Isolement automatisé d`ADN génomique à partir de sang
Contents
1. o 23ml Solution de prot inase K PK 130 ml Prot ase alcaline Alkaline Protease APA e 1400mi Tampon de lyse cellulaire Cell Lysis Buffer CLD e 1600ml Tampon de liaison Binding Buffer BBA 115 ml R sine ReliaPrep e 3500mi Tampon de lavage pr par Prepared Wash Buffer WBC e4x150ml Eau sans nucl ases Conditions de stockage stocker le ReliaPrep Large Volume HT gDNA Isolation System temp rature ambiante 15 30 C Ne pas r frig rer ou congeler les r actifs Entre utilisations stocker les r actifs de la plateforme recouverts ou ferm s temp rature ambiante 2 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 USA Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 EP048 R vis 6 13 www promega com Remarque pour des renseignements sur les commandes en dehors des tats Unis adressez vous une succursale ou un distributeur Promega local Les coordonn es de ceux ci sont disponibles au site www promega com Adresse lectronique techserv promega com Conventions de d nomination Tout au long de ce document les solutions fournies dans le ReliaPrep Large Volume HT gDNA Isolation System sont nomm es comme suit Solution de prot inase K PK Solution de prot inase K Prot ase alcaline Alkaline Protease APA Prot ase alcaline Tampon de lyse cellulaire Cell Lysis Buffer CLD Tampon de lyse cellulaire Tamp2. chantillon ml Volume d chantillon ml Figure 1 Rendement en ADN par la proc dure automatis e en fonction du volume de d part de sang total Les chantillons de sang total ont t pr par s partir d un seul sujet Chaque point est la moyenne de quatre r plicats et les barres d erreur repr sentant un cart type Graphique A Rendements en ADN d termin l aide du spectrophotom tre NanoDrop Graphique B Rendements en ADN d termin l aide du syst me QuantiFluor dsDNA 8 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 USA Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 EP048 R vis 6 13 www promega com 5 B Rendement chez plusieurs sujets Au cours du d veloppement de la m thode ReliaPrep pour sang total nous avons trait des chantillons provenant de plusieurs sujets La Figure 2 pr sente le rendement en ADN par leucocyte 6 amp Purification automatis e ReliaPrep m Pr cipitation manuelle T 5 O D 4 a A 3 s CT 2 CT 5 a 0 11181MA Sujet 1 Sujet 2 Sujet 3 Sujet 4 Figure 2 Rendements normalis s en ADN chez plusieurs sujets Les rendements en ADN sont normalis s en fonction des taux de leucocytes de chaque sujet Le sujet 1 est celui qui a t utilis dans la Figure 1 Chaque barre repr sente la moyenne de quatre r plicats et les barres d erreur repr sentant un cart
3. de lavage pr par compris entre 4 4 et 9 ml en fonction du volume initial de l chantillon Les chantillons sont agit s 500 tours min pendant 2 minutes puis 700 tours min pendant 2 minutes de plus Les chantillons sont ensuite soumis une capture magn tique pendant 3 minutes Les d chets du second lavage sont limin s de chaque tube puis un volume d thanol 50 compris entre 4 4 et 9 ml est ajout aux chantillons en fonction de leur volume initial Les chantillons sont agit s 500 tours min pendant 4 minutes Ils sont ensuite soumis une capture magn tique pendant 3 minutes Tous les d chets sont limin s colonne par colonne et le volume calcul d eau sans nucl ases est ajout chaque tube Les chantillons sont agit s 500 tours min pendant 3 minutes puis 400 tours min pendant 15 minutes 70 C Une capture magn tique est effectu e pendant 5 minutes puis les luats sont transf r s la plaque interm diaire Si l option de transf rer les chantillons dans une plaque ou des tubes finaux a t s lectionn e un message s affiche pour demander l utilisateur de centrifuger la plaque interm diaire 2 500 x g pendant 20 minutes afin d liminer les particules r siduelles La plaque interm diaire est replac e dans l appareil puis les luats sont transf r s aux tubes finaux ou la plaque finale La m thode est termin e Promega Corporation 2800 Woods Hollow
