NT-proBNP - Biomedica Immunoassays
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1. 4 3 CV X 3 7 11 NOTE TECNICHE Non mescolare o sostituire i reagenti con quelli di altri lotti o altra provenienza Non scambiare i tappi di differenti reagenti o tra i vari lotti Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza Proteggere i reagenti dalla luce solare diretta La soluzione di substrato deve restare incolore fino alla sua aggiunta in micropiastra Per assicurare l ottenimento di risultati accurati necessario che la pellicola autoadesiva sia ben sistemata sui pozzetti della micropiastra durante le incubazioni 12 PRECAUZIONI Tutti i componenti del kit di origine umana sono stati misurati contro HIV Ab e HbsAg e sono risultati negativi Tuttavia tali componenti devono essere manipolati e smaltiti come potenziali materiali infettivi reagenti liquidi contengono Proclin 300 lt 0 1 come conservante il quale non tossico alle concentrazioni usate in questo kit Potrebbe causare reazioni allergiche alla cute evitare il contatto con la cute o gli occhi Non pipettare a bocca Non mangiare bere fumare o usare cosmetici nei luoghi ove vengono utilizzati reagenti Evitare ogni contatto con i reagenti utilizzando i guanti L acido solforico irritante per gli occhi e la cute Sciacquare bene con acqua in caso di contatto 13 BIBLIOGRAFIA Vedere capitolo 13 LITERATURE delle istruzioni d uso in Inglese 15 20 Notes 16 20 Notes 17 20 Notes 18 20 is2. IVD LOT HE SYMBOLS Expiry date Verfallsdatum Date de p remption Data di scadenza Fecha de caducidad Data de validade Uiterste gebruiksdatum Udlabsdato Utg ngsdatum Termin Waznosci Lej rati id Doba exspir cie Doba exspirace Consider instructions for use Bitte Gebrauchsanweisung beachten Consultez la notice d utilisation Consultare le istruzioni per l uso Consulte las instrucciones de utilizaci n Consulte as instruc es de utilizac o Raadpleeg de gebruiksaanwijzing Se brugsanvisningen L s anvisningarna f re anv ndning Prosze przeczyta instrukcje wykonania Vegy k figyelembe a haszn lati utas t sban foglaltakat Postupujte pod a pokynov na pou itie Postupujte dle n vodu k pou it In vitro Diagnostic Medical Device for in Vitro Diagnostic Use In vitro Diagnostikum zur In vitro Diagnostik Dispositif m dical de diagnostic in vitro Pour usage diagnostique in vitro Dispositivo medico per diagnostica in vitro per uso diagnostico in vitro Dispositivo m dico de diagn stico in vitro para uso diagn stico in vitro Dispositivo m dico para diagn stico in vitro Para utiliza o de diagn stico in vitro Medisch hulpmiddel voor diagnostiek in vitro Voor diagnostisch gebruik in vitro Medicinsk udstyr til in vitro diagnostik Udelukkende til in vitro diagnostisk anvendelse Medicinteknisk produkt avsedd f r in vitro diagnostik F r in vitro diagnostis
3. NT proBNP EN ENZYME IMMUNOASSAY FOR THE QUANTITATIVE DETERMINATION OF NT proBNP IN HUMAN SERUM CAT NO SK 1204 12 X 8 TESTS DE ENZYME IMMUNOASSAY F R DIE QUANTITATIVE BESTIMMUNG VON NT proBNP IN HUMANEN SERUM PROBEN KAT NR SK 1204 12 X8 TESTE FR KIT DE DOSAGE IMMUNOENZYMATIQUE POUR LA DETERMINATION DE LA CONCENTRATION EN NT proBNP DANS LE SERUM HUMAIN REF SK 1204 12 X 8 TESTS IT SAGGIO IMMUNOENZIMATICO PER LA DETERMINAZIONE QUANTITATIVA DI NT proBNP NEL SIERO UMANI CODICE SK 1204 12 X 8 DERMINAZIONI rev no 150318 replacing 141021 A Biomedica Medizinprodukte GmbH amp Co KG A 1210 Wien Divischgasse 4 B OM EDICA Tel 43 1 291 07 45 Fax 43 1 291 07 85 E mail export bmgrp com 1 20 CONTENT INHALT SOMMAIRE CONTENUTO ENGLISH 3 DEUTSCH 7 FRANCAIS 10 ITALIANO 13 Additional information on our products is available on our website Zus tzliche Information zu unseren Produkten ist auf unserer Homepage erh ltlich Pour toute information compl mentaire sur nos produits visiter notre site Internet Ulteriori informazioni sui nostri prodotti sono disponibili sulla nostra home page www bmgrp com 2 20 1 INTRODUCTION BNP is mainly expressed by ventricular myocardium in response to volume overload and increased filling pressure BNP has a cleavable signal sequence Mature BNP consists of 108 amino acids proBNP or BNP 108 and undergoes cleavage resulting in physiologically active BNP 32 and
4. a ambiente 18 26 C Aspirare e lavare i pozzetti 5x con 300 ul di WASHBUF diluito Tampone di lavaggio rimuovere il WASHBUF restante picchiettando la piastra su un tovagliolo di carta dopo l ultimo lavaggio Aggiungere 200 ul di SUB Substrato in tutti i pozzetti Incubare per 30 min a temperatura ambiente 18 26 C al buio Aggiungere 50 ul di STOP Soluzione di stop in tutti i pozzetti Misurare subito l assorbanza a 450 nm con riferimento a 630 nm se disponibile Tem onen 8 CALCOLO DEI RISULTATI Leggere la densit ottica OD di tutti i pozzetti su un lettore di micropiastre utilizzando la lunghezza d onda di 450 nm lunghezza d onda di correzione di 630 nm Costruire la curva di calibrazione dai valori OD degli STD Usare un software disponibile in commercio o della carta millimetrata Ricavare la concentrazione del campione da questa curva di calibrazione Questo dosaggio stato valutato utilizzando l algoritmo 4PL Metodi di calcolo differenti che utilizzano altri algoritmi devono essere valutati dall utilizzatore campioni con risultato superiore allo standard a concentrazione pi elevate STD5 640 pmol l devono essere diluiti con STD1 o un siero a bassa concentrazione di analita e ridosati Considerare i fattori di diluizione utilizzati per il calcolo della concentrazione di questi campioni Esempio di curva STD tipica vedere capitolo 8 CALCULATION OF RESULTS delle istruzioni d uso in Inglese II foglio del c
