Streptex Acid Extraction Kit [FR]
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1. MATERIEL FOURNI Le coffret d extraction acide Streptex comprend assez de mat riel pour effectuer 50 tests Voir la partie Composition du coffret MATERIEL N CESSAIRE MAIS NON FOURNI Coffret Streptex ZL50 R30950501 et ZL61 R30164701 ou r actifs Streptex en conditionnement s par ZL51 R30950601 ZL57 R30951201 et ZL58 R30164601 Le coffret d extraction acide Streptex est destin tre utilis exclusivement avec le coffret Streptex et ne doit pas tre utilis avec des produits fournis par d autres fabricants PROCEDURE DU TEST Proc dure du test pour les groupes A B C F et G Un sch ma propos pour le groupage des organismes provenant de culture primaire ou de sous culture est pr sent en figure 3 Pour chaque culture Etape 1 Imm diatement avant l emploi distribuer 3 gouttes de r actif d extraction 1 dans un tube jetable Etape 2 Ajouter trois gouttes de r actif d extraction 2 au r actif d extraction 1 dans le tube jetable La couleur du m lange vire au vert jaune Il est important d effectuer cette op ration avant d ajouter la culture Etape 3 Etape 4 Etape 5 l aide d un b tonnet d homog n isation enlever une quantit de culture suffisante pour recouvrir le bout arrondi du b tonnet c est dire environ 5 grandes colonies Pour les petites colonies v rifier soigneusement qu une quantit suffisante de culture a t enlev e pour pouvoir effectuer le test2. d hydrolyse du PYR plus conce tra 6 5 de NaC1 et analyser test hydrolyse du PYR Si l snltat re tif enregistrB s les groupes B CD Fot G 1 1 Enregistrer Enregistrer Alpha ou non Enregistrer Enregistron Ent rocoque Streptocoque h molytiques Ent rocoqu du groupe D rmpe Dnon Enregistrer ent rocoqu Strep v an Enregistrer ent rocoque Strep vddan Probak ement streptocoque du groupe D tOn a rencontr de rares souches poss dant plus d un groupe d antig nes Apr s avoir confirm le bon fonctionnement des r actifs voir le paragraphe Proc dures du contr le de qualit les souches pr sentant des probl mes doivent tre soumises un laboratoire de r f rence pour leur identification BIBLIOGRAPHIE 1 Birch B R Keaney M G L et al 1984 Antibiotic susceptibility and biochemical properties of Streptococcus faecalis strains reacting with both D and G antisera J Clin Path 37 1289 2 Bjorck L and Kronvall G 1984 Purification and some properties of streptococcal protein G a novel IgG binding reagent J Immunol 133 969 3 Chorpenning F W Cooper H R et al 1975 Cross reactions of Streptococcus mutans due to cell wall teichoic acid Infect Immun 12 586 Ederer G M Herrmann M M et al 1972 Rapid extraction method with pronase B for grouping beta hemolytic streptococci Appl Microbiol 23 285 gt El Kho
3. motifs obtenus sont clairement dessin s et sont facilement reconnaissables dans n importe quelles conditions d clairage normales Etape 7 Eliminer la carte de r action utilis e selon les r gles de s curit appropri es Etape 8 S assurer que les r actifs latex et l enzyme d extraction sont replac s au r frig rateur dans le portoir de conservation fourni avec le coffret Streptex RESULTATS LECTURE DES RESULTATS Un r sultat positif est caract ris par le d veloppement d une image d agglutination montrant des agr gats clairement visibles des particules de latex fig 1 La vitesse d apparition et l intensit de l agglutination d pendent de l avidit et de la concentration des antig nes variant de gros agr gats apparaissant apr s quelques secondes de m lange de petits agr gats se d veloppant plut t lentement Figure 1 Figure 2 Dans le cas d un r sultat n gatif le latex n agglutine pas et l aspect laiteux reste pratiquementinchang pendant le test d une minute fig 2 Il est toutefois possible de d tecter de l g res traces de granularit s dans les chantillons n gatifs selon l acuit visuelle de l op rateur PROCEDURES DU CONTROLE QUALITE Les tests de contr le qualit doivent tre r alis s sur chaque kit la r ception du num ro de lot de kit Chaque laboratoire doit appliquer les r glementations nationales et locales Normalement la performanc
