Home

CYCLO-Trac® SP-Whole Blood

Contents

1. 9 90 31 CYCLO Trac SP
2. KIT 6 KIT 6 1 6 2 6 3 6 4 6 4 7 CYCLO Trac SP
3. 117 Sandoz LTD Sandimmune H P 450
4. HPLC 26 3 O RIA CYCLO Trac SP DiaSorin O
5. A vo OPS Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep 107 TO KIT 125 Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep 1 H
6. RIA 118 15 15 1 ng mL 2 A N XAMHAH 46 4 9 10 7 25 186 6 0 3 2 25 YWHAH 625 19 2 3 1 25 TA LEA N ng mL 91 15 0 16 5 5 K vtpo 1 203 27 9 13 7 5 543 53 7 9 9 5 71 6 7 9 5 5 K vtpo 2 173 12 9 7 58 5 466 41 5 8 9 5 78 5 4 6 8 5 K vtpo 3 195 18 4 9 4 5 500 50 2 10 0 5 87 6 9 7 9 5 K vtpo 4 200 13 5 6 8 5 505 42 5 8 4 5 78 3 6 4 6 5 K vtpo 5 192 10 2 5 3 5 497 23 9 4 8 5
7. in vitro NRC 1 2 3
8. CYCLO Trac SP 8 7 ng mL n 20 15 4 CYCLO Trac SP H 50 B Bo 50 B Bo 100 1 1 7 8 lt 0 1 13 0 1 17 0 7 18 0 2 21 0 8 120 15 5 Oi 160 250 ng mL
9. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 1999 U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health H M A Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts
10. KIT CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep 1 9 mL CYCLO Trac SP 0 6 1 vial 2 mL 5 vials 1 mL CYCLO Trac SP ImmunoSep 2 100 mL CYCLO Trac SP 1 20 mL CYCLO Trac SP 2 1 mL 200 TO KIT 2 8 C 2 8 C dev va H TOU
11. 119 15 2 AAHOINOTHTA H AAHOINOTHTA ME TH TH AOKIMH 30 OPO 132 1716 ng mL x aparwp vou 100 E 1 2 1 4 1 8 96 1 93 3 95 9 TA 13 7 19 2 22 6 90 14 3 20 6 23 6 3 5 6 n 30 ng mL XA 1 95 119 17 14 1 212 109 11 10 1 467 97 7 7 15 3
12. 12 x 75 TO 20 25 C a 100 5 CYCLO Trac SP B NSB 50 uL O 100 5 CYCLO Trac SP 1 0 mL CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep y 0 CYCLO Trac SP 50 uL 0 CYCLO Trac SP 100 5 CYCLO Trac SP Ba povoyunt g CYCLO Trac SP A E 50 uL CYCLO Trac 100 5 CYCLO Trac SP 50 uL 100 35 CYCLO
13. TOU FDA HBsAg HCV HIV 1 2 B HBV C HCV HIV
14. TI O1 P 450 pe
15. 9 14 10 10 1 SMI 50 HL 10 2
16. KIT 12 CYCLO Trac SP va RIA va DiaSorin B CPM O CPM 112 Y d opeuon CPM NSB M oeg CPM 80 50 20 12
17. 8 1 12 x 75 8 2 12 x 75 8 3 125 8 4 vortex 8 5 a 400 UL 100 uL 50 B va 1 0 mL 100 LL 110 8 6 8 7 HPLC T1226 32 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 12 x 75 400 uL
18. 10 3 10 4 ImmunoSep 10 5 1 4 1 9 1 19 10 6 5 10 7 TO
19. 100 1000 mg dL 300 1000 mg dL 5 30 mg dL 50 200 ng mL 500 1000 ng mL 100 200 ng mL 6 20 60 ng mL OKT3 1500 ng mL Ta 100 ug mL CYCLO Trac SP DiaSorin HPLC AY
20. 9 DEOMEUM VN 2 222 9 HPLC RIA RIA 23 RIA HPLC
21. 125 KITPIKWV EDTA 0 05 4 5 CYCLO Trac SP 1 2 0 1 108 5 KAI TIA IN VITRO
22. CDC 22 1976 1999 45 R20 21 22 R32 28 TO 125 To KIT 9 uCi 333 kBq 125
23. 109 4 5 va
24. 4 1 NSB ImmunoSep CYCLO Trac SP VO Kal 0 08 4 2 CYCLO Trac SP 0 6 O 0 1 O 1200 ng mL 0 1 CYCLO Trac SP
25. IDI TNTEG 2 Av T 55 53 19 11 26 1
26. II TO KIT CYCLO Trac SP Hu pa Liver era ng mL ng mL ng mL N M oo N T A N 0 4 8 2 438 269 9 161 115 7 10 3 392 138 10 326 176 9 372 111 11 9 6 428 207 10 563 119 10 496 136 14 10 5 387 219 10 598 162 10 1 620 231 21 10 3 487 283 10 5 505 185 10 478 109 30 9 3 416 163 9 4 450 102 10 1 608 217 60 9 1 579 474 9 3 482 171 8 1 437 66 90 9 1 252 105 8 1 433 173 8 347 102 Total events 24 13 3 a 3 75 mg kg 5 mg kg 12 mg kg 2 5 mg kg 20 mg nu pa 1 2 mg kg 5 mg kg OKT3 10
27. RIA H CYCLO Trac SP 12 1 CPM 12 2 CPM NSB CPM 12 3 To CPM CPM Tou 0 5 CPM CPM NSB Yo B Bo x 100 CPM O CPM NSB 12 4 Me YPAPAHATOS B Bo Y
28. ol 4 90 n 10 n 10 10 n 18 199 115 II 400 650 ng mL TOU
29. aia EDTA 9 27 5 10 mL EDTA 7 2 mg 5 mL Av 2 8 C 7 3 20 C 28 29 4 C TO CYCLO Trac SP 8
30. HPLC pe parafilm va 100 vortex 15 1600 x g 20 25 C 5 va
31. III TA 18 Y pkn 2 100 300 ng mL III 18 KIT CYCLO Trac SP ng mL mg dL N MET 1 0 7 12 151 128 143 49 4 0 0 7 18 0 2 8 14 16 185 96 125 27 2 2 1 1 8 2 3 15 21 19 173 94 94 2 7 1 9 1 1 9 4 4 22 ews 28 17 198 146 76 3 0 1 9 1 1 8 5 5 29 35 22 210 168 70 2 9 1 7 1 2 8 2 6 36 ews 42 17 164 63 68 2 5 1 1 1 1 5 6 7 43 ews 49 14 175 53 55 2 4 1 1 1 1 5 4 8 50 ews 56 17 198 99 42 2 1 1 0 1 2 5 4 9 57 ews 63 16 176 54 40 3 1 2 7 1 0 10 9 10 64 ews 70 4 199 59 34 3 5 3 3 0 9 11 7 11
32. H 3 5 mg xih 15 mg 50 mg kA6 ALG 5 mg xih OKT3 7 H 4 mg kid 2 2 5 mg kih va 500 mg 15 mg 10 5 mg Ki OKT3 10 116
33. DiaSorin HE TO USP O in vitro 4 3 Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep To 0 08 4 4 18 CYCLO Trac SP
34. Assim as dosagens devem ser individualizadas e monitorizadas de forma a ser poss vel alcan ar uma imunosupress o ptima e a minimizar os efeitos laterais adversos A quase totalidade da ciclosporina presente no sangue total est ligada aos gl bulos vermelhos e s prote nas plasmaticas Esta distribui o afectada por varia es da temperatura e dos hemat critos Para assegurar resultados consistentes necess rio um protocolo normalizado para a recolha de sangue Est o actualmente dispon veis dois m todos para monitorizar os n veis de ciclosporina nos pacientes a cromatografia l quida de alta press o HPLC e o radioimunoensaio RIA Os radioimunoensaios de primeira gera o utilizavam anticorpos policlonais que apresentavam uma elevada reactividade cruzada com os metab litos em circula o Os valores de ciclosporina gerados por esses radioimunoensaios excediam invariavelmente os valores gerados pela HPLC Os radioimunoensaios de segunda gera o baseiam se em tecnologias de anticorpos monoclonais Foram desenvolvidos anticorpos monoclonais espec ficos e n o espec ficos O anticorpo espec fico mede apenas o composto precursor da ciclosporina e gera valores semelhantes aos obtidos pela HPLC O anticorpo n o espec fico mede o composto precursor e os metab litos produzindo resultados semelhantes aos obtidos pelos radioimunoensaios de primeira gerac o 3 PRINC PIO DO ENSAIO O radioimu
35. Gesundheitssch dlich beim Einatmen Verschlucken und bei Kontakt mit der Haut R32 Entwickelt bei Kontakt mit S ure sehr giftige Gase 28 Bei Kontakt mit der Haut sofort mit viel Wasser abwaschen REAGENZIEN MIT JOD 125 Dieses Kit enth lt radioaktives Material mit h chstens 9 uCi 333 Jod 125 Bei der Lagerung Handhabung und Entsorgung dieses Materials sind entsprechende Vorsichtsma nahmen und gute Laborpraktiken einzuhalten F r rzte bzw Institutionen die im Rahmen einer Generallizenz Radioisotope erhalten gilt Folgendes Entgegennahme Erwerb Besitz und Verwendung dieses radioaktiven Materials sind nur rzten veterin rmedizinisch t tigen Tier rzten klinischen Labors oder Krankenh usern und nur f r klinische In vitro Tests oder In vitro Labortests gestattet bei denen kein interner oder externer Kontakt des Materials oder seiner Strahlung mit Menschen oder Tieren stattfindet Entgegennahme Erwerb Besitz Verwendung und Weitergabe des Materials unterliegen den Vorschriften und der Generallizenz der US Nuclear Regulatory Commission bzw des Staates mit dem diese Beh rde ein Abkommen zur Aus bung ihrer berwachungsfunktion abgeschlossen hat 1 Die Lagerung des radioaktiven Materials ist auf einen speziell daf r bestimmten Bereich zu beschr nken 2 Der Zugang zu radioaktivem Material ist nur befugten Personen zu gestatten 3 Radioaktives Material nicht mit dem Mund pipettieren 4 Im vorgesehenen
36. de calibrador O extra do 100 uL de 5 CYCLO Trac SP vermelho 1 0 mL ImmunoSep CYCLO Trac SP NSB bem misturado azul c Calibrador 0 CYCLO Trac SP 50 uL de calibrador O CYCLO Trac SP extra do 100 uL de 251 CYCLO Trac SP vermelho d Calibradores CYCLO Trac SP A E 50 uL de calibrador CYCLO Trac extra do 100 uL de 251 CYCLO Trac SP vermelho e Controlos e amostras desconhecidas 50 uL de amostra extra da 100 uL de 251 CYCLO Trac SP vermelho Agite o frasco de ImmunoSep Anti CYCLO Trac SP vigorosamente adicione imediatamente 1 0 mL de reagente bem misturado a todos os tubos excepto os tubos de contagem total e os tubos NSB Misture vigorosamente os tubos e incube os durante 1 hora a 20 25 C Centrifugue os tubos usando 1600 x g durante 20 minutos a 20 25 C Decante imediatamente os sobrenadantes de todos os tubos excepto dos tubos de contagem total invertendo os durante um per odo m ximo de 2 minutos Seque os tubos com papel absorvente para remover quaisquer gotas de sobrenadante que possam ter permanecido nas beiras antes de virar os tubos para cima Utilizando um contador de cintila o gama conte o precipitado de cada tubo e os tubos de contagem total durante um per odo de tempo suficiente para atingir precis o estat stica consulte a sec o Limita es do Procedimento Em alternativa poder extrair 200 uL de amostra com 800 uL de metanol g 1 118 x 108 raio em cm rpm 72 10 COMEN
37. 5 CYCLO Trac SP rot e Kontrollen und unbekannte Proben 50 uL extrahierte Probe 100 uL 15 CYCLO Trac SP rot 9 10 Das Fl schchen mit dem Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep kr ftig sch tteln sofort 1 0 mL des gut gemischten Reagenz in allen R hrchen hinzuf gen mit Ausnahme der NSB R hrchen und der R hrchen f r die Gesamtz hlung 9 11 Die R hrchen kr ftig sch tteln und dann bei 20 25 C eine Stunde lang inkubieren 9 12 Die R hrchen 20 Minuten lang bei 20 25 C und 1600 G zentrifugieren Alternativ k nnen auch 200 uL der Probe in 800 Methanol extrahiert werden G 1118x 103 Radius in cm U min 31 9 13 Anschlie end sofort den berstand bei allen R hrchen mit Ausnahme der R hrchen f r die Gesamtz hlung dekantieren dazu die R hrchen maximal 2 Minuten lang umdrehen Die R hrchen mit L schpapier abtrocknen um Tropfen des berstands zu entfernen die sich u U am Rand befinden und dann die R hrchen aufrecht stellen 9 14 Mit einem Gammaszintillationsz hler den Niederschlag in jedem R hrchen und in den R hrchen f r die Gesamtz hlung messen Dabei ausreichend Zeit einplanen um eine statistische Genauigkeit zu erreichen siehe Abschnitt Grenzen des Verfahrens 10 ANMERKUNGEN ZUM VERFAHREN 10 1 Im Interesse maximaler Mess und Wiederholgenauigkeit m ssen die Schritte f r die Methanolextraktion sorgf ltig eingehalten werden Es m ssen positive Verdr ngungspipetten SMI zur Pipettierun
38. Y 0 9121X 47 r 0 9719 Y 0 8022X 34 r 0 9585 Y 0 9196X 50 r 0 9223 Y 0 9572X 48 r 0 9067 1 038X 27 r 0 9124 187 1 3074X 29 r 0 9703 1 4672X 16 r 0 9696 1 3575X 12 r 0 9067 Ta HPLC 121 REFERENCES BIBLOGRAPHIE LITERATUR BIBLIOGRAFIA BIBLIOGRAFIA 1 2 10 11
39. c Uni n no espec fica CPM de tubo NSB Media de CPM de tubos de cuentas totales d Pendiente de la curva del calibrador Por ejemplo controle la capacidad de reproducci n de ciclo a ciclo en los puntos de 80 50 y 20 de la l nea del calibrador 46 12 C LCULO DE RESULTADOS Hay numerosos m todos para calcular los resultados de los ensayos RIA Todos tienen como finalidad obtener una curva de calibrado que relacione el alcance de la uni n con las concentraciones de los calibradores de calibrado La curva para el ensayo de CYCLO Trac SP se obtiene trazando B Bo frente a concentraci n logar tmica 12 1 Calcule el promedio de CPM de cada calibrador control y muestra del paciente 12 2 Reste el promedio de CPM de los tubos de NSB a todas las cuentas promedio para obtener la CPM corregida 12 3 Divida las CPM corregidas de cada calibrador control o muestra de paciente por la CPM corregida del calibrador 0 CPM de calibrador o muestra de paciente CPT de NSB B Bo x 100 CPM de calibrador O CPM de NSB 12 4 Con un papel gr fico semilog trace el porcentaje B Bo de los calibradores eje Y frente a su correspondiente concentraci n eje X 12 5 Una los puntos con una l nea de ajuste ptimo 12 6 Interpole las concentraciones de ciclosporina de las muestras del paciente a partir de la curva de calibrador En la pr ctica la mayor a de laboratorios utilizan un sistema inform tico de reducci n de datos Dia
40. flaskorna med kontroller Man b r ej blanda reagens fr n olika satser med undantag f r 5 CYCLO Trac SP sp r mne F r att kontinuerligt bekr fta att ett RIA test ger konsekventa resultat m ste laboratoriet kontrollera ett antal andra faktorer DiaSorin rekommenderar att man regelbundet kontrollerar f ljande parametrar f r att vara s ker p att satsen ger konsekventa resultat a Totalaktivitet b Maximal bindning Aktiviteten CPM f r 0 kalibreringsr ret Medel CPM f r totalaktivitetsr ren c Ospecifik bindning CPM f r NSB r ret Medel CPM f r totalaktivitetsr ren d Kalibreringskurvans lutning F lj exempelvis kalibreringskurvans punkter f r 80 50 och 20 som en kontroll av reproducerbarheten mellan olika k rningar 12 RESULTATBER KNING Det finns m nga olika metoder f r att ber kna resultaten fr n RIA test Alla r baserade p att man tar fram en kalibreringskurva genom att plotta bindningsgraden mot de angivna koncentrationerna hos kalibreringsl sningarna Kurvan f r CYCLO Trac SP assayen f r man genom att plotta B Bo mot logaritmen f r koncentrationen 12 1 Ber kna medel CPM f r varje kalibreringsl sning kontroll och patientprov 12 2 Subtrahera medel CPM f r NSB r ren fr n alla andra v rden f r att p s s tt f fram korrigerade CPM v rden 12 3 Dividera det korrigerade CPM v rdet f r varje kalibreringsl sning kontroll och patientprov med det korrigerade CPM v rdet f
41. obtida marcando 8 B Bo vs a concentra o do registo 12 1 Calcule a CPM m dia para cada calibrador controlo e amostra do paciente 12 2 Subtraia a CPM m dia dos tubos NSB a todas as contagens para obter a CPM corrigida 12 3 Divida a CPM corrigida de cada calibrador controlo ou amostra do paciente pela CPM corrigida do calibrador 0 73 C CPM do calibrador ou da amostra do paciente CPT de NSB B Bo x 100 CPM do calibrador O CPM de NSB 12 4 Usando papel de gr fico semi log de tr s ciclos marque a B Bo dos calibradores eixo Y em rela o respectiva concentra o eixo X 12 5 Desenhe uma curva de melhor ajuste atrav s dos pontos 12 6 Fa a a interpola o das concentra es de ciclosporina das amostras do paciente presentes na curva de calibragem Na pr tica muitos laborat rios utilizar o um sistema de redu o de dados informatizado A DiaSorin recomenda a utiliza o de um spline ou de um programa de ajuste da curva log stica de 4 par metros 4PL NOTA N O utilize uma escala de concentra o linear eixo X e ou uma escala B Bo logit eixo Y DADOS DE REDU O O Laborat rio de controlo de qualidade da DiaSorin usa um ajuste de curva spline suave TABELA I Dados da amostra de sangue total CYCLO Trac SP DiaSorin Percentagem de CPM CPM CPM Liga o Percentagem Conc Tubo duplicada m dia corrigida B T B Bo ng mL Contagem total 51 045 50 892 50 738 N
42. oldalon 106 KIT RIA 1251 FIA OAIKO CYCLO TRAC SP 1 IN VITRO To KIT RIA CYCLO Trac SP A Sandimmune O TH H H H IATPOY TO KIT RIA CYCLO TRAC SP MONO ME 2 Sandimmune
43. s lecs kkentik a teljes v r ciklosporin szintj t a Sandimmune ra phenytoin t phenobarbital t trimethoprim ot sulfa methoxazol lal vagy carbamazepine t tartalmaznak A v r ciklosporin szintj nek monitoroz sa s a megfelel adagol s be ll t sa l tfontoss g ezen gy gyszerek haszn latakor Megfigyelhet hogy a prednisolon clearance cs kken a ciklosporinnal kezelt betegekn l s a teljes v r ciklosporin szintje RIA val m rve megemelkedik nagy d zis methylprednisolon kezel s hat s ra 15 SPECIFIKUS TELJES T K PESS G JELLEMZ K 15 1 Prec zi Intra assay rt k ng mL m r s be kezd Aj nlott az assay k k z tti 104 vari ci vizsg lata tlag rt k S D C V N ALACSONY 46 4 9 10 7 25 K Z P 186 6 0 3 2 25 MAGAS 625 19 2 3 1 25 Inter assay eredm nyek multi k zpont tanulm ny alapj n teljes v rb l tlag Ciklosporin S D C V N ng mL 91 15 0 16 5 5 K zpont 1 203 27 9 13 7 5 543 53 7 9 9 5 71 6 7 9 5 5 K zpont 2 173 12 9 7 58 5 466 41 5 8 9 5 78 5 4 6 8 5 K zpont 3 195 18 4 9 4 5 500 50 2 10 0 5 87 6 9 7 9 5 K zpont 4 200 13 5 6 8 5 505 42 5 8 4 5 78 3 6 4 6 5 K zpont 5 192 10 2 5 3 5 497 23 9 4 8 5 miel tt radio immunoassay 15 2 HELYESS G AZ ASSAY HELYESS GE LINAEARITASI ES VISSZANYER SI TESZTTEL ELLENORIZHETO Linearit s Parallelizmus tlagos visszanyer s 30 k l nb z min
44. verf r 50 uL metanolextrakt till varje assayr r m ste pipetter med positive displacement anv ndas 10 2 Tills tt alla reagens till den nedersta tredjedelen av provr ret s att reagensen kan blandas fullst ndigt 10 3 Eng ngsr r fr n vissa tillverkare kan ge en f rh jd ospecifik bindning eller g r att pellettarna glider mer i r ren 10 4 ImmunoSep reagensen m ste skakas kraftigt omedelbart f re anv ndning 10 5 Om ett ok nt prov ger ett h gre v rde n den h gsta kalibreringsl sningen skall provet extraheras p nytt med en st rre kvot mellan blod och metanol n 1 4 vi rekommenderar 1 9 eller 1 19 Multiplicera assayresultatet med l mplig korrektionsfaktor 10 6 Om r ren av n gon anledning inte kan dekanteras inom 5 minuter efter det att centrifugen stannat b r man centrifugera om dem 10 7 K r assayen direkt efter extraktionssteget 11 KVALITETSKONTROLL Alla laboratorier skall ta med minst tv kontroller vid varje assay f r att garantera att resultaten blir korrekta Om man anv nder otestade kontroller som medelv rde och standardavvikelse inte har fastst llts f r best mmer man dessa v rden genom att k ra varje kontroll i minst tio assayer Man kan f fram ett godk nt omr de f r kontrollerna genom att anv nda 2 standardavvikelser f r de tidigare uppm tta v rdena DiaSorin Quality Control Laboratory har best mt ett intervall f r kontrollerna i satsen Dessa intervall finns angivna p
45. veterinarios que practiquen la medicina veterinaria laboratorios cl nicos u hospitales y s lo para pruebas in vitro cl nicas o de laboratorio que no conlleven la administraci n interna o externa del material ni su radiaci n a seres humanos ni animales Su recepci n adquisici n posesi n uso y transferencia se rigen por la normativa y la licencia gen rica de la Comisi n Reguladora Nuclear del estado en el que la Comisi n haya llegado a un acuerdo para el ejercicio de su autoridad reguladora 1 El almacenamiento del material radiactivo debe limitarse a un rea destinada especificamente a tal efecto 2 El acceso a materiales radiactivos debe estar limitado a personal autorizado nicamente 3 No recoja material radiactivo con la pipeta usando la boca 4 No coma ni beba dentro de las reas destinadas a trabajos radiactivos 43 5 Las reas donde puedan producirse derrames deben enjugarse y despu s lavarse con un detergente alcalino o una soluci n decontaminante radiol gica Todo recipiente de vidrio utilizado debe enjuagarse completamente con agua antes de lavarse con otros recipientes de laboratorio Para facultativos o instituciones que reciben radiois topos con licencia espec fica La recepci n uso transferencia y eliminaci n de los materiales radiactivos se rigen por la normativa y las condiciones de la licencia en cuesti n ADVERTENCIA Este producto contiene una sustancia qu mica conocida por el Estado de
46. 50738 NSB 1221 1328 2 6 1434 0 Calibrator 25323 25432 24104 50 0 25541 Calibrators ng mL A 20 22781 22806 21478 89 1 22830 B 61 19850 19624 18296 75 9 19397 C 154 14843 14911 13583 56 4 14978 D 379 9506 9570 8242 34 2 9633 E 1099 4893 4858 3530 14 6 4823 Unknown Samples 1 16225 16122 14794 61 4 126 16019 2 9764 9570 8242 34 2 379 9375 Typical sample data and a calibrator curve are shown in TABLE I and FIGURE 1 this information is for reference only and should not be used for the calculation of any value CYCLO Trac SP WHOLE BLOOD SAMPLE CALIBRATOR CURVE Bo 100 40 FIGURE 1 13 LIMITATIONS OF THE PROCEDURE 13 1 Specimens should not be repeatedly frozen and thawed 13 2 Counting times should be sufficient to prevent statistical error 13 3 Monoclonal antibodies such as OKT3 have been evaluated and shown not to interfere in the assay 14 EXPECTED VALUES Therapeutic blood levels for cyclosporine in kidney heart and liver transplant patients have not been well established This has in part been due to the varied treatment protocols for transplantation practiced the methods available for measuring cyclosporine and the concomitant administration of other immunosuppressive medications with cyclosporine 90 31 A clinical evaluation using the CYCLO Trac SP Whole Blood kit was conducted at the University Hospitals of London Ontario and Albany New York in kidney heart and liver transplant p
47. 6 4 Uma liga o n o espec fica alta 6 5 Reprodutibilidade deficiente entre duplicados 7 RECOLHA E PREPARA O DE ESP CIMES S o necess rios cem microlitros de sangue total EDTA para o procedimento de extrac o do sangue total CYCLO Trac SP NOTA N o utilize amostras heparinadas 2 RECOLHA E ARMAZENAMENTO DE SANGUE TOTAL Recolha o sangue por interm dio de venipunctura num tubo de vidro evacuado de 5 ou de 10 mL O EDTA 7 2 mg 5 mL de sangue deve ser usado como anticoagulante N o s o necess rios mais aditivos ou preservativos para manter a integridade da amostra Se n o utilizar os esp cimes imediatamente armazene os a 2 8 C ou a uma temperatura inferior durante um m ximo de 7 dias Para um armazenamento mais prolongado at 3 meses congele as amostras a 20 C ou a temperaturas inferiores 29 As amostras de sangue total que tenham sido armazenadas a 4 C ou que n o tenham sido imediatamente processadas devem ser bem misturadas antes de extrair amostras para testar no kit de sangue total CYCLO Trac SP 8 EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESS RIOS N O FORNECIDOS 8 1 Tubos de vidro descart veis de borosilicato 12 x 75 mm 8 2 Centrifugador controlado por temperatura para acomodar tubos de 12 x 75 mm 8 3 Contador de cintila o gama capaz de contar iodo 125 8 4 Misturador de v rtice 8 5 Dispositivos para pipetar a pipetas volum tricas de 400 uL 100 uL e 50 LL b Distribuidores de repeti
48. Maximumk t d s A Kalibr tor O be t s per perc ben CPM kifejezett rt ke a Tot l be t s cs vek atlagos CPM rt ke c Nem specifikus k t d s Az NSB cs vek CPM rt ke CPM of NSB cs a Total be t s cs vek tlagos CPM rt ke d A kalibr ci s g rbe meredeks ge P ldaul figyelje meg a 80 50 s 20 os kalibr ci s pontok vonal nak futtat sok k z tti reproduk lhat s g t 12 EREDM NYEK KALKUL CI JA Sz mos m dszer l tezik a RIA m r sek rt kel sre Valamennyi az ismert kalibr torok koncentr ci ja s a m rt rt kek k z tti sszefugg sen alapul A CYCLO Trac SP assay kalibr ci j n l a B Bo log koncentr ci sszef gg s haszn land 12 1 Sz mitsa ki az tlag CPM rt ket valamennyi kalibr torra kontrollra s beteg mint ra 12 2 Vonja ki a megfelel CPM rt kekb l az tlag NSB CPM rt keket 12 4 Ossza el a kalibratorokra kontrollokra s mint kra m rt CPM rt keket a Kalibr tor O ra kapott CPM ek tlag val Kalibr tor p ciens minta CPM rt ke NSB CPM rt ke BBQ 100 Kalibr tor O CPM rt ke NSB CPM rt ke 12 4 Haszn ljon szemi log pap rt br zolja a kalibratorok B Bo t Y tengely a hozz tartoz koncentr ci rt k f ggv ny ben X tengely 12 5 Abrazolja a legjobban illeszked g rb t 12 6 Hat rozza meg a mint k ciklosporin koncentr ci j t a g rbe alapj n interpol ci val A gyakorlat
49. Pensilv nia Figado Y 0 9572X 48 r 0 9067 40 Centro M dico de Albany Rins Y 1 038X 27 r 0 9124 187 Rins Y 1 3074X 29 0 9703 73 Universidade de Cora o Y 1 4672X 16 r 0 9696 75 Western Ontario Figado Y 1 3575X 12 r 0 9067 63 Os dados de correla o apresentados representam os resultados dos estudos efectuados em diversos laborat rios utilizando procedimentos de HPLC validados individualmente N o dever o ser feitas compara es com estes dados e qualquer compara o de m todos s dever ser feita depois de se efectuar uma cuidadosa normaliza o dos m todos CONSULTE A TIMA P GINA PARA OBTER REFER NCIAS 80 CYCLO TRAC SP WHOLE BLOOD I RIA KIT 1 AVSEDD ANV NDNING F R DIAGNOSTISKT BRUK IN VITRO Satsen CYCLO Trac SP Whole Blood radioimmunoassay RIA r avsedd f r kvantitativ best mning av ciklosporin ciklosporin A ciklosporin Sandimmune i helblod f r att underl tta uppf ljning av hj rt njur och levertransplanterade patienter som behandLas med ciklosporin F RSIKTIGT ENLIGT AMERIKANSK FEDERAL LAG R F RS LJNING OCH DIS TRIBUTION AV DENNA UTRUSTNING ENDAST TILL TEN TILL L KARE ELLER P L KARES F RESKRIFT ELLER TILL KLINISKA LABORATORIER OCH UTRUST NINGEN F R ENDAST ANV NDAS AV L KARE ELLER P L KARES F RE SKRIFT CYCLO TRAC SP RIA KIT R ENDAST AVSEDD ATT ANV NDAS MED CIKLOSPORIN 2 SAMMANFATTNING OCH F RKLARING Ciklosporin Cyklospo
50. Standardabweichung festlegen Ein zul ssiger Wertebereich kann dann f r diese Kontrolle mit Standardabweichungen von 2 der zuvor bestimmten Werte ermittelt werden Das Qualit tskontrolllabor von DiaSorin hat f r die in diesem Kit enthaltenen Kontrollen einen Bereich festgelegt Diese Bereiche sind auf den Kontrollfl schchen aufgedruckt Die Reagenzien des Kits sollten nicht ausgetauscht werden mit Ausnahme des 1 CYCLO Trac SP Tracer F r eine komplette Laborkontrolle der konsistenten Leistung bei einem RIA sind zus tzliche Faktoren zu ber cksichtigen DiaSorin empfiehlt die folgenden Parameter regelm Big zu berpr fen um eine konsistente Leistung des Kits sicherzustellen a Gesamtz hlung b Maximale Bindung Z hlungen pro Minute CPM des Nullkalibratorr hrchens CPM Durchschnittswert der R hrchen f r die Gesamtzahlung c Nichtspezifische Bindung CPM des NSB R hrchens CPM Durchschnittswert der R hrchen f r die Gesamtz hlung d Steigung der Kalibratorkurve Beispielsweise sind die Punkte f r 80 50 und 20 auf der Kalibratorlinie von Durchlauf zu Durchlauf zu berwachen um die Reproduzierbarkeit sicherzustellen 32 12 ERGEBNISBERECHNUNG Es gibt viele Verfahren zur Berechnung der Ergebnisse von RIAs Bei jedem Verfahren wird eine Kalibrierkurve erstellt indem die Bindung gegen die Konzentrationen der zur Kalibrierung verwendeten Kalibratoren grafisch dargestellt wird Die Kurve f r den CYCLO Trac SP Test
51. concentration of cyclosporine found in the sample 4 REAGENTS PROVIDED IN THE KIT CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep BLUE 1 vial 9 mL CYCLO Trac SP Calibrators 0 6 1 vial 2 mL 5 vials 1 mL CYCLO Trac SP ImmunoSep 2 vials 100 mL CYCLO Trac SP Tracer RED 1 vial 20 mL CYCLO Trac SP Controls 2 vials 1 mL Number of tests 200 STORAGE Upon receipt the kit should be stored at 2 8 C After opening store each reagent at 2 8 C until the expiration date on the label Reagents should not be used past the expiration date The expiration date of the kit is reported on the external label and corresponds to the expiration date of the tracer Reagents from different batches must not be mixed 4 1 CYCLO Trac SP NSB ImmunosSep blue ready to use reagent Donkey anti mouse serum normal mouse serum premix is diluted in phosphate buffered saline containing 0 08 sodium azide and a surfactant Blue dye is added Shake vigorously immediately before use 4 2 CYCLO Trac SP Calibrators 0 6 ready to use reagent Cyclosporine free serum contains 0 1 sodium azide and a surfactant Six cyclosporine calibrators at nominal concentrations ranging from 0 1200 ng mL are prediluted in human serum containing 0 1 sodium azide and a surfactant Exact concentration values are assigned according to each lot and appear on vial labels The DiaSorin CYCLO Trac SP calibrator has been calibrated against the USP Cyclosporine Reference Standard Any comp
52. knas d refter i gammar knare Den m ngd radioaktivitet som finns kvar i pelletten r omv nt proportionell mot halten ciklosporin i provet 81 4 REAGENS I F RPACKNINGEN CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep BL 1 flaska 9 mL CYCLO Trac SP kalibreringsl sningar 0 6 1 flaska 2 mL 5 flaskor 1 mL CYCLO Trac SP ImmunoSep 2 flaskor 100 mL CYCLO Trac SP sp r mne R D 1 flaska 20 mL CYCLO Trac SP kontroller 2 flaskor 1 mL Antal test 200 F RVARING O ppnad f rpackning f rvaras vid 2 8 C N r f rpackningen ppnats f rvaras varje reagens vid 2 8 C till det utg ngsdatum som anges p etiketten Reagensen f r ej anv ndas efter utg ngsdatum Utg ngsdatum f r satsen anges p etiketten p ytterf rpackningen och motsvarar utg ngsdatum f r sp r mnet Reagens fr n skilda batcher f r ej blandas 4 1 CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep bl reagens f rdigt f r anv ndning En f rdig blandning av antimusserum fr n sna normalt musserum sp tt med PBS med tillsats av 0 08 natriumazid och ett ytaktivt medel Bl tt f rg mne tillsatt Skakas kraftigt omedelbart f re anv ndning 4 2 CYCLO Trac SP Calibrators 0 6 reagens f rdiga f r anv ndning Ciklosporinfritt serum med tillsats av 0 1 natriumazid och ett ytaktivt medel Sex kalibreringsl sningar med ciklosporin med nominella halter p 0 1200 ng mL f rdigsp dda med humant serum med tillsats av 0 1 natriumazid och ett ytaktivt
53. reactivos listo para utilizar El suero sin ciclosporina contiene azida s dica al 0 1 y un tensioactivo Seis calibradores de ciclosporina a concentraciones nominales entre O y 1200 ng mL previamente diluidos en suero humano que contiene azida s dica al 0 1 y tensioactivo Se asignan valores de concentraci n exactos de acuerdo con cada lote y se indican en las etiquetas de los viales El calibrador CYCLO Trac SP de DiaSorin se ha calibrado frente el est ndar de referencia par ciclosporina de la USP Las com paraciones con otros productos o procedimientos deben realizarse con este est ndar de referencia Los calibradores del equipo han demostrado tener conmutabilidad con muestras de pacientes cuando se utilizan con los reactivos y el procedimiento recomendados para esta prueba de diagn stico in vitro 4 3 Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep reactivo listo para utilizar La mezcla previa de anticuerpo monoclonal de rat n anti ciclosporina y de burro antirrat n suero normal de rat n se diluye en soluci n salina tamp n fosfato que contiene azida s dica al 0 08 y un tensioactivo Agite con vigor inmediatamente antes de utilizarlo 4 4 18 CYCLO Trac SP rojo reactivo listo para utilizar Un derivado de la ciclosporina se etiqueta con yodo 125 y se diluye con tamp n EDTA citrato que contiene azida s dica al 0 05 suero humano y un tensioactivo Se a ade tintura roja 4 5 Controles CYCLO Trac SP nivel 1 y nivel 2 reactivo listo para
54. ssen die Kalibratoren Kontrollen und Proben in Methanol extrahiert werden Der Test selbst besteht nur aus einem Inkubationsschritt und arbeitet mit einem doppelten Antik rper Phasentrennverfahren Um die Arbeitsschritte zu vereinfachen werden der erste Antik rper spezifischer monoklonaler Maus Antik rper f r Cyclosporin A und der zweite Antik rper Esel Anti Maus Antik rper in einem Tr ger vorgemischt normales Mausserum um ein Reagenz das so genannte Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep zu erhalten 27 Um den Cyclosporin Spiegel in diesem Kit zu bestimmen werden zun chst die Vollblutproben die Kalibratoren und die Kontrollen in Methanol extrahiert Die Methanolextrakte werden dann mit einem mit Jod 125 markierten Cyclosporin Tracer und Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep kombiniert Nach einer Stunde Inkubation werden die R hrchen zentrifugiert dekantiert und anschlie end ausgez hlt Die Menge der Radioaktivit t die noch in dem Pellet vorhanden ist verh lt sich umgekehrt proportional zur Konzentration des Cyclosporins in der Probe 4 REAGENZIEN DES KITS CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep BLAU 1 Flaschchen 9 mL CYCLO Trac SP Kalibratoren 0 6 1 Flaschen 2 mL und 5 Flaschen 1 mL CYCLO Trac SP ImmunoSep 2 Flaschchen 100 mL CYCLO Trac SP Tracer ROT 1 Flaschchen 20 mL CYCLO Trac SP Kontrollen 2 Fl schchen 1 mL Anzahl der Tests 200 LAGERUNG Das Kit sollte bei 2 8 C aufbewahrt werden Nach dem ffnen jedes R
55. 0 1 1 6 1 7 2 Pacientes tratados com 2 5 mg kg de ciclosporina em intervalos de doze horas 4 mg kg de azatioprina no per odo pr opera o e reduzido para 0 75 a 1 0 mg kg e metilprednisolona administrada como um bolus de 300 mg e posteriormente ajustada para 20 mg dia 30 dias ap s o transplante e para 10 mg dia 60 dias ap s o transplante gt Determina es individuais da ciclosporina Os resultados deste estudos demonstraram que os n veis da ciclosporina no sangue se mantiveram dentro dos n veis sangu neos pretendidos para cada tipo de transplante tal como indicado para os protocolos de transplante utilizados por cada centro Como a ciclosporina consegue produzir n veis sangu neos diferentes em pacientes diferentes a interpreta o dos resultados e o ajuste da dosagem de ciclosporina devem ser tidos em considera o no per odo p s transplante devendo ser administrados outros medicamentos e obtidas informa es cl nicas relevantes relativas ao paciente INTERAC ES DOS F RMACOS Relat rio emitido pela Sandoz LTD Basileia Su a para o f rmaco Sandimmune ciclosporina A ciclosporina extensamente metabolizada pelo f gado Por essa raz o o seu n vel no sangue total pode ser influenciado pelos f rmacos que afectam as enzimas microssom ticas hep ticas particularmente o sistema citocromo P 450 77 As subst ncias que inibem essas enzimas diminuir o o metabolismo hep tico e aumentar o
