Système de test ZEUS IFA nDNA
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1. Filtre d excitation Filtre barri re Filtre de suppression rouge KP490 K510 ou K530 BG38 BG12 K510 ou K530 BG38 FITC K520 BG38 Source lumineuse Tungst ne Halog ne 100W KP490 K510 ou K530 BG38 Lumi re incidente Source lumineuse Vapeur de mercure 200 100 50 W Filtre d excitation Miroir dichro que Filtre barri re Filtre de suppression rouge KP500 TK510 K510 ou K530 BG38 FITC TK510 K530 BG38 Source lumineuse Tungst ne Halog ne 50 et 100 W KP500 TK510 K510 ou K530 BG38 FITC TK510 K530 BG38 PR L VEMENT DES CHANTILLONS 1 ZEUS Scientific recommande que l utilisateur pr l ve les chantillons conform ment au document M29 du CLI intitul Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infectious Diseases Aucune m thode de test connue ne peut offrir une garantie totale qu un chantillon de sang humain ne causera aucune transmission d infection Par cons quent tous les d riv s d chantillons sanguins doivent tre consid r s comme possiblement infectieux 2 Utiliser uniquement du s rum sanguin fra chement pr lev et correctement r frig r obtenu selon la proc dure de ponction veineuse aseptique de cette analyse 34 35 Ne pas ajouter d anticoagulant ni d agent de conservation viter d utiliser du s rum sanguin h molys lib mique ou expos des bact ries Syst me de test ZEUS IFA nDNA 2 Mis jour le 10 302. Science 166 1648 1969 12 Gershwin ME Steinberg AD Arthritis Rheum 17 947 1974 13 Casals SP Friou GJ Myers LI Arthritis Rheum 7 379 1964 14 Arana R Seligmann M J Clin Invest 46 1867 1967 15 Tan EM Schur PH Carr RI et al J Clin Invest 45 1732 1966 16 Stollar D Levine L Leher HI et al Proc Nat l Acad Sci USA 48 874 1962 17 Bosicevich J Nasou JP Kayhoe DE Proc Soc Exp Biol Med 103 636 1960 18 Jokinen EJ Julkunen H Ann Rheum Dis 24 477 1965 19 Matrer R Helgeland SM Tonder O J Immunol Methods 5 345 1974 20 Bickel YB Barnett EV Pearson CM Clin Exp Immunol 3 641 1968 21 Davis JS IV Arthritis Rheum 14 377 1971 22 Johnson GD Edmonds JP Holbrow EJ Lancet 2 883 1973 23 Wold RT Young FE Tan EM et al Science 161 806 1968 24 Farr Rd J Infect Dis 103 239 1958 25 Koffler D Schur PH Kunkel HG J Exp Med 126 607 1967 26 Harbeck RJ Bardana EJ Kohler PF et al J Clin Invest 52 789 1973 27 Cohen SA Hughes GRV Noel GL et al Clin Exp Immunol 8 551 1971 28 Natali PG Tan EM J Clin Invest 51 345 1972 29 Aarden LA deGroot ER Feltkemp EW Ann NY Acad Sci 254 505 1975 30 Slater NGP Cameron JS and Lessof MH Clin Exp Immunol 25 480 1976 31 Stingl G Meingassner JG Swelty P et al Clin Immunol Immunopath 6 131 1976 32 Davis P Christian B and Russel AS J Rheumatol 4 15 1977 33 Tourville D
3. viter les claboussures et la g n ration d a rosols Ne pas exposer les r actifs une lumi re puissante durant leur stockage ou durant une incubation Laisser le paquet de lames arriver temp rature ambiante avant d ouvrir l enveloppe protectrice afin de prot ger les puits et le tampon absorbant de toute condensation R cup rer la solution de lavage dans un bassin r sidus Traiter la solution r siduelle avec un d sinfectant p ex 10 de javel domestique 0 5 d hypochlorite de sodium viter d exposer les r actifs aux vapeurs de javel Ne pas exposer les r actifs des solutions contenant de la javel ni m me aux odeurs fortes s chappant d une solution contenant de la javel De tr s petites quantit s de javel hypochlorite de sodium peuvent d truire l activit biologique de plusieurs r actifs de ce syst me de test Ne pas appliquer de pression sur l enveloppe de lame Une telle op ration risquerait d endommager le substrat Les composants de ce syst me de test sont assembl s pour procurer une sensibilit et une reproductibilit optimale Ne pas remplacer les r actifs par des produits d autres fabricants Lire attentivement la notice dans l emballage Composants non ouvert ouvert sont stables jusqu la date de p remption imprim e sur l tiquette dans la mesure o les conditions de stockage recommand es sont rigoureusement respect es Ne pas utiliser apr s la date de p remption Ne pas c
