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M45 MICROGEN LEGIONELLA REF IVD

1. 78 78 100 Pr cision 128 128 100 Sur les 50 isolats de ce groupe 12 taient r currents dans les deux tests Ces 12 isolats appartenaient S aureus 4 C diversus 1 A baimannii 2 P stuartii 1 B cereus 2 K pneumoniae 1 Streptococcus spp 1 Toutefois tous ces isolats ne d veloppent ni ne pr sentent une morphologie relativement atypique lorsqu ils sont cultiv s sur un milieu s lectif de Legionella Dans le cas du B cereus l agglutination s est r v l e atypique filandreuse 70 isolats de L pneumophila et de Legionella spp ont t test s dans Microgen Legionella et dans la trousse de latex de comparaison pour distinguer le s rogroupe 1 des s rogroupes 2 15 disponible SG2 15 dans le Positif 0 3 commerce L pn N gatif y 9 ta Total 8 30 32 70 Aucun isolat du s rogroupe 1 de L pneumophila na manifest de r action crois e avec le r actif test 2 15 et de m me aucun isolat des s rogroupes 2 15 de L pneumophila na manifest de r action crois e avec le r actif test 1 Tous les isolats de Legionella spp non pneumophila n ont pas r agi la fois avec le r actif test 1 et r actif test 2 15 dans Microgen Legionella Le latex des esp ces Legionella a t test par rapport tous les s rogroupes Legionella pneumophila n ayant aucune activit h t rosp cifique d tect e Le latex des esp ces Legionella est con u pour la d tec
2. ALMACENAMIENTO Y VIDA TIL Microgen Legionella deber almacenarse a una temperatura de 2 a 8 C cuando no est en uso El kit no deber utilizarse despu s de la fecha de caducidad impresa en la etiqueta del envase MUESTRAS Se pueden analizar con Microgen Legionella las colonias que han crecido en placas de agar selectivo La morfologia de las colonias examinadas deber ser similar a la de Legionella PROCEDIMIENTO Control de calidad Cada vez que se utilice el kit deber n realizarse los siguientes controles 1 Control de los reactivos Mezclar suavemente los reactivos de l tex del ensayo Microgen M45a M45b M45d y a adir una gota de cada reactivo para separar los pocillos en el portaobjeto para aglutinaci n A adir una gota de soluci n salina M40 a cada gota de reactivo de l tex Con una varilla para mezclar distinta para cada pocillo mezclar concienzudamente el reactivo de l tex y la soluci n salina esparciendo el l quido sobre toda la superficie del pocillo Agitar suavemente el portaobjeto durante 2 minutos y observar la presencia de aglutinaci n Si se observa aglutinaci n por lo menos uno de los reactivos est contaminado y deber utilizarse un kit nuevo 2 Control positivo A adir una gota de control positivo M45c a un pocillo del portaobjeto para aglutinaci n Mezclar con cuidado el reactivo 1 M45a y a adir una gota en el mismo pocillo No dejar que el cuentagotas toque el control po
3. Latex particles coated with polyclonal rabbit antibodies to 10 commonly isolated Legionella species see table below Preserved with 0 099 sodium azide Red cap Preserved with 0 099 sodium azide White cap M40 0 85 Isotonic Saline 2 x 5 0mL Instructions for Use Disposable agglutination slides Disposable mixing sticks Additional Requirements Bacteriological loops Legionella selective medium Glass tubes for boiling 0 85 isotonic saline WARNINGS AND PRECAUTIONS Safety 1 The reagents supplied in this kit are for in vitro diagnostic use only 2 Sodium azide which is used as a preservative in the kit reagents can react with lead or copper plumbing to form potentially explosive metal azides Dispose by flushing with a large volume of water to prevent azide build up 3 Appropriate precautions should be taken when handling or disposing of potential pathogens Decontamination of infectious material can be achieved with sodium hypochlorite at a final concentration of 3 for 30 minutes Liquid waste containing acid must be neutralised before treatment 4 The positive control has been inactivated during the manufacturing process However it should be handled as though potentially infectious Procedural _ Microgen Legionella should be used according to the kit instructions Allow all reagents to reach room temperature before use Do not dilute any of the kit reagents Do not intermix reagents from different
4. contenenti acido devono essere neutralizzati prima di trattarli 4 Il controllo positivo stato inattivato durante il processo produttivo In ogni caso deve essere maneggiato come se fosse potenzialmente infetto Procedurali 1 Utilizzare Microgen Legionella in conformit alle istruzioni del kit 2 Attendere che i reagenti raggiungano la temperatura ambiente prima dell uso 3 Non diluire i reagenti del kit 4 Non scambiare tra loro reagenti provenienti da kit di lotti diversi 5 Non congelare i reagenti del kit 6 Fare in modo che il contagocce del reagente al lattice non tocchi il controllo positivo o il campione batterico 7 Fare attenzione a registrare solo l agglutinazione Le reazioni coagulate o filamentose possono non essere vere agglutinazioni 8 Assicurarsi che il vetrino per agglutinazione sia pulito e asciutto prima dell uso CONSERVAZIONE E PERIODO DI VALIDITA Conservare Microgen Legionella a 2 8 C quando non viene utilizzato Non utilizzare il kit dopo la data di scadenza stampata sull etichetta del contenitore CAMPIONI Con Microgen Legionella si possono esaminare le colonie cresciute su piastre di agar selettive Sottoporre al test colonie morfologicamente simili a quelle di Legionella PROCEDURA Controllo di Qualit Ogni volta che si utilizza il kit necessario effettuare i seguenti controlli 1 Controllo del reagente miscelare delicatamente i reagenti a
5. tre neutralis s avant traitement 4 Le contr le positif a t inactiv lors du processus de fabrication Il doit n anmoins tre manipul comme s il tait potentiellement infectieux Proc dure Utiliser Microgen Legionella conform ment aux instructions de la trousse Laisser tous les r actifs atteindre la temp rature ambiante avant utilisation Ne diluer aucun r actif de la trousse Ne pas intervertir les r actifs de trousses de diff rents lots Ne congeler aucun r actif de la trousse Ne pas laisser le compte gouttes de r actif latex entrer en contact avec le contr le positif ou les chantillons bact riens 7 Enregistrer l agglutination Les r actions caill es ou filandreuses peuvent r v ler l absence d une v ritable agglutination 8 V rifier que la lame d agglutination est propre et s che avant utilisation D D OR CONSERVATION ET DUREE DE CONSERVATION Microgen Legionella doit tre conserv 2 8 C lorsqu il n est pas utilis La trousse ne doit pas tre utilis e apr s la date de p remption imprim e sur l emballage ECHANTILLONS Les colonies cultiv es sur des plaques d agar s lectives peuvent tre test es avec Microgen Legionella La morphologie des colonies test es doit ressembler celle de la Legionella MODE OPERATOIRE Contr le qualit Les contr les suivants doivent tre effectu s chaque utilisation de la trousse 1 C
6. N DEL KIT TEST Part culas de l tex revestidas con anticuerpos policlonales de conejo dirigidos contra el serogrupo 1 de L pneumophila Conservadas con azida s dica al 0 099 Tap n azul TEST 2 15 Part culas de l tex revestidas con anticuerpos contra los serogrupos 2a15 de L pneumophila Conservadas con azida s dica al 0 099 Cuentagotas amarillo CONTROL Suspensi n de ant genos de Legionella desactivados reactivos con los reactivos de ensayo 1 y 2 15 y con Species Conservada con azida s dica al 0 099 Tap n negro M45a Reactivo de ensayo 1 2 5 mL M45b Reactivo de ensayo 2 15 2 5 mL M45c Control positivo 10 mL REAG TEST SPECIES M45d Reactivo de ensayo al g nero 2 5mL Part culas de latex revestidas con anticuerpos policlonales de conejo a 10 aislados corrientes del g nero Legionella v ase la tabla a continuaci n Conservado con azida s dica al 0 099 tap n rojo Conservada con azida s dica al 0 099 Tap n blanco M40 0 85 Soluci n salina isot nica al 0 85 2 x 5 0 mL Instrucciones de uso Portaobjetos de aglutinaci n desechables Varillas para mezclar desechables Requisitos adicionales Asas bacteriol gicas Medio selectivo para Legionella Tubos de vidrio para ebullici n Soluci n salina isot nica al 0 85 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Seguridad 1 Los reactivos de este kit son para uso diagn stico in vitro nicamente 2 La azida s dica que se uti