5. additional C terminal fragments cf http www uniprot org uniprot P16860 PRO_0000001532 along with a physiologically inactive N terminal peptide comprising amino acids 1 76 which is further degraded proteolytically BNP has a key role in cardiovascular homeostasis with biological actions including natriuresis diuresis vasorelaxation and inhibition of renin and aldosterone secretion A high concentration of BNP in the bloodstream is indicative of heart failure Areas of Interest Cardiac impairment acute myocardial infarction left ventricular dysfunction Renal failure e Obesity and diabetes e Various forms of secondary hypertensions e Therapy monitoring of heart failure patients 2 CONTENTS OF THE KIT CONT KIT COMPONENTS QUANTITY PLATE polyclonal sheep anti NT proBNP antibody coated microtiter strips in 12 x 8 tests stripholder packed in alu bag with desiccant WASHBUF Wash buffer 20x concentrated clear cap 1x50 ml Standards synthetic human NT proBNP 0 10 40 160 640 pmol l STD lyophilised white caps 5 vials lyophilised CTRL Control synthetic human NT proBNP lyophilised yellow cap exact 1 vial lyophilised concentration after reconstitution see label CONJ Conjugate sheep anti human NT proBNP HRPO red dye brown cap 1x29 ml ready to use SUB Substrate TMB solution blue cap ready to use 1x22ml STOP Stop solution sulphuric acid white cap ready to use 1x7ml 3 ADDITIONAL MATERIAL ADDED TO THE KIT 1 se
6. ampon de lavage Diluer le concentr au 01 20 1 19 par exemple 50 ml de WASHBUF 950 ml d eau distill e Les cristaux dans le concentr de tampon vont se dissoudre temp rature ambiante 18 26 C Le tampon concentr reste stable 4 C 2 8 C jusqu la date de p remption mentionn e sur l tiquette Le tampon dilu reste stable 4 C 2 8 C jusqu un mois Utilisez uniquement cette solution de tampon de lavage dilu e WASHBUF pour le dosage 6 PRINCIPE DE L ESSAI Voir au chapitre 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY de la version anglaise de la notice 7 ASSAY PROTOCOL Tous les r actifs et les chantillons doivent tre temp rature ambiante 18 26 C avant utilisation dans le dosage Marquer les positions du Standard Echantillon Contr le sur la feuille de protocole Sortez les barrettes de la microplaque du sac alu Stocker les bandes inutilis es avec le d shydratant 4 C 2 8 C dans le sac en aluminium Les bandes sont stables jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette jouter 50 ul de Standard Echantillon Contr le en double exemplaire dans les puits respectifs jouter 200 ul de Conjugu dans chaque puit agiter d licatement ouvrir herm tiquement la plaque et laisser incuber 3 heures temp rature ambiante 18 26 C spirer et laver 5 fois les puits avec 300 ul de solution de tampon de lavage dilu e WASHBUF retirez le reste de olution WASHBUF en tapant la plaque contre une
7. atory should establish its own reference data Conversion factor 1 pmol 8 475 pg ml pmol l to pg ml refers to NT proBNP 1 76 that is detected by the ELISA Standard range 0 to 640 pmol l Sample volume 50 ul human serum Detection Limit 0 pmol l 3 SD 3 pmol l Incubation time 3 hours 30 min 10 PRECISION Experiment Intra assay 2 samples of known concentrations were tested 3 times in 1 assay by 1 operator Inter assay 2 samples of known concentrations were tested 8 times in 2 assays by different operators Intra assay n 3 Sample 1 Sample2 Inter assay n 8 Sample 1 Sample 2 Mean pmol l 60 2 35 2 Mean pmol l 52 1 108 1 SD pmol l 2 0 0 9 SD pmol l 17 7 9 CV 4 3 CV 3 7 11 TECHNICAL HINTS Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources Do not mix stoppers and caps from different reagents or various lots Do not use reagents beyond expiration date Protect reagents from direct sunlight Substrate solution should remain colourless until added to the plate To ensure accurate results proper adhesion of plate sealers during incubation steps is necessary 5 20 12 PRECAUTIONS All test components of human source were tested against HIV Ab and HBsAg and were found negative Nevertheless they should be handled and disposed as if they were infectious Liquid reagents contain lt 0 1 Proclin 300 as preservative which is not toxic in conce
8. co umano liofilo tappo giallo vedere 1 flacone l etichetta per conoscere l esatta concentrazione dopo ricostituzione CONJ Coniugato anti human NT proBNP HRPO di pecora colore rosso tappo 1x29 ml marrone pronto per l uso SUB Substrato soluzione di TMB tappo blu pronto per l uso 1x22ml STOP Soluzione di stop acido solforico tappo bianco pronto per l uso 1x7ml 3 ALTRO MATERIALE AGGIUNTO AL KIT 1 pellicola di plastica autoadesiva Foglio del QC Schema del protocollo Manuale con le istruzioni d uso 4 MATERIALE ED EQUIPAGGIAMENTO RICHIESTI MA NON FORNITI Micropipette calibrate per 50 500 ul e puntali monouso Lettore ELISA dotato di filtro a 450 nm oppure a due filtri 450 nm e 630 nm Carta millimetrata oppure software per il calcolo dei risultati Si consiglia l utilizzo di un Lavatore di micopiastre per i lavaggi Acqua distillata o deionizzata 5 PREPARAZIONE DEI REAGENTI E DEI CAMPIONI Tutti i reagenti del kit sono stabili a 4 C 2 8 C fino alla data di scadenza riportata sull etichetta di ciascun flacone Preparazione del campione L NT proBNP stabile nel sangue intero per diverse ore a temperatura ambiente 18 26 C Tuttavia si consiglia di separare per centrifugazione il siero il pi presto possibile es 20 min a 2 000 x g preferibilmente a 4 C 2 8 C Il siero possono essere conservati a 4 C 2 8 C fino a due giorni Per la conservazione per periodi di tempo pi lunghi aliquotare i campio