4. al 29 Des rapports r cents de plusieurs chercheurs affirment que cette m thode constitue un test de laboratoire utile pour d tecter des anticorps anti ADNn chez les patients atteints de lupus ryth mateux syst mique LES 30 33 Ces tudes indiquent galement que le syst me de test IFA nDNA d tection anticorps anti ADNn par immunofluorescence indirecte produit des r sultats comparables la m thode de radioimmunoessai pour la d tection d anticorps anti ADNn PRINCIPE DU TEST Le syst me de test ZEUS IFA nDNA est un essai pr standardis de d tection d anticorps par immunofluorescence indirecte permettant l identification qualitative et semi quantitative d anticorps anti ADNn dans le s rum d un patient et dans un s rum de contr le La r action se fait en deux temps Dans un premier temps si des anticorps anti ADNhn sont pr sents une r action a lieu entre les anticorps anti ADNhn et le cin toplaste du substrat C luciliae Dans un deuxi me temps de l immunoglobuline de ch vre antihumaine marqu e avec de l isothiocyanate de fluoresc ine FITC est ajout e au substrat Si le s rum du patient contient des anticorps anti ADNn une r action positive antig ne anticorps fluorescente de couleur vert pomme est observ e lorsque les lames sont examin es sous un microscope fluorescence La r action positive se reconna t par un marquage intense dans les petits cin toplastes du substrat C luciliae EE COMPOS
5. syst mique LES Des 11 patients atteints de LES neuf se sont av r s tre un stade aigu de n phrite lupus ce diagnostic ayant t confirm par une biopsie r nale Les deux patients ayant obtenu un r sultat n gatif d anticorps anti ADNn ne souffraient d aucune maladie r nale active Aucun autre patient souffrant d autres maladies n a pr sent d anticorps anti ADNn dans le s rum bien que ces 41 patients aient obtenu un titre positif de d tection d ANN avec des dilutions allant de 1 40 1 40 000 Sp cificit Le syst me de test ZEUS IFA nDNA peut d tecter des anticorps d IgG IgA et IgM dans le cadre d analyses avec diffusion de gel et d analyses immuno lectrophor tiques du conjugu d immunoglobuline antihumaine marqu e avec du FITC R F RENCES 1 Robbins WC Holman HR Deicher HRG et al Proc Soc Exp Biol Med 96 575 1957 2 Seligman M Cr Acad Sci Paris 245 243 1957 3 CeppeliniR Polli E Celada F Proc Soc Exp Biol Med 96 572 1957 4 Deicher HRG Holman HR Kunkel HG J Exp Med 109 97 1959 5 Dubois EL J Rheumatol 2 204 1975 6 Epstein WV J Rheumatol 2 215 1975 7 Blomgren SE Seminars Heamtol 10 345 1973 8 Alarcon Segovia D Fishbein E J Rheumatol 2 167 1975 9 Klajman A Farkas R Gold E Ben Efraim S Clin Immunol Immunopath 3 525 1975 10 Pincus T Schur PH Rose JA N Engl J Med 281 701 1969 11 Koffler D Carr RI Agnello V et al
6. 2014 3 Les chantillons peuvent tre conserv s temp rature ambiante pendant un maximum de 8 heures Si aucun test n est effectu dans un d lai de 8 heures le s rum sanguin peut tre stock 2 8 C pendant un maximum de 48 heures Si l ex cution du test est retard e le s rum sanguin peut tre stock 20 C ou moins viter les cycles multiples de gel d gel pouvant causer une perte d activit anticorps et produire des r sultats erron s Les laboratoires utilisateurs ont la responsabilit de consulter tous les documents de r f rence disponibles et ou leurs propres tudes afin de d terminer les crit res de stabilit appropri s pour leur laboratoire 37 CONDITIONS DE STOCKAGE 8 