4. 4301 et LP03 R30854401 ou la culture en bouillon 6 5 de NaCl peuvent tre utilis s cet effet Pour des informations d taill es sur la diff renciation biochimique des streptocoques se r f rer un manuel de r f rence RESULTATS PR VUS Des extraits de streptocoques appartenant aux s rogroupes A B C D F ou G provoquent une agglutination forte et rapide avec une suspension au latex correspondant CARACTERISTIQUES SPECIFIQUES Des tudes cliniques ont t r alis es dans 6 centres en Grande Bretagne et 2 au Canada sur un total de 735 cultures de streptocoques 700 b ta h molytiques 35 alpha h molytiques ou non h molytiques 331 cultures primaires et 404 sous cultures ont t analys es Les r sultats obtenus avec les suspensions latex Streptex en utilisant la proc dure d extraction acide d une minute ont t compar s avec ceux obtenus en utilisant la proc dure d extraction enzymatique de 10 minutes Pour atteindre les objectifs de cette tude le test direct de l antig ne du groupe D a t effectu en association avec la proc dure d une minute sur toutes les cultures Les r sultats obtenus avec les 735 cultures de streptocoques sont pr sent s dans le tableau 1 La concordance entre les r sultats obtenus par Streptex apr s la proc dure d extraction acide d une minute et la proc dure d extraction enzymatique de 10 minutes tait de 99 6 732 des cultures analys es
5. Deux cultures b ta h molytiques n ont pas t trouv es apr s la proc dure d extraction d une minute un streptocoque du groupe B et un streptocoque du groupe C Un total de cinq cultures ont donn des r actions positives avec plus d une suspension latex d un groupe de streptocoques par l une ou les deux proc dures d extraction Trois cultures ont donn des r actions DG Une b ta h molytique et deux non h molytiques par des proc dures d extraction d une minute et de 10 minutes Une culture qui r agissait avec les suspensions latex du groupe G et du groupe F par les deux proc dures d extraction a t trouv e comme tant un m lange de streptocoques du groupe G et du groupe F par des analyses compl mentaires Une autre culture tait positive pour le groupe D et le groupe G apr s la proc dure d extraction acide d une minute et elle tait positive seulement pour le groupe G apr s la proc dure de dix minutes Dix sept cultures de streptocoques n ont t classifi es dans les groupes A B C D F ou G par aucune des deux m thodes d extraction Tableau 1 Groupage de streptocoques par la proc dure d extraction d une minute Streptex A B C D F G Pasde R action r action mixte Proc dure A 147 d extraction B 217 1 enzymatique C 72 1 de 10 minutes D 129 F 18 G 132 1 Pas de r action 17 R action mixte 4 a En sous culture cette culture apparaissait comme tant alpha h molyt
6. Transf rer dans le tube jetable et m langer soigneusement Laisser le b tonnet dans le tube pendant 1 minute temp rature ambiante 18 30 C Distribuer 3 gouttes de r actif d extraction 3 dans le tube jetable Homog n iser le liquide dans le tube l aide du b tonnet La couleur du liquide dans le tube doit virer du vert jaune au violet Si la couleur ne change pas ajouter quelques gouttes suppl mentaires de r actif d extraction 3 Mettre le b tonnet au rebut conform ment aux r gles de s curit en vigueur Laisser les bulles se disperser suffisamment dans le tube pour que le liquide puisse tre pr lev par un distributeur d chantillons REMARQUE Les p riodes de temps recommand es ne doivent pas tre suivies au pied de la lettre l extraction peut tre laiss e au repos jusqu 60 minutes avant ou apr s l addition du r actif d extraction 3 Remettre en suspension chaque suspension latex en l agitant vigoureusement pendant quelques secondes Garder le flacon compte gouttes en position verticale et distribuer 1 goutte 20 ul de chaque suspension latex pour les groupes A B C F et G dans un cercle diff rent d une carte de r action REMARQUE Lors de l utilisation de flacons compte gouttes Etape 6 Etape 7 Etape 8 il est important de les placer en position verticale et de v rifier que la goutte se forme l extr mit de embout Si l embout du compte gouttes est mouill
