VHE dans le s rum ou le plasma humain Remarque modifications en surbrillance INTRODUCTION Le diagnostic de l h patite virale r sultant de l infection par le virus de l h patite A VHA et le virus de l h patite B VHB est rendu possible par l existence de tests s rologiques fiables et sensibles pour les marqueurs appropri s L absence clinique et diagnostique de marqueurs correspondant au VHA ou au VHB a permis d identifier un autre groupe d agents de l h patite virale regroup s sous le nom d h patites virus non A non B NANB 1 2 Deux formes pid miologiques distinctes d h patite NANB ont t identifi es transmises soit par voie parent rale soit par voie orale f cale 3 4 5 Le virus responsable de la plupart des cas d h patite NANB transmis par voie parent rale a t clon 6 Le clonage de cet agent d nomm virus de l h patite C VHC a permis la mise au point de tests diagnostiques visant d tecter l anticorps dirig contre le VHC Dans les pays en voie de d veloppement il existe une deuxi me forme pid miologiquement distincte d h patite NANB d sign e sous
10. TIFS 1 CONJUGU DE TRAVAIL a Le CONJUGU DE TRAVAIL doit tre pr par imm diatement avant utilisation b Pour pr parer le conjugu dilu diluer le conjugu au 1 500 dans le diluant fourni avec la trousse par exemple 10 ul de conjugu pour 5 mi de diluant c Utiliser exclusivement des r cipients et tubes en polypropyl ne d Consulter le tableau pour pr parer le conjugu de travail TABLEAU DE PR PARATION DU CONJUGU Nombre de tests Vol de conjugu ul Vol de diluant ml 96 24 0 12 0 TAMPON DE LAVAGE DILU a Le TAMPON DE LAVAGE DILU doit tre pr par imm diatement avant utilisation b Diluer 1 volume de CONCENTR DE LAVAGE DE PLAQUE dans 19 volumes d eau distill e de qualit r actif Bien m langer Un volume d approximativement 400 mli de tampon de lavage est n cessaire pour laver 1 plaque PROC DURE DU TEST IMPORTANT Les immunodosages de ce type sont sensibles la temp rature et d pendent du temps Le respect absolu de la proc dure d analyse garantit le fonctionnement optimal du test Le non respect de la proc dure recommand e peut conduire l obtention de r sultats aberrants 1 Sortir la microplaque du sachet aluminium 2 Secouer les flacons de pr l vement et de contr le avant utilisation 3 Remplir un r servoir r actif de 200 pl DILUANT A laide d une pipette canaux multiples ajouter 200 ul de DILUANT dans tous
11. ager implicitement ou explicitement ce que ce produit n empi te pas sur les droits de propri t intellectuelle de tierces parties PROBL MES TECHNIQUES R CLAMATIONS Dans l ventualit d un probl me technique d une r clamation proc der comme suit 1 Noter le num ro de lot de la trousse et sa date de p remption 2 Conserver les trousses et les r sultats obtenus 3 Contacter le bureau MP Biomedicals le plus proche ou votre distributeur local BIBLIOGRAPHIE 1 Feinstone S A Z Kapikian R H Purcell H J Alter and P V Holland 1975 Transfusion associated hepatitis not due to viral hepatitis type or B New England Journal of Medicine 292 767 2 Prince A M G F Grady and C Hazzi 1974 Long incubation post transfusion hepatitis without serological evidence of exposure to hepatitis B virus Lancet 2 241 3 Alter H J R H Purcell P V Holland and H Popper 1978 Transmissible agent in non A non B hepatitis Lancet 1 459 4 Balayan M S A G Andzhapandze S S Savinskaya E S Ketiladze D M Braginski A P Savinow V F Poleschuk 1983 Evidence for a virus in non A non B hepatitis transmitted via the fecal oral route Intervirology 20 23 5 Tabor E R J Gerety J A Drucker et al 1978 Transmission of non A non B hepatitis from man to chimpanzee Lancet 1 463 6 Choo Q L G Kuo A J Weiner L R Overby D W Bradley and M Houghton 1990 Isolation