C Syst me de test non ouvert g y Support de montage conjugu SAVe Diluent lames contr les n gatifs et positifs 2 C PBS r hydrat stable 30 jours 5 Paquets de tampon phosphate salin PBS 2 C PROC DURE D ESSAI 1 Sortir les lames de leur lieu de stockage r frig r et laisser les lames se r chauffer temp rature ambiante 20 25 C D chirer l enveloppe protectrice et sortir les lames Ne pas appliquer de pression sur les c t s plats de l enveloppe protectrice 2 Identifier chaque puits selon le s rum de patient et les contr les REMARQUE Les contr les doivent tre utilis s non dilu s Pr parer une dilution 1 10 p ex 10 ul de s rum 90 ul de SAVe Diluent ou du
7. A FA Syst me de test ZEUS IFA nDNA D ZE U S FA1001 CE A Product of ZEUS Scientific UTILISATION PR VUE Le syst me de test ZEUS IFA nDNA est un essai pr standardis con u pour la d tection qualitative et semi quantitative d anticorps de l ADN natif par immunofluorescence indirecte IFA Ce syst me de test est destin un usage diagnostique In Vitro SIGNIFICATION ET CONTEXTE Les anticorps anti acide d soxyribonucl ique natif anti ADNn sont fr quemment d couverts dans le s rum provenant de patients atteints de lupus ryth mateux syst mique LES spontan actif et de certains syndromes de lupus induits par des m dicaments 1 9 La pr sence anticorps anti ADNn est indicative d un LES actif et pr sente une corr lation troite avec un d but de n phrite lupus 5 10 13 La sp cificit des anticorps anti ADNn en pr sence de LES est nettement plus grande que celle des anticorps antinucl aires 5 12 Par cons quent la d tection des anticorps anti ADNn constitue un outil de diagnostic valable ainsi qu un outil pronostique utile pour le diagnostic diff rentiel du LES 5 10 13 La pr sence d anticorps anti ADNn dans le s rum d une personne avec un diagnostic confirm de LES est consid r e comme une indication de maladie r currente active ou de r ponse faible un traitement 5 13 Par cons quent la surveillance p riodique des anticorps anti ADNn chez les personnes ayant un diagnostic confirm de LE
8. ANTS DU SYST ME DE TEST Mat riel inclus Chaque syst me de test contient les composants suivants en quantit suffisante pour r aliser le nombre de tests indiqu sur l tiquette du conditionnement REMARQUE Le conjugu et les solutions de contr le contiennent une combinaison de Procline 0 05 v v et d azoture de sodium lt 0 1 volume d eau comme agents de conservation Le SAVe Diluent contient de l azoture de sodium comme agent de conservation sous une concentration inf rieure 0 1 volume d eau 1 Lames de substrat C luciliae Dix lames de 8 puits avec un tampon absorbant Conjugu Immunoglobuline de ch vre antihumaine tiquet e avec de l isothiocyanate de fluoresc ine FITC Contient une solution tampon de 2 sou CON phosphate avec BSA et un colorant de contraste Un flacon de 3 5 ml avec bouchon ambre Pr t l emploi t Contr le positif s rum humain Produira un marquage positif couleur vert pomme du cin toplaste dans les organismes C luciliae Une ampoule 3 R i de 0 5 ml avec bouchon rouge Pr t l emploi CONTROL CONTROL Contr le n gatif s rum humain Ne produira aucun marquage d tectable d ADNn Une ampoule de 0 5 ml avec bouchon vert Pr t l emploi P SAVe Diluent Un flacon de 30 ml bouchon vert contenant une solution de tampon phosphate salin Pr t l emploi REMARQUE La solution DIL e BER SAVe Diluent change de couleur lorsqu elle e
