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Quantum Blue C-Reactive Protein (CRP)

1. 2001 APPENDIX IV SYMBOLS SYMBOLE SYMBOLES SIMBOLI SIMBOLOS Symbol Explanation Symbol Explanation Use By Temperature limitation Verwendbar bis Zul ssiger Temperaturbereich Utiliser jusqu au X Limites de temp rature Utilizzare entro Limiti di temperatura Fecha de caducidad Limite de temperatura Catalogue number Test Cartridge Bestellnummer Testkassette REF R f rence du catalogue Cartouche de testi Numero di catalogo Card di rilevazione N mero de cat logo Cartucho de prueba Batch code Chase Buffer Chargenbezeichnung Laufpuffer LOT Code du lot BUFICHASE Tampon de chase Codice del lotto Tampone di chase Codigo de lote Tampon de chase In Vitro Diagnostic Medical Device RFID Chip card In Vitro Diagnostikum RFID Chipkarte Dispositif m dical de diagnostic in RCC RFID Carte puce IVD vitro RFID Carta chip Dispositivo medico diagnostico in RFID Tarjeta chip vitro Consult Instructions for Use Producto sanitario para diagn stico Gebrauchsanweisung beachten in vitro Consulter le mode d emploi Contains sufficient for n tests Consultare le istruzioni per l uso Ausreichend f r n Ans tze Consulte las instrucciones de uso NV Contenu suffisant pour n tests Contenuto sufficiente per n saggi Contenudo sufficiente para n ensayos VD Printing Date 2013 08 09 Revision date 2013 07 29 16 16 B HLMANN CRP ELISA
2. LDQ inf rieure et 25 mg L LDQ sup rieure Voir la Table 6 e Plage dynamique la plage s tablit entre 1 0 et 25 mg L pour le test e Fidelite R p tabilit lt 19 3 du CV Fidelite totale lt 24 0 du CV La r p tabilit du test Quantum Blue CRP a t calcul e a partir de 6 chantillons suppl ment s avec CRP couvrant la totalit de la plage d essai test conform ment au protocole EP5 A2 du CLSI Chaque chantillon a t teste selon la proc dure d essai lors d une analyse comprenant 20 r p titions pour chacun de trois lots differents Les valeurs moyennes obtenues pour les trois lots de cartouches d essai sont pr sent es dans la Table 7 La r p tabilit est inf rieure a 20 du CV e Fid lit entre lots lt 243 CV fid lit entre laboratoires lt 25 2 du CV La fid lit du test Quantum Blue CRP entre lots et entre laboratoires a t calcul e a partir de 6 chantillons suppl ment s avec CRP couvrant la totalit de la plage d essai Chaque chantillon a t test selon la proc dure de test lors d une analyse comprenant 20 r p titions pour chacun de trois lots differents Les valeurs moyennes obtenues pour les trois lots de cartouches d essai sont pr sent es dans la Table 8 e Lin arit un chantillon contenant 65 mg L de CRP a t pr par partir de s rum d pourvu de CRP et de solution m re de CRP L chantillon a t dilu en 16 tapes avec du s r
3. chantillon de s rum avec 135 ul de tampon de dilution B LFCRP CB dans un tube essai 2 R alisation du test et interpr tation Placer 100 ul d chantillon de s rum dilu sur Porifice de chargement de la cartouche d essai 3 Dosage en flux lat ral et lecture du r sultat Le lecteur Quantum Blue Reader propose deux m thodes CHP 22 et CHP O0 Choisir l une des m thodes avant de proc der l essai Charger les param tres sp cifiques au lot de r actif au moyen de la carte puce RFID 1 M thode CRP 22 avec minuteur interne e Charger la cartouche de test dans le tiroir du lecteur e Ajouter 100uL d chantillon dilu via l orifice de chargement de la cartouche de test e Fermer le tiroir et lancer l analyse en appuyant sur le bouton de d marrage e La lecture d marre automatiquement apr s un d lai de 22 minutes 1320 s 2 M thode lt CRP_0 gt sans minuteur interne e Ajouter 100uL d chantillon dilu via l orifice de chargement de la cartouche d essai e Incuber pendant 22 1 minutes en utilisant un minuteur externe e Charger la cartouche de test dans le tiroir du lecteur e Lancer imm diatement la lecture de la cartouche en appuyant sur le bouton de d marrage ENTER du lecteur Quantum Blue Remarque consulter le mode d emploi du Quantum Blue Reader pour plus de d tails concernant les fonctions de base l initialisation et l utilisation du lecteur en particulie
4. e A thorough understanding of this instruction for use is necessary for the successful use of the product Reliable results will be obtained only by following this instruction for use accurately e Patient samples that are not properly handled may cause inaccurate results e If the precision of the assay does not correlate with the established limits and repetition excludes errors in technique check the following issues i pipetting temperature controlling and timing devices ii expiration dates of reagents and ii storage and incubation conditions VALIDATION OF RESULTS e For a valid test result the Control Line C must be visible in any case see Figure 1A and 1B It is used as functional test control only and cannot be used for the interpretation of the Test Line T If the Test Line T is not detectable after 22 minutes of incubation time Figure 1A the concentration of CRP present in the blood sample is below the detection limit If a Test Line T is detectable after 22 minutes of incubation time Figure 1B the CRP concentration present in the blood sample is calculated by the Quantum Blue Reader If only the Test Line T is detectable after 22 minutes of incubation time Figure 1C the test result is invalid and the CRP assay has to be repeated using another Test Cartridge If neither the Control Line C nor the Test Line T is detectable after 22 minutes of incubation time Figure 1D the test result is i
5. ufen von 20 Replikaten gemessen Die LoD wurde berechnet unter Verwendung der mittleren Standardabweichung der Proben in bereinstimmung mit dem CLSI Protokoll EP17 A Limit of Quantification LoQ Lower LoQ lt 1 0 mg L CRP Upper LoQ 225 mg L CRP The LoQ wurde ermittelt mit Hilfe eines Prazisionsprofils Die Nachweisgrenze entspricht derjenigen CRP Konzentration die eine Streuung von lt 25 CV zeigt und damit eine quantitative Bestimmung innerhalb eines Bereiches von 1 0 unterer LoQ und 25 mg L oberer LoQ Siehe Table 6 Messbereich Der Messbereich des Teste liegt zwischen 1 0 und 25 mg L Prazision Repeatability 19 3 CV Total Prazision 24 0 CV Die Repeatability des Quantum Blue CRP Assays wurde mit Hilfe von 6 Proben die mit gereinigtem CRP angereichert wurden und den gesamten Assaybereich abdeckten gem ss CLSI EP5 A2 berechnet Jede Probe wurde gem der Testanleitung in einem Lauf mit je 20 Replikaten angesetzt und gemessen Die Mittelwerte von 3 verschiedenen Lots von Testkassetten werden in Table 7 dargestellt Die Repeatability lag unterhalb von 20 CV Inter lot Pr zision lt 24 3 CV Interlabor Pr zision lt 25 2 CV Die Inter Lot Pr zision des Quantum Blue CRP Assays wurde berechnet mit 6 Proben die mit gereinigtem CRP supplementiert wurden und den gesamten Assaybereich abdeckten Jede Probe wurde gem ss der Testdurchf hrung in einem Ansatz unter Verwendung von drei Lots in jeweils 2
6. Goldkonjugat wird von einem Ziege Anti Maus Antik rper gebunden welcher ebenfalls auf die Membran gebunden wurde Kontrolllinie Die Signalintensit t von Test und Kontrolllinie werden quantitativ mit dem Quantum Blue Reader gemessen GELIEFERTE REAGENZIEN UND VORBEREITUNG Reagents Menge Code Kommentar Testkassette in einer 25 St ck B LECRP TC Folientasche Chase Puffer 1 Mirada B LFCRP CB Gebrauchsfertig F r Firmware RFID Chip Karte rot 1 1 0 4 x B LFCRP RCCR Fur Firmware RFID Chip Karte weiss 1 2247 B LFCRP RCC Table 2 LAGERUNG UND HALTBARKEIT DER REAGENZIEN Alle Kitkomponenten sind bei 2 8 bis zum angegebenen Ablaufdatum haltbar EQUIPMENT e Pr zisionspipetten mit Einwegspitzen 10 200 ul e R hrchen f r die Probenverd nnung e Laborwecker optional e Quantum Blue Reader bei B HLMANN erh ltlich Art Nr BI POCTR ABS e Handschuhe und Laborkittel VORSICHTSMASSNAHMEN SICHERHEITSMASSNAHMEN e Proben humanen Ursprungs k nnen infekti s sein z B Hepatitis B Virus und HIV e Stellen Sie sicher dass Hautverletzungen wie Schnitte und Absch rfungen gut abgedeckt sind und ergreifen Sie Massnahmen um eine Infektion oder eine Benetzung der Schleimh ute zu verhindern e Nicht gebrauchte L sungen sollten nach den jeweils g ltigen gesetzlichen Bestimmungen entsorgt werden Technische Vorsichtsmassnahmen e Die Reagenzien d rfen nach Abla