56. 10 7 25 MEDEL 186 6 0 3 2 25 H G 625 19 2 3 1 25 Resultat f r interseriell variation fr n en multicenter f rdighetsstudie med helblodsprov Medelv rde ciklosporin ng mL 91 Center 1 203 543 71 Center 2 173 466 87 Center 4 200 505 78 Center 5 192 497 78 Center 3 195 500 Anger interseriell variation p ett laboratorium som just b rjat k ra radio immunoassayer 91 15 2 RIKTIGHET RIKTIGHETEN F R ASSAYEN HAR KONTROLLERATS MED ETT LINEARITETSTEST OCH ETT UTBYTESTEST Linearitet parallellitet Genomsnittligt utbyte f r 30 olika seriesp dda patientprover koncentrationsomr de 132 1716 ng mL sp dningsfaktor x v rde f r utsp tt prov utbyte 100 x v rde f r ospatt prov Sp dning 1 2 1 4 1 8 utbyte 96 1 93 3 95 9 S D 13 7 19 2 22 6 C V 14 3 20 6 23 6 Noggrannhet Utbytesstudie Genomsnittliga utbyten f r 3 ciklosporinniv er tillsatta till 5 prov 6 kopior av varje prov n 30 Tillsatt ciklosporin ng mL utbyte S D C V Niv 1 95 119 17 14 Niv 2 212 109 11 10 Niv 3 467 97 7 7 15 3 Analytisk k nslighet detektionsgr nser Medelk nsligheten f r CYCLO Trac SP Whole Blood Assay definierad som den synbarliga koncentrationen vid 3 standardavvikelser fr n CPM v rdena vid maximal bindning r 8 7 ng mL n 20 15 4 Analytisk specificitet Genomsnittlig korsreaktivitet me
57. 10 Tage lang 5 mg kg d Nephrotoxizit t oder AbstoRung 36 TABELLE III zeigt die durchschnittliichen Cyclosporin Blutwerte und den entsprechenden Creatinin Spiegel bei 18 Patienten mit Nierentransplantation der Universit tsklinik Albany New York 2 Die Patienten in Albany wurden auf 100 300 ng mL Cyclosporin Talspiegel eingestellt TABELLE III Tempor re Cyclosporin Werte im Vollblut bei 18 Patienten mit Nierentransplantation bei Messung mit dem CYCLO Trac SP Whole Blood Kit Tag Cyclosporine Creatinin Spiegel nach ng mL mg dL Woche OP NP MW SA N MW SA Min Max 1 0 7 12 151 128 143 49 4 0 0 7 18 0 2 8 14 16 185 96 125 2 7 2 2 1 1 8 2 3 15 21 19 173 94 94 2 7 1 9 1 1 9 4 4 22 28 17 198 146 76 3 0 1 9 1 1 8 5 5 29 35 22 210 168 70 2 9 1 7 1 2 8 2 6 36 42 17 164 63 68 2 5 1 1 1 1 5 6 7 43 49 14 175 53 55 2 4 1 1 1 1 5 4 8 50 56 17 198 99 42 2 1 1 0 1 2 5 4 9 57 63 16 176 54 40 3 1 2 7 1 0 10 9 10 64 70 4 199 59 34 3 5 3 3 0 9 11 7 11 71 77 18 146 73 27 3 0 3 1 0 9 11 1 12 78 84 5 142 76 18 3 5 3 3 1 1 11 2 13 85 91 1 304 7 4 2 0 3 3 6 4 6 14 92 98 1 317 10 3 4 1 1 1 7 4 8 15 99 105 2 121 10 9 4 1 1 6 2 0 5 5 16 106 112 1 49 5 5 4 2 5 1 7 8 7 17 113 119 1 79 3 1 6 0 1 1 6 1 7 2 Patienten wurden mit 2 5 mg kg Cyclosporin in Intervallen von 12 Stunden behandelt Azathioprin 4 mg kg vor der OP und allm hliche Reduzierung auf 0 75 1 0 mg kg Methylprednisolon als 300 mg Bolus anschlieBend Einstellung auf
58. 11 YEON va va Ta 2 DiaSorin KIT
59. 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Tutschka P J Cyclosporin A as a Tool for Experimental and Clinical Transplation Biomedicine 36 341 1982 Tutschka P J Cyclosporin A Immunobiological Aspects Hepatology 2 5 645 1982 Britton S and R Palacios Cyclosporin A Usefulness Risks and Mechanism of Action Immunological Review 65 5 1982 Keown P A G L Essery C R Stiller N R Sinclair R Mullen and R A Ulan Mechanisms of Immunosuppression by Cyclosporin Transplantation Proceedings 13 1 386 1981 White D J G Cyclosporin A Clinical Pharmacology and Therapeutic Potential Drugs 24 332 1982 Merion R M D J White S Thiru D B Evans and R Y Calne Cyclosporine Five Year s Experience in Cadaveric Renal Transplantation New England Journal of Medicine 310 3 148 54 1984 Bieber C et al Heart Transplantation 3 81 1983 Busuttil R W L I Goldstein G M Danovich M E Ament and L D Memsic Liver Transplantation Today Annals of Internal Medicine 104 3 337 389 1986 Cohen D J Cyclosporine Clinical Applications and Monitoring Methods Laboratory Management pp 29 34 1985 Sells R A Transplantation Proc 15 2495 1983 Albrechtsen D G Soedal K J Berg H Bondevik I B Brekke P Fauchald A Jakobsen B R Opedal H E Rugstad E Thorsby et al Cyclosporine in Living Rel
60. 12 5 12 6 DiaSorin spline 4 4PL X logit B Bo Y 113 DiaSorin smooth spline NINAKAZ I CYCLO Trac SP DiaSorin ZUK B B0 ng mL 51045 50892 50738 NSB 122
61. 25 541 Calibratori ng mL A 20 22 781 22 806 21 478 89 1 22 830 B 61 19 850 19 624 18 296 75 9 19 397 C 154 14 843 14 911 13 583 56 4 14 978 D 379 9 506 9 570 8 242 34 2 9 633 E 1099 4 893 4 858 3 530 14 6 4 823 Campioni non noti 1 16 225 16 122 14 794 61 4 126 16 019 2 9 764 9 570 8 242 34 2 379 9 375 I dati di campioni tipici e una curva di calibrazione sono riportati nella TABELLA I e nella FIGURA 1 queste informazioni servono solo a scopo di riferimento e non devono essere usate per il calcolo dei valori 61 CURVA DI CALIBRAZIONE CYCLO Trac SP PER CAMPIONE DI SANGUE INTERO Bo 100 40 FIGURA 1 13 LIMITI DELLA PROCEDURA 13 1 campioni non devono essere congelati e scongelati ripetutamente 13 2 Il conteggio delle volte dovrebbe essere sufficiente per prevenire errori statistici 13 3 Gli anticorpi monoclonali quali OKT3 sono stati presi in esame e non stata notata alcuna interferenza nell analisi 14 VALORI PREVISTI I livelli ematici terapeutici per la ciclosporina nei pazienti che hanno subito trapianto di rene cuore e fegato non sono stati definitamente stabiliti Ci in parte dovuto ai vari protocolli di cura per il trapianto eseguito i metodi disponibili per la misurazione della ciclosporina e la concomitante somministrazione di altri farmaci immunosoppressivi con la ciclosporina 9 39 31 stata eseguita una valutazione clinica del kit CYCLO Trac SP Sangue intero pres
62. 4 se recomienda 1 9 o 1 19 Multiplique los resultados del ensayo por el factor de correcci n apropiado 10 6 Si no es posible decantar los tubos en 5 minutos tras la detenci n de la centr fuga se recomienda centrifugar los tubos de nuevo 10 7 Realice el ensayo inmediatamente despu s del paso de extracci n 11 CONTROL DE CALIDAD Cada laboratorio debe incluir al menos dos muestras de control en cada ensayo para asegurar la validez de los resultados de cada ensayo Si utiliza controles a n no sometidos a ensayo y no ha determinado una desviaci n media y est ndar debe hacerse esto para cada control usando un m nimo de diez ensayos Entonces se puede obtener un rango aceptable de valores para estos controles usando desviaciones est ndar de 2 de los valores previamente determinados El laboratorio de control de calidad de DiaSorin ha determinado un rango para los controles que se incluyen en este equipo Estos rangos est n impresos en los viales de los controles Se recomienda no intercambiar los reactivos del equipo salvo el trazador 125 CYCLO Trac SP Para que un laboratorio pueda supervisar el desempe o uniforme de un ensayo RIA hay factores adicionales que deben comprobarse DiaSorin recomienda comprobar peri dicamente los siguientes par metros para asegurar el desempe o uniforme del equipo a Cuentas totales b Uni n m xima Cuentas por minuto CPM de tubo de calibrador 0 Media de CPM de tubos de cuentas totales
63. 4 9 10 7 25 MEDIUM 186 6 0 3 2 25 HIGH 625 19 2 3 1 25 Between assay variation results from multi center proficiency study using whole blood samples Mean Cyclosporin S D C V N ng mL 91 15 0 16 5 5 Center 1 203 27 9 13 7 5 543 53 7 9 9 5 71 6 7 9 5 5 Center 2 173 12 9 7 58 5 466 41 5 8 9 5 78 5 4 6 8 5 Center 3 195 18 4 9 4 5 500 50 2 10 0 5 87 6 9 7 9 5 Center 4 200 13 5 6 8 5 505 42 5 8 4 5 78 3 6 4 6 5 Center 5 192 10 2 5 3 5 497 23 9 4 8 5 Indicates between assay variation seen in a laboratory just beginning to run radio immunoassays 11 15 2 TRUENESS THE ASSAY TRUENESS HAS BEEN CHECKED BY THE LINEARITY TEST AND THE RECOVERY TEST Linearity Parallelism Average recovery for 30 different serially diluted patient samples concentration range 132 1716 ng mL dilution factor x value of diluted sample value of neat sample Recovery 100 x Dilution 1 2 1 4 1 8 Recovery 96 1 93 3 95 9 S D 13 7 19 2 22 6 C V 14 3 20 6 23 6 Accuracy Recovery Study Average recoveries at 3 levels of added cyclosporine for 5 samples 6 replicates each n 30 Added Cyclosporine Recovery SD CV ng mL 5 Level 1 95 119 17 14 Level 2 212 109 11 10 Level 3 467 97 7 7 15 3 Analytical Sensitivity Limits of Detection When defined as the apparent concentration at three standard deviations from the co
64. 4672X 16 Y 1 Western Ontario 3575X 12 Presenterade korrelationsdata utg r resultatet av studier som utf rts i ett antal laboratorier med HPLC rutiner som validerats oberoende av varandra Ingen j mf relse b r g ras med dessa data och en eventuell j mf relse av metoder b r g ras f rst sedan man stadkommit en omsorgsfull standardisering av metoderna SE SISTA SIDAN F R REFERENSER 93 CYCLO TRAC SP WHOLE BLOOD 1251 RIA K SZLET 1 FELHASZN L SI TER LET KIZ R LAG IN VITRO DIAGNOSZTIKAI HASZN LATRA A CYCLO Trac SP Whole Blood radioimmunoassay RIA k szletet a ciklosporin Ciklosporin A Ciklosporin Sandimmune teljes v rb l t rt n kvantitat v meghat roz s ra sz nt k sz v m j vese transzplant lt betegek ciklosporin kezel s befogad s nak ellen rz s re FIGYELEM U S LLAMI T RV NYEK KORL TOZZ K AZ ELAD ST FORGALMAZ ST VALAMINT RENDELETBEN SZAB LYOZOTT AZ ORVOSOK S A KLINIKAI LABORAT RIUMOK SZ M RA A CYCLO TRAC SP K SZLET HASZN LATA KIZ R LAG CIKLOSPORIN M R S HEZ 2 A TESZT TTEKINT SE S MAGYAR ZATA A ciklosporin Cyclosporin A Cyclosporin Ciclosporin Sandimmune egy gomba eredet ciklikus undekapeptidis amelynek er teljes immunszupressz v hat sa van 2 B r a hat smechanizmusa m g vizsg lat alatt ll gy t nik hat ssal van mind a T helper mind a T szupresszor lymphocyt k metabolizmus ra mellyel k ros tja az immunrendszert
65. 7 43 49 14 175 53 55 2 4 1 1 1 1 5 4 8 50 56 17 198 99 42 2 1 1 0 1 2 5 4 9 57 63 16 176 54 40 3 1 2 7 1 0 10 9 10 64 70 4 199 59 34 3 5 3 3 0 9 11 7 11 71 77 18 146 73 27 3 0 3 1 0 9 11 1 12 78 84 5 142 76 18 3 5 3 3 1 1 11 2 13 85 91 1 304 7 4 2 0 3 3 6 4 6 14 92 98 1 317 10 3 4 1 1 1 7 4 8 15 99 105 2 121 10 9 4 1 1 6 2 0 5 5 16 106 112 1 49 5 5 4 2 5 1 7 8 7 17 113 119 1 79 3 1 6 0 1 1 6 1 7 2 Los pacientes tratados con ciclosporina 2 5 mg kg en intervalos de doce horas azatioprina 4 mg kg antes de la operaci n disminuyendo hasta 0 75 a 1 0 mg kg y metilprednisolona suministrada como una pildora de 300 mg y ajustada despu s a 20 mg d a durante 30 d as tras el transplante y 10 mg d a durante 60 tras el transplante gt Determinaciones individuales de ciclosporina Los resultados de estos estudios demuestran que los niveles de ciclosporina en sangre se mantuvieron en los niveles de sangre deseados para cada tipo de transplante como se indicaba en los protocolos de transplante utilizados en cada centro Dado que la ciclosporina puede producir distintos niveles en sangre en diferentes pacientes la interpretaci n de los resultados y el ajuste de la dosis de ciclosporina debe considerar tambi n el periodo posterior al transplante otros medicamentes administrados e informaci n cl nica importante relativa al paciente INTERACCIONES DE LAS DROGAS Sandoz LTD de Basilea Suiza informa de lo siguiente acerca del medicame
66. 95 119 17 14 Nivel 2 212 109 11 10 Nivel 3 467 97 7 7 15 3 Sensibilidad anal tica limites de detecci n Cuando se la define como la concentraci n evidente en tres desviaciones est ndar de las cuentas con una uni n m xima la sensibilidad media del ensayo en sangre completa CYCLO Trac SP es de 8 7 ng mL n 20 15 4 Especificidad anal tica Promedio de reactividad cruzada de metabolitos de ciclosporina en el ensayo en sangre completa CYCLO Trac SP La reactividad cruzada se define como Concentraci n de ciclosporina a 50 B Bo 100 x Concentraci n de metabolitos a 50 B Bo Metabolitos de ciclosporina Reactividad cruzada 1 1 7 8 lt 0 1 13 0 1 17 0 7 18 0 2 21 0 8 53 15 5 Interferencia Las sustancias siguientes se afiadieron a al cuotas de mezclas de sangre completa que contenian ciclosporina 160 250 ng mL Ninguna de ellas interfiri en las medidas de ciclosporina en las concentraciones indicadas a continuaci n Sustancia Concentraci n Colesterol 100 1000 mg dL Triglic ridos 300 1000 mg dL Bilirrubina 5 30 mg dL Azatioprina 50 200 ng mL Cimetidina 500 1000 ng mL Nifedipina 100 200 ng mL 6 metil prednisolona 20 60 ng mL OKT3 1500 ng mL La siguiente lista de drogas administradas de forma simult nea ha sido probada a niveles de hasta 100 ug mL y se ha demostrado que no interfieren con el ensayo Acetaminofen Lidocaina N Acetilprocainamida Metoclopramida Cefalosporina Nafici
67. Prozent CPM CPM CPM Gebunden Prozent Konz R hrchen Wert Wert Wert B T B B0 ng mL Gesamtz hlung 51 045 50 892 50 738 NSB 1 221 1 328 2 6 1 434 Nullkalibrator 25 323 25 432 24 104 50 0 25 541 Kalibratoren ng mL A 20 22 781 22 806 21 478 89 1 22 830 B 61 19 850 19 624 18 296 75 9 19 397 C 154 14 843 14 911 13 583 56 4 14 978 D 379 9 506 9 570 8 242 34 2 9 633 E 1099 4 893 4 858 3 530 14 6 4 823 Unbekannte Proben 1 16 225 16 122 14 794 61 4 126 16 019 2 9 764 9 570 8 242 34 2 379 9 375 Typische Probendaten und eine Kalibratorkurve sind in TABELLE I und ABBILDUNG 1 dargestellt sie dienen nur zur Information und d rfen nicht zur Berechnung von Werten verwendet werden 34 KALIBRATORKURVE DER CYCLO Trac SP WHOLE BLOOD PROBE Bo 100 40 ABBILDUNG 1 13 GRENZEN DES VERFAHRENS 13 1 Die Proben d rfen nicht mehrmals eingefroren und wieder aufgetaut werden 13 2 Die Z hlzeiten m ssen lang genug sein um statistische Fehler auszuschlie en 13 3 Monoklonale Antik rper wie OKT3 wurden gepr ft und st ren den Test nach weislich nicht 14 ERWARTETE WERTE Therapeutische Blutspiegel von Cyclosporin bei Patienten mit Nieren Herz und Lebertransplantationen wurden noch nicht umfassend untersucht Dies ist zum Teil auf die unterschiedlichen Behandlungsprotokolle f r die Transplantationen auf die zur Messung des Cyclosporins verf gbaren Verfahren und auf die gleichzeitige Verabreichung
68. TRAC 1 USO INDICADO PARA USO DIAGNOSTICO IN VITRO O kit de radioimunoensaio RIA de Sangue Total SP CYCLO Trac destina se medi o quantitativa da ciclosporina Ciclosporina A Ciclosporina Sandimmune no sangue total como forma de auxiliar na gest o de pacientes submetidos a transplantes do corag o dos rins e do figado que estejam a receber ciclosporina ATEN O A LEI FEDERAL DOS E U A RESTRINGE A VENDA E DISTRIBUI O DESTE DISPOSITIVO A OU POR ORDEM DE M DICOS OU LABORAT RIOS CL NICOS O SEU USO RESTRITO A OU POR ORDEM DE UM M DICO O KIT RIA SP CYCLO TRAC DESTINA SE A SER UTILIZADO EXCLUSIVAMENTE COM A CICLOSPORINA 2 RESUMO E EXPLICA O A ciclosporina ciclosporina A ciclosporina ciclosporina Sandimmune um undecap ptido c clico de origem f ngica com poderosas propriedades imuno supressoras 2 Ainda que seu mecanismo de ac o se encontre a ser estudado a ciclosporina parece afectar o metabolismo dos linf citos T helper e dos linf citos T supressores os quais debilitam o sistema imunit rio Apesar deste f rmaco ter demonstrado a sua utilidade ao evitar a rejei o de novos rg os transplantados tamb m apresenta alguns efeitos adversos 9 os mais graves dos quais s o as nefro e hepa totoxicidades associadas aos n veis elevados deste f rmaco no sangue 1 Al m disso a absor o e o metabolismo da ciclosporina altamente vari vel de paciente para paciente
69. Trac SP Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep 1 0 mL NSB OKIHOOTIKO G vortex 1 20 25 C 1600 x 20 20 25 C 200 uL 800 uL g 1118 x 1078 rpm 111 9 13 OKINAOTIKOUG 2
70. Trac SP 0 kalibreringsl sning 50 uL extrakt fran CYCLO Trac SP 0 kalibreringsl sning 100 5 CYCLO Trac SP r d d CYCLO Trac SP kalibreringsl sningar A E 50 pL extrakt fr n CYCLO Trac kalibreringsl sning 100 5 CYCLO Trac SP r d e Kontroller och ok nda prover 50 uL extrakt fr n provet 100 uL 5 CYCLO Trac SP r d Skaka flaskan med Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep kraftigt tills tt genast 1 0 mL v lblandat reagens till alla r r utom r ren f r total aktivitet och NSB Vortexa r ren grundligt och inkubera dem 1 timme vid 20 25 C Centrifugera r ren 20 minuter vid 1600 x g och 20 25 C Dekantera genast supernatanten fr n alla r r utom totalaktivitetsr ren genoma att v nda dem upp och ner i h gst 2 minuter H ll r ren mot absorberande papper f r att f bort eventuella supernatantdroppar p kanterna innan du v nder dem r tt igen Anv nd gammar knare och r kna f llningen i varje r r samt total aktivitetsr ren under tillr ckligt l ng tid f r att statistiskt s kra resultat ska erh llas Se avsnittet Metodbegr nsningar E Alternativt kan man extrahera 200 uL prov med 800 uL metanol a g 1118 x 103 radie i cm rpm 85 10 KOMMENTARER TILL PROCEDURERNA 10 1 F r att f st rsta noggrannhet och precision m ste man omsorgsfullt f lja stegen i metanolextraktionen pipetter med positive displacement SMI m ste anv ndas f r pipettering av b de metanol och prov ven n r man
71. While these methods are highly accurate they do not guarantee that all infected units will be detected This product may also contain other human source material for which there is no approved test Because no known test method can offer complete assurance that hepatitis B virus HBV hepatitis C virus HCV Human Immunodeficiency Virus HIV or other infectious agents are absent all products containing human source material should be handled in accordance with good laboratory practices using appropriate precautions as described in the U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4th May 1999 or current edition REAGENTS CONTAINING SODIUM AZIDE CAUTION Some reagents in this kit contain sodium azide Sodium azide may react with lead or copper plumbing to form highly explosive metal azides On disposal flush with a large volume of water to prevent azide build up For further information refer to Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts in the Manual Guide Safety Management No CDC 22 issued by the Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 European Communities Hazardous Substance Risk Phrases Council Directive 1999 45 EC R20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed R32 Contact with acids liberates very toxic gas S28 After contact with skin wash immedi
72. are based on monoclonal antibody technology Both specific and nonspecific monoclonal antibodies have been developed The specific antibody measures only the parent compound of cyclosporine and generates values similar to those obtained by HPLC The nonspecific antibody measures both parent compound and metabolites and produces results similar to those of first generation RIA s 3 PRINCIPLE OF THE ASSAY The DiaSorin CYCLO Trac SP Whole Blood RIA employs a specific monoclonal antibody that measures only cyclosporine and demonstrates no significant cross reactivity with its metabolites A methanol extraction step is required for the calibrators controls and samples prior to assay The assay itself consists of a single incubation step and uses a double antibody phase separation technique To simplify the procedure the first antibody mouse monoclonal specific to Cyclosporin A and the second antibody donkey anti mouse are premixed with a carrier normal mouse serum to produce a single reagent called Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep To determine cyclosporine levels with this kit whole blood samples calibrators and controls are first extracted with methanol The methanol extracts are then combined with lodine 125 labeled cyclosporine tracer and Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep Following a 1 hour incubation the tubes are centrifuged decanted and then counted The amount of radio activity remaining in the pellet is inversely proportional to the
73. detergente alcalino o soluzione per la decontaminazione radiologica Tutti gli oggetti in vetro usati devono essere accuratamente risciacquati con acqua prima di lavarli con altri oggetti in vetro del laboratorio Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una licenza specifica L acquisto I uso il trasferimento e lo smaltimento di materiali radioattivi sono soggetti alle norme e alle condizioni della licenza specifica AVVERTENZA Questo prodotto contiene un prodotto chimico noto nello Stato della California per provocare cancro ATTENZIONE La radioattivit stampata sulle istruzioni allegate alla confezione pu essere leggermente diversa dalla radioattivit stampata sull etichetta della scatola e sull etichetta della fiala di tracciante L etichetta sulla scatola e sulla fiala di tracciante indicano la quantita effettiva di radioattivita alla data di calibrazione mentre il materiale informativo della confezione indica la radioattivit teorica del kit 6 INDICAZIONI DI POSSIBILE DETERIORAMENTO DEI REAGENTI DEL KIT 6 1 La presenza di particolato anomalo in uno qualsiasi dei reagenti 6 2 Uno sfasamento nella pendenza o posizione della curva di calibrazione rispetto a quella che normalmente si ottiene 6 3 Una diminuzione del legame massimo 6 4 Un legame altamente non specifico 6 5 Scarsa riproducibilit fra i duplicati 7 PRELIEVO DEI CAMPIONI E PREPARAZIONE Sono richiesti cento microlitri di sangue inte
74. extrakci t gy hogy a minta metanol ar ny legyen nagyobb mint 1 4 1 9 vagy 1 19 aj nlott Korrig lja az eredm nyeket a megfelel faktorral 10 6 Ha a cs veket nem tudja a centrifug l st k vet 5 percen bel l le nteni aj nlott a cs veket jra lecentrifug lni 10 7 Az assay ind t s t k zvetlen l az extrakci s l p st k vet en kell elv gezni 11 MIN SEGBIZTOSIT S Valamennyi laborat rium sz m ra aj nlott legal bb k t kontroll m r se valamennyi futtat sn l megfelel en valid lhat eredm nyek biztos t s hoz Ha ismeretlen kontrollt haszn l melynek nincs meghat rozott tlaga s standard devianci ja akkor ezen kontroll tlag t s standard devianci j t legal bb 10 k l nb z futtat sb l sz rmaz m r s alapj n kell meghat rozni Az elfogadhat s gi tartom ny az el bbi m r sekb l a 2 SD alapj n kell meghat rozni A DiaSorin Quality Control Laboratory meghat rozta a k szletben tal lhat kontrollok tartom nyait Ezek a tartom nyok az vegen ker lnek felt ntet sre Nem aj nlott a 5 CYCLO Trac SP tracer ek egym ssal t rt n helyettes t se A teljes monitoroz s szab lyainak megfelel en a RIA assay n l a laborat riumnak ellen riznie kell az addicion lis faktort DiaSorin azt javasolja hogy a k vetkez param tereket minden assay futtat s el tt ellen rizze a Tot l be t ssz m g 1118 x 10 sugar cm ben kifejezve rpm 98 b
75. istruzioni per N sung beachten E for Use d utilisation uso Puso In vitro A EN In vitro Diagn stico in Diagnostica in f Diagnostic in vitro A A h diagnostic Diagnostikum vitro vitro Lot No No de lot Chargen Nr N mero de lote Lotto n Temperature Limitation de a Limitaci n de Limite della Temperaturbereich limitation temp rature temperatura temperatura Antiserum Antis rum Antiserum Antisuero Antisiero Trazador Tracciatore Tracer antigen Traceur antig ne Tracer 251 antigeno antigene labelled with I marqu a l iode markiertes Antigen etiquetado con 125 etichettato con 125 Buffer Tampon Puffer Tamp n Tampone Calibrator talon Kalibrator Calibrador Calibratore Control serum S rum de contr le Kontrollserum Suero de control Siero di controllo Radioactive Radioactif Radioaktiv Radiactivo Radioattivo Harmful Nocif Gesundheits Nocivo Nocivo sch dlich SYMBOLS USED WITH DEVICES CONTINUED ON NEXT PAGE CONTINUED FROM PREVIOUS PAGE SYMBOLS USED WITH DEVICES Portugu s Svenska Magyar Conformidade com as normas europeias Europeisk verensst mmeise Eur pai Megfelel s g Prazo de validade Utg ngsdatum Lej rati id Fabricante Tilverkare Gy rt Consulte as instrug es de uti
76. la remarque suivante concernant le m dicament Sandimmune cyclosporine La cyclosporine est largement m tabolis e par le foie Ainsi son taux dans le sang total peut tre influenc par des m dicaments qui affectent les enzymes microsomaux h patiques en particulier le systeme cytochrome P 450 Les substances qui inhibent ces enzymes r duiront le m tabolisme h patique et augmenteront le taux de cyclosporine dans le sang total Les m dicaments qui augmentent la concentration de cyclosporine dans le sang total incluent danazol 23 c toconazole rythromycine nicardipine diltiazem m thyltestost rone et les contraceptifs oraux Les substances qui induisent l activit du cytochrome P 450 augmenteront le m tabolisme h patique et diminueront le taux de cyclosporine dans le sang total Les m dicaments qui diminuent la concentration sanguine de cyclosporine comprennent rifampine ph nytoine ph nobarbital trimethoprime avec sulfam thoxazole et carbamaz pine La surveillance du taux sanguin de cyclosporine et l ajustement appropri du dosage sont essentiels lorsque ces m dicaments sont utilis s en concomitance Il est apparu que la clairance de pr dnisolone est r duite chez les patients trait s par cyclosporine et que les taux de cyclosporine dans le sang total mesur s par RIA augmentent selon l administration de doses lev es de m thylprednisolone 15 CRIT RES DE QUALITE 15 1 Pr cision Variation int
77. log 12 1 Calcolare il CPM medio per ogni calibratore controllo e campione paziente 12 2 Sottrarre il CPM medio delle provette NSB da tutti i conteggi per ottenere il CPM esatto 12 3 Dividere il CPM corretto di ogni calibratore controllo o campione paziente per il CPM corretto del calibratore 0 CPM del calibratore o campione paziente CPT di NSB 9 x 100 A B Bg CPM del calibratore 0 CPM di NSB 60 12 4 Utilizzando carta millimetrata semi logaritmica a tre cicli tracciare la percentuale di B Bo dei calibratori asse Y rispetto alla concentrazione corrispondente asse X 12 5 Tracciare una curva di miglior interpolazione fra i punti 12 6 Interpolare le concentrazioni di ciclosporina dei campioni paziente dalla curva di calibrazione Nella pratica la maggior parte dei laboratori utilizza un sistema di riduzione dei dati su computer DiaSorin consiglia di usare un programma a retta curvilinea o a interpolazione di curva logistica con 4 parametri 4PL NOTA NON usare una scala di concentrazione lineare asse X e o una scala logit B Bo asse Y RIDUZIONE DEI DATI Il Laboratorio di controllo di qualit DiaSorin utilizza una retta curvilinea uniforme TABELLA I Dati campione DiaSorin CYCLO Trac SP Sangue intero Percentuale CPM CPM CPM Bound Percent Konz Provetta duplicato medio corretto B T B B0 ng mL e 51 045 50 892 50 738 NSB 1 221 1 328 2 6 1 434 Calibratore O 25 323 25 432 24 104 50 0
78. man spola efter med stora m ngder vatten f r att f rhindra att azid ackumuleras F r ytterligare information h nvisar vi till avsnittet Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts i handboken Safety Management No CDC 22 utgiven av Centers for Disease Control and Prevention Atlanta USA 1976 Europeiska Gemenskapens Riskfraser f r farliga preparat EU kommissionens direktiv 1999 45 EC R20 21 22 Farligt vid inandning hudkontakt och f rt ring R32 Utvecklar mycket giftig gas vid kontakt med syra S28 Vid kontakt med huden tv tta genast med mycket vatten REAGENS SOM INNEH LLER JOD 125 Satsen inneh ller radioaktivt material som ej verstiger 9 333 kBq jod 125 Adekvata f rsiktighets tg rder m ste vidtas och god laboratoriepraxis f ljas vid f rvaring hantering och kassering av detta material F r mottagningar och institutioner som tar emot radioisotoper under en allm n licens Detta radioaktiva material f r endast tas emot f rv rvas gas och anv ndas av l kare veterin rer med praktik inom veterin rmedicin kliniska laboratorier eller sjukhus och f r endast anv ndas f r kliniska tester in vitro eller laboratorietester in vitro vilka ej inneb r n gon inv rtes eller utv rtes administrering av materialet eller av str lning fr n det till m nniskor eller djur F r mottagande f rv rv innehav anv ndning och verl telse g ller de regler och den allm nna licens som
79. medel De exakta koncentrationsv rdena anges f r varje batch p etiketterna p flaskorna Kalibreringsl sningarna f r DiaSorin CYCLO Trac SP har kalibrerats mot USP s referensstandard f r ciklosporin Alla j mf relser med andra produkter eller metoder skall ske med denna referensstandard som utg ngspunkt Kalibreringsl sningarna i satsen kan betraktas som likv rdiga med patientprover n r de anv nds med de reagens och metodanvisningar om rekommenderas f r detta diagnostiska in vitro test 4 3 Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep reagens f rdigt f r anv ndning En f rdig blandning av en monoklonal musantikropp mot ciklosporin och antimusserum fr n sna normalt musserum sp tt med PBS med tillsats av 0 08 natriumazid och ett ytaktivt medel Skakas kraftigt omedelbart f re anv ndning 4 4 121 CYCLO Trac SP r d reagens f rdigt f r anv ndning Ett ciklosporinderivat m rkt med jod 125 uppl st i citrat EDTA buffert med tillsats av 0 05 natriumazid humant serum och ett ytaktivt medel R tt f rg mne tillsatt 4 5 CYCLO Trac SP kontroller niv 1 och niv 2 reagens f rdiga f r anv n dning Humant serum med tillsats av l mplig m ngd cyklosporin A f r att erh lla en kontrollhalt inom det angivna omr det Det specifika intervallet f r varje batch anges p flaskorna med kontroller i varje sats Med tillsats av 0 1 natriumazid och andra stabiliseringsmedel 82 5 VARNINGAR OCH F RSIKTIGHETS TG RDER F R D
80. mono clonal de souris sp cifique la Cyclosporin A et le second anticorps de singe anti souris sont pr m lang s l aide d un transporteur s rum de souris normal pour produire un seul r actif appel Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep 14 Pour d terminer le taux de cyclosporine l aide de cette trousse les chantillons de sang total les talons et les contr les sont d abord extraits l aide de m thanol Les extraits de m thanol sont ensuite combin s avec de l iode 125 marqu par le traceur cyclosporine et l Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep Apr s 1 heure d incubation les tubes sont centrifug s d cant s puis compt s La quantit de radioactivit restant dans la pastille est inversement proportionnelle la concentration de cyclosporine pr sente dans l chantillon 4 R ACTIFS FOURNIS DANS LA TROUSSE ImmunoSep CYCLO Trac SP NSB BLEU 1 tube 9 mL Etalons CYCLO Trac SP 0 6 1 tube 2 mL 5 tubes 1 mL ImmunoSep CYCLO Trac SP 2 tubes 100 mL Traceur CYCLO Trac SP ROUGE 1 tube 20 mL Contr les CYCLO Trac SP 2 tubes 1 mL Nombre de dosages 200 CONSERVATION D s r ception la trousse doit tre stock e entre 2 et 8 C Apr s ouverture conserver chaque r actif entre 2 et 8 C jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette Les r actifs ne doivent pas tre utilis s au del de la date de p remption La date de p remption de la trousse se trouve sur l tiquette ext rieure et
81. o calibrados para administrar 1 0 mL e 100 pL 8 6 Metanol grau de HPLC 8 7 Tampas para os tubos de extrac o Produtos Cient ficos N T1226 32 71 9 PROCEDIMENTO DO ENSAIO 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 9 14 Rotule um tubo de vidro de 12 x 75 para teste por cada calibrador controlo e amostra desconhecida Deite 400 uL de metanol grau de HPLC em cada tubo usando uma pipeta volum trica Tape os tubos com parafilme se as amostras ainda n o estiverem preparadas para serem adicionadas Adicione os calibradores os controlos e as amostras de sangue total ao metanol utilizando uma pipeta volum trica de 100 uL NOTA Deite lentamente cada amostra com a ponta da pipeta colocada ligeiramente abaixo da superf cie do metanol Imediatamente depois de adicionar a amostra tape cada tubo e misture durante 15 segundos Centrifugue os tubos tapados utilizando 1600 x g a 20 25 C durante 5 minutos Seja cuidadoso para n o permitir que os extractos de metanol evaporem antes de pipetar os tubos de ensaio Prepara tubos de teste de 12 x 75 mm rotulados de acordo com o Esquema do Ensaio protocolar contra capa Deixe os reagentes equilibrarem temperatura ambiente 20 25 C antes de os utilizar no ensaio Adicione reagentes da seguinte forma a Tubos de contagem total 100 uL de 5 CYCLO Trac SP vermelho b Tubos de liga o n o espec fica NSB 50