7. aire l antig ne du groupe et n cessite une p riode d incubation d au moins 10 minutes 37 C Les r actifs fournis dans ce coffret permettent une extraction plus rapide de l antig ne du groupe PRINCIPE DE LA M THODE Les antig nes sp cifiques de groupe sont extraits des streptocoques par de l acide nitreux lors d une tape d incubation simple et courte L extrait est alors neutralis et les antig nes sont d tect s et identifi s avec des suspensions de particules de latex recouvertes d anticorps sp cifiques du groupe Une agr gation de particules de latex indique un r sultat positif Les suspensions latex des groupes A B C D F et G sont fournies dans le coffret Streptex ZL50 30950501 et ZL61 30164701 ou individuellement REACTIFS COMPOSITION DU COFFRET Coffret d extraction acide Streptex ZL59 R30951301 50 tests R actif d extraction 1 1 flacon R actif d extraction 2 1 flacon R actif d extraction 3 1 flacon B tonnets d homog n isation en bois 200 Distributeurs d chantillons 2 pochettes Tubes jetables 1 paquet Porte tube jetable 1 Carte de proc dure 1 Notice d utilisation 1 DESCRIPTION PREPARATION POUR UTILISATION ET CONDITIONS DE CONSERVATION RECOMMANDEES Voir galement la partie Pr cautions et restrictions d emploi 30 C 2 C Sauf indication contraire tous les r actifs doivent tre stock s entre 2 et 30 C pour conserver leur activit jusqu
8. e du test est assur e par la pr sence d une agglutination vidente dans une seule des suspensions latex les autres suspensions ne montrant pas d agglutination Ce profil de r action suffit dans la plupart des cas pour d montrer la sp cificit des r actifs et l efficacit de la proc dure d extraction Si le mod le de r action est diff rent il est recommand de suivre les proc dures suivantes a Test de la r activit des suspensions latex proc dure du contr le positif Distribuer une goutte 40 ul d antig ne contr le positif la place de l chantillon analyser M langer le contenu de chaque cercle avec un b tonnet d homog n isation neuf en recouvrant la surface du cercle Apr s avoir fait doucement osciller la carte pendant une minute une agglutination bien nette doit se produire avec toutes les suspensions latex du test b Test de la sp cificit de l agglutination proc dure du contr le n gatif Pour s assurer que l agglutination d une suspension latex est sp cifique en particulier dans les cas d agglutination tr s faible ou lorsque plus d une suspension est agglutin e par un seul extrait r p ter le s test s positif s simultan ment avec un des test s parall le s en utilisant une goutte d un extrait pr par avec un b tonnet d homog n isation non inocul ou avec une goutte d enzyme d extraction non inocul e pour le groupe D La suspension latex ne doit
9. e pour l extraction Certaines souches de Streptococcus bovis et de Enterococcus faecium groupe D peuvent tre difficiles grouper Des r sultats faussement positifs peuvent appara tre de fa on occasionnelle avec des germes non apparent s par exemple Klebsiella Escherichia ou Pseudomonas qui peuvent agglutiner de mani re non sp cifique tous les r actifs latex Cependant en examinant les caract ristiques de culture sur les milieux de croissance l op rateur peut g n ralement liminer ces organismes de l analyse L existence d antig nes communs aux organismes provenant d esp ces ou de genres h t rologues a t d montr e pour certains streptocoques 1 en cons quence la possibilit de r actions crois es de ce type dans les syst mes de groupage des streptocoques ne peut pas tre limin e L antig ne du groupe D est commun aux organismes des groupes de streptocoques Q R et S Certaines souches de streptocoques poss dent des facteurs semblables la prot ine A qui se combinent de mani re non immunologique avec les IgG ce qui peut donner des r actions faussement positives dans la proc dure de test directe d crite pour les streptocoques du groupe D Les ent rocoques sont relativement r sistants la p nicilline mais les proc dures s rologiques ne permettent pas de les diff rencier des autres streptocoques du groupe D Des tests biochimiques tels que l hydrolyse du PYR R f LPO2 R3085