7. HLMANN Quantum Blue CRP rapport 1 250 avec le tampon de dilution puis recommencer la proc dure de test avec une nouvelle cartouche Multiplier la concentration indiqu e par un facteur inverse au rapport de dilution x 25 pour obtenir le r sultat final Les valeurs de CRP doivent tre utilis es comme des informations suppl mentaires par le m decin pour tablir son diagnostic DONNEES DE PERFORMANCE Limite du blanc LDB lt 0 34 mg L CRP La LDB a t d termin e conform ment au protocole EP17 A du CLSI via trois analyses ind pendantes portant sur trois lots diff rents de cartouches d essai pour un total de 60 valeurs de blanc en utilisant comme chantillon du s rum d pourvu de CRP Limite de d tection LDD lt 0 61 mg L CRP La LDD a t d termin e partir de s rum bas de CRP Les chantillons ont t test s sur trois lots differents de cartouches d essai via trois analyses ind pendantes comportant chacune 20 r p titions Les carts types moyens ont t d termin s et la LDD a t calcul e conform ment au protocole EP17 A du CLSI Limites de quantification LDQ LDQ inf rieure lt 1 0 mg L CRP LDQ sup rieure gt 25 mg L CRP La LDQ a t d termin e a partir du profil de fid lit pr sent ci apr s La limite de quantification correspond la concentration de CRP avec un manque de fid lit inf rieur a 25 du CV ce qui permet un dosage quantitatif entre 1 0
8. LoQ lt 1 0 mg LCRP Upper LoQ 225 mg L CRP The LoQ has been established with the precision profile The limit of quantification corresponds to the concentration of CRP with an imprecision below 2596 CV allowing a quantitative measurement between 1 0 lower LoQ and 25 mg L upper LoQ Refer toTable 6 Dynamic range The assay range is between 1 0 and 25 mg L Precision Repeatability lt 19 3 CV Total precision 24 0 CV The repeatability of the Quantum Blue CRP assay was calculated from 6 samples supplemented with purified CRP covering the assay range according to CLSI EP5 A2 Each sample was tested according to the assay procedure in one run using three lots with 20 replicates each The repeatability was below 20 96 CV Refer to Table 7 Inter lot precision S24 3 CV interlab precision lt 25 2 CV The inter lot and interlab precision of the Quantum Blue CRP assay was calculated from 6 samples supplemented with purified CRP covering the assay range Each sample was tested according to the assay procedure in one run using three lots with 20 replicates each The mean values of three different lots of Test Cartridges are presented in Table 8 Linearity A sample containing 65 mg L CRP was produced using CRP free serum and CRP stock solution The sample was diluted in 16 steps using CRP free serum and subsequently assayed on four test cartridges The mean was calculated for each dilution according to CLSI EP6 A The res
9. Quantum Blue Si seule la ligne de test T est d tectable apr s 22 minutes d incubation figure 1C le r sultat du test n est pas valide et le test CRP doit tre recommenc avec une autre cartouche Si ni la ligne de test T ni la ligne de contr le C ne sont d tectables apr s 22 minutes d incubation figure 1C le r sultat du test n est pas valide et le test CRP doit tre r p t avec une autre cartouche tant donn que le lecteur Quantum Blue r alise une valuation quantitative des lignes de test T et de contr le C un contr le de validit suppl mentaire de la ligne de contr le C est n cessaire Si l intensit de signal de la ligne de contr le C est inf rieure au seuil indiqu apr s 22 minutes d incubation le r sultat du test n est pas valide et le test CRP doit tre r p t avec une autre cartouche 2013 07 29 8 16 NORMALISATION ET INTERPR TATION DES R SULTATS ele test immunochromatographique est talonn par rapport au mat riel de r f rence NIBSC 85 506 e Le lecteur Quantum Blue de B HLMANN emploie une courbe d talonnage sp cifique chaque lot pour calculer la concentration de prot ine CRP Cette courbe d talonnage sp cifique au lot est g n r e a partir d chantillons m lang s pour contr le qualit de concentrations en CRP connues e Lorsque l indication donn e par le lecteur d passe 20 mg L diluer l chantillon de s rum concern selon un B
10. diverse volte e lasciar riposare per 45 minuti a temperatura ambiente 18 28 C lontano dalla luce fino alla formazione del coagulo Centrifugare per 15 minuti a 1800 x g a temperatura ambiente 18 28 C e prelevare il siero Non inattivare i campioni mediante calore campioni di siero possono essere conservati refrigerati a 2 8 fino a 7 giorni Per tempi di conservazione pi lunghi tenere i campioni a 20 C campioni sono stabili per almeno 4 mesi Nota l uso di campioni lipemici emolitici e itterici deve essere validato per questa analisi E possibile evitare di avere campioni lipemici chiedendo ai pazienti di digiunare per almeno 12 ore prima del prelievo del campione Revision date 2013 07 29 PROCEDURA DEL TEST La procedura di analisi costituita da due parti indipendenti 1 Diluizione dei campioni di siero con il tampone di diluzione Prima di eseguire la misurazione diluire il campione di siero 1 10 con il tampone di diluzione Ad esempio mescolare 15 ul di campione di siero con 135 pl di tampone di diluzione B LFCRP CB in una provetta 2 Analisi di flusso laterale Lettura Aggiungere 100 ul di campione di siero diluito sull apertura per il caricamento del campione della cartuccia di rilevazione 3 Dosaggio a flusso laterale e lettura Esistono due metodi alternativi disponibili sul Quantum Blue Reader lt CRP_22 gt e lt CRP_0 gt Prima di iniziare gli esperimenti selezionare uno di questi metodi Caric
11. e Let the reagents adjust to reach room temperature Mix well vortex the reagents before use e Cartridges cannot be re used e Test results should be interpreted in conjunction with information available from clinical assessment of the patient and other diagnostic procedures SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE Less than 50 ul of serum is required Collect blood into plain venipuncture tubes for Serum avoid hemolysis mix by inverting sample tube several times and leave to clot for 45 minutes at room temperature 18 28 C protected from light Centrifuge at 1800 x g for 15 minutes at room temperature 18 28 C and collect the serum Do not heat inactivate samples Serum samples can be stored refrigerated at 2 8 C for up to7 days For longer storage keep serum samples at 20 C The samples are stable for at least 4 months Note The use of lipaemic hemolytic and icteric samples has to be validated for this assay Lipaemic samples can be avoided by asking patients to fast for at least 12 hours prior to the sample being taken Reagents Quantity Code Comments Test Cartridge vacuum sealed in a foil 25 pieces B LFCRP TC bag 1 vial Chase Buffer 10 ml B LFCRP CB Ready to use 4 To be used with RFID Chip Card red 1 piece B LFCRP RCCR Firmware 1 0 4 x To be used with RFID Chip Card white 1 piece B LFCRP RCC Firmware 2 2 17 Table 1 STORAGE AND SHELF LIFE OF REAGENTS All kit components ar
12. fattore del volume reciproco x 25 per ottenere il risultato finale valori di CRP devono essere utilizzati come dati supplementari a disposizione del medico per l elaborazione di una diagnosi CONTROLLO DI QUALIT e L utilizzo corretto del prodotto subordinato alla comprensione approfondita delle presenti istruzioni per l uso Soltanto seguendo esattamente le istruzioni per Puso si potranno ottenere risultati affidabili e campioni dei pazienti manipolati in maniera inadeguata possono dare risultati inesatti e Se la precisione dell analisi non correla con i limiti stabiliti e la ripetizione esclude errori tecnici verificare i seguenti aspetti i dispositivi di pipettatura di controllo della temperatura e di misurazione del tempo ii date di scadenza dei reagenti e iii condizioni di conservazione e incubazione VALIDAZIONE DEI RISULTATI e Per un risultato valido la linea di controllo C deve essere visibile in ogni caso vedere Figure 1A e 1B E utilizzata soltanto come controllo funzionale del test e non pu essere usata per interpretare la linea di rilevazione T Se la linea di rilevazione T non individuabile dopo un tempo di incubazione di 22 minuti Figura 1A significa che la concentrazione di CRP presente nel campione ematico inferiore al limite di rilevazione Se la linea di rilevazione T individuabile dopo un tempo di incubazione di 22 minuti Figura 1B significa che la concentrazione di