82. r p tition calibr s pour d livrer 1 0 mL et 100 uL 8 6 M thanol degr CLHP 8 7 Bouchons pour les tubes d extration Scientific Products No T1226 32 17 9 PROC DURE DE DOSAGE 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 9 14 Marquez un tube essai de verre 12 x 75 pour chaque talon contr le et chantillon d terminer Dispensez 4000 uL de m thanol degr CLPH dans chaque tube l aide d une macropipette volume variable Couvrez les tubes avec du parafilm si les chantillons ne sont pas pr ts tre ajout s Ajoutez les talons les contr les et les chantillons de sang total dans le methanol l aide d une macropipette volume variable 100 uL REMARQUE Dispensez lentement chaque chantillon avec la pointe de la pipette plac e l g rement sous la surface de m thanol D s que vous avez ajout l chantillon bouchez le tube et m langez le sur le Vortex pendant 15 secondes Centrifugez les tubes ferm s 1600 x g et 20 25 C pendant 5 minutes Veillez ce que les extraits de m thanol ne s vaporent pas avant le pipetage dans les tubes essai Installez les tubes essai marqu s 12 x 75 mm selon le Profil de dosage dos du manuel Laissez les r actifs atteindre la temp rature ambiante 20 25 C avant de les utiliser pour le dosage Ajoutez les r actifs comme suit a Tubes de num ration totale 100 uL de 121
83. r O kalibreringsl sningen CPM f r kalibreringsl sning eller patientprov CPM f r NSB BiB x100 CPM f r 0 kalibreringsl sningen CPM f r NSB 86 12 4 Anv nd ett lin log papper ver tre tiopotenser och plotta procent B Bo f r kalibreringsl sningarna p y axeln mot motsvarande koncentration p x axeln 12 5 Rita en b sta anpassad linje genom punkterna 12 6 Anv nd kurvan f r att avl sa ciklosporinhalterna i patientproverna praktiken anv nder de flesta laboratorier ett datorbaserat datareduktionssystem DiaSorin rekommenderar att man anv nder ett spline anpassningsprogram eller ett 4 parameters logistiskt 4PL anpassningsprogram OBS ANV ND INTE en linj r koncentrationsskala p x axeln och eller en logaritmisk B Bo skala p y axeln DATAREDUKTION DiaSorins kvalitetskontrollaboratorium anv nder en mjuk anpassning till SPLINE funktioner TABELL I Exempeldata f r DiaSorin CYCLO Trac SP Whole Blood Procent CPM i Medel Korrigerad bundet Procent diagr R r dubbelprov CPM CPM B T B Bo ng mL Total aktivitet 51 045 50 892 50 738 NSB 1 221 1 328 2 6 1 434 Kalibrering sl sning 25 323 25 432 24 104 50 0 25 541 Kalibreringsl sningar ng mL A 20 22 781 22 806 21 478 89 1 22 830 B 61 19 850 19 624 18 296 75 9 19 397 C 154 14 843 14 911 13 583 56 4 14 978 D 379 9 506 9 570 8 242 34 2 9 633 E 1099 4 893 4 858 3 530 14 6 4 823 Ok nda prover 1 16 225 16 122 14 79
84. tubes Run the assay immediately after the extraction step g 1118x 10 radius in cm rpm 11 QUALITY CONTROL Each laboratory should include at least two control samples in every assay to ensure the validity of each assay s results If you are using unassayed controls and have not established a mean and standard deviation a mean and standard deviation should then be determined for each control using a minimum of ten assays An acceptable range of values may then be obtained for these controls using 2 standard deviations of the values previously determined The DiaSorin Quality Control Laboratory has determined a range for the controls included with this kit These ranges are printed on the control vials It is not recommended that kit reagents be interchanged with the exception of 25 CYCLO Trac SP tracer In order for a laboratory to completely monitor the consistent performance of an RIA assay there are additional factors which must be checked DiaSorin suggests a regular check of the following parameters to assure consistent kit performance a Total Counts b Maximum Binding Counts per minute CPM of O Calibrator Tube Average CPM of Total Count Tubes c Nonspecific Binding CPM of NSB Tube Average CPM of Total Count Tubes d Slope of Calibrator Curve For example monitor the 80 50 and 20 points of the calibrator line for run to run reproducibility 12 CALCULATION OF RESULTS There are many methods in existence for ca
85. utilizar Suero humano con la cantidad apropiada de ciclosporina A para obtener una concentraci n que se encuentre dentro del rango especificado Los rangos para cada lote est n impresos en los viales de los controles incluidos en cada equipo Se a ade azida s dica al 0 1 y otros estabilizadores 42 5 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES PARA UTILIZACION EN DIAGN STICOS IN VITRO No debe destinarse al uso interno o externo en seres humanos ni animales REACTIVOS QUE CONTIENEN MATERIAL DE ORIGEN HUMANO Tr tese como potencialmente infeccioso Todas las unidades de donantes de suero plasma se han probado en conformidad con un m todo aprobado por la FDA estadounidense y han dado resultados negativos para la presencia de AgsHB anticuerpos de VHC y anticuerpos de VIH 1 2 Aunque estos m todos son altamente precisos no garantizan que se detecten todas las unidades infectadas Este producto tambi n puede contener otros materiales de origen humano para los cuales no existe prueba homologada Dado que ning n m todo de prueba puede ofrecer una seguridad total de la ausencia del virus de la hepatitis B VHB de la hepatitis C VHC el virus de inmunodeficiencia humana VIH u otros agentes infecciosos todos los productos que contengan material de origen humano se deben manejar de acuerdo con las pr cticas de laboratorio correctas utilizando las precauciones adecuadas que se describen en el manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Lab
86. y 1 038x 27 r 0 9124 187 enter Niere y 1 3074x 29 r 0 9703 73 University of Herz y 1 4672x 16 r 0 9696 75 Western Ontario Leber y 1 3575x 12 r 0 9067 63 Die angegebenen Korrelationsdaten sind die Ergebnisse von Studien in verschiedenen Labors die von Dritten gepr fte HPLC Verfahren verwendeten Es sollte kein Vergleich mit diesen Daten vorgenommen werden und bevor Verfahren verglichen werden mussen diese sorgfaltig standardisiert werden LITERATURANGABEN FINDEN SIE AUF DER LETZTEN SEITE 40 EQUIPO 125 RIA CYCLO TRAC SP PARA SANGRE COMPLETA 1 USO INDICADO PARA UTILIZACION EN DIAGNOSTICOS IN VITRO El equipo de ensayo radioinmunol gico RIA CYCLO Trac SP en sangre completa tiene como finalidad la determinaci n cuantitativa de ciclosporina Ciclosporina A Ciclosporina Sandimmune en sangre completa como ayuda en el tratamiento de pacientes con transplantes de coraz n ri n e h gado que reciben ciclosporina PRECAUCI N LA LEGISLACI N ESTADOUNIDENSE RESTRINGE LA VENTA Y DISTRIBUCI N DE ESTE DISPOSITIVO A M DICOS O LABORATORIOS CL NICOS O POR ORDEN DE STOS Y SU UTILIZACI N SE RESTRINGE A M DICOS O POR ORDEN DE STOS EL EQUIPO RIA CYCLO TRAC SP SOLO DEBE UTILIZARSE CON CICLOSPORINA 2 RESUMEN Y EXPLICACI N La ciclosporina Ciclosporina A Ciclosporina Ciclosporina Sandimmune es un p ptido c clico de once amino cidos de origen f ngico con potentes propiedade
87. 0 563 119 10 496 136 14 10 5 387 219 10 598 162 10 1 620 231 21 10 3 487 283 10 5 505 185 10 478 109 30 9 3 416 163 9 4 450 102 10 1 608 217 60 9 1 579 474 9 3 482 171 8 1 437 66 90 9 1 252 105 8 1 433 173 8 347 102 Totale eventi 24 13 3 a Ciclosporina da 3 75 mg kg a 5 mg kg I V passando a 12 mg kg in due dosaggi suddivisiappena possibile prednisone 2 5 mg kg con diminuzione a 20 mg day metilpredniso lone 1 2 mg kg In assenza di funzione renale la ciclosporina amp stata sospesa ed stato somministrato OKT3 5 mg kg per 10 giorni gt La ciclosporina stata iniziata il terzo giorno post operatorio 5 mg kg in due dosaggi suddividi prednisone 15 mg al giorno ridotti gradualmente azatioprina in aggiunta come indicato ALG 50 mg kg somministrato una volta e continuato solo come indicato OKT3 5 mg kg I V per 7 giorni come indicato c Ciclosporina data per inizialmente con dose orale iniziata il quinto giorno a 4 mg kg e mantenuta al livello ematico desiderato prednisone 15 mg al giorno ridotto gradualmente azatioprina 2 2 5 mg kg e sospesa quando le piastrine iniziavano a diminuire metilprednisolone 500 mg nel corso dell intervento e 15 mg per 10 giorni OKT3 5 mg kg per 10 giorni 4 Nefrotossicit o rigetto 63 La TABELLA III indica i valori ematici medi ed equivalenti livelli di creatinina in 18 pazienti trapiantati di rene presso l ospedale universitario di Albany New York Ad Albany i pazient
88. 0 2 8 14 16 185 96 125 2 7 2 2 1 1 8 2 3 15 21 19 173 94 94 2 7 1 9 1 1 9 4 4 22 28 17 198 146 76 3 0 1 9 1 1 8 5 5 29 35 22 210 168 70 2 9 1 7 1 2 8 2 6 36 42 17 164 63 68 2 5 1 1 1 1 5 6 7 43 49 14 175 53 55 2 4 1 1 1 1 5 4 8 50 56 17 198 99 42 2 1 1 0 1 2 5 4 9 57 63 16 176 54 40 3 1 2 7 1 0 10 9 10 64 70 4 199 59 34 3 5 3 3 0 9 11 7 11 71 77 18 146 73 27 3 0 3 1 0 9 11 1 12 78 84 5 142 76 18 3 5 3 3 1 1 11 2 13 85 91 1 304 7 4 2 0 3 3 6 4 6 14 92 98 1 317 10 3 4 1 1 1 7 4 8 15 99 105 2 121 10 9 4 1 1 6 2 0 5 5 16 106 112 1 49 5 5 4 2 5 1 7 8 7 17 113 119 1 79 3 1 6 0 1 1 6 1 7 2 Patienter behandlade med ciklosporin 2 5 mg kg med 12 timmars intervall azatioprin 4 mg kg preoperativt och minskande till 0 75 1 0 mg kg och metylprednisolon givet som en 300 mg bolus och d refter justerat till 20 mg dag i 30 dagar efter transplantationen och 10 mg dag i 60 dagar efter transplantationen gt Individuella ciklosporinbest mningar Resultaten fr n dessa studier visar att ciklosporinniv erna i blod h lls vid de nskade v rden f r varje transplantationstyp som anges i transplantationsprotokollen f r respektive center Eftersom ciklosporin kan ge olika blodniv er hos olika patienter m ste man vid tolkning av resultaten och justering av doseringen ta h nsyn till hur l ng tid som g tt efter transplantationen vilka andra l kemedel som ges och vilken relevant klinisk information som f religger f r patienten L KEME
89. 0 napig vagy 10 mg nap ra 60 napig az oper ci t k vet en gt Egy ni ciklosporin meghat roz s A tanulm ny eredm nye r mutat hogy a v r ciklosporin szint valamennyi transzplant ci t pusn l a k v nt szinten tarthat valamennyi transzplant ci s centrum visszajelz se alapj n Mivel a v r ciklosporin szintje k l nb z betegekben nagyon elt r lehet ez rt az eredm nyk zl sn l s a d zis be ll t sn l figyelembe kell venni az oper ci ut ni peri dust m s alkalmazott gy gykezel st s valamennyi a betegre vonatkoz egy b klinikai inform ci t 103 GY GYSZER KOLCSONHATAS A k vetkez jelent s a Sandoz LTD Basle Sv jc t l vonatkoz an cyclosporin A cyclosporin t nagym rt kben a maj metaboliz lia Ez rt a teljes v rben m rhet szintet nagym rt kben befoly solj k azok a gy gyszerek melyek hat ssal vannak a maj mikrosz m lis enzimeire k l n sen a citokrom P 450 rendszerre L nyeges ismerni ezen enzimekre gyakorolt g tl hat sukat amely sor n lecs kken a m j metabolizmusa s megemelkedik a ciklosporin szint a teljes v rben A gy gyszerek amelyek megemelik a teljes v r ciklosporin koncentr ci j t danazol t ketoconazol t erythromycin t nicardipin t diltiazem et methyltestosteron t tartalmaznak illetve ilyen hat st fejtenek ki a fogamz sg tl szerek Azok az anyagok amelyek induk lj k a citokrom P 450 aktivit st megemelik a m j metabolizmust
90. 1 203 27 9 13 7 5 543 53 7 9 9 5 71 6 7 9 5 5 Centro 2 173 12 9 7 58 5 466 41 5 8 9 5 78 5 4 6 8 5 Centro 3 195 18 4 9 4 5 500 50 2 10 0 5 87 6 9 7 9 5 Centro 4 200 13 5 6 8 5 505 42 5 8 4 5 78 3 6 4 6 5 Centro 5 192 10 2 5 3 5 497 23 9 4 8 5 Indica a varia o entre ensaios observada num laborat rio no in cio da execu o dos radioimunoensaios 78 15 2 PRECIS O A PRECIS O DO ENSAIO FOI VERIFICADA PELO TESTE DE LINEARIDADE E PELO TESTE DE RECUPERA O Linearidade Paralelismo Recupera o m dia para 30 amostras do paciente diferentes dilu das em s rie intervalo de concentra o 132 1716 ng mL factor de dilui o x valor da amostra dilu da Recupera o 100 x valor da amostra pura Dilui o 1 2 1 4 1 8 Y Recupera o 96 1 93 3 95 9 D S 13 7 19 2 22 6 C V 14 3 20 6 23 6 Precisao Estudo de recupera o Recupera es m dias em 3 n veis de ciclosporina adicionada a 5 amostras 6 r plicas de cada n 30 Ciclosporina adicionada 9 ng mL 9 5 C V N vel 1 95 119 17 14 Nivel 2 212 109 11 10 Nivel 3 467 97 7 7 15 3 Sensibilidade Anal tica Limites de detec o Quando definida como a concentra o aparente em tr s desvios padr o das contagens na liga o m xima a sensibilidade m dia do Ensaio de Sangue Total CYCLO Trac SP de 8 7 ng mL n 20 15 4 Especificidade anal tica Reactividad
91. 1 1328 2 6 1434 0 25323 25432 24104 50 0 25541 ng mL A 20 22781 22806 21478 89 1 22830 B 61 19850 19624 18296 75 9 19397 C 154 14843 14911 13583 56 4 14978 D 379 9506 9570 8242 34 2 9633 E 1099 4893 4858 3530 14 6 4823 1 16225 16122 14794 61 4 126 16019 2 9764 9570 8242 34 2 379 9375 I 1 114 CYCLO Trac SP Bo 100 40 2XHMA 1 13 13 1 Ta 13 2 Ol OTATIOTIK 13 3 OKT3 14
92. 121X 47 r 0 9719 373 University of Kidney Y 0 8022X 34 r 0 9585 82 Pennsylvania Heart Y 0 9196X 50 r 0 9223 42 Liver Y 0 9572X 48 r 0 9067 40 Albany Medical Center Kidney Y 1 038X 27 r 0 9124 187 University of Kidney Y 1 3074X 29 r 0 9703 73 Western Ontario Heart Y 1 4672X 16 r 0 9696 75 Liver Y 1 3575X 12 r 0 9067 63 Correlation data presented represents the results of studies done in a number of laboratories using independently validated HPLC procedures No comparison should be made to this data and any comparison of methods should be done only after careful standardization of the methods has been achieved SEE LAST PAGE FOR REFERENCES 13 TROUSSE DE DOSAGE RADIO IMMUNOLOGIQUE CYCLO TRAC SP SANG TOTAL 12 1 INDICATION POUR USAGE DIAGNOSTIQUE IN VITRO La trousse de dosage radio immunologique RIA CYCLO Trac SP sang total permet la d termination quantitative de la cyclosporine Cyclosporine A Cyclosporine Sandimmune dans le sang total pour aider g rer les patients qui ont subi une transplantation de coeur de rein ou de foie et qui sont soumis un traitement de cyclosporine ATTENTION D APRES LA LOI FEDERALE AMERICAINE LA VENTE ET LA DISTRIBUTION DE CET ARTICLE EST RESERVEE AUX MEDECINS O AUX LABORATOIRES CLINIQUES DIRECTEMENT OU SUR COMMANDE EXPRESSE LUTILISATION DE CET ARTICLE EST RESERVEE AUX MEDECINS OU NE PEUT ETRE EFFECTUEE QUE SUR LEUR
93. 20 mg Tag bis zum 30 Tag nach der Transplantation und 10 mg Tag bis zum 60 Tag nach der Transplantation gt Individuelle Bestimmung des Cyclosporins Die Ergebnisse dieser Studien zeigen dass der Cyclosporin Blutspiegel gut auf den gew nschten Wert f r jede Transplantationsart eingestellt werden konnte der vom jeweiligen Klinikzentrum entsprechend dem Transplantationsprotokoll indiziert war Da Cyclosporin bei verschiedenen Patienten verschiedene Blutspiegelwerte ergeben kann m ssen bei der Interpretation der Ergebnisse und der Anpassung der Cyclosporin Dosierung das Datum der Transplantation weitere verabreichte Medikamente sowie die relevanten klinischen Informationen ber cksichtigt werden WECHSELWIRKUNG MIT ANDEREN MEDIKAMENTEN Die folgenden Informationen stammen von Sandoz LTD in Basel Schweiz und betreffen das Medikament Sandimmune Cyclosporin Cyclosporin wird durch den Stoffwechsel in der Leber schnell abgebaut Infolgedessen kann der Spiegel im Vollblut durch Medikamente beeinflusst werden die auf mikrosomale Leberenzyme wirken insbesondere auf das Zytrochromsystem P 450 37 Substanzen die bekannterweise diese Enzyme hemmen reduzieren den Leberstoffwechsel und erh hen den Cyclosporin Spiegel im Vollblut Zu den Medikamenten die nachweislich die Konzentrationen von Cyclosporin im Vollblut erh hen geh ren Danazol Ketoconazol Erythromycin Nicardipin Diltiazem Methyltestosteron sowie orale Kontrazeptiv
94. 23 1986 Hows J M and J M Smith In Vitro Stability of Cyclosporin Journal of Clinical Pathology 36 720 721 1983 Rudy J L and J Ruthledge Preparation and Optimal Storage of a Whole Blood Control Pool for Cyclosporin A Clinical Chemistry 32 2204 5 1986 Shaw L Advances in Cyclosporine Pharmacology Measurement and Therapeutic Monitoring Clinical Chemistry 35 7 1299 1308 1989 Moger T G Post S Stevioff and C Anderson Cyclosporine Nephrotoxicity is Minimized by Adjusting Dosage on the Basis of Drug Concentration in Blood Mayo Clinic Proc 63 241 274 1988 Rosano T G B M Freed M A Pell and N Lempert Cyclosporine Metabolites in Human Blood and Renal Tissue Transplant Proceedings 18 p 6 Suppl 5 35 40 1986 Sandimmunne is a registered trademark of Sandoz LTD Basle Switzerland CYCLO Trac is a registered trademark of DiaSorin Inc SYMBOLS USED WITH DEVICES CONTROL English Fran ais Deutsch Espa ol Italiano European Conformit aux CE Konformit ts Conformidad Conformit normes 8 Conformity A kennzeichnung europea europea europ ennes Expiration Date Date limite Mindesthaltbar Fecha de Data di d utilisation keitsdatum caducidad scadenza Manufacturer Fabricant Hersteller Fabricante Fabbricante Consult Consulter les Geb h i Consulte las Consultare le Instructions instructions instrucciones de
95. 4 61 4 126 16 019 2 9 764 9 570 8 242 34 2 379 9 375 Typiska provdata och en kalibreringskurva visas i TABELL och FIGUR 1 denna information r endast avsedd som ett exempel och ska inte anv ndas f r att ber kna n gra v rden 87 CYCLO Trac SP WHOLE BLOOD SAMPLE CALIBRATOR CURVE Bo 100 40 FIGUR 1 13 METODBEGR NSNINGAR 13 1 Proverna f r ej frysas och tinas flera g nger 13 2 Aktiviteten i r ren m ste r knas under tillr ckligt l ng tid f r att man ska kunna undvika statistiska fel 13 3 Monoklonala antikroppar som OKT3 har testats och visat sig ej interferera med assayen 14 F RV NTADE V RDEN De terapeutiska niv erna av ciklosporin i blod hos njur hj rt och levertransplanterade patienter r ej v l fastst llda vilket delvis beror p de varierande behandlingsprotokollen vid transplantationer p de befintliga betoderna att m ta ciklosporin och p samtidig administrering av andra immunh mmande l kemedel 2 30 31 En klinisk utv rdering av CYCLO Trac SP Whole Blood utf rdes p univer sitetssjukhusen i London i den kanadensiska provinsen Ontario och i Albany i delstaten New York p njur hj rt och levertransplanterade patienter I dessa studier m ttes de temporala miniminiv erna i blodet hos de transplanterade patienterna Miniminiv erna observerades efter transplantationen under 4 till 90 dagar hos patienter vid universitetssjukhuset i London Ontario som genomg tt tr
96. 42 17 164 63 68 2 5 1 1 1 1 5 6 7 43 49 14 175 53 55 2 4 1 1 1 1 5 4 8 50 56 17 198 99 42 2 1 1 0 1 2 5 4 9 57 63 16 176 54 40 3 1 2 7 1 0 10 9 10 64 70 4 199 59 34 3 5 3 3 0 9 11 7 11 71 77 18 146 73 27 3 0 3 1 0 9 11 1 12 78 84 5 142 76 18 3 5 3 3 1 1 11 2 13 85 91 1 304 7 4 2 0 3 3 6 4 6 14 92 98 1 317 10 3 4 1 1 1 7 4 8 15 99 105 2 121 10 9 4 1 1 6 2 0 5 5 16 106 112 1 49 5 5 4 2 5 1 7 8 7 17 113 119 1 79 3 1 6 0 1 1 6 1 7 2 Patients trait s par cyclosporine 2 5 mg kg des intervalles de douze heures azathioprine 4 mg kg en pr op ratoire et une pointe de 0 75 1 0 mg kg et m thylprednisolone en doses de 300 mg bols puis modifi 20 mg jour pendant 30 jours apr s la transplantation et 10 mg jour pendant 60 jours apr s la transplantation gt D terminations individuelles de cyclosporine Les r sultats de ces tudes montrent que le taux de cyclosporine dans le sang est maintenu au taux voulu de sang pour chaque type de transplantation comme indiqu pour les protocoles de transplantation adopt s par chaque centre La cyclosporine pouvant produire des taux de sang diff rents chez diff rents patients l interpr tation des r sultats et l ajustement du dosage de cyclosporine doivent prendre en consid ration la p riode post transplantation les autres m dicaments administr s et les informations cliniques importantes concernant le patient INTERACTIONS M DICAMENTEUSES Sandoz LTD B le Suisse reporte
97. 433 173 8 347 102 Total events 24 13 3 a Cyclosporine 3 75 mg kg to 5 mg kg I V changing to 12 mg kg in two divided doses as soon as possible prednisone 2 5 mg kg with taper to 20 mg day methylpredniso lone 1 2 mg kg If no kidney function cyclosporine was discontinued and OKT3 given 5 mg kg for 10 days gt Cyclosporine begun 3rd post operative day 5 mg kg in two divided doses prednisone 15 mg daily taper gradually azathioprine in addition as indicated ALG 50 mg kg given once and continued only as indicated OKT3 5 mg kg for 7 days as indicated Cyclosporine given initially with oral dose started at day 5 at 4 mg kg and main tained at desired blood level prednisone 15 mg daily decreasing gradually azathioprine 2 2 5 mg kg and discontinued when platelets begin to fall methyl prednisolone 500 mg intraoperatively and 15 mg for 10 days OKT3 5 mg kg for 10 days d Nephrotoxicity or rejection TABLE III shows the mean cyclosporine blood values and corresponding creatinine levels in 18 kidney transplant patients from the University Hospital Albany New York At Albany patients were maintained at 100 to 300 ng mL trough cyclosporine level TABLE Ill Temporal cyclosporine whole blood values in 18 kidney transplant patients as measured by the CYCLO Trac SP Whole Blood Kit Post Cyclosporine Creatinine Levels Operative ng mL mg dL Week Day NP Mean S D N Mean S D MIN MAX 1 0 7 12 151 12
98. 5 Zentrum 5 192 10 2 5 3 5 497 23 9 4 8 5 Radioimmunoassays durchf hrt 38 Abweichungen zwischen einzelnen Tests in einem Labor das erst seit kurzem 15 2 EXAKTHEIT DIE EXAKTHEIT DES TESTS WURDE DURCH EINE LINEARIT TS UND EINE WIEDERFINDUNGSPRUFUNG GETESTET Linearit t Parallelit t Durchschnittliche Wiederfindung bei 30 verschiedenen seriell verd nnten Patient enproben Konzentrationsbereich 132 1716 ng mL Verd nnungsfaktor x Wert der verd nnten Probe Wert der unverd nnten Probe Wiederfindung 100 x Verd nnung 1 2 1 4 1 8 Wiederfindung 96 1 93 3 95 9 Standardabw 13 7 19 2 22 6 VK 14 3 20 6 23 6 Genauigkeit Wiederfindungsstudie Durchschnittliche Wiederfindung bei 3 Spiegeln zugegebenem Cyclosporin in 5 Proben jeweils 6 Replikate n 30 Zugegebenes Cyclosporin Wiederfindung Standardabw VK ng mL Spiegel 1 95 119 17 14 Spiegel 2 212 109 11 10 Spiegel 2 467 97 7 7 15 3 Analytische Sensitivit t Nachweisgrenzen Die durchschnittliche Sensivit t des CYCLO Trac SP Whole Blood Tests betr gt 8 7 ng mL n 20 wenn sie als die anscheinende Konzentration bei 3 Standard abweichungen von den Z hlungen bei maximaler Bindung definiert wird 15 4 Analytische Spezifit t Durchschnittliche Kreuzreaktivitat der Cyclosporin Metabolite im CYCLO Trac SP Whole Blood Test Die Kreuzreaktivitat wird wie folgt definiert Cyc
99. 5 5 B r ennek a gy gyszernek haszna van az jonnan transzplant lt szervek kil k d s nek g tl s ban sz mos kedvez tlen hat sban van szerepe a legs lyosabb amikor vese vagy m j totoxicit s t rsul a gy gyszer magas v r szintj vel 216 Ehhez j rul m g hozz hogy a ciklosporin abszorpci ja s metabolizmusa nagy variabilit st mutat beteg s beteg k z tt 7 9 gy a d zist egy nileg kell meghat rozni s monitorozni az optim lis immunszupresszi el r s hez s a k ros hat sok minimaliz l s hoz A teljes v rben csaknem a ciklosporin tejes mennyis ge v r sv rtestekhez s plazma proteinekhez k t dik Ez az eloszl s hat ssal van a h m rs klet v ltoz sra s a hematokritra 222 Az sszevethet eredm nyek el r se rdek ben a v rv tel standardiz ci ja elengedhetetlen 9 Jelenleg k t f le m dszer l tezik a betegek ciklosporin szintj nek monitoroz s ra nagy teljes tm ny folyad k kromatogr fia HPLC s radioimmunoassay RIA Az els gener ci s RIA k poliklon lis antitesteket haszn ltak melyek nagym rt kben mutattak keresztrakci t a v rben kering metabolitokkal Ezen RIA kal m rt ciklosporin rt kek mindig a HPLC rt k felett voltak A m sodik gener ci s RIA k szletek monoklon lis antitest technik n alapulnak Mind specifikus mind non specifikus antitestek kifejleszt sre ker ltek A specifikus antitesttel t rt n m r s mely kiz r lag a c
100. 71 77 18 146 73 27 3 0 3 1 0 9 11 1 12 78 ews 84 5 142 76 18 3 5 3 3 1 1 11 2 13 85 ews 91 1 304 7 4 2 0 3 3 6 4 6 14 92 ews 98 1 317 10 3 4 1 1 1 7 4 8 15 99 ews 105 2 121 10 9 4 1 1 6 2 0 5 5 16 106 112 1 49 5 5 4 2 5 1 7 8 7 17 113 119 1 79 3 1 6 0 1 1 6 1 7 a 2 5 mg KIAO 4 mg KIA 0 75 1 0 mg KIA 300 mg 20 mg nu pa 30 10 mg nu pa 60
101. 8 143 4 9 4 0 0 7 18 0 2 8 14 16 185 96 125 2 7 2 2 1 1 8 2 3 15 21 19 173 94 94 2 7 1 9 1 1 9 4 4 22 28 17 198 146 76 3 0 1 9 1 1 8 5 5 29 35 22 210 168 70 2 9 1 7 1 2 8 2 6 36 42 17 164 63 68 2 5 1 1 1 1 5 6 7 43 49 14 175 53 55 2 4 1 1 1 1 5 4 8 50 56 17 198 99 42 2 1 1 0 1 2 5 4 9 57 63 16 176 54 40 3 1 2 7 1 0 10 9 10 64 70 4 199 59 34 3 5 3 3 0 9 11 7 11 71 77 18 146 73 27 3 0 3 1 0 9 11 1 12 78 84 5 142 76 18 3 5 3 3 1 1 112 13 85 91 1 304 7 4 2 0 3 3 6 4 6 14 92 98 1 317 10 3 4 1 1 1 7 4 8 15 99 105 2 121 10 9 4 1 1 6 2 0 5 5 16 106 112 1 49 5 5 4 2 5 1 7 8 7 17 113 119 1 79 3 1 6 0 1 1 6 1 7 2 Patients treated with cyclosporine 2 5 mg kg at twelve hour intervals azathioprine 4 mg kg preoperatively and tapered to 0 75 to 1 0 mg kg and methylprednisolone given as a 300 mg bolus and then adjusted to 20 mg day by 30 days post transplant and 10 mg day by 60 days post transplant gt Individual cyclosporine determinations The results of these studies demonstrate that cyclosporine blood levels were maintained at desired blood levels for each transplant type as indicated for the transplant protocols utilized by each center Because cyclosporine can produce different blood levels in different patients interpretation of results and adjustment of cyclosporine dosage must take into consideration post transplant period other medications administered and relevant Clinical information concerning the patient 10 DRUG IN
102. 95 9 D s 13 7 19 2 22 6 C V 14 3 20 6 23 6 Precisione Studio di recupero Recuperi medi a 3 livelli di ciclosporina aggiunta per 5 campioni 6 replicati ciascuno n 30 Ciclosporina aggiunta ng mL di recupero D S C V Livello 1 95 119 17 14 Livello 2 212 109 11 10 Livello 3 467 97 7 7 15 3 Sensibilit analitica limiti di rilevazione Se definita come concentrazione apparente a 3 deviazioni standard dai conteggi a legame massimo la sensibilit media dell analisi CYCLO Trac SP Sangue intero 8 7 ng mL n 20 15 4 Specificit analitica Reattivit incrociata media dei metaboliti di ciclosporina nell analisi CYCLO Trac SP Sangue intero La reattivit incrociata cosi definita Concentrazione di ciclosporina al 50 di B Bo 100 x Concentrazione di metabolita al 50 di B Bo Metabolita ciclosporina di reattivit incrociata 1 1 7 8 lt 0 1 13 0 1 17 0 7 18 0 2 21 0 8 66 15 5 Interferenza Le seguenti sostanze sono state aggiunte in aliquote di un pool di sangue intero contenente ciclosporina 160 250 ng mL Nessuna di queste sostanze ha interferito con la misurazione della ciclosporina quando presente nelle concentrazioni indicate di seguito Sostanza Concentrazione Colesterolo 100 1000 mg dL Trigliceridi 300 1000 mg dL Bilirubina 5 30 mg dL Azatioprina 50 200 ng mL Cimetidina 500 1000 ng mL Nifedipina 100 200 ng mL 6 metil prednisolone 20 60 ng mL OKT3 1500 ng
103. Bestimmung von Cyclosporin Cyclosporin A Cyclosporin Sandimmune in Vollblut zur Unterst tzung der Behandlung von Patienten mit Herz Nieren und Lebertransplantation gedacht die Cyclosporin erhalten ACHTUNG LAUT BUNDESRECHT DER USA DARF DIESES GERAT NUR AN EINEN ARZT ODER AUF ANWEISUNG EINES ARZTES ODER AN EIN KLINISCHES LABOR VERKAUFT UND NUR VON EINEM ARZT ODER AUF ANWEISUNG EINES ARZTES VERWENDET WERDEN DAS CYCLO TRAC SP RIA KIT DARF NUR ZUSAMMEN MIT CYCLOSPORIN VERWENDET WERDEN 2 BERBLICK UND ERKL RUNG Cyclosporin Cyclosporin A Cyclosporin Ciclosporin Sandimmune ist ein zyklisches Undekapeptid aus einem Pilz mit stark immunosuppressiven Eigenschaften 2 Der eigentliche Wirkungsmechanismus wird noch untersucht es scheint jedoch so zu sein dass Cyclosporin sowohl auf den Stoffwechsel der T Helferlymphozyten als auch auf den der T Suppressorlymphozyten wirkt die das Immunsystem beeintr chtigen Obwohl das Medikament erfolgreich gegen die AbstoRung von transplantierten Organen wirkt wurden verschiedene Nebenwirkungen festgestellt die gravierendsten sind Nephrotoxizit t und Hepatoxizit t bedingt durch den hohen Spiegel des Medikaments im Blut Au erdem variiert die Aufnahme von Cyclosporin und sein Abbau durch den Stoffwechsel in starkem Ma e von Patient zu Patient 1719 Deshalb muss die Dosierung individuell angepasst und berwacht werden um eine optimale Immunsuppression zu erreichen und die Nebenwi
104. COMMANDE EXPRESSE LA TROUSSE DE DOSAGE RADIO IMMUNOLOGIQUE CYCLO TRAC SP NE PEUT ETRE UTILIS E QUE POUR LE DOSAGE DE LA CYCLOSPORINE 2 R SUM ET COMMENTAIRE La cyclosporine Cyclosporine A Cyclosporine Ciclosporine Sandimmune est un polypeptide cyclique provenant d un champignon pr sentant de grandes propri t s d immunosuppression Son action est aujourd hui encore tudi e Toutefois la cyclosporine semble agir sur le m tabolisme des cellules T auxiliaires et des cellules suppressives qui affaiblit le systeme immunitaire Bien que cette substance fasse preuve d une grande utilit dans la pr vention des rejets dans les transplantations d organes elle pr sente des effets ind sirables 21 dont les plus importants sont la n phrotoxicit et l h patotoxicit associ es un taux lev de sang 1218 De plus l absorption et le m tabolisme de la cyclosporine sont tr s variables d un patient l autre C est pourquoi les dosages doivent tre individualis s et surveill s de mani re obtenir une immunosuppression optimale et r duire les effets ind sirables Presque toute la cyclosporine pr sente dans le sang total est li e aux h maties et aux prot ines du plasma 22 Les changements de temp rature et d h matocrite affectent sa distribution Pour assurer des r sultats constants un protocole standard de pr l vement du sang doit tre adopte Il existe actuellement deux m thodes de surveilla
105. CYCLO Trac SP Whole Blood Radioimmunoassay for Cyclosporine For the quantitative measurement of cyclosporine Cyclosporin A Cyclosporin Sandimmune in whole blood Instruction Manual Manuel d Instructions Testanleitung Manual de Instrucciones Manuale di Istruzioni Manual de instru es Bruksanvisning Felhaszn l i Utasit s REF 23000 DiaSorin Stillwater Minnesota 55082 0285 U S A TABLE OF CONTENTS English il i a ied pa lw at ER tn Page 1 FET G IS 14 Deutsch a 27 Espanol iii ai diodos 41 Italiano 55 Portugu s n Svenska lilla asian 81 Magyar iii ao lie ili awd era ED 94 CYCLO TRAC SP WHOLE BLOOD 21 RIA KIT 1 INTENDED USE FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE The CYCLO Trac SP Whole Blood radioimmunoassay RIA kit is intended for the quantitative measurement of cyclosporine Cyclosporin A Cyclosporin Sandimmune in whole blood as an aid in the management of heart kidney and liver transplant patients receiving cyclosporine CAUTION U S FEDERAL LAW RESTRICTS THIS DEVICE TO SALE AND DISTRIBUTION BY OR ON THE ORDER OF A PHYSICIAN OR TO A CLINICAL LABORATORY AND USE IS RESTRICTED TO BY OR ON THE ORDER OF A PHYSICIAN THE CYCLO TRAC SP RIA KIT IS FOR USE ONLY WITH CYCLO SPORINE 2 SUMMARY AND EXPLANATION Cyclosporine Cyclosporin A Cyclospori