4. sine est recueillie l aide d un aimant pendant 20 minutes 11 Les d chets provenant de la lyse et de la liaison sont retir s de chaque tube Ensuite un volume de Tampon de lavage pr par compris entre 1 et 3 ml en fonction du volume initial de l chantillon est ajout chaque tube Cette tape est r p t e jusqu ce que tous les d chets aient t limin s de tous les tubes et le tampon de lavage ajout 12 Les chantillons sont agit s 500 tours min pendant 2 minutes 6 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 USA Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 EP048 R vis 6 13 www promega com 4 C tapes de purification suite 15 14 15 16 17 18 19 Apr s agitation les chantillons sont m lang s en pipetant pour disperser compl tement la r sine Ensuite l appareil ajoute sous agitation un volume suppl mentaire de Tampon de lavage pr par compris entre 4 4 et 9 ml en fonction du volume initial de l chantillon Les chantillons sont agit s 500 tours min pendant 2 minutes puis 700 tours min pendant 2 minutes de plus Apr s cette tape la r sine est captur e pendant 3 minutes Les d chets du premier lavage sont limin s de chaque tube puis 1 ml de Tampon de lavage pr par est ajout aux chantillons Ensuite l appareil ajoute sous agitation un volume suppl mentaire de Tampon
5. du retrait du lysat Contactez le service technique l adresse techserv promega com avant de tenter d ajuster le syst me robotique Message d erreur de l appareil Si le syst me signale un volume insuffisant dans un bac de r actif v rifiez que le type de bac utilis est ad quat et ajoutez du r actif au bac Si vous observez d autres erreurs contactez le service technique de Promega Notez le message d erreur pr cis et l heure Vous aurez besoin des fichiers de rapport d taill s EVOware enregistr s sous C ProgramData Tecan EVOware AuditTrail log Les fichiers de rapport utilisent la convention de d nomination suivante EVO_aaaammjj_hhmmss log la date et l heure correspondent la cr ation du fichier Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 wWww promega com EP048 R vis 6 13 Promega 12 7 Produits associ s PRODUIT CONDITIONNEMENT R F Appareil HSM 2 0 1 pi ce A2715 Solution de RNase A 5ml A7974 Solution tampon TE 20X pH 7 5 25 ml A2651 Tecan Freedom EVO HSM Workstation Contacter Promega Prot ase alcaline Alkaline Protease APA 130 ml A1721 Tampon de lyse cellulaire Cell Lysis Buffer CLD 1 400 ml A1731 Tampon de liaison Binding Buffer BBA 1 600 ml A1741 R sine ReliaPrep 115 ml A1752 Tampon de lavage pr par Prepared Wash Buffer WBC 3 500 ml A2681 S
6. l interface de l utilisateur et les options de traitement veuillez contacter le service technique de Promega l adresse techserv promega com 4 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 USA Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 EP048 R vis 6 13 www promega com Promega 4 A Mat riaux suppl mentaires En plus des r actifs fournis par Promega d autres mat riaux et r actifs doivent tre pr par s et fournis par l utilisateur thanol 50 combiner un volume gal d thanol 95 100 de qualit USP ACS ou biologie mol culaire de l eau de qualit biologie mol culaire M langer Remarque l utilisation d alcool d natur contenant du m thanol ou de l isopropanol peut r duire le rendement en ADN et sa qualit WBA pr par pour R f A1751 ajouter 150 ml d thanol 50 pr par ci dessus chaque bouteille enti re de Tampon de lavage WBA Bien m langer avant lemploi Remarque si la configuration de votre kit R f A2751 comporte du Tampon de lavage pr par WBC n ajoutez pas d thanol avant utilisation Hydroxyde de sodium 100 mM pr parer au moins 300 ml d hydroxyde de sodium 100 mM dans de l eau d ionis e pour chaque s rie d chantillons Ce r actif est utilis pour nettoyer le syst me par ex Fisher R f ss276 4 RNase A facultatif pr parer un stock d