9. e immediately at 450 nm with reference 630 nm if available gt Wim co 1 oc 4 20 8 CALCULATION OF RESULTS Read the optical density OD of all wells on a plate reader using 450 nm wavelength correction wavelength 630 nm Construct the standard curve from the OD values of the STD Use commercially available software or graph paper Obtain sample concentration from this standard curve The assay was evaluated with 4PL algorithm Different curve fitting methods need to be evaluated by the user Samples with values above STD5 640 pmol l can be diluted with STD1 or NT proBNP negative human serum and re assayed Dilution factors must be taken into consideration for calculation of the sample concentrations Example typical STD curve 3 000 2 500 et 2 000 1 500 1 000 HT 0 500 0 000 em o 100 200 300 400 500 600 700 OD 450 nm NT proBNP pmol l The quality control QC protocol supplied with the kit shows the results of the final release QC for each kit at production date Data for OD obtained by customers may differ due to various influences and or due to the normal decrease of signal intensity during shelf life However this does not affect validity of results as long as an OD of 1 50 or more is obtained for STD5 and the value of the CTRL is in range target range see label 9 ASSAY CHARACTERISTICS Values of apparently Median serum n 93 3 0 pmol l healthy individuals Each labor
10. fehlen wir die Serumseparation durch Zentrifugation sobald wie m glich durchzuf hren z B 20 min bei 2000 x g vorzugsweise bei 4 C 2 8 C Serum kann bis zu 2 Tage bei 4 C 2 8 C aufbewahrt werden Die gewonnenen Serumproben sollten aliquotiert und bei 25 C oder niederer f r l ngerfristige Lagerung aufbewahrt werden F nf Frier Tau Zyklen verursachen keine Verluste der Immunreaktivit t in den Proben Lip mische und h molytische Proben k nnen falsche Ergebnisse liefern Proben vor Verwendung gut mischen Wir empfehlen Doppelbestimmungen Proben mit Werten ber STD5 640 pmi l 7 20 k nnen mit STD1 oder NT proBNP negativem human Serum verd nnt werden N here Informationen zur Probenstabilit t finden Sie auf unserer Website www bmgrp com s Validation Data oder kontaktieren Sie unseren Kundenservice per Email an export bmgrp com oder Tel unter 43 1 29107 45 Rekonstitution Handhabung e STD Standard Pipettieren Sie 500 pl destilliertes oder deionisiertes Wasser in jeden Standard Lassen Sie das Lyophilisat bei Raumtemperatur 18 26 C 10 Minuten l sen Gut mischen Genaue Konzentration nach Rekonstitution Siehe Etikett Der rekonstituierte Standard ist bei 25 C oder niederer bis zum Ablaufdatum haltbar Vermeiden Sie Frier Tau Zyklen e CTRL Kontrolle Pipettieren Sie 500 ul destilliertes oder deionisiertes Wasser in die Kontrolle Lassen Sie das Lyophilisat bei Raumtemperatur 18 26 C 10 Minuten l sen Gut misc
11. hen Genaue Konzentration nach Rekonstitution Siehe Etikett Die rekonstituierte Kontrolle ist bei 25 C oder niederer bis zum Ablaufdatum haltbar Vermeiden Sie Frier Tau Zyklen e WASHBUF Waschpuffer Das mitgelieferte Konzentrat wird 1 20 1 19 verd nnt zB 50 ml WASHBUF 950 ml destilliertes Wasser Kristalle im Pufferkonzentrat l sen sich bei Raumtemperatur auf Der unverd nnte WASHBUF ist bei 4 C 2 8 C bis zum Ablaufdatum haltbar Der verd nnte WASHBUF ist bei 4 C 2 8 C bis zu einem Monat haltbar Im Testsystem darf nur verd nnter WASHBUF verwendet werden 6 TESTPRINZIP Siehe Kapitel 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY im englischen Teil des Beipacktextes 7 TESTPROTOKOLL Im Test d rfen nur Reagenzien und Proben verwendet werden welche Raumtemperatur 18 26 C aufweisen Markieren Sie die Positionen f r STD PROBE CTRL Standard Probe Kontrolle am Protokollblatt Nehmen Sie die ben tigten Mikrotiterstreifen aus dem Aluminium Beutel Nicht verwendete Mikrotiterstreifen k nnen mit Trockenmittel im Aluminium Beutel bei 4 C 2 8 C bis zum angegebenen Ablaufdatum gelagert werden 1 Pipettieren Sie 50 ul STD SAMPLE CTRL Standards Sample Kontrolle in Doppelbestimmung in die entsprechenden Wells 2 Pipettieren Sie 200 pl CONJ Konjugat in alle Wells Streifen abdecken und 3 Stunden bei Raumtemperatur 18 26 C inkubieren Inhalt der Wells verwerfen und 5x mit 300 pl verd nnten WASHBUF Waschpuffer waschen Nach dem
12. ibody In the washing step all non specific unbound material is removed In a second step the substrate TMB Tetramethylbenzidine is pipetted into the wells The enzyme catalysed colour change of the substrate is directly proportional to the amount of NT proBNP present in the sample This colour change is detectable with a standard microtiter plate ELISA reader 1 precoated AB 2 sample STD CTRL 3 CONJ anti analyte HRPO Y 4 gt 4 SUB enzyme catalyzed c color change 3 vd gt NM UN PI d 3 D 9 X 7 ASSAY PROTOCOL All reagents and samples must be at room temperature 18 26 C before use in the assay Mark position for STD SAMPLE CTRL Standard Sample Control on the protocol sheet Take microtiter strips out of the alu bag Store unused strips with desiccant at 4 C 2 8 C in the alu bag Strips are stable until expiry date stated on the label Add 50 pl STD SAMPLE CTRL Standards Sample Control in duplicate into respective well Add 200 pl CONJ Conjugate into each well swirl gently Cover tightly and incubate 3 hours at room temperature 18 26 C Aspirate and wash wells 5x with 300 ul diluted WASHBUF Wash buffer remove remaining WASHBUF by hitting plate against paper towel after the last wash Add 200 pl SUB Substrate into each well Incubate for 30 min at room temperature 18 26 C in the dark Add 50 pl STOP Stop solution into each well Measure absorbanc