7. No hay Legionella presente Posible aglutinaci n inespecifica Resultado no concluyente Posible aglutinaci n inespecifica Resultado no concluyente Posible aglutinaci n inespecifica Resultado no concluyente Posible aglutinaci n inespecifica Resultado no concluyente Una pauta de aglutinaci n inespecifica no excluye la presencia de bacterias Legionella pero los resultados deben interpretarse como no concluyentes LIMITACIONES DEL USO 1 Los resultados deber n interpretarse en el contexto de toda la informaci n cl nica y de laboratorio disponible 2 Es posible que las reacciones fibrosas en el portaobjeto no sean reacciones verdaderas positivas y se requieren an lisis adicionales 3 Es posible que los cultivos antiguos o mucoides no proporcionen una suspensi n lisa en soluci n salina y pueden producir una aglutinaci n at pica Estas deber n tratarse previamente mediante ebullici n tal como se describe en el m todo anterior 4 Microgen Legionella est indicado para la identificaci n de los serotipos 1 a 15 de L pneumophila y para la detecci n de una gama de 10 integrantes del g nero Legionella despu s de su cultivo en placas de agar selectivo Las colonias que den resultados positivos deber n confirmarse como Legionella spp Por su incapacidad para crecer en medios de cultivo selectivos para Legionella que sean deficientes en ciste na CARACTER STICAS DE L
8. Test 1 2 15 e Specie Con azide sodica allo 0 099 come conservante Tappo nero M45a Reagente per il Test 1 2 5 mL M45b Reagente per il Test 2 15 2 5 mL M45c Controllo Positivo 1 0 mL REAG TEST SPECIES M45d Reagente per il Test Specie 2 5 mL Particelle di lattice rivestite da anticorpi policlonali di coniglio verso 10 specie di Legionella comunemente isolate vedi tabella sotto Con azide sodica allo 0 099 come conservante Tappo rosso Naci 0 95 M40 Soluzione salina isotonica allo 0 85 2x5 0mL Con azide sodica allo 0 099 come conservante Tappo bianco Istruzioni per Uso Vetrini per agglutinazione monouso Bacchette per miscelazione monouso Ulteriore materiale necessario Anse batteriologiche Mezzo selettivo per Legionella Provette di vetro per bollitura Soluzione salina isotonica allo 0 85 AVVERTENZE E PRECAUZIONI Per la sicurezza 1 I reagenti forniti nel kit sono esclusivamente per uso diagnostico in vitro 2 L azide sodica utilizzata come conservante nei reagenti del kit pu reagire con le tubature in piombo o in rame formando azidi metalliche potenzialmente esplosive Smaltire sciacquando abbondantemente con acqua per evitare l accumulo di azidi 3 Prendere le precauzioni del caso quando si maneggiano o si smaltiscono potenziali patogeni Per la decontaminazione del materiale infetto utilizzare ipoclorito di sodio a una concentrazione finale del 3 per 30 minuti Gli scarti liquidi
9. bact riens Aucune diff rence significative n a t constat e dans les concentrations au point de virage entre les 3 lots et les r sultats qualitatifs de la microplaque correspondaient parfaitement Bei Microgen Legionella handelt es sich um einen Latexagglutinationstest der zur Best tigung von auf selektiven Medien gez chteten Legionella pneumophila und auf bliche Weise isolierten Legionella species bestimmt ist Der Test ist f r Organismen aus Patientenproben mit V a Legionella pneumonia oder aus Umweltproben geeignet Microgen Legionella erm glicht den separaten Nachweis von L pneumophila Serogruppe 1 und Serogruppen 2 15 und auf bliche Weise isolierten Legionella species Hinweis L pneumophila Serogruppe 16 ist nun im Manual of Clinical Microbiology Handbuch der Klinischen Mikrobiologie erw hnt Serogruppe 16 sollte mit Serogruppe 6 kreuzreagieren so dass das Microgen 2 15 Latexreagens theoretisch auch mit Serogruppe 16 Isolaten agglutinieren sollte Das Kit sollte nur von Fachpersonal verwendet werden ZWECKBESTIMMUNG TESTPRINZIP Testreagens 1 enth lt Latexpartikel die mit polyklonalen Kaninchenantik rpern gegen L pneumophila Serogruppe 1 Testreagens 2 15 enth lt Latexpartikel die mit polyklonalen Kaninchenantik rpern gegen L pneumophila Serogruppen 2 15 behandelt worden sind Testreagens Species enth lt Latexpartikel die mit polyklonalen Kaninchenantik rpern gegen 10 auf bliche Weis
10. batteriche una goccia del Reagente per il Test 2 15 alla seconda sospensione e una goccia del Reagente per il Test Specie alla terza sospensione Fare in modo che il contagocce del reagente non tocchi la sospensione 9 Miscelare il reagente e la sospensione utilizzando una diversa bacchetta per miscelazione per ciascuna combinazione Spargere il liquido sull intera superficie del pozzetto 10 Ruotare delicatamente il vetrino per 2 minuti e osservare alla ricerca dell agglutinazione 11 Eliminare le bacchette per miscelazione e i vetrini usati in un disinfettante adatto INTERPRETAZIONE L aggregazione visibile delle particelle di lattice indica una reazione di agglutinazione risultati di Microgen Legionella devono essere cosi interpretati Reagent Reagente eperil peril Test Test 1 2 15 Reagente per il Test Specie Interpretazione Presenza di L E o pneumophila 1 Presenza di L Pneumophila 2 15 Presenza di specie di Legionella Assenza di Legionella Sensibilit 50 50 100 Specificit 78 78 100 Accuratezza 128 128 100 Dei 50 isolati in questo gruppo 12 hanno dato una reazione crociata con entrambi i test Si trattava di isolati di S aureus 4 C diversus 1 A baimannii 2 P stuartii 1 B cereus 2 K pneumoniae 1 Streptococcus spp Comunque tutti i suddetti isolati quando messi in coltura su mezzi selettivi per la Legionella o non crescono o mostrano
11. decin la lumi re des autres informations cliniques et de laboratoire disponibles 2 Les r actions filandreuses sur la lame peuvent ne pas tre des r actions r ellement positives et il est donc n cessaire de proc der d autres tests 3 Des cultures anciennes et ou muco des peuvent ne pas donner une suspension velout e dans la solution saline et provoquer une agglutination atypique Ces cultures doivent tre bouillies comme indiqu pr c demment 4 Microgen Legionella est destin identifier les s rotypes 1 15 de L pneumophila et la d tection d une s quence de 10 Legionella species suite leur culture sur des plaques d agar s lectives Les colonies donnant des r sultats positifs doivent tre confirm es en tant que Legionella spp par leur incapacit se d velopper sur un milieu de culture s lectif Legionella d ficient en cyst ine CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCE Microgen Legionella a t valu par rapport un test d agglutination au latex prouv disponible dans le commerce pour L pneumophila 128 isolats de L pneumophila la Legionella spp non pneumophila et des bact ries potentiellement r currentes ont t test s dans les deux produits Microgen Legionella tous les serogroupes ve ve Total vase ag 50 0 50 disponible dans le commerce Se 0 78 78 tous les s rogroupes Total 50 78 128 Sensibilit 50 50 100 Sp cificit
12. r actif test 2 15 et du r actif test Species Voir la section PRINCIPE DU TEST ci dessus Procedure de test 1 Verser 1 goutte de solution saline isotonique M40 sur chacun des trois puits de la lame d agglutination 2 Utiliser une 6se pour pr lever 3 4 colonies de type Legionella sur la plaque d agar s lective et r aliser un pr l vement gal pais sur la lame le long de chaque goutte de solution saline 3 M langer les colonies avec la solution saline et les mulsionner pour former une suspension lourde velout e en renversant le liquide sur toute la surface du puits 4 Si la suspension reste velout e passer la section 7 Si la suspension est filandreuse ou granuleuse souvent suite des cultures anciennes et ou muco des proc der comme suit 5 Verser 0 5 mL de solution saline isotonique 0 85 dans un tube en verre Pr parer une suspension homog ne charg e d organismes pr lev s sur la plaque d agar s lective 6 Faire bouillir la suspension pendant 5 minutes Laisser refroidir temp rature ambiante Placer 30 uL de suspension bouillie sur chacun des trois puits d une lame d agglutination 7 M langer doucement chaque r actif latex test M45a M45b et M45d pour obtenir une suspension homog ne 8 Ajouter une goutte de r actif test 1 l une des suspensions bact riennes et une goutte de r actif test 2 15 la deuxi me suspension et une goutte de r actif test Spec