7. t introduites au cours de la purification ou du maniement Utilisez des r cipients en plastique ou en verre sans nucl ases Utilisez des c nes filtre pour toutes les tapes de pipetage Portez des gants tout moment Les nucl ases ventuellement introduites apr s l lution d gradent l ADN Pour prot ger l ADN lu contre les nucl ases s lectionnez l option d ajouter du tampon TE concentr une concentration de 1X dans l luat final L ADN tait d grad avant la proc dure de purification Si l ADN tait d grad avant la purification l ADN r sultant le sera galement 10 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 USA Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 EP048 R vis 6 13 www promega com Promega 6 D pannage suite Sympt mes Causes possibles et commentaires R sine ReliaPrep dans l luat final Les solutions concentr es d ADN peuvent tre visqueuses Il peut tre n cessaire de prolonger le temps de capture de la r sine ReliaPrep pour ces solutions visqueuses liminez la r sine r siduelle de l ADN lu en effectuant la centrifugation comme indiqu M diocre puret de l ADN Une m diocre puret de l ADN observ e par les rapports spectroscopiques ou dans les analyses en aval est souvent le r sultat d un retrait incomplet du lysat Tout ajustement physique du syst me robotique peut influencer l efficacit
8. PROTOCOLE AUTOMATIS Isolement automatis d ADN g nomique partir de sang total l aide de l appareil Tecan Freedom EVO HSM Workstation Mode d emploi des produits A1751 et A2751 Isolement automatis d ADN g nomique partir de sang total l aide de l appareil Tecan Freedom EVO HSM Workstation Toute la documentation technique est disponible l adresse www promega com protocols Veuillez consulter ce site Internet pour v rifier que vous utilisez la version la plus jour de ce protocole automatis Si vous avez des questions sur l utilisation de ce syst me veuillez contacter le service technique de Promega l adresse techserv promega com R D COR esse en danse doc en Data ae dus tete EEEE 2 2 Composants du produit et conditions de stockage seessoescessoscoecccecceccoecocoecocecoesseessocseesoeecooe 2 D Avani de COMMENCER ss rancncnracnecesesnucs rs spepepemae asset cac ei dede dance NTT AE 3 3 A Types chantillons compatibles 5 ststesoes honcassonecoecnoscoceacetosssoseseese 3 3 B Options de traitement des chantillons essesseescecsoescesseecsoeccosoecssocsoecsoesoecsoecseescesooeeoo 3 5 0 ODUONS deOin cee eannan riaan 4 3 D Quantification et valuation de PADN eessceesceecsoeccsoecsoeccooecccoecooeccooeccooecoocecsoeccooecsoeeeoo 4 4 Traitement a nlomaliSE scrrisicirisrcisresrisirisistti tonit ttt Kraer EN ENAN ananee et eeceeecee eco E ENESTE AAEN ERIAS 4 4 A M
9. Road Madison WI 53711 5399 tats Unis 7 Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 wWww promega com EP048 R vis 6 13 Promega 5 R sultats du d veloppement Les donn es d crites ci dessous sont repr sentatives de plusieurs groupes de donn es obtenues au cours du d veloppement Le traitement de tous les chantillons pr sent s a t d marr dans des tubes de 50 ml Les luats obtenus ont t laiss s sur la plaque interm diaire pour l analyse 5 A Comparaison du rendement entre la purification automatis e et manuelle La quantit d ADN obtenue avec le syst me de purification automatis de l ADN ReliaPrep pr sente un rapport lin aire avec le volume initial de l chantillon tout au long de la plage recommand e de volume de d part Les chantillons pr sent s la Figure 1 proviennent d un seul sujet Chaque chantillon a t trait l aide de la m thode de pr cipitation Wizard Genomic ou l aide du syst me automatis ReliaPrep Les chantillons ont pr sent un rapport A moyen de 2 1 et un rapport A moyen de 2 0 P a Purification automatis e ReliaPrep 300 Purification automatis e ReliaPrep m Pr cipitation manuelle m Pr cipitation manuelle 209 250 E 5 Z 250 gt z Z 200 200 pa S S 150 z 150 E 100 100 5 E Ch 50 a 50 0 2 4 6 8 10 12 0 2 4 6 8 10 12 z Volume d