12. its et par lavage 12 13 14 15 16 17 18 19 20 B Lavage manuel de la microplaque Aspirer la totalit du contenu des puits en abaissant d licatement l embout de l aspirateur jusqu au fond de chaque puit ATTENTION NE PAS RAYER LA SURFACE INTERNE DES PUITS Remplir la totalit de la plaque avec au moins 300 l puits puis aspirer imm diatement dans le m me ordre R p ter ce cycle six 6 reprises S cher la microplaque en la retournant sur un papier absorbant et en tapotant fermement Il ne doit pas subsister de tampon de lavage Tout r sidu de tampon de lavage risque d inhiber l apparition de la coloration pendant l incubation avec le substrat Remplir un r servoir r actifs avec le CONJUGU DE TRAVAIL l aide d une pipette canaux multiples ajouter 100 ul de CONJUGU DE TRAVAIL dans chaque puits Poser un nouveau film couvre plaques Incuber la microplaque pendant 30 minutes 37 C Ne pas incuber 37 C au bain marie Retirer et jeter le film couvre plaques Renouveler les tapes de lavage 11 et 12 Remplir un r servoir r actif avec la SOLUTION DE SUBSTRAT l aide d une pipette canaux multiples ajouter 100 ul de SOLUTION DE SUBSTRAT dans chaque puits Poser un film couvre plaques Incuber dans l obscurit pendant 15 minutes temp rature ambiante 25 83 C Retirer et jeter le film couvre plaques l aide d
13. le nom d h patite NANB transmission ent rique ET NANB Les principales pid mies d h patite ET NANB se sont produites en Asie dans l ancienne Union Sovi tique en Am rique centrale et en Afrique 7 8 La maladie volue g n ralement sur un mode aigu et spontan ment r solutif sans apparition de s quelles chroniques Elle s accompagne toutefois d une incidence lev e de la mortalit 10 20 chez les femmes enceintes 7 et d un taux de mortalit de 1 2 dans la population globale soit un taux 10 fois sup rieur celui du VHA L agent tiologique de l h patite ET NANB a t clon 9 et d nomm virus de lh patite E VHE Le clonage du VHE par les scientifiques a permis d identifier des pitopes viraux de type courant pouvant contribuer la mise au point d un test diagnostique de d pistage des anticorps dirig s contre le VHE 10 Le test VHE ELISA de MP Diagnostics utilise ces antig nes recombinants du VHE issus de la r gion structurelle du g nome viral pour d tecter la pr sence d anticorps dirig s contre le VHE DESCRIPTION DES SYMBOLES UTILIS S Ci apr s les symboles graphiques utilis s sur les produits et emballages des produits MP Diagnostics Ces symboles sont ceux qui apparaissant le plus fr quemment sur les dispositifs m dicaux et sur leurs emballages Ils sont d crits plus en d tails dans la notice de normalisation British and European Standard BS EN 980 2003 9
14. les puits 4 Les puits A1 et B1 font office de 10 Hi BLANCS NE PAS AJOUTER DE PR L VEMENT DANS CES PUITS Ajouter 10 ul de diluant suppl mentaires dans ces puits 5 Ajouter 10 ul du sp cimen au puits 10 ul d sign cet effet en commen ant par le puits H1 Ceci permettra d obtenir une dilution finale du pr l vement de 1 21 NE PAS METTRE DE SPECIMEN DANS UN PUITS VIDE 6 Une fois les pr l vements analyser 10 ul ajout s ajouter 10 ul de CONTROLE NEGATIF par puits dans les puits C1 D1 amp Et 7 Ajouter 10 ul de CONTR LE POSITIF 10 HI par puits dans les puits F1 et G1 M langer soigneusement en tapotant d licatement de chaque c t de la microplaque tout en veillant ce que la plaque reste bien plat sur la paillasse 8 Recouvrir la microplaque avec pr caution l aide de l un des films couvre plaques fournis afin d viter toute vaporation pendant l incubation 9 Laisser incuber pendant 30 minutes 30 minutes 37 C Ne pas incuber 37 C au bain marie 10 Pr parer le CONJUGU DE TRAVAIL comme indiqu dans la section PR PARATION DES R ACTIFS avant de laver la microplaque 11 Retirer et jeter le film couvre plaque puis 300 ul par laver la microplaque l aide de TAMPON puits x 6 DE LAVAGE DILU selon l une des deux m thodes recommand es A Laveur automatique ou semi automatique de microplaque Laver six 6 reprises avec au moins 300 ul par pu