13. kt bruk Wyr b medyczny do Diagnostyki In Vitro In vitro orvosdiagnosztikai term k In vitro diagnostick zdravotn cky materi l ur en pre diagnostiku in vitro In vitro diagnostick zdravotnicky materi l ur eno pro diagnostiku in vitro Lot Batch Number Charge Chargennummer Lot Code du lot Lotto Numero di lotto Lote C digo de lote Lote C digo do lote Lot Partijnummer Lot Batchkode Lot Satskod Numer serii Lot Batch sz m slo ar e C slo ar e Manufactured by Hergestellt von Fabriqu par Prodotto da Fabricado por Fabricado por Vervaardigd door Fabrikation af Tillverkad av Wyprodukowane pr Gy rtotta Vyroben Vyrobeno Catalogue Number Bestellnummer Num ro de r f rence Numero di riferimento N mero de referencia N mero de refer ncia Referentienummer Referencenummer Katalognummer Numer katalogowy Katal gussz m Katal gov slo Katalogov slo Store at between Lagerung bei zwischen Conserver entre Conservare a tra Conservar a temp entre Armazene a entre Bewaar bij tussen Opbevares mellem F rvaras vid Przechowywa w T roljuk k z tt Skladujte v rozsahu Skladujte v rozmez Contains sufficient for x tests Inhalt ausreichend f r x Tests Contient suffisant pour x tests Contenuto sufficiente per x test Contiene suficiente para x pruebas Cont m suficiente para x testes Bevat vo
14. langer ou changer les r actifs d autres lots ou sources Ne pas m langer les bouchons et capsules des diff rents r actifs ou entre plusieurs lots Ne pas utiliser les r actifs au del de la date d expiration Prot ger les r actifs de la lumi re du soleil La solution de substrat doit rester incolore jusqu son ajout dans la plaque Pour garantir des r sultats pr cis une bonne adh rence de la plaque au support au cours des tapes d incubation est n cessaire 12 PRECAUTIONS Tous les composants de test de source humaine ont t test s contre le VIH Ab et HBsAg et ont t trouv s n gatifs N anmoins ils doivent tre manipul s et limin s comme s ils taient des r actifs liquides infectieux qui contiennent x 0 1 Proclin 300 comme conservateur qui n est pas toxique aux concentrations utilis es dans ce kit Il peut provoquer des r actions allergiques de la peau viter le contact avec la peau ou les yeux Ne pas pipeter la bouche Ne pas manger boire fumer ni appliquer de cosm tiques dans le laboratoire o les r actifs sont utilis s viter tout contact avec les r actifs en utilisant des gants L acide sulfurique est irritant pour les yeux et la peau Rincer avec de l eau en cas de contact 13 LITERATURE Voir au chapitre 13 LITERATURE dans la version anglaise de cette notice 12 20 1 INTRODZIONE Il BNP principalmente espresso dal miocardio ventricolare in risposta a sovracca
15. ldoende voor x bepalingen Indeholder tilstr kkeligt til x prover Inneh llet r cker till x analyser Zawarto na x test w Tartalma X teszt elv gz s re elegend Obsahuje materi l pre x testov Obsahuje materi l pro x test 19 20 SK 1204 NT proBNP ASSAY PROTOCOL AND CHECKLIST PREPARATION OF REAGENTS u Bring all reagents to room temperature 18 26 C m Prepare reagents and samples as instructed m Bring unused and prepared components to the storage temperature mentioned in the package insert m Take microtiter strips out of the alu bag and mark positions on the protocol sheet TEST PROCEDURE Step1 Add 50 ul STD SAMPLE CTRL standard sample control in duplicate into respective well Step 2 Add 200 ul CONJ Conjugate into each well Swirl gently Step 3 Cover tightly and incubate for 3 hours at room temperature 18 26 C Step 4 Aspirate and wash wells 5x with 300 ul diluted WASHBUF Wash buffer Remove remaining buffer by hitting plate against paper towel a Step 5 Add 200 ul SUB Substrate into each well a Step 6 Incubate for 30 minutes at room temperature 18 26 C in the dark a Step 7 Add 50 ul STOP Stop solution into each well a Step 8 Read Optical Density at 450 nm with reference 630 nm if available 20 20
16. letzten Waschschritt Reste von Waschpuffer durch Ausklopfen auf saugf higem Papier entfernen Pipettieren Sie 200 u SUB Substrat in alle Wells 30 min bei Raumtemperatur 18 26 C im Dunkeln inkubieren Pipettieren Sie 50 pl STOP Stoppl sung in alle Wells gut mischen Extinktion unmittelbar bei 450 nm messen mit 630 nm als Referenz falls m glich e m 8 BERECHNUNG DER ERGEBNISSE Messen Sie die optische Dichte OD von allen Wells mit einem Mikrotiterplattenphotometer mit einem 450 nm Filter Referenz 630 nm Konstruieren Sie eine Standardkurve aus den OD Werten der STD unter Verwendung von kommerziell erh ltlichem Millimeterpapier oder einer geeigneten Software Das Testsystem wurde mit einem 4 Parameter Algorithmus evaluiert Andere Auswerte Algorithmen m ssen vom Verwender evaluiert werden Die Konzentration der Proben wird aus der Standardkurve abgelesen Proben mit Ergebnissen ber dem h chsten Standard STD5 640 pmol l k nnen mit STD1 oder niedrig messendem Serum verd nnt und erneut getestet werden Eventuelle weitere Verd nnungen m ssen bei der Berechnung der Probenwerte ber cksichtigt werden Typische STD Kurve Siehe Kapitel 8 CALCULATION OF RESULTS im englischen Teil des Beipacktextes Auf dem beigepackten QC Protokoll sind die Resultate der QC Freigabe der jeweiligen Kit Lot vermerkt Vom Verwender erhaltene Daten der OD k nnen abweichend sein bedingt durch verschiedene Einfl sse und oder dem no