10. i 255 5 Nowlan S S and Deibel R H 1967 Group Q Streptococci 1 Ecology serology physiology and relationship to established Enterococci J Bact 94 291 16 Parker M T and Ball L C 1976 Streptococci and aerococci associated with systemic infection in man J Med Microbiol 9 275 17 Rantz L A and Randall E 1955 Use of autoclaved extracts of hemolytic streptococci for serological grouping Stanford Med Bull 13 290 18 Watson B K Moellering R C et al 1975 Identification of streptococci Use of lysozyme and Streptomyces albus filtrate in the preparation of extracts for Lancefield grouping J Clin Microbiol 1 274 1 Donn es sur fichier Remel EMBALLAGE 2150 PROD TO 50 tests L gende des symboles R f rence de catalogue Dispositif m dical de diagnostic in vitro Consulter le mode d emploi IFU H ER Limite de temp rature temp rature de conservation Code de lot num ro de lot aE A utiliser avant date de p remption j Frabricant marque commerciale IFU X7827 R vis Janvier 2012 Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT Royaume Uni eel Pour tout support technique contacter le distributeur local
11. imm diatement un m decin si possible lui montrer l tiquette 2 Les r actifs d extraction 2 et 3 contiennent respectivement un acide faible et un agent faiblementirritant Eviter tout contact direct en portant un quipement de protection appropri Si le mat riel entre en contact avec la peau les muqueuses ou les yeux laver la surface en rin ant imm diatement et abondamment l eau Xi R actif d extraction 3 R36 37 38 Irritant pour les yeux les voies respiratoires et la peau 3 Conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire il est fortement recommand de traiter les extraits n importe quel stade du test comme s ils taient potentiellement infectieux et de les manipuler avec toutes les pr cautions n cessaires 4 L quipement non jetable doit tre st rilis en utilisant une proc dure appropri e apr s l emploi bien que la m thode la plus appropri e soit la st rilisation par autoclave pendant 15 minutes 121 C le mat riel usage unique doit tre st rilis par autoclave ou incin r Les claboussures de mat riaux potentiellement infectieux doivent tre limin es imm diatement l aide d un papier absorbant et les surfaces contamin es doivent tre nettoy es avec un d sinfectant anti bact rien standard ou de l alcool 70 NE PAS utiliser d hypochlorite de sodium Le mat riel utilis pour le nettoyage des claboussures y compris les gants doit tre limi
12. ique b Apr s la proc dure d extraction d une minute cette culture tait positive pour les groupes D et G La r action au groupe D tait faible Apr s les proc dures d extraction de 10 minutes et d une minute 3 de ces cultures ont t group es comme DG L autre tait une culture mixte de streptocoques des groupes G et F qui ont pu tre identifi s individuellement par les 2 proc dures d extraction d 196 cultures b ta plus 17 cultures alpha ou non h molytiques e 113 cultures b ta plus 16 cultures alpha ou non h molytiques Figure 3 Sch ma propos pour le groupage des streptocoques Inspecter la culture de streptocoques pour d terminer le type d h molyse et les caract ristiques de culture si la culture est alpha h molytique exclure Streptococcus pneumoniae Si un organisme suspect est en quantit insuffisante ou contamin par un organisme interf rent faire une sous culture STREPTEX Positif pour un Positive pour N gatif pour tous grape plus dn groupe les groupes 1 B ta molytiques Alpha ou Isol r nouveau non K molytiques et analysetrt l i 1 Groupes B Groupe D Groupe B Groupes A B ta C F ou G C F ou G Alpha ou non h molytiques h molytiques Enregistrekulture en bouillbregistremdentificatiokecommencer Culture en le groupe la Bile esc lin amp froupe H biochimique lextadtion av bouill nla 6 5 de NaCl test une SsuspensionBile esculine
13. it tre not e avant d essayer de les grouper On peut proc der un groupage direct et fiable des streptocoques partir des cultures mixtes sur des milieux d isolement primaires solides condition que les streptocoques ne soient pas envahis par d autres organismes tels que Klebsiella Escherichia ou Pseudomonas qui peuvent agglutiner de fa on non sp cifique tous les r actifs au latex Le groupage par le syst me Streptex ne doit pas tre utilis partir de cultures primaires en milieu liquide Si le groupage de cultures primaires ou de sous cultures impures semblant contenir des streptocoques ne donne pas un r sultat clair il est recommand de faire des sous cultures pures des colonies soup onn es pour pouvoir effectuer ult rieurement une identification par le syst me Streptex Les organismes des groupes A B C F ou G sont g n ralement b ta h molytiques Si un organisme alpha h molytique ou non h molytique semble appartenir l un de ces groupes il convient de confirmer l identit de l esp ce par des tests biochimiques Comme les ent rocoques sont relativement r sistants la p nicilline la diff renciation entre les organismes du groupe D ent rocoques Enterococcus spp et non ent rocoques streptocoques du groupe D se fait par un test d hydrolyse L pyrrolidonyl R naphthylamide PYR R f LPO2 R30854301 et LPO3 R30854401 ou par culture en bouillon 6 5 de NaCl fig 3 PROCEDURE