106. CYCLO Trac SP rouge b Tubes de liaison non sp cifique NSB 50 uL d talon 0 extrait 100 uL de 1251 CYCLO Trac SP rouge 1 0 mL d ImmunoSepCYCLO Trac SP NSB bleu bien m lang c talon 0 CYCLO Trac SP 50 uL d talon 0 extrait CYCLO Trac SP 100 uL de 121 CYCLO Trac SP rouge d talons CYCLO Trac SP A E 50 uL d talon CYCLO Trac extrait 100 de 1251 CYCLO Trac SP rouge e Contr le et chantillons d terminer 50 uL d chantillon extrait 100 uL de 1251 CYCLO Trac SP rouge Agitez vigoureusement le flacon d lmmunoSep Anti CYCLO Trac SP I ajoutez imm diatement 1 0 mL de r actif bien m lang tous les tubes l exception des tubes de num rotation totale et de NSB M langez vigoureusement les tubes sur le Vortex est laissez les incuber pendant 1 heure 20 25 C Centrifugez les tubes 1600 x g pendant 20 minutes 20 25 C D cantez imm diatement le surnageant de tous les tubes l exception des tubes num rotation totale en les renversant pendant 2 minutes au maximum Tapez les tubes sur du papier absorbant pour liminer les gouttes de liquide qui restent sur les bords avant de les replacer l endroit A l aide du compteur scintillation gamma comptez le pr cipit de chaque tube et des tubes num ration totale le temps n cessaire atteindre l exactitude statistique suffisante consultez le paragraphe Limitations de la Proc dure En alternative vous pouvez extrair
107. California como causante de cancer ATENCI N La radiactividad impresa en el interior del paquete puede diferir ligeramente de la impresa en la etiqueta de la caja y en la del vial del trazador La etiqueta de la caja y la del trazador indican la cantidad real de radiactividad en la fecha de la calibraci n mientras que el impreso del interior del paquete indica la radiactividad te rica del equipo 6 INDICACIONES DE POSIBLE DETERIORO DE LOS REACTIVOS DEL EQUIPO 6 1 Presencia de part culas an malas en alguno de los reactivos 6 2 Desviaci n en la pendiente o posici n de la curva del calibrador con respecto al resultado habitual 6 3 Disminuci n de la uni n m xima 6 4 Alto nivel de uniones no espec ficas 6 5 Reproductividad pobre entre duplicados 7 RECOLECCI N Y PREPARACI N DE LA MUESTRA Para el procedimiento de extracci n de sangre completa del CYCLO Trac SP se precisan cien microlitros de sangre completa con EDTA NOTA No deben utilizarse muestras heparinizadas 2 RECOGIDA Y ALMACENAMIENTO DE SANGRE COMPLETA Recoja la sangre por punci n venosa en un tuvo de vidrio vac o de 5 10 mL Debe utilizarse EDTA 7 2 mg 5 mL de sangre como anticoagulante No se precisa ning n otro aditivo ni conservante para mantener la integridad de la muestra Si no se utilizan las muestras de inmediato almac nelas a 2 8 C o menos durante un m ximo de 7 d as Si desea almacenarlas durante m s tiempo hasta 3 meses cong le
108. DELSINTERAKTIONER The following is reported by Sandoz LTD Basle Switzerland for the drug Sandimmune cyclosporine Ciklosporin metaboliseras huvudsakligen av levern Helblodsassayen f r ciklosporin kan d rf r influeras av l kemedel som p verkar leverns mikrosomala enzymer speciellt cytokrom P 450 systemet mnen med k nd h mmande effekt p dessa enzymer minskar levermetabolismen och kar ciklosporinhalterna 90 Bland de l kemedel som har rapporterats h ja helblodskoncentrationen av ciklosporin terfinns danazol ketoconazol erytromycin nikardipin diltiazem metyltestosteron och perorala antikonceptionsmedel Substanser som inducerar cytokrom P 450 aktivitet ger en kad levermetabolism och s nker ciklosporinhalterna Bland de l kemedel som har rapporterats s nka helblodskoncentrationen av ciklosporin terfinns rifampin fenytoin fenobarbital intraven st trimetoprim med sulfametoxazol och karbamazepin Vid samtidig anv ndning av ciklosporin och dessa l kemedel r det helt n dv ndigt med en noggrann uppf ljning av blodniv erna av ciklosporin och l mplig dosjustering Det har visat sig att prednisolon clearance r s nkt hos patienter som behandlas med ciklosporin och att helblodsniv erna av ciklosporin uppm tta med RIA stiger efter administrering av en h g dos metylprednisolon 15 SPECIFIKA PRESTANDA 15 1 Precision Intraseriell variation v rden i ng mL Medelv rde S D C V N L G 46 4 9
109. FEDERALE STATUNITENSE LIMITA LA VENDITA E LA DISTRIBUZIONE DI QUESTO APPARECCHIO A O DIETRO PRESCRIZIONE DI UN MEDICO O AD UN LABORATORIO CLINICO IL SUO USO E LIMITATO A O SU ORDINE DI UN MEDICO IL KIT RIA CYCLO TRAC SP DEVE ESSERE UTILIZZATO SOLO CON CICLOSPORINA 2 SOMMARIO E SPIEGAZIONI La ciclosporina Ciclosporina A Ciclosporina Sandimmune un undecapeptide ciclico di origine fungina con potenti propriet immunosoppressive Anche se si sta ancora studiando il suo meccanismo di azione la ciclosporina sembra influire sul metabolismo sia dei linfociti T helper sia dei linfociti T soppressore che indeboliscono il sistema immunitario Sebbene questo farmaco abbia dimostrato la sua capacit di prevenire il rigetto nei trapianti di nuovi organi sono stati riferiti vari effetti indesiderati i pi gravi dei quali sono nefrotossicit ed epato tossicit associati ad elevati livelli nel sangue di questo farmaco gt 8 Inoltre l assorbimento e il metabolismo della ciclosporina altamente variabile da paziente a paziente Pertanto necessario individualizzare e monitorare i dosaggi al fine di ottenere un immunosoppressione ottimale e ridurre gli effetti collaterali indesiderati Quasi tutta la ciclosporina presente nel sangue intero legata ai globuli rossi e alle proteine plasmatiche Questa distribuzione determinata dalle variazioni di temperatura e dall ematocrito 2 Per assicurare risultati co
110. IAGNOSTISKT BRUK IN VITRO Ej avsett f r vare sig inv rtes eller utv rtes bruk p m nniskor eller djur REAGENS SOM INNEH LLER MATERIAL AV HUMANT URSPRUNG Behandlas som potentiellt smittfarligt Varje donerad enhet serum plasma som anv nts f r beredning av produkten har testats med en metod godk nd av USA s l kemedelsverk FDA och befunnits negativ vad g ller f rekomst av HBsAg antikroppar mot HCV och antikroppar mot HIV 1 2 ven om dessa metoder r mycket tillf rlitliga utg r de ingen garanti f r att samtliga infekterade enheter uppt cks Produkten kan ven inneh lla annat material av humant ursprung f r vilket det inte finns n got godk nt test Eftersom ingen k nd testmetod kan ge en fullst ndig garanti f r att det inte f rekommer hepatit B virus HBV hepatit C virus HCV humant immunbristvirus HIV eller andra infekti sa agens skall alla produkter som inneh ller material av humant ursprung hanteras i enlighet med god laboratoriepraxis och med l mpliga f rsiktighets tg rder enligt handboken Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories fr n U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 4 e upplagan maj 1999 eller aktuell upplaga REAGENS SOM INNEH LLER NATRIUMAZID F RSIKTIGT Vissa reagens i satsen inneh ller natriumazid Natriumazid kan reagera med bly och koppar i avloppsledningarna och bilda h gexplosiva metallazider N r reagensen kasseras m ste
111. ITETSF RS MRING HOS REAGENSEN I SATSEN 6 1 F rekomst av onormalt partikelformigt material i n got av reagensen 6 2 En f r ndring av kalibreringskurvans l ge eller lutning j mf rt med vad som normalt erh lles 6 3 En s nkning av maximal bindning 6 4 En h g ospecifik bindning 6 5 D lig reproducerbarhet mellan dubbelprover 7 PROVTAGNING OCH PROVHANTERING Det beh vs etthundra 100 mikroliter helblod med EDTA tillsats f r extraktionssteget inf r assayen OBS Heparinblod kan ej anv ndas 27 PROVTAGNING OCH F RVARING AV HELBLOD Tag venprov i 5 eller 10 mL glasr r av vacutainertyp EDTA 7 2 mg 5 mL blod skall anv ndas som antikoagulationsmedel Inga andra tillsatser eller konserveringsmedel beh vs f r att h lla proverna intakta Om proverna inte testas omedelbart ska de f rvaras vid h gst 2 8 C i upp till 7 dagar F r l ngre f rvaring upp till 3 m nader kan proverna h llas frysta vid 20 C eller kallare 2 22 Helblodprover som f rvarats vid 4 C eller som inte har behandlats omedelbart m ste blandas noggrant innan man pipetterar blod som ska testas med satsen 8 EJ TILLHANDAH LLEN MEN N DV NDIG UTRUSTNING OCH MATERIEL 8 1 Eng ngs borosilikatr r 12 x 75 mm 8 2 Temperaturreglerad centrifug som passar f r 12 x 75 mm r r 8 3 Gammar knare som kan r kna jod 125 8 4 Vortex blandare 8 5 Pipetteringshj lpmedel a pipetter med positive displacement f r 400 uL 100 uL och 50
112. O Trac SP NSB ImmunoSep blu reagente pronto all uso La premiscela di siero scimmia anti topo normale siero di topo diluita in soluzione salina con tampone fosfatico contenente 0 08 sodio azide e una sostanza surfactante stato aggiunto colorante blu Agitare energicamente immediatamente prima dell uso 4 2 Calibratori CYCLO Trac SP 0 6 reagente pronto all uso Il siero privo di ciclosporina contiene 0 1 sodio azide e una sostanza surfactante Sei calibratori per ciclosporina a concentrazioni normali varianti fra 0 1200 ng mL sono prediluiti nel siero umano contenente 0 1 sodio azide e una sostanza surfactante valori esatti delle concentrazioni vengono assegnati in base al lotto e sono indicati sulle etichette delle fiale II calibratore DiaSorin CYCLO Trac SP stato calibrato in base allo standard di riferimento USP per ciclosporina Eventuali confronti con altri prodotti o procedure devono essere fatti in base a questo standard di riferimento calibratori del kit dimostrano commutabilit con i campioni del paziente quando usati con reagenti e con la procedura operativa di questo test diagnostico in vitro come consigliato 4 3 Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep reagente pronto all uso Anticorpo monoclonale topo anti ciclosporina e premiscela siero scimmia anti topo normale siero di topo diluito in soluzione salina con tampone fosfatico contenente 0 08 sodio azide e una sostanza surfactante Agitare energicamente immediata ment
113. SB 1 221 1 328 2 6 1 434 Calibrador O 25 323 25 432 24 104 50 0 25 541 Calibradores ng mL A 20 22 781 22 806 21 478 89 1 22 830 B 61 19 850 19 624 18 296 75 9 19 397 C 154 14 843 14 911 13 583 56 4 14 978 D 379 9 506 9 570 8 242 34 2 9 633 E 1099 4 893 4 858 3 530 14 6 4 823 Amostras desconhecidas 1 16 225 16 122 14 794 61 4 126 16 019 2 9 764 9 570 8 242 34 2 379 9 375 Os dados t picos de amostras e a curva de calibragem s o indicadas na TABELA I e na FIGURA 1 esta informa o serve apenas como refer ncia e n o deve ser utilizada para calcular qualquer valor 74 Curva de calibragem da amostra de sangue total CYCLO Trac SP Bo 100 CITA Si 40 FIGURA 1 13 LIMITA ES DO PROCEDIMENTO 13 1 Os esp cimes n o devem ser congelados e cortados v rias vezes 13 2 Os tempos de contagem devem ser os suficientes para evitar erros estat sticos 13 3 Procedeu se avalia o de anticorpos monoclonais tais como o OKT3 tendo ficado demonstrado que n o interferem no ensaio 14 VALORES ESPERADOS Os n veis sangu neos terap uticos de ciclosporina nos pacientes sujeitos a transplantes de rins do cora o ou do f gado ainda n o foram claramente definidos Tal ficou em parte a dever se aos variados protocolos de tratamento para os transplantes praticados aos m todos dispon veis para medir a ciclosporina e administra o concomitante de outros f rmacos imunosupressores com a cicl
114. Sorin recomienda la utilizaci n de un programa de ajuste de l nea estriada o una l nea log stica de 4 par metros NOTA NO utilice una escala de concentraci n lineal eje X ni una escala logar tmica B Bo eje Y 47 DATOS DE REDUCCI N El laboratorio de control de calidad de DiaSorin utiliza un ajuste de l nea estriada alisada TABLA I Datos de muestra de sangre completa con CYCLO Trac SP de DiaSorin Uni n CPM Promedio CPM porcentual Porcentaje Conc Tubo duplicado CPM corregido B T B B0 ng mL Cuentas 51 045 50 892 totales 50 738 NSB 1 221 1 328 2 6 1 434 Calibrador O 25 323 25 432 24 104 50 0 25 541 Calibradores ng mL A 20 22 781 22 806 21 478 89 1 22 830 B 61 19 850 19 624 18 296 75 9 19 397 C 154 14 843 14 911 13 583 56 4 14 978 D 379 9 506 9 570 8 242 34 2 9 633 E 1099 4 893 4 858 3 530 14 6 4 823 Muestras desconocidas 1 16 225 16 122 14 794 61 4 126 16 019 2 9 764 9 570 8 242 34 2 379 9 375 La TABLA I y la FIGURA 1 ofrecen ejemplos de datos tipicos de muestras y de una curva de calibrado esta informaci n s lo debe utilizarse como referencia y no para calcular ning n valor 48 Curva de calibrador de muestras de sangre completa de CYCLO Trac SP Bo 100 II Si FJ 40 FIGURA 1 13 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO 13 1 Las muestras no deben congelarse y descongelarse de forma reiterada 13 2 La frecuencia de las cuentas deber a bastar para evitar
115. T RIOS SOBRE O PROCEDIMENTO 10 1 De forma a obter o m ximo de precis o os passos de extrac o do metanol devem ser cuidadosamente seguidos utilize sempre volum tricas SMI para deitar o metanol e as amostras Tamb m s o necess rias pipetas volum tricas para transferir 50 UL de extracto de metanol para cada tubo de ensaio 10 2 Adicione cada al quota de reagente ao ter o inferior do tubo de ensaio para garantir a mistura completa dos reagentes 10 3 Os tubos descart veis de alguns fabricantes poder o produzir liga es n o espec ficas elevadas ou provocar um maior deslizamento da pastilha 10 4 Os reagentes ImmunoSep devem ser bem misturados imediatamente antes de serem usados 10 5 Se uma amostra apresentar uma leitura superior ao calibrador mais alto volte a extrair a amostra usando uma rela o sangue metanol superior a 1 4 recomendam se as rela es 1 9 ou 1 19 Multiplique os resultados do ensaio pelo factor de correc o adequado 10 6 Se n o conseguir decantar os tubos num per odo de 5 minutos ap s a conclus o da centrifuga o recomenda se que volte a centrifugar os tubos 10 7 Execute o ensaio imediatamente ap s a fase de extrac o 11 CONTROLO DE QUALIDADE Cada laborat rio deve incluir pelo menos duas amostras de controlo em cada ensaio para assegurar a validade dos resultados de cada ensaio Se estiver a utilizar controlos n o ensaiados e ainda n o tiver estabelecido um meio e um desvio
116. TERACTIONS The following is reported by Sandoz LTD Basle Switzerland for the drug Sandimmune cyclosporine Cyclosporine is extensively metabolized by the liver Therefore its whole blood level may be influenced by drugs that affect the hepatic microsomal enzymes particularly the cytochrome P 450 system Substances known to inhibit these enzymes will decrease hepatic metabolism and increase cyclosporine whole blood levels Drugs that have been reported to increase the whole blood concentration of cyclosporine include danazol ketoconazole erythromycin nicardipine diltiazem methyl testosterone and oral contraceptives Substances that are inducers of cytochrome P 450 activity will increase hepatic metabolism and decrease cyclosporine whole blood levels Drugs that have been reported to decrease the whole blood concentration of cyclo sporine include rifampin phenytoin phenobarbital trimethoprim with sulfa methoxazole and carbamazepine Monitoring of blood levels of cyclosporine and appropriate dosage adjustment are essential when these drugs are used concomitantly It has been found that prednisolone clearance is reduced in patients treated with cyclosporine and that whole blood levels of cyclosporine as measured by RIA increase following the administration of high dose methylprednisolone 15 SPECIFIC PERFORMANCE CHARACTERISTICS 15 1 Precision Within assay variation values ng mL Mean Value S D C V N LOW 46
117. Trac SP Whole Blood k szlettel m rve Post Vese Sz vb M je Operativ CyA ng mL CyA ng mL CyA ng mL nap N eset tlag SD N eset tlag SD N eset tlag SD 0 4 8 2 438 269 9 161 115 7 10 3 392 138 10 326 176 9 372 111 11 9 6 428 207 10 563 119 10 496 136 14 10 5 387 219 10 598 162 10 1 620 231 21 10 3 487 283 10 5 505 185 10 478 109 30 9 3 416 163 9 4 450 102 10 1 608 217 60 9 1 579 474 9 3 482 171 8 1 437 66 90 9 1 252 105 8 1 433 173 8 347 102 Osszes eset 24 13 3 a Ciklosporin 3 75 mg kg 5 mg kg I V v ltoztat s 12 mg kg ra kett valasztva amilyen hamar csak lehet prednison 2 5 mg kg r l cs kkentve 20 mg napra methylprednisolon 1 2 mg kg Ha nincs vese funkci a ciklosporin adagolas megszakitva s OKT3 ad sa 5 mg kg 10 napig gt Ciklosporin ad sa az oper ci ut ni 3 napon kezd dik 5 mg kg mal k t adagban prednison napi 15 mg fokozatosan cs kkentve azathioprin ad sa indokolt esetben ALG 50 mg kg ad sa egyszer kiz r lag indokolt esetben OKT3 5 mg kg I V 7 napig ha sz ks ges Ciklosporin ad sa kezdetben or lis adagol s az 5 napt l 4 mg kg mal a k v nt d v r szint fenntart s val prednison napi 15 mg fokozatosan cs kkentve azathioprin 2 2 5 mg kg s megszak t sa a v rlemezk k sz m nak cs kken s vel metil prednisolon 500 mg intraoperativ s 15 mg I V for 10 napig OKT3 5 mg kg 10 napig Nefrotoxicit s vagy ki
118. Valamennyi sszehasonl t s m s term kkel vagy metodik val referencia standardok haszn lat val v gezhet A k szlet kalibratorai bizony tottan helyettesithet ek p ciens mint kkal a k szlet reagenseinek s az in vitro diagnosztikai proced ra betart s val 4 3 Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep felhaszn l sra k sz reagens Monoklon lis eg r anti ciklosporin antitest s szam r anti eg r norm l eg r sz rum kever ke foszf t pufferes fiziol gi s s oldatban mely 0 08 Na azidot s tart s t kat tartalmaz Haszn lat el tt alaposan r zza fel 4 4 5 CYCLO Trac SP piros felhaszn l sra k sz reagens 1 125 tel jelzett ciklosporin sz rmaz k s h g t citr t EDTA puffer ben mely 0 05 Na azid ot hum n sz rumot s tart s t t tartalmaz Piros fest ket tartalmaz 4 5 CYCLO Trac SP Kontrollok szint 1 s szint 2 felhaszn l sra k sz reagens Hum n sz rumhoz adott meghat rozott mennyis g ciklosporin A t tartalmaz hogy koncentr ci ja a specifikus tartom nyba essen A Lot ra jellemz kontroll tartom ny az vegen van felt ntetve valamennyi k szletben 0 1 Na azid ot s egy b stabiliz tort tartalmaz 5 FIGYELMEZTET SEK S VINT ZKED S CSAK IN VITRO DIAGNOSZTIKAI HASZN LATRA Emberek llatok in v v kezel se tilos HUM N EREDET ANYAGOKAT TARTALMAZ REAGENSEK Potenci lis infektol giai forr sk nt kezelend ek Minden sz rum plazma donor egys g a U S FDA szab lyai
119. a Substanzen welche die Aktivitat von Zytochrom P 450 induzieren intensivieren den Leberstoffwechsel und senken die Cyclosporin Werte im Vollblut Zu den Medikamenten die nachweislich die Konzentrationen von Cyclosporin im Vollblut senken geh ren Rifampin Phenytoin Phenobarbital Trimethroprim mit Sulfa methoxazol intraven s verabreicht und Carbamazepin Die Uberwachung der Blutspiegelwerte von Cyclosporin und die entsprechende Anpassung der Dosierung ist unerlasslich wenn diese Medikamente zus tzlich verabreicht werden Es wurde festgestellt dass die Prednisolon Clearance bei Patienten die mit Cyclosporin behandelt wurden geringer ist und dass der Cyclosporin Spiegel im Vollblut entsprechend der Messung mittels RIA nach der Verabreichung von hoch dosiertem Methylprednisolon ansteigt 15 SPEZIELLE LEISTUNGSMERKMALE 15 1 Pr zision Abweichungen innerhalb eines Tests Werte ng mL Mittelwert Standardabw VK N NIEDRIG 46 4 9 10 7 25 MITTEL 186 6 0 3 2 25 HOCH 625 19 2 3 1 25 Abweichungen zwischen den einzelnen Tests auf Grundlage von Studien mit Vollblut proben in mehreren Klinikzentren Mittelwert Cyclosporin Standardabw VK N ng mL 91 15 0 16 5 5 Zentrum 1 203 27 9 13 7 5 543 53 7 9 9 5 71 6 7 9 5 5 Zentrum 2 173 12 9 7 58 5 466 41 5 8 9 5 78 5 4 6 8 5 Zentrum 3 195 18 4 9 4 5 500 50 2 10 0 5 87 6 9 7 9 5 Zentrum 4 200 13 5 6 8 5 505 42 5 8 4 5 78 3 6 4 6
120. adioactives avec la bouche 4 Ne pas manger ni boire dans les zones de travail radioactives 16 5 En cas de d versement de produits radioactifs dans une zone nettoyer la zone puis la laver l aide d une produit d tergent base d alcali ou d une solution de d contamination radioactive Tout article de verre utilis doit tre enti rement lav l eau avant de laver les autres articles de verre du laboratoire Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence sp cifique La r ception l utilisation le transfert et la mise au rebut de produits radioactifs sont sujets aux r glementations et conditions de votre licence sp cifique AVERTISSEMENT Ce produit contient un produit chimique connu dans l Etat de Californie comme tant canc rig ne ATTENTION La radioactivit imprim e sur la notice d utilisation peut tre l g rement diff rente de celle qui est imprim e sur l tiquette de la bo te et sur l tiquette du flacon du traceur Les tiquettes de la bo te et du flacon du traceur indiquent la dose r elle de radioactivit la date de calibrage alors que la notice d utilisation indique la radio activit th orique de la trousse 6 INDICATIONS D UNE DETERIORATION POSSIBLE DES R ACTIFS DE LA TROUSSE 6 1 Pr sence de particules dangereuses anormales dans l un des r actifs 6 2 cart de pente ou de position de la courbe d talonnage par rapport la nor
121. ag kil ttyen fel kell t r lni majd alk li detergenssel vagy radioaktivit st dekontamin l oldattal kell felmosni Az veged nyeket alaposan ki kell bl teni v zzel miel tt m s laborat riumi ed nnyel egy tt ker lne mos sra A radioakt v anyagok kezel s n l a k vetkez speci lis szab lyok rv nyesek A radioakt v anyagok kezel s nek haszn lat nak sz ll t s nak s hullad kkezel s nek szab lyoz sa saj t ir ny t s al esik FIGYELMEZTET S A k szlet olyan anyagokat tartalmaz amelyet a Kaliforniai llamban r kkelt nek min s tenek MEGJEGYZ S A csomagol s mell klet n felt ntetett radioaktivit s rt k n mileg elt r a dobozon s a tracer vegcse c mk j n felt ntetett radioaktivit s rt kekt l A dobozon s a traceres veg c mk j n felt ntetett rt k a kalibr ci idej n m rt aktu lis radioaktivit st mutatja m g a csomagol s mell kletek nt felt ntetett rt k a k szlet teoretikus radioaktivit s t adja meg A K SZLET ROML S T JELZ JELLEMZ K 6 1 Szokatlan partikulumok megjelen se b rmely reagensben 6 2 A kalibr ci s g rbe helyzet nek s meredeks g nek el r se a megszokott l 6 3 A maxim lis k t s cs kken se 6 4 Magas nem specifikus k t d s 6 5 Gyenge reproduk lhat s g a duplik tumok k z tt 96 7 MINTAV TEL S EL K SZ T S A CYCLO Trac SP teljes v rb l t rt n extrakci s elj r shoz 100 ul EDTA s telj
122. ais radioactivos deve ser limitado apenas a pessoal autorizado 3 N o pipete material radioactivo por via oral N o coma nem beba nas reas designadas para trabalho radioactivo 5 As reas onde possam ocorrer fugas devem ser limpas e em seguidas lavadas com detergente lcali ou solu o de descontamina o radiol gica Qualquer vidro usado deve ser enxaguado completamente em gua antes de lavar qualquer outro material de vidro do laborat rio gt 70 Para m dicos ou instituig es que recebem r dio is topos sob uma licenga especifica A recep o uso transfer ncia e elimina o de materiais radioactivos est o sujeitos aos regulamentos e condi es de sua licen a espec fica ADVERT NCIA Este produto cont m um elemento qu mico que provoca cancro segundo o Estado da Calif rnia ATEN O O s mbolo de radioactividade impresso na embalagem pode ser ligeiramente diferente do s mbolo impresso no r tulo da caixa e no r tulo do frasco do tra ador O r tulo da caixa e do frasco do tra ador indicam a quantidade real de radioactividade na data de calibragem enquanto a embalagem indica a radioactividade te rica no kit 6 INDICA ES DE POSS VEL DETERIORA O DOS REAGENTES DO KIT 6 1 A presen a de part culas anormais em qualquer um dos reagentes 6 2 Um deslocamento na inclina o ou na posi o da curva do calibrador em rela o que normalmente obtida 6 3 Uma diminui o na liga o m xima
123. an Anyag Koncentr ci Koleszterol 100 1000 mg dL Triglicerid 300 1000 mg dL Bilirubin 5 30 mg dL Azathioprine 50 200 ng mL Cimetidin 500 1000 ng mL Nifedipin 100 200 ng mL 6 metil prednisolon 20 60 ng mL OKT3 1500 ng mL A k vetkez list n tal lhat gy gyszereket 100 ug mL koncentr ci val vizsg lt l s nem tal ltak interfer ci s hat st az assay vel Acetaminophen Lidocaine N Acetylprocainamide Metoclopramide Cephalosporine Naficillin Chloramphenicol Penicillin Digoxin Propranolol Disopyramide Rifampin Ethosuximide Salicylic Acid Gentamycin Sulfate Tobramycin Kanamycin Verapamil DiaSorin CYCLO Trac SP Whole Blood Assay sszehasonlit sa HPLC vel Tanulm ny Transzplant ci Line ris egyenlet Regresszi s n t pusa koefficiens Farmakokinetika N A Y 0 9121X 47 r 0 9719 373 Pennsylvania l Vese Y 0 8022X 34 r 0 9585 82 Egyetem Sziv Y 0 9196X 50 r 0 9223 42 M j Y 0 9572X 48 r 0 9067 40 Albany Medical Center Vese Y 1 038X 27 r 0 9124 187 Western Ontario Vese Y 1 3074X 29 r 0 9703 73 Egyetem Sz v Y 1 4672X 16 r 0 9696 75 M j Y 1 3575X 12 r 0 9067 63 AZ itt k z tett adatok sz mos olyan laborat rium tanulm nyaib l sz rmaznak akik n ll an rv nyes tett HPLC metodik t haszn lnak Az adatok nem hasnl that ak ssze s minden m dszer sszehasonl t s csak alapos standardiz ci ut n lehets ges Irodalmak az utols
124. anderer Immunosuppressiva zusammen mit Cyclosporin zur ck zuf hren 9 50 51 Eine klinische Untersuchung mit dem CYCLO Trac SP Whole Blood Kit wurde in den Universit tskliniken von London Ontario und Albany New York an Patienten mit Herz Nieren und Lebertransplantationen durchgef hrt Bei diesen Untersuchungen wurde der tempor re Cyclosporin Talspiegel im Blut bei transplantierten Patienten gemessen Die Bluttalwerte wurden 4 bis 90 Tage nach der Transplantation bei Patienten mit Nierentransplantation n 10 Herztransplantation n 10 und Lebertransplantation n 10 in der Universit tsklinik von London Ontario kontrolliert Au erdem wurde eine hnliche Untersuchung an Patienten mit Nierentransplantation n 18 in der Universit tsklinik von Albany New York durchgef hrt In Albany wurde der Bluttalspiegel bei transplantierten Patienten nach der Transplantation 199 Tage lang untersucht 35 TABELLE II zeigt die durchschnittlichen Cyclosporin Blutwerte und signifikante Ereignisse AbstoRung oder Nephrotoxizit t bei transplantierten Patienten in der Universit tsklinik London Ontario In diesem Klinikzentrum wurden die Blutspiegelwerte der Patienten auf 400 bis 650 ng mL Cyclosporin je nach Transplantationsart und klinischem Zustand der Patienten eingestellt TABELLE Il Tempor re Cyclosporin Werte im Vollblut bei Patienten mit Nieren Herz und Lebertransplantationen bei Messung mit dem CYCLO Trac SP Whole Blood Ki
125. ansplantation av njure n 10 hj rta n 10 och lever n 10 Dessutom genomf rdes en liknande studie p njurtransplanterade patienter n 18 vid universitetssjukhuset i Albany New York I Albany observerades miniminiv erna i blod fr n transplantation till 199 dagar efter transplantation 88 TABELL II visar medelv rdet f r ciklosporinv rdena i blod och h ndelser av betydelse avst tning eller njurtoxicitet som iakttogs p transplantationspatienterna fr n univer sitetssjukhuset i London Ontario Vid detta center uppr tth lls en ciklosporinhalt i patienternas blod p 400 650 ng mL beroende p typ av transplantat och det kliniska tillst ndet f r patienterna TABELL II Ciklosporinv rden i helblod som funktion av tiden hos patienter som genomg tt njur hj rt eller levertransplantation enligt m tning med CYCLO Trac SP Whole Blood Kit ae Njure Hj rtaP Figado ne CyA ng mL CyA ng mL CyA ng mL operation N H nd d Med S D N H nd Med SD N Med SD 0 4 8 2 438 269 9 161 115 7 10 3 392 138 10 326 176 9 372 111 11 9 6 428 207 10 563 119 10 496 136 14 10 5 387 219 10 598 162 10 1 620 231 21 10 3 487 283 10 5 505 185 10 478 109 30 9 3 416 163 9 4 450 102 10 1 608 217 60 9 1 579 474 9 3 482 171 8 1 437 66 90 9 1 252 105 8 1 433 173 8 347 102 Totalt antal 24 13 3 h ndelser a Ciklosporin 3 75 mg kg till 5 mg kg i v som s snart som m jligt ndras til
126. arison with other products or procedures should be done with this reference standard The kit calibrators demonstrate commutability with patient samples when used with reagents and operating procedure of this in vitro diagnostic test as recommended 4 3 Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep ready to use reagent Monoclonal mouse anti cyclosporine antibody and donkey anti mouse normal mouse serum premix is diluted in phosphate buffered saline containing 0 08 sodium azide and a surfactant Shake vigorously immediately before use 4 4 18 CYCLO Trac SP red ready to use reagent A derivative of cyclosporine is labeled with lodine 125 and diluted in citrate EDTA buffer which contains 0 05 sodium azide human serum and a surfactant Red dye is added 4 5 CYCLO Trac SP Controls level 1 and level 2 ready to use reagent Human serum is spiked with the appropriate amount of cyclosporine A to obtain a concentration within a specified range Ranges for each lot are printed on the control vials included with each kit 0 1 sodium azide and other stabilizers are added 5 WARNINGS AND PRECAUTIONS FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE Not for internal or external use in humans or animals REAGENTS CONTAINING HUMAN SOURCE MATERIAL Treat as potentially infectious Each serum plasma donor unit used in the preparation of this product has been tested by a U S FDA approved method and found non reactive for the presence of HBsAg antibody to HCV and antibody to HIV 1 2
127. ated and Cadaveric Renal Transplantation Transplantation Proc 16 5 1911 4 1984 Atkinson K et al Transplantation Proc 15 2761 1983 Hows J M P M Chipping S Fairhead J Smith A Baughan and E C Gordon Smith Nephrotoxicity in Bone Marrow Transplant Recipients Treated with Cyclo sporin A Br J Haematol 54 1 69 78 1983 Kahan B D C A Wideman M Reid S Gibbons M Jarowenko S Flechner and C T Van Buren The Value of Serial Serum Trough Cyclosporine Levels in Human Renal Transplantation Transplantation Proc 16 5 1195 9 1984 Keown P A and et al In Transplantation and Clinical Immunology Excerpta Medica Vol 13 J L Toursine Ed pp 34 1981 Bowers L D and D M Canafax Cyclosporine Experience with Therapeutic Monitoring Therapeutic Drug Monitoring 6 2 142 7 1984 See also D J Freeman Am R Cell Phys Surg Can 17 301 1984 Giacherio D and T Annesley Cyclosporin Monitoring the Dosage of a New Immuno suppressant MediLab April May pp 20 25 1985 Kahan B D et al Transplantation Proc 15 446 1983 National Academy of Clinical Biochemistry American Association for Clinical Chemistry Task Force on Cyclosporine Monitoring Clinical Chemistry 33 7 1269 88 1987 Yatscoff R W D N Rush and J R Jeffery Effects of Sample Preparation on Con centrations of Cyclosporin A Measured in Plasma Cl
128. ately with plenty of water REAGENTS CONTAINING IODINE 125 This kit contains radioactive material which does not exceed 9 Ci 333 kBq of iodine 125 Appropriate precautions and good laboratory practices should be used in the storage handling and disposal of this material For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a general license This radioactive material may be received acquired possessed and used only by physicians veterinarians in the practice of veterinary medicine clinical laboratories or hospitals and only for in vitro clinical or laboratory tests not involving internal or external administration of the material or the radiation therefrom to human beings or animals Its receipt acquisition possession use and transfer are subject to the regulations and the general license of the U S Nuclear Regulatory Commission or of the state with which the Commission has entered into an agreement for the exercise of regulatory authority 1 Storage of radioactive material should be limited to a specifically designated area Access to radioactive materials must be limited to authorized personnel only Do not pipette radioactive material by mouth Do not eat or drink within designated radioactive work areas Areas where spills may occur should be wiped up then washed with an alkali detergent or radiological decontamination solution Any glassware used must be rinsed completely with water before washing with other laborato
129. aten 7 PROBENENTNAHME UND PROBENVORBEREITUNG F r die Vollblutextraktion von CYCLO Trac SP werden 100 mL EDTA Vollblut ben tigt HINWEIS Mit Heparin versetzte Proben d rfen nicht verwendet werden 27 ENTNAHME UND LAGERUNG DES VOLLBLUTS Das Vollblut durch Venenpunktion in einem evakuierten 5 oder 10 mL Glasr hrchen sammeln Als Antikoagulationsmittel wird EDTA 7 2 mg 5 mL Blut verwendet Zur Aufrechterhaltung der Probenreinheit werden keine weiteren Zus tze oder Konser vierungsmittel ben tigt Wird die Probe nicht sofort verwendet kann sie bei Temperaturen von 2 8 C maximal 7 Tage aufbewahrt werden Fur l ngere Lagerung bis 3 Monate die Proben bei mindestens 20 C einfrieren 29 Vollblutproben die bei 4 C gelagert oder nicht sofort verarbeitet wurden vor der Entnahme der Proben f r den Test mit dem CYCLO Trac SP Whole Blood Kit gr ndlich durchmischen 8 ZUSATZLICH BENOTIGTE GERATE UND MATERIALIEN 8 1 Einweg Borosilikatglasr hrchen 12 x 75 mm 8 2 Temperaturgesteuerte Zentrifuge f r R hrchen 12 x 75 mm 8 3 Gammaszintillationsz hler zur Z hlung von Jod 125 8 4 Sch ttelger t 8 5 Pipettierger te a Positive Verdr ngungspipetten 400 uL 100 uL und 50 b Multipipetten mit Einstellungen zur Abgabe von 1 0 mL und 100 8 6 Methanol HPLC geeignet 8 7 Verschlusskappen f r die Blutentnahmer hrchen Bestellnummer T1226 32 30 9 TESTVERFAHREN 9 1 Jeweils ein Glasr hrchen 12 x 75 mm f r Kal