10. at riaux suppl mentaires seessecceccsoccoecseccoecsoeccocsoecsoecooecoecooecoeccoeccoccseccoessoesoecsoeeo 5 4 B Proc dure de purification de PADN ssessseeseesoecscecocesoecseecocecoecoeecocecsocsoccsocsoecooesoecsoeeo 5 4 C tapes de purification 0000000000000000000000ssssseoossssscccosssssccossssssccosssesccocsssssseosssseseeossee 6 5 R sultats du d veloppement 5 esse cesse sesnnsceoesecocesco cess eee desde ec desss ess esst en cit eos 8 5 A Comparaison du rendement entre la purification automatis e et manuelle 8 5 B Rendement chez plusieurs sujets essecssecsoccoecsoecooecoecsoecoocccsocoeccoeccoeccoccoecsoecsoecoecsoeeoo 9 5 C Controle de contamination crois e essocsossessessocsocsessessocoocoessossocsocsoesossossocsoesossocsoeo 9 Oe DDRM nee EI EEEE E de ae ee eee eee se ete 10 7 PEDGUILS ASSOCICS ess innssn sites en sense cause srern sante een nons este nie canons een eesenseseses een mntti tie 12 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 wWww promega com EP048 R vis 6 13 Promega 1 Description L appareil Tecan Freedom EVO HSM workstation permet d automatiser l isolement d ADN g nomique ADN partir d chantillons de sang total et utilise la formulation chimique du ReliaPrep Large Volume HT gDNA Isolation System Le protoc
11. dement en ADN d pend du nombre de leucocytes dans le mat riel de d part Les chantillons avec un faible taux en leucocytes pr senteront un moindre rendement en raison de la quantit r duite au d part Le volume initial de l chantillon d passe la capacit de traitement du syst me Le ReliaPrep Large Volume HT gDNA Isolation System a t optimis pour purifier de l ADN partir de 1 10 ml de sang total Le traitement d chantillons de sang en dehors de cette plage recommand e peut entra ner une r duction du rendement en ADN et de sa concentration Si la limite de 10 ml est d pass e les volumes de traitement n cessaires seront en exc s du volume utile maximal des tubes de 50 ml Le ReliaPrep Large Volume HT gDNA Isolation System a t optimis pour des chantillons de sang normaux provenant d adultes en bonne sant qui contiennent en g n ral entre 4 5 x 106 et 1 x 107 leucocytes ml Des chantillons de sang total contenant un taux plus lev de leucocytes peuvent provoquer une capture plus lente de la r sine ReliaPrep au cours de la purification ce qui r duit le rendement L utilisation r ussie du ReliaPrep Large Volume HT gDNA Isolation System d pend de l usage des r actifs appropri s dans l ordre voulu V rifiez si tous les r actifs ont bien t plac s dans la position ad quate de l appareil et s ils ont t dilu s correctement avant l emploi ADN d grad Des nucl ases ont
12. e RNase A 4 mg ml Promega propose de la RNase A R f A7974 pr par e la concentration recommand e Solution concentr e de Tris EDTA TE facultatif Promega propose une solution tampon TE concentr e 20X pH 7 5 R f A2651 Un stock de TE concentr peut galement tre pr par selon la m thode pr f r e de votre laboratoire Le stock doit avoir une concentration 10 20 fois plus lev e que la concentration finale souhait e Il est important de s lectionner le facteur de concentration au cours de l installation initiale de l appareil pour faire en sorte que la dilution appropri e soit appliqu e au cours du traitement des chantillons Les fournitures Tecan suivantes sont n cessaires pour l extraction de 32 chantillons Nous recommandons d utiliser uniquement des c nes jetables filtre pour minimiser le risque de contamination crois e Description de l article Qt R f Tecan C nes jetables LiHa 1 000 ul avec filtre 176 c nes 10 612 513 Bacs r actif jetables gris 6 10 613 049 Bacs jetables de 25 ml 3 30 055 743 4 B Proc dure de purification de PADN L interface principale de la m thode de purification de l ADN est le logiciel Tecan TouchTools l aide des crans interactifs vous pouvez s lectionner toutes les options configurables par lutilisateur pour la purification Pour obtenir les instructions du syst me consultez le Manuel technique de l appareil Tecan Freedom EVO HSM Work