17. lf adhesive plastic film QC protocol Protocol sheet Instruction manual for use 4 MATERIAL AND EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT SUPPLIED Precision pipettes calibrated to deliver 50 500 pl and disposable tips ELISA reader for absorbance at 450 nm or from 450 nm to 630 nm Graph paper or software for calculation of results Plate washer is recommended for washing Distilled or deionised water 5 REAGENTS AND SAMPLE PREPARATION All reagents as supplied in the kit are stable at 4 C 2 8 C until the expiry date stated on the label of each reagent Sample preparation NT proBNP is stable in whole blood for several hours at room temperature 18 26 C Nevertheless we recommend separating serum by centrifugation as soon as possible e g 20 min at 2 000 x g preferably at 4 C 2 8 C Serum can be stored at 4 C 2 8 C up to two days For long term storage aliquot the acquired serum samples and store them at 25 C or lower Samples can be subjected to 5 freeze thaw cycles without any loss of immune reactivity Lipemic or hemolyzed samples may give erroneous results Samples should be mixed well before assaying We recommend duplicates for all values Samples with values above STD5 640 pmol l can be diluted with STD1 or NT proBNP negative human serum For further information on sample stability and assay performance characteristics please visit our website www bmgrp com s Validation Data or contact our customer service by e mail ex
18. lution de TMB capuchon bleu pr te l emploi 1x22 ml STOP Solution d acide sulfurique capuchon blanc pr te l emploi 1x7ml 3 MATERIEL ADDITIONNEL CONTENU DANS LE KIT e 1 film plastique auto adh sif e X Protocole de contr le qualit Feuille de protocole Mode d emploi 4 MAT RIEL ET QUIPMENT REQUIS e Pipettes de pr cision talonn es pour d livrer 50 500 ul et embouts jetables Un lecteur de plaque ELISA absorbance 450 nm ou de 450 nm 630 nm Papier millim tr ou logiciel pour le calcul des r sultats Une laveuse de plaque est recommand e pour le lavage Eau distill e ou d min ralis e 5 REACTIFS ET PREPARATION DE L ECHANTILLON Tous les r actifs du kit sont stables 4 C 2 8 C jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette de chaque flacon Pr paration de l chantillon NT proBNP est stable dans le sang entier pendant plusieurs heures temp rature ambiante 18 26 C N anmoins nous recommandons le s rum de s paration par centrifugation aussi rapidement que possible par exemple 20 min 2000 x g de pr f rence 4 C 2 8 C Le s rum peut tre stock s 4 C 2 8 C jusqu deux jours Pour le stockage long terme aliquoter les chantillons de s rum acquis et stocker les 25 C ou moins Les chantillons peuvent tre soumis 5 cycles de cong lation d cong lation sans perte de r activit immunitaire Les chantillons lip miques ou h molys s peu
19. ni di siero e conservarli a 25 C o a temperature inferiori campioni possono essere sottoposti a 5 cicli di congelamento scongelamento senza alcuna perdita di reattivit immunitaria campioni lipemici o emolizzati possono dare risultati errati Mescolare bene i campioni prima di dosarli Si raccomanda di misurare ciascun campione in duplicato Diluire 13 20 con STD1 o siero umano negativo per NT proBNP i campioni con concentrazione superiore allo standard pi elevato STD5 640 pmol l Per ulteriori informazioni sulla stabilit dei campioni e le caratteristiche prestazionali di questo kit si prega di visitare il nostro sito web www bmgrp com v Validation Data o contattare il nostro servizio clienti per e mail export bmgrp com o telefonicamente al numero 43 1 29107 45 oppure contattare il distributore locale Ricostituzione Manipolazione STD Standard Pipettare 500 ul di acqua distillata o deionizzata dentro ciascun flacone Lasciare a temperatura ambiente 18 26 C per 10 min Agitare delicatamente La concentrazione di ciascuno standard stampata sull etichetta del corrispondente flacone Gli standard ricostituiti sono stabili a 25 C fino alla data di scadenza Evitare ripetuti cicli di congelamento scongelameno e CTRL Controllo Pipettare 500 pl di acqua distillata o deionizzata dentro il flacone Lasciare a temperatura ambiente 18 26 C per 10 min Agitare delicatamente La concentrazione finale riportata sull e
20. ntrations used in this kit It may cause allergic skin reactions avoid contact with skin or eyes Do not pipette by mouth Do not eat drink smoke or apply cosmetics where reagents are used Avoid all contact with the reagents by using gloves e Sulfuric acid is irritating to eyes and skin Flush with water if contact occurs 13 LITERATURE 1 Utility of the Amino Terminal Fragment of Pro Brain Natriuretic Peptide in Plasma For the Evaluation of Cardiac Dysfunction in elderly Patients in Primary Health Care Alehagen U et al Clin Chem 49 8 1337 1346 2003 2 Head to head comparison of N terminal pro brain natriuretic peptide brain natriuretic peptide and N terminal pro atrial natriuretic peptide in diagnosing left ventricular dysfunction Hammerer Lercher et al Clin Chim Acta 310 2 193 197 2001 3 Prognostic evaluation of neurohumoral plasma levels before and during beta blocker therapy in advanced left ventricular dysfunction Stanek B et al JACC 38 436 442 2001 4 Pulmonary arterial hypertension in rheumatic mitral stenosis does it affect right ventricular function and outcome after mitral valve replacement Pande S et al Interact CardioVasc Thorac Surg 9 421 425 2009 5 Prognostic impact of body mass index in patients undergoing coronary artery bypass surgery Sung SH et al Heart 97 648 654 2011 6 Effect of piboserod a 5 HT4 serotonin receptor antagonist on left ventricular function in patie