130. atients These evaluations measured temporal trough cyclosporine blood levels in transplant patients Trough blood values were observed post transplant from 4 days to 90 days in kidney n 10 heart n 10 and liver n 10 transplant patients at the University Hospital London Ontario In addition a similar evaluation was conducted with kidney transplant patients n 18 at University Hospital Albany New York At Albany trough blood levels were observed from transplant to 199 days post transplant TABLE II shows the mean cyclosporine blood values and significant events rejection or nephrotoxicity observed in transplant patients from the University Hospital London Ontario At this center patients blood levels were maintained at 400 to 650 ng mL cyclosporine depending upon transplant type and clinical condition of the patients TABLE II Temporal cyclosporine whole blood values in kidney heart and liver transplant patients as measured by the CYCLO Trac SP Whole Blood Kit Post Kidney Heart Liver Operative CyA ng mL CyA ng mL CyA ng mL Day N Event Mean S D N Event Mean S D N Eventd Mean SD 0 DA 2 E 4 8 2 438 269 9 161 115 5 7 10 3 392 138 10 326 176 9 372 111 11 9 6 428 207 10 563 119 10 496 136 14 10 5 387 219 10 598 162 10 1 620 231 21 10 3 487 283 10 5 505 185 10 478 109 30 9 3 416 163 9 4 450 102 10 1 608 217 60 9 1 579 474 9 3 482 1 8 1 437 66 90 9 1 22 105 8 1
131. b Repeterande dispensorer kalibrerade f r 1 0 mL och 100 LL 8 6 Metanol HPLC kvalitet 8 7 Proppar till extraktionsr r Scientific Products nr T1226 32 84 9 TESTPROCEDUR 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 9 14 M rk ett 12 x 75 mm glasprovr r f r varje kalibreringsl sning kontroll och ok nt prov Pipettera 400 uL metanol HPLC kvalitet till varje r r med hj lp av en pipett med positive displacement S tt p parafilm p r ren om proverna nnu inte r klara att tills ttas Tills tt kalibreringsl sningar kontroller och blodprover till metanolen med hj lp av en 100 uL pipett med positive displacement OBS Sl pp ut proverna l ngsamt med pipettspetsen en liten bit under metanolytan Direkt n r ett prov tillsatts s tter du i en propp och vortexar i 15 sekunder Centrifugera r ren med propp vid 1600 x g och 20 25 C i 5 minuter Var noga s att inte metanolextrakten f r ngas innan de pipetteras till assayr ren G r i ordning m rkta 12 x 75 mm provr r enligt lathunden f r assayen p p rmens baksida L t reagensen anta rumstemperatur 20 25 C innan de anv nds i assayen Tills tt reagens enligt f ljande a R r f r total aktivitet 100 5 CYCLO Trac SP r d b R r f r ospecifik bindning NSB 50 uL extrakt fran 0 kalibreringsl sning 100 5 CYCLO Trac SP r d 1 0 mL valblandad CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep bla c CYCLO
132. ban a legt bb laborat rium sz m t g pes ki rt kel programot haszn l A DiaSorin spline vagy 4 param teres logisztikai 4PL g rbe illeszt programot haszn l MEGJEGYZ S NE HASZN LJON koncentr ci scale t X tengely vagy logit B Bo scale t Y tengely ADATOK TSZ MIT SA A DiaSorin QC laborat rium simitott spline g rbe illeszt st haszn l 99 TABL ZAT I DiaSorin CYCLO Trac SP teljes v r minta adatok K t si Duplik tum Atlag Korrig lt sz zal k Sz zal k Konc Cs CPM CPM CPM B T B Bo ng mL Tot l 51045 50892 be t ssz m 50738 NSB 1221 1328 2 6 1434 0 Kalibr tor 25323 25432 24104 50 0 25541 Kalibr torok ng mL A 20 22781 22806 21478 89 1 22830 B 61 19850 19624 18296 75 9 19397 C 154 14843 14911 13583 56 4 14978 D 379 9506 9570 8242 34 2 9633 E 1099 4893 4858 3530 14 6 4823 Ismeretlen mint k 1 16225 16122 14794 61 4 126 16019 2 9764 9570 8242 34 2 379 9375 Egy tipikus minta adatsor s kalibr ci s g rbe l that az I T BL ZATBAN s az 1 ABRAN ezek az rt kek csak p ld k ez rt ne haszn lja az eredm nyek kalkul ci j hoz 100 CYCLO Trac SP TELJES V R MINTA KALIBR CI S G RBE Bo 100 40 BRA 1 13 AZELJ R S KORL TAI 13 1 A mint kat nem szabad ism telten fagyasztani olvasztani 132 A kiv lasztott m r si id legyen elegend a statisztikai hib k kik sz b l s hez 13 3 Monoklon lis antitest
133. ben mescolato c Calibratore 0 CYCLO Trac SP 50 uL di calibratore O CYCLO Trac SP estratto 100 uL di 135 CYCLO Trac SP rosso d Calibratori CYCLO Trac SP A E 50 uL di calibratore CYCLO Trac estratto 100 uL di 25 CYCLO Trac SP rosso e Controllo e campioni non noti 50 uL di campione estratto 100 uL di 5 CYCLO Trac SP rosso Agitare energicamente il flacone di Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep aggiungere immediatamente 1 0 mL di reagente ben mescolato in tutte le provette eccetto le provette per il conteggio totale e NSB Agitare energicamente le provette nel Vortex e lasciare in incubazione per un ora a 20 25 C Centrifugare le provette a 1600 x g per 20 minuti a 20 25 C Far decantare immediatamente i liquidi superficiali da tutte le provette eccetto le provette per il conteggio totale capovolgendole per un tempo massimo di 2 minuti Asciugare le provette su carta assorbente per rimuovere eventuali gocce di liquido superficiale che possono essere rimaste sui bordi prima di riportare in posizione verticale Usando un contatore ad emissione di scintille gamma contare il precipitato di ogni provetta e delle provette per il conteggio totale per un tempo sufficiente a raggiungere la precisione statistica vedere la sezione Limiti della procedura In alternativa possibile estrarre 200 uL di campione con 800 uL di metanolo g 1118 x 10 raggio in cm rpm 59 10 COMMENTI ALLA PROCEDURA 10 1 Per ottenere la massima p
134. c SP Dia Rins2 Cora o F gado P s CyA ng mL CyA ng mL CyA ng mL operativo N Evento fMedia D S N Eventod Media DS N Evento Media D S 0 is os E pr as Da g 4 8 2 438 269 9 161 115 E 7 10 3 392 138 10 326 176 9 372 111 11 9 6 428 207 10 563 119 10 496 136 14 10 5 387 219 10 598 162 10 1 620 231 21 10 3 487 283 10 5 505 185 10 478 109 30 9 3 416 163 9 4 450 102 10 1 608 217 60 9 1 579 474 9 3 482 171 8 1 437 66 90 9 1 252 10 8 1 433 173 8 347 102 N gt a wo wo Totale eventi a Ciclosporina de 3 75 mg kg a 5 mg kg modificando para 12 mg kg em duas doses divididas logo que poss vel 2 5 mg kg de prednisona com redu o para 20 mg dia 1 2 mg kg de metilpredniso lona Nos casos de n o funcionamento dos rins a ciclosporina foi descontinuada sendo fornecidos 5mg kg de OKT3 durante 10 dias gt A administra o de ciclosporina teve in cio no 3 dia p s operativo com 5 mg kg em duas doses divididas 15 mg de prednisona por dia com redu o gradual adicionando azatioprina consoante o necess rio 50 mg kg de ALG administrado uma nica vez e reutilizado consoante o necess rio 5 mg kg de OKT3 por I V durante 7 dias consoante o necess rio A administra o da ciclosporina por inicialmente atrav s de dose oral teve in cio no dia 5 com uma quantidade de 4 mg kg tendo sido mantida no n vel sangu neo pretendido 15 mg de prednisona diariamente com dimi
135. cano e determinado como n o reactivo para a presen a de HBsAg anticorpo para HCV e anticorpo para HIV 1 2 Apesar destes m todos serem bastante precisos n o garantem que todas as unidades infectadas sejam detectadas Este produto tamb m pode conter outros materiais de origem humana para os quais n o h teste aprovado Como nenhum m todo de teste conhecido pode oferecer seguran a total em rela o aus ncia do v rus da hepatite B HBV do v rus da hepatite C HCV do v rus da imunodefici ncia VIH ou de outros agentes infecciosos todos los produtos que cont m materiais de origem humana devem ser manuseados de acordo com boas pr ticas laboratoriais usando as precau es adequadas tal como descrito no Manual dos Centros Americanos para Controlo e Preven o de Doen as e Institutos Nacionais de Sa de Bioseguran a em Laborat rios Microbiol gicos e Biom dicos Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 edi o Maio 1999 ou edi o actual REAGENTES COM AZIDA DE S DIO CUIDADO Alguns reagentes neste kit cont m azida de s dio A azida de s dio pode reagir com chumbo ou cobre para formar azidas de metal altamente explosivo Ao eliminar lave com grande quantidade de gua para impedir a forma o de azida Para mais informa es consulte Descontamina o de drenos de pias de laborat rios para remover sais de azidas no Manual Guia Gest o de Seguran a N CDC 22 emitido pelos Centro
136. correspond celle du traceur Les r actifs de lots diff rents ne doivent pas tre m lang s 4 1 ImmunoSep CYCLO Trac SP NSB bleu r actif pr t l emploi Le pr m lange de s rum anti souris de singe s rum de souris normal est dilu dans une solution saline de tampon phosphat contenant 0 08 de nitrure de sodium et un surfactant Un colorant bleu est ajout Agiter vigoureusement juste avant l usage 4 2 Etalons CYCLO Trac SP 0 6 r actif pr t l emploi Le s rum exempt de cyclosporine contient 0 1 de nitrure de sodium et un surfactant Six talons de cyclosporine une concentration nominale allant de O 1200 ng mL sont pr dilu s dans du s rum humain contenant 0 1 de nitrure de sodium et un surfactant Les valeurs exactes de concentration sont assign es selon chaque lot et figurent sur les tiquettes des tubes L talon DiaSorin CYCLO Trac SP a t calibr selon le standard de r f rence USP Cyclosporine Toute comparaison avec d autres produits ou proc dures de dosage doit tre effectu e selon ce standard de r f rence Les talons de la trousse d montrent leur commutabilit avec les chantillons patient lorsqu ils sont utilis s avec des r actifs et selon le mode d emploi de ce dosage diagnostique in vitro comme recommand 4 3 ImmunoSep Anti CYCLO Trac SP r actif pr t l emploi Le pr m lange d anticorps monoclonal de souris anti cyclosporine et le s rum anti souris de singe s
137. d gage des gaz tr s toxiques S28 Apr s un contact avec la peau laver imm diatement grande eau R ACTIFS CONTENANT DE L IODE 125 Cette trousse contient un produit radioactif qui ne d passe pas 9 uCi 333kBq d iode 125 Les pr cautions appropri es et les bonnes pratiques de laboratoire doivent tre utilis es pour la conservation la manipulation et la mise au rebut de ce produit Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence g n rale Ce produit radioactif peut tre re u r ceptionn d tenu et utilis uniquement par des m decins des laboratoires cliniques des h pitaux des v t rinaires et des centres de recherche dans le cadre de la pratique de m decine v t rinaire de laboratoires cliniques ou des h pitaux et uniquement pour des analyses cliniques ou de laboratoire in vitro n impliquant pas l administration interne ou externe du produit ni par rayonnement l homme ou l animal Sa r ception son acquisition sa d tention son utilisation et son transfert sont sujets aux r glementations et la licence g n rale de l U S Nuclear Regulatory Commission de l tat avec lequel la Commission a conclu un accord pour l exercice de l autorit r glementaire 1 Le produit radioactif doit tre conserv un endroit d sign 2 L acc s aux produits radioactifs doit tre limit au personnel autoris uniquement 3 Ne pas pipeter des solutions r
138. d ciklosporinmetaboliter f r CYCLO Trac SP Whole Blood Assay Korsreaktiviteten definieras som Ciklosporinkoncentration vid 50 B Bo 100 x Metabolitkoncentration vid 50 B Bo Ciklosporinmetabolit korsreaktivitet 1 1 7 8 lt 0 1 13 0 1 17 0 7 18 0 2 21 0 8 92 15 5 Interferens F ljande mnen tillsattes till portioner av en helblodspool som inneh ll ciklosporin 160 250 ng mL Ingen av dessa substanser uppvisade n gon interferens med ciklosporinbest mningen n r de f rekom i nedan angivna koncentrationer mne Koncentration Kolesterol 100 1000 mg dL Triglycerider 300 1000 mg dL Bilirubin 5 30 mg dL Azatioprin 50 200 ng mL Cimetidin 500 1000 ng mL Nifedipin 100 200 ng mL 6 metylprednisolon 20 60 ng mL OKT3 1500 ng mL De samtidigt administrerade l kemedlen i nedanst ende lista har testats i halter upp till 100 ug mL och ej visat n gon interferens med assayen Acetaminofen Lidokain N acetylprokainamid Metoklopramid Cefalosporin Naficillin Kloramfenikol Penicillin Digoxin Propranolol Disopyramid Rifampin Etosuximid Salicylsyra Gentamycinsulfat Tobramycin Kanamycin Verapamil J mf relse mellan DiaSorin CYCLO Trac SP Whole Blood Assay och HPLC 2 ini Regressions Farmakokinetisk Ej till mpligt Y 0 9121X 47 r 0 9719 Y 0 8022X 34 Universidade da Y 0 9196X 50 Pensilv nia Y 0 9572X 48 Centro M dico de Albany Njure 1 038X 27 r 0 9124 187 Y 1 3074X 29 University of Y 1
139. das prednisona 15 mg al d a reduciendo de forma gradual tambi n azatioprina seg n las indicaciones ALG 50 mg kg suministrado una vez y continuado solo seg n las indicaciones OKT3 5 mg kg I V durante 7 seg n las indicaciones Ciclosporina suministrada V al comienzo con dosis oral comenzando el quinto d a a 4 mg kg y mantenida en el nivel de sangre deseado prednisona 15 mg diarios disminuyendo de forma gradual azatioprina 2 2 5 mg kg e interrumpida cuando las plaquetas comienzan a disminuir metilprednisolona 500 mg de forma intraoperativa y 15 mg durante 10 dias OKT3 5 mg kg durante 10 dias Nefrotoxicidad o rechazo 50 La TABLA Ill muestra los valores medios de ciclosporina en sangre y los correspondientes niveles de creatinina en 18 pacientes de transplante de ri n en el Hospital Universitario de Albany Nueva York 2 En Albany los pacientes se mantuvieron a un nivel de ciclosporina entre 100 y 300 ng mL TABLA III Valores temporales de ciclosporina en sangre completa en 18 pacientes de transplante de ri n medidos mediante el equipo de sangre completa CYCLO Trac SP D a Ciclosporina Niveles de creatinina tras ng mL mg dL Semana operaci n N Media SD N Media SD M N MAX 1 0 7 12 151 128 143 49 4 0 0 7 18 0 2 8 14 16 185 96 125 2 7 2 2 1 1 8 2 3 15 21 19 173 94 94 2 7 1 9 1 1 9 4 4 22 28 17 198 146 76 3 0 1 9 1 1 8 5 5 29 35 22 210 168 70 2 9 1 7 1 2 8 2 6 36 42 17 164 63 68 2 5 1 1 1 1 5 6
140. de contr le dans chaque dosage pour garantir la validit de leurs r sultats Si vous utilisez des contr les non dos s et que vous n avez pas tabli de moyenne ni de d viation standard il vous faudra d terminer une moyenne et une d viation standard pour chaque contr le l aide de dix dosages au moins Une gamme de valeurs acceptable peut donc tre obtenue pour ces contr les en utilisant l cart type 2 par rapport aux valeurs pr c demment calcul es Le DiaSorin Quality Control Laboratory a d termin un intervalle pour les contr les fournis dans cette trousse Ces intervalles sont imprim s sur les tubes de contr le Il est d conseill d interchanger les r actifs de la trousse l exception du traceur 35 CYCLO Trac SP Pour qu un laboratoire puisse surveiller enti rement la constance des performances d un dosage RIA certains facteurs suppl mentaires doivent tre v rifi s DiaSorin sugg re un contr le r gulier des param tres suivants pour garantir la pr cision constante de la trousse a Activit totale b Liaison maximale Coups par minute CPM du tube de calibrateur O Moyenne des CPM des tubes de num ration totale c Liaison non sp cifique CPM du tube NSB Moyenne des CPM des tubes de num ration totale d Pente de la courbe d talonnage Surveiller par exemple les points 80 50 et 20 de la ligne de l talon pour la reproductibilit d un dosage l autre 12 CALCUL DES R SULTATS Il existe de
141. e 200 d chantillon l aide de 800 uL de m thanol g 1118x 10 rayon en cm rpm 18 10 COMMENTAIRES SUR LA PROC DURE 10 1 Pour obtenir la plus grande exactitude et la meilleure pr cision suivez scrupuleusement les tapes d extraction du m thanol utilisez des macro pipettes volume variable SMI pour dispenser le m thanol et les chantillons Utilisez galement les macropipettes volume variable pour transf rer 50 uL d extrait de m thanol dans chaque tube essai 10 2 Ajoutez chaque part de r actif dans le tiers inf rieur du tube essai de mani re assurer le m lange complet des r actifs 10 3 Les tubes jetables de certains fabricants pourraient provoquer des liaisons non sp cifiques lev es ou faire trop glisser les pastilles 10 4 Agitez vigoureusement les r actifs ImmunoSep avant l emploi 10 5 Si un chantillon d terminer est sup rieur l talon le plus lev il doit tre extrait une nouvelle fois en utilisant une proportion de sang et de m thanol sup rieure 1 4 1 9 ou 1 19 sont recommand s Multipliez les r sultats du dosage par le facteur de correction appropri 10 6 Siles tubes be peuvent pas tre d cant s dans les 5 minutes qui suivent la fin de la centrifugation il est recommand de les centrifuger nouveau 10 7 Effectuez le dosage d s la fin de l extraction 11 CONTR LE QUALIT Chaque laboratoire doit inclure au moins deux chantillons
142. e cruzada m dia dos metab litos de ciclosporina no ensaio de Sangue Total CYCLO Trac SP A reactividade cruzada definida como Concentra o de ciclosporina a 50 B Bo 100 x Concentra o de metabolitos a 50 B Bo Metab litos da Ciclosporina Reactividade cruzada 1 1 7 8 lt 0 1 13 0 1 17 0 7 18 0 2 21 0 8 79 15 5 Interfer ncia As subst ncias seguintes foram enriquecidas em al quotas de conjuntos de sangue total com ciclosporina 160 250 ng mL Nenhuma dessas subst ncias interferiu na medi o da ciclosporina quando presentes nas concentra es listadas a seguir Subst ncia Concentra o Colesterol 100 1000 mg dL Triglic ridos 300 1000 mg dL Bilirrubina 5 30 mg dL Azatioprina 50 200 ng mL Cimetidina 500 1000 ng mL Nifedipina 100 200 ng mL 6 metil prednisolona 20 60 ng mL OKT3 1500 ng mL A lista seguinte de f rmacos coadministrados foi testada at n veis de 100 ug mL e considerada como n o sendo interferente com o ensaio Acetaminofeno Lidocaina N Acetilprocainamida Metoclopramida Cefalosporina Naficilina Cloramfenicol Penicilina Digoxina Propranolol Disopiramida Rifampina Etosuximida Acido Salic lico Sulfato de gentamicina Tobramicina Canamicina Verapamil Compara o do Ensaio de Sangue Total CYCLO Trac SP DiaSorin com a HPLC Tipo de E o da linh Coeficiente N D Y 0 9121X 47 r 0 9719 373 Rins Y 0 8022X 34 r 0 9585 82 Universidade da Cora o Y 0 9196X 50 r 0 9223 42
143. e dosage Ac taminoph ne Lidoca ne N Ac tylproca namide M toclopramide C phalosporine Naficilline Chloramph nicol P nicilline Digoxine Propranolol Disopyramide Rifampine Ethosuximide Acide salycilique Sulfate de gentamycine Tobramycine Kanamycin Verapamil Comparaison entre le dosage DiaSorin CYCLO Trac SP sang total et la m thode CLHP Type de Coefficient de Etude transplantation Equation de ligne r gression n Pharmacocin tique N A Y 0 9121X 47 r 0 9719 373 Universit de Rein Y 0 8022X 34 r 0 9585 82 ae ci Coeur Y 0 9196X 50 r 0 9223 42 y Foie Y 0 9572X 48 r 0 9067 40 Centre m dical E 2 d Albany Rein Y 1 038X 27 r 0 9124 187 Universit de Rein Y 1 3074X 29 r 0 9703 73 Western Ontario Coeur Y 1 4672X 16 r 0 9696 75 Foie Y 1 3575X 12 r 0 9067 63 Les donn es de corr lation propos es repr sentent les r sultats des tudes conduites dans des laboratoires utilisant des proc dures CLPH valid es de mani re ind pendante Aucune comparaison ne doit tre faite entre ces donn es Une comparaison entre les m thodes ne doit tre appliqu e qu apr s tablissement d une standardisation m ticuleuse des m thodes VOIR LA DERNI RE PAGE POUR R F RENCE 26 CYCLO TRAC SP WHOLE BLOOD 125 RIA KIT 1 VERWENDUNGSZWECK NUR ZUR IN VITRO DIAGNOSTIK Der CYCLO Trac SP Whole Blood Radioimmunoassay RIA Kit ist f r die quantitativen
144. e prima dell uso 4 4 15 CYCLO Trac SP rosso reagente pronto all uso Un derivato della ciclosporina etichettato con iodio 125 e diluito in un tampone citrato EDTA che contiene 0 05 sodio azide siero umano e una sostanza surfactante stato aggiunto colorante rosso 4 5 Controlli CYCLO Trac SP livello 1 e livello 2 reagente pronto all uso Nel siero umano aggiunta una quantita necessaria di ciclosporina A in modo da ottenere una concentrazione nei range specificati range per ogni lotto sono stampati sulle fiale dei controlli inclusi in ogni kit Vengono aggiunti 0 1 sodio azide ed altri stabilizzanti 56 5 AVVERTENZE E PRECAUZIONI PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Non per uso interno o esterno su animali o persone REAGENTI CONTENENTI MATERIALE DI PROVENIENZA UMANA Trattare come potenzialmente infettivi Ogni unit di siero plasma da donatore usata nella preparazione di questo prodotto amp stata testata con una metodica approvata dalla FDA statunitense e trovata non reattiva per la presenza di HBsAg anticorpi ad HCV ed anticorpi ad HIV 1 2 Anche se questi metodi sono estremamente accurati non garantita la localizzazione di tutte le unit infette Questo prodotto pu inoltre contenere altro materiale di provenienza umana per il quale non esiste un test approvato Poich nessuna metodologia di test approvata pu offrire garanzia completa sull assenza del virus dell epatite B HBV dell epatite C HCV del vir
145. e y los hechos significativos rechazo o nefrotoxicidad observados en pacientes de transplantes en el Hospital Universitario de Londres Ontario En este centro los niveles de sangre de los pacientes se mantuvieron con 400 a 650 ng mL de ciclosporina en funci n del tipo de transplante y las condiciones cl nicas de los pacientes TABLA II Valores temporales de ciclosporina en sangre completa en pacientes con transplantes de ri n coraz n e higado medido con el equipo de sangre completa CYCLO Trac SP Dia Ri n Coraz n Higado f s M Ci ng mL M Ci ng mL M Ci ng mL operaci n N Incid Media S D N Incid Media S D N Incid Media S D 0 a amp amp Es e 5 4 8 2 438 269 9 161 115 2 4 7 10 3 392 138 10 326 176 9 E 372 111 11 9 6 428 207 10 563 119 10 2 496 136 14 10 5 387 219 10 598 162 10 1 620 231 21 10 3 487 283 10 5 505 185 10 E 478 109 30 9 3 416 163 9 4 450 102 10 1 608 217 60 9 1 579 474 3 42 171 8 1 437 66 90 9 1 252 105 8 1 433 173 8 347 102 Total de 24 13 3 incidencias a Ciclosporina 3 75 mg kg a 5 mg kg tendiendo a 12 mg kg en dos dosis separadas tan pronto como sea posible prednisona 2 5 mg kg reduciendo hasta 20 mg d a metilpredniso lona 1 2 mg kg Si no hab a funci n del ri n se interrumpi la ciclosporina y se suministr OKT3 5 mg kg durante 10 d as Se comenz con la ciclosporina el tercer d a tras la operaci n 5 mg kg en dos dosis separa
146. eagenz bei 2 8 C nicht l nger als bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum lagern Die Reagenzien d rfen nach dem Verfallsdatum nicht verwendet werden Das Verfalisdatum des Kits ist auf dem uReren Etikett angebracht und entspricht dem Verfallsdatum des Tracers Reagenzien aus verschiedenen Chargen d rfen nicht vermischt werden 4 1 CYCLO Trac SP NSB ImmunosSep blau gebrauchsfertiges Reagenz Das Esel Anti Maus Serum normale Mausserum ist vorgemischt und wird mit einer phosphatgepufferten Kochsalzl sung mit 0 08 Natriumazid und einem Netzmittel verd nnt Es wird blauer Farbstoff zugesetzt Unmittelbar vor Verwendung kr ftig sch tteln 4 2 CYCLO Trac SP Kalibratoren 0 6 gebrauchsfertiges Reagenz Cyclosporin freies Serum enthalt 0 01 Natriumazid und ein Netzmittel Die 6 Cyclo sporin Kalibratoren mit Nennkonzentrationen zwischen 0 und 1200 ng mL werden in humanem Serum mit 0 1 Natriumazid und einem Netzmittel vorverd nnt Exakte Konzentrationswerte sind auf den Etiketten und jeder Charge angegeben Der DiaSorin CYCLO Trac SP Kalibrator wurde gem dem USP Cyclosporin Referenzstandard kalibriert Ein Vergleich mit anderen Produkten oder Verfahren sollte auf der Grundlage dieses Referenzstandards erfolgen Die Kalibratoren des Kits sind mit Patientenproben austauschbar wenn sie mit Reagenzien verwendet werden und dieser diagnostische In vitro Test wie empfohlen durchgef hrt wird 4 3 Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep g
147. ebrauchsfertiges Reagenz Die Mischung aus monoklonalem Maus Anti Cyclosporin Antik rper und Anti Maus bzw normalem Mausserum wird mit einer phosphatgepufferten Kochsalzl sung mit 0 08 Natriumazid und einem Netzmittel vorverd nnt Unmittelbar vor Verwendung kr ftig sch tteln 4 4 18 CYCLO Trac SP rot gebrauchsfertiges Reagenz Ein Derivantium des Cyclosporins wird mit Jod 125 markiert und in Zitrat EDTA Puffer mit 0 05 Natriumazid humanem Serum und einem Netzmittel verd nnt Es wird roter Farbstoff zugesetzt 4 5 CYCLO Trac SP Kontrollen Spiegel 1 und Spiegel 2 gebrauchsfertiges Reagenz Das Humanserum wird mit der entsprechenden Menge Cyclosporin A versetzt um eine Konzentration im vorgeschriebenen Bereich zu erhalten Die Bereiche f r jede Charge sind auf den Kontrollflaschchen in jedem Kit aufgedruckt Es werden 0 1 Natriumazid und andere Stabilisatoren zugesetzt 28 5 WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN NUR ZUR IN VITRO DIAGNOSTIK Nicht f r internen oder externen Gebrauch bei Menschen oder Tieren REAGENZIEN MIT MATERIAL HUMANEN URSPRUNGS Dieses Produkt ist als potenziell infekti s zu behandeln Alle in der Herstellung dieses Produktes verwendeten Serum bzw Plasma spendeeinheiten wurden nach einer von der FDA der USA genehmigten Methode getestet und f r nicht reaktiv auf das Hepatitis B Oberflachenantigen HBsAg Hepatitis C Antik rper HCV und Antik rper f r HIV 1 2 befunden Obwohl diese Methode u e
148. ecant the supernatant from all the tubes except the total count tubes by inverting them for a maximum time of 2 minutes Blot the tubes on absorbent paper to remove any drops of supernatant that may be remaining on the rims before turning tubes upright Using a gamma scintillation counter count the precipitate of each tube and the total count tubes for a sufficient time to achieve statistical accuracy see Limitations of Procedure section 10 PROCEDURAL COMMENTS 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 In order to obtain maximum accuracy and precision the methanol extraction steps must be carefully followed positive displacement pipettes SMI must be used to dispense both the methanol and the samples Positive displacement pipettes are also required for transferring 50 uL of methanol extract to each assay tube Add each aliquot of reagent to the lower third of assay tube to ensure complete mixture of reagents Some manufacturers disposable tubes may yield elevated nonspecific bindings or cause increased pellet slippage ImmunoSep reagents must be vigorously mixed immediately before use If a sample reads greater than the highest calibrator re extract the sample using a blood methanol ratio greater than 1 4 1 9 or 1 19 are recommended Multiply the assay results by the appropriate correction factor If the tubes cannot be decanted within 5 minutes after the centrifuge has stopped it is recommended to re centrifuge the
149. ednisone 15 mg par jour en augmentation progressive avec ajout d azathioprine comme indiqu ALG 50 mg kg administr e une fois et poursuivie selon les indications OKT3 5 mg kg pendant 7 jours comme indiqu Cyclosporine administr e d abord par dose orale partir du cinqui me jour a une dose de 4 mg kg et maintenue au niveau de sang voulu prednisone 15 mg par jour en diminution progressive azathioprine 2 2 5 mg kg et interrompue lorsque les plaquettes ont commenc baisser m thylprednisolone 500 mg en intraop ratoire et 15 mg pendant 10 jours OKT3 5 mg kg pendant 10 jours N phrotoxicit ou rejet 22 Le TABLEAU III montre la moyenne des valeurs de cyclosporine dans le sang et le taux de cr atinine correspondant chez 18 patients ayant subi une transplantation de rein l h pital universitaire d Albany dans l tat de New York A Albany les patients taient maintenus a 100 et 300 ng mL de chute du taux de cyclosporine TABLEAU III Valeurs temporaires de cyclosporine dans le sang total chez 18 patients ayant subi une transplantation de rein mesur par la trousse CYCLO Trac SP sang total Post Cyclosporine Taux de cr atinine Op ratoire ng mL mg dL Semaine Jour N Moyenne S D N Moyenne S D MIN MAX 1 0 7 12 151 128 143 49 4 0 0 7 18 0 2 8 14 16 185 96 125 2 7 2 2 1 1 8 2 3 15 21 19 173 94 94 2 7 1 9 1 1 9 4 4 22 28 17 198 146 76 3 0 1 9 1 1 8 5 5 29 35 22 210 168 70 2 9 1 7 1 2 8 2 6 36
150. ek mint az OKT3 nem okoz interferenci t az assay ben 14 V RT RT KEK A vese sz v s m j transzplant ltak ter pi s ciklosporin szintje v rben nem meghat rozott Ez r szben a v ltoz transzplant lt kezel si protokollnak k sz nhet a metodika alkalmas a ciklosporin s a vele egy tt adott egy b immunszupressz v gy gyszerek m r s re 9 30 31 A klinikai rt kel sben a londoni ontarioi albany i s a new york i Egyetemi K rh z CYCLO Trac SP Whole Blood k szletet haszn lt vese sz v s m j transzplant lt betegekn l Ezek a vizsg latok a ciklosporin transzplant lt betegek v r ben m rhet rt k t vizsg lt k az id f ggv ny ben Transzplant ci t k vet en a v rszint 4 90 napig ker lt vizsg latra vese n 10 sz v n 10 s m j n 10 transzplant lt betegekben a londoni s az ontarioi Egyetemi K rh zban Tov bbi vese transzplant ltak vizsg lat ra ker lt sor n 18 az albany i new york i Egyetemi K rh zban a transzplant ci t l a transzplant ci t k vet 199 napig T BL ZAT II mutatja az tlag ciklosporin v r koncentr ci t s a szignifik ns v ltoz sokat ki r l s vagy nefrotoxicit s a londoni ontarioi Egyetemi K rh z eredm nyei alapj n Ebben a k zpontban 400 650 ng mL ciklosporin k pek f ggv ny ben 101 T BL ZAT II A ciklosporin id beni v ltoz sa teljes v rben vese sziv s m j transzplant lt betegekben CYCLO
151. ent contenir d autres produits d origine humaine pour lesquelles il n existe aucun test agr Comme aucune m thode de test connue ne peut offrir l assurance compl te de l absence du virus de l h patite B HBV de l h patite C HCV du virus de l immunod ficience humaine VIH ou d autres agents infectieux tous les produits d origine humaine doivent tre manipul s conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire en prenant les pr cautions appropri es d crites dans le document U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 mai 1999 ou derni re dition REACTIFS CONTENANT DU NITRURE DE SODIUM ATTENTION Certains r actifs de cette trousse contiennent du nitrure de sodium Le nitrure de sodium peut r agir avec la plomberie en plomb ou en cuivre et former des azotures ultra explosifs Pour leur mise au rebut rincer a grande eau pour emp cher l accumulation de nitrure Pour plus d informations consulter Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts dans le manuel Guide Safety Management No CDC 22 publi par les Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA D claration des risques relatifs aux substances dangereuses des communaut s europ ennes Directive du conseil 1999 45 EC R 20 21 22 Nocif en cas d inhalation d ingestion et de contact avec la peau R 32 Un contact avec les acides
152. erados en estos ensayos eran siempre superiores a los generados mediante HPLC Los ensayos RIA de segunda generaci n se basan en tecnologia de anticuerpos monoclonales Se han desarrollado anticuerpos mono clonales espec ficos y no espec ficos El anticuerpo espec fico mide nicamente el precursor de la ciclosporina y genera valores similares a los obtenidos mediante HPLC El anticuerpo no espec fico mide el precursor y los metabolitos y genera resultados similares a los de los ensayos RIA de primera generaci n 3 PRINCIPIO DEL ENSAYO El ensayo RIA CYCLO Trac SP para sangre completa de DiaSorin utiliza anticuerpo monoclonal espec fico que mide solo ciclosporina y no parece tener reactividad cruzada significativa con sus metabolitos Antes del ensayo es preciso realizar una extracci n con metanol para los calibradores los controles y las muestras El ensayo propiamente dicho consiste en un solo paso de incubaci n y utiliza una t cnica de separaci n de fase de doble anticuerpo Para simplificar el procedimiento el primer anticuerpo monoclonal de rat n espec fico para Ciclosporina A y el segundo de burro antirrat n se mezclan previamente con un portador suero normal de rat n para producir un solo reactivo denominado Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep 41 Para determinar los niveles de ciclosporina con este equipo las muestras de sangre completa los calibradores y los controles se extraen previamente con metanol A continuac