13. illons d teindre la pompe vide et de stocker les r actifs restants de la plateforme 4 C tapes de purification 1 Facultatif transfert des chantillons partir de tubes primaires 2 D tection automatique du volume des chantillons et calcul du volume des r actifs Le volume des r actifs utilis pour les chantillons de moins de 3 ml est identique celui utilis pour 3 ml de sang Le HSM agite les chantillons 500 tours min lorsque chaque r actif est ajout De la prot inase K 0 02 volume est ajout e chaque tube Facultatif de la RNase A 0 02 volume est ajout e chaque chantillon De la Prot ase alcaline 0 125 volume est ajout e chaque chantillon Un volume de Tampon de lyse est ajout chaque chantillon RS E o a a Apr s l ajout de Tampon de lyse les chantillons sont incub s 65 C pendant 30 minutes sous agitation 500 tours min suivi par une p riode de 10 minutes d agitation 500 tours min sans chaleur Pendant ce temps la r sine ReliaPrep est maintenue en suspension par m lange intermittent avec un c ne 9 Du Tampon de liaison 1 2 volume est ajout chaque chantillon 10 La r sine ReliaPrep est compl tement remise en suspension et 0 1 volume de r sine est ajout chaque chantillon La liaison des acides nucl iques la r sine s effectue en incubant les chantillons pendant 20 minutes sous agitation 550 tours min puis la r
14. ole automatis est pr configur tout en offrant la flexibilit n cessaire pour r pondre aux besoins des applications g nomiques haut d bit Le syst me est capable de traiter n importe quelle combinaison de volumes d chantillons dans la gamme enti re de volume de d part pour cette m thode Les r actifs sont automatiquement ajust s en fonction du volume des chantillons individuels L utilisateur n a qu pr ciser le nombre d chantillons traiter et le volume d lution souhait Des options suppl mentaires permettent l utilisateur de personnaliser la proc dure de purification de l ADN pour r pondre ses besoins 2 Composants du produit et conditions de stockage PRODUIT R F ReliaPrep Large Volume HT gDNA Isolation System A1751 R serv la recherche Chaque syst me contient assez de r actifs pour 96 purifications chacune partir d un maximum de 10 ml Comprend 23ml Solution de prot inase K PK 130ml Prot ase alcaline Alkaline Protease APA e 1020ml Tampon de lyse cellulaire Cell Lysis Buffer CLD e 2x765ml Tampon de liaison Binding Buffer BBA 9 115 ml R sine ReliaPrep e 3x815ml Tampon de lavage Wash Buffer WBA e 2x150ml Eau sans nucl ases PRODUIT R F ReliaPrep Large Volume HT gDNA Isolation System A2751 R serv la recherche Chaque syst me contient assez de r actifs pour 96 purifications chacune partir d un maximum de 10 ml Comprend
15. olution de prot inase K PK 23 ml A5051 Eau sans nucl ase 500 mi P1197 1 000 ml P1199 Tampon de lyse tissulaire Tissue Lysis Buffer TLA 500 ml A5091 Bouteille pour thanol 50 1 pi ce A2691 2012 2013 Promega Corporation Tous droits r serv s Wizard est une marque d pos e de Promega Corporation QuantiFluor et ReliaPrep sont des marques de commerce de Promega Corporation EVOware et Freedom EVO sont des marques d pos es de Tecan AG Corporation NanoDrop est une marque d pos e de Thermo Fisher Scientific TouchTools est une marque d pos e de Tecan AG Corporation Tous les prix et toutes les caract ristiques sont sujets modification sans avis pr alable Les d clarations relatives aux produits sont sujettes modification Veuillez contacter le service technique de Promega ou consulter le catalogue en ligne de Promega pour obtenir les informations les plus r centes sur les produits Promega Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 USA Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 EP048 R vis 6 13 www promega com