13. fiables si se siguen con precisi n estas instrucciones Una manipulaci n incorrecta de las muestras de pacientes puede dar lugar a la obtenci n de resultados inexactos Si la precisi n del an lisis no se corresponde con los l mites establecidos y la repetici n excluye posibles errores en la t cnica compruebe los puntos siguientes i dispositivos de pipeteado control de la temperatura y medici n del tiempo ii fechas de caducidad de los reactivos y iii condiciones de conservaci n e incubaci n PRECAUCIONES DE SEGURIDAD e Las muestras de pacientes deben ser manipuladas como potencialmente biopeligrosas p ej portadoras del virus de la hepatitis B y el VIH tomando las precauciones apropiadas e Aseg rese de que cualesquiera cortes abrasiones u otras lesiones cut neas cuentan con la protecci n apropiada y tome precauciones para evitar autoinocularse o salpicar membranas mucosas e Utilice equipos de protecci n personal apropiados para evitar el contacto con los ojos y la piel e La soluci n no utilizada deber desecharse conforme a las normativas locales estatales y federales Revision date 2013 07 29 VALIDACI N DE LOS RESULTADOS Para que el resultado obtenido en un an lisis sea v lido la l nea de control C debe estar siempre visible v anse las Figuras 1A y 1B Dicha l nea sirve nicamente como control funcional del an lisis y no debe ser utilizada para interpretar la l nea de test T Si l
14. wenn Sie mehr ber die Basisfunktionen Inbetriebnahme und Bedienung erfahren wollen insbesondere wie Testmethoden ausgew hlt werden und wie lotspezifische Parameter von der RFID Chipkarte geladen werden um die Proben messen zu k nnen B HLMANN Quantum Blue CRP QUALIT TSKONTROLLE e Ein vollst ndiges Verst ndnis dieser Arbeitsanleitung ist f r den erfolgreichen Einsatz des Produktes notwendig Zuverl ssige Resultate werden nur durch die genaue Einhaltung der Arbeitsanleitung erreicht e Unsachgem e Handhabungen der Patientenproben k nnen zu unbrauchbaren Resultaten f hren e Falls die Ergebnisse des Testes nicht innerhalb der erwarteten Bereiche liegen und wiederholte Messungen einen Durchf hrungsfehler ausschlie en sind folgende Bedingungen zu berpr fen i Pipetten Thermometer und Uhren Laborwecker i Verfallsdaten der Reagenzien iii Lagerung und Inkubationsbedingungen VALIDIERUNG DER ERGEBNISSE e Damit das Testresultat als g ltig bewertet wird muss die Kontrollbande C klar ersichtlich sein siehe Figuren 1A und 1B Diese wird nur als Funktionskontrolle verwendet und kann nicht zur Interpretation der Testbande T benutzt werden Falls die Testbande T nach 22 Minuten Inkubation nicht nachweisbar ist Figur 1A bedeutet dies dass CRP nicht nachweisbar ist Falls die Testbande T nach der Inkubation von 22 Minuten nachweisbar ist wird die CRP Konzentration in der Serumprobe durch den Qua
15. 0 repliche ciascuno valori medi dei tre lotti diversi di cartucce di rilevazione sono indicati nella Table 7 La riproducibilit era inferiore al 2096 del CV Precisione tra lotti lt 24 3 del CV precisione tra laboratori lt 25 2 del CV La precisione tra lotti e tra laboratori dell analisi della CRP Quantum Blue amp stata calcolata in 6 campioni di siero privo di CRP supplementati con CRP purificato compresi nella gamma di analisi Ciascun campione stato testato in base alla procedura di analisi in un unica analisi utilizzando tre lotti con 20 repliche ciascuno valori medi dei tre lotti diversi di cartucce di rilevazione sono indicati nella Table 8 Linearit e stato prodotto un campione contenente 65 mg l di CRP utilizzando siero privo di CRP e una soluzione madre di CRP Il campione amp stato diluito in 16 fasi utilizzando siero privo di CRP e successivamente analizzato su quattro cartucce di rilevazione La media amp stata calcolata per ciascuna diluizione in conformit al protocollo CLSI EP6 A Il risultato ha mostrato linearit tra 0 80 e 35 mg l fare riferimento alla Table 9 Recupero 80 120 E stato prodotto un campione contenente 65 mg l di CRP utilizzando siero privo di CRP e una soluzione madre di CRP Il campione stato diluito in 16 fasi utilizzando siero privo di CRP e successivamente analizzato su quattro cartucce di B HLMANN Quantum Blue CRP rilevazione La media stata calcolata per ci
16. 0 Replikaten gemessen Die Mittelwerte der drei Testkassetten Lots sind in Table 8 dargestellt Linearit t Eine Probe mit 65 mg L CRP wurde aus CRP freiem Serum und CRP Stockl sung hergestellt Die Probe wurde in 16 Stufen mit CRP freiem Serum verd nnt und anschliessend auf 4 Testkassetten getestet Der Mittelwert jeder Verd nnung wurde gem ss CLSI EP6 A berechnet Linearit t konnte zwischen 0 80 und 35 mg L gezeigt werden Siehe Table 9 Wiederfindung 80 120 Eine Probe mit 65 mg L CRP wurde aus CRP freiem Serum und CRP Stockl sung hergestellt Die Probe wurde in 16 Stufen mit CRP freiem Serum verd nnt und anschlie end auf 4 Testkassetten getestet Der Mittelwert jeder Probe wurde berechnet Die Wiederfindung zwischen 80 120 wurde zwischen 0 8 und 35 mg L erreicht Mit einer zus tzlichen Verd nnung von 1 25 bis zu 100 mg L High Dose Hook Effekt Bis zu einer Konzentration von 200 mg L CRP wurde kein High Dose Hook Effekt beobachtet e Methodenvergleich R2 0 96 y 1 063x 22 Proben wurden mit dem KoneLab CRP High Sensitivity verglichen Die Ergebnisse sind in Figure 2 dargestellt LEISTUNGSMERKMALE e Limit of Blank LoB lt 0 34 mg L CRP Der LoB wurde berechnet nach dem CLSI Protokoll EP17 A in 3 unabh ngigen L ufen unter Verwendung von 3 verschiedenen Testkassetten Lots mit insgesamt 60 Blank Werten bei denen CRP freies Serum als Probe eingesetzt wurde e Limit of Detection LoD lt 0 61 mg L CRP D
17. CRP presente nel campione ematico stata calcolata dal lettore Quantum Blue Se dopo un tempo di incubazione di 22 minuti visibile soltanto la linea di rilevazione T Figura 1C il risultato non valido e l analisi della CRP deve essere ripetuta utilizzando un altra cartuccia di rilevazione Se dopo un tempo di incubazione di 22 minuti non visibile n la linea di controllo C n quella di rilevazione T Figura 1D il risultato non valido e l analisi della CRP deve essere ripetuta utilizzando un altra cartuccia di rilevazione Poich il lettore Quantum Blue consente una valutazione quantitativa delle linee di rilevazione T e di controllo C viene eseguita un ulteriore verifica della validit della linea di controllo C Se dopo un tempo di incubazione di 22 minuti l intensit del segnale della linea di controllo C inferiore a una determinata soglia il risultato non comunque valido e l analisi della CRP deve essere ripetuta utilizzando un altra cartuccia di rilevazione STANDARDIZZAZIONE E INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI L analisi di flusso laterale calibrata secondo il materiale di riferimento NIBSC 85 506 Il lettore B HLMANN Quantum Blue utilizza una curva standard specifica per il lotto per calcolare la concentrazione di CRP Tale curva standard specifica per Revision date 2013 07 29 11 16 CARATTERISTICHE DI PRESTAZIONE Limite del Bianco LoB 0 34 mg l CRP
18. Il LoB stato determinato in conformit al protocollo CLSI EP17 A in tre analisi indipendenti utilizzando tre diversi lotti di cartucce di rilevazione con un totale di 60 valori di bianco utilizzando come campione del sieroprivo di CRP Limite di rilevabilit LoD lt 0 61 mg l CRP Il LoD stato stabilito mediante siero basso di CRP campioni sono stati misurati con tre diversi lotti di cartucce di rilevazione in tre analisi indipendenti di 20 repliche ciascuna Sono stati calcolati i valori DS medi e il LoD ricavato stato misurato in conformit al protocollo CLSI EP17 A Limite di Quantificazione LoQ LoQ inferiore lt 1 0 mg l CRP LoQ superiore 225 mg l CRP Il LoQ e stato stabilito con l ausilio del profilo di precisione Il limite di quantificazione corrisponde alla concentrazione di CRP con una imprecisione inferiore al 25 del CV consentendo una misurazione quantitativa compresa tra 1 0 LoQ inferiore e 25 mg l LoQ superiore Fare riferimento alla Table 6 Gamma dinamica La gamma di analisi compresa tra 1 0 e 25 mg l Precisione Riproducibilit 19 396 del CV Precisione totale lt 24 0 del CV La riproducibilita dell analisi della CRP Quantum Blue stata calcolata in 5 campioni mescolati con siero privo di CRP compresi nella gamma di analisi in conformit al protocollo CLSI EP5 A2 Ciascun campione amp stato testato in base alla procedura di analisi in un unica analisi utilizzando tre lotti con 2