13. rpern gegen L pneumophila Serogruppen 2 15 Konserviert mit 0 099 Natriumazid Gelber Verschluss M45a Testreagens 1 2 5mL CONTROL M45c Positivkontrolle 1 0mL Inaktivierte Suspension von Legionellen Antigenen reagiert mit Testreagens 1 2 15 als auch Species Konserviert mit 0 099 Natriumazid Schwarzer Verschluss TEST SPECIES M45a Testreagens Species 2 5mL Latexpartikel behandelt mit polyklonalen Kaninchen Antik rpern gegen auf bliche Weise isolierte Legionella species Siehe Tabelle unten Konserviert mit 0 099 Natriumazid Roter Verschluss NaCl 0 85 M40 0 85 isotone Kochsalzl sung 2 x 5 0mL Konserviert mit 0 099 Natriumazid WeiBer Verschluss Gebrauchsanweisung Einwegobjekttr ger f r die Agglutination Einwegr hrst bchen Zus tzlich werden ben tigt Bakteriologische sen Selektives Medium f r Legionellen Glaskolben zum Erhitzen 0 85 isotone Kochsalzl sung WARNHINWEISE UND SICHERHEITSVORKEHRUNGEN Sicherheit 1 Die Reagenzien in diesem Kit sind nur f r die n vitro Diagnostik gedacht 2 Natriumazid das als Konservierungsmittel f r die Reagenzien verwendet wird kann mit in Abflussinstallationen vorhandenem Blei oder Kupfer reagieren und zur Anreicherung von explosiven Metallaziden f hren Bei Entsorgung mit reichlich Wasser nachsp len um eine Anreicherung des Azids zu vermeiden 3 Beim Umgang oder der Beseitigung von potenziell pathogenem Material sollten e
14. 4 Microgen Legionella previsto per l identificazione dei sierotipi 1 15 di L pneumophila e per la rilevazione di un intervallo di 10 specie di Legionella dopo coltura su piastre di agar selettive Per le colonie che danno risultati positivi la conferma che si tratti di Legionella spp data dell incapacit di crescere su un mezzo di coltura selettivo per la Legionella che non contiene cisteina CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI Microgen Legionella stato valutato nel confronto con un test di agglutinazione al lattice per la L pneumophila disponibile in commercio e ben affermato 128 isolati di L pneumophila Legionella spp non pneumofila e batteri che possono dare una reazione crociata sono stati analizzati con entrambi i prodotti Microgen Legionella tutti i sierogruppi VO VO Totale Test al Lattice O 50 0 50 in commercio tutti i i sierogruppi yo 0 18 18 Totale 50 78 128 Nessun isolato di Sierogruppo 1 di L pneumophila ha provocato una reazione crociata con il Reagente per il Test 2 15 e allo stesso modo nessun isolato dei Sierogruppi 2 15 di L pneumophila ha provocato una reazione crociata con il Reagente per il Test 1 Nessun isolato di Legionella spp non pneumofila ha reagito con il reagente per il test 1 e con il reagente per il test 2 15 del Microgen Legionella Il lattice Legionella Specie stato sperimentato verso tutti i sierogruppi di Legione
15. 45a and add 1 drop to the same well Do not allow the dropper to touch the positive control Mix with a mixing stick rock the slide gently for 2 minutes and observe for agglutination A positive result indicated by agglutination should be seen Repeat this process using Test Reagent 2 15 M45b and Test Reagent Species M45d Again a positive result should be seen If agglutination is not seen with any of the three latex reagents a fresh kit should be used NOTE The reaction strength with the positive control may not be the same for Test Reagent 1 as with Test Reagent 2 15 and Test Reagent Species see PRINCIPLE OF THE TEST above Test Procedure 1 Dispense 1 drop of isotonic saline M40 on to each of three wells of the agglutination slide 2 Using an inoculating loop remove 3 4 Legionella like colonies from the selective agar plate and make a thick even smear on the slide alongside each drop of saline 3 Mix the colonies with the saline and emulsify to form a smooth heavy suspension spreading the liquid over the entire surface of the well 4 If the suspension remains smooth proceed to section 7 If the suspension is stringy or granular often as a result of old and or mucoid cultures proceed as follows 5 Dispense 0 5mL 0 85 isotonic saline into a glass tube Prepare a homogeneous turbid suspension of organisms taken from the selective agar plate 6 Boil the suspension for 5 minutes Allow to cool to room tempera
16. A EJECUCI N Microgen Legionella se ha evaluado en comparaci n con una prueba de aglutinaci n en l tex comercial bien establecida para L pneumophila En ambos productos se analizaron 128 aislados de L pneumophila y bacterias con reacci n cruzada potencial Microgen Legionella todos los serogrupos Posit Negat Total Prueba de l tex Posit 50 0 50 comercial todos los Negat 0 78 78 serogrupos Total 50 78 128 Sensibilidad 50 50 100 Especificidad 78 78 100 Exactitud 128 128 100 De los 50 aislados de este grupo 12 fueron reacciones cruzadas en ambos ensayos Estos fueron aislados de S aureus 4 C diversus 1 A baimannii 2 P stuartii 1 B cereus 2 K pneumoniae 1 y del g nero Streptococcus 1 Sin embargo todos los anteriores o bien no crecen o muestran morfolog as muy at picas al ser cultivados en medios selectivos para Legionella En el caso de B cereus la aglutinaci n fue at pica fibrosa Se analizaron 70 aislados de L pneumophila y Legionella spp tanto en Microgen Legionella como en el kit de l tex de comparaci n para diferenciar entre el serogrupo 1 y los serogrupos 2 a 15 Microgen Legionella i Positivo Positivo L pn a SG1 a er Negativo Total Positivo a SG1 8 0 0 8 Prueba de Positivo l tex a SG2 0 30 0 30 comercial 15 Negativo aL pn 0 32 32 Total 8 30 32 70 Ning n aislado de
17. ANWENDUNGSBESCHR NKUNGEN 1 Die Ergebnisse sollten durch den Arzt immer im Kontext aller vorhandenen klinischen und Laborparameter interpretiert werden 2 Str hnige Reaktionen auf dem Objekttr ger m ssen keine echten positiven Reaktionen sein Daher k nnen weitere Tests notwendig sein 3 Alte und oder schleimige Kulturen k nnten in Kochsalzl sung m glicherweise nicht glatt suspendieren und daher atypisch agglutinieren Diese sollten daher durch Erhitzen vorbehandelt werden wie in obiger Methode beschrieben 4 Microgen Legionella ist zum Nachweis von L pneumophila Serotypen 1 15 und dem Nachweis einer Reihe von 10 Legionella species nach Kultur auf selektiven Agarplatten bestimmt Kolonien mit positiven Ergebnissen sollten zur Best tigung von Legionella spp auf Legionella selektiven Kulturmedien ohne Cystein angez chtet werden wobei das Wachstum ausbleiben sollte LEISTUNGSDATEN Microgen Legionella wurde im Vergleich mit einem g ngigen kommerziell erh ltlichen Latex Agglutinationstest f r L pneumophila untersucht 128 isolierte L pneumophila nicht pneumophile Legionelle spp und eine Reihe von potenziell kreuzreagierenden Bakterien wurden mit beiden Produkten getestet Microgen Legionella alle Serogruppen ve ve Gesamt Kommerzieller ve 50 0 50 Latextest alle Serogruppen YO 0 78 28 Gesamt 50 78 128 Sensitivit t 50 50 100 Spezifit t 78 78 100 Genauigk
18. MICROGEN BIOPRODUCTS CE INTENDED USE Microgen Legionella is a latex agglutination test intended for confirmatory identification of Legionella pneumophila and commonly isolated Legionella species grown on selective media The test is suitable for organisms derived from patients with suspected Legionella pneumonia or from environmental sources Microgen Legionella allows the separate identification of L pneumophila Serogroup 1 and Serogroups 2 15 and commonly isolated Legionella species Note L pneumophila serogroup 16 is now mentioned in the Manual of Clinical Microbiology Serogroup 16 should cross react with serogroup 6 so theoretically the Microgen 2 15 latex reagent should also agglutinate with serogroup 16 isolates The kit is intended for professional use only PRINCIPLE OF THE TEST For Test Reagent 1 latex particles are coated with polyclonal rabbit antibodies raised against L pneumophila Serogroup 1 For Test Reagent 2 15 latex particles are coated with polyclonal rabbit antibodies raised against serogroups 2 15 For Test Reagent Species latex particles are coated with polyclonal rabbit antibodies raised against 10 commonly isolated Legionella species see table below When these latex particles are mixed with a suspension containing the appropriate Legionella bacteria or heat killed antigens from the relevant Legionella bacteria an immunochemical reaction takes place causing the latex particles to agglutinate i
19. anii L anisa L feelei Specificity testing of the Legionella Species Latex indicates that isolates of Legionella sainthelensi sgp 1 erythra hacklaie sgp 1 and tucsonensis can also produce positive results REPRODUCIBILITY Intra batch reproducibility was established by testing sensitivity and specificity of 1 batch of product against serial dilutions of reference and kit control antigens and a panel of 47 bacterial samples Different operators carried out tests on 3 separate occasions End point titres obtained with reference control antigens and qualitative results with the panel were identical in the three assays Inter batch reproducibility was examined by testing sensitivity and specificity of 3 batches of product against serial dilutions of reference and kit control antigens and a panel of 47 bacterial samples Between the 3 batches no significant differences in end point titres were seen and qualitative results with the panel correlated 100 USAGE PREVU Microgen Legionella est un test d agglutination au latex destin identifier de maniere certaine la Legionella pneumophila et les Legionella species commun ment isol es cultiv e sur un milieu s lectif Le test est adapt aux organismes des patients susceptibles de pr senter une Legionella pneumonia ou des sources environnementales Microgen Legionella permet d identifier de mani re s par e le s rogroupe 1 et les s rogroupes 2 15 et de