15. leur pochette de conservation avec l agent de dessiccation fourni Les contr les de la trousse doivent tre dos s en m me temps que les chantillons des patients chaque cycle de test Prendre soin de ne pas toucher ou clabousser le bord du puits avec le conjugu Ne pas souffler dans la micropipette Il est recommand de proc der dans la mesure du possible un pipetage inverse L utilisation d chantillons fortement h molys s de s rums non totalement coagul s d chantillons plasmatiques contenant de la fibrine ou d chantillons ayant subi une contamination microbienne risque de conduire l obtention de r sultats erron s NE PAS INCUBER LES PLAQUES AU BAIN MARIE Les incubateurs CO ne doivent pas tre utilis s Lors de l incubation 37 C toute vaporation doit tre vit e Couvrir les plaques laide des films adh sifs couvre plaques fournis viter d ouvrir et fermer trop fr quemment la porte de l incubateur au cours des tapes d incubation Ne pas conserver la solution d arr t dans un r cipient peu profond et ne pas la replacer dans le flacon de stockage apr s utilisation V rifier que le bas de la plaque est propre et sec et que la surface du liquide ne pr sente aucune bulle avant de lire les r sultats sur la plaque Supprimer les bulles du puits en tapotant d licatement par exemple Avant utilisation v rifier que les quipements automatis s S ils sont utilis
16. n phosphate saline tamponn e avec du Tween 20 Contient du chloroac tamide comme conservateur Conserver entre 2 et 8 C CONJUGU 1 flacon IgG anti humaine de ch vre 70 pl marqu e la peroxydase de raifort Contient du thiomersal comme conservateur Conserver entre 2 et 8 C SUBSTRAT 1 flacon SUBS TMB Tampon contenant du 3 3 5 5 12 5 ml tetramethylbenzidine Conserver l abri de la lumi re entre 2 et 8 C SOLN STOP HCI IN SOLUTION D ARR T 1 flacon A Solution d acide chlorhydrique 30 ml 1 N Conserver l abri de la lumi re entre 2 et 8 C FILMS COUVRE PLAQUES 4 pi ces Films adh sifs pour couvrir la microplaque pendant l incubation MODE D EMPLOI 1 exemplaire Bronidox est une marque d pos e de Henkel Chemical Co PR CAUTIONS D UTILISATION Utilisation r serv e au diagnostic in vitro Utilisation r serv e aux professionnels Consulter l emballage du produit pour conna tre les composants susceptibles de pr senter un risque biologi2que SE INFORMATIONS RELATIVES LA S CURIT ET LA SANT ATTENTION Cette trousse contient des substances d origine humaine Aucune AN technique de test ne permet de garantir totalement que les produits sanguins humains ne sont pas susceptibles de transmettre une infection MANIPULER LES PR L VEMENTS TESTER ET LES CONTR LES POSITIFS ET N GATIFS COMME S IL S AGISSAIT D AGENTS POTENTIELLEMENT INFECTIEUX Il est rec
17. nnent avec les doigts ou embout de la pipette Il est recommand de nettoyer la verrerie devant tre utilis e pour les r actifs l aide d acide chlorhydrique 2M et de la rincer abondamment l eau distill e ou d ionis e avant utilisation 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Pour des r sultats optimaux laisser tous les r actifs et chantillons arriver temp rature ambiante 25 C 3 C avant utilisation Apr s utilisation les replacer imm diatement entre 2 et 8 C pour conservation Utiliser exclusivement de l eau d ionis e ou distill e de qualit r actif pour diluer les r actifs Tous les r actifs doivent tre convenablement m lang s avant utilisation Le solution conjugu e de travail et le tampon de lavage dilu doivent tre pr par s imm diatemnt avant leur utilisation Ne pas exposer les r actifs ou r aliser les analyses dans une zone pr sentant un niveau lev de vapeurs chimiques d sinfectantes par exemple des vapeurs d hypochlorite au cours de leur conservation ou de lincubation Une telle mise en contact inhibe la r action de coloration Ne pas exposer non plus les r actifs une forte luminosit Ne sortir les microplaques de leur pochette de conservation qu au moment pr cis de leur utilisation Les bandelettes non utilis es dont l emballage a t ouvert doivent tre conserv es entre 2 et 8 C dans