19. PA B HLMANN Quantum Blue C Reactive Protein CRP Quantitative Lateral Flow Assay LF CRP25 25 tests Revision date 2013 07 29 B HLMANN LABORATORIES AG Baselst 55 English page 2 aselstrasse CH 4124 Sch nenbuch Switzerland u Seite 2 Tel 41 61 487 1212 rangais page Fax 441 61 487 1234 Italiano pagina 10 info buhlmannlabs ch Espanol p gina 12 ENGLISH INTENDED USE The Quantum Blue C Reactive Protein CRP Lateral Flow Assay is a sandwich type immunoassay designed for the quantitative determination of CRP in human serum in combination with the B HLMANN Quantum Blue Reader PRINCIPLE OF THE ASSAY The test is designed for the selective measurement of CRP antigen by sandwich immunoassay A monoclonal capture antibody mAb which is highly specific for CRP is lined onto the test membrane A second monoclonal detection antibody conjugated to gold colloids is deposited in the conjugate release pad and released into the reaction system after addition of the test sample The CRP anti CRP gold conjugate binds to the anti CRP antibody coated onto the test membrane test line test band and the remaining free anti CRP gold conjugate binds to the goat anti mouse antibody coated onto the test membrane control line control band The signal intensities of the test line and the control line respectively are measured quantitatively by the B HLMANN Quantum Blue Reader REAGENTS SUPPLIED AND PREPARATION
20. a l nea de test T no es detectable tras 22 minutos de incubaci n Figura 1A la concentraci n de CRP presente en la muestra de sangre est por debajo del l mite de detecci n Si hay una l nea de test T detectable tras 22 minutos de incubaci n Figura 1B la concentraci n de CRP presente en la muestra de sangre se calcula por medio del lector Quantum Blue Si tras los 22 minutos de incubaci n s lo es detectable la l nea de test Figura 1C el resultado del an lisis no es v lido y ser necesario repetir el ensayo de determinaci n de CRP utilizando otro cartucho de an lisis Si tras los 22 minutos de incubaci n no son detectables ni la l nea de control C ni la l nea de test T Figura 1D el resultado del an lisis no es v lido y ser necesario repetir el ensayo de determinaci n de CRP utilizando otro cartucho de an lisis Puesto que el lector Quantum Blue amp permite una evaluaci n cuantitativa de las l neas de test T y control C se realiza una comprobaci n de validez adicional de la l nea de control C Si la intensidad de se al de la l nea de control C est por debajo de un determinado umbral tras 22 minutos de incubaci n el resultado del an lisis tampoco es v lido y ser necesario repetir el ensayo de determinaci n de CRP utilizando otro cartucho de an lisis 13 16 ESTANDARIZACI N E INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS e El ensayo de flujo lateral se calibra utilizando el material
21. al Flow Assay Reading Add 100 ul of diluted serum sample onto the sample loading port of the test cartridge 3 Lateral Flow Assay Procedure and Readout There are two alternative methods available on the Quantum Blue Reader lt CRP_22 gt and lt CRP_0 gt Select one of these methods before starting the experiments Load the lot specific parameters from the RFID Chip Card 1 Method lt CRP_22 gt with internal timer e Load the test cartridge onto the test cartridge holder of the Reader e Add 100 ul of diluted serum sample onto the sample loading port of the test cartridge e Close the cartridge holder and start the measurement by pressing the start button e The scan starts automatically after 12 minutes 1320 seconds 2 Method lt CRP_0 gt without internal timer e Add 100 ul of diluted serum sample onto the sample loading port of the test cartridge e Incubate for 22 minutes 1 minute set a timer manually e Load the test cartridge onto the test cartridge holder of the Reader e Scan the cartridge with the Quantum Blue Reader by pressing the start lt ENTER gt button immediately Remark Please refer to the Quantum Blue Reader Manual to learn about the basic functions and how to initialize and operate the Reader especially how to select test methods and how to load lot specific parameters from the RFID Chip Card in order to get the samples measured B HLMANN Quantum Blue CRP QUALITY CONTROL
22. are i parametri specifici del lotto dalla carta chip RFID 1 Metodo lt CRP_22 gt con timer interno e Caricare la cartuccia di test sul supporto per cartuccia di test del Reader e Aggiungere 100 ul di campione di siero diluito sulla porta di carico del campione della cartuccia di test e Chiudere il supporto per cartuccia e misurazione premendo il pulsante di avvio iniziare la ela scansione inizia automaticamente dopo 22 minuti 1320 secondi 2 Metodo CHRP 0 senza timer interno e Aggiungere 100 ul di campione di siero diluito sulla porta di carico del campione della cartuccia di test e Incubare per 22 minuti 1 minuto impostare un timer manuale e Caricare la cartuccia di test sul supporto per cartuccia di test del Reader e Scansionare la cartuccia con il Quantum Blue Reader premendo il pulsante ENTER immediatamente Nota Per informazioni sulle funzioni di base e su come avviare e mettere in funzione il Reader in particolare per informazioni sulla selezione dei metodi di test e su come caricare i parametri specifici del lotto dalla carta chip RFID per ottenere i campioni misurati consultare il manuale del Quantum Blue Reader 10 16 PRECAUZIONI PRECAUZIONI DI SICUREZZA e campioni dei pazienti devono essere trattati come materiali potenzialmente a rischio biologico ad es epatite B e HIV Prendere adeguate precauzioni e Assicurarsi che tagli abrasioni e lesioni cutanee siano protetti adegu
23. ascuna concentrazione ll recupero si dimostrato accettabile tra 0 8 e 35 mg l e con una diluizione aggiuntiva di 1 25 fino a 100 mg l Il recupero variava dall 80 al 120 e Effetto gancio da dosi alte non stato osservato effetto gancio da dosi alte fino a una concentrazione di 200 mg l e Confronto tra metodi R2 0 96 y 1 063x 22 campioni sono stati confrontati con KoneLab CRP High Sensitivity dati della correlazione sono indicati nella Figure 2 ESPANOL SOSTANZE INTERFERENTI Le sostanze interferenti sono state valutate in conformit al protocollo CLSI EP7 A2 campioni fortemente emolitici lipemici o itterici con concentrazione di CRP fino a 2 mg l potrebbero interferire con il test determinando di falsi risultati di CRP fino al 4096 elevata Sono state testate le seguenti sostanze trigliceridi Intralipid 13 2 mg ml bilirubina coniugata 0 2 mg ml bilirubina non coniugata 0 29 mg ml o emoglobina 2 mg ml Altre sostanze e o fattori non sono stati esaminati in questo studio Non possono escludersi interferenze VALORI ATTESI E stato determinato il seguente intervallo di riferimento per il siero 97 5 percentile proveniente da donatori di sangue asintomatici 97 5 percentile Valore mediano n 99 4 76 mg l 1 12 mg l LIMITAZIONI DELLE PRESTAZIONI Temperatura L analisi deve essere eseguita a una compresa tra 18 e 22 C temperatura Revision date 2013 07 29 USO PREVISTO El
24. atamente e prendere delle precauzioni per evitare auto inoculazione o spruzzi di membrane mucose e Indossare indumenti di protezione personale adeguati cosi da evitare il contatto con gli occhi e la pelle e Smaltire la soluzione inutilizzata nel rispetto delle disposizioni locali regionali e nazionali in materia PRECAUZIONI TECNICHE e componenti non devono essere utilizzati dopo la data di scadenza stampata sulle etichette Non mescolare diversi lotti di reagenti B HLMANN Quantum Blue CRP e Le prestazioni del test saranno influenzate negativamente nel caso in cui i reagenti non siano correttamente diluiti siano modificati o siano conservati in condizioni diverse da quelle indicate nella sezione conservazione e durata dei reagenti e Evitare la contaminazione dei reagenti e Attendere che i reagenti raggiungano la temperatura ambiente Mescolare bene con vortex i reagenti prima dell uso e Le cartucce non possono essere riutilizzate e risultati del test devono essere interpretati assieme alle informazioni derivanti dalla valutazione clinica del paziente e da altre procedure diagnostiche il lotto viene generata con pool di campioni del controllo qualit con concentrazioni note di CRP Per la misurazione quantitativa di campioni superiori a 20 mg l diluire i campioni 1 250 con il tampone di diluzione e analizzarli nuovamente seguendo la procedura La concentrazione misurata deve quindi essere moltiplicata per il