20. apuchon noir TEST SPECIES M45d R actif test Species 2 5 mL Particules de latex ayant des anticorps polyclonaux de lapin des 10 Legionella species commun ment isol es fix s sur leur paroi voir le tableau ci dessous Conserv es avec de l azoture de sodium a 0 099 capuchon rouge NaCl 0 85 M40 Solution saline isotonique 0 85 2x5 0mL Conserv es avec de l azoture de sodium 0 099 capuchon blanc Mode d emploi Lames d agglutination jetables B tonnets de m lange jetables Mat riels suppl mentaires requis ses bact riologiques Milieu s lectif Legionella Tube de verre pour bullition Solution saline isotonique 0 85 AVERTISSEMENTS ET MESURES DE SECURITE Mesures de s curit 1 Les r actifs fournis dans cette trousse sont destin s une utilisation diagnostique in vitro uniquement 2 L azoture de sodium qui est utilis en tant que conservateur dans les r actifs de la trousse peut pr cipiter avec une tuyauterie en plomb ou en cuivre pour former des azotures m talliques potentiellement explosifs Eliminer en nettoyant grande eau pour pr venir une accumulation d azoture 3 Prendre toutes les mesures appropri es lors de la manipulation ou de l limination des pathog nes potentiels D contaminer les produits infectants avec une solution d hypochlorite de sodium une concentration finale de 3 pendant 30 minutes Les d chets liquides contenant de l acide doivent
21. batches of kits Do not freeze any of the kit reagents Do not allow the latex reagent dropper to touch the positive control or bacterial samples 7 Be careful only to record agglutination Reactions that are curdy or stringy may not be true agglutination 8 Ensure the agglutination slide is clean and dry prior to use DARAN STORAGE AND SHELF LIFE Microgen Legionella should be stored at 2 8 C when not in use The kit should not be used after the expiry date printed on the carton label SPECIMENS Colonies grown on selective agar plates can be tested with Microgen Legionella The morphology of the colonies tested should resemble that of Legionella PROCEDURE Quality Control The following controls should be performed each time the kit is used 1 Reagent Control Gently mix the Microgen test latex reagents M45a M45b M45d and add one drop of each reagent to separate wells on the agglutination slide Add one drop of saline solution M40 to each drop of latex reagent Using a different mixing stick for each well mix the latex reagent and saline thoroughly spreading the liquid over the entire area of the well Rock the slide gently for 2 minutes and observe for agglutination If any agglutination is seen at least one of the reagents is contaminated and a fresh kit should be used 2 Positive Control Add one drop of positive control M45c to one well on the agglutination slide Gently mix Test Reagent 1 M
22. con ant genos de referencia control y los resultados cualitativos con la serie fueron id nticos en los tres an lisis Se evalu la reproducibilidad entre lotes mediante el an lisis de la sensibilidad y la especificidad de tres lotes de producto frente a diluciones seriadas de ant genos de referencia y de control del kit y una serie de 47 muestras bacterianas Entre los tres lotes no se observ ninguna variaci n en los t tulos de criterio de valoraci n y los resultados cualitativos con la serie de muestras bacterianas se correlacionaron en un 100 Microgen Bioproducts Ltd 1 Admiralty Way Camberley Surrey GU15 3DT UK WF2958 2007 11
23. du s rogroupe 1 De m me le r actif latex contenant des anticorps des s rogroupes 2 15 s agglutine uniquement en pr sence d antigenes de l un des s rogroupes 2 15 Le r actif latex recouvert d anticorps Legionella species s agglutine avec les 10 Legionella species isol es voir le tableau ci dessous Les r actions du r actif test 1 avec des antig nes du s rogroupe 1 sont g n ralement plus fortes et plus rapides que celles des r actifs test 2 15 avec des antig nes des s rogroupes 2 15 Ceci est d l effet de dilution du m lange de 15 antis rums diff rents pendant la fabrication des r actifs test 2 15 Le latex des Legionella species r agit de mani re similaire au latex du s rogroupe 1 de la Legionella CONT PRESENTATION DE LA TROUSSE TEST 1 Particules de latex ayant des anticorps polyclonaux du s rogroupe 1 de la L pneumophila fix s sur leur paroi Conserv es avec de l azoture de sodium 0 099 capuchon bleu TEST Particules de latex ayant des anticorps des s rogroupes 2 15 de la L pneumophila fix s sur leur paroi Conserv es avec de l azoture de sodium 0 099 capuchon jaune Eo 5 E 3 xe 2 D M45a R actif test 1 25 mL M45b R actif test 2 15 2 5 mL CONTROL M45c Contr le positif 1 0 mL La suspension d antigenes de Legionella inactiv s r agit aux r actifs test 1 et 2 15 et Species Conserv es avec de l azoture de sodium 0 099 c
24. e isolierte Legionella species Serogruppen behandelt worden sind Siehe Tabelle unten Werden die Latexpartikel mit einer Suspension aus den geeigneten Legionellen oder durch Hitze abget teten Antigenen aus den entsprechenden Legionellen vermischt so findet eine immunchemische Reaktion statt bei der die Latexpartikel zu Aggregaten agglutinieren die mit dem blo en Auge leicht sichtbar sind Das Latexreagens mit Antik rpern gegen Serogruppe 1 wird nur in Anwesenheit der Serogruppe 1 Antigene agglutinieren Das Latexreagens mit Antik rper gegen Serogruppe 2 15 wird nur in Anwesenheit eines der Serogruppe 2 15 Antigene agglutinieren Das Latexreagens mit Antik rpern gegen Legionella species wird mit den 10 relevanten Legionella species agglutinieren Siehe Tabelle unten Reaktionen von Testreagens 1 mit Antigen der Serogruppe 1 verlaufen generell st rker und schneller als von Testreagens 2 15 mit Antigenen der Serogruppen 2 15 Dies ist auf die verd nnende Wirkung des Mischens von 15 verschiedenen Antiseren w hrend der Herstellung von Testreagens 2 15 zur ckzuf hren Der Latex der Legionella species reagiert auf hnliche Weise auf den Latex der Legionella pneumophila Serogruppe 1 CONT INHALT DES KITS TEST Latexpartikel behandelt polyklonalen Kaninchen Antik rpern gegen L pneumophila Serogruppe 1 Konserviert mit 0 099 Natriumazid Blauer Verschluss TEST 205 M45b Testreagens 2 15 2 5mL Latexpartikel behandelt mit Antik
25. eit 128 128 100 Von den 50 Isolaten dieser Gruppe haben 12 in beiden Tests kreuzreagiert Es handelte sich dabei um S aureus 4 C diversus 1 A baimannii 2 P stuartii 1 B cereus 2 K pneumoniae 1 Streptococcus spp Entweder haben alle der o g kein Wachstum oder atypische Morphologien bei Anz chtung auf Legionella selektiven Medien gezeigt Im Falle von B cereus zeigte sich eine atypische Agglutination str hnig 70 isolierte L pneumophila und Legionella spp wurden sowohl mit Microgen Legionella als auch mit dem Vergleichs Latexkit getestet um zwischen den Serogruppen 1 und Serogruppen 2 15 zu unterscheiden Microgen Legionella SGI SG2 15 L pn Gesa Positiv Positiv Negativ mt SG1 Positiv 8 y 0 8 Kommerziell SG2 15 er Latextest Positiv 9 2 gt L pn negativ 0 32 32 Gesamt 8 30 32 70 Keine der isolierten L pneumophila Serogruppe 1 hat mit Testreagens 2 15 kreuzreagiert Genauso hat keine isolierte L pneumophila Serogruppen 2 15 mit Testreagens 1 kreuzreagiert Alle isolierten nicht pneumophilen Legionella spp waren sowohl mit Testreagens 1 als auch mit Testreagens 2 15 von Microgen Legionella nicht reaktiv Latex der Legionella Species wurde gegen alle Legionella pneumophila Serogruppen getestet wobei keine Kreuzreaktivit t nachgewiesen wurde Der Latex der Legionella Species ist zum Nachweis von 10 Legionella Species vorgesehen Dies sind insbes