14. it normalement tre effectu e uniquement si le test fournit un r sultat n gatif pour les groupes A B C F et G ou si la pr sence d une souche du groupe DG est soup onn e Reconstituer un flacon d enzyme d extraction fourni dans le coffret Streptex ZL50 R30950501 et ZL61 R30164701 ou s par ment ZL55 R30951001 en ajoutant 11 ml d eau distill e st rile Laisser reposer quelques minutes en remuant et en retournant de temps en temps pour faciliter la dissolution Pour que l enzyme d extraction reconstitu e conserve ses propri t s pendant au moins trois mois celle ci doit tre conserv e entre 2 et 8 C Pour qu elle conserve ses propri t s pendant au moins 6 mois ou jusqu la date inscrite sur l tiquette du flacon d origine selon la premi re ch ance enzyme peut galement tre conserv e sous forme de fractions aliquot es congel es entre 15 et 25 C NE PAS CONGELER ET DECONGELER PLUS D UNE FOIS Pour chaque culture Etape 1 Distribuer une goutte 40 ul d enzyme d extraction dans un cercle propre d une carte de r action Enlever l aide d un b tonnet d homog n isation une quantit de culture suffisante pour recouvrir le bout arrondi du b tonnet et la r partir sur une portion non recouverte du cercle en frottant doucement et sans d border dans l enzyme d extraction REMARQUE Pour obtenir un niveau de sensibilit lev il est important d taler la colonie s
15. la date de p remption du kit EXTRACTION REAGENT R actif d extraction 1 Un flacon contenant 7 ml de solution de nitrite de sodium de couleur bleu vert R actif d extraction 2 Un flacon contenant 7 ml d une solution acide faible solution d acide ac tique et un indicateur jaune EXTRACTION REAGENT R actif d extraction 3 Un flacon contenant 7 ml d une solution de neutralisation incolore solution de tampon TRIS Les r actifs d extraction doivent tre conserv s en position verticale une temp rature comprise entre 2 et 30 C pour leur permettre de conserver leur activit au moins jusqu la date de p remption du coffret PRECAUTIONS ET RESTRICTIONS D EMPLOI Destin exclusivement au diagnostic in vitro EXTRACTION REAGENT R serv exclusivement un usage professionnel Attention Ce produit contient du caoutchouc naturel sec Pour de plus amples informations sur les composants potentiellement dangereux se r f rer la fiche de s curit fournie par le fabricant et l tiquetage INFORMATIONS DE SECURITE 1 Le r actif d extraction 1 contient du nitrite de sodium produit consid r comme toxique T selon les directives de la Communaut Economique Europ enne CEE La nature des risques particuliers R et les conseils de prudence S attribu s aux pr parations dangereuses sont les suivants Toxique en cas d ingestion En cas d accident ou de malaise consulter
16. ly A Wannamaker L W et al 1975 Simplified extraction procedure for serological grouping of beta hemolytic streptococci Appl Microbiol 28 836 Elliot S D and Taj J Y 1978 The type specific polysaccharides of Streptococcus suis J Exp Med 148 1699 7 Facklam R R and Carey R B 1991 Manual of Clinical Microbiology 5th Ed Edited by Balows A Hausler W J Herrman K L Isenberg H D and Shadomy H J American Society for Microbiology Washington D C Pages 238 257 8 Facklam R R 1977 Physiological differentiation of Viridans streptococci J Clin Microbiol 5 184 Facklam R R Cooksey R C et al 1979 Evaluation of commercial latex agglutination reagents for grouping streptococci J Clin Microbiol 10 641 Facklam R R and Smith P B 1976 The gram positive cocci Human Pathology 7 187 Fuller A T 1938 The formamide method for the extraction of polysaccharides from haemolytic streptococci Brit J Path 19 130 12 Harvey C L and Mclllmurray M B 1984 Streptococci with dual antigen specificity for Lancefield groups D and G Eur J Clin Microbiol 3 526 Lancefield R C 1938 A micro precipitin technic for classifying hemolytic streptococci and improved methods for producing antisera Proc Soc Exp Biol N Y 38 473 p O a p w 14 Maxted W R 1948 Preparation of streptococcal extracts for Lancefield grouping Lancet i