153. erh lt man durch grafische Darstellung von B Bo und der logarithmischen Konzentration 12 1 Den CPM Durchschnittswert f r jeden Kalibrator jede Kontrolle und jede Patientenprobe berechnen 12 2 Den CPM Durchschnittswert der NSB R hrchen von allen Z hlvorg ngen subtrahieren um den korrigierten CPM Wert zu erhalten 12 3 Den korrigierten CPM Wert f r jeden Kalibrator jede Kontrolle oder jede Patientenprobe durch den korrigierten CPM Wert des Nullkalibrators dividieren CPM des Kalibrators oder der Patientenprobe CPT der NSB B Bo x 100 CPM des Nullkalibrators CPM der NSB 12 4 Auf halblogarithmischem Millimeterpapier B Bo der Kalibratoren y Achse und die entsprechenden Konzentrationen x Achse darstellen 12 5 Durch die Punkte eine Ausgleichsgerade ziehen 12 6 Die Cyclosporin Konzentrationen der Patientenproben von der Kalibratorkurve interpolieren In der Praxis verwenden die meisten Labors ein rechnergest tztes Datenreduktions system DiaSorin empfiehlt ein Programm zur Anpassung der 4 Parameter Logistikkurve 4PL oder der Spline Kurve HINWEIS KEINESFALLS eine lineare Skala f r die Konzentration x Achse und oder eine logarithmische Skala f r B Bo s y Achse verwenden 33 DATEN NACH DER DATENREDUKTION Das Qualit tskontrolllabor von DiaSorin verwendet eine gegl ttete Spline Kurvenanpassung TABELLE I DiaSorin CYCLO Trac SP Whole Blood Probendaten Doppelter Durchschn Korrigierter
154. errores estad sticos 13 3 Los anticuerpos monoclonales como el OKT3 se han evaluado y han demo strado no interferir en el ensayo 14 VALORES PREVISTOS Los niveles de sangre terap uticos para ciclosporina en pacientes sometidos a transplante de ri n coraz n e h gado no est n bien establecidos En parte esto es debido a los diversos protocolos de tratamiento practicados para transplantes los m todos disponibles para la medici n de ciclosporina y la administraci n concomitante de otros medicamentos inmunosupresores con ciclosporina 30 31 En los Hospitales Universitarios de Londres Ontario y Albany Nueva York se realiz una evaluaci n cl nica utilizando el equipo de sangre completa CYCLO Trac SP en pacientes con transplantes de ri n coraz n e h gado Estas evaluaciones midieron los niveles de ca da temporal de ciclosporina en sangre en pacientes con transplantes Los valores de ca da de sangre se observaron tras el transplante desde 4 d as hasta 90 d as en pacientes con transplantes de ri n n 10 coraz n n 10 e h gado n 10 en el Hospital Universitario de Londres Ontario Asimismo se realiz una evaluaci n similar con pacientes de transplantes de ri n n 18 en el Hospital Universitario en Albany Nueva York En Albany los niveles de ca da de sangre se observaron desde el transplante hasta 199 d as tras la operaci n 49 La TABLA II muestra los valores medios de ciclosporina en sangr
155. es v r sz ks ges MEGJEGYZ S Heparinos minta nem haszn lhat 12 27 A TELJES V R GY JT SE S T ROL SA A v rt 5 vagy 10 mL es vacutainer veg cs be kell venni Antikoagul nsk nt EDTA 7 2 mg 5 mL v r alkalmazhat A minta ps g nek meg rz se miatt ne haszn ljon adal k vagy tart s t anyagot Amennyiben a mint kat nem haszn lja fel azonnal t rolja 2 8 C on vagy az alatt 7 napig Hosszabb ideig t rt n t rol shoz 3 h napig fagyassza a mint kat 20 C ra vagy az al 28 29 A 4 C on t rolt teljes v rt vagy nem azonnal feldolgoz sra ker l v rt alaposan fel keverni miel tt a CYCLO Trac SP whole blood k szlettel feldolgozn nk 8 MEGHAT ROZ SHOZ SZ KS GES EGY B ANYAGOK 8 1 Rendelkez sre ll b rszilik t vegek 12 x 75 mm 8 2 12 x 75 mm cs h z haszn lhat szab lyozhat h m rs klet centrifuga 8 3 1 125 m r s re alkalmas gammasz ml l 8 4 Vortex 8 5 Pipettak a 400 uL 100 uL s 50 uL bem r s re alkalmas pipett k b 1 0 mL re illetve 100 uL re kalibr lt ism tl adagol 8 6 Metanol HPLC min s g 8 7 Cap ok extrakci s cs vek sz m ra Tudom nyos Term kek No T1226 32 9 ASSAY MENETE 9 1 Cimk zzen fel egy 12 x 75mm es veg cs vet mindegyik kalibr tornak kontrollnak s az ismeretlen mint knak 9 2 M rjen 400 uL metanolt HPLC min s g mindegyik cs be megfelel pipett t haszn lva Fedje le a cs veket parafilmmel ha a m
156. fel er teljesen az Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep tartalm t m rjen be azonnal 1 0 mL t a j l felkevert reagensb l valamennyi cs be kiv ve a total s NSB cs veket 9 11 Vortexelje a cs veket alaposan s inkub lja 1 r n kereszt l 20 25 C on 9 12 Centrifugalja a cs veket 1600 x g on 20 25 C on 20 percig 9 13 T vol tsa el a fel l sz t valamennyi cs b l kiv ve a tot lt maximum 2 perc leforditassal ltassa le a fel l sz cseppeket a cs sz j r l itat spapirral miel tt felforditan azokat 9 14 Haszn ljon gamma sz ml l t s m rje valamennyi cs ben l v precipit tumot s a tot l cs vet elegend ideig a statisztikai pontoss g el r s hez lsd Az elj r s korl tai 10 M DSZER KOMMENT R 10 1 Szab lyosan a maxim lis pontoss g s prec zi el r s hez a metanol extrakci s l p st figyelmesen kell v grehajtani kalibr lt pipetta sz ks ge mind a minta mind a metanol bem r s hez Ilyen pipetta sz ks ges az 50 uL metanol extraktum cs vekbe t rt n bem r s hez is 10 2 M rje valamennyi reagens aligot ot a cs als harmad ba a mint k megfelel kevered s nek el seg t s hez 10 3 N h ny gy rt egyszerhaszn latos cs veket biztos t a nem specifikus k t sek elker l s re 10 4 Az ImmunoSep reagenseket k zvetlen l haszn lat el tt alaposan ssze kell keverni 10 5 Ha a minta rt ke magasabb mint a legnagyobb kalibr tor ism telje meg az
157. g des Methanols und der Proben verwendet werden Positive Verdr ngungspipetten werden auRerdem f r die Ubertragung von 50 uL Methanolextrakt in jedes Testr hrchen ben tigt 10 2 Jedes Aliquot des Reagenz in das untere Drittel des Testr hrchens hinzugeben damit sich die Reagenzien vollst ndig vermischen 10 3 Die Einwegr hrchen bestimmter Hersteller k nnen nichtspezifische Bindungen ergeben oder dazu f hren dass das Pellet leicht herausrutscht 10 4 Die ImmunoSep Reagenzien m ssen unmittelbar vor Verwendung gr ndlich gemischt werden 10 5 Liefert eine Probe gr Rere Werte als die h chsten Kalibratorwerte die Probe erneut extrahieren dabei mindestens ein Mischungsverh ltnis von einem Teil Blut und vier Teilen Methanol einhalten empfohlen werden Mischungs verh ltnisse von 1 9 bis 1 19 Die Testergebnisse mit dem entsprechenden Korrekturfaktor multiplizieren 10 6 Wenn die R hrchen nicht innerhalb von 5 Minuten nach der Entnahme aus der Zentrifuge dekantiert werden k nnen sollten sie neu zentrifugiert werden 10 7 Unmittelbar nach der Extraktion den Test durchf hren 11 QUALITATSKONTROLLE Jedes Labor sollte mindestens zwei Kontrollproben f r jeden Test vorsehen damit die G ltigkeit der Testergebnisse berpr ft werden kann Wenn Sie ungetestete Kontrollen verwenden und keinen Mittelwert und keine Standardabweichung festgelegt haben m ssen Sie f r jede Kontrolle nach mindestens 10 Tests einen Mittelwert und eine
158. i n los extractos con metanol se combinan con trazador de ciclosporina etiquetado con yodo 125 y Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep Tras 1 hora de incubaci n los tubos se centrifugan se decantan y a continuaci n se cuentan La cantidad de radioactividad remanente en la pastilla es inversamente proporcional a la concentraci n de ciclosporina encontrada en la muestra 4 REACTIVOS SUMINISTRADOS CON EL EQUIPO NSB CYCLO Trac SP ImmunoSep AZUL 1 vial 9 mL Calibradores 0 6 CYCLO Trac SP 1 vial 2 mL 5 viales 1 mL CYCLO Trac SP ImmunoSep 2 viales 100 mL Trazador CYCLO Trac SP ROJO 1 vial 20 mL Controles CYCLO Trac SP 2 viales 1 mL N mero de pruebas 200 ALMACENAMIENTO Tras su recepci n el equipo debe almacenarse a 2 8 C Una vez abiertos almacene los reactivos a 2 8 C hasta la fecha de vencimiento que figura en la etiqueta Los reactivos no deben utilizarse despu s de la fecha de vencimiento La fecha de vencimiento del equipo se indica en la etiqueta externa y se corresponde con la fecha de vencimiento del trazador No deben mezclarse reactivos de diferentes lotes 4 1 CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep azul reactivo listo para utilizar La mezcla previa de suero de burro antirrat n suero normal de rat n se diluye en soluci n salina tamp n fosfato que contiene azida s dica al 0 08 y un tensioactivo Se afiade tintura azul Agite con vigor inmediatamente antes de utilizarlo 4 2 Calibradores 0 6 CYCLO Trac SP
159. i per ogni tipo di trapianto come indicato dai protocolli per i trapianti utilizzati presso ogni centro Poich la ciclosporina pu produrre livelli ematici diversi in pazienti diversi l interpretazione dei risultati e la regolazione del dosaggio di ciclosporina deve con siderare il periodo post operatorio altri farmaci somministrati e informazioni cliniche del caso concernenti il paziente INTERAZIONE DI FARMACI Quanto segue stato riferito dalla Sandoz LTD Basilea Svizzera per il farmaco Sandimmune ciclosporina La ciclosporina viene ampiamente metabolizzata dal fegato Pertanto il suo livello nel sangue intero pu essere condizionato da farmaci che hanno effetto sugli enzimi microsomali epatici in particolare il sistema citocromo P 450 Le sostanze note che inibiscono questi enzimi riducono il metabolismo epatico e aumentano i livelli di ciclosporina nel sangue intero 64 farmaci che sono stati indicati aumentare la concentrazione di ciclosposrina nel sangue intero sono danazolo chetoconazolo eritromicina nicardipina diltiazem metiltestosterone e i contraccettivi orali Le sostanze che inducono l attivit di citocromo P 450 aumentano il metabolismo epatico e diminuiscono i livelli di ciclosporina nel sangue intero farmaci che sono stati indicati diminuire la concentrazione nel sangue intero di ciclosporina sono rifampicina fenitoina fenobarbitale trimetoprim con sulfa metossazolo e carbamazepina I
160. i sono stati mantenuti a livelli di trough blood di ciclosporina 100 300 ng mL TABELLA III Valori temporali di ciclosporina nel sangue intero in 18 pazienti con trapianto di rene misurati con il kit CYCLO Trac SP Sangue intero Giorno Ciclosporina Livelli di creatinina post ng mL mg dL Settimana operatorio N Media D S N Media D S M N MAX 1 0 7 12 151 128 143 49 40 0 7 18 0 2 8 14 16 185 96 125 27 2 2 1 1 8 2 3 15 21 19 173 94 94 27 1 9 1 1 9 4 4 22 28 17 198 146 76 30 1 9 1 1 8 5 5 29 35 22 210 168 70 29 1 7 1 2 8 2 6 36 42 17 164 63 68 25 1 1 1 1 5 6 7 43 49 14 175 53 55 24 1 1 1 1 5 4 8 50 56 17 198 99 42 2 1 1 0 1 2 5 4 9 57 63 16 176 54 40 31 2 7 1 0 10 9 10 64 70 4 199 59 34 3 5 33 0 9 11 7 11 71 77 18 146 73 27 30 3 1 0 9 11 1 12 78 84 5 142 76 18 35 3 1 1 11 2 13 85 91 1 304 7 42 0 3 3 6 4 6 14 92 98 1 317 10 34 1 1 1 7 4 8 15 99 105 2 121 10 9 4 1 1 6 2 0 5 5 16 106 112 1 49 5 54 2 5 1 7 8 7 17 113 119 1 79 3 16 01 1 6 1 7 2 Pazienti trattati con ciclosporina 2 5 mg kg ad intervalli di 12 ore azatioprina 4 mg kg prima dell intervento e ridotto a 0 75 1 0 mg kg e metilprednisolone somministrato in bolo di 300 mg quindi regolato a 20 mg giorno entro 30 giorni dopo il trapianto e 10 mg giorno entro 60 giorni dopo il trapianto gt Determinazioni di ciclosporina individuali risultati di questi studi dimostrano che i livelli di ciclosporina nel sangue sono stati mantenuti ai livelli desiderat
161. iaci n intraensayo valores ng mL Valor de la media S D CM N BAJA 46 4 9 10 7 25 MEDIA 186 6 0 3 2 25 ALTA 625 19 2 3 1 25 La variaci n entre ensayos es el resultado de estudios de competencia de varios centros utilizando muestras de sangre completa Media de ciclosporina S D C V N ng mL 91 15 0 16 5 5 Centro 1 203 27 9 13 7 5 543 53 7 9 9 5 71 6 7 9 5 5 Centro 2 173 12 9 7 58 5 466 41 5 8 9 5 78 5 4 6 8 5 Centro 3 195 18 4 9 4 5 500 50 2 10 0 5 87 6 9 7 9 5 Centro 4 200 13 5 6 8 5 505 42 5 8 4 5 78 3 6 4 6 5 Centro 5 192 10 2 5 3 5 497 23 9 4 8 5 Indica la variaci n entre ensayos detectada en un laboratorio que comienza a realizar ensayos radioinmunol gicos 52 15 2 VERACIDAD LA VERACIDAD DEL ENSAYO SE COMPROB CON LAS PRUEBAS DE LINEALIDAD Y RECUPERACION Linealidad paralelismo Recuperaci n media para 30 muestras diferentes de pacientes diluidas en serie rango de concentraci n 132 1716 ng mL factor de diluci n x valor de muestra diluida recuperaci n 100 x valor de la muestra sin diluir Diluci n 1 2 1 4 1 8 recuperaci n 96 1 93 3 95 9 S D 13 7 19 2 22 6 C V 14 3 20 6 23 6 Exactitud Estudio de recuperaci n Promedio de recuperaci n a 3 niveles de ciclosporina afiadida para 5 muestras 6 r plicas de cada una n 30 Ciclosporina afiadida recuperaci n S D C V ng mL Nivel 1
162. ibrator Kontrolle und unbekannte Probe mit Etikett versehen 9 2 Methanol HPLC geeignet in jedes R hrchen mit einer positiven Verdr ngungs pipette geben Die R hrchen mit Folie abdecken wenn die Proben noch nicht hinzugef gt werden k nnen 9 3 Die Kalibratoren die Kontrollen und die Vollblutproben mit einer positiven 100 uL Verdr ngungspipette in das Methanol geben HINWEIS Vorsichtig jede Probe zugeben dabei mit der Pipettenspitze leicht unter die Methanoloberflache gehen 9 4 Sofort nach Zugabe der Probe jedes R hrchen verschlie en und 15 Sekunden lang sch tteln 9 5 Die mit Verschlusskappen versehenen R hrchen bei 20 25 C 5 Minuten lang mit 1600 G zentrifugieren 9 6 Die Methanolextrakte d rfen vor dem Pipettieren in die Testr hrchen nicht verdunsten 9 7 Die mit Etikett versehenen Probenr hrchen 12 x 75 mm entsprechend dem Testprotokoll siehe hintere Umschlagseite vorbereiten 9 8 Die Reagenzien auf Zimmertemperatur 20 25 C bringen bevor sie f r den Test eingesetzt werden 9 9 Die Reagenzien wie folgt zugeben a R hrchen f r die Gesamtzahlung 100 5 CYCLO Trac SP rot b NSB R hrchen 50 extrahierter Nullkalibrator 100 251 CYCLO Trac SP rot 1 0 mL gr ndlich gemischtes CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep blau c CYCLO Trac SP Nullkalibrator 50 uL extrahierter CYCLO Trac SP Nullkalibrator 100 5 CYCLO Trac SP rot d A E 50 uL extrahierter CYCLO Trac Kalibrator 100
163. iklosporin tartalmat hat rozza meg a HPLC vel megegyez rt ket ad A nem specifikus antitestekkel t rt n m r s mely mind a val di mind a metabolit tartalmat m ri az els gener ci s RIA kal megegyez eredm nyt ad 3 MEGHAT ROZ S ELVE A DiaSorin CYCLO Trac SP Whole Blood RIA egy specifikus monoklon lis antitestet haszn l mely csak a cyclosporin t m ri s nem szignifik ns a keresztreakci ja a metabolitokkal A kalibr torok kontollok s mint k metanolos extrakci ja elengedhetetlen a m r s megkezd se el tt Az assay egy inkub ci s l p st s antitest f zisos szepar ci s technik t alkalmaz A m r s egyszer s t se rdek ben az els antitest monoklon lis eg r Cyclosporin A antitest s a m sodlagos szam r anti eg r kevert hordoz ban norm l eg r sz rum egy reagensben ker lt kiszerel sre a Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep ban A k szlettel t rt n ciklosporin szint meghat roz sban a teljes v r mint k kalibr torok kontrollok els k nt metanollal ker lnek extrah l sra A metanolos extraktumok ut na sszem r sre ker lnek l 125 tel jel lt ciklosporin tracer rel s az Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep al 1 ra inkub ci k vetkezik majd a cs vek centrifug l sa le nt se s m r se A gy ngy k n visszamaradt m rhet radioaktivit s ford tottan ar nyos a mint k ciklosporin koncentr ci j val 94 4 AK SZLET TARTALMA CYCLO Trac SP NSB ImmunoSe
164. inical Chemistry 30 11 1812 1984 Annesly T K Matz D Giacherio and C Feldkamp Cyclosporine Distribution in Blood Concomitant Effect of Hematocrit Concentration Metabolites and Temperature Journal of Clinical Immunoassay 10 4 226 231 1987 22 23 24 25 26 21 28 29 30 31 32 Annesly T M D A Giacherio and C S Feldkamp The Concentration Related Distribution of Cyclosporine in Blood The Journal of Clinical Immunoassay 9 1 Spring 1986 Donatsch P E Abisch M Homberger R Traber M Trapp and R Voges A Radioimmunoassay to Measure Cyclosporin A in Plasma and Serum Samples Journal of Immunoassay 2 1 19 32 1981 Lensmeyer G L and B L Fields Clinical Chemistry 31 196 1985 Ball P E H Munzer H P Keller E Abisch and J Rosenthaler Specific Radioimmunoassay with a Monoclonal Antibody for Monitoring Cyclosporine in Blood Clinical Chemistry 34 257 261 1988 Holt D W A Johnston J T Marsden L Vernillet P A Keown T G Rosano L M Shaw and J Rosenthaler Monoclonal Antibodies for Radioimmunoassay of Cyclosporine a Multicenter Comparison of Their Performance with the Sandoz Polyclonal Radioimmunoassay Kit Clinical Chemistry 34 6 1091 6 1988 Potter J M and H Self Cyclosporin A Variation in Whole Blood Levels Related to In Vitro Anticoagulant Usage Therapeutic Drug Monitoring 8 1 122 1
165. int k m g nincsenek el k sz tve 9 3 Adjon 100 uL kalibr tort kontrollt s teljes v r mint t a metanolhoz megfelel pipett t haszn lva MEGJEGYZ S Mindegyik mint t lassan engedje a metanolba gy hogy a pipettahegyet kiss a metanol felsz ne al helyezi 9 4 K zvetlen l a minta bem r s t k vet en a cs veket fedje le s keverje vortex 15 m sodpercig 9 5 Centrifug lja lefedett cs veket 1600 x g vel 20 25 C on 5 percig 9 6 Ovakodjon nehogy a metenol extraktum elp rologjon miel tt az assay cs be bem ri 9 7 Feliratozza a 12 x 75 mm es tesztcs veket az assay terv le r sa szerint h ts fedlap 9 8 Hozza a reagenseket szobah m rs kletre 20 25 C az assay kezdete el tt 9 9 M rje be a k vetkez reagenseket a Tot l be t s cs 100 uL 35 CYCLO Trac SP piros b Nem specifikus k t si cs vek NSB 50 uL extrah lt O kalibr tor 100 uL 15 CYCLO Trac SP piros 1 0 mL alaposan sszekevert CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep k k V ltoztatva 200 uL minta extrakci ja 800 uL metanollal g 1118x 10 sug r cm ben kifejezve rpm 97 c CYCLO Trac SP O kalibr tor 50 uL extrah lt CYCLO Trac SP 0 Kalibr tor 100 5 CYCLO Trac SP piros d CYCLO Trac SP kalibratorok A E 50 uL extrah lt CYCLO Trac kalibr tor 100 5 CYCLO Trac SP piros e Kontroll s ismeretlen mint k 50 uL extrah lt minta 100 5 CYCLO Trac SP piros 9 10 Razza
166. l 12 mg kg f rdelat p tv doser dagligen prednison 2 5 mg kg som avtar till 20 mg dag metylpredniso lon 1 2 mg kg Om njurfunktion saknades sattes ciklosporin ut och OKT3 gavs med 5 mg kg i 10 dagar gt Ciklosporin sattes in dag 3 efter operationen med 5 mg kg f rdelat p tv doser om dagen prednison 15 mg dagligen som successivt minskades dessutom vid behov azatioprin ALG 50 mg kg gavs en g ng och fortsattes endast vid behov OKT3 5 mg kg i v i 7 dagar vid behov c Ciklosporin gavs initialt i v peroral administrering p b rjades dag 5 med 4 mg kg och fortsattes med lagom dos f r att uppr tth lla nskad blodhalt prednison 15 mg dagligen som minskades successivt azatioprin 2 2 5 mg kg och sattes ut n r trombocyttalet b rjade sjunka metylprednisolon 500 mg under ingreppet och 15 mg i v i 10 dagar OKT3 5 mg kg i 10 dagar d Nijurtoxicitet eller avst tning 89 TABELL Ill visar medelv rdena f r ciklosporinhalten i blod och motsvarande kreatininhalter hos 18 njurtransplanterade patienter fr n universitetssjukhuset i Albany New York 2 Albany h lls patienterna p miniminiv er av ciklosporin p 100 till 300 ng mL TABLE III Ciklosporinv rden i helblod som funktion av tiden hos 18 njurtransplanterade patienter enligt m tning med CYCLO Trac SP Whole Blood Kit Dag Ciklosporin Kreatininhalter efter ng mL mg dL Vecka operation N Medel S D N Medel S D MIN M X 1 0 7 12 151 128 143 49 4 0 0 7 18
167. l k d s 102 T BL ZAT III mutatja az tlagos v r ciklosporin s a hozz tartoz kreatinin szinteket 18 vese transzplant lt beteg adatai alapj n az albany i s a new york i Egyetemi K rh z m r sei alapj n Az albany i p ciensek ciklosporin szintje 100 300 ng mL k z tt volt tartva T BL ZAT III 18 vese transzplant lt beteg teljes v r ciklosporin szintj nek id beni v ltoz sa CYCLO Trac SP Whole Blood k szlettel m rve Oper ci Ciklosporin Kreatinin szint ut n ng mL mg dL H t nap Ne tlag S D N tlag S D MIN MAX 1 0 7 12 151 128 143 4 9 4 0 0 7 18 0 2 8 14 16 185 96 125 2 7 2 2 1 1 8 2 3 15 21 19 173 94 94 2 7 1 9 1 1 9 4 4 22 28 17 198 146 76 3 0 1 9 1 1 8 5 5 29 35 22 210 168 70 2 9 1 7 1 2 8 2 6 36 42 17 164 63 68 2 5 1 1 1 1 5 6 49 49 14 175 53 55 2 4 1 1 1 1 5 4 8 50 56 17 198 99 42 2 1 1 0 1 2 5 4 9 57 63 16 176 54 40 3 1 2 7 1 0 10 9 10 64 70 4 199 59 34 3 5 3 3 0 9 11 7 11 71 77 18 146 73 27 3 0 3 1 0 9 11 1 12 78 84 5 142 76 18 3 5 3 3 1 1 112 13 85 91 1 304 7 4 2 0 3 3 6 4 6 14 92 98 1 317 10 3 4 1 1 1 7 4 8 15 99 105 2 121 10 9 4 1 1 6 2 0 5 5 16 106 112 1 49 5 5 4 2 5 1 7 8 7 17 113 119 1 79 3 1 6 0 1 1 6 1 7 a A p cienseket 2 5 mg kg ciklosporinnal kezelt k 12 r s intervallumban azathioprin nel 4 mg kg preoperativ s cs kkentett k 0 75 1 0 mg kg ig metilprednisolon 300 mg os bolus ban ker lt bead sra majd be ll tott k 20 mg nap ra 3
168. l monitoraggio di ciclosporina nel sangue e idonea regolazione del dosaggio sono indispensabili quando questi farmaci sono usati in concomitanza stato notato che la clearance di prednisolone minore nei pazienti trattati con ciclosporina e che i livelli di ciclosporina nel sangue intero misurati mediante RIA aumentano dopo la somministrazione di dosi elevate di metilprednisolone 15 CARATTERISTICHE SPECIFICHE DELLE PERFORMANCE 15 1 Precisione Variazioni intra analisi valori ng mL Valore medio D s C V N BASSO 46 4 9 10 7 25 MEDIO 186 6 0 3 2 25 ALTO 625 19 2 3 1 25 Risultati delle variazioni intra analisi da uno studio di perizia multicentrico in cui sono stati usati campioni di sangue intero Media ciclosporina ng mL 91 Centro 1 203 543 71 Centro 2 173 466 87 Centro 4 200 505 78 Centro 5 192 497 qa 78 Centro 3 195 500 Indica variazione intra analisi rilevata in un laboratorio all inizio delle analisi radioimmunologiche 65 15 2 ACCURATEZZA L ACCURATEZZA DELL ANALISI STATA CONTROLLATA DA UN TEST DI LINEARITA E DA UN TEST DI RECUPERO Linearit Parallelismo Recupero medio per 30 campioni diluiti in serie range di concentrazione 132 1716 ng mL fattore di diluizione x valore del campione diluito di recupero 100 x j P valore del campione non diluito Diluizione 1 2 1 4 1 8 di recupero 96 1 93 3
169. las a 20 C o menos 2 Las muestras de sangre almacenadas a 4 C o que no se han procesado de inmediato deben mezclarse bien antes de tomar muestras para analizar en el equipo de sangre completa CYCLO Trac SP 8 EQUIPO Y MATERIAL NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 8 1 Tubos desechables de vidrio de borosilicato 12 x 75 mm 8 2 Centr fuga controlada por temperatura con capacidad para 12 tubos de 75 mm 8 3 Contador de centelleo de rayos gamma capaz de contar yodo 125 8 4 Mezclador v rtex 8 5 Utensilios de dosificaci n a Pipetas de desplazamiento positivo de 400 uL 100 uL y 50 LL b Dispensadores repetitivos calibrados para suministrar 1 0 mL y 100 pL 8 6 Metanol grado HPLC 8 7 Tapones para tubos de extracci n Scientific Products N T1226 32 44 9 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 Etiquete un tubo de ensayo de vidrio de 12 x 75 para cada calibrador control y muestra desconocida Suministre 400 uL de metanol grado HPLC a cada tubo con una pipeta de desplazamiento positivo Cubra los tubos con parafilm si las muestras no est n listas par a adirlas Afiada los calibradores los controles y las muestras de sangre completa al metanol con una pipeta de desplazamiento positivo de 100 uL NOTA Suministre lentamente cada muestra con la punta de la pipeta colocada un poco por debajo de la superficie del metanol Inmediatamente tra
170. lculating results of RIA s Each is based on obtaining a calibration curve by plotting the extent of binding against the concentrations of the calibration calibrators The curve for the CYCLO Trac SP assay is obtained by plotting B Bo vs log concentration 12 1 Calculate the average CPM for each calibrator control and patient sample 12 2 Subtract the average CPM of the NSB tubes from all counts to obtain the corrected CPM 12 3 Divide the corrected CPM of each calibrator control or patient sample by the corrected CPM of the 0 calibrator BIBo CPM of calibrator or patient sample CPT of NSB x 100 CPM of 0 calibrator CPM of NSB 12 4 Using three cycle semi log graph paper plot B Bo of the calibrators Y axis against their corresponding concentration X axis 12 5 Draw a best fit curve through the points 12 6 Interpolate cyclosporine concentrations of the patient samples from the calibrator curve In practice most laboratories will employ a computer based data reduction system DiaSorin recommends using either a spline or 4 parameter logistic 4PL curve fitting program NOTE DO NOT use a linear concentration scale X axis and or a logit B Bo scale Y axis REDUCTION DATA The DiaSorin QC lab uses a smoothed spline curve fit TABLE I DiaSorin CYCLO Trac SP Whole Blood Sample Data Percent Duplicate Average Corrected Bound Percent Conc Tube CPM CPM CPM B T B Bo ng mL Total Count 51045 50892
171. lina Cloramfenicol Penicilina Digoxina Propranolol Disopiramida Rifampin Etosuximida cido salic lico Gentamicina sulfato Tobramicina Kanamicina Verapamil Comparaci n entre el ensayo en sangre completa CYCLO Trac SP de DiaSorin y HPLC Tipo de Ecuaci n lineal Coeficiente fi Estudio transplante de regresi n eme wa weona come as Ri n Y 0 8022X 34 BO de Corazon Y 0 9196X 50 ensilvania Higado Y 0 9572X 48 Centro m dico de Albany Ri n 1 038X 27 r 0 9124 187 Ri n 1 3074X 29 Universidad de Coraz n va 1 4672X 16 Meer Ontario Higado Y 1 3575X 12 La correlaci n de los datos presentados representa los resultados de los estudios realizados en una serie de laboratorios con procedimientos HPLC validados de forma independiente No deben realizarse comparaciones con estos datos y toda comparaci n de m todos debe realizarse tras un cuidadoso proceso de estandarizaci n de los m todos CONSULTE LA BIBLIOGRAF A EN LA LTIMA P GINA 54 KIT 25 RIA CYCLO TRACO SP SANGUE INTERO 1 USO PREVISTO PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Il kit per l analisi radioimmunologica CYCLO Trac SP Sangue Intero RIA serve per la determinazione quantitativa di ciclosporina Ciclosporina A Ciclosporina Sandimmune nel sangue intero quando sono necessarie indicazioni nella scelta terapeutica di pazienti che hanno subito trapianto di cuore reni e fegato e assumono ciclosporina AVVERTENZA LA LEGGE
172. lizag o Se bruksanvisningen Felhaszn l i utmutat Diagn stico in Diagnostik in vitro A 8 In vitro In vitro diagnosztika vitro N do lote Batch nummer Lot sz m Limite de Temperatur H m rs kleti temperatura begr nsning tartom ny Anti soro Antiserum Antisz rum Tra ador ant geno Sp relement marcado com I antigen betecknad Tracer l el jel lt med 125 antitest 551 Tamp o Buffert Puffer Calibrador Kalibrator Kalibr tor Soro de controlo Kontrollserum Kontroll sz rum Op6s Radioactivo Radioaktiv Radioaktiv Padievepy Nocivo Skadligt Vesz lyes DiaSorin S p A 13040 Saluggia VC Italy DiaSorin Inc 1951 Northwestern Avenue P O Box 285 Stillwater MN 55082 0285 ec rer Phone 651 439 9710 FAX 651 351 5669 For Customer Service in the U S and Canada Call Toll Free 800 328 1482 In the United Kingdom Call 44 118 9364200 FAX 44 118 9792061 PRINTED IN U S A
173. losporin Konzentration bei 50 B Bo etabolitkonzentration bei o 0 Metabolitk tration bei 50 B B 100 x Cyclosporin Metabolit Kreuzreaktivitat 1 1 7 8 lt 0 1 13 0 1 17 0 7 18 0 2 21 0 8 39 15 5 Interferenz Die folgenden Substanzen wurden in Aliquots einer Vollblutprobensammlung mit Cyclosporin 160 250 ng mL versetzt Keine dieser Substanzen st rte die Cyclosporin Messung in den im Folgenden angegebenen Konzentrationen Substanz Cholesterol Triglyceride Bilirubin Azathioprin Cimetidin Nifedipin 6 Methylprednisolon OKT3 Konzentration 100 1000 mg dL 300 1000 mg dL 5 30 mg dL 50 200 ng mL 500 1000 ng mL 100 200 ng mL 20 60 ng mL 1500 ng mL Die folgende Liste gleichzeitig verabreichter Medikamente wurde mit Konzentrationen bis zu 100 ug mL getestet und st rten den Test nachweislich nicht Acetaminophen N Acetyl Procainamid Cephalosporin Chloramphenicol Digoxin Disopyramid Ethosuximid Gentamicinsulfat Kanamycin Lidocain Metoclopramid Naficillin Penicillin Propranolol Rifampin Salicylsaure Tobramycin Verapamil Vergleich des CYCLO Trac SP Whole Blood Tests von DiaSorin mit HPLC Transplanta Regressions Studie tionsart Geradengleichung koeffizient n Pharmakokinetisch entfallt y 0 9121x 47 r 0 9719 373 Niere y 0 8022x 34 r 0 9585 82 University of Herz y 0 9196x 50 r 0 9223 42 Pennsylvania Leber y 0 9572x 48 r 0 9067 40 ende Niere
174. mL farmaci indicati nell elenco che segue somministrati contemporaneamente sono stati testati a livelli fino a 100 ug mL e non sono stati notati interferire con l analisi Acetaminofene Lidocaina N Acetilprocainamide Metoclopramide Cefalosporine Nafcillina Cloramfenicolo Penicillina Digossina Propranololo Disopiramide Rifampicina Etosuccimide Acido salicilico Gentamicina solfato Tobramicina Kanamicina Verapamil Confronto fra l analisi DiaSorin CYCLO Trac SP Sangue intero e HPLC Tipo di Coefficiente di Studio trapi Equazione lineare n rapianto regressione Farmacocinetica N D Y 0 9121X 47 r 0 9719 373 TOR Rene Y 0 8022X 34 r 0 9585 82 Universit della Cuore Y 0 9196X 50 r 0 9223 42 Pennsylvania Fegato Y 0 9572X 48 r 0 9067 40 Albany Medical Center Rene Y 1 038X 27 r 0 9124 187 o Rene Y 1 3074X 29 r 0 9703 73 University of Cuore Y 1 4672X 16 r 0 9696 75 Western Ontario Fegato Y 1 3575X 12 r 0 9067 63 I dati di correlazione presentati indicano i risultati degli studi effettuati in vari laboratori che utilizzano procedure HPLC convalidate indipendentemente Nessun confronto dovr essere fatto con questi dati ed eventuale confronto di metodi deve essere fatto solo dopo aver ottenuto una attenta standardizzazione dei metodi FARE RIFERIMENTO ALL ULTIMA PAGINA PER LA BIBLIOGRAFIA 67 KIT DE RADIOIMUNOENSAIO DE SANGUE TOTAL SP CYCLO
175. mL Tra ador CYCLO Trac SP VERMELHO 1 frasco 20 mL Controlos CYCLO Trac SP 2 frascos 1 mL N mero de testes 200 ARMAZENAMENTO Ao ser recebido o kit deve ser armazenado a 2 8 C Depois de abrir armazene cada reagente a 2 8 C at data de validade no r tulo Os reagentes n o devem ser usados ap s a data de validade A data de validade do kit indicada no r tulo externo e corresponde data de validade do tra ador N o misture reagentes de lotes diferentes 4 1 ImmunoSep NSB CYCLO Trac SP azul reagente pronto a usar A pr mistura de soro anti rato de burro soro de rato normal dilu da em salina de tamp o fosfato com 0 08 de azida de s dio e um surfactante adicionado corante azul Agite vigorosamente imediatamente ap s a utiliza o 4 2 Calibradores 0 6 CYCLO Trac SP reagente pronto a usar O soro sem ciclosporina cont m 0 1 de azida de s dio e um surfactante Os seis calibradores de ciclosporina em concentra es nominais entre 0 1200 ng mL s o pr diluidos em soro humano com 0 1 de azida de s dio e um surfactante Os valores exactos da concentra o s o atribu dos de acordo com cada lote sendo indicados nos r tulos dos frascos O calibrador SP CYCLO Trac da Diasorin foi calibrado em rela o ao padr o de refer ncia USP Ciclosporina Qualquer compara o com outros produtos ou procedimentos deve ser feita utilizando este padr o de refer ncia Os calibradores do kit demonstram