21. nts with symptomatic heart failure Kjekshus JK et al Eur J Heart Fail 11 771 778 2009 7 Plasma pro B type natriuretic peptide in the general population screening for left ventricular hypertrophy and systolic dysfunction Goetze JP et al Eur Heart J 27 3004 3010 2006 6 20 1 EINLEITUNG BNP wird haupts chlich durch Myokard als Reaktion auf Volumen berladung und erh htem F lldruck synthetisiert Reifes BNP besteht nach Verlust der Signalsequenz aus 108 Aminos uren proBNP oder BNP 108 Es wird in das physiologisch aktive BNP 32 weitere C terminale Fragmente vgl http www uniprot org uniprot P 168608 PRO 0000001532 sowie ein physiologisch inaktives N terminales Peptid aus Aminos uren 1 76 gespalten das weiter proteolytisch abgebaut wird Die BNP Fragmente in der Zirkulation sind daher sehr heterogen BNP spielt eine Schl sselrolle in der kardiovaskul ren Hom ostase mit biologischen Wirkungen einschlie lich Natriurese Diurese Vasorelaxation und der Hemmung von Renin und Aldosteron Sekretion Eine hohe Konzentration von BNP im Blut ist ein Hinweis auf Herzinsuffizienz Interessensgebiete Herzinsuffizienz akuter Myokardinfarkt linksventrikul re Dysfunktion Niereninsuffizienz Adipositas und Diabetes Verschiedene Formen der sekund ren Hypertonie Therapiebeobachtung von Patienten mit Herzinsuffizienz 2 INHALT DES KITS CONT KIT KOMPONENTEN MENGE Polyklonaler Schaf anti NT proBNP Antik rper beschichtet a
22. ontrollo di qualit QC fornito con il kit mostra i risultati al rilascio QC finale per tutti i kit alla data di produzione Le OD ottenute dai clienti possono essere differenti per varie influenze e o a causa del normale decremento di intensit del segnale durante la validit del kit Tuttavia ci non influisce sulla validit dei risultati finch si ottiene una OD di 1 50 o superiore per lo STD a concentrazione pi elevata e finch il valore del CTRL compreso nell intervallo di riferimento vedere l etichetta 14 20 9 CARATTERISTICHE DEL DOSAGGIO Mediana siero n 93 3 0 pmol l Ogni laboratorio deve stabilire i propri intervalli di riferimento Fattore di conversione 1 pmol l 8 475 pg ml Intervalli di riferimento da pmol l a pg ml referito a NT proBNP 1 76 che viene misurato in questo test ELISA Intervallo di misura da 0 a 640 pmol l Volume di campione 50 pl di siero umano Limite di rivelabilit 0 pmol l 3 SD 3 pmol l Tempo di incubazione 3 ore 30 min 10 PRECISIONE Esperimento Intra saggio 2 campioni a concentrazione nota soo stati misurati 3 volte in 1 saggio da 1 operatore Inter saggio 2 campioni a concentrazione nota sono stati misurati 8 volte in 2 saggi da operatori differenti Intra saggio n 3 Campione 1 Campione2 Inter saggio n 8 Campione 1 Campione 2 Media pmol l 60 2 35 2 Media pmol l 52 1 108 1 SD pmol l 2 0 0 9 SD pmol l 17 7 9 CV
23. port bmgrp com or by phone 43 1 29107 45 3 20 Reconstitution Handling e SID Standard Pipette 500 ul of distilled or deionised water into each vial Leave at room temperature 18 26 C for 10 min Swirl gently The standard concentration is printed on the label Reconstituted standard is stable at 25 C until expiry date Avoid freeze thaw cycles CTRL Control Pipette 500 pl of distilled or deionised water to the vial Leave at room temperature 18 26 C for 10 min Swirl gently The final concentration is stated on the label Reconstituted control is stable at 25 C until expiry date stated on label Avoid freeze thaw cycles e WASHBUF Wash buffer Dilute the concentrate 1 20 e g 50 ml WASHBUF 950 ml distilled water Crystals in the buffer concentrate will dissolve at room temperature 18 26 C The undiluted WASHBUF is stable at 4 C 2 8 C until expiry date stated on label The diluted WASHBUF is stable at 4 C 2 8 C up to one month Use only diluted WASHBUF Wash buffer for the assay 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY This kit is a sandwich enzyme immunoassay for the determination of NT proBNP in human serum In a first step sample and conjugate sheep anti human NT proBNP HRPO are pipetted into the wells of the microtiter strips which are pre coated with polyclonal sheep anti NT proBNP antibody NT proBNP present in the sample binds to the pre coated antibody in the well and forms a sandwich with the detection ant
24. rico di volume ed aumento della pressione di riempimento Il BNP ha una sequenza segnale sfaldabile Il BNP maturo consiste di 108 amminoacidi proBNP o BNP 108 e subisce una segmentazione risultante in BNP 32 fisiologicamente attivo e altri frammenti C terminali cf http www uniprot org uniprot P16860 PRO_0000001532 assieme ad un peptide N terminale fisiologicamente non attivo comprendente gli amminoacidi 1 76 che viene ulteriormente degradato proteoliticamente I BNP ha un ruolo chiave nell omeostasi cardiovascolare con azioni biologiche che comprendono natriuresi diuresi vasodilatazione e inibizione della secrezione di renina e aldosterone Un elevata concentrazione di BNP nel sangue indicativa di insufficienza cardiaca Aree di Interesse Insufficienza cardiaca infarto miocardico acuto disfunzione ventricolare Insufficienza renale e Obesit e diabete X Varie forme di ipertensioni secondarie Monitoraggio della terapia sui pazienti con scompenso cardiaco 2 CONTENUTO DEL KIT CONT COMPONENTI DEL KIT QUANTITA Strisce di microtitolazione sensibilizzate con anticorpo policlonale di pecora PLATE anti NT proBNP fissate in una cornicetta e sigillate in una busta di 12 x 8 test alluminio con dessiccante WASHBUF Tampone di lavaggio concentrato 20x tappo trasparente 1x50 ml STD Standard di NT proBNP sintetico umano 0 10 40 160 640 pmol l liofili 5 flaconi tappi bianchi CTRL Controllo di NT proBNP sinteti