26. er der drei Latexreagenzien keine Agglutination sichtbar wird sollte ein neues Kit benutzt werden ANMERKUNG Die Reaktionsst rke mit der Positivkontrolle kann bei Testreagens 1 und Testreagens 2 15 sowie Testreagens Species unterschiedlich sein Siehe TESTPRINZIP weiter oben Testverfahren 1 Bringen Sie 1 Tr der isotonen Kochsalzl sung M40 in eine Kavit t eines Agglutinationsobjekttr gers auf 2 Entfernen Sie von der selektiven Agarplatte 3 4 Legionellen hnliche Kolonien mittels einer Impf se und machen Sie einen dicken gleichm igen Ausstrich neben jeden Tr der Kochsalzl sung 3 Vermischen Sie die Kolonien mit der Kochsalzl sung und verstreichen Sie sie zu einer glatten Suspension ber die gesamte Oberfl che der Kavit t 4 Bleibt die Suspension glatt fahren Sie mit Abschnitt 7 fort Erscheint die Suspension str hnig oder k rnig h ufig als Ergebnis alter und oder schleimiger Kulturen fahren Sie wie folgt fort 5 Geben Sie 0 5 mL 0 85 isotoner Kochsalzl sung in den Glaskolben Bereiten Sie eine homogene dickfl ssige Suspension aus Organismen der selektiven Agarplatte vor 6 Suspension 5 Minuten lang erhitzen Auf Raumtemperatur abk hlen lassen 30 ul gekochte Suspension in je drei Kavit ten eines Objekttr gers aufbringen 7 Sch tteln Sie die beiden Test Latex Reagenzien M45a M45b und M45d vorsichtig um eine homogene Suspension zu erreichen 8 Geben Sie 1 Tr Testreagens 1 z
27. ies la troisi me suspension Ne pas laisser le compte gouttes de r actif entrer en contact avec la suspension 9 M langer le r actif et la suspension avec un nouveau b tonnet de m lange pour chaque combinaison Verser le liquide sur toute la surface du puits 10 Remuer doucement la lame pendant 2 minutes et observer l apparition de l agglutination 11 Jeter les b tonnets de m lange et les lames usag s dans un d sinfectant appropri INTERPRETATION L agglutination est indiqu e par une agr gation visible des particules de latex Les r sultats Microgen Legionella doivent tre interpr t s comme suit R actif test Interpr tation Species R actif R actif test 1 test 2 15 L pneumophila 1 pr sente L pneumophila 2 15 pr sente Legionella species pr sente Legionella non pr sente Possible agglutination non sp cifique R sultat non concluant Possible agglutination non sp cifique R sultat non concluant Possible agglutination non sp cifique R sultat non concluant Possible agglutination non sp cifique R sultat non concluant Un sch ma d agglutination non sp cifique n exclut pas la pr sence de la de la bact rie Legionella mais les r sultats doivent tre interpr t s comme tant peu concluants LIMITES D UTILISATION 1 Les r sultats doivent tre interpr t s par le m
28. ione immunochimica che provoca l agglutinazione delle particelle di lattice in aggregati facilmente visibili a occhio nudo Il reagente al lattice rivestito con anticorpi anti sierogruppo 1 si agglutiner solo in presenza degli antigeni del sierogruppo 1 Il reagente al lattice rivestito con anticorpi anti sierogruppi 2 15 si agglutiner solo in presenza degli antigeni di uno dei sierogruppi 2 15 Il reagente al lattice rivestito con anticorpi di specie di Legionella agglutiner con le 10 specie rilevanti di Legionella vedere tabella sotto Le reazioni del Reagente per il Test 1 con gli antigeni del Sierogruppo 1 sono solitamente pi intense e pi rapide di quelle tra il Reagente per il Test 2 15 e gli antigeni dei Sierogruppi 2 15 Ci a causa dell effetto diluizione dovuto alla miscelazione di 15 differenti antisieri durante la produzione del Reagente per il Test 2 15 Il lattice delle specie di Legionella reagisce in maniera simile al lattice del sierogruppo 1 di Legionella pneumophila CONT PRESENTAZIONE DEL KIT TEST 1 Particelle di lattice rivestite con anticorpi policlonali di coniglio anti sierogruppo 1 di L pneumophila Con azide sodica allo 0 099 come conservante Tappo blu TEST Particelle di lattice rivestite con anticorpi anti sierogruppi 2 15 di L pneumophila Con azide sodica allo 0 099 come conservante Tappo giallo CONTROL Sospensione di antigeni di Legionella inattivati reattivi con i Reagenti per il
29. l lattice per il test Microgen M45a M45b M45d e aggiungere una goccia di ciascun reagente a due diversi pozzetti sul vetrino per agglutinazione Aggiungere una goccia di soluzione salina M40 a ogni goccia di reagente al lattice Utilizzando una diversa bacchetta per miscelazione per ciascun pozzetto miscelare accuratamente il reagente al lattice e la soluzione salina spargendo il liquido su tutta la superficie del pozzetto Ruotare delicatamente il vetrino per 2 minuti e osservare alla ricerca dell agglutinazione Se si osserva agglutinazione almeno uno dei reagenti contaminato ed necessario utilizzare un kit nuovo 2 Controllo Positivo aggiungere una goccia di controllo positivo M45c a un pozzetto del vetrino per agglutinazione Miscelare delicatamente il Reagente per il Test 1 M45a e aggiungerne 1 goccia allo stesso pozzetto Fare in modo che il contagocce non tocchi il controllo positivo Miscelare con una bacchetta per miscelazione ruotare delicatamente il vetrino per 2 minuti e osservare alla ricerca dell agglutinazione Si deve osservare un risultato positivo indicato dall agglutinazione Ripetere la procedura utilizzando il Reagente per il Test 2 15 M45b e il Reagente per il Test Specie M45d Di nuovo si deve osservare un risultato positivo Se non si osserva agglutinazione con alcuno dei tre reagenti al lattice necessario utilizzare un kit nuovo NOTA L intensit della reazione con il controllo positiv
30. l serogrupo 1 de L pneumophila present reacci n cruzada con el reactivo de ensayo 2 15 y de manera similar ning n aislado de los serogrupos 2 15 de L pneumophila tuvo reacci n cruzada con el reactivo de ensayo 1 Ninguno de los aislados de Legionella no pneumophila reaccion con el reactivo de ensayo 1 o con el reactivo de ensayo 2 15 de Microgen Legionella El reactivo Legionella Species Latex ha sido ensayado con todos los serogrupos de Legionella pneumophila sin que se hayan encontrado reacciones cruzadas Legionella Species Latex est dise ado para detectar 10 bacterias del g nero Legionella que son G nero Legionella 10 especies de destino L micdadei L bozemanii 1 L bozemanii 2 L dumoffi L longbeachae 1 L longbeachae 2 L jordanis L gormanii L anisa L feelei Los ensayos de especificidad del reactivo de l tex Legionella Species indican que tambi n pueden arrojar resultados positivos los aislados de Legionella sainthelensi sgp 1 erythra hacklaie sgp 1 y tucsonensis REPRODUCIBILIDAD Se evalu la reproducibilidad intralote mediante el an lisis de la sensibilidad y la especificidad de un lote de producto frente a diluciones seriadas de antigenos de referencia y de control del kit y una serie de 47 muestras bacterianas Diferentes operadores llevaron a cabo las pruebas en tres ocasiones distintas Los t tulos de criterio de valoraci n obtenidos
31. liza como conservante en los reactivos del kit puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as para formar azidas met licas que son potencialmente explosivas Debe desecharse lavando con abundante agua para evitar la acumulaci n de azidas 3 Deben tomarse las precauciones apropiadas al manipular o eliminar los pat genos potenciales La descontaminaci n del material infeccioso puede obtenerse con hipoclorito s dico a una concentraci n final del 3 durante 30 minutos Los desechos l quidos que contienen cidos deben neutralizarse antes de su tratamiento 4 El control positivo se ha desactivado durante el proceso de fabricaci n No obstante deber ser manipulado como si fuera potencialmente infeccioso Procedimiento 1 Microgen Legionella deber emplearse seg n las instrucciones del kit Asegurarse de que todos los reactivos alcancen la temperatura ambiental antes de su uso No diluir ninguno de los reactivos del kit No mezclar reactivos de lotes diferentes de kits No congelar ninguno de los reactivos del kit No dejar que el cuentagotas del reactivo de l tex toque el control positivo ni las muestras bacterianas 7 Tener el cuidado de anotar nicamente la aglutinaci n Es posible que las reacciones que tienen aspecto de cuajo o fibrosas no se traten de verdaderas aglutinaciones 8 Asegurarse de que el portaobjeto para la aglutinaci n est limpio y seco antes de su uso D D OR