176. male obtenue 6 3 Diminution de la liaison maximale 6 4 Haute liaison non sp cifique 6 5 Mauvaise reproductibilit entre les doubles 7 PR L VEMENT ET PR PARATION DES CHANTILLONS Cent microlitres d EDTA sang total sont n cessaires pour la proc dure d extraction du CYCLO Trac SP sang total REMARQUE Les chantillons h parinis s ne doivent pas tre utilis s 9 27 PR L VEMENT ET CONSERVATION DU SANG TOTAL Pr levez du sang par ponction veineuse dans un tube de verre vide de 5 ou 10 mL Utilisez de EDTA 7 2 mg 5 mL sang comme anticoagulant Aucun autre additif ou conservateur n est n cessaire pour pr server l int grit de l chantillon Si les chantillons ne sont pas utilis s imm diatement les conserver une temp rature de 2 a 8 C ou plus bas jusqu 7 jours Pour une conservation plus longue jusqu 3 mois congelez les chantillons 20 C ou plus bas 8 29 Les chantillons de sang qui ont t conserv s 4 C ou qui n ont pas t imm diatement trait s doivent tre bien agit s avant d tre utilis s pour le test de la trousse CYCLO Trac SP sang total 8 MAT RIEL ET PRODUITS REQUIS MAIS NON FOURNIS 8 1 Tubes en verre borosilicat jetables 12 x 75 mm 8 2 Centrifugeuse thermostat pour tubes 12 x 75 mm 8 3 Compteur scintillation gamma en mesure de compter l iode 125 8 4 Vortex 8 5 Pipettes a 400 uL 100 uL et 50 uL macropipette volume variable b Distributeurs
177. n Ciclosporin Sandimmune is a cyclic undecapeptide of fungal origin with powerful immunosuppressive properties 2 While its mechanism of action is still under investigation cyclosporine appears to affect the metabolism of both T helper lymphocytes and T suppressor lymphocytes which impairs the immune system Though this drug has demonstrated utility in preventing the rejection of new organ transplants a number of adverse effects the most serious of which are nephro and hepa totoxicity associated with high blood levels of this drug have been reported Moreover absorption and metabolism of cyclosporine is highly variable from patient to patient Thus dosages must be individualized and monitored to achieve optimal immunosuppression and minimize adverse side effects Nearly all of the cyclosporine present in whole blood is bound to red blood cells and plasma proteins 22 This distribution is affected by changes in temperature and hematocrit 2 22 To ensure consistent results a standardized protocol for blood collection is necessary 9 Two methods are currently available to monitor cyclosporine levels in patients high performance liquid chromatography HPLC and radioimmunoassay RIA First generation RIA s employed polyclonal antibodies which exhibit high cross reactivity with circulating metabolites Cyclosporine values generated by these RIA s invariably exceeded those generated by HPLC Second generation RIA s
178. nce du taux de cyclosporine chez les patients la chromatographie liquide haute performance CLHP et le dosage radio immunologique RIA Les RIA de premi re g n ration utilisaient des anticorps polyclonaux qui pr sentaient une r activit crois e lev e avec les m tabolites en circulation 4 Les valeurs de cyclosporine g n r es par ces RIA exc daient invariablement les valeurs obtenues par la m thode CLHP Les RIA de deuxi me g n ration sont bas s sur une technologie utilisant un anticorps monoclonal Les anticorps monoclonaux sp cifiques et non sp cifiques ont t d velopp s L anticorps sp cifique mensure uniquement le compos parent de la cyclosporine et g n re des valeurs semblables celles obtenues par CLHP L anticorps non sp cifique mesure le compos parent et les m tabolites Ses r sultats sont semblables ceux des m thodes RIA de premi re g n ration 3 DESCRIPTION DE LA METHODE DE DOSAGE Le dosage radio immunologique DiaSorin CYCLO Trac SP sang total emploie un anticorps monoclonal sp cifique qui mesure uniquement la cyclosporine et ne pr sente aucune r activit crois e importante avec les m tabolites L extraction au m thanol est n cessaire pour les talons les contr les et les chantillons avant le dosage Le dosage en soi consiste en une seule tape d incubation et utilise une technique de s paration d anticorps en deux phases Pour simplifier la proc dure le premier anticorps
179. ncil Directive 1999 45 EC R20 21 22 Bel legz se b rrel t rt n rintkez se s lenyel se k ros R32 Savakkal kapcsolatba l pve nagyon toxikus g zok szabadulnak fel S28 B rrel t rt n rintkez s t k vet en azonnal b v zzel mossa le 1 125 TARTALM REAGENSEK Ez a k szlet olyan I 125 tartalm anyagokat tartalmaz melyek radioaktivit sa nem haladja meg a 9 uCi 333 rt ket Helyes el k sz t s s megfelel laborat riumi gyakorlat sz ks ges az anyagok t rol s n l kezel s n l s a hullad kkezel sn l Egyetemes szab lyok radioizot pok kezel s hez Ezeket a radioakt v anyagokat csak orvosok vagy llatorvosok szerezhetik be birtokolhatj k s haszn lhatj k human s llat gy gy szatban klinikai laborat riumokban vagy k rh zakban kiz r lag in vitro klinikai vagy laborat riumi tesztekben melyek nem foglalj k magukban a hum n illetve llati szervezet k ls vagy bels kezel s t arra ir nyul sug rz st Ezen term kek beszerz se birtokl sa haszn lata sz ll t sa a U S Nuclear Regulatory Commission szab lyoz sa al esik A radioakt v anyagokat k r lhat rolt speci lisan jel lt ter leten kell t rolni A radioakt v anyagokhoz csak arra jogosult szem lyek f rhetnek Tilos a radioakt v anyagok sz jjal t rt n pipett z sa A radioakt v munk hoz kijel lt ter leten enni s inni tilos A ter letet ahov radioakt v any
180. ndante acqua REAGENTI CONTENENTI IODIO 125 Questo kit contiene materiale radioattivo che non supera 9 uCi 333 kBq di iodio 125 Adottare precauzioni adeguate e le buone pratiche di laboratorio per la conservazione la manipolazione e lo smaltimento di questo materiale Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una licenza generale Questo materiale radioattivo pu essere consegnato acquisito conservato e usato unicamente da personale medico veterinari abilitati alla pratica di medicina veterinaria laboratori clinici o ospedali e unicamente per test in vitro clinici o di laboratorio che non prevedano la somministrazione interna o esterna del materiale o di radiazioni da esso derivanti su persone o animali L acquisto il possesso la conservazione l uso e il trasferimento sono soggetti alle norme e alla licenza generale della Nuclear Regulatory Commission statunitense dello stato con cui la Commissione ha stipulato un accordo per l esercizio dell autorit normativa 1 La conservazione del materiale radioattivo deve essere limitata ad un area specificatamente designata 2 L accesso ai materiali radioattivi deve essere limitato esclusivamente al personale autorizzato 3 Non usare la bocca per versare con la pipetta materiale radioattivo 4 Non mangiare o bere nelle aree di lavoro designate per materiale radioattivo 57 5 Le zone dove possono verificarsi perdite devono essere pulite quindi lavate con
181. noensaio de Sangue Total SP CYCLO Trac da Diasorin emprega um anticorpo monoclonal espec fico que mede apenas a ciclosporina e que n o demonstra qualquer reactividade cruzada significativa com os seus metab litos Antes do ensaio necess ria uma fase de extrac o do metanol para os calibradores os controlos e as amostras O pr prio ensaio consiste numa nica etapa de incuba o e utiliza uma t cnica de separa o da fase do anticorpo duplo Para simplificar o procedimento o primeiro anticorpo monoclonal de rato espec fico da Ciclosporina A e o segundo anticorpo anti rato de burro s o previamente misturados com um catalisador soro de rato normal para produzir um reagente nico designado Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep 68 Para determinar os niveis de ciclosporina com este kit as amostras de sangue total os calibradores e os controlos come am por ser extra dos com metanol Os extractos de metanol s o depois combinados com iodo 125 rotulado como tra ador da ciclosporina e com Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep Ap s 1 hora de incuba o os tubos s o centrifugados decantados e depois contabilizados A quantidade de radioactividade restante na pastilha inversamente proporcional concentra o de ciclosporina presente na amostra 4 REAGENTES FORNECIDOS NO KIT ImmunoSep CYCLO Trac SP NSB AZUL 1 frasco 9 mL Calibradores 0 6 CYCLO Trac SP 1 frasco 2 mL 5 frascos 1 mL ImmunoSep CYCLO Trac SP 2 frascos 100
182. nombreuses m thodes de calcul des r sultats des dosages radio immunologiques Chacune est bas e sur l obtention d une courbe d talonnage en d terminant l ampleur de la liaison par rapport aux concentrations des talons La courbe pour le dosage CYCLO Trac SP est obtenue en d terminant le B Bo et de diagramme de concentration 12 1 Calculez la moyenne des CPM pour chaque talon contr le et chantillon de patient 12 2 Soustrayez la moyenne des CPM des tubes NSB de tous les comptes pour obtenir les CPM corrig s g 1118x 10 rayon en cm rpm 19 12 3 12 4 12 5 12 6 Divisez les CPM corrig s de chaque talon contr le ou chantillon de patient par les CPM corrig s de l talon 0 CPM de l talon ou chantillon de patient CPT de NSB CPM de l talon 0 CPM de NSB B Bo x 100 A l aide de papier semi logarithmique a trois cycles d terminez le B Bo des talons axe des Y et leur concentration correspondante axe des X Tracez une courbe la plus pr cise possible entre les points Interpolez la concentation de cyclosporine des chantillons du patient sur la courbe d talonnage Dans la pratique la plupart des laboratoires utiliseront un syst me informatique de r duction des donn es DiaSorin conseille d utiliser un programme de courbe spline ou 4PL REMARQUE N UTILISEZ ni une chelle de concentration lin aire axe des X ni une chelle logit B Bo axe de
183. ntegrity of the sample If specimens are not used immediately store at 2 8 C or lower for up to 7 days For prolonged storage up to 3 months freeze samples at 20 C or lower 8 29 Whole blood samples that have been stored at 4 C or have not been immediately processed should be thoroughly mixed prior to taking samples for testing in the CYCLO Trac SP whole blood kit EQUIPMENT AND MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 8 1 8 2 8 3 8 4 8 5 8 6 8 7 Disposable borosilicate glass tubes 12 x 75 mm Temperature controlled centrifuge to accommodate 12 x 75 mm tubes Gamma scintillation counter capable of counting lodine 125 Vortex Pipetting devices a 400 uL 100 uL and 50 uL positive displacement pipettes b Repeating dispensers calibrated to deliver 1 0 mL and 100 LL Methanol HPLC grade Caps for extraction tubes Scientific Products No T1226 32 ASSAY PROCEDURE 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 Label one 12 x 75 glass test tube for each calibrator control and unknown sample Dispense 400 LL of methanol HPLC grade into each tube using a positive displacement pipette Cover tubes with parafilm if samples are not yet ready to be added Add the calibrators the controls and the whole blood samples into the methanol using a 100 uL positive displacement pipette NOTE Slowly dispense each sample with the pipette tip placed slightly under the surface of the methanol Immediately after the sam
184. nto Sandimmune ciclosporina La ciclosporina se metaboliza de forma extensiva en el h gado Por ello su nivel en sangre completa puede verse influido por drogas que afectan a los enzimas microsomales en particular el sistema citocromo P 450 51 Las sustancias conocidas por inhibir dichos enzimas disminuir n el metabolismo hep tico e incrementar n los niveles de ciclosporina en sangre completa Las drogas identificadas por su capacidad de incrementar la concentraci n de ciclosporina en sangre completa incluyen danazol ketoconazole eritromicina nicardipine diltiazem metiltestosterona y anticonceptivos orales Las sustancias inductoras de la actividad de citocromo P 450 incrementar n el metabolismo hep tico y har n disminuir los niveles de ciclosporina en sangre completa Las drogas identificadas por reducir la concentraci n de ciclosporina en sangre completa incluyen rifampin fenito na fenobarbital trimetoprim I V con sulfametoxazol y carb amazepina El control de los niveles de ciclosporina en sangre y el ajuste de la dosis apropiada son esenciales cuando se utilizan estas drogas de forma simult nea Se ha descubierto que la eliminaci n de prednisolona se reduce en pacientes tratados con ciclosporina y que los niveles de ciclosporina en sangre completa medidos con el equipo RIA se incrementan tras la administraci n de altas dosis de metilprednisolona 15 CARACTER STICAS DE DESEMPENO ESPEC FICAS 15 1 Precisi n Var
185. nui o gradual 2 2 5 mg kg de azatioprina descontinuada quando as plaquetas come aram a decrescer 500 mg de metilprednisolona intraoperativamente e 15 mg atrav s de durante 10 dias 5 mg kg de OKT3 durante 10 dias d Nefrotoxicidade ou rejei o 76 A TABELA Ill mostra os valores m dios de ciclosporina no sangue e os n veis correspondentes de creatinina em 18 pacientes sujeitos a transplante dos rins no Hospital da Universidade de Albany New York Em Albany os pacientes foram mantidos a n veis m nimos de ciclosporina entre 100 a 300 ng mL TABELA III Valores temporais de ciclosporina no sangue total em 18 pacientes sujeitos a transplantes dos rins medidos com o Kit de Sangue Total CYCLO Trac SP Dia Ciclosporina Niveles de creatinina P s ng mL mg dL Semana Operativo N M dia D s N M dia D S MIN M X 1 0 7 12 151 128 143 49 40 0 7 18 0 2 8 14 16 185 96 125 27 2 2 1 1 8 2 3 15 21 19 173 94 94 2 7 1 9 1 1 9 4 4 22 28 17 198 146 76 3 0 1 9 1 1 8 5 5 29 35 22 210 168 70 2 9 157 1 2 8 2 6 36 42 17 164 63 68 2 5 1 1 1 1 5 6 7 43 49 14 175 53 55 2 4 1 1 1 1 5 4 8 50 56 17 198 99 42 2 1 1 0 1 2 5 4 9 57 63 16 176 54 40 3 1 2 7 1 0 10 9 10 64 70 4 199 59 34 35 33 0 9 11 7 11 71 77 18 146 73 27 3 0 3 1 0 9 11 1 12 78 84 5 142 76 18 35 33 1 1 11 2 13 85 91 1 304 7 42 0 3 3 6 4 6 14 92 98 1 317 10 3 4 1 1 1 7 4 8 15 99 105 2 121 10 9 4 1 1 6 2 0 5 5 16 106 112 1 49 5 54 25 1 7 8 7 17 113 119 1 79 3 1 6
186. oratories 4 edici n mayo de 1999 o actual de Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health REACTIVOS CON CONTENIDO DE AZIDA S DICA PRECAUCI N Algunos reactivos de este equipo contienen azida s dica La azida s dica puede reaccionar con las ca erias de plomo y cobre y formar azidas met licas altamente explosivas Al desecharlo enjuague con abundante agua para evitar que se acumule la azida Para obtener informaci n adicional consulte Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts en el manual Guide Safety Management N CDC 22 publicado por Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 Advertencias establecidas en la Comunidad Europea sobre el riesgo de sustancias peligrosas Directiva del Consejo 1999 45 EC R 20 21 22 Nocivo por inhalaci n por ingesti n y en contacto con la piel R 32 En contacto con cidos libera gases altamente t xicos S28 En caso de contacto con la piel l vese inmediatamente con abundante agua REACTIVOS CON CONTENIDO DE YODO 125 Este equipo contiene material radiactivo que no supera de 9 333 kBq de yodo 125 Para almacenar manejar y desechar este material deben adoptarse las precauciones necesarias y pr cticas de laboratorio correctas Para facultativos o instituciones que reciben radiois topos con licencia gen rica Este material radiactivo s lo deben recibirlo adquirirlo poseerlo y utilizarlo m dicos
187. os n veis de ciclosporina no sangue total Os f rmacos que provocam o aumento da concentra o de ciclosporina no sangue total incluem o danazol o cetoconazole a eritromicina a nicardipina o diltiazem o metiltestosterona e os contraceptivos orais As subst ncias que induzem a actividade do citocromo P 450 aumentar o o metabolismo hep tico e diminuir o os n veis de ciclosporina no sangue total Os f rmacos que foram considerados como diminuidores da concentra o de ciclosporina no sangue total incluem a rifampina a fenito na o fenobarbital o trimetoprim I V com sulfametoxazol e a carbamazepina A monitoriza o dos n veis de ciclosporina no sangue e o ajuste da dosagem adequada s o essenciais sempre que estes f rmacos forem utilizados concomitantemente Descobriu se que a elimina o de prednisolona reduzida em pacientes tratados com ciclosporina e que os n veis de ciclosporina no sangue total tal como medidos pelo RIA aumentam ap s a administra o de uma dose elevada de metilprednisolona 15 CARACTER STICAS ESPEC FICAS DE DESEMPENHO 15 1 Precis o Varia o durante o ensaio valores ng mL Valor m dio D S C V N BAIXO 46 4 9 10 7 25 MEDIO 186 6 0 3 2 25 ALTO 625 19 2 3 1 25 A varia o durante o ensaio resulta de estudos de compet ncia multi centros utilizando amostras de sangue total Ciclosporina m dia D S C V N ng mL 91 15 0 16 5 5 Centro
188. osporina 90 31 A avaliac o cl nica utilizando o kit de sangue total CYCLO Trac SP foi realizada nos Hospitais das Universidades de London Ontario e Albany New York em pacientes sujeitos a transplantes dos rins do corac o e do figado Estas avaliag es mediram os n veis minimos de ciclosporina no sangue ao longo do tempo em pacientes sujeitos a transplantes Observaram se valores m nimos no sangue no periodo p s transplante entre o 4 dia e o 90 dia nos pacientes sujeitos a transplante dos rins n 10 do corac o n 10 e do figado n 10 no Hospital da Universidade de London Ontario Al m disso foi feita uma avaliac o semelhante nos pacientes sujeitos a transplante dos rins n 18 no Hospital da Universidade de Albany New York Em Albany foram observados n veis m nimos no sangue desde a altura do transplante at 199 dias p s transplante 75 A TABELA II mostra os valores m dios de ciclosporina no sangue e os eventos significativos rejei o ou nefrotoxicidade observados nos pacientes sujeitos a transplantes no Hospital da Universidade de London Ontario Nesse centro os n veis de ciclosporina no sangue dos pacientes foram mantidos entre 400 a 650 ng mL dependendo do tipo de transplante e da condi o cl nica dos pacientes TABELA II Valores temporais de ciclosporina no sangue total em pacientes submetidos a transplantes dos rins do cora o e do f gado medidos com o Kit de Sangue Total CYCLO Tra
189. ovranno essere stabilite per ogni controllo sulla base di un minimo di dieci analisi Si pu quindi ottenere un range accettabile di valori per questi controlli utilizzando 2 deviazioni standard dei valori determinati in precedenza Il Laboratorio di Controllo della Qualit DiaSorin ha stabilito un range per i controlli inclusi nel kit range sono stampati sulle fiale dei controlli Evitare di scambiare i reagenti del kit ad eccezione del tracciante 35 CYCLO Trac SP Per monitorare completamente la costanza e la validit di un analisi RIA si devono controllare altri fattori DiaSorin consiglia di controllare regolarmente i seguenti parametri per garantire prestazioni costanti del kit a Conteggi totali b Legame massimo Conteggi al minuto CPM della provetta del calibratore 0 CPM medio delle provette per il conteggio totale c Legame non specifico CPM della provetta NSB CPM medio delle provette per il conteggio totale d Pendenza della curva di calibrazione Ad esempio monitorare i punti a 80 50 e 20 della linea del calibratore per la riproducibilit analisi dopo analisi 12 CALCOLO DEI RISULTATI Esistono molti metodi per calcolare i risultati di RIA ognuno tende ad ottenere una curva di calibrazione mediante tracciamento dell estensione del legame rispetto alle concentrazioni indicate dei calibratori La curva dell analisi CYCLO Trac SP si ottiene mediante tracciamento della percentuale di B Borispetto alla concentrazione di
190. oxicit observ s chez les patients transplant s l h pital universitaire de Londres dans l Ontario Dans ce centre le taux de sang des patients tait maintenu entre 400 et 650 ng mL de cyclosporine selon le type de transplantation et les conditions cliniques des patients TABLEAU II Valeurs temporaires de cyclosporine dans le sang total chez les patients ayant subi une transplantation de rein de coeur et de foie mesur es par la trousse CYCLO Trac SP sang total Post Rein Coeur FoieC Op ratoire CyA ng mL CyA ng mL CyA ng mL Jour N Ev nd Moyen S D N Ev n Moyen SD N Ev n d Moyen S D 0 E 5 a 4 8 2 438 269 9 161 115 7 10 3 392 138 10 326 176 9 372 111 11 9 6 428 207 10 563 119 10 496 136 14 10 5 387 219 10 598 162 10 1 620 231 21 10 3 487 283 10 5 505 185 10 478 109 30 9 3 416 163 9 4 450 102 10 1 608 217 60 9 A 579 474 9 3 482 171 8 1 437 66 90 9 1 252 105 8 1 433 173 8 347 102 Evenements 24 13 3 totaux v d Cyclosporine 3 75 mg kg 5 mg kg I V devenu 12 mg kg en deux doses divis es d s que possible prednisone 2 5 mg kg avec une pointe 20 mg jour m thylprednisolone 1 2 mg kg En I absence de fonction du rein la cyclosporine a t suspendue et de l OKT3 a t administr une dose de 5 mg kg pendant 10 jours Cyclosporine commenc e au troisi me jour suivant l intervention une dose de 5 mg kg en deux doses divis es pr
191. p K K 1 veg 9 mL CYCLO Trac SP Kalibr torok 0 6 1 veg 2 mL 5 veg 1 mL CYCLO Trac SP ImmunoSep 2 veg 100 mL CYCLO Trac SP Tracer PIROS 1 veg 20 mL CYCLO Trac SP Kontrollok 2 veg 1 mL Meghat roz sok sz ma 200 T ROL S A cimk n jelzettek alapj n a k szlet 2 8 C on t roland Felnyit st k vet en valamennyi reagenst a cimk n jelzett lej rati ideig 2 8 C on kell tartani A reagensek nem haszn lhat k fel a lej rati id t k vet en A k szlet k ls csomagol s n felt ntetett lej rati id a tracer lej rati idej vel egyezik meg A k l nb z gy rt s k szletek reagenseit szigor an tilos sszekeverni 4 1 CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep k k felhaszn l sra k sz reagens Szam r anti eg r sz rum norm l eg r sz rum kever ke foszf t pufferes fiziol gi s s oldatban mely 0 08 Na azidot s tart sit kat tartalmaz K k sz nez ket tartalmaz Haszn lat el tt alaposan r zza fel 4 2 CYCLO Trac SP Kalibr torok 0 6 felhaszn l sra k sz reagens Cyclosporine mentes sz rum tartalmaz 0 1 Na azid ot tart sit k nt Hat ciklosporin kalibr tor a 0 1200 ng mL n vleges koncentr ci tartomanyban human sz rumban 0 1 Na azidot s fel letaktiv anyagot tartalmaz A megfelel6 koncentr ci lot sz monk nt v ltozik s az veg cimk j n ker l felt ntet sre A DiaSorin CYCLO Trac SP kalibr tor hiteles t se USP Cyclosporin Referencia Standard dal t rt nt
192. padr o dever ent o determinar um meio e um desvio padr o para cada controlo utilizando um m nimo de dez ensaios Conseguir ent o obter um intervalo aceit vel de valores para esses controlos usando 2 desvios padr o dos valores previamente determinados O Laborat rio de Controlo de Qualidade da DiaSorin determinou um intervalo para os controlos inclu dos neste kit Esses intervalos est o impressos nos frascos dos controlos N o se recomenda a permuta dos reagentes do kit com a excep o do tra ador 251 CYCLO Trac SP Para um laborat rio monitorizar completamente o desempenho consistente de um ensaio RIA ser necess rio verificar alguns factores adicionais A DiaSorin sugere a verifica o regular dos par metros seguintes para assegurar o desempenho consistente do kit a Contagens totais b Liga o m xima Contagens por minuto CPM do tubo do calibrador 0 CPM m dia dos tubos de contagem total c Liga o n o espec fica CPM do tubo NSB CPM m dia dos Tubos de Contagem Total d Inclina o da curva do calibrador Por exemplo monitorize os pontos 80 50 e 20 da linha do calibrador para uma reprodutibilidade ensaio a ensaio 12 C LCULO DE RESULTADOS Existem diversos m todos para calcular os resultados dos radioimunoensaios Cada um baseia se na obten o de uma curva de calibragem desenhando a extens o da liga o em rela o s concentra es dos calibradores A curva do ensaio CYCLO Trac SP
193. permutabilidade com as amostras de pacientes quando usados com reagentes e um procedimento operacional deste teste de diagn stico in vitro tal como recomendado 4 3 ImmunoSep Anti CYCLO Trac SP reagente pronto a usar O anticorpo monoclonal anti ciclosporina de rato e a pr mistura de soro anti rato de burro soro de rato normal s o dilu dos numa solu o de tamp o fosfato com 0 08 de azida de s dio e um surfactante Agite vigorosamente imediatamente antes de utilizar 4 4 P 125 CYCLO Trac vermelho reagente pronto a usar Um derivado da ciclosporina rotulado com iodo 125 e dilu do em tamp o EDTA de citrato o qual cont m 0 05 de azida de s dio soro humano e um surfactante adicionado corante vermelho 4 5 Controlos CYCLO Trac SP n vel 1 e n vel 2 reagente pronto a usar O soro humano enriquecido com a quantidade adequada de ciclosporina A para obter uma concentra o dentro do intervalo especificado Os intervalos para cada lote est o impressos nos frascos dos controlos inclu dos em cada kit S o adicionados 0 1 de azida de s dio e outros estabilizadores 69 5 AVISOS E PRECAU ES PARA USO DIAGN STICO IN VITRO N o recomendado para o uso interno ou externo em seres humanos ou animais REAGENTES COM MATERIAL DE FONTE HUMANA Trate como se fossem potencialmente infecciosos Cada unidade de doador de soro plasma usados na prepara o deste produto foi testado por um m todo aprovado pelo FDA ameri
194. ple is added cap each tube and vortex it for 15 seconds Centrifuge the capped tubes using 1600 x g at 20 25 C for 5 minutes Take care not to allow the methanol extracts to evaporate before pipetting into the assay tubes Set up labeled 12 x 75 mm test tubes according to the protocol Scheme of the Assay back cover Allow reagents to equilibrate to room temperature 20 25 C before using in the assay Alternately 200 uL of sample may be extracted with 800 uL of methanol g 1118x 10 radius in cm rpm 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 9 14 Add reagents as follows a Total count tubes 100 uL of 15 CYCLO Trac SP red b Nonspecific binding tubes NSB 50 uL of extracted O calibrator 100 of 25 CYCLO Trac SP red 1 0 mL of thoroughly mixed CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep blue c CYCLO Trac SP 0 calibrator 50 uL of extracted CYCLO Trac SP 0 Calibrator 100 of 25 CYCLO Trac SP red d CYCLO Trac SP calibrators A E 50 uL of extracted CYCLO Trac calibrator 100 of 25 CYCLO Trac SP red e Control and unknown samples 50 uL of extracted sample 100 of 25 CYCLO Trac SP red Shake the bottle of Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep vigorously immediately add 1 0 mL of well mixed reagent to all tubes except the total count and NSB tubes Vortex the tubes vigorously and incubate them for 1 hour at 20 25 C Centrifuge the tubes using 1600 x g for 20 minutes at 20 25 C Immediately d
195. porine dans les transplantations de rein de coeur et de foie n ont pas t bien tablis Cela est d en partie aux modifications dans les protocoles de traitement pour les transplantations effectu es aux m thodes disponibles pour le dosage de la cyclosporine et l administration concomitante d autres traitements immunosuppresseurs associ s la cyclosporine 59 31 Une valuation clinique l aide de la trousse CYCLO Trac SP sang total a t conduite dans les h pitaux universitaires de Londres dans l Ontario et d Albany dans l tat de New York chez les patients ayant subi une transplantation de rein de coeur et de foie Ces valuations ont mesur une chute temporaire du taux de cyclosporine dans le sang chez les patients transplant s Une chute de la valeur de sang a t observ e entre 4 et 90 jours apr s l intervention chez les patients ayant subi une transplantation de rein n 10 de coeur n 10 et de foie n 10 l h pital universitaire de Londres dans l Ontario De plus une valuation similaire a t conduite chez les patients ayant subi une transplantation de rein n 18 l h pital universitaire d Albany dans l tat de New York Albany une chute du niveau de sang a t observ dans une p riode allant de la transplantation 199 jours apr s l intervention 21 Le TABLEAU II pr sente les valeurs moyennes de cyclosporine dans le sang et des v nements significatifs rejet ou n phrot
196. r l g konsekvent h gre n dem man fick med HPLC Andra generationens RIA r baserade p monoklonala antikroppar B de specifika och ickespecifika monoklonala antikroppar har tagits fram De specifika antikropparna m ter endast modersubstansen ciklosporin och ger ungef r samma v rden som HPLC De ickespecifika antikropparna m ter b de modersubstansen och metaboliterna och ger ungef r samma resultat som f rsta generationens RIA 3 ANALYSPRINCIP DiaSorin CYCLO Trac SP Whole Blood RIA utnyttjas en specifik monoklonal antikropp som enbart m ter ciklosporin och ej uppvisar n gon korsreaktivitet med metaboliter F re assay m ste man utf ra ett extraktionssteg med metanol p kalibreringsl sningar kontroller och prover Den egentliga assayen best r av ett enda inkubationssteg och utnyttjar en teknik med fasseparation med dubbla antikroppar F r att f renkla proceduren r prim rantikroppen monoklonal musantikropp specifik f r cyklosporin A och sekund rantikroppen antimusantikropp fr n sna i f rv g blandade med en b rare normalt musserum s att man f r ett enda reagens kallat Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep N r man g r en ciklosporinbest mning med satsen extraherar man f rst helblodsprover kalibreringsl sningar och kontroller med metanol Till metanolextrakten tills tts sedan ciklosporin markt med jod 125 och Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep Efter 1 timmes inkubation centrifugeras r ren dekanteras och r
197. ra il primo anticorpo monoclonale del topo specifico per Ciclosporina A e il secondo anticorpo scimmia anti topo vengono premiscelati con un carrier normale siero di topo per produrre un unico reagente denominato Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep 55 Per stabilire i livelli di ciclosporina con questo kit i campioni di sangue intero i calibratori e i controlli vengono dapprima estratti con metanolo Gli estratti vengono quindi combinati con tracciante etichettato con iodio 125 e Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep Dopo un ora di incubazione le provette vengono centrifugate lasciate decantare e quindi contate La quantit di radioattivit rimanente nel precipitato inversamente pro porzionale alla concentrazione di ciclosporina presente nel campione 4 REAGENTI FORNITI CON IL KIT CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep BLU 1 fiala 9 mL Calibratori CYCLO Trac SP 0 6 1 fiala 2 mL 5 fiale 1 mL CYCLO Trac SP ImmunoSep 2 fiale 100 mL Tracciante CYCLO Trac SP ROSSO 1 fiala 20 mL Controlli CYCLO Trac SP 2 fiale 1 mL Numero di test 200 CONSERVAZIONE Il kit deve essere conservato a 2 8 C Dopo I apertura conservare ogni reagente a 2 8 C fino alla data di scadenza indicata sull etichetta reagenti non devono essere utilizzati dopo la data di scadenza La data di scadenza del kit indicata sull etichetta esterna e si riferisce alla data di scadenza del tracciante Non si devono mescolare reagente di lotti diversi 4 1 CYCL
198. ra dosage valeurs ng mL Valeur moyenne Ecart type C V N BAS 46 4 9 10 7 25 MOYEN 186 6 0 3 2 25 ELEVE 625 19 2 3 1 25 Les variations entre essais sont dues l tude de comp tence multi centres des chantillons de sang total Cyclosporine moyenne Ecart type C V N ng mL 91 15 0 16 5 5 Centre 1 203 27 9 13 7 5 543 53 7 9 9 5 71 6 7 9 5 5 Centre 2 173 12 9 7 58 5 466 41 5 8 9 5 78 5 4 6 8 5 Centre 3 195 18 4 9 4 5 500 50 2 10 0 5 87 6 9 7 9 5 Centre 4 200 13 5 6 8 5 505 42 5 8 4 5 78 3 6 4 6 5 Centre 5 192 10 2 5 3 5 497 23 9 4 8 5 Indique une variation intra essai observ e dans un laboratoire commen ant tout juste effectuer des dosages radio immunologiques 24 15 2 EXACTITUDE L EXACTITUDE DU DOSAGE A T V RIFI E PAR LE TEST DE LIN ARIT ET DE R CUP RATION Lin arit parall lisme R cup ration moyenne pour 30 chantillons de patients dilu s en s rie intervalle de concentration 132 1716 ng mL facteur de dilution x valeur de l chantillon dilu R cup ration 100 x valeur d chantillon non dilu Dilution 1 2 1 4 1 8 R cup ration 96 1 93 3 95 9 Ecart type 13 7 19 2 22 6 CM 14 3 20 6 23 6 Exactitude Etude de r cup ration r cup rations moyennes 3 niveaux de cyclosporine ajout e pour 5 chantillons 6 r pliqu s chacun n 30 Cyclosporine ajou