16. on de liaison Binding Buffer BBA Tampon de liaison Tampon de lavage Wash Buffer WBA Tampon de lavage Tampon de lavage pr par Prepared Wash Buffer WBC Tampon de lavage pr par Remarque pour R f A1751 comportant le Tampon de lavage WBA il est n cessaire de pr parer ce dernier avant de le charger dans l appareil en ajoutant de l thanol 50 la bouteille de tampon de lavage WBA tel que d crit la section 4 A Pour R f A2751 comportant le Tampon de lavage pr par WBC aucune pr paration suppl mentaire n est requise 3 Avant de commencer 3 A Types d chantillons compatibles Les m thodes pr sent es dans ce document sont pr vues pour le traitement d un volume de sang total compris entre 1 et 10 ml Une combinaison quelconque d chantillons de sang peut tre trait e en une proc dure pour autant que le volume de d part soit dans la plage recommand e Le sang peut tre pr lev en pr sence de la plupart des anticoagulants couramment utilis s Le sang peut tre fra chement pr lev ou congel L utilisation de sang coagul n est pas recommand e car les caillots peuvent boucher les c nes d aspiration ou de transfert des chantillons et peut donner des luats impurs color s Les chantillons doivent pouvoir passer travers une pipette s rologique standard de 10 ml Des chantillons de sang ayant t stock s de fa on non optimale peuvent tre trait s cependan
17. rise Les utilisateurs peuvent choisir des volumes d lution entre 500 et 1 500 ul L lution de l ADN dans un volume bas augmente la concentration de l ADN purifi mais r duit le rendement total Des volumes finaux d lution inf rieurs 1 ml peuvent entra ner une resuspension incompl te de la r sine ReliaPrep pour les chantillons de volume lev ce qui diminue la performance et augmente la pr sence de r sine r siduelle dans les luats Il est possible d utiliser un volume d lution proportionnel au volume initial de l chantillon Dans ce cas les chantillons d un volume initial compris entre 1 et 3 ml seront lu s dans 500 ul d eau et ceux d un volume initial de 10 ml seront lu s dans 1 500 ul d eau Pour les chantillons d un volume initial compris entre 3 et 10 ml le volume d lution sera ajust de fa on lin aire Tous les ADN lu s sont transf r s du HSM une plaque interm diaire 96 puits profonds Si vous souhaitez stocker l ADN dans du tampon TE le syst me peut ajouter du Tris EDTA concentr la plaque interm diaire Apr s la centrifugation manuelle le syst me peut transf rer les chantillons aux r cipients finaux Ces derniers peuvent consister en tubes de 2 ml bouchons viss s par ex Sarstedt R f 72 609 ou en une plaque 96 puits profonds Si vous choisissez de transf rer les chantillons dans des tubes vous serez invit placer ceux ci sur la plateforme s
18. station n TM402 Dans la liste des programmes disponibles s lectionnez ReliaPrep_Blood__HSM_2 0 v1 0 et suivez les instructions de l interface graphique TouchTools pour s lectionner tous les param tres du traitement L interface vous guidera tout au long de la configuration du syst me avant le d marrage du traitement Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis 5 Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 wWww promega com EP048 R vis 6 13 Promega 4 B Proc dure de purification de l ADN suite Une fois toutes les informations saisies le syst me commencera la proc dure de purification Il n y aura plus d autres informations saisir jusqu la fin de la m thode sauf en cas de probl me au cours du transfert de la d tection des chantillons ou de l aspiration sous vide En cas de probl me reportez vous la section Traitement des erreurs du Manuel technique de l appareil Tecan Freedom EVO HSM Workstation n TM402 Apr s l lution il vous sera demand de centrifuger la plaque interm diaire Cette tape est n cessaire afin d liminer les particules de r sines r siduelles pr sentes dans les luats Si vous avez choisi de laisser vos chantillons dans la plaque interm diaire ce message ne s affichera pas et la m thode sera alors termin e l issue de la purification le syst me vous demandera de retirer vos chant