25. rmalen Signalverlust des Kits w hrend der Laufzeit Dieser m gliche Signalverlust hat keinen Einfluss auf die G ltigkeit der Resultate so lange die OD von STD5 den Wert 1 50 oder h her erreicht und der Wert der CTRL im g ltigen Bereich ist Bereich siehe Etikett 8 20 9 TESTMERKMALE Werte von anscheinend Median Serum n 93 3 0 pmol l gesunden Spendern Jeder Verwender sollte den Normalbereich f r seine Proben evaluieren Umrechnungsfaktor 1 pmol 8 475 pg ml pmol l zu pg ml entspricht NT proBNP 1 76 Standardbereich 0 bis 640 pmol l Probenvolumen 50 ul human Serum Detektionsgrenze 0 pmol l 3 SD 3 pmol l Inkubationszeiten 3h 30 min 10 PR ZISION Experiment Intra assay 2 Proben wurden 3 Mal in Doppelbestimmung in 1 Test von 1 Operator getestet Inter assay 2 Proben wurden 8 Mal in Doppelbestimmung in 2 Tests von unterschiedlichen Operatoren getestet Intra assay n 3 Probe 1 Probe 2 Inter assay n 8 Probe 1 Probe 2 Durchschnitt pmol l 60 2 35 2 Durchschnitt pmol l 52 1 108 1 SD pmol l 2 0 0 9 SD pmol l 1 7 7 9 VK 4 3 VK 3 7 11 TECHNISCHE MERKMALE Reagenzien von verschiedenen Lots oder Tests d rfen nicht gemischt werden St psel und Verschl sse von verschiedenen Reagenzien d rfen nicht vertauscht werden Abgelaufene Reagenzien d rfen nicht verwendet werden Reagenzien sind vor direktem Sonnenlicht zu sch tzen Substratl sung muss vor Ve
26. rwendung farblos sein Mikrotiterstreifen m ssen bei den Inkubationen mit Abdeckfolie abgedeckt sein Vermeiden Sie Schaumbildung beim Mischen der Reagenzien 12 VORSICHTSMASSNAHMEN Ale Bestandteile humanen Ursprunges wurden auf HIVAK und HBsAg getestet und negativ gefunden Trotzdem sollten die Reagenzien als potentiell infekti s behandelt werden Die fl ssigen Reagenzien enthalten lt 0 1 Proclin 300 als Konservierungsmittel Vermeiden Sie Kontakt mit Augen Haut und Schleimhaut Proclin 300 ist in der verwendeten Konzentration nicht toxisch Allergische Reaktionen sind m glich e Nicht mit dem Mund pipettieren Nicht Rauchen Essen Trinken oder Kosmetika benutzen w hrend der Verwendung der Testreagenzien Verwenden Sie Handschuhe Schutzbrille und Laborkleidung w hrend der Testdurchf hrung e Schwefels ure reizt Augen und Haut Bei Ber hrung gr ndlich mit Wasser sp len 13 LITERATUR Siehe Kapitel 13 LITERATURE im englischen Teil des Beipacktextes 9 20 1 INTRODUCTION BNP est principalement exprim par le myocarde ventriculaire en r ponse la surcharge de volume et augmentation de la pression de remplissage BNP poss de une s quence signal clivable BNP mature est constitu e de 108 acides amin s proBNP ou BNP 108 et subit un clivage r sultant de l activit physiologique de BNP 32 et des fragments suppl mentaires C terminaux cf http www uniprot org uniprot P16860 PRO_0000001532 et aussi d
27. serviette en papier apr s le dernier lavage jouter 200 pl de substrat dans chaque puit Incuber pendant 30 min temp rature ambiante 18 26 C dans le noir Ajouter 50 pl de solution Stop dans chaque puit Mesurer l absorbance imm diatement 450 nm avec pour r f rence 630 nm si possible EEES gt O gt gt gt e Nan 8 CALCUL DES RESULTATS Lire la densit optique DO de chaque puits sur un lecteur de plaques 450 nm longueur d onde de correction de 630 nm Construire la courbe d talonnage partir des valeurs de DO des MST Utiliser un logiciel disponible dans le commerce ou du papier millim tr On obtient ainsi la concentration de l chantillon partir de la courbe du standard L essai a t valu l aide de l algorithme 4 PL 4 param tres logistiques Diff rentes m thodes d ajustement de courbe doivent tre valu es par l utilisateur Les chantillons qui donnent les valeurs plus lev es que le dernier standard MST5 640 pmol l doivent tre dilu avec MST1 ou un s rum n gatif en NT proBNP Les facteurs de dilution doivent tre pris en consid ration pour le calcul de concentration des chantillons Exemple de courbe de standard typique Voir au chapitre 8 CALCULATION OF RESULTS dans la version anglaise de la notice d utilisation Le protocole de contr le de qualit QC fourni avec le kit pr sente les r sultats de la version finale de QC pour chaque kit la date de produc
28. tichetta del flacone Il controllo ricostituito stabile a 25 C fino alla data di scadenza dichiarata sull etichetta Evitare ripetuti cicli di congelamento scongelamento e WASHBUF Tampone di lavaggio Diluire 1 20 1 19 la soluzione concentrate es 50 ml di WASHBUF 950 ml di acqua distillata cristalli eventualmente presenti nel tampone concentrato si discioglieranno a temperatura ambiente 18 26 C Il tampone concentrato stabile a 4 C 2 8 C fino alla data riportata sull etichetta di flacone Il tampone diluito stabile a 4 C 2 8 C per un mese Usare solo WASHBUF diluito Tampone di lavaggio per il dosaggio 6 PRINCIPIO DEL DOSAGGIO Vedere capitolo 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY delle istruzioni d uso in Inglese 7 PROTOCOLLO DI DOSAGGIO Portare tutti i reagenti e i campioni a temperatura ambiente 18 26 C prima di iniziare il dosaggio Contrassegnare la posizione per il STD SAMPLE CTRL Standard Campione Controllo sullo schema del protocollo Prendere le strisce di microtitolazione dalla busta di alluminio Conservare dentro la busta di alluminio le stisce non utilizzate con il dessiccante a 4 C 2 8 C Le strisce sono stabili fino alla data di scadenza dichiarata sull etichetta Aggiungere 50 ul di STD SAMPLE CTRL Standard Campione Controllo in duplicato nei pozzetti corrispondenti Aggiungere 200 y di CONJ Coniugato in tutti i pozzetti agitare delicatamente Coprire bene e incubare per 3 ore a temperatur