9. Jeter conform ment toutes les lois applicables 3 Les puits de lame ne contiennent pas d organismes viables Cependant les lames doivent tre consid r es comme des mat riaux biologiques dangereux et tre manipul es en cons quence Syst me de test ZEUS IFA nDNA 1 Mis jour le 10 30 2014 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 Ru de ER tn me 11 Les solutions de contr le sont des mat riaux biologiques dangereux Les mat riaux d origine de ces produits ont fait l objet de tests approuv s n ayant r v l aucune pr sence d antig ne du VIH 1 de HBsAg et d anticorps contre le VHC et le VIH Cependant puisqu aucune m thode de test n offre une garantie absolue d absence de tout agent infectieux ces produits doivent tre manipul s selon les consignes du niveau 2 de bios curit conform ment aux recommandations applicables aux chantillons de sang et aux s rums humains potentiellement infectieux dans le manuel des centres am ricains de contr le des maladies intitul Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories derni re dition et conform ment aux normes de l OSHA concernant les agents pathog nes sanguins 20 Pour obtenir des r sultats exacts il est essentiel de respecter les d lais et les temp ratures d incubation V rifier que tous les r actifs sont quilibr s temp rature ambiante 20 25 2C avant de commencer le test Replac
10. R and Benn V Microbiological Proceeding 1977 34 Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture Second Edition Approved Standard 1984 Published by National Committee for Clinical Laboratory Standards 35 Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens NCCLS Document H18 A Vol 10 No 12 Approved Guideline 1990 36 U S Department of Labor Occupational Safety and Health Administration Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens Final Rule Fed Register 56 64175 64182 1991 37 Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests Approved Guidelines 4 Edition 2010 CLSI Document GP44 A4 ISBN 1 56238 724 3 Clinical and Laboratory Standards Institute 950 West Valley Road Suite 2500 Wayne PA 19087 ml gt Z E U S Sc en T fi C Si vous d sirez une assistance client le aux tats Unis veuillez contacter votre distributeur local ZEUS Scientific Inc Si vous avez besoin d arance technique aux ETATE UMIE veuillez contacter ZEUS Scientific au num ro de t l phone ZOO Evans W ay Branchourg New Jersey 08876 USA ratuit indiqu ou par courriel support zeusscientific com pe Toll Free U S 1 800 286 2111 Option 2 8 q p PP i Molenstraat 15 International 1 908 526 3744 ue P e es EC 2513 BH The Hague Fax 1 908 526 2058 echnique hors des Etats Unis doivent contacter leur the Metherionde Website www zeusscient
11. S aide valuer le d veloppement clinique de la maladie et la r action du patient au traitement 5 10 13 Des anticorps anti ADN ont t d couverts dans le s rum de patients atteints de LES il y a plus de 15 ans 1 4 Depuis lors des anticorps anti ADN ont t tudi s avec de nombreuses techniques incluant la diffusion de gel 1 14 15 la fixation de compl ment 2 14 et 16 l agglutination 17 18 les tests d ADN inopin s 13 19 la radioimmuno lectrophor se 20 la contre immuno lectrophor se 21 22 et la pr cipitation de sulfate d ammonium 10 23 et 24 Des efforts consid rables ont t faits pour d terminer la sp cificit des anticorps anti ADN Il appara t maintenant qu il existe des anticorps identifiables r agissant avec l ADNn ou avec l ADN simple brin ADNSs d natur ou avec les deux 8 12 14 et 20 II semble qu il soit possible d tablir une corr lation entre les anticorps d ADNn et l activit clinique de la maladie 2 5 10 et 25 En outre des anticorps anti ADN ont t lu s des reins de patients atteints de LES et un rapport a d montr la pr sence de complexes ADN anti ADN dans le s rum de patients atteints de LES actif 26 Cependant ces anticorps ont t d couverts chez des patients avec et sans n phrite lupus active 27 28 Le syst me de test ZEUS IFA nDNA est bas sur l utilisation d un substrat cin toplaste Crithidia luciliae d crit initialement par Aarden et