32. lla pneumophila senza rilevamento di reattivit crociata Il lattice Legionella Specie destinato a mettere in evidenza 10 specie di Legionella Queste sono le seguenti Specie di Legionella 10 specie bersaglio L micdadei L bozemanii 1 L bozemanii 2 L dumoffi L longbeachae 1 L longbeachae 2 L jordanis L gormanii L anisa L feelei Il test di specificit del lattice Legionella Specie indica che gli isolati di Legionella sainthelensi sgp 1 erythra hacklaie sgp 1 e tucsonensis ossono anche produrre risultati positivi RIPRODUCIBILITA La riproducibilit intra lotto stata definita esaminando la sensibilit e la specificit di 1 lotto di prodotto nei confronti di diluizioni seriate di antigeni di riferimento e di controllo del kit e di un gruppo di 47 campioni batterici Operatori diversi hanno effettuato i test in tre occasioni distinte II punto finale delle titolazioni ottenute con gli antigeni di riferimento controllo e i risultati qualitativi con il gruppo di campioni sono risultati identici nelle tre prove La riproducibilit inter lotti stata esaminata analizzando la sensibilit e la specificit di 3 lotti di prodotto nei confronti di diluizioni seriate di antigeni di riferimento e di controllo del kit e di un gruppo di 47 campioni batterici Fra i 3 lotti non sono state osservate differenze significative del punto finale delle titolazioni e i risu
33. ltati qualitativi con il gruppo di campioni hanno presentato una correlazione del 100 er Microgen Legionella es una prueba de aglutinaci n de l tex indicada para la confirmaci n de la identificaci n de Legionella pneumophila y de otros aislados corrientes del g nero Legionella cultivados en medios selectivos La prueba es adecuada para los microorganismos obtenidos de pacientes con sospechad e neumon a por Legionella o de fuentes ambientales Microgen Legionella permite la identificaci n por separado del serogrupo 1 y de los serogrupos 2 a 15 de L pneumophila as como otros aislados corrientes del g nero Legionella Nota El serogrupo 16 de L pneumophila es mencionado ahora en el Manual de Microbiolog a Cl nica Manual of Clinical Microbiology Cabe esperar una reacci n cruzada del serogrupo 16 con el serogrupo 6 por lo cual en teor a el reactivo Microgen 2 15 latex deber a tambi n aglutinar con aislados del serogrupo 16 Kit para uso nicamente por profesionales INDICACIONES DE USO PRINCIPIO DEL ENSAYO En el caso del Reactivo de ensayo 1 las part culas de l tex est n revestidas con anticuerpos policlonales de conejo dirigidos contra el serogrupo 1 de L pneumophila En el caso del Reactivo de ensayo 2 15 las part culas de l tex est n revestidas con anticuerpos policlonales de conejo dirigidos contra los serogrupos 2 a 15 de L pneumophila En el caso del reactivo de ensayo Species las par
34. morfologia molto atipica Nel caso del B cereus Pagglutinazione risultata atipica filamentosa 70 isolati di L pneumophila e Legionella spp sono stati esaminati con il Microgen Legionella e con il kit al lattice di confronto per differenziare il Sierogruppo 1 dai Sierogruppi 2 15 Possibile agglutinazione aspecifica Risultato non decisivo Possibile agglutinazione aspecifica Risultato non decisivo Possibile agglutinazione aspecifica Risultato non decisivo Microgen Legionella SG1 SG2 15 L pn Positivo Positivo Negativo Totale SG1 Positivo 8 0 0 8 Test al SG2 15 Lattice in a 0 30 0 30 commercio Positivo L pn negativo 9 9 pe ve Totale 8 30 32 70 Possibile agglutinazione aspecifica Risultato non decisivo Uno schema di agglutinazione aspecifica non preclude la presenza di batteri Legionella ma i risultati devono essere interpretati come non decisivi LIMITAZIONI D USO 1 I risultati devono essere interpretati da un clinico nel contesto di tutte le informazioni disponibili cliniche e di laboratorio 2 Le reazioni filamentose sul vetrino possono non essere vere reazioni positive e sono necessari ulteriori test 3 Le colture vecchie e o mucoidi possono non dare una sospensione omogenea nella soluzione salina e possono dar luogo ad agglutinazione atipica In questi casi pretrattare con la bollitura come descritto in precedenza
35. nto aggregates which are easily visible to the naked eye The latex reagent coated with serogroup 1 antibodies will only agglutinate in the presence of serogroup 1 antigens The latex reagent coated with serogroup 2 15 antibodies will only agglutinate in the presence of antigens from any one of the serogroups 2 15 The latex reagent coated with Legionella species antibodies will agglutinate with the 10 relevant Legionella species see table below Reactions of Test Reagent 1 with serogroup 1 antigens are generally stronger and faster than with those between Test Reagent 2 15 and serogroup 2 15 antigens This is because of the dilution effect of blending 15 different antisera during manufacture of Test Reagent 2 15 The Legionella species latex reacts in a similar manner to the Legionella pneumophila serogroup 1 latex CONT KIT PRESENTATION TEST EX M45a Test Reagent 1 2 5mL Latex particles coated with rabbit polyclonal antibodies to L pneumophila serogroup 1 Preserved with 0 099 sodium azide Blue cap Latex particles coated with polyclonal rabbit antibodies to L pneumophila serogroups 2 15 Preserved with 0 099 sodium azide Yellow cap M45b Test Reagent 2 15 2 5mL M45 MICROGEN LEGIONELLA IVD M45c Positive Control 1 0mL Suspension of inactivated Legionella antigens reactive with Test Reagents 1 2 15 and Species Preserved with 0 099 sodium azide Black cap REAG TEST SPECIES M45d Test Reagent Species 2 5mL
36. ntsprechende Sicherheitsvorkehrungen getroffen werden Die Dekontamination infekti sen Materials kann mit Natriumhypochlorit bei einer Endkonzentration von 3 ber 30 Minuten erfolgen Fl ssige Abfallstoffe die S uren enthalten m ssen vor der Behandlung neutralisiert werden 4 Die Positivkontrolle wurde w hrend des Herstellungsprozesses inaktiviert Trotzdem sollte dieses Produkt als potenziell infekti s behandelt werden Anwendung 1 Microgen Legionella sollte gem der Gebrauchsanweisung benutzt werden 2 Alle Reagenzien sollten vor der Verwendung Raumtemperatur haben 3 Keines der Reagenzien im Kit sollte verd nnt werden 4 Reagenzien verschiedener Chargen sollten nicht miteinander vermischt werden 5 Keines der Reagenzien im Kit sollte eingefroren werden 6 Die Latexreagenzflasche sollte nicht mit der Positivkontrolle oder den Bakterienproben in Ber hrung kommen 7 Vergewissern Sie sich dass tats chlich eine Agglutination vorliegt Flockige oder strahnige Ergebnisse m ssen keine Agglutination darstellen 8 Vergewissern Sie sich dass der Objekttr ger vor der Verwendung sauber und trocken ist AUFBEWAHRUNG UND HALTBARKEIT Microgen Legionella sollte bei Nichtverwendung bei 2 8 C gelagert werden Das Kit sollte nicht nach dem Ablaufdatum auf dem Verpackungsetikett benutzt werden PROBEN Mit Microgen Legionella k nnen Kolonien die auf selektiven Agarplatten gez chtet wurden gete
37. o pu non essere la stessa con il Reagente per il Test 1 e con il Reagente per il Test 2 15 e con il Reagente per il Test Specie Vedere sopra il PRINCIPIO DEL TEST Procedura del test 1 Dispensare 1 goccia di soluzione salina isotonica M40 su ognuno dei tre pozzetti del vetrino per agglutinazione 2 Utilizzando un ansa da inoculo rimuovere dalla piastra di agar selettiva 3 4 colonie Legionella simili ed eseguire sul vetrino uno striscio spesso e uniforme a fianco di ciascuna goccia di soluzione salina 3 Miscelare le colonie con la soluzione salina ed emulsionare fino a formare una sospensione densa e omogenea spargendo il liquido sull intera superficie del pozzetto 4 Se la sospensione rimane omogenea passare alla sezione 7 Se la sospensione filamentosa o granulare spesso come risultato di colture vecchie e o mucoidi procedere nel seguente modo 5 Dispensare in una provetta 0 5 mL di soluzione salina isotonica allo 0 85 Preparare una sospensione torbida omogenea di organismi presi dalla piastra di agar selettiva 6 Bollire la sospensione per 5 minuti Lasciare raffreddare a temperatura ambiente Porre 30uL della sospensione bollita su ciascuno dei tre pozzetti di un vetrino per agglutinazione 7 Miscelare delicatamente ciascun reagente al lattice per il test M45a M45b e M45d per garantire che la sospensione sia omogenea 8 Aggiungere una goccia di Reagente per il Test 1 a una delle sospensioni
38. ondere Legionella species 10 Zielspecies L micdadei L bozemanii 1 L bozemanii 2 L dumoffi L longbeachae 1 L longbeachae 2 L jordanis L gormanii L anisa L feelei Die Spezifizit tstestung des Latex der Legionella Species weist darauf dass Isolate von Legionella sainthelensi sgp 1 erythra hacklaie sgp 1 und tucsonensis ebenfalls zu positiven Ergebnissen f hren k nnen REPRODUZIERBARKEIT Die Reproduzierbarkeit innerhalb der Charge wurde durch Testung der Sensitivit t und Spezifit t 1 Produktcharge im Vgl zu einer Verd nnungsreihe von Referenz und Kit Kontrollantigenen und einer Reihe von 47 Bakterienproben untersucht Verschiedene Anwender f hrten die Tests bei 3 verschiedenen Gelegenheiten durch Die Endpunkttiter die mittels der Referenz Kontrollantigene und der qualitativen Ergebnisse mit den Bakterienproben ermittelt wurden waren in den drei Analysen identisch Die Reproduzierbarkeit zwischen den Chargen wurde durch Testung der Spezifit t von 3 Produktchargen im Vgl zu einer Verd nnungsreihe von Referenz und Kit Kontrollantigenen und einer Reihe von 47 Bakterienproben untersucht Zwischen den 3 Chargen ergaben sich keine signifikanten Differenzen bei den Endpunkttitern und die qualitativen Ergebnisse der Bakterienproben korrelierten zu 100 QD Microgen Legionella un test di agglutinazione al lattice previsto per Pidentificazione c