25. de incubaci n B LFCRP CB Listo para usar B LFCRP RCCR Utilizar con 1 unidad Firmware 1 0 4 x Tarjeta chip RFID roja Tarjeta chip RFID blanca Utilizar con 1 unidad Firmware 2 2 17 B LFCRP RCC Tabla 5 CONSERVACI N Y PER ODO DE VALIDEZ DE LOS REACTIVOS Todos los componentes del kit son estables a una temperatura de entre 2 y 8 C hasta la fecha de caducidad impresa en las etiquetas EQUIPO e Pipetas de precisi n con puntas desechables 10 a 200 ul e Cron metro opcional e Tubos para la diluci n de los muestras e Lector Quantum Blue de BUHLMANN c digo para pedidos BI POCTR ABS e Guantes y bata de laboratorio 12 16 RECOGIDA Y CONSERVACI N DE LAS MUESTRAS El procedimiento requiere menos de 50 ul de suero Recoja la sangre en tubos para venopunci n vac os para suero evitando la hem lisis m zclela invirtiendo el tubo de muestra varias veces y d jela coagular durante 45 minutos a temperatura ambiente entre 18 y 28 C protegida de la luz Centrif guela a 1800 x g durante 15 minutos a temperatura ambiente entre 18 y 28 C y recoja el suero No desactive las muestras por acci n del calor Las muestras de suero se pueden conservar refrigeradas a una temperatura de entre 2 y 8 C hasta un m ximo de 7 d as Para per odos de conservaci n m s largos hay que mantenerlas a 20 C Las muestras son estables durante al menos 4 meses B HLMANN Quantum Blu
26. de referencia NIBSC 85 506 B HLMANN Quantum Blue CRP e El lector B HLMANN Quantum Blue utiliza una curva est ndar espec fica del lote para calcular la concentraci n de CRP Dicha curva est ndar espec fica del lote se genera a partir de muestras agregadas de control de calidad con concentraciones conocidas de CRP Para obtener mediciones cuantitativas de muestras con lecturas por encima de 20 mg l diluya las muestras de suero en proporci n 1 250 con tamp n de detecci n y ens yelas de nuevo conforme al procedimiento La concentraci n as medida debe multiplicarse luego por el inverso del factor de diluci n volum trica x25 para obtener el resultado final Los valores de CRP deben utilizarse como datos complementarios para ayudar al m dico a establecer un diagn stico CARACTER STICAS DEL RENDIMIENTO L mite para el blanco LoB lt 0 34 mg l de CRP El LoB se ha establecido de acuerdo con el protocolo CLSI EP17 A en tres tandas de lecturas independientes utilizando tres lotes diferentes de cartuchos de an lisis con un total de 60 valores de blanco utilizando suero libre de CRP como muestra L mite de Detecci n LoD lt 0 61 mg l de CRP El LoD se ha establecido con suero bajo de CRP Las muestras se midieron con tres lotes diferentes de cartuchos de an lisis en tres tandas de lecturas independientes de 20 r plicas cada una Se determinaron los valores medios de SD y a partir de ah se ha calculado el LoD de acu
27. e CRP Nota El uso de muestras lip micas hemol ticas o ict ricas debe ser validado para este ensayo Es posible evitar la obtenci n de muestras lip micas pidiendo a los pacientes que ayunen durante al menos las 12 horas previas a la recogida de la sangre PROCEDIMIENTO DE ENSAYO El procedimiento de ensayo consta de dos partes individuales 1 Diluci n de las muestras de suero con tamp n de detecci n Antes de proceder a la medida diluya la muestra de suero en proporci n 1 10 con tamp n de detecci n Por ejemplo Mezcle 15 ul de muestra de suero con 135 ul de tamp n de detecci n B LFCRP CB en un tubo de ensayo 2 Ensayo de flujo lateral Lectura de los resultados A ada 100 ul de muestra de suero diluida al puerto de carga de muestra del cartucho de an lisis 3 Procedimiento de ensayo de flujo lateral y lectura de los resultados En el lector Quantum Blue Reader hay dos m todos alternativos disponibles lt CRP_22 gt y lt CRP Oz Seleccione uno de esos m todos antes de iniciar los experimentos Cargue los par metros espec ficos del lote desde la tarjeta chip RFID 1 M todo CHRP 22 con cron metro interno e Cargue el casete de prueba en el portacasetes de prueba del lector e A ada 100 ul de muestra de suero diluida en el puerto de carga de muestra del casete de prueba e Cierre el portacasetes e inicie la medici n pulsando el bot n de inicio e El barrido se inicia autom ticam
28. e 8 Inter lot and inter lab precision 2 Sample Concentration Inter Lot Inter Lab No mean mg L Precision Precision CV 0 CV SI 1 04 21 3 25 2 i S2 1 9 21 8 17 9 4 S3 2 9 15 496 15 396 0 2 4 6 8 10 12 14 S4 9 5 13 196 18 196 Konelab T30 S5 15 9 24 396 25 196 S6 20 9 19 096 23 396 Table 6 LOB LOD and LOQ Table 9 Linearity Lot LOB mg L LOD mg L LOQ mg L Lot Repeatability Linear Range Recovery Lot 1 0 21 0 61 1 0 to 30 mean Lot 2 0 20 0 52 0 6 to 25 Lot 1 22 696 0 78 43 3 mg L 108 4 Lot 3 0 34 0 58 0 6 to 25 Lot 2 23 5 0 83 36 7 mg L 102 0 Lot 3 24 896 0 81 36 1 mg L 83 496 Revision date 2013 07 29 15 16 B HLMANN Quantum Blue CRP APPENDIX II REFERENCES LITERATURREFERENZEN REFERENCES RIFERIMENTI REFERENCIAS 1 Powell LJ C reactive protein a review Am J Med 4 Vermeire S Van Assche G Rutgeerts P The role of Technol 45 2 38 42 1979 C reactive protein as an inflammatory marker in 2 Gewurz H Mold C Siegel J Fiedel B C reactive gastrointestinal diseases Nat Clin Pract Gastroenterol protein and the acute phase response Adv Intern Mepal AUA aaRS 12005 Med 27 345 72 1982 5 Vermeire S Van Assche G Rutgeerts P Laboratory 3 Patel VB Robbins MA Topol EJ C reactive protein a mMakersin 190 useful magic OF unnacassary i arn toys Gut 55 3 426 31 2006 golden marker for inflammation and coronary artery disease Cleve Clin J Med 68 6 521 524 527 34
29. e stable at 2 8 C until the expiration date printed on the labels EQUIPMENT e Precision pipettes with disposable tips 10 200 ul e Tubes for dilution of samples e Timer optional e Quantum Blue Reader available from B HLMANN order code BI POCTR ABS e Gloves and Lab coat PRECAUTIONS SAFETY PRECAUTIONS e Patient samples should be handled as potentially bio hazardous eg Hepatitis B virus and HIV Please take appropriate precautions e Ensure that cuts abrasions and skin lesions are properly protected and take precautions to avoid self inoculation or splashing of mucous membranes e Wear appropriate personal protective equipment to avoid contact with eyes and skin e Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations TECHNICAL PRECAUTIONS e Components must not be used after the expiry date printed on the labels Do not mix different lots of reagents e Test performance will be adversely affected if reagents are incorrectly diluted modified or stored under conditions other than those as detailed in storage and shelf life of reagents e Avoid contamination of reagents Revision date 2013 07 29 2 16 ASSAY PROCEDURE The Assay Procedure consists of two individual parts 1 Dilution of serum samples with chase buffer Prior measurement dilute the serum sample 1 10 with Chase Buffer For example Mix 15 ul serum sample with 135 ul Chase Buffer B LFCRP CB 2 Later
30. e tested triglycerides Intralipid 13 2 mg ml conjugated bilirubin 0 2 mg ml unconjugated bilirubin 0 29 mg ml or haemoglobin 2 mg ml Other substances and or factors have not been investigated in this study Interferences cannot be excluded B HLMANN Quantum Blue CRP EXPECTED VALUES The following reference interval for serum 97 5 percentile has been determined from asymptomatic blood donors 97 5 percentile 4 76 mg L Median 1 12 mg L n 99 PERFORMANCE LIMITATIONS Temperature The assay has to be performed at a temperature between 18 22 C Revision date 2013 07 29 4 16 B HLMANN Quantum Blue CRP DEUTSCH ANWENDUNGSZWECK Der Quantum Blue C Reaktives Protein CRP Lateral Flow Assay ist ein Sandwich Immunoassay zur quantitativen Bestimmung von CRP in humanem Serum in Kombination mit dem B HLMANN Quantum Blue Reader PRINZIP DER METHODE Der Test dient zur Bestimmung von CRP mittels Sandwich Immunoassay Ein monoklonaler hoch spezifischer Fangantik rper mAb gegen CRP ist auf einer Testmembran beschichtet Ein zweiter monoklonaler Nachweisantik rper welcher mit Goldkolloiden konjugiert ist wird auf dem Conjugate Release Pad aufgebracht Nach der Zugabe der verd nnten Probe wird er in das Reaktions System freigesetzt Der CRP anti CRP Goldkonjugat Komplex bindet an den auf der Membran gebundenen Anti CRP Antik rper Testlinie Das verbleibende nicht gebundene anti CRP