199. radioaktiven Arbeitsbereich nicht essen oder trinken 29 5 Versch ttetes Material aufwischen und den Bereich anschlieBend mit alkalischem Reinigungsmittel oder radiologischer Dekontaminationsl sung wischen Alle benutzten Glasbeh lter gr ndlichst mit Wasser sp len bevor sie zusammen mit anderen Laborbeh ltern aus Glas ausgewaschen werden F r rzte oder Einrichtungen die im Rahmen einer Sondergenehmigung Radioisotope erhalten gilt Folgendes Entgegennahme Gebrauch Weitergabe und Entsorgung radioaktiven Materials unter liegen den Vorschriften und Bedingungen der jeweiligen Sondergenehmigung VORSICHT Dieses Produkt enth lt eine Chemikalie die nach Angaben des US Bundesstaates Kalifornien krebserregend ist WICHTIGER HINWEIS Die auf der Packungsbeilage angegebene Radioaktivit t kann von der auf dem Etikett des Kartons und des Tracer Fl schchens angegebenen etwas abweichen Sowohl das Etikett des Kartons als auch das Etikett des Tracer Fl schchens geben den tats chlichen Wert der Radioaktivit t am Kalibrationsdatum an w hrend die Packungsbeilage die theoretische Radioaktivit t des Kits angibt 6 ANZEICHEN F R M GLICHEN VERFALL DER KIT REAGENZIEN 6 1 Ungew hnliche Partikel in einem der Reagenzien 6 2 Verschiebung der Steigung oder Position der Kalibratorkurve im Vergleich zu den normalen Ergebnissen 6 3 Abnahme der maximalen Bindung 6 4 Hohe nichtspezifische Bindung 6 5 Schlechte Reproduzierbarkeit bei Duplik
200. recisione ed esattezza le fasi di estrazione con metanolo devono essere attentamente seguite si devono utilizzare pipette a sostituzione positiva SMI per distribuire sia il metanolo sia i campioni Le pipette a sostituzione positiva sono inoltre necessarie per trasferire 50 uL di estratto in ogni provetta di analisi 10 2 Aggiungere ogni aliquota di reagente al terzo inferiore della provetta di analisi al fine di garantire una miscela completa di reagenti 10 3 Provette monouso di alcuni costruttori possono dare legami non specifici elevati o provocare un maggiore scivolamento del precipitato 10 4 reagenti IMmunoSep devono essere agitati energicamente immediatamente prima dell uso 10 5 Se un campione d una lettura maggiore rispetto al calibratore superiore estrarre nuovamente il campione utilizzando un rapporto sangue metanolo superiore a 1 4 si consiglia 1 9 o 1 19 Moltiplicare i risultati dell analisi per il fattore di correzione idoneo 10 6 Se non possibile lasciar decantare le provette nei 5 minuti dopo l arresto della centrifuga si consiglia di centrifugare nuovamente le provette 10 7 Eseguire l analisi immediatamente dopo la fase di estrazione 11 CONTROLLO DI QUALITA Ogni laboratorio dovrebbe includere almeno due controlli in ogni analisi per garantire la validit dei risultati di ogni analisi Se si impiegano controlli non analizzati e non stata stabilita una deviazione media e standard tali deviazioni d
201. rin A Ciklosporin Cyklosporin Sandimmun r en cyklisk undekapeptid med svampursprung och starka immunh mmande egenskaper Aven om det alltj mt p g r forskning kring dess verkningsmekanism tycks det som om ciklosporin p verkar metabolismen hos b de T hj lparceller och T suppressorceller vilket h mmar immunsystemet ven om det har visat sig att detta l kemedel r av v rde f r att f rhindra avst tning av nytransplanterade organ har ett antal biverkningar rapporterats d r de allvarligaste utg rs av njur och levertoxiska effekter vid h ga blodniv er av medlet 2 5 Dessutom varierar absorption och metabolisering kraftigt fr n patient till patient 17 19 S ledes m ste doseringen anpassas individuellt och noga f ljas upp f r att man ska f optimal immunh mning med minsta m jliga biverkningar N stan allt cyklosporin i helblod f religger bundet till r da blodkroppar och plasmaproteiner 222 Denna distribution p verkas av f r ndringar av temperatur och hematokrit F r att s kerst lla konse kventa resultat kr vs ett standardiserat protokoll f r provtagningen Det finns f r n rvarande tv metoder att kontrollera ciklosporinniv erna hos patienter h gpresterande v tskekromatografi HPLC och radioimmunoassay RIA f rsta generationens RIA tester anv ndes polyklonala antikroppar som uppvisar h g korsreaktivitet med cirkulerande metaboliter De ciklosporinv rden som erh lls med dessa teste
202. rkungen zu minimieren 8 Fast das gesamte Cyclosporin im Vollblut wird durch die roten Blutzellen und die Plasmaproteine gebunden Die Verteilung h ngt von Ver nderungen des Temperatur und des H matokritwerts ab 22 Um konsistente Ergebnisse zu erzielen ist ein Standardprotokoll f r die Blutentnahme erforderlich Zurzeit gibt es zwei Verfahren zur berwachung des Cyclosporin Spiegels bei Patienten die Hochleistungsfl ssigkeitschromatografie HPLC und den Radio immunoassay RIA Bei der ersten Generation von RIAs wurden polyklonale Antik rper verwendet die eine hohe Kreuzreaktivitat mit den zirkulierenden Stoffwechselprodukten zeigten Die bei diesen RIAs erzeugten Cyclosporin Werte berstiegen stets die bei der HPLC erzeugten Werte Die zweite Generation von RIAs basiert auf einem Verfahren mit monoklonalen Antik rpern Es wurden sowohl spezifische als auch nichtspezifische Antik rper entwickelt Der spezifische Antik rper misst nur die Elternkomponente des Cyclosporins und erzeugt hnliche Werte wie die HPLC Der nichtspezifische Antik rper misst sowohl die Elternkomponente als auch die Stoffwechselprodukte und liefert hnliche Ergebnisse wie die RIAs der ersten Generation 3 TESTPRINZIP Beim CYCLO Trac SP Whole Blood RIA von DiaSorin wird ein spezifischer monoklonaler Antik rper eingesetzt der nur das Cyclosporin misst und keine signifikante Kreuzreaktivitat mit dessen Stoffwechselprodukten zeigt Vor dem Test m
203. ro EDTA per la procedura di estrazione con CYCLO Trac SP NOTA Non usare campioni contenenti eparina 27 PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEL SANGUE INTERO Prelevare il sangue mediante venopuntura in una provetta di vetro da 5 o 10 mL sotto vuoto Si consiglia di usare EDTA 7 2 mg 5 mL di sangue come anticoagulante Non sono richiesti altri additivi o conservanti per mantenere l integrit del campione Se i campioni non vengono utilizzati immediatamente possono essere conservati a 2 8 C o a temperatura inferiore fino a 7 giorni Per tempi di conservazione pi lunghi fino a 3 mesi i campioni dovranno essere congelati a 20 C o a temperatura inferiore 8 2 campioni di sangue intero che sono stati conservati a temperatura di 4 C o che non sono stati lavorati immediatamente devono essere mescolati accuratamente prima di prelevare campioni da analizzare con il kit CYCLO Trac SP Sangue intero 8 ATTREZZATURE E MATERIALI NECESSARI NON FORNITI IN DOTAZIONE 8 1 Provette in vetro borosilicato monouso 12 x 75 mm 8 2 Centrifuga a temperatura controllata adatta per 12 provette da 75 mm 8 3 Contatore ad emissione di scintille gamma adatto per il conteggio di iodio 125 8 4 Mixer Vortex 8 5 Dispositivi per operazioni con pipetta a Pipette a sostituzione positiva da 400 100 uL e 50 b Dosatoria ripetizione calibrati per inviare 1 0 mL e 100 pL 8 6 Metanolo di grado HPLC 8 7 Cappucci per le provette di estrazione Scientific P
204. roducts N T1226 32 58 9 PROCEDURA DI ANALISI 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 9 14 Etichettare 12 provette in vetro da 75 mm per ogni calibratore controllo e campione non noto Versare 400 uL di metanolo di grado HPLC in ogni provetta utilizzando una pipetta a sostituzione positiva Coprire le provette con pellicola qualora i campioni non siano ancora pronti Aggiungere nel metanolo i calibratori i controlli e i campioni di sangue intero utilizzando una pipetta da 100 uL a sostituzione positiva NOTA Iniettare lentamente il campione tenendo la punta della pipetta leggermente sotto la superficie del metanolo Immediatamente dopo l aggiunta del campione chiudere ogni provetta e agitare nel vortex per 15 secondi Centrifugare le provette chiuse a 1600 x g a 20 25 C per 5 minuti Fare attenzione che gli estratti non evaporino prima di iniettarli nelle provette di analisi Preparare 12 provette da 75 mm in base al protocollo dello Schema di analisi sul retro della copertina Lasciare che i reagenti si stabilizzino a temperatura ambiente 20 25 C prima di usarli per l analisi Aggiungere i reagenti come indicato di seguito a Provette per il conteggio totale 100 di 5 CYCLO Trac SP rosso b Provette per legame non specifico NSB 50 uL di calibratore O estratto 100 uL di 135 CYCLO Trac SP rosso 1 0 mL di CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep blu
205. rst genau ist bietet sie keine Gew hr daf r dass alle infizierten Einheiten identifiziert werden k nnen Dieses Produkt kann auch Material humanen Ursprungs enthalten f r welches es noch kein genehmigtes Testverfahren gibt Da keine der zur Zeit bekannten Testmethoden absolute Gew hr f r den Ausschluss des Hepatits B Virus HBV des Hepatitis C Virus HCV des Aids Virus HIV oder anderer Infektionserreger bieten kann sind alle Produkte mit Komponenten humanen Ursprungs unter Einhaltung guter Laborpraktiken und entsprechender Vorsichtsma nahmen laut Empfehlungen des Leitfadens der Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 Auflage Mai 1999 oder aktuelle Auflage als potenziell infekti se Substanzen zu behandeln REAGENZIEN MIT NATRIUMAZID ACHTUNG Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Natriumazid das ggf mit Blei oder Kupferleitungen reagieren und h chst explosive Metallazide bilden kann Zur Entsorgung mit reichlich Wasser nachsp len um Azidbildung zu vermeiden Weitere Informationen finden Sie im Abschnitt Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts des Handbuches Safety Management Nr CDC 22 heraus gegeben von den Centers for Disease Control and Prevention Atlanta Georgia 1976 Gefahrenbezeichnungen der Europ ischen Gemeinschaft f r gef hrliche Stoffe Richtlinie 1999 45 EG R20 21 22
206. rum de souris normal est dilu dans une solution saline de tampon phosphat contenant 0 08 de nitrure de sodium et un surfactant Agitez vigoureusement juste avant l emploi 4 4 18 CYCLO Trac SP rouge r actif pr t l emploi Un d riv de cyclosporine est marqu avec de l iode 125 et dilu dans un tampon de citrate et EDTA contenant 0 05 de nitrure de sodium du s rum humain et un surfactant Un colorant rouge est ajout 4 5 Contr les CYCLO Trac SP niveau 1 et niveau 2 r actif pr t l emploi Du s rum humain est dop avec la quantit appropri e de cyclosporine A de mani re obtenir une concentration comprise dans un intervalle sp cifique Les intervalles de chaque lot sont imprim s sur les tubes de contr le inclus dans chaque trousse 0 1 de nitrure de sodium et d autres stabilisateurs sont ajout s 15 5 AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS POUR USAGE DIAGNOSTIQUE IN VITRO Non pr vu pour une utilisation interne ou externe sur l homme ou l animal REACTIFS CONTENANT DES PRODUITS D ORIGINE HUMAINE Traiter comme potentiellement infectieux Chaque don de s rum plasma intervenant dans la pr paration de ce produit a t test par une m thode agr e par la FDA et s est av r non r actif en pr sence de HBsAG d anticorps anti VHC et d anticorps anti VIH1 2 M me si ces m thodes sont extr mement pr cises elles ne garantissent pas la d tection de tous les dons infect s Ce produit peut galem
207. ry glassware For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a specific license The receipt use transfer and disposal of radioactive materials are subject to the regulations and conditions of your specific license WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause cancer ATTENTION Radioactivity printed in the package insert may be slightly different from the radioactivity printed on the box label and on the tracer vial label The box label and the tracer vial label indicate the actual amount of radioactivity at the calibration date where the package insert indicates the theoretical radioactivity of the kit INDICATIONS OF POSSIBLE DETERIORATION OF KIT REAGENTS 6 1 The presence of abnormal particulate matter in any of the reagents 6 2 A shift in the slope or position of the calibrator curve from what is normally obtained 6 3 A decrease in maximum binding 6 4 A high nonspecific binding 6 5 Poor reproducibility between duplicates Bon 7 8 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION One hundred microliters of EDTA whole blood are required for the CYCLO Trac SP whole blood extraction procedure NOTE Heparinized samples should not be used 2 COLLECTION AND STORAGE OF WHOLE BLOOD Collect blood by venipuncture in a 5 or 10 mL evacuated glass tube EDTA 7 2 mg 5 mL blood should be used as an anticoagulant No further additives or preservatives are required to maintain the i
208. s inmuno depresoras 2 Aunque su mecanismo de acci n se encuentra a n bajo investigaci n la ciclosporina parece afectar al metabolismo de los linfocitos T cooperadores y a los linfocitos T supresores que afecta al sistema inmunitario Si bien esta droga ha demostrado gran utilidad para evitar el rechazo en los transplantes de rganos se ha registrado una serie de efectos adversos 9 1 los m s serios de los cuales consisten en nefrotoxicidad y hepatoxicidad asociadas con altos niveles en sangre de este medicamento Por otra parte la absorci n y el metabolismo de la ciclosporina es muy variable de un paciente a otro 1 Por ello es preciso individualizar y supervisar la dosificaci n para lograr una ptima inmuno supresi n y minimizar los efectos adversos Casi toda la ciclosporina presente en la sangre completa est unida a gl bulos rojos y prote nas plasm ticas Esta distribuci n se ve afectada por los cambios de temperatura y del hematocrito 22 Para garantizar resultados coherentes es necesario un protocolo est ndar para la recogida de sangre En la actualidad existen dos m todos disponibles para supervisar los niveles de ciclosporina en los pacientes cromatograf a l quida de alta resoluci n HPLC y ensayo radioinmunol gico RIA Los ensayos RIA de primera generaci n utilizaban anticuerpos policlonales que mostraron alta reactividad cruzada con metabolitos circulantes Los valores de ciclosporina gen
209. s Y DONNEES DE REDUCTION Le laboratoire QC DiaSorin utilise un programme smoothed spline curve TABLEAU Donn es de l chantillon de sang total DiaSorin CYCLO Trac SP CPM CPM CPM li graph Tube double moyen corrig B T B B0 ng mL Activit totale 51 045 50 892 50 738 NSB 1221 1328 2 6 1434 Calibrateur 0 25 323 25 432 24 104 50 0 25 541 Calibrateurs ng mL A 20 22 781 22 806 21 478 89 1 22 830 B 61 19 850 19 624 18 296 75 9 19 397 C 154 14 843 14 911 13 583 56 4 14 978 D 379 9 506 9570 8 242 34 2 9 633 E 1099 4 893 4 858 3 530 14 6 4823 Echantillons d terminer 1 16 225 16 122 14 794 61 4 126 16 019 2 9 764 9 570 8 242 34 2 379 9 375 Des donn es d chantillons typiques et une courbe d talonnage sont pr sent es au TABLEAU I et la FIGURE 1 ces informations sont fournies titre de r f rence seulement et ne doivent pas tre utilis es pour le calcul d une valeur quelconque 20 Courbe d talonnage de I chantillon de sang total CYCLO Trac SP Bo 100 40 FIGURE 1 13 LIMITES DU DOSAGE 13 1 Les chantillons ne doivent pas tre congel s et d congel s plusieurs fois 13 2 Les temps de num ration doivent tre suffisants pour emp cher l erreur statistique 13 3 Les anticorps monoclonaux comme OKT3 ont t valu s et n ont pas pr sent d interf rence avec le dosage 14 VALEURS ATTENDUES Les taux th rapeutiques de sang pour la cyclos
210. s de Controlo e Preven o de Doen as Atlanta GA 1976 Frases de Risco de Subst ncias Perigosas da Comunidade Europeia Directiva do Conselho 1999 45 EC R20 21 22 Nocivo pela inala o em contacto com a pele e se ingerido R32 O contacto com cidos liberta g s muito t xico S28 Ap s contacto com a pele lave imediatamente com gua em abund ncia REAGENTES COM IODO 125 Este kit cont m material radioactivo que n o excede 9 uCi 333 kBg de iodo 125 Devem ser tomadas todas as precau es apropriadas e usadas boas pr ticas laboratoriais no armazenamento manuseamento e elimina o deste material Para m dicos ou institui es que recebam r dio is topos sob uma licen a geral Este material radioactivo pode ser recebido adquirido possu do e usado apenas por m dicos veterin rios na pr tica da medicina veterin ria laborat rios cl nicos e hospitais e apenas para testes laboratoriais ou testes cl nico in vitro que n o envolvam administra o interna ou externa do material ou a radia o deste para seres humanos ou animais A sua recep o aquisi o posse uso e transfer ncia est o sujeitos aos regulamentos e licen a geral da Comiss o Reguladora Nuclear dos Estados Unidos do estado com o qual a Comiss o chegou a acordo para o exerc cio da autoridade reguladora 1 O armazenamento de qualquer material radioactivo deve ser limitado a uma rea especificamente designada 2 O acesso a materi
211. s la adici n de la muestra tape cada tubo y mezcle en v rtex durante 15 segundos Centrifugue los tubos tapados a 1600 x g y 20 25 C durante 5 minutos Tenga cuidado para que los extractos de metanol no se evaporen antes de dosificarlos en los tubos de ensayo Prepare y etiquete 12 tubos de ensayo de 75 mm de acuerdo con el protocolo Esquema del ensayo contraportada Deje que los reactivos se equilibren a temperatura ambiente 20 25 C antes de utilizarlos en el ensayo A ada los reactivos de este modo a Tubos de cuentas totales 100 uL de 1251 CYCLO Trac SP rojo b Tubos de uni n no espec fica NSB 50 uL de calibrador O extra do 100 uL de 121 CYCLO Trac SP rojo 1 0 mL de CYCLO Trac SP NSB ImmunoSep azul bien mezclado c Calibrador 0 para CYCLO Trac SP 50 uL de Calibrador O CYCLO Trac SP extra do 100 uL de 1251 CYCLO Trac SP rojo d Calibradores A E CYCLO Trac SP 50 uL de calibrador CYCLO Trac extra do 100 uL de 1251 CYCLO Trac SP rojo e Control y muestras desconocidas 50 uL de muestra extra da 100 uL de 121 CYCLO Trac SP rojo Agite con vigor el frasco de Anti CYCLO Trac SP ImmunoSep inmediatamente a ada 1 0 mL de reactivo bien mezclado a todos los tubos salvo los de cuentas totales y los tubos NSB Agite en v rtex con vigor e inc belos durante 1 hora a 20 25 C Centrifugue los tubos a 1600 x g durante 20 minutos a 20 25 C Decante inmediatamente los sobrenadantes de todos los tubos sal
212. so gli ospedali universitari di London Ontario e Albany New York su pazienti che hanno subito trapianti di rene cuore e fegato Durante tali valutazioni sono stati misurati i livelli di trough blood temporali Sono stati esaminati i valori di trough blood dopo il trapianto da 4 a 90 giorni per rene n 10 cuore n 10 e fegato n 10 presso l ospedale universitario di London nell Ontario Una simile valutazione stata condotta su pazienti con trapianto di rene n 18 presso l ospedale universitario di Albany New York Ad Albany sono stati esaminati i livelli di trough blood dal giorno del trapianto per 199 giorni dopo il trapianto 62 La TABELLA II indica i valori ematici di ciclosporina medi ed eventi significativi rigetto o nefrotossicit osservati in pazienti trapiantati dell ospedale universitario di London in Ontario Presso questo centro i livelli ematici dei pazienti sono stati mantenuti da 400 a 650 ng mL di ciclosporina a seconda del tipo di trapianto e delle condizioni cliniche del paziente TABELLA II Valori temporali di ciclosporina nel sangue intero nei pazienti trapiantati di rene cuore e fegato misurati con il kit CYCLO Trac SP Sangue intero Gicino Rene Cuore FegatoC post CyA ng mL CyA ng mL CyA ng mL operatorio N Evento dMedia D S N Evento Media D S N Evento Media D S 0 u o u 4 8 2 438 269 9 161 115 z 7 10 3 392 138 10 326 176 9 98132 1 11 9 6 428 207 1
213. stanti necessario stabilire un protocollo standardizzato per il prelievo del sangue Attualmente sono disponibili due metodi per monitorare i livelli di ciclosporina nei pazienti cromatografia liquida ad alte prestazioni HPLC ed analisi radioimmunologica RIA Il metodo RIA di prima generazione utilizzava anticorpi policlonali i quali presentavano elevata reattivit incrociata con i metaboliti in circolazione valori della ciclosporina ottenuti da questi metodi RIA invariabilmente superavano quelli ottenuti mediante HPLC metodo RIA di seconda generazione si basa su una tecnologia di anticorpo monoclonale 5 Sono stati sviluppati anticorpi monoclonali sia specifici sia non specifici L anticorpo specifico misura solo il composto parente della ciclosporina e d valori simili a quelli ottenuti con HPLC L anticorpo non specifico misura sia il composto parente sia i metaboliti e d risultati simili a quelli dei metodi RIA di prima generazione 3 PRINCIPIO DELL ANALISI Il kit RIA DiaSorin CYCLO Trac SP Sangue intero impiega un anticorpo monoclonale specifico che misura solo la ciclosporina e non presenta alcuna reattivit incrociata significativa con i suoi metaboliti Per i calibratori i controlli e i campioni richiesta una fase di estrazione con metanolo prima dell analisi L analisi stessa consiste di un unica fase di incubazione e utilizza una tecnica di separazione di fase con doppio anticorpo Per semplificare la procedu
214. szerint ki lett vizsg lva s negat v eredm nyt adott HBsAg re HCV antitestre s HIV antitestre n zve B r az ellen rz s nagy pontoss ggal t rt nik nem garant lhat hogy valamennyi fert z t nyez kimutat sra ker l A k szlet tartalmaz olyan hum n eredet anyagokat is amelyek nem esnek tesztel s al Mivel nem ismert olyan metodika amely teljes biztons ggal kiz rja a hepatitis B v rus HBV hepatitis C v rus HCV Hum n Immunodeficiency Virus HIV vagy egy b infektol giai gens jelenl t t minden hum n eredet anyagot k l n sen nagy vint zked sek mellett kell a laborat riumban kezelni a U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4th May 1999 vagy k s bbi el r sainak megfelel en 95 Or BAS 6 NA AZID TARTALM REAGENSEK FIGYELMEZTETES A k szlet n h ny reagense Na azid ot tartalmaz A Na azid lom s r z tartalm vizvezet kekkel reakci ba l pve robban svesz lyes f m azidokat k pez A hullad kot b v zzel eressze le a felszabadul azidok kitapad s nak megakad lyoz s ra Tov bbi inform ci kat a Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts in the Manual Guide Safety Management No CDC 22 issued by the Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 olvashat European Communities Hazardous Substance Risk Phrases Cou
215. t Tag Niere Herzb Leber nach CyA ng mL CyA ng mL CyA ng mL OP N Ereign MW SA N Ereign MW SA N Ereignd MW SA 0 E E 3 2 gt 4 8 2 438 269 9 161 115 7 10 3 392 138 10 326 176 9 372 111 11 9 6 428 207 10 563 119 10 496 136 14 10 5 387 219 10 598 162 10 1 620 231 21 10 3 487 283 10 5 505 185 10 478 109 30 9 3 416 163 9 4 450 102 10 1 608 217 60 9 1 579 474 9 3 482 171 8 1 437 66 90 9 1 252 105 8 1 433 173 8 347 102 Ereignisse 24 13 3 gesamt a Cyclosporin baldige Umstellung von 3 75 5 mg kg intraven s auf 12 mg kg in zwei getrennten Dosen Prednison 2 5 mg kg mit allm hlicher Reduzierung auf 20 mg Tag Methylprednisolon 1 2 mg kg Bei Nierendysfunktion wurde Cyclosporin abgesetzt und stattdessen OKT3 5 mg kg ber 10 Tage gegeben gt Die Cyclosporin Gaben begannen am dritten Tag nach der Operation mit 5 mg kg in zwei getrennten Dosen Prednison 15 mg Tag mit allm hlicher Reduzierung der Menge zus tzlich Azathioprin entsprechend Indikation ALG 50 mg kg als Einmalgabe anschlieRend nur nach Indikation OKT3 7 Tage lang 5 mg kg intraven s nach Indikation c Cyclosporin zuerst intraven s ab Tag 5 oral Beginn mit 4 mg kg und Einstellung entsprechend dem gew nschten Blutspiegel Prednison 15 mg Tag langsam steigern Azathioprin 2 2 5 mg kg langsam absetzen wenn Anzahl der Thrombozyten abnimmt Methylprednisolon 500 mg w hrend der OP und 10 Tage lang 15 mg intraven s OKT3
216. t e ng mL R cup ration Ecart type C V Niveau 1 95 119 17 14 Niveau 2 212 109 11 10 Niveau 3 467 97 7 7 15 3 Sensibilit analytique limites de d tection Lorsqu elle est d finie comme la concentration apparente trois d viations standard des comptes liaison maximale la sensibilit moyenne du dosage CYCLO Trac SP sang total est de 8 7 ng mL n 20 15 4 Sp cificit analytique Moyenne de r activit crois e des m tabolites de cyclosporine dans le dosage CYCLO Trac SP sang total La r activit crois e est d finie comme Concentration de cyclosporine 50 B Bo 100 x Concentration de m tabolite 50 B Bo M tabolite de cyclosporine r action crois e 1 1 7 8 lt 0 1 13 0 1 17 0 7 18 0 2 21 0 8 25 15 5 Interf rence Les substances suivantes ont t dop es en fractions d un ensemble de sang total contenant de la cyclosporine 160 250 ng mL Aucune de ces substances n a provoqu d interf rences avec la d termination de cyclosporine dans les concentrations pr sent es ci dessous Substance Concentration Cholest rol 100 1000 mg dL Triglyc rides 300 1000 mg dL Bilirubine 5 30 mg dL Azathioprine 50 200 ng mL Cim tidine 500 1000 ng mL Nif dipine 100 200 ng mL 6 m thyl prednisolone 20 60 ng mL OKT3 1500 ng mL La liste suivante de m dicaments co administr s a t test e des niveaux de 100 ug mL Ils n ont pr sent aucune interf rence avec l
217. ta higit sab l koncentr ci tartom ny 132 1716 ng mL h g t si faktor x h g tott minta rt ke Visszanyer s 100 x higitatlan minta rt ke Higitas 1 2 1 4 1 8 Visszanyer s 96 1 93 3 95 9 S D 13 7 19 2 22 6 C V 14 3 20 6 23 6 Pontoss g Visszanyer si vizsg lat tlagos visszanyer s 5 mint hoz 3 mennyis gben t rt n ciklosporin hozz ad ssal valamennyib l 6 replik tummal n 30 Hozz adott ciklosporin Visszanyer s SD A ng mL Szint 1 95 119 17 14 Szint 2 212 109 11 10 Szint 3 467 97 7 7 15 3 Analitikai Szenzitivit s detekt l si hat r Meghat rozhat mint az a koncentr ci rt k amelynek be t ssz ma h rom standard devianci val elt r a maximum k t s rt k t l a CYCLO Trac SP Whole Blood Assay atlagos szenzitivitasa 8 7 ng mL n 20 15 4 Analitikai Specificitas Ciklosporin metabolitok keresztreakci ja CYCLO Trac SP Whole Blood assay vel Keresztreakci definicidja Ciklosporin koncentr ci 50 os B Bo nal 100 x x Metabolit koncentr ci 50 os B Bo nal Ciklosporin metabolit Keresztreakci 1 1 7 8 lt 0 1 13 0 1 17 0 7 18 0 2 21 0 8 105 15 5 Interferenci k A k vetkez anyagok ker ltek hozz ad sra ciklosporin tartalm 160 250 ng mL teljes v r pool ok aligotjaihoz Egyik sem okozott interferenci t ciklosporin m r sekor az al bb l that koncentr ci kb
218. untsat maximum binding the mean sensitivity of the CYCLO Trac SP Whole Blood Assay is 8 7 ng mL n 20 15 4 Analytical Specificity Average cross reactivity of cyclosporine metabolites in the CYCLO Trac SP Whole Blood assay Cross reactivity is defined as Cyclosporine concentration at 50 B Bo 100 x Metabolite concentration at 50 B Bo Cyclosporine Metabolite Yo Cross reactivity 1 1 7 8 lt 0 1 13 0 1 17 0 7 18 0 2 21 0 8 12 15 5 Interference The following substances were spiked into aliquots of a whole blood pool containing cyclosporine 160 250 ng mL None of these substances interfered with cyclosporine measurement when present in concentrations listed below Substance Concentration Cholesterol 100 1000 mg dL Triglycerides 300 1000 mg dL Bilirubin 5 30 mg dL Azathioprine 50 200 ng mL Cimetidine 500 1000 ng mL Nifedipine 100 200 ng mL 6 methyl prednisolone 20 60 ng mL OKT3 1500 ng mL The following list of coadministered drugs have been tested at levels up to 100 ug mL and found not to interfere with the assay Acetaminophen Lidocaine N Acetylprocainamide Metoclopramide Cephalosporine Naficillin Chloramphenicol Penicillin Digoxin Propranolol Disopyramide Rifampin Ethosuximide Salicylic Acid Gentamycin Sulfate Tobramycin Kanamycin Verapamil Comparison of DiaSorin CYCLO Trac SP Whole Blood Assay to HPLC Transplant Regression Study Type Line Equation Coefficient n Pharmacokinetic N A Y 0 9
219. us di immunodeficienza HIV o di altri agenti infettivi tutto il materiale di provenienza umana deve essere trattato in conformit con le buone pratiche di laboratorio adottando le precauzioni appropriate come descritto nei manuali dei Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories quarta edizione Maggio 1999 o edizione corrente REAGENTI CONTENENTI SODIO AZIDE ATTENZIONE Alcuni reagenti di questo kit contengono sodio azide La sodio azide pu reagire con componenti in piombo o rame e formare quindi azidi metalliche altamente esplosive AI momento dello smaltimento lavare con abbondante acqua al fine di evitare la formazione di azide Per ulteriori informazioni consultare Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts nel manuale Guide Safety Management No CDC 22 pubblicato dai Centri per il controllo e la Prevenzione delle malattie di Atlanta GA 1976 Frasi di rischio per sostanze pericolose della Comunit Europea Direttiva del Consiglio 1999 45 CE R 20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed Dannoso per inalazione per contatto con la pelle ed ingestione R 32 Contact with acids liberates very toxic gas Il contatto con acidi libera gas altamente tossico S28 After contact with skin wash immediately with plenty of water Dopo il contatto con la pelle lavare immediatamente con abbo
220. utf rdats av den amerikanska Nuclear Regulatory Commission eller av den stat med vilken kommissionen har ing tt ett avtal f r ut vande av regulatorisk myndighet 1 Radioaktivt material f r endast f rvaras p en speciellt avsedd plats Endast auktoriserad personal f r ha tillg ng till radioaktivt material Pipettera aldrig radioaktivt material med munnen Undvik att ta eller dricka i lokaler d r radioaktivt material anv nds Ytor d r spill kan f rekomma skall torkas av och d refter reng ras med ett alkaliskt reng ringsmedel eller radiologisk dekontamineringsl sning Alla glasvaror som anv nds m ste sk ljas noga med vatten innan de diskas tillsammans med andra glasvaror f r laboratoriebruk a Rs 83 F r mottagningar och institutioner som tar emot radioisotoper under en specifik licens N r ni tar emot anv nder verl ter och kasserar radioaktivt material g ller reglerna och villkoren i er specifika licens VARNING Produkten inneh ller en kemikalie som enligt staten Kalifornien r k nd f r att orsaka cancer OBSERVERA Den radioaktivitet som anges p bipacksedeln kan skilja sig n got fr n den aktivitet som anges p etiketterna p kartongen och p flaskan med sp r mnet Etiketterna p kartongen och p flaskan med sp r mnet anger den verkliga radio aktivitetsm ngden vid kalibreringsdatum medan bipacksedeln anger den teoretiska radioaktiviteten f r satsen 6 TECKEN SOM KAN TYDA P EN KVAL
221. vo los de cuentas totales invirti ndolos durante un m ximo de 2 minutos Seque los tubos sobre papel absorbente para eliminar posibles gotas de sobrenadante que puedan quedar en los bordes antes de colocar los tubos hacia arriba Como alternativa pueden extraerse 200 uL de muestra con 800 uL de metanol g 1118x 10 radio en cm rpm 45 9 14 Utilice un contador de centelleo de rayos gamma para contar el precipitado de cada tubo y los tubos de cuentas totales a fin de conseguir precisi n estad stica vea la secci n Limitaciones del procedimiento 10 COMENTARIOS SOBRE EL PROCEDIMIENTO 10 1 Con el fin de obtener la m xima exactitud y precisi n las extracciones con metanol deben realizarse con cuidado deben utilizarse pipetas de des plazamiento positivo SMI para suministrar tanto el metanol como las muestras Tambi n se precisan estas pipetas para transferir 50 uL de extracto de metanol a cada tubo de ensayo 10 2 A ada cada al cuota de reactivo al tercio inferior del tubo de ensayo para asegurar la mezcla completa de los reactivos 10 3 Los tubos desechables de algunos fabricantes pueden generar numerosas uniones no espec ficas u ocasionar una mayor diferencia en la pastilla 10 4 Los reactivos IMmunoSep deben mezclarse con vigor inmediatamente antes de utilizarlos 10 5 Si la lectura de una muestra es mayor que el calibrador m s alto vuelva a extraer la muestra con una proporci n de sangre metanol mayor de 1

Download Pdf Manuals

Related Search

Related Contents

SOP for calibrating and verifying lab equipment for discharging with  こちらのPDF - コアスタッフ株式会社  Xtorm AM109  User manual  Instructions for Use TherMedico NK 1 - schwa  2008年8月版  MPL-7S - ライフオン プロンプター  ミオレット・フォーユー簡易版  MES BONNES RÉSOLUTIONS DE L`ANNÉE NOURRIR  Candy CC267 Manual - Recambios, accesorios y repuestos  

Copyright © All rights reserved. Failed to retrieve file