29. tion Les donn es de densit optique obtenues par les clients peuvent diff rer en raison de diverses influences et ou en raison de la diminution normale de l intensit du signal pendant la dur e de vie Toutefois cela n affecte 11 20 pas la validit des r sultats tant qu une DO 2 1 50 est obtenue pour la MST de plus forte concentration et que la valeur du CTRL est dans la gamme objectif r glable voir tiquette 9 CHARACT RISTIQUES DE L ESSAI Mediane serum n 93 3 0 pmol l Chaque laboratoire doit tablir ses propres donn es de r f rence Facteur de conversion 1 pmol l 8 475 pg ml pmol l en pg ml se r f re la NT proBNP 1 76 qui est d tect e par le test ELISA Gamme du standard 0 640 pmol l Volume de l chantillon 50 ul de s rum humain Donn es de r f rence Limite de d tection 0 pmol l 3 SD 3 pmol l Temps d incubation 3 heures 30 min 10 PR CISION Exp rience Intra essai 2 chantillons de concentration connue ont t test s 3 fois dans 1 analyse par 1 op rateur Inter dosage 2 chantillons de concentrations connues ont t test s 8 fois dans 2 essais par diff rents op rateurs Intra essai n 3 Enchantillon 1 Enchantillon 2 Inter dosage n 8 Enchantillon 1 Enchantillon 2 Moyenne pmol l 60 2 35 2 Moyenne pmol l 52 1 108 1 SD pmol l 2 0 0 9 SD pmol l 17 7 9 CV 4 3 CV 3 7 11 CONSEILS TECHNIQUES Ne pas m
30. uf PLATE Mikrotiterplattenstreifen im Streifenhalter Verpackt im Aluminium Beutel mit 12 x 8 Teste Trockenmittel WASHBUF Waschpuffer 20fach Konzentrat durchsichtiger Verschlu 1x50 ml Standard synthetisches humanes NT proBNP 0 10 40 160 640 pmol l 210 wei er Verschlu Iyophilisiert 5 Fl schchen Kontrolle synthetisches humanes NT proBNP gelber Verschlu dii lyophilisiert genaue Konzentration nach Rekonstitution siehe Etikett 1 Fl schchen Konjugat Schaf anti human NT proBNP HRPO rot gef rbt brauner pen VerschluB gebrauchsfertig m SUB Substrat TMB L sung blauer VerschluB gebrauchsfertig 1x22ml STOP Stopp L sung HaS04 wei er Verschlu gebrauchsfertig 1x7 ml 3 ZUS TZLICHES MATERIAL IM KIT 1 selbstklebende Aluminium Abdeckfolie e QC Protokoll Protokoll Blatt Arbeitsanleitung Beipacktext 4 ZUS TZLICH BEN TIGTES MATERIAL UND GER TE e Kalibrierte Pr zisionspipetten f r 50 500 pl inkl Pipettenspitzen Mikrotiterplattenphotometer mit 450 nm Filter 630 nm Referenz Millimeterpapier oder Software Mikrotiterplatten Wascher wird empfohlen Alternativen Mehrkanalpipetten oder Dispenser Destilliertes oder deionisiertes Wasser 5 REAGENZIEN UND PROBENVORBEREITUNG Alle Reagenzien des Kits sind bei 4 C 2 8 C bis zum Ablaufdatum siehe Etikett des Reagenz stabil Probenvorbereitung NT proBNP ist im Vollblut f r einige Stunden bei Raumtemperatur 18 26 C stabil Dennoch emp
31. un peptide N terminal physiologiquement inactif comprenant les acides amin s 1 76 qui est ensuite d grad par prot olyse BNP a un r le cl dans l hom ostasie cardiovasculaire avec des actions biologiques y compris la natriur se la diur se vasorelaxation et l inhibition de la r nine et la s cr tion d aldost rone Une forte concentration de BNP dans le sang est indicatif d une insuffisance cardiaque Domaines d int r ts Insuffisance cardiaque infarctus aigu du myocarde dysfonctionnement ventricule gauche e Insuffisance r nale e L ob sit et le diab te e Diff rentes formes d hypertensions secondaires Le suivi de la th rapie de patients souffrant d insuffisance cardiaque 2 CONTENU DU KIT COMPOSANTS COMPOSITION DU KIT QUANTITE PLAQUE Anticorps polyclonaux de mouton anti NT proBNP coat s sur les PLATE barrettes de la microplaque de support emball s dans un sac en aluminium 12 x 8 tests avec du d shydratant WASHBUF WASHBUF Tampon de lavage concentr 20 fois capuchon transparent 1x50 ml STANDARD MST NT proBNP humaine synth tique 0 10 40 160 640 STD NS 5 flacons pmol l lyophilis es capuchon blancs CTRL CONTR LE NT proBNP humaine synth tique lyophilis e capuchon jaune 1f i iy pt acon voir la concentration exacte apr s reconstitution sur l tiquette CONJ CONJUGUE Anticorps de mouton anti NT proBNP HRPO humaine colorant 1x22 ml rouge capuchon brun pr t l emploi SUB SUBSTRAT So
32. vent donner des r sultats erron s 10 20 Les chantillons doivent tre m lang s avant le dosage Nous vous recommandons de r aliser deux essais pour toutes les valeurs Les chantillons avec des teneurs sup rieures de MST5 640 pmol l peuvent tre dilu s avec la solution de MST1 ou le s rum NT proBNP humain n gatif Pour de plus amples informations sur les caract ristiques de performance de stabilit et d analyse de l chantillon merci de visiter notre site Web www bmgrp com v Validation Data ou de contacter notre service client par e mail export bmgrp com ou par t l phone 43 1 29107 45 Reconstitution manutention e STD MST Standard Ins rer l aide d une pipette 500 p1 d eau distill e ou d sionis e dans chaque flacon Laisser temp rature ambiante 18 26 C pendant 10 min Agiter doucement La concentration finale est indiqu e sur l tiquette Le standard reconstitu est stable 25 C jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette viter les cycles de cong lation d cong lation e CTRL Control Introduire a la pipette 500 ul d eau distill e ou d min ralis e dans le flacon Laisser temp rature ambiante 18 26 C pendant 10 min Agiter doucement La concentration finale est indiqu e sur l tiquette Le contr le reconstitu est stable 25 C jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette viter les cycles de cong lation d cong lation e VASHBUF T
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