17. n comme s il s agissait de d chets biologiquement dangereux 5 Ne pas effectuer de pipetage la bouche Pour manipuler les chantillons et effectuer le test porter des gants usage unique et une protection des yeux Une fois le test termin se laver soigneusement les mains PRECAUTIONS D ANALYSE 1 Ne pas utiliser les r actifs au del de la date de p remption indiqu e 2 Au cours de la proc dure de test il est important de v rifier que l agent d extraction 1 vire du bleu vert au vert jaune avec ajout de l agent d extraction 2 et du vert jaune au violet avec l ajout de l agent d extraction 3 3 Amener le mat riel temp rature ambiante 18 30 C avant emploi 4 Ne pas laisser les composants de ce coffret la lumi re du soleil 5 Il est important de tenir les flacons compte gouttes verticalement et que la goutte se forme l extr mit de l embout Si l embout du compte gouttes est mouill un volume incorrect se forme autour de l extr mit et non pas la pointe si cela se produit s cher l embout avant de continuer PRELEVEMENT DES ECHANTILLONS ET PREPARATION DES CULTURES Pour de plus amples informations sur le pr l vement des chantillons et la pr paration des cultures primaires consulter un manuel de r f rence Les milieux g n ralement utilis s comprennent de la g lose au sang auquel cas la r action h molytique des colonies pr sum es de streptocoques do
18. ons latex indique l identit de la souche analys e les r actions retard es et faibles avec le m me extrait doivent tre ignor es Une force d agglutination similaire dans plus d une suspension latex mais pas dans toutes indique que l extrait peut contenir un m lange de groupes de streptocoques ou d autres bact ries contenant des antig nes entra nant une r activit crois e de plus amples proc dures d isolement et ou tests biochimiques doivent tre effectu s Un exc s de colonies peut conduire une agglutination non sp cifique dans plus d une suspension latex dans ce cas la culture doit tre r analys e Si une culture b ta h molytique donne une r action nette avec les r actifs des groupes B C F ou G toute r action avec le r actif du groupe D doit g n ralement tre ignor e puisqu elle peut tre non immunologique Les souches du groupe D ne r agissent qu avec le r actif du groupe D On a trouv certaines souches de streptocoques du groupe D contenant galement l antig ne du groupe G Le composant du groupe D de ces souches n est pas extrait de mani re efficace par les r actifs fournis avec ce coffret et ils doivent tre identifi s ou confirm s l aide de la proc dure enzymatique dans le coffret Streptex ZL50 R30950501 et ZL61 R30164701 LIMITES DE LA METHODE Des r sultats faussement n gatifs peuvent appara tre si une quantit inad quate de culture est utilis
19. pas pr senter d agglutination significative et le r sultat sert de contr le pour la comparaison directe avec le motif obtenu en pr sence de l extrait bact rien c Test de la proc dure d extraction Effectuer toute la proc dure de test sur des souches d un groupe connu Des tests doivent tre effectu s occasionnellement avec diff rents groupes connus pour pouvoir valuer la pr cision et l efficacit de l int gralit du syst me test et op rateur INTERPRETATION DES RESULTATS En r gle g n rale seuls les streptocoques b ta h molytiques fournissent des r sultats fiables dans les techniques de groupage I existe cependant des exceptions cette r gle puisque la majorit des souches des streptocoques du groupe D sont alpha h molytiques ou non h molytiques et que certaines souches du groupe B sont non h molytiques A l exception du groupe B les d terminants s rologiques des streptocoques alpha h molytiques et non h molytiques n ont que peu voire pas de valeur Les organismes du groupe D doivent encore tre classifi s comme ent rocoques ou streptocoques du groupe D par culture en bouillon la Bile Esculine et en bouillon 6 5 de NaCl ou par un test PYR R f LPO2 R30854301 et LPO3 R30854401 ceux r agissant avec les groupes A C F ou G peuvent tre identifi s si n cessaire par des proc dures biochimiques appropri es Une agglutination forte et rapide dans une seule des suspensi