18. of a cDNA clone derived from a blood borne non A non B hepatitis genome Science 244 359 7 Bradley D W 1990 Enterically transmitted non A non B hepatitis pp 442 461 In A J Zuckerman ed British Medical Bulletin 46 2 Churchill Livingstone New York 8 Purcell R H and J R Ticehurst 1988 Enterically transmitted non A non B hepatitis Epidemiology and clinical characteristis pp 131 137 In A J Zuckerman ed Viral Hepatitis and Liver Disease Alan R Liss Inc New York 9 Reyes G R M A Purdy J P Kim K C Luk L M Young K E Fry and D Bradley 1990 Isolation of a cDNA from the virus responsible for enterically transmitted non A non B hepatitis Science 247 1335 10 Yarbough P O A W Tam K E Fry K Krawczynski K A McCaustland D W Bradley and G R Reyes 1991 Hepatitis E virus Identification of type common epitopes Journal of Virology 65 5790 MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd 85 Science Park Drive 04 01 The Cavendish Singapore Science Park Singapour 118259 T l 65 6775 0008 Fax 65 6775 4536 Courriel enquiry_ap mpbio com Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 EC REP D 66386 St Ingbert Allemagne T l 49 68 94 58 1020 Fax 49 68 94 58 1021 Courriel info mt procons com Bureaux r gionaux MP Biomedicals Suisse S A Halle de Fret Aeroport P O Box 1015 1211 Gen ve 5 Suisse T l 4122 788 1908 Fax 4122
19. ommand de manipuler les composants et les sp cimens analyser conform ment aux Bonnes pratiques de laboratoire Ils doivent galement tre limin s dans le respect des r gles de s curit en vigueur Le Contr le positif et le Contr le n gatif contiennent du thiomersal et de l azide de sodium L azide de sodium peut r agir au contact du cuivre et du plomb pr sents dans certaines tuyauteries pour former des sels explosifs Les quantit s utilis es dans cette trousse sont limit es Toutefois lors de leur limination les substances contenant des azides doivent tre rinc es abondament afin d viter la formation d azides m tallis s dans les tuyauteries 1 viter toute contamination microbienne des r actifs lors de l ouverture des flacons et du pr l vement des aliquotes de produit 2 Ne pas pipeter avec la bouche 3 Manipuler les sp cimens tester les microplaques et les Contr les positifs et n gatifs comme s il s agissait d agents potentiellement infectieux 4 Porter une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant le d roulement du test Jeter les gants dans des sacs poubelle destin s aux mat riaux pr sentant des dangers biologiques Se laver abondamment les mains par la suite 5 Il est fortement recommand de proc der ce test dans un local pr vu pour les op rations pr sentant des dangers biologiques 6 Ne pas placer d aliments et de boissons proximit des produits
20. s sont valid s Il est fortement recommand de proc der r guli rement l entretien du syst me d aspiration de lavage afin d viter la contamination des sp cimens n gatifs par les sp cimens fortement positifs INSTRUCTIONS DE CONSERVATION 1 Conserver la trousse VHE ELISA MPD et ses composants entre 2 et 8 C en dehors des p riodes d utilisation 2 Lorsqu ils sont conserv s entre 2 et 8 C l ensemble des r actifs et microplaques d analyse restent stables jusqu la date de p remption indiqu e sur la trousse Ne pas congeler les r actifs 3 Des cristaux peuvent se former lorsque le Concentr de lavage de plaque 20x est conserv entre 2 et 8 C Ils doivent tre dissous par r chauffement 37 C avant utilisation 4 Un pr cipit peut se former lorsque le Diluant est conserv entre 2 et 8 C Ceci na aucune incidence sur le fonctionnement de la trousse 5 Les bandelettes de microplaque non utilis es et dont l emballage a t ouvert doivent tre conserv es avec l agent de dessiccation fourni entre 2 et 8 C dans un sachet ferm RECUEIL TRANSPORT ET CONSERVATION DES PRELEVEMENTS Les chantillons doivent tre conserv s entre 2 et 8 C si analyse doit tre r alis e dans les 7 jours suivant le pr l vement et congel s 20 C ou temp rature inf rieure si l analyse doit tre r alis e plus de 7 jours apr s Il est pr f rable d utiliser des chantillons clairs non h mol