31. ensayo de flujo lateral Quantum Blue CRP es un inmunoensayo tipo s ndwich dise ado para la determinaci n cuantitativa de la prote na C reactiva CRP en suero humano en combinaci n con el lector B HLMANN Quantum Blue PRINCIPIO DEL ENSAYO El an lisis ha sido dise ado para la medici n selectiva del ant geno CRP mediante un inmunoensayo tipo s ndwich La membrana de an lisis lleva un recubrimiento de un anticuerpo de captura monoclonal altamente espec fico para CRP Un segundo anticuerpo de detecci n monoclonal conjugado con oro coloidal se deposita en la almohadilla de liberaci n del conjugado para su liberaci n al sistema de reacci n tras la adici n de la muestra que se va a analizar El conjugado de oro anti CRP con CRP se une al anticuerpo anti CRP que recubre una zona de la membrana de an lisis l nea de test banda de test mientras que el resto del conjugado de oro anti CRP libre se une al anticuerpo de cabra antirrat n que recubre asimismo otra zona de la membrana de an lisis l nea de control banda de control Las intensidades de se al correspondientes a la l nea de test y la l nea de control respectivamente se miden de manera cuantitativa con el lector B HLMANN Quantum Blue REACTIVOS SUMINISTRADOS Y PREPARACI N Reactivos Cantidad C digo Comentarios Cartucho de prueba sellado al vac o en una bolsa de aluminio 25 unidades B LFCRP TC 1 vial 10 ml Chase buffer Tamp n
32. ente pasados 12 minutos 1320 segundos 2 M todo lt CRP_0 gt sin cron metro interno e A ada 100 ul de muestra de suero diluida en el puerto de carga de muestra del casete de prueba e Incube la muestra durante 22 minutos 1 minuto arranque un cron metro manualmente e Cargue el casete de prueba en el portacasetes de prueba del lector e Inicie el barrido del casete con el lector Quantum Blue Reader pulsando el bot n de inicio lt ENTER gt inmediatamente MEDIDAS DE PRECAUCI N T CNICAS e Los componentes no se deben utilizar m s all de la fecha de caducidad impresa en las etiquetas No se deben mezclar reactivos de lotes diferentes e El rendimiento del an lisis se ver adversamente afectado si los reactivos se diluyen de manera incorrecta se modifican o se conservan en condiciones distintas de las detalladas en conservaci n y per odo de validez de los reactivos Evite la contaminaci n de los reactivos Deje que los reactivos alcancen la temperatura ambiente Mezcle bien los reactivos som talos a v rtex antes de usarlos Las casetes no pueden ser reutilizadas Los resultados del an lisis deben interpretarse de manera conjunta con la informaci n obtenida de la valoraci n cl nica del paciente y otros procedimientos diagn sticos CONTROL DE CALIDAD Para hacer un uso correcto de este producto es necesario entender en detalle las presentes instrucciones de uso Unicamente se obtendr n resultados
33. erdo con el protocolo CLSI EP17 A Limite de cuantificaci n LoQ LoQ inferior lt 1 0 mg l de CRP LoQ superior 225 mg l de CRP El LoQ se ha establecido con el perfil de precisi n El l mite de cuantificaci n corresponde a la concentraci n de CRP con una imprecisi n inferior a 25 CV permitiendo mediciones cuantitativas en el rango de 1 0 LoQ inferior a 25 mg l LoQ superior Ver la Table 6 Rango din mico El rango de ensayo es entre 1 0 y 25 mg l Precisi n Repetibilidad lt 19 3 CV Precisi n total lt 24 0 CV La repetibilidad del ensayo Quantum Blue para CRP se calcul a partir de 6 muestras supplementadas con CRP que cubr an el rango de ensayo conforme a CLSI EP5 A2 Cada muestra se analiz de acuerdo al procedimiento de ensayo en una tanda de lectura utilizando tres lotes con 20 r plicas cada uno Los valores medios de tres lotes diferentes de cartuchos de an lisis se presentan en la Table 7 La repetibilidad estuvo por debajo del 20 CV Precisi n interlote 24 3 CV Precisi n interlaboratorio lt 25 2 CV La precisi n interlote e interlaboratorio del ensayo Quantum Blue para CRP se calcul a partir de 6 muestras supplementadas con CRP que cubr an el rango de ensayo Cada muestra se analiz de acuerdo al procedimiento de ensayo en una tanda de lectura utilizando tres lotes con 20 r plicas cada uno Los valores medios de tres lotes diferentes de cartuchos de an lisis se presentan en la Table 8 L
34. idiert werden Lip mische Proben k nnen vermieden werden wenn die Proben von n chternen Patienten abgenommen werden TESTDURCHF HRUNG Der Arbeitsablauf gliedert sich in 2 Schritte 1 Verd nnung der Serumproben mit Chase Puffer Das Serum vor der Messung 1 10 mit Chase Puffer verd nnen Z B 15 ul Serum mit 135 ul Chase Puffer B LFCRP CB verd nnen 2 Lateral Flow Assay Auswertung 100 ul verd nnte Serumprobe auf die Testkassette auftragen 3 Lateral Flow Testablauf und Quantifizierung Es sind zwei alternative Methoden auf dem Quantum Blue Reader gespeichert lt CRP_22 gt und lt CRP_0 gt W hlen Sie eine dieser Methoden aus bevor Sie den Assay starten Laden Sie die testspezifischen Parameter von der RFID Chipkarte 1 Methode lt CRP_22 gt mit internem Zeitmesser e Kassette auf den Kassettenhalter des Readers laden e 100 ul verd nnte Serumprobe auf die Ladevorrichtung der Kassette aufbringen e Den Kassettenhalter schliessen und den Start lt ENTER gt Knopf dr cken e Der Lesevorgang startet automatisch nach 22 Minuten 1320 Sek 2 Methode lt CRP_0 gt ohne internen Zeitmesser e 100 ul verd nnte Serumprobe auf die Ladevor richtung der Kassette aufbringen e Die Kassette f r 22 1 Minute inkubieren einen Wecker manuell einstellen e Kassette auf den Kassettenhalter des Readers laden und auslesen durch Dr ckendes Start lt ENTER gt Knopfes Hinweis Nehmen Sie das Reader Manual zu Hilfe
35. ie LoD wurde ermittelt mit Hilfe von niedrigen CRP Seren Die Revision date 2013 07 29 6 16 INTERFERENZEN Interferenzen wurden gem ss CLSI Protokoll EP7 A2 getestet Stark h molytische lip mische oder ikterische Proben mit CRP Konzentrationen bis zu 2 mg L k nnen mit dem Test interferieren und falsch erh hte CRP Werte von bis zu bis zu 40 ergeben Die folgenden Substanzen wurden getestet Triglyzeride Intralipid 13 2 mg ml konjugiertes B HLMANN Quantum Blue CRP Bilirubin 0 2 mg ml unkonjugiertes Bilirubin 0 29 mg ml und H moglobin 2 mg ml Andre Substanzen und oder Faktoren sind nicht untersucht worden Weitere Interferenzen k nnen nicht ausgeschlossen werden ERWARTETE WERTE Die folgenden Referenzintervalle f r Serum 97 5 Perzentile wurden mit asymptomatischen Blutspendern ermittelt 97 5 Perzentile 4 76 mg L Median 1 12 mg L n 99 LEISTUNGSEINSCHR NKUNGEN Temperatur Der Assay muss bei einer Temperatur von 18 22 C durchgef hrt werden Revision date 2013 07 29 FRANCAIS USAGE PREVU Le test immunochromatographique Quantum Blue pour prot ine C r active CRP est un test dit sandwich a deux sites concu pour la d termination quantitative de la CRP dans le s rum humain au moyen du lecteur Quantum Blue de B HLMANN PRINCIPE DU TEST Le test mesure quantitativement l antigene de la CRP via un test immunochromatographi que dit sandwich Un anticorps mo
36. inealidad Se prepar una muestra con 65 mg l de CRP utilizando suero extento de CRP y soluci n patr n de CRP La muestra se diluy en 16 pasos utilizando suero libre de CRP y seguidamente se ensay en cuatro cartuchos de an lisis Para cada diluci n se calcul la media conforme a CLSI EP6 A Los resultados mostraron linealidad entre 0 80 y 35 mg l V ase la Table 9 Revision date 2013 07 29 14 16 e Recuperaci n 80 120 Se prepar una muestra con 65 mg l de CRP utilizando suero extento de CRP y soluci n patr n de CRP La muestra se diluy en 16 pasos y seguidamente se ensay en cuatro cartuchos de an lisis Se calcul la media correspondiente a cada concentraci n La recuperaci n era aceptable entre 0 8 y 35 mg l y con una diluci n adicional de 1 25 hasta 100 mg l La recuperaci n variaba entre el 80 y el 120 e Efecto de gancho a dosis altas No se observ efecto de gancho a dosis altas hasta una concentraci n de 200 mg l e Comparaci n de m todos R2 0 96 y 1 063x Se compararon 22 muestras con el m todo KoneLab para CRP de alta sensibilidad Los datos de correlaci n se ilustran en la Figure 2 SUSTANCIAS INTERFERENTES Las sustancias interferentes se evaluaron de conformidad con el protocolo CLSI EP7 A2 Muestras fuertemente hemol ticas lip micas o ict ricas con concentraciones de CRP de hasta 2 mg l pueden interferir con el an lisis dando lugar a resultados de CRP falsamente elevados ha
37. noclonal AcM de capture pr sentant une sp cificit lev e envers la CRP est d pos sur la membrane de test Un second anticorps monoclonal de d tection conjugu de l or colloidal est d pos sur le dispositive de lib ration des conjugu et lib r dans le syst me apr s l ajout de l chantillon tester Le conjugu or CRP anti CRP se lie l anticorps anti CRP d pos sur la membrane de test ligne de test bande de test le conjugu or anti CRP libre r siduel se lie l anticorps de ch vre anti souris d pos sur la membrane de test ligne de contr le bande de contr le Les intensit s de signal respectives de la ligne de test et de la ligne de contr le font l objet d une mesure quantitative par le lecteur Quantum Blue de B HLMANN R ACTIFS INCLUS ET PR PARATION R actifs Quantit Code Remarques Cartouches d essai En sachet aluminium 25 B LFCRP TC Sous vide Tampon d dilution Neon BirCRP CB Pr t l emploi Carte puce RFID Employer avec rouge i B LECRP RCCR Firmware 1 0 4 x Carte puce RFID Employer avec blanche i B LFCRP RCC Firmware 2 2 17 Table 3 STOCKAGE ET DUR E DE CONSERVATION DES REACTIFS Tous les constituants du kit sont stables entre 2 et 8 C jusqu la date d expiration imprim e sur les tiquettes MAT RIEL REQUIS e Pipettes de pr cision extr mit s jetables 10 200 ul e Tubes pour la dilution des chantillons e Min
38. nt t test es triglyc rides Intralipid 13 2 mg mL bilirubine conjugu e 0 2 mg mL bilirubine non conjugu e 0 29 mg mL et h moglobine 2 mg mL Aucun autre facteur ni substance n a t test lors de cette tude Le risque d interf rences ne peut tre cart VALEURS ATTENDUES L intervalle de r f rence suivant pour le s rum 97 5 centile a t d termin partir de donneurs de sang asymptomatiques 97 5 percentile 4 76 mg L M diane 1 12 mg L n 99 FACTEURS LIMITANT LA PERFORMANCE Temp rature Le test doit tre r alis une temp rature comprise entre 18 et 22 C B HLMANN Quantum Blue CRP ITALIANO USO PREVISTO L analisi di flusso laterale per la proteina C reattiva Quantum Blue un immunodosaggio a sandwich studiato per la determinazione quantitativa della CRP nel siero umano in combinazione con il lettore BUHLMANN Quantum Blue PRINCIPIO DELL ANALISI L esame e studiato per la misurazione selettiva dell antigene CRP mediante un immunodosaggio a sandwich Un anticorpo monoclonale di cattura mAb altamente specifico per la CRP riveste la membrana di rilevazione Un secondo anticorpo monoclonale di rilevazione coniugato a oro colloidale e deposto sul supporto di rilascio del coniugato viene rilasciato nel sistema di reazione in seguito all aggiunta del campione in esame Il complesso CRP anti CRP coniugato con oro si lega all anticorpo anti CRP legato alla memb
39. ntum Blue Reader berechnet e Falls nach der Inkubationszeit von 22 Minuten nur die Testbande T sichtbar ist Figur 1C ist das Resultat ung ltig und der Test muss mit einer neuen Testkassette wiederholt werden e Falls weder die Kontrollbande C noch die Testbande T nach der Inkubation von 22 Minuten nachweisbar sind Figur 1D ist das Resultat ung ltig und der Test muss mit einer neuen Testkassette wiederholt werden eDa der Quantum Blue Reader eine quantitative Bestimmung der Test T und der Kontrollbande C erlaubt wird eine zus tzliche Validierung durchgef hrt Falls die Signalintensit t der Kontrollbande C nach der Inkubation von 22 Minuten einen bestimmten Wert unterschreitet ist das Resultat ung ltig und der Test muss mit einer neuen Testkassette wiederholt werden STANDARDISIERUNGUND INTERPRETATION DER ERGEBNISSE e Der Lateral Flow Assay ist gegen das Referenzmaterial NIBSC 85 506 kalibriert e Der B HLMANN Quantum Blue Reader verwendet eine Lot spezifische Standardkurve zur Berechnung der CRP Konzentration Diese Standardkurve wird anhand von Richtigkeitsproben mit definierten CRP Konzentration berechnet e Zur quantitativen Bestimmung von Proben oberhalb von 20 mg L wird das Serum 1 250 verd nnt mit Chase Puffer und erneut bestimmt Die gemessene Konzentration muss dann mit dem Verd nnungsfaktor mit 25 multipliziert werden um das Endergebnis zu erhalten Proben wurden in 3 unabh ngigen L
40. nvalid and the CRP assay has to be repeated using another Test Cartridge As the Quantum Blue Reader allows a quantitative evaluation of the Test T and Control C Lines an additional validity check of the Control Line C is undertaken If the signal intensity of the Control Line C is below a specific threshold after 22 minutes of incubation time the test result is also invalid and the CRP assay has to be repeated using another Test Cartridge STANDARDIZATION AND INTERPRETATION OF RESULTS e The Lateral Flow Assay is calibrated to the NIBSC 85 506 reference material e The B HLMANN Quantum Blue Reader uses a lot specific standard curve to calculate the CRP concentration This lot specific standard curve is generated with accuracy pool samples with assigned CRP concentrations e For quantitative measurements of samples reading above 20 mg L dilute the serum samples 1 250 with chase buffer and assay them again according to the procedure The measured concentration must then be multiplied by the reciprocal volume factor x 25 to obtain the final result eCRP values should be used as supplementary data available to the physician in establishing a diagnosis were measured with three different lots of Test Cartridges in three independent runs of 20 replicates each The averaged SD values were determined and the LoD has there from been calculated in accordance with CLSI protocol EP17 A Limit of Quantification LoQ Lower
41. r comment choisir la m thode de test et charger les param tres de lot de la carte puce RFID en vue de mesurer des chantillons PR CAUTIONS PR CAUTIONS DE S CURIT e Les chantillons peuvent pr senter un risque biologique virus de l h patite B ou VIH par exemple Ils doivent tre manipul s avec toutes les pr cautions n cessaires e S assurer que les coupures abrasions et l sions cutan es sont correctement prot g es et prendre les pr cautions n cessaires pour viter une auto inoculation ou l aspersion de muqueuses e Porter des quipements de protection individuelle adapt s pour viter les contacts oculaires et cutan s e Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment la r glementation en vigueur PR CAUTIONS TECHNIQUES e Les composants ne doivent pas tre utilis s au del de la date d expiration imprim e sur les tiquettes Ne pas m langer des r actifs de lots diff rents Revision date e Le test ne donnera pas les r sultats escompt s en cas de dilution incorrecte de modification ou de stockage des r actifs dans des conditions autres que celles d taill es la rubrique Stockage et dur e de conservation des r actifs e viter la contamination des r actifs e Laisser les r actifs se stabiliser la temp rature ambiante Bien m langer au vortex les r actifs avant utilisation e Les cartouches d essai sont usage unique e Les r sultats d
42. rana di rilevazione linea di rilevazione banda di rilevazione e l anti CRP coniugato con oro in eccesso si lega all anticorpo caprino antimurino legato alla membrana di rilevazione linea di controllo banda di controllo Le intensit dei segnali della linea di rilevazione e della linea di controllo sono misurate quantitativamente mediante il lettore B HLMANN Quantum Blue REAGENTI FORNITI E PREPARAZIONE Reagenti Quantit Codice Commenti Cartuccia di rilevazione sigillata sottovuoto in una 25 pezzi B LFCRP TC busta di stagnola 1 Chase buffer Tampone flaconcino B LFCRP CB Pronto per l uso di diluzione 10 ml a A B LFCRP Utilizzare con Carta chip RFID rossa 1 unit RCCR Firmware 1 0 4 x 7 x E Utilizzare con Carta chip RFID bianca 1 unit B LFCRP RCC Firmware 2 2 17 Tabella 4 CONSERVAZIONE E VALIDIT DEI REAGENTI Tutti i componenti del kit sono stabili a 2 8 C fino alla data di scadenza riportata sulle etichette ATTREZZATURA e Timer opzionale e Pipette di precisione con puntali monouso 10 200 ul e Provette di 5 ml per la diluizione degli campioni e Lettore Quantum Blue disponibile presso B HLMANN codice di ordinazione BI POCTR ABS e Guanti e camice da laboratorio RACCOLTA E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI Sono necessari meno di 50 ul di siero Prelevare il sangue in provette semplici per venipuntura per siero evitare l emolisi mescolare invertendo le provette