19. t la quantit et la qualit de l ADN isol peuvent tre compromises selon les conditions sp cifiques Veuillez contacter le service technique de Promega pour toute question au sujet des types d chantillons compatibles l adresse suivante techserv promega com 3 B Options de traitement des chantillons Les chantillons sont trait s l aide de tubes coniques standard de 50 ml pr charg s dans l appareil HSM Si vous ne souhaitez pas transf rer les chantillons manuellement le syst me peut les transf rer automatiquement partir des tubes de r colte sous vide Le temps de traitement total est prolong d environ une heure quand le transfert automatis des chantillons est s lectionn Lors du transfert partir de tubes primaires le syst me peut transf rer le contenu entier des tubes ou jusqu un volume maximum d termin Le diam tre des tubes contenant les chantillons peut tre de 13 ou 16 mm mais des tubes d un seul diam tre doivent tre utilis s pour une s rie d chantillons donn e Les chantillons peuvent au besoin tre trait s la RNase A r actif facultatif achet s par ment Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis 3 Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 wWww promega com EP048 R vis 6 13 Promega 3 C Options d lution L ADN doit tre lu l aide d eau sans nucl ases comp
20. type 5 C Contr le de contamination crois e Ce syst me int gr utilise une s rie d tapes de nettoyage pour faire en sorte que les constituants entrant en contact avec les chantillons et partag s entre ceux ci ne pr sentent pas de risque de contamination crois e Pour une description d taill e des m thodes utilis es pour v rifier l int grit des chantillons sur l appareil Tecan Freedom EVO HSM Workstation veuillez vous reporter la note d application Verification of Sample Integrity for the Tecan Freedom EVO HSM Workstation n AN204 l adresse www promega com Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis 9 Num ro vert aux tats Unis 800 356 9526 1 608 274 4330 Fax 1 608 277 2516 wWww promega com EP048 R vis 6 13 Promega 6 D pannage Pour toute question qui ne serait pas trait e ci dessous veuillez consulter une succursale ou un distributeur Promega local Les coordonn es de ceux ci sont disponibles au site www promega com Adresse lectronique techserv promega com Sympt mes Causes possibles et commentaires Faible rendement en ADN La r sine ReliaPrep n a pas t remise en suspension de fa on ad quate avant l emploi Resuspendez la r sine ReliaPrep avec soin dans le flacon de r actif avant de la transf rer pour la purification des chantillons L chantillon contenait trop peu de leucocytes par millilitre de sang Le ren
21. uite l lution Au moment de l installation du syst me veuillez discuter des r cipients finaux requis avec le technicien 3 D Quantification et valuation de PADN La qualit et la concentration de l ADN peuvent tre d termin es de diverses mani res notamment par spectrophotom trie l aide de colorants fluorescents par lectrophor se sur gel et par PCR quantitative De nombreux rapports font tat du fait que diff rentes m thodes de quantification de l ADN donnent souvent des valeurs absolues in gales Nous vous recommandons d utiliser une m me m thode pour d terminer la qualit et la quantit de l ADN tout au long de votre proc dure c d utiliser une m me m thode pour quantifier l ADN purifi et pour d terminer la quantit d ADN utiliser dans vos applications d aval Tout au long de ce document des r sultats des m thodes de spectrophotom trie NanoDrop et de colorants QuantiFluor dsDNA ADN double brin sont pr sent s 4 Traitement automatis L appareil Tecan Freedom EVO HSM Workstation offre plusieurs options de traitement des chantillons Ces options sont contr l es sur l interface TouchTools Toutes les options d crites la section 3 sont accessibles partir de cette interface Consultez le Manuel technique de l appareil Tecan Freedom EVO HSM Workstation n TM402 pour obtenir les instructions concernant l interface TouchTools Pour assistance compl mentaire concernant
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