39. onfermativa di Legionella pneumophila e di specie di Legionella comunemente isolate cresciute su mezzi selettivi Il test adatto agli organismi derivati da pazienti con sospetta polmonite da Legionella o da fonti ambientali Microgen Legionella consente l identificazione separata del Sierogruppo 1 e dei Sierogruppi 2 15 di L Pneumophila e di specie di Legionella comunemente isolate Nota Il sierogruppo 16 di L pneumophila ora menzionato nel Manuale di Microbiologia Clinica Il sierogruppo 16 dovrebbe cross reagire con il sierogruppo 6 cos teoricamente il reagente al lattice Microgen 2 15 dovrebbe anche agglutinare con gli isolati del sierogruppo 16 Il kit solo per uso professionale USO PREVISTO PRINCIPIO DEL TEST Il Reagente per il Test 1 contiene particelle di lattice rivestite con anticorpi policlonali di coniglio diretti verso il Sierogruppo 1 di L Pneumophila Il Reagente per il Test 2 15 contiene particelle di lattice rivestite con anticorpi policlonali di coniglio diretti verso i Sierogruppi 2 15 di L pneumophila Il Reagente per il Test Specie contiene particelle di lattice rivestite con anticorpi policlonali di coniglio diretti verso 10 specie di Legionella comunemente isolate vedere tabella sotto Quando le particelle di lattice vengono miscelate con una sospensione contenente gli antigeni dei batteri Legionella adeguati o gli antigeni uccisi al calore dei batteri Legionella rilevanti si verifica una reaz
40. ontr le r actif M langer doucement les r actifs latex test Microgen M45a M45b M45d et ajouter une goutte de chaque r actif pour s parer les puits sur la lame d agglutination Ajouter une goutte de solution saline M40 chaque goutte de r actif latex Utiliser un b tonnet de m lange diff rent pour chaque puits et m langer le r actif latex et la solution saline soigneusement en renversant le liquide sur la surface enti re du puits Remuer doucement la lame pendant 2 minutes et observer l apparition de l agglutination Une agglutination visible implique la contamination d au moins un des r actifs utiliser une nouvelle trousse 2 Contr le positif Ajouter une goutte de contr le positif M45c a un puits sur la lame d agglutination M langer doucement le r actif test 1 M45a et ajouter 1 goutte au m me puits Ne pas laisser le compte gouttes entrer en contact avec le contr le positif M langer avec un b tonnet de m lange remuer doucement la lame pendant 2 minutes et observer l apparition d une agglutination Le r sultat indiqu par l agglutination doit tre positif R p ter ce processus avec le r actif test 2 15 M45b et le r actif test Species M45d Le r sultat doit de nouveau tre positif Si aucun des trois r actifs latex ne produit d agglutination utiliser une nouvelle trousse REMARQUE La puissance de r action avec le contr le positif du r actif test 1 peut diff rer de celle du
41. s Legionella species commun ment isol es Remarque Le s rogroupe 16 de la L pneumophila est d sormais mentionn dans le Manuel de Microbiologie Clinique Le s rogroupe 16 devant poss der une activit h t rosp cifique avec le s rogroupe 6 le r actif au latex Microgen 2 15 doit donc th oriquement s agglutiner galement avec les isolats du s rogroupe 16 La trousse est usage professionnel uniquement PRINCIPE DU TEST Pour le r actif test 1 les particules de latex ont des anticorps de lapin polyclonaux fix s sur leur paroi et cultiv s par rapport au s rogroupe 1 de la L pneumophila Pour les r actifs test 2 15 les particules de latex ont des anticorps de lapin polyclonaux fix s sur leur paroi et cultiv s par rapport aux s rogroupes 2 15 de la L pneumophila Pour le r actif test species les particules de latex ont des anticorps de lapin polyclonaux fix s sur leur paroi et cultiv s par rapport 10 Legionella species commun ment isol es voir le tableau ci dessous Lorsque ces particules de latex sont m lang es une suspension contenant la bact rie Legionella appropri e ou des antig nes tu s par la chaleur de la bact rie L gionella impliqu e une r action immunochimique se produit entra nant l agglutination des particules de latex en agr gats facilement perceptibles l oeil nu Le r actif latex contenant des anticorps du s rogroupe 1 s agglutine uniquement en pr sence d antigenes
42. si n turbia y homog nea de microorganismos extra dos de la placa de agar selectivo 6 Hervir la suspensi n durante 5 minutos Dejar que enfr e a temperatura ambiente Colocar 30 ul de suspensi n hervida en cada uno de tres pocillos de un portaobjeto de aglutinaci n 7 Mezclar con cuidado cada reactivo de l tex de ensayo M45a M45b y M45d para asegurar una suspensi n homog nea 8 A adir una gota de reactivo de ensayo 1 a una de las suspensiones bacterianas una gota de reactivo de ensayo 2 15 a la segunda suspensi n y una gota del reactivo de ensayo Species a la tercera suspensi n No permitir que el cuentagotas toque la suspensi n 9 Mezclar el reactivo y la suspensi n con una varilla para mezcla nueva para cada combinaci n Mezclar y esparcir el l quido sobre toda la superficie del pocillo 10 Agitar suavemente el portaobjeto durante 2 minutos y observar la presencia de aglutinaci n 11 Despu s de la lectura eliminar las varillas para mezclar y los portaobjetos usados en un desinfectante adecuado INTERPRETACI N Una reacci n de aglutinaci n est indicada por una agregaci n visible en las part culas de l tex Los resultados de Microgen Legionella deber n interpretarse de la siguiente manera Reactivo Reactivo Reactivo de de ensayo de ensayo ensayo 1 2 15 Species Interpretaci n L pneumophila 1 2 presente L pneumophila 2 15 presente G nero Legionella presente
43. sitivo Mezclar con una varilla agitar suavemente el portaobjeto durante 2 minutos y observar la presencia de aglutinaci n Deber observarse un resultado positivo indicado por la presencia de aglutinaci n Repetir este proceso con el reactivo de prueba 2 15 M45b y con el reactivo de prueba Species M45d De nuevo deber observarse un resultado positivo Si no se observa aglutinaci n con ninguno de los tres reactivos de l tex deber utilizarse un kit nuevo NOTA Es posible que la potencia de la reacci n con el control positivo no sea la misma con el reactivo de ensayo 1 que con el reactivo de ensayo 2 15 y con el reactivo de ensayo Species Ver PRINCIPIO DEL ENSAYO m s arriba Procedimiento del ensayo 1 Dispensar una gota de soluci n salina isot nica M40 en cada uno de tres pocillos del portaobjeto de aglutinaci n 2 Con un asa de inoculaci n eliminar 3 4 colonias similares a Legionella de la placa de agar selectivo y formar un extendido uniforme y grueso en el portaobjeto a lo largo de cada gota de soluci n salina 3 Mezclar las colonias con la soluci n salina y emulsificar para formar una suspensi n lisa y espesa 4 Sila suspensi n permanece lisa pasar a 7 Si la suspensi n es fibrosa o granular a menudo a consecuencia de cultivos antiguos o mucoides proceda de la siguiente manera 5 Dispensar en un tubo de vidrio 0 5 mL de soluci n salina isot nica al 0 85 Preparar una suspen
44. solates of S aureus 4 C diversus 1 A baimannii 2 P stuartii 1 B cereus 2 K pneumoniae 1 Streptococcus spp 1 However all of the above either do not grow or show very atypical morphology when cultured on Legionella selective media In the case of B cereus agglutination was atypical stringy 70 isolates of L pneumophila and Legionella spp were tested in both Microgen Legionella and the comparison latex kit to differentiate between Serogroup 1 and Serogroups 2 15 Microgen Legionella SG1 SG2 15 L pn Total Positive Positive Negative SG1 Positive 8 a a 8 Commercial SG2 15 Latex Test Positive 0 30 0 30 L pn negative 0 0 32 32 Total 8 30 32 70 No isolates of L pneumophila serogroup 1 cross reacted with Test Reagent 2 15 and similarly no isolates of L pneumophila serogroups 2 15 cross reacted with Test Reagent 1 All non pneumophila Legionella spp isolates were non reactive with Test Reagent 1 and Test Reagent 2 15 in Microgen Legionella Legionella Species Latex has been tested against all Legionella pneumophila serogroups with no cross reactivity detected The Legionella Species Latex is designed to detect 10 Legionella species In particular these are Legionella species 10 Target Species L micdadei L bozemanii 1 L bozemanii 2 L dumoffi L longbeachae 1 L longbeachae 2 L jordanis L gorm