21. valeurs de contr le n gatif restantes doivent r pondre aux crit res ci dessus sans quoi l analyse est invalide et doit tre r p t e 2 Calcul de l absorbance moyenne du contr le positif RCX Exemple Puits N Absorbance F1 1 048 G1 1 056 Total 2 104 Moyenne 2 104 2 1 052 RCX a Chaque contr le positif doit tre de gt 0 700 Si Pune des valeurs du contr le positif ne r pond pas aux deux crit res ci dessus l analyse est invalide et doit tre r p t e 3 Calcul de la diff rence entre RCX et NRCXx Exemple NRCXx 0 047 RCx 1 052 RCXx NRCX 1 052 0 047 1 005 Pour que le test soit valide la valeur RCX NRCX doit tre de gt 0 600 Dans le cas contraire une manipulation incorrecte ou une d t rioration des r actifs peut tre mise en cause et l analyse doit tre r p t e 4 Calcul de la valeur SEUIL Valeur SEUIL 0 500 NRCXx Exemple NRCx 0 047 Valeur SEUIL 0 500 0 047 0 547 INTERPR TATION DES R SULTATS 1 Les sp cimens dont les absorbances sont inf rieures la valeur SEUIL sont consid r s comme n gatifs au test VHE ELISA de MPD 2 Les pr l vements dont les absorbances sont sup rieures ou gales la valeur SEUIL sont consid r s comme initialement positifs d apr s les crit res du test VHE ELISA de MPD et doivent tre r analys s en double avant interpr tation 3 Les pr l vements apparaissant comme positifs apr s renou
22. vellement de l analyse doivent tre interpr t s comme positifs reproductibles vis vis des anticorps dirig s contre le VHE d apr s les crit res du test VHE ELISA de MPD 4 Les pr l vements initialement positifs apparaissant comme n gatifs apr s renouvellement de l analyse sont consid r s comme n gatifs d apr s les crit res du test VHE ELISA de MPD CARACT RISTIQUES DE FONCTIONNEMENT SPECIFIQUES L analyse al atoire d chantillons de donneurs de sang issus de r gions non end miques telles que l Allemagne et l Australie indique que la s ropr valence environ 1 2 tend tre assez faible Cependant dans les pays tels que la Chine et Hong Kong o les flamb es pid miques de VHE se produisent au cours de la saison des pluies une s ropr valence lev e d environ 15 est observ e La s ropositivit vis vis du test VHE ELISA MPD indique une exposition ant rieure La s ropositivit des sujets sains au sein de populations faible risque est tr s limit e moins de 1 environ tandis que chez les sujets sains des r gions end miques elle tend tre quelque peu plus lev e Les infections par le VHE sont en bonne partie asymptomatiques ce qui explique les cas de s ropositivit en l absence de la maladie LIMITES DE LA M THODE Les r sultats positifs de fa on r p t e au test VHE ELISA MPD indiquent la possible pr sence d anticorps dirig s contre le VHE dans le sp cimen
23. ys s Les chantillons lip miques ict riques ou contamin s par des particule doivent tre filtr s 0 45um ou centrifug s avant analyse Le s rum des patients peut tre inactiv mais ceci n est pas indispensable au fonctionnement optimal du test Pour l inactiver proc der comme suit 1 Retirer les bouchons des r cipients contenant le s rum 2 Chauffer le s rum 56 C pendant 30 minutes au bain marie 3 Laisser refroidir le s rum avant de refermer les bouchons 4 Le s rum peut tre congel pour tre conserv jusqu l analyse Il est d conseill de soumettre le s rum du patient des cycles r p t s de cong lation d cong lation MAT RIEL SUPPL MENTAIRE N CESSAIRE MAIS NON FOURNI 1 Papier absorbant jetable pour paillasse et serviettes en papier 2 Tubes ou r cipients en polypropyl ne 3 Pipettes gradu es 5 mi 10 ml 4 Pipette canaux multiples capable de distribuer 50 ul 100 ul et 200 il 5 Pipette capable de distribuer 1 1000 pl 6 Embouts de pipette jetables 7 R servoirs r actifs cuves rectangulaires ayant une capacit de 25 ml 8 Eau d ionis e ou distill e de qualit r actif 9 Flacons 500 mi 1 litre 10 Un incubateur 37 C 11 Un lecteur de plaque en microdosage double A A ou simple A longueur d onde 12 Solution d hypochlorite de sodium 5 ou eau e Javel liquide domestique PR PARATION DES R AC
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