20. remel FR Coffret d extraction acide Streptex DOMAINE D APPLICATION En association avec le coffret Streptex ZL50 R30950501 et ZL61 R30164701 ces r actifs fournissent une m thode alternative d extraction et d identification des antig nes des groupes de streptocoques selon le sch ma de Lancefield partir de milieux de culture RESUME ET EXPLICATION DU TEST Les r actifs sont destin s l extraction des streptocoques des groupes A B C F et G selon le sch ma de Lancefield temp rature ambiante 18 30 C L extraction s effectue en 1 minute L antig ne du groupe D ne peut tre extrait l aide de ces r actifs mais un protocole compatible pour la d tection directe de celui ci est d crit dans cette notice Le test de l antig ne du groupe D doit tre effectu et interpr t si un r sultat n gatif appara t pour les groupes B C F et G La majorit des esp ces de streptocoques poss dent des antig nes sp cifiques du groupe auquel ils appartiennent et qui sont en g n ral des composants de la paroi cellulaire structure d hydrates de carbone Lancefield a montr que ces antig nes pouvaient tre extraits sous forme soluble et identifi s par des r actions de pr cipitation avec des antis rums homologues Plusieurs proc dures d extraction des antig nes ont t d crites 11141718 Le test Streptex ZL50 R30950501 et ZL61 R30164701 utilise une proc dure enzymatique pour extr
21. un volume incorrect se forme autour de l extr mit et non pas l extr mit m me dans ce cas s cher l embout avant de continuer Distribuer 1 goutte d extrait tombant librement 40 ul et ne contenant pas de bulles dans chacun des 5 cercles contenant les suspensions latex pour les groupes A B C F et G l aide d un distributeur d chantillons en position verticale et liminer le distributeur selon les r gles de s curit appropri es M langer le contenu de chaque cercle l un apr s l autre l aide d un b tonnet d homog n isation et le r partir de mani re recouvrir compl tement la surface du cercle Utiliser un b tonnet diff rent pour chaque cercle et l liminer selon les r gles de s curit appropri es apr s l emploi Faire doucement osciller la carte pendant 1 minute maximum La carte doit tre maintenue une distance de lecture normale des yeux 25 35 cm Ne pas utiliser de loupe Les motifs obtenus sont nettement dessin s et sont facilement reconnaissables dans n importe quelles conditions d clairage normales Etape9 Eliminerles cartes de r action utilis es selon les r gles de s curit appropri es Etape 10 S assurer que les r actifs latex sont replac s au r frig rateur dans le portoir de conservation fourni avec le coffret Streptex Proc dure du test pour le groupe D La m thode rapide de d tection de l antig ne du groupe D d crite ci apr s do
22. ur la carte avant que celle ci ne soit m lang e avec l enzyme d extraction Etape 2 Etape 3 Emulsionner la colonie avec l enzyme d extraction dans le cercle Utiliser un b tonnet diff rent pour chaque culture et l liminer selon les r gles de s curit appropri es Etape 4 Remettre en suspension la suspension latex du groupe D en agitant vigoureusement pendant quelques secondes Garder le flacon compte gouttes en position verticale et distribuer 1 goutte 20 ul de la suspension latex du groupe D dans le cercle REMARQUE Lors de l utilisation de flacons compte gouttes il est important de les garder en position verticale et de v rifier que la goutte se forme l extr mit de l embout Si embout du compte gouttes est humide un volume incorrect se forme autour de l extr mit et non pas l extr mit m me dans ce cas s cher l embout avant de continuer Etape5 M langer le contenu du cercle l aide d un b tonnet d homog n isation et le r partir de mani re recouvrir toute la surface du cercle Utiliser un b tonnet diff rent pour chaque culture et l liminer selon les r gles de s curit appropri es apr s l emploi Eviter la formation de bulles qui pourraient interf rer avec la r action Etape6 Faire doucement osciller la carte pendant 1 minute maximum La carte doit tre maintenue une distance de lecture normale des yeux 25 35 cm Ne pas utiliser de loupe Les
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