45. stet werden Die Morphologie der getesteten Kolonien sollte der von Legionellen hneln VERFAHREN Qualit tskontrolle Die folgenden Kontrollen sollten bei jeder Verwendung des Kits durchgef hrt werden 1 Reagenzienkontrolle Sch tteln Sie vorsichtig die Microgen Test Latex Reagenzien M45a M45b M45d und geben Sie einen Tr jedes Reagens in separate Kavit ten auf den Objekttr ger Einen Tr Kochsalzl sung M40 zu beiden Latexreagenzien geben Mischen Sie das Latexreagens und die Kochsalzl sung gr ndlich mit verschiedenen R hrst bchen f r jede Kavit t und verteilen Sie die Fl ssigkeit ber die gesamte Kavitat Objekttr ger 2 Min vorsichtig schwenken und auf Agglutination hin berpr fen Falls eine Agglutination sichtbar wird ist zumindest eine der Reagenzien kontaminiert und ein neues Kit sollte verwendet werden 2 Positivkontrolle Geben Sie einen Tr der Positivkontrolle M45c in eine Kavit t auf dem Objekttr ger Testreagens 1 M45a vorsichtig sch tteln und 1 Tr in dieselbe Kavit t geben Die Tropfenflasche sollte nicht mit der Positivkontrolle in Ber hrung kommen Mit R hrst bchen vermischen Objekttr ger 2 Min vorsichtig schwenken und auf Agglutination hin berpr fen Ein positives Ergebnis als Agglutination sollte sichtbar sein Wiederholen Sie diesen Vorgang mit dem Testreagens2 15 M45b und dem Testreagens Species M45d Es sollte wiederum ein positives Ergebnis sichtbar sein Falls bei ein
46. t culas de l tex est n revestidas con anticuerpos policlonales de conejo dirigidos contra 10 aislados corrientes del g nero Legionella v ase el cuadro a continuaci n Cuando estas part culas de l tex se mezclan con una suspensi n que contiene las correspondientes bacterias de Legionella o ant genos termoinactivados de la correspondiente bacteria de Legionella se produce una reacci n inmunoqu mica que hace que las part culas de l tex se aglutinen en agregados que son f cilmente visibles a simple vista El reactivo de l tex revestido con anticuerpos contra el serogrupo 1 s lo se aglutinar en presencia de ant genos del serogrupo 1 El reactivo de l tex revestido con anticuerpos contra los serogrupos 2 a 15 s lo se aglutinar en presencia de cualquiera de los serogrupos 2 a 15 El reactivo de l tex revestido con anticuerpos contra el g nero Legionella se aglutinar con las 10 especies pertinentes del g nero Legionella v ase el cuadro a continuaci n Las reacciones del Reactivo de ensayo 1 con los ant genos del serogrupo 1 son en general m s intensas y m s r pidas que las reacciones entre el Reactivo de ensayo 2 15 y los ant genos de los serogrupos 2 a 15 Esto se debe al efecto de diluci n de mezclar 15 antisueros distintos durante la elaboraci n del Reactivo de ensayo 2 15 El reactivo de l tex Legionella Species reacciona de manera similar al l tex del serogrupo 1 de Legionella pneumophila CONT PRESENTACI
47. tion de 10 Legionella species qui sont notamment Legionella species 10 esp ces cibles L micdadei L bozemanii 1 L bozemanii 2 L dumoffi L longbeachae 1 L longbeachae 2 L jordanis L gormanii L anisa L feelei Microgen Legionella SG1 SG2 15 L pn Positif Positif Negati Total Test au SGI latex Positif 3 y 0 3 Les tests de sp cificit du latex des esp ces Legionella indiquent que les isolats du sgp 1 de Legionella sainthelensi du sgp 1 de erythra hacklaie et tucsonensis peuvent galement produire des r sultats positifs REPRODUCTIBILITE La reproductibilit inter lots a t d termin e en testant la sensibilit et la sp cificit d un lot de produit par rapport des suspensions dilutions d antig nes de contr le de r f rence et de la trousse et une microplaque de 47 chantillons bact riens Diff rents op rateurs ont effectu des tests 3 occasions diff rentes Les concentrations au point de virage obtenues avec des antig nes de contr le r f rence et les r sultats qualitatifs avec la microplaque sont identiques dans les trois dosages La reproductibilit inter lots a t d termin e en testant la sensibilit et la sp cificit de 3 lots de produit par rapport des suspensions dilutions d antig nes de contr le de r f rence et de la trousse et une microplaque de 47 chantillons
48. ture Place 30uL boiled suspension on to each of three wells of an agglutination slide 7 Gently mix each test latex reagent M45a M45b and M45d to ensure a homogeneous suspension 8 Add one drop of Test Reagent 1 to one of the bacterial suspensions one drop of Test Reagent 2 15 to the second suspension and one drop of Test Reagent Species to the third suspension Do not allow the reagent dropper to touch the suspension 9 Mix the reagent and suspension using a new mixing stick for each combination Spread the liquid over the entire area of the well 10 Rock the slide gently for 2 minutes and observe for agglutination 11 Discard the used mixing sticks and slides into a suitable disinfectant INTERPRETATION An agglutination reaction is indicated by visible aggregation of the latex particles Microgen Legionella results should be interpreted as follows Test Test Test Reagent Reagent Reagent 1 2 15 Species Interpretation L pneumophila 1 present L pneumophila 2 15 present Legionella species present No Legionella present Possible non specific agglutination inconclusive result Possible non specific agglutination inconclusive result Possible non specific agglutination inconclusive result Possible non specific agglutination Inconclusive result A non specific agglutination pattern does not preclude the presence of Legionella bacteria but results ha
49. u einer der Bakteriensuspensionen 1 Tr von Testreagens 2 15 zur zweiten Suspension und 1 Tr von Testreagens Species zur dritten Suspension Die Tropfenflasche darf nicht mit der Suspension in Ber hrung kommen 9 Vermischen Sie jeweils das Reagens und die Suspension mit einem eigenen R hrst bchen Verstreichen Sie die Fl ssigkeit ber die gesamte Kavit t 10 Objekttr ger 2 Min vorsichtig schwenken und auf Agglutination hin berpr fen 11 Entsorgen Sie die benutzten R hrst bchen und Objekttr ger in geeigneter Desinfektionsl sung INTERPRETATION Eine Agglutinationsreaktion wird durch eine sichtbare Aggregation der Latexpartikel angezeigt Die Ergebnisse von Microgen Legionella sollten wie folgt interpretiert werden Test Test Test Reagens Reagens Reagens Interpretation 1 2 15 Species _ _ L pneumophila 1 vorhanden L pneumophila 2 15 _ i 5 vorhanden _ _ A Legionella species vorhanden Keine Legionella vorhanden M gliche nicht spezifische Agglutination kein eindeutiges Ergebnis M gliche nicht spezifische Agglutination kein eindeutiges Ergebnis M gliche nicht spezifische Agglutination kein eindeutiges Ergebnis M gliche nicht spezifische Agglutination Kein eindeutiges Ergebnis Ein nicht spezifisches Agglutinationsmuster schlie t die Anwesenheit von Legionella nicht aus die Ergebnisse m ssen aber als nicht eindeutig interpretiert werden
50. ve to be interpreted as inconclusive LIMITATIONS OF USE 1 Results should be interpreted by the clinician in the context of all available clinical and laboratory information 2 Stringy reactions on the slide may not be true positive reactions and further tests are required 3 Old and or mucoid cultures may not give a smooth suspension in saline and may give atypical agglutination These should be pre treated by boiling as described in the method above 4 Microgen Legionella is intended for the identification of L pneumophila serotypes 1 15 and detection of a range of 10 Legionella species following culture on selective agar plates Colonies giving positive results should be confirmed as Legionella spp by their inability to grow on Legionella selective culture media deficient in cysteine PERFORMANCE CHARACTERISTICS Microgen Legionella has been evaluated in comparison with a well established commercially available latex agglutination test for L pneumophila 128 isolates of L pneumophila non pneumophila Legionella spp and potentially cross reacting bacteria were tested in both products Microgen Legionella all serogroups ve ve Total Commercial ve 50 0 50 Latex Test all serogroups ve 0 78 78 Total 50 78 128 Sensitivity 50 50 100 Specificity 78 78 100 Accuracy 128 128 100 Of the 50 isolates in this group 12 were cross reactants in both tests These were i

M45 MICROGEN LEGIONELLA REF IVD

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