43. sta en un 40 Se ensayaron las sustancias siguientes triglic ridos Intralipid 13 2 mg ml bilirrubina conjugada 0 2 mg ml bilirrubina no conjugada 0 29 mg ml o hemoglobina 2 mg ml En este estudio no se investigaron otras sustancias y o factores No es posible excluir interferencias Valores esperadosA partir de muestras de donantes de sangre asintom ticos se ha determinado el intervalo de referencia VALORES ESPERADOS A partir de muestras de donantes de sangre asintom ticos se ha determinado el intervalo de referencia siguiente para suero percentil 97 5 Percentil 97 5 4 76 mg l Mediana 1 12 mg l n 99 LIMITACIONES DE RENDIMIENTO TEMPERATURA El ensayo debe realizarse a una temperatura de entre 18 y 22 C B HLMANN Quantum Blue CRP APPENDIX TABLES AND FIGURES TABELLEN UND FIGUREN TABLES ET FIGURES TABELLE E FIGURE TABLAS E FIGURAS Figure 1 Test results o o o 5 o o o 4 A A 4 A B C D Figure 2 Method comparison LF CRP Table 7 Summary of within lab precision with Konelab CRP High Sensitivity Sample Concentration Repeatability Total No mean mg L CV Precision 16 CV 14 SI 1 16 17 6 19 7 S2 2 30 18 996 21 896 12 S3 3 25 19 396 22 196 S4 10 0 14 996 19 496 10 S5 16 5 19 196 22 796 8 S6 23 3 18 596 24 096 E Q u Tabl
44. u test doivent tre interpr t s en tenant compte des informations r sultant de l examen clinique du patient et d autres proc dures diagnostiques CONTR LE QUALIT e Le pr sent mode d emploi doit tre parfaitement compris pour une utilisation r ussie du produit Seul le respect complet du pr sent mode d emploi garantit l obtention de r sultats fiables Une manipulation incorrecte des chantillons pr lev s sur le patient peut donner lieu des r sultats inexacts Si la fid lit du test ne correspond pas aux limites tablies et que sa r p tition permet d carter les erreurs techniques v rifier les points suivants i dispositifs de pipetage de r gulation de la temp rature et de chronom trage ii dates d expiration des r actifs et iii conditions de stockage et d incubation VALIDATION DES R SULTATS Pour que le r sultat du test soit valide la ligne de contr le C doit tre visible dans tous les cas voir les figures 1A et 1B Cette ligne constitue uniquement un t moin fonctionnel et elle ne donne aucune indication pour l interpr tation de la ligne de test T Si la ligne de test T est ind tectable apr s 22 minutes d incubation figure 1A la concentration de CRP dans l chantillon sanguin est inf rieure la limite de d tection Si la ligne de test T est d tectable apr s 22 minutes d incubation figure 1B la concentration de CRP dans l chantillon sanguin est calcul e par le lecteur
45. uf des Verfallsdatums nicht mehr verwendet werden Mischen Sie nicht Reagenzien verschiedener Kit lots e Die Leistungsmerkmale des Test k nnen negativ beeinflusst werden durch nicht korrekt verd nnte oder modifizierte Reagenzien oder wenn sie nicht unter den in Lagerung und Haltbarkeit der Reagenzien spezifizierten Bedingungen gelagert werden e Vermeiden Sie eine Kontamination der Reagenzien Revision date 2013 07 29 5 16 e quilibrieren Sie die Reagenzien auf Raumtemperatur e Reagenzien vor Gebrauch gut mischen vortexen e Die Kassetten k nnen nicht wiederverwendet werden e Test Ergebnisse sollten in Verbindung mit klinischen Informationen aus der klinischen Untersuchung und den Ergebnissen anderer diagnostischer Verfahren interpretiert werden UNTERSUCHUNGSMATERIAL UND LAGERUNG Es wird weniger als 50 ul Serum ben tigt Blut in Abnahmer hrchen f r Serum sammeln H molyse vermeiden indem die R hrchen mehrfach ber Kopf gemischt werden 45 Minuten bei Raumtemperatur lichtgesch tzt gerinnen lassen 18 28 C Bei 1800 x g 15 Minuten bei Raumtemperatur 18 28 C zentrifugieren und das Serum abgiessen Keine hitzeinaktivierten Seren verwenden Serumproben k nnen gek hlt bei 2 8 C f r bis zu 7 Tage gelagert werden F r eine l ngere Lagerung das Serum bei 20 C aufbewahren Die Proben sind so mindestens 4 Monate stabil Achtung Lip mische h molytische und ikterische Proben m ssen in diesem Test val
46. ults showed linearity within 0 80 and 35 mg L Refer to Table 9 Recovery 80 120 A sample containing 65 mg L CRP was produced using CRP free serum and CRP stock solution The sample was diluted in 16 steps using CRP free serum as subsequently assayed on four test cartridges The mean was calculated for each for each concentration The recovery was acceptable between 0 8 and 35 mg L and with an additional dilution of 1 25 up to 100 mg L The recovery varied from 80 120 96 e High Dose Hook effect No High dose hook effect was observed up to a concentration of 200 mg L e Method Comparison R2 0 96 y 1 063x 22 samples were compared with KoneLab CRP High Sensitivity The correlation data are illustrated in Figure 2 PERFORMANCE CHARACTERISTICS e Limit of Blank LoB lt 0 34 mg L CRP The LoB has been established in accordance with CLSI protocol EP17 A in three independent runs using three different lots of Test Cartridges with 60 blank values in total by using CRP free serum as a sample e Limit of Detection LoD lt 0 61 mg L CRP The LoD has been established with CRP low serum The samples Revision date 2013 07 29 3 16 INTERFERING SUBSTANCES Interference substances were evaluated in accordance with CLSI protocol EP7 A2 Strongly hemolytic lipemic or icteric samples with CRP concentration of up to 2 mg L might interfere with the test leading to up to 40 96 falsely elevated CRP results The following substances wer
47. um d pourvu de CRP puis il a t test sur quatre cartouches d essai La moyenne a t calcul e conform ment au protocole EP6 A du CLSI pour chaque dilution Les r sultats ont produit une lin arit entre 0 80 et 35 mg L voir la Table 9 e R cup ration 80 120 Un chantillon contenant 65 mg L de CRP a t pr par a partir de s rum d pourvu de CRP et de solution m re de CRP L chantillon a t dilu en 16 tapes avec du s rum d pourvu de CRP puis il a t test sur quatre cartouches d essai La moyenne a t calcul e pour chaque concentration Le taux de Revision date 2013 07 29 9 16 r cup ration obtenu est acceptable entre 0 8 et 35 mg L ainsi qu apr s une dilution suppl mentaire de 1 25 a 100 mg L e Effet crochet a dose lev e aucun effet crochet n a t observ jusqu a la concentration de 200 mg L e Comparaison des m thodes R2 0 96 y 1 063x 22 chantillons ont t compar s avec le KoneLab CRP High Sensitivity Les donn es de correlation sont pr sent es sur la figure Figure 2 INTERFERENCES Les substances donnant lieu a des interf rences ont t valu es conform ment au protocole EP A2 du CLSI Les chantillons fortement h molys s lip miques ou ict riques ayant une concentration en CRP inf rieure ou gale 2 mg L sont susceptibles d interf rer avec le test en produisant des taux de CRP faussement lev s de 40 Les substances suivantes o
48. uteur facultatif e Quantum Blue Reader code de commande BI TR ABS e Gants et blouse de laboratoire 7 16 PR L VEMENT ET STOCKAGE DES CHANTILLONS Le test n cessite moins de 50 uL de s rum Pr lever le sang dans des tubes ordinaires de pr l vement par ponction veineuse pour s rum en vitant l h molyse Homog n iser en retournant plusieurs fois le tube et laisser coaguler pendant 45 minutes la temp rature ambiante 18 a 28 C l abri de la lumi re Centrifuger 1800 x g pendant 15 minutes la temp rature ambiante 18 28 C et recueillir le s rum Ne pas soumettre les chantillons une inactivation thermique Les chantillons de s rum peuvent tre conserv s 7 jours une temp rature comprise entre 2 et 8 C Placer les chantillons 20 C pour les conserver plus longtemps Les chantillons sont stables pendant au moins 4 mois Note l utilisation d chantillons lip miques h molys s ou ict riques doit tre valid e pour ce test Les chantillons lip miques peuvent tre vit s en demandant au patient d tre jeun pendant au moins 12 h avant la prise de sang B HLMANN Quantum Blue CRP PROC DURE DE TEST La proc dure de test comprend deux parties distinctes 1 Dilution des chantillons de s rum avec le tampon de dilution Avant la mesure diluer l chantillon de s rum avec le tampon de dilution selon un rapport de dilution 1 10 Par exemple m langer 15 ul d

Quantum Blue C-Reactive Protein (CRP)

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