12. ent l hydralazine peuvent g n rer une production d anticorps anti ADNhn 5 6 et 8 Syst me de test ZEUS IFA nDNA 3 Mis jour le 10 30 2014 R SULTATS ESP R S Les valeurs esp r es chez une population normale sont un r sultat n gatif avec une dilution de d part 1 10 Cependant certains m dicaments peuvent causer un r sultat positif d anticorps anti ADNhn 5 6 CARACT RISTIQUES DE PERFORMANCE Le syst me de test ZEUS IFA nDNA a t valu en parall le avec une proc dure de r f rence de d tection d anticorps antinucl aires AAN utilisant un substrat de foie de rat Cinquante deux s rums contenant des anticorps antinucl aires provenant de patients ayant fait l objet de diagnostics divers incluant de LES ont t retest s avec le syst me de test ZEUS IFA nDNA Le tableau suivant r sume les r sultats comparatifs Sommaire de l tude comparative du syst me de test ZEUS IFA nDNA ANN et ADNhn avec diverses maladies Nombre de patients Diagnostic R sultats AAN positifs R sultats ADNn positifs 11 Lupus syst mique 11 9 8 Hypertension ou ur mie 8 0 3 Scl rodermie 3 0 4 Arthrite rhumato de 4 0 1 Syndrome de Sj gren 1 0 5 Chirurgie c ur ouvert 5 0 20 Autre diagnostic ou aucun diagnostic 20 0 52 52 9 Les donn es pr sent es dans le tableau ci dessus r v lent la sp cificit relative du test d ADNn pour diagnostiquer le lupus ryth mateux
13. er imm diatement les r actifs inutilis s dans leur r cipient et observer les consignes de stockage Un mauvais lavage peut causer de faux r sultats positifs ou n gatifs S assurer de minimiser la quantit de solution PBS r siduelle par absorption avant d ajouter le conjugu Ne pas laisser les puits s cher entre les incubations La solution SAVe Diluent le conjugu et les solutions de contr le contiennent de l azoture de sodium sous une concentration inf rieure 0 1 volume d eau Il a t signal que l azoture de sodium pouvait former des accumulations de plomb ou d azoture de cuivre dans la tuyauterie de laboratoire lesquelles peuvent causer des explosions ou des d tonations Pour viter ce risque rincer abondamment les viers avec beaucoup d eau apr s y avoir jet une solution contenant de l azoture de sodium Cet agent de conservation peut tre toxique s il est ing r La dilution et l adult ration de ces r actifs peuvent produire des r sultats erron s Ne jamais pipeter la bouche viter tout contact de la peau o des muqueuses avec des r actifs ou des chantillons humains viter toute contamination microbienne des r actifs Des r sultats incorrects pourraient survenir Toute contamination des r actifs ou des chantillons pourrait fausser les r sultats Les r cipients en verre r utilisables doivent tre lav s et abondamment rinc s de fa on enlever tout r sidu de d tergent
14. ific com distributeur r gional Tel 31 0 70 345 8570 gt ZEUS IFA et SAVe Diluent sont des marques de commerce de ZEUS Scientific Inc 2014 ZEUS Scientific Inc Tous droits r serv s Fax 31 0 70 346 7299 Syst me de test ZEUS IFA nDNA 4 Mis jour le 10 30 2014
15. ongeler Le colorant de contraste bleu Evans est potentiellement canc rig ne En cas de contact cutan rincer abondamment sous l eau Jeter les r sidus conform ment aux r glementations locales en vigueur Ne pas laisser les lames s cher durant la proc dure Selon les conditions ambiantes du laboratoire il est possible qu il soit n cessaire de placer les lames dans une pi ce humide durant les p riodes d incubation MAT RIAUX N CESSAIRES MAIS NON FOURNIS Petites pipettes s rologiques Pasteur capillaires ou automatiques Embouts de pipettes jetables Petits tubes d essai Aq 13 x 100 mm ou de dimensions comparables Supports pour tubes d essai Plateau de marquage Un grand plateau de marquage avec un petit dispositif de m lange magn tique sera id al pour laver les lames entre les incubations Bandes de recouvrement 24 x 60 mm paisseur n2 1 Eau distill e ou d ionis e Microscope fluorescence correctement quip Cylindre gradu d un litre Minuterie de laboratoire pour mesurer les tapes d incubation Bassin de r sidus et de d sinfectant p ex 10 de javel domestique 0 5 d hypochlorite de sodium Les syst mes de filtres suivants ou des syst mes quivalents sont satisfaisants pour un usage routinier avec des assemblages de microscopie sur fond noir avec lumi re transmise ou incidente Lumi re transmise Source lumineuse Vapeur de mercure 200 W ou 50 W
16. ormes la description les r sultats sont invalides a Contr le n gatif Caract ris par l absence de marquage fluorescent sur le cin toplaste Un marquage du noyau uniquement et ou un marquage du corps basal doit tre interpr t comme un r sultat n gatif b Contr le positif Caract ris par un marquage fluorescent de couleur vert pomme sur le cin toplaste Un marquage du corps basal et du cin toplaste doit tre consid r comme un r sultat positif 3 Des contr les suppl mentaires peuvent tre test s conform ment aux r glementations gouvernementales en vigueur et aux normes des organisations d accr ditation comp tentes REMARQUES a L intensit de la fluorescence observ e peut varier selon le microscope et le syst me de filtre utilis b Le cin toplaste est g n ralement situ plus pr s du corps basal que le noyau cependant cause de la nature fluide de l endoplasme la position du cin toplaste peut varier d une cellule l autre 36 C Examiner uniquement un organisme bien d fini dans chaque champ Certains organismes n ont pas une apparence optimale la morphologie peut varier d un organisme l autre cause de leur fixation de leur stade de croissance et ou de l orientation de la lame lors du s chage 36 INTERPR TATION DES R SULTATS 1 Untitre inf rieur 1 10 est consid r n gatif 2 Test positif Observation d un marquage vert pomme sur le petit cin topla
17. s de 5 minutes en changeant de PBS entre les lavages 7 Retirez une une les lames du tampon PBS Inverser la lame et les puits principaux dans les trous des buvards fournis pongez la lame en essuyant le c t oppos avec une serviette absorbante ATTENTION Placer le buvard et la lame sur une surface plane et dure L utilisation de serviettes essuie tout pour ponger risquerait de d truire la matrice de lames Ne pas laisser les lames s cher durant la proc dure de test 8 Ajouter 20 ul de conjugu dans chaque puits 9 R p ter les tapes de 4 7 10 Appliquer 3 5 gouttes de support de montage sur chaque lame entre les puits et une bande de recouvrement Examiner imm diatement les lames avec un microscope fluorescence appropri REMARQUE S il n est pas possible d examiner imm diatement les lames appliquer du vernis ongles transparent sur la bande de recouvrement pour fermer herm tiquement les contours et ranger au r frig rateur Il est recommand que les lames soient examin es le jour m me du test CONTR LE DE QUALIT 1 Chaque fois qu un essai est ex cut un contr le positif un contr le n gatif et un contr le tampon doivent tre inclus 2 Il est recommand de lire le contr le positif et le contr le n gatif avant l valuation des r sultats du test Il sera ainsi possible d tablir les r f rences n cessaires pour interpr ter l chantillon du test Si les contr les ne sont pas conf
18. st combin e du s rum 6 Tampon phosphate salin PBS pH 7 2 0 2 Vider le contenu de chaque sachet de tampon dans un litre d eau distill e ou d ionis e M langer jusqu ce que tous les sels soient bien dissous Quatre sachets suffisants pour pr parer 4 litres MNTMED 7 Support de montage glyc rol tamponn Deux ampoules de 3 0 ml avec bec verseur et bouchon blanc REMARQUES 1 Les composants suivants ne doivent pas n cessairement tre utilis s avec des syst mes de test ayant un num ro de lot correspondant et peuvent donc tre librement utilis s avec des syst mes de test ZEUS IFA tant que les num ros de produits sont identiques SAVe Diluent produit n FA005CC support de montage produit n FA0009S et PBS produit n 00085 2 Le syst me de test contient galement a Une tiquette de composant contenant des informations sp cifiques de lot l int rieur de la bo te du syst me de test b Un CD contenant toute la documentation du produit ZEUS IFA dont le mode d emploi PR CAUTIONS 1 Pour utilisation diagnostique in vitro uniquement 2 Observer les pr cautions normalement applicables lors de toute manipulation de r actif de laboratoire En cas de contact oculaire rincer imm diatement les yeux avec beaucoup d eau et consulter un m decin Porter des v tements protecteurs appropri s ainsi que des gants et une protection des yeux du visage Ne pas respirer les vapeurs de ce produit
19. ste du substrat de C luciliae avec une dilution 1 10 sur une chelle de 1 4 1 correspond une r action faible et 4 une r action forte Tous les s rums positifs 1 10 doivent tre titr s la dilution d extr mit Cette op ration est r alis e en faisant des dilutions en s rie de 1 10 1 20 1 40 etc avec uniquement des r sultats positifs Le titre d extr mit est le taux de dilution le plus lev produisant une r action positive 3 Le marquage simultan du petit cin toplaste et du plus grand noyau C luciliae adjacent doit tre interpr t comme un r sultat positif 4 Un marquage polaire la base des flagelles n est pas significatif 5 Un marquage du noyau seulement ne doit pas tre interpr t comme un r sultat positif REMARQUE Un effet de prozone peut tre observ avec une faible dilution du s rum d un patient Si un tel effet semble possible il est sugg r de retester l chantillon du patient avec un taux de dilution plus lev p ex 1 40 ou 1 80 LIMITES DE L ESSAI Le syst me de test ZEUS IFA nDNA est un outil d aide au diagnostic Il est donc essentiel que les r sultats d anticorps anti ADNn soient interpr t s par une autorit m dicale comp tente en tenant compte des informations cliniques globales du patient Les patients souffrant de LES et suivant un traitement base de st ro des peuvent avoir un r sultat n gatif 5 8 et 9 Certains m dicaments particuli rem
20. tampon PBS pour chaque patient La solution SAVe Diluent changera de couleur pour confirmer que chantillon a t combin avec le diluant Options de dilution a Les utilisateurs peuvent titrer le contr le positif jusqu l extr mit pour l employer comme contr le semi quantitatif 1 minimalement r actif Dans un tel cas le contr le doit tre dilu avec deux volumes de SAVe Diluent ou du tampon PBS Lorsque l valuation est r alis e par ZEUS Scientific la dilution d extr mit est tablie et imprim e sur l ampoule de contr le positif 1 dilution Il est important de signaler qu cause des variations propres chaque laboratoire quipement etc le laboratoire doit tablir son propre titre d extr mit attendu pour chaque lot de contr le positif b Lors du titrage des sp cimens pr lev s sur des patients les dilutions initiales doivent tre pr par es dans du SAVe Diluent ou du tampon PBS et toutes les dilutions subs quentes doivent tre pr par es uniquement avec du SAVe Diluent ou du tampon PBS 3 Avec un distributeur appropri indiqu ci dessus distribuer 20 ul de chaque contr le et de chaque s rum de patient dilu dans les puits appropri s 4 Incuber les lames temp rature ambiante 20 25 C pendant 30 minutes 5 Rincer d licatement les lames avec du tampon PBS Ne pas appliquer directement un jet de PBS dans les puits d essai 6 Laver les lames avec